Orientadores : Maria de Fatima Sonati, Monica Barbosa de Melo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T14:43:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jorge_SimoneBordignonde_M.pdf: 1672707 bytes, checksum: 1ca1b039159c022f6091792558490b00 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Mutações de ponto e pequenas inserções ou deleções nos genes da globina a humana podem produzir variantes estruturais de cadeia a e a-talassemia. As mutações podem ser identificadas tanto pelo sequenciamento total dos genes, como por métodos de triagem, os quais selecionam o exon mutado para, então, ser seqüenciado. Embora sejam pequenos (cerca de 1Kb, com 3 exons e 2 introns), os genes da globina a são duplicados (a2 and a1) e extremamente ricos em ligações G-C, o que torna difícil a desnaturação e reduz a eficiência do sequenciamento, causando freqüentes artefatos e necessidade de repetições. Como o sequenciamento é ainda um método demorado e de custo elevado para muitos laboratórios, nós modificamos algumas condições do Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP) com o intuito de otimizar a triagem de mutações nos genes da globina a humana / Abstract: Point mutations and small insertions or deletions in the human a-globin genes may produce a-chain structural variants and a-thalassemia. Mutations can be detected either by direct sequencing of the whole gene or by screening methods, which select the mutated exon for sequencing. Although small (around 1 Kb, 3 exons and 2 introns), the a-globin genes are duplicate (a2 and a1) and extremely G-C rich, what makes them difficult to denature and reduces sequencing efficiency, causing frequent artifacts and the need of repetitions. As DNA sequencing is still a time-consuming and expensive method for many laboratories, we modified some conditions of the Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP) in order to optimize mutation detection in the a-globin genes / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:45:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_CamilaOrescodos_M.pdf: 6578927 bytes, checksum: db85ac88ccf51f8137bcc2551ebcd458 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As síndromes talassêmicas compreendem um grupo heterogêneo de doenças hereditárias em que existe urna redução no ritmo de síntese de urna ou mais cadeias polipeptídicas da hemoglobina.Nas ß-talassemias ocorre supressão total ou parcial da produção de cadeias ß. O estado homozigótico da maioria das variantes genéticas de ß-talassemia produz o quadro clínico da talassemia maior ou anemia de Cooley. Esses pacientes apresentam acentuada anemia e necessitam de transfusões sangüíneas regulares para sobreviverem. Os indivíduos heterozigotos para ß-talassemia apresentam, com raras exceções, apenas discreta anemia. Existem ainda alguns quadros clínicos não tão graves quanto à forma homozigótica clássica, geralmente não dependentes de transfusão, que são denominados de "talassemia intermediária". A baixa produção de ß-globina em ß-talassemia, com a síntese normal de ?-globinas resulta num excesso de cadeias a que são responsáveis pela eritropoiese não eficaz, danos à membranas de eritrócitos e redução da vida-média de células vermelhas. Recentemente foi descrita urna proteína que formaria um complexo estável quando ligado à a-globinas, evitando que estas sofressem oxidação e precipitação. Esta proteína foi denominada AHSP (Alpha Hemoglobin Stabilizing Protein). A caracterização da proteína foi feita em camundongos e, até a presente data, não são encontrados dados da expressão do gene em humanos. Durante o desenvolvimento deste trabalho foram feitas análises de expressão gênica durante a diferenciação eritróide humana e em pacientes com ß-talassemia, evoluções clínicas maior e intermediária e em indivíduos controles. Foram feitas também análises da seqüência de DNA na procura de polimorfismos ou mutações que pudessem estar relacionados com a modulação da expressão ou relacionados com a doença. A análise da expressão gênica durante a diferenciação eritróide em humanos, mimetizada por cultura de precursores eritróides em cultura de duas fases indica que o gene AHSP está sendo requerido durante toda a diferenciação celular, sugerindo que possivevelmente AHSP está sendo requerido para estabilizar cadeias-? para a formação de hemoglobina. Em pacientes com ß-talassemia,a expressão do gene AHSP está aumentada em pacientes com clínica lntermediaria quando comparados com pacientes com clínica Maior e controles, enquanto que a expressão de ?