Didelis dėmesys skiriamas natūralių antioksidantų paieškai ir įvertinimui augalinės kilmės vaistinėse ir maistinėse žaliavose. Mokslinių tyrimų objektais yra didelis skaičius augalų rūšių, ekstraktų, maisto papildų ir vaistinių preparatų. Tiriamųjų darbų našumas ir informatyvumas, be abejonės, priklauso nuo pasirinktų metodų tinkamumo, jautrumo ir efektyvumo. Darbo tikslas yra išvystyti bei įteisinti pokolonėlinę ESC-DPPH metodiką ir ją pritaikyti laisvuosius radikalus surišančių žinomų ir nežinomų junginių, esančių vaistinėje augalinėje žaliavoje, antioksidantinio aktyvumo įvertinimui. ESC išskirstyti junginiai nustatomi UV detektoriumi 275 nm ilgio bangoje; mobili fazė su analitėmis per maišymo trišakį tiekiama į reakcijos kilpą, kur 0,4 ml/min tėkmės greičiu paduodamas DPPH tirpalas. Reakcijos kilpa sujungta su UV/Vis tipo detektoriumi, matuojančiu pratekančio tirpalo absorbciją esant 520 nm bangos ilgiui. Nustatyta, jog Crataegus monogyna lapuose vyraujantis flavonoidas viteksino ramnozidas nepasižymi antioksidantiniu aktyvumu. Reikšmingiausias antioksidantas C. monogyna lapuose ir žieduose yra chlorogeno rūgštis. Didžiausiu antioksidantiniu aktyvumu Origanum vulgare augalinėje žolėje pasižymi rozmarino rūgštis. Achillea millefolium ekstraktuose identifikuotos šios analitės, turinčios radikalus surišantį aktyvumą: chlorogeno rūgštis, luteolin-7-O-gliukozidas, rutinas ir luteolinas. / The most important attention is paid to the search of natural antioxidants and their evaluation in medicinal and food raw materials of plant origin. A number of plants, their extacts, food products and medicinal preparations appear to be objects of scientific research. Effectiveness and informative character of research, undoubtedly, depend on relevance, sensitivity and efficiency of the methods chosen. Aim of this work is development and validation of post column HPLC-DPPH method as well as its application in antioxidant activity evaluation of known and unknown compounds fixing free radicals and existing in medicinal plant raw materials. HPLC separated compounds are identified at wave length of 275 nm and then the mobile phase with analytes flows by mixing tee to the reaction coil, where DPPH reagent solution is supplied. The solution flow rate – 0,4 ml/min. The reaction coil is connected with UV/Vis type detector, which measures absorption of flowing solution at wave length of 520 nm. It was dermined that vitexin rhamnoside, the dominant compound in the leaves of Crataegus monogyna, is not significant radical sacavenger. The most active antioxidant in leaves and the flowers of C. monogyna is chlorogenic acid. The most active antioxidant in Origanum vulgare raw materials is rosmarinic acid. Identified analytes in the extracts of Achillea millefolium that possessed radical scavenging properties were chlorogenic acid, luteolin-7-O-glucoside, rutin and luteolin.

Lietuvoje daugiausiai buvo užregistruota virškinimo sistemą veikiančių augalinės kilmės preparatų. Dažniausiai registruojamos augalinių vaistinių preparatų vaistų formos yra tabletės, lašai, tirpalai bei arbatos. Tarp augalinių preparatų Lietuvos vaistų registre vyrauja savo produkciją įregistravusios Lietuvos, Vokietijos bei Lenkijos įmonės. Tarp įmonių įregistravusių savo produkciją lyderiauja Lietuvos įmonės „Acorus Calamus“, „Švenčionių vaistažolės“, Lenkijos įmonė „Herbapol“ (iki 2000m.) bei Lietuvos įmonė „Valentis“ (2010m. ir 2013m.). / 1994 – 2013 there were mainly registered drugs for digestive system. The most common herbal medicines registered drug forms are tablets, drops, solutions and tea. In Lithuania main drug companies are from Lithuania, Germany and Poland. Since 1994 most succssefull companies who had registered their products were Lithuanian companies “Acorus Calamus”, “Švenčionių vaistažolės”, Polish company “Herbapol” (until 2000) and Lithuanian company “Valentis” (2010 - 2013).