-globina não demonstra diferenças entre os grupos. Mas dados da razão da expressão do gene AHSP/a-globina demonstram que, quando comparados com os dados obtidos da cultura, os grupos provavelmente apresentam diferenças pelo fato de que ß-talassemia intermediária apresentar mais eritroblastos que os outros grupos, mostrando que possivelmente AHSP não apresenta relação com a evolução clinicaem ß-talassemias. As análises de polimorfismos demonstraram polimorfismos que podem estar relacionado com ß talassemia e uma mutação que pode estar alterando a estrutura protéica de AHSP e talvez contribuindo para a pior evolução clinica de pacientes heterozigotos para ß talassemia. Baseado nestes dados nós prevemos uma importante função deste gene durante a diferenciação eritróide normal, descrevemos polimorfismos que podem relacionar o gene AHSP com ß-talassemias na população estudada durante o desenvolvimento deste trabalho, descrevemos aqui a primeira mutação detectada no gene AHSP que possa mostrar uma possível relação desta proteína com a evolução clinica em ß-talassemia, mas uma importância concreta do gene AHSP na fisiopatologia da ß-talassemia ainda não está bem estabelecida / Abstract: Thalassemia syndromes are a heterogeneous group of heredity diseases in which there is a reduction in the synthesis of one or more hemoglobin chains. In ß-thalassemia there is a reduction or total suppression of the ß-globingene expression. The homozygous state of most ß-thalassemia genetic variants produces the clinic evolution of major thalassemia or Cooley's anemia. These patients present severe anemia and require regular blood transfusions in order to survive. Heterozygous individuaIs present, with exceptions, discrete anemia. There are some clinical evolutions, not as severe as the classic homozygous form, which are often blood transfusion independent, named ß-thalassemia intermedia. Lower levels of ß-globinin ß-thalassemia,with normal synthesis of ?-globin lead to an unbalanced globin synthesis and to an excessive production of ?-globin chains. This results in ineffectiveery thropoiesis, erythrocyte membrane damage and a shortened lifespan of red blood cells. Recently, a protein forming a stable complex when connected with ?-globin avoiding thus the deleterious effects of ?-globin precipitation and oxidation has been described. This protein has been denominated AHSP (Alpha Hemoglobin Stabilizing Protein) and its characterization has only been performed on mice. Until now no data regarding the expression in human genes has been found. The present study analyzed the gene expression of the AHSP gene during human erythroid cell differentiation and in major and intermedia homozygous ß-thalassemia patients and in controls. DNA analysis was performed in order to detect polymorphisms or mutations possibly related to expression modulation or to the disease. The gene expression analysis during human erythroid cell differentiation, reproduced by the culture of the erythroid precursor in two phases demonstrated that the AHSP gene is required during the entire cell differentiation, suggesting that AHSP may possibly be required to stabilizea-chains in order to form hemoglobin .In ß-thalassemic patients, the AHSP gene expression was increased in intermedia patients compared to major patients and controIs, however no difference regardinga-globin gene expression was demonstrated between the groups. Ratio data of the AHSP/a-globin gene expression demonstrated that, when compared with the cell differentiation data, the groups probably presented differences due to the fact that ß-thalassemia intermedia patients presented more erythroblasts than the other groups, suggesting that AHSP may not be related to the clinicalevolution of ß-thalassemia. The polymorphisms analyses showed some one that could be relationship with ß-thalassemia and a mutation that could be changing the AHSP structure an may contributing to a worse clinicevolution in patients heterozygous to