Vγ9Vδ2 T cells are the main circulating γδ T cells in human adult blood. They are known for their T cell receptor (TCR)-dependent recognition of microbe and endogenous-derived non-peptide pyrophosphate antigens (phosphoantigens, PAg). With the intrinsically biased type 1 immune responses, Vγ9Vδ2 T cells are an important force in the defense of infections and tumors. However, the immune responses of Vγ9Vδ2 T cells in early life infections and in immunotherapies are not clear yet. In this thesis, we explored Vγ9Vδ2 T cell immune responses in both aspects. Vγ9Vδ2 T cells are abundant in human fetal peripheral blood, but compared to their adult counterparts they have a distinct developmental origin, are hyporesponsive towards in vitro phosphoantigen exposure and they do not possess a cytotoxic effector phenotype. In order to obtain insight into the role of Vγ9Vδ2 T cells in the human fetus, we investigated in the first part of this thesis their responses upon in utero infection with the phosphoantigen-producing parasite Toxoplasma gondii (T. gondii). Most congenital infections are caused by viruses, T. gondii is one of the exceptions. The organelle apicoplast present in T. gondii can generate the most potent Vγ9Vδ2 T cell activator. Thus infection in utero with T. gondii makes it a good model to observe Vγ9Vδ2 T cell immune responses in early life. By comparing to age-matched controls, we found that fetal Vγ9Vδ2 T cells were highly expanded in congenital T. gondii infected newborns, and these expanded cells were highly differentiated towards potent cytotoxic effector cells. While the impact of congenital infection on Vγ9Vδ2 T cell expansion and function waned after birth, the Vγ9Vδ2 TCR repertoire of infected infants possessed a clear fetal footprint with public clonotypes, reflecting the Vγ9Vδ2 T cell response in utero. Indeed, verification of the antigen recognition related complementarity-determining region 3 (CDR3) of the TCR for γ and δ chain by high-throughput sequencing revealed the enrichment of three Vδ2 sequences in congenitally-infected infants that are already generated at 8 weeks of gestation. Vγ9Vδ2 T cells possess several characteristics, including MHC-independent recognition of tumor cells and potent killing potential, that make them attractive candidates for cancer immunotherapeutic approaches. In the second part of this thesis we investigated Vγ9Vδ2 T cell responses towards two kinds of hemiparasite plant Viscum album L. (European mistletoe) extract drugs in vitro. Mistletoe therapy is the most used complementary cancer therapy in European countries. Mistletoe extract drugs are considered to benefit for increasing the quality of life of cancer patients and modulate immune cells, but the mechanism of action is not clear. Here, we investigated in-depth the in vitro response of human T cells towards mistletoe extract drugs by analyzing their functional and TCR responses using flow cytometry and high-throughput sequencing respectively. Non-fermented mistletoe-extract drugs (AbnobaViscum), but not their fermented counterparts (Iscador), induced specific expansion of Vγ9Vδ2 T cells among T cells. Furthermore, AbnobaViscum rapidly induced the release of cytotoxic granules and the production of the cytokines IFNγ and TNFα in Vγ9Vδ2 T cells. This stimulation of anti-cancer Vγ9Vδ2 T cells was mediated by the butyrophilin BTN3A, did not depend on the accumulation of endogenous phosphoantigens and involved the same Vγ9Vδ2 TCR repertoire as those of phosphoantigen-reactive Vγ9Vδ2 T cells.In summary, in the first part of this thesis we showed that the human fetus intrinsically possesses a group of Vγ9Vδ2 T cells that are responding to congenital parasite infections that provide potential protective effects to the fetus. In the second part, we provided insight into the in vitro responses of Vγ9Vδ2 T cells towards mistletoe extract drugs, indicating that Vγ9Vδ2 T cells can be an important target in mistletoe therapy. / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Constituiu objetivo deste trabalho o desenvolvimento tecnológico de formas farmacêuticas obtidas a partir de Phyllanthus niruri L. (Euphorbiaceae), incluso no Projeto de Pesquisa de Plantas Medicinais da Central de Medicamentos. Para tanto, foram desenvolvidas metodologias analíticas capazes de avaliar a qualidade da matéria-prima, das ações de transformação, dos produtos intermediários e do produto final. Estudaram-se técnicas de preparação de soluções extrativas e de produto seco por aspersão. O estudo da metodologia adaptada para quantificação de flavonóides na matéria-prima, demonstrou desvio da linearidade de resposta com o aumento da massa da amostra, limitando o seu emprego as condições fixadas neste trabalho. O teor de flavonóides totais do material vegetal foi de 0,80 g % (m/m). A solução extrativa empregada no desenvolvimento do produto seco foi selecionada através da realização do planejamento fatorial 2 3, onde foram avaliados os fatores: método de extração (decocção e infusão), relação droga solvente (2,5 e 7,5:100) e tempo de extração (5 e 15 min), utilizando como parâmetro de decisão o teor de flavonóides totais. A solução extrativa selecionada foi obtida através de decocção durante 15 minutos das partes aéreas moídas na proporção 7,5:100 (m/V). O emprego da mesma metodologia quantitativa aplicada a matéria-prima e ao produto intermediário mostrou a existência de erro sistemático proporcional com o aumento da concentração das amostras. Entretanto, alcançou-se comportamento linear, com ausência de erros sistemáticos, empregando-se amostras de menor concentração. O produto seco por aspersão foi obtido em torre de secagem, a partir da solução extrativa selecionada, adicionada de dióxido de silício coloidal a 30% do resíduo seco. Tanto a operação de secagem quanto a adição de dióxido de silício coloidal não causaram interferência nas análises qualitativas e quantitativas, obtendo-se uma taxa de recuperação, calculado como flavonóides totais, de 99%. / Phyllanthus niruri L. is a medicinal plant used in Brazil mainly against genitourinary disorders. Despite of its wide use in the folk medicine and in the pharmaceutical industry no attempts were done to provide technological knowledge in order to obtain pharmaceutical dosage forms with adequate and constant quality. The governmental program on medicinal, managed by the Brazilian Drug Agency CEME, developed pharmacological, chemical and botanical studies for this plant in a feasible dosage form, the technological development spray-dried product starting from Phyllanthus niruri was the aim of this work. For such purpose quality control and production methods for the plant raw material, aqueous extracts and spray-dried product were proposed and studied. The total flavonoid assay method for the plant raw material showed a lack of linearity at extremes high and low concentration, but, however, linear at the middle values. The extractive solution was selected through a 2 3 factorial design, considering the extraction method (decoction and infusion), plant to solvent proportion (2.5 and 7.5:100 w/v) and extraction time (5 and 15 minutes). The total flavonoids content was employed as decision parameter. The chose extractive solution was obtained by 15 min decoction of a plant to solvent ratio of 7.5 :100 (w/v). The assay method was not influenced by the amount of the plant used in the extract, but by the aliquot size. The spray dried product was prepared using colloidal silicon dioxide as drying excipient. The spray drying process and the excipient did not interfere on the qualitative and quantitative profile of the product.The total flavonoid recovery was around 99 % (w/w). The final product showed a low residual humidity content, but limited stability when exposed to high moisture atmospheres.

Constituiu objetivo deste trabalho o desenvolvimento tecnológico de formas farmacêuticas obtidas a partir de Phyllanthus niruri L. (Euphorbiaceae), incluso no Projeto de Pesquisa de Plantas Medicinais da Central de Medicamentos. Para tanto, foram desenvolvidas metodologias analíticas capazes de avaliar a qualidade da matéria-prima, das ações de transformação, dos produtos intermediários e do produto final. Estudaram-se técnicas de preparação de soluções extrativas e de produto seco por aspersão. O estudo da metodologia adaptada para quantificação de flavonóides na matéria-prima, demonstrou desvio da linearidade de resposta com o aumento da massa da amostra, limitando o seu emprego as condições fixadas neste trabalho. O teor de flavonóides totais do material vegetal foi de 0,80 g % (m/m). A solução extrativa empregada no desenvolvimento do produto seco foi selecionada através da realização do planejamento fatorial 2 3, onde foram avaliados os fatores: método de extração (decocção e infusão), relação droga solvente (2,5 e 7,5:100) e tempo de extração (5 e 15 min), utilizando como parâmetro de decisão o teor de flavonóides totais. A solução extrativa selecionada foi obtida através de decocção durante 15 minutos das partes aéreas moídas na proporção 7,5:100 (m/V). O emprego da mesma metodologia quantitativa aplicada a matéria-prima e ao produto intermediário mostrou a existência de erro sistemático proporcional com o aumento da concentração das amostras. Entretanto, alcançou-se comportamento linear, com ausência de erros sistemáticos, empregando-se amostras de menor concentração. O produto seco por aspersão foi obtido em torre de secagem, a partir da solução extrativa selecionada, adicionada de dióxido de silício coloidal a 30% do resíduo seco. Tanto a operação de secagem quanto a adição de dióxido de silício coloidal não causaram interferência nas análises qualitativas e quantitativas, obtendo-se uma taxa de recuperação, calculado como flavonóides totais, de 99%. / Phyllanthus niruri L. is a medicinal plant used in Brazil mainly against genitourinary disorders. Despite of its wide use in the folk medicine and in the pharmaceutical industry no attempts were done to provide technological knowledge in order to obtain pharmaceutical dosage forms with adequate and constant quality. The governmental program on medicinal, managed by the Brazilian Drug Agency CEME, developed pharmacological, chemical and botanical studies for this plant