ß-thalassemia. Based on these data we suggest that the AHSP gene plays an important role during normal erythroid differentiation, described some polymorphisms that could be relation AHSP gene with ß-thalassemia,described the first mutation on AHSP gene that could show a possible relation of the AHSP with the clinic evolution in ß thalassemia,but a real importance of the AHSP gene in ß-thalassemia pathophysiology is not clearly / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Satie Hatsushika Ogo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T19:37:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torsoni_MarcioAlberto_D.pdf: 4477638 bytes, checksum: 24dd57f5141309b44bbd4f201f560fe1 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Hemoglobinas de várias espécies de vertebrados apresentam capacidade polimerizar-se através da fonnação de pontes de disulfeto. Nestas espécies, a hemoglobina apresenta grupos tióis reativos, os quais levam também a fonnação de pontes de disulfeto mistas com a glutationa. Muitos autores tem relacionado a presença destes grupos tióis na hemoglobina a resistência do animal a hipóxia. Outros estudos tem também relacionado estes grupos a um mecanismo adicional de participação da Hb em processos de proteção celular contra agentes oxidantes. Dentre os grupos de vertebrados, os répteis destacam-se por apresentarem muitas espécies com hemoglobinas ricas em grupos tióis reativos. O jabuti Geochelone carbonaria, pertencente a família Testudinidae, apresenta cerca de 4 SH reativos na hemo gl obina, e um complexo padrão eletroforético, o qual foi demonstrado ser uma consequência da intensa fonnação de disulfetos. Outra espécie pertencente ao mesmo gênero, Geochelone denticulata, apresenta apenas 2 grupos tióis reativosJHb e um padrão eletroforético do hemolisado comparativamente mais simples. Os estudos de susceptibilidade da Hb stripped da 2 espécies a oxidação mostraram que a Hb de G. denticulata é mais susceptível, provavelmente devido ao menor número de grupos tióis reativos na Hb. A modificação da hemoglobina de G. carbonaria por diamida ou GS-SG não induziu significante alteração nas propriedades funcionais da hemoglobina de G. carbonaria. Por outro lado, a susceptibilidade da hemoglobina à oxidação foi sensivelmente alterada pelas mesmas modificações. A peroxidação lipídica da membrana de eritrócitos humanos na presença destas hemoglobinas modificadas ou não, mostraram também que as alterações na molécula induziam a perda da capacidade da hemoglobina de prevenir a peroxidação. O mesmo comportamento não foi observado para a hemoglobina tratada com diamida. Adicionalmente foi determinada a atividade das enzimas que fazem parte do sistema antioxidante das 2 espécies de quelônios. A glutationa peroxidase e a glutationa redutase foram mais ativas na espécie G. denticulata, enquanto que a superóxido dismutase e catalase foram mais ativas na espécie G. carbonaria. A titulação da concentração de GSH no eritrócito de G. carbonaria mostrou que esta é cerca de 2 vezes maior que na espécie G. denticulata. Portanto, a espécie G. carbonaria apresenta maior poder redutor no interior do eritrócito e a presença de tióis reativos na hemoglobina pode ser um mecanismo adicional de proteção celular / Abstract: Hemoglobinas de várias espécies de vertebrados apresentam capacidade polimerizar-se através da fonnação de pontes de disulfeto. Nestas espécies, a hemoglobina apresenta grupos tióis reativos, os quais levam também a fonnação de pontes de disulfeto mistas com a glutationa. Muitos autores tem relacionado a presença destes grupos tióis na hemoglobina a resistência do animal a hipóxia. Outros estudos tem também relacionado estes grupos a um mecanismo adicional de participação da Hb em processos de proteção celular contra agentes oxidantes. Dentre os grupos de vertebrados, os répteis destacam-se por apresentarem muitas espécies com hemoglobinas ricas em grupos tióis reativos. O jabuti Geochelone carbonaria, pertencente a família Testudinidae, apresenta cerca de 4 SH reativos na hemo gl obina, e um complexo padrão eletroforético, o qual foi demonstrado ser uma consequência da intensa fonnação de disulfetos. Outra espécie pertencente ao mesmo gênero, Geochelone denticulata, apresenta apenas 2 grupos tióis reativosJHb e um padrão eletroforético do hemolisado comparativamente mais simples. Os estudos de susceptibilidade da Hb stripped da 2 espécies a oxidação mostraram que a Hb de G. denticulata é mais susceptível, provavelmente devido ao menor número de grupos tióis reativos na Hb. A modificação da hemoglobina de G. carbonaria por diamida ou GS-SG não induziu significante alteração nas propriedades funcionais da hemoglobina de G. carbonaria. Por outro lado, a susceptibilidade da hemoglobina à oxidação foi sensivelmente alterada pelas mesmas modificações. A peroxidação lipídica da membrana de eritrócitos humanos na presença destas hemoglobinas modificadas ou não, mostraram também que as alterações na molécula induziam a perda da capacidade da hemoglobina de prevenir a peroxidação. O mesmo comportamento não foi observado para a hemoglobina tratada com diamida. Adicionalmente foi determinada a atividade das enzimas que fazem parte do sistema antioxidante das 2 espécies de quelônios. A glutationa peroxidase e a glutationa redutase foram mais ativas na espécie G. denticulata, enquanto que a superóxido dismutase e catalase foram mais ativas na espécie G. carbonaria. A titulação da concentração de GSH no eritrócito de G. carbonaria mostrou que esta é cerca de 2 vezes maior que na espécie G. denticulata. Portanto, a espécie G. carbonaria apresenta maior poder redutor no interior do eritrócito e a presença de tióis reativos na hemoglobina pode ser um mecanismo adicional de proteção celular / Doutorado / Doutor em Ciências

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T12:07:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grignoli_CarlosRobertoEscrivao_M.pdf: 6927532 bytes, checksum: 04f15dab880c63f76741351c93bd0646 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: As hemoglobinas humanas, compreendem um grupo de moléculas protéicas responsáveis pelo transporte de oxigênio dos capilares alveolares dos pulmões para os tecidos. As moléculas variantes de hemoglobinas são caracterizadas pela anormalidade estrutural de uma subunidade particular da globina e podem ou não resultar em alterações clínicas detectáveis. Existem alterações que levam a uma redução no ritmo de síntese de uma ou mais cadeias polipeptídicas da hemoglobina denominada de síndromes talassêmicas. Neste estudo identificamos as alterações moleculares em pacientes portadores de variante de cadeia d, 7 pacientes com variantes de cadeia (3 e 2 pacientes com talassemia Beta. A caracterização das alterações foi feita pelo sequenciamento de DNA dos genes de globina beta e delta após amplificação pela reação em cadeia da polimerase. Variantes como as Hbs Lepore-Boston-Washington, Leiden, Korle-Bu e A2 'B2 representam os primeiros casos descritos na nossa população sendo que as Hbs Leiden e Korle-Bu foram demonstradas pela primeira vez por análise de DNA. Uma nova variante de cadeia ß eletroforeticamente silenciosa detectada pela eletroforese de cadeia de globinas, denominada de Hb Rio Claro ß34(B16)Val->Met, e encontrada em associação com Hb Hasharon (a47 Asp->His) e alfa talassemia-2 (-a3.7). Foi descrita neste trabalho adicionalmente uma nova mutação de ponto afetando o codon 6 no gene da beta globina (GAG->TAG), criando um "stop codon" e uma alteração rara na nossa população na região promotora do gene da globina beta (-88), ambas levando a talassemia ß / Abstract: Not informed / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores : Nilce Correa Meirelles, Iris Linares de Torriani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T03:38:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bonafe_CarlosFranciscoSampaio_M.pdf: 3201683 bytes, checksum: f8eb49e24c12e533f509d4b48603a71b (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: Glossoscolex pauHstus (Oligochaeta, Glossoscolecidae) é um anelídeo que vive no solo em regiões calcáreas no Estado de São Paulo, e tem uma hemeproteína gigante extracelular que ocorre dissolvida no sangue. Esse tipo de pigmento respiratório é denominado eritrocruorina, e é observado à microscopia eletrônica como dois discos hexagonais sobrepostos, cada um contendo seis subunidades, com uma cavidade central. No presente trabalho estudou-se afinidade da eritrocruorina pelo oxigênio em presença do