in a feasible dosage form, the technological development spray-dried product starting from Phyllanthus niruri was the aim of this work. For such purpose quality control and production methods for the plant raw material, aqueous extracts and spray-dried product were proposed and studied. The total flavonoid assay method for the plant raw material showed a lack of linearity at extremes high and low concentration, but, however, linear at the middle values. The extractive solution was selected through a 2 3 factorial design, considering the extraction method (decoction and infusion), plant to solvent proportion (2.5 and 7.5:100 w/v) and extraction time (5 and 15 minutes). The total flavonoids content was employed as decision parameter. The chose extractive solution was obtained by 15 min decoction of a plant to solvent ratio of 7.5 :100 (w/v). The assay method was not influenced by the amount of the plant used in the extract, but by the aliquot size. The spray dried product was prepared using colloidal silicon dioxide as drying excipient. The spray drying process and the excipient did not interfere on the qualitative and quantitative profile of the product.The total flavonoid recovery was around 99 % (w/w). The final product showed a low residual humidity content, but limited stability when exposed to high moisture atmospheres.

Constituiu objetivo deste trabalho o desenvolvimento tecnológico de formas farmacêuticas obtidas a partir de Phyllanthus niruri L. (Euphorbiaceae), incluso no Projeto de Pesquisa de Plantas Medicinais da Central de Medicamentos. Para tanto, foram desenvolvidas metodologias analíticas capazes de avaliar a qualidade da matéria-prima, das ações de transformação, dos produtos intermediários e do produto final. Estudaram-se técnicas de preparação de soluções extrativas e de produto seco por aspersão. O estudo da metodologia adaptada para quantificação de flavonóides na matéria-prima, demonstrou desvio da linearidade de resposta com o aumento da massa da amostra, limitando o seu emprego as condições fixadas neste trabalho. O teor de flavonóides totais do material vegetal foi de 0,80 g % (m/m). A solução extrativa empregada no desenvolvimento do produto seco foi selecionada através da realização do planejamento fatorial 2 3, onde foram avaliados os fatores: método de extração (decocção e infusão), relação droga solvente (2,5 e 7,5:100) e tempo de extração (5 e 15 min), utilizando como parâmetro de decisão o teor de flavonóides totais. A solução extrativa selecionada foi obtida através de decocção durante 15 minutos das partes aéreas moídas na proporção 7,5:100 (m/V). O emprego da mesma metodologia quantitativa aplicada a matéria-prima e ao produto intermediário mostrou a existência de erro sistemático proporcional com o aumento da concentração das amostras. Entretanto, alcançou-se comportamento linear, com ausência de erros sistemáticos, empregando-se amostras de menor concentração. O produto seco por aspersão foi obtido em torre de secagem, a partir da solução extrativa selecionada, adicionada de dióxido de silício coloidal a 30% do resíduo seco. Tanto a operação de secagem quanto a adição de dióxido de silício coloidal não causaram interferência nas análises qualitativas e quantitativas, obtendo-se uma taxa de recuperação, calculado como flavonóides totais, de 99%. / Phyllanthus niruri L. is a medicinal plant used in Brazil mainly against genitourinary disorders. Despite of its wide use in the folk medicine and in the pharmaceutical industry no attempts were done to provide technological knowledge in order to obtain pharmaceutical dosage forms with adequate and constant quality. The governmental program on medicinal, managed by the Brazilian Drug Agency CEME, developed pharmacological, chemical and botanical studies for this plant in a feasible dosage form, the technological development spray-dried product starting from Phyllanthus niruri was the aim of this work. For such purpose quality control and production methods for the plant raw material, aqueous extracts and spray-dried product were proposed and studied. The total flavonoid assay method for the plant raw material showed a lack of linearity at extremes high and low concentration, but, however, linear at the middle values. The extractive solution was selected through a 2 3 factorial design, considering the extraction method (decoction and infusion), plant to solvent proportion (2.5 and 7.5:100 w/v) and extraction time (5 and 15 minutes). The total flavonoids content was employed as decision parameter. The chose extractive solution was obtained by 15 min decoction of a plant to solvent ratio of 7.5 :100 (w/v). The assay method was not influenced by the amount of the plant used in the extract, but by the aliquot size. The spray dried product was prepared using colloidal silicon dioxide as drying excipient. The spray drying process and the excipient did not interfere on the qualitative and quantitative profile of the product.The total flavonoid recovery was around 99 % (w/w). The final product showed a low residual humidity content, but limited stability when exposed to high moisture atmospheres.