cátion bivalente magnésio, observando-se aumento de afinidade e cooperatividade. Determinou-se o coeficiente de sedimentação de 58 S, e estimou-se o peso molecular de 3,23 x 106 Da. Encontrou-se peso molecular mínimo de 25250 Da, alto comparativamente ao das hemoglobinas tetraméricas e mioglobinas, sugerindo a presença de subunidades que não carreiam o heme, a exemplo de outras eritrocruorinas. A abordagem com espalhamento de raios X a baixo ângulo levou a parâmetros estruturais de baixa resolução com raio de giro de cerca de 11,4 nm e dimensão máxima da molécula / Abstract: Glossoscolex paulistus (Oligochaeta, Glossoscolecidae) is an earthworm which dwells in limestone regions in São Paulo State, and has a giant extracellular hemeprotein that occurs in the blood. This type of respiratory pigment is called erythrocruorin, and is examined with the aid of electronic microscopy as two hexagonal superimposed disks, each one having six subunits and a central cavity. This thesis studies the affinity of erythrocruorin with oxygen in the presence of the divalent cation magnesium: an increase of affinity and cooperativity is observed. The sedimentation coefficient was found to be 58 S, and the molecular weight approximately 3.23 x 106 Da. The minimum molecular weight determined, 25,250 Da, was relatively high compared with those of tetrameric hemoglobins and mioglobins, thus suggesting the presence of subunits not carrying a heme group as is the case with other erithrocruorins. Small angle X-ray scattering experiments led to the determination of low resolution dimensional parameters such as the radius of giration (11.4 nm) and maximum molecular dimension (27 nm) / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Aldo Focesi Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T22:32:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_MariaLaiseChaves_D.pdf: 4732215 bytes, checksum: c94ac3e60cd4a16cc93ecba1104ae905 (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: Propriedades funcionais de hemoglobinas de anfíbios de ?habitats? terrestres e aquáticos foram estudadas a fim de correlaciona-las com propriedades antigênicas destas proteínas. Pôde-se observar que as hemoglobinas dos anuros terrestres Bufo paracnemis, Bufo marinus, Rana catesbeiana e Leptodactylus labyrinthicus possuem menor afinidade pelo oxigênio que as dos anuros aquáticos estudados Pipa carvalhoi, Pipa pipae, girino de Rana catesbeiana e girino de Hyla geographica. Também foi observado que hemoglobinas de anuros aquáticos não apresentam efeito Bohr quando isentas de cofatores, porém, na presença de ATP esse efeito torna-se evidente. Já nos anuros terrestres, o efeito dos polifosfatos, na maioria dos casos foi desprezível. Imune-soros foram obtidos em coelho e em carneiro após prolongado período de imunização com os componentes mais representativos das hemoglobinas de Pipa carvalhoi e de Bufo paracnemis. Os resultados das reações antígeno-anticorpo, em diferentes condições, mostraram uma grande semelhança antigênica entre as hemoglobinas de anuros de ?habitat? terrestre em contraste com a dos aquáticos que apresentaram maiores diferenças antigênicas tanto entre si como em relação a dos terrestres. Assim, observamos identidade total entre hemoglobinas de Bufo paracnemis e Bufo marinus, identidade parcial entre hemoglobinas de B. paracnemis e de Rana catesbeiana, de Leptodactilus labirinthicus e de Pipa carvalhoi com o soro anti-hemoglobina II (Bufo paracnemis) e não detectamos identidade entre hemoglobina de Bufo paracnemis e hemoglobinas das formas larvais de Hyla geographica...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Functional properties of hemoglobins of terrestrial and aquatic amphibia were studied in order to stablish relationship with their antigenic properties. It was possible to show that the hemoglobins of the terrestrial anura B. Paracnemis a R. catesbeiana present less oxygen afinity than the hemoglobins of aquatic anura P. Carvalhoi and P. Pipae. It was also observed that the stripped hemoglobins of aquatic anura do not show Bohr effect. However, in the presence of ATP, the Bohr effect becomes evident. In the terrestrial anura on the other hand, the poli-phosphates effects were, in many cases, so small that can be neglected. Antisera were obtained in rabbits and in sheep, after a long period of immunization with the more representative hemoglobins of P. Carvalhoi ad of B. Paracnemis. The results of antigen-antibody reaction, under different conditions, show antigenic similarity among hemoglobins of terrestrial anura. It was also found that hemoglobins of aquatic anura have antigenicity differences both, among themselves and when compared with the hemoglobins of terrestrial anura. Then it was observed a total identity between hemoglobin of B. Paracnemis and of B. Marinus, partial identity between hemoglobins of B. Paracnemis and R. catesbeiana, B. Paracnemis and L. Labyrinthicus and L. Labyrinthicus with the anti-Hb II of B. Paracnemis serum ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Aldo Focesi Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T00:37:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ogo_SatieHatsushika_M.pdf: 3604800 bytes, checksum: a83266aebdf715f91042e9ed20d3c188 (MD5) Previous issue date: 1977 / Resumo: Algumas propriedades estruturais e funcionais em duas espécies de serpentes de hábitos semo-aquáticos, H. modestus e L. miliaris que apresentam diferentes graus de adaptação a esse ambiente foram examinados. Os hemolisados totais de ambos os ofícios apresentaram três componentes tanto por eletroforese com por cromatografia. O estudo das propriedades funcionais de suas hemoglobinas revelou diferenças fundamentais: a afinidade pelo oxigênio foi maior na H. modestus enquanto que o efeito Bohr da L. miliaris exibiu valores mais elevados entre pH 7,0 e 8,0. O coeficiente de Hill, n. que reflete a interação heme-heme não se modificou em grande proporção, em função do pH em ambas as espécies e seus valores foram relativamente pequenos quando comparados com os de outras serpentes (SULLIVAN, 1974). Os fosfatos orgânicos interagiram com as hemoglobinas de ambas as serpentes diminuindo sua afinidade pelo oxigênio, aumentando o efeito Bohr e alteranto a interação heme-heme. A concentração saturante da ATP/heme foi aproximadamente 2,2 (mol/mol) em ambas as espécies embora o efeito do ATP na concentração maior que a saturante sobre a afinidade pelo oxigênio fosse mais acentuado em L. miliaris. Os dois ofídios recorreram a anaerobiose quando estimulados, e nessas condições, o nível de lactato no sangue circulante foi maior em L. miliaris. Finalmente foram discutidos os diferentes graus de adaptação funcional das hemoglobinas correlacionados ao habitat e atividade das espécies em estudo / Abstract: Some structural and funcitional properties of two kind of water snakes H. modestus and L. miliaris, which show different degree of adaptation to the environment were analysed. The hemolysate of both kind of snake showed three components when analysed by either electrophoresis or chromatography. Important points came out from the study functional properties of their hemoglobin: thus, the oxygen affinity of H.modestus, the aquatic specie presented higher values than that of L. miliaris, although concerning the Bohr effect this specie showed low value close to zero between pH 7,0 and 8,0. The Hill coefitient did not show considerable variations with the pH in the snakes and their values were small compared with other species of snakes. Organic phosphates interacted with hemoglobin of both kind of snakes decreasing their oxygen affinity, increasing the Bohr effect and changing the Hill coefficient values. The ATP/ species of snake thought the effect of excess ATP on the oxygen affinity was more pronounced in L. miliaris. Upon stumulation both snakes increased their anaerobic metabolism according to the high blood lactate level found which was more pronounced in L. miliaris. Finally the different degree of functional adaptation of hemoglobin related to the habitat and the activity of both kind of snakes were discussed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Nilce Correa Meirelles / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T02:39:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula_Eneidade_M.pdf: 6362855 bytes, checksum: b4f71b442f4e203150aefbd887b56459 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: Antigos modelos e teórias sobre a reação hemoglobina/oxigênio são revistos e ainda os rnétodos para determinação de P50 (pressão parcial de O2 para saturação de 50% dos sítios ligantes da hemoglobina), baseados nessas teorias, propondo-se nova rnetodologia para o cálculo de parâmetros fisiológicos, basedas nessas no método fotométrico clássico de ROSSI-FANELLI &, ANTONINI (1958). A utilização de diferentes metodologias permitiu o estudo in vitro de sete vasodilatadores cardíacos, de uso no tratamento de angina de peito, sobre as propriedades funcionais da hemoglobina humana. Desse "screening", uma análise estatística final demonstra o efeito direto da papaverina e do dipiridamol ligados com a hemoglobina, provocando um deslocamento da Curva de Oxigenação da mesma proteína, para a direita. Também a nifedipine altera a afinidade IIb/oxigênio, porém em sentido oposto, aumentando-a. Tal efeito é demonstrado em condições diversas: com IIb fetal, na presença de fosfatos orgânicos de concentração definida, em diferentes pHs, temperaturas e tempos de incubação, além de concentrações variáveis da droga. Por equilíbrios de diálise a reação molecular entre proteína e droga demostrada. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Older mode!s and theories about the Hernoglobin/Oxygen binding are revised as well as the rnethods for rneasuring P50 (the partia! O2 pressure for the half saturation 01' the Hb binding sites), which are based on the rnodels. A new methodology for obtain P50, based on the classic spectrophotorndric method of 'ROSSI-FANELLI & ANTONIN! is proposed. The different methods utilized allowed the "in vitro" study of' seven cardiac vasodilator drugs, often used in the angina pectoris treatrnent, over the functíonal properties of the Hurnarn hernoglobín. A final statístical analysis of' this screeníng showed a dírecd effect of' papaverine and dipirídamole when bound to hemoglobin, promoting a shift to the right in the Oxygen Equilibrium Curve of' the protein while nifedipíne- another vasodilator - alters the Hb/Oxygen affinity in an opposite way, increasing it. This effect is noticed in several condictions: with Fetal Hb, in the presence of known quantitics of organic phosphates, on different, pH values, ternperatures, incubation periods, and drugs concentrations. Thc molecular reaction between protein and drug is demonstrated by dialysís equilibría. The papaverine effect is relationed to íts dissociation constant (pK), and we concluded the drug reacts better with Hb in its non dissociated form, which is the responsible for the effect over the Hb physiolugical properties. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Jose Inacio Cotrim Vasconcellos, Nilce Correa Meirelles / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Fisica Gleb Wataghin / Made available in DSpace on 2018-07-15T07:17:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marigheto_NiusaAparecida_M.pdf: 3514557 bytes, checksum: 4ce9a19958f18997976bc6a712cb5d72 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: É apresentado neste trabalho um estudo comparado entre as moléculas de hemoglobina humana A, humana S e de Ranacatesbeiana. Utilizamos para este estudo duas técnicas: a espectroscopia de absorção óptica ( visível e infravermelho ) e a espectroscopia fotoacústica ( visível ). Com as amostras na forma de solução aquosa foram obtidos espectros de absorção óptica no intervalo espectral de 250nm a 600nm e fotoacústicos no intervlo de 300nm a 600nm. Para a obtenção dos espectros na região do infravermelho ( 2,5u a 40u ) foram utilizadas amostras na forma de cristais ou liofilizados prensadas num disco de KBr. Após a obtenção dos dados experimentais foi feita a deconvolução dos espectros e um ajuste computacional das linhas obtidas tentando caracterizá-las através da frequência ou comprimento de onda de absorção máxima, largura e forma. É traçado um estudo comparado entre as diferentes hemoglobinas no mesmo intervalo espectral e são lançadas bases comparativas entre os espectros fotoacústicos e de absorção óptica / Abstract: Not informed. / Mestrado / Física / Mestre em Física

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:43:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freitas_AidaGomesde_M.pdf: 4241702 bytes, checksum: 2e686bbc6782bae53d7c2f5e992bbb45 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: As síndromes talassêmicas constituem um grupo heterogêneo de doenças genéticas causadas por mutações que afetam a síntese de uma ou mais cadeias globínicas, designadas de acordo com o tipo de cadeia cuja síntese está prejudicada. Nas f3-talassemiasocorre supressão parcial ou total das cadeias f3,o que provoca o excesso de subunidades livres de a-globinas instáveis, insolúveis e formam agregados chamados corpos de inclusão, responsáveis pela destruição de precursores eritróides. Os homozigotos para a f3-talassemia que apresentam anemia grave, necessitam de transfusões sangüíneas regulares, o que produz acúmulo de ferro no organismo, afetando principalmente o fígado, o coração e as glândulas endócrinas. Recentemente foi descrito o gene AHSP (Alpha Haemoglobin Stabilizing Protein) que pode ter participação na síntese de hemogiobina. A proteína produzida por este gene forma um complexo estável quando ligado a a-globinas livres, funcionando como uma chaperona molecular evitando a precipitação das cadeias nas células. O papel desta proteína nas síndromes talassêmicas ainda não está esclarecido, embora haja evidências de que ela possa desempenhar função importante quando existe excesso de cadeias a como nas f3-talassemias. Com base nesses dados, propomos o estudo do efeito da supressão da expressão do gene AHSP em células da linhagem eritroleucêmica humana K562 (ATCC), através do silenciamento gênico por interferência de RNA e em culturas de células mononucleares do sangue periférico de indivíduo portador da mutação no códon 75 do gene AHSP, para análise durante a diferenciação celular. As células mononucleares do indivíduo mutante e do controle foram obtidas a partir do sangue de doadores voluntários no ambulatório do Hemocentro da UNICAMP e foram submetidas a um sistema de cultura de células em duas fases. Através dos resultados obtidos foi possível observar que não houve a interferência esperada do gene AHSP nas condições testadas. Os resultados obtidos também demonstraram expressão diferencial no gene AHSP na presença da mutação no códon 75 que talvez esteja relacionada com a evolução clínica na ~-talassemia. Estes dados sugerem uma importante função do gene AHSP durante a diferenciação eritróide / Abstract: Thalassemia syndromes are a heterogeneous group of genetics diseases caused by mutations that affect the synthesis of one or more hemoglobin chains. In ~-thalassemia partial or total suppression of ~ - chains occurs, provoking the excess of ITeea-globin chains, which are insoluble and form aggregates called inclusion bodies, responsible for the destruction of erythrocyte precursors. Homozigotes for ~-thalassemia that present serious anemia, need regular blood transfusions, leading to the accumulation of iron in the organism, affecting mainly the liver, the heart and the endocrine glands. Recently the AHSP gene was described which may have a participation in hemoglobina synthesis. The protein produced for this gene forms a stable complex with free a-globin, functioning as molecular chaperone. The role of this protein in the thalassemia syndromes hass still not been determined, although it may e predicted that it may play an important function when an excess of chains exists as in the thalassemias. Based on these data we investigated in this project the effect ofthe suppression ofthe expression of AHSP by RNAi gene silencing in the human leukemic cell line, K562 (ATCC) and in cultures of mononuclearcells of the peripheral blood derived ITomdonor with AHSP mutation at codon 75, for analysis during the cellular differentiation. For the analysis of the cellular differentiation, the cells, obtained ITomthe blood of volunteers at the Hematology and Hemotherapy Center of the UNICAMP will be submitted to a system of culture of cells in two phases. These results demonstrated that it was not possible obtain interference of the expression of AHSP. These results also demonstrated differential expression in the AHSP gene when the mutation at codon 75 was presented and maybe was related with the clinical evolution in thalassemia. Based on this data, we proposed an important function of AHSP gene during the erythroid differentiation / Mestrado / Medicina Experimental / Mestre em Fisiopatologia Médica