O interesse mundial por produtos derivados de plantas medicinais cresceu vertiginosamente nos últimos anos. Produtos derivados de plantas medicinais são misturas multicomponentes e sua eficácia pode estar associada a mais de um composto tornando o seu controle da qualidade tarefa árdua. Apesar de grandes investimentos em pesquisa terem sido feitos para a comprovação da eficácia e segurança dos medicamentos derivados de plantas medicinais, poucos são os trabalhos científicos que dizem respeito à manutenção da qualidade desses produtos. Extratos secos de plantas medicinais possuem efeito farmacológico devido à presença de substâncias ativas que estão sujeitas a reações de degradação. A velocidade dessas reações pode ser prevista através do estudo de estabilidade que envolve o armazenamento dos extratos em diversas condições (diferentes temperatura e umidade relativa do ar). Por esse motivo, o objetivo dessa tese foi o estudo da influência do processo de obtenção, das condições de armazenamento e das propriedades físico-químicas sobre a estabilidade de extratos secos padronizados de plantas medicinais. Visando o entendimento dos fatores que afetam a estabilidade de produtos naturais, os extratos foram caracterizados em relação à composição (presença de açúcares redutores, proteínas, lipídeos, carboidratos de alta e baixa massa molecular, acidez titulável), análise térmica, determinação de isotermas de adsorção (ou absorção), espectroscopia de Infravermelho e difração de raios-X. Após caracterização, os extratos secos foram armazenados em câmara climática visando avaliar a variação das propriedades físicas e químicas em função do período e condições de armazenamento. Para um entendimento mais amplo dos fatores que proporcionam maiores influências na estabilidade de produtos derivados de plantas medicinais, extratos secos foram obtidos a partir de três plantas medicinais amplamente utilizadas na medicina popular brasileira: Bauhinia forficata (hipoglicemiante), Maytenus ilicifolia (anti-úlcera gástrica) e Passiflora alata (sedativo e ansiolítico). Os extratos secos foram obtidos a partir de dois distintos processos de secagem o spray-drying (secagem por nebulização) e o processo leito de jorro. Os resultados obtidos indicam que todos os extratos secos analisados apresentaram algum tipo de alteração dos padrões de qualidade inicialmente observados. O que não foi possível mostrar é o quanto essas perdas poderiam influenciar na atividade biológica desses produtos. Por se tratar de uma mistura multicomponente é pouco provável que se estabeleçam técnicas que possam assegurar que todos esses componentes sejam mantidos durante todo o período de armazenamento. Porém, fenômenos importantes para a atividade farmacológica como a cristalização das substâncias, (demonstrada através dos espectros de raios-X), ou a degradação de marcadores (CLAE e espectrofotometria) puderam ser monitorados e previstos. / Nowadays, the global interest for herbal drugs has increased significantly. Herbal medicinal products are a complex mixture of substances and their efficacy might be associated with one or more compounds. For this reason, the quality control of herbal products is a challenging task. In spite of a great increase in researches concerning the pharmacological and toxicological aspects of herbal drugs, there is a lack of scientific works related to the quality maintenance of these products. Among all the herbal medicinal products the standardized dried extracts are gaining more interest as a way of controlling dosage and increasing safety of the phytopharmaceuticals. Herbal dried extracts are effective due to the presence of active substances, and these substances may degrade. The rate of degradation can be measured through stability testing what is done through the storage of the product in different storage conditions (temperature and relative humidity). For this reason, the aim of this thesis was the study of the influence of the obtainment process, storage conditions and physical and chemical properties in the standardized dried extracts stability. For the understanding of the factors which affects the stability of the natural products, the extracts were characterized in relation to their composition (reducing sugars, proteins, lipids, low and high molecular weight carbohydrates, and titrable acidity), the calorimetric profile, determination of sorption isotherms, near infrared spectroscopy and X-ray diffraction analysis. Furthermore, the dried extracts were stored in a climatic chamber for the evaluation of the physical and chemical properties variations in relation to the time and storage conditions. Herbal dried extracts obtained from three plant species commonly used in Brazil were used in this study: Bauhinia forficata (hypoglycemiant), Maytenus ilicifolia (antiulcerogenic) and Passiflora alata (sedative and anxiolytic). The dried extracts were produced trough two different drying processes the spray drying and the spouted bed drying. In conclusion, the results obtained showed that all the studied extracts presented some deviation of the initial standards owing to its great sensibility to the environmental conditions. However, it was not possible to show how this lost would affect the effectiveness of these products. Moreover, for being such a complex mixture of components it is almost impossible the establishment of techniques that will assure that all this components will remain unchanged during the storage period. Nevertheless, some important factors for the pharmacological activity of substances as the crystallization (X-ray diffraction) or the degradation of the chemical markers (high performance liquid chromatography and spectrophotometry) can be evaluate and previewed

O interesse mundial por produtos derivados de plantas medicinais cresceu vertiginosamente nos últimos anos. Produtos derivados de plantas medicinais são misturas multicomponentes e sua eficácia pode estar associada a mais de um composto tornando o seu controle da qualidade tarefa árdua. Apesar de grandes investimentos em pesquisa terem sido feitos para a comprovação da eficácia e segurança dos medicamentos derivados de plantas medicinais, poucos são os trabalhos científicos que dizem respeito à manutenção da qualidade desses produtos. Extratos secos de plantas medicinais possuem efeito farmacológico devido à presença de substâncias ativas que estão sujeitas a reações de degradação. A velocidade dessas reações pode ser prevista através do estudo de estabilidade que envolve o armazenamento dos extratos em diversas condições (diferentes temperatura e umidade relativa do ar). Por esse motivo, o objetivo dessa tese foi o estudo da influência do processo de obtenção, das condições de armazenamento e das propriedades físico-químicas sobre a estabilidade de extratos secos padronizados de plantas medicinais. Visando o entendimento dos fatores que afetam a estabilidade de produtos naturais, os extratos foram caracterizados em relação à composição (presença de açúcares redutores, proteínas, lipídeos, carboidratos de alta e baixa massa molecular, acidez titulável), análise térmica, determinação de isotermas de adsorção (ou absorção), espectroscopia de Infravermelho e difração de raios-X. Após caracterização, os extratos secos foram armazenados em câmara climática visando avaliar a variação das propriedades físicas e químicas em função do período e condições de armazenamento. Para um entendimento mais amplo dos fatores que proporcionam maiores influências na estabilidade de produtos derivados de plantas medicinais, extratos secos foram obtidos a partir de três plantas medicinais amplamente utilizadas na medicina popular brasileira: Bauhinia forficata (hipoglicemiante), Maytenus ilicifolia (anti-úlcera gástrica) e Passiflora alata (sedativo e ansiolítico). Os extratos secos foram obtidos a partir de dois distintos processos de secagem o spray-drying (secagem por nebulização) e o processo leito de jorro. Os resultados obtidos indicam que todos os extratos secos analisados apresentaram algum tipo de alteração dos padrões de qualidade inicialmente observados. O que não foi possível mostrar é o quanto essas perdas poderiam influenciar na atividade biológica desses produtos. Por se tratar de uma mistura multicomponente é pouco provável que se estabeleçam técnicas que possam assegurar que todos esses componentes sejam mantidos durante todo o período de armazenamento. Porém, fenômenos importantes para a atividade farmacológica como a cristalização das substâncias, (demonstrada através dos espectros de raios-X), ou a degradação de marcadores (CLAE e espectrofotometria) puderam ser monitorados e previstos. / Nowadays, the global interest for herbal drugs has increased significantly. Herbal medicinal products are a complex mixture of substances and their efficacy might be associated with one or more compounds. For this reason, the quality control of herbal products is a challenging task. In spite of a great increase in researches concerning the pharmacological and toxicological aspects of herbal drugs, there is a lack of scientific works related to the quality maintenance of these products. Among all the herbal medicinal products the standardized dried extracts are gaining more interest as a way of controlling dosage and increasing safety of the phytopharmaceuticals. Herbal dried extracts are effective due to the presence of active substances, and these substances may degrade. The rate of degradation can be measured through stability testing what is done through the storage of the product in different storage conditions (temperature and relative humidity). For this reason, the aim of this thesis was the study of the influence of the obtainment process, storage conditions and physical and chemical properties in the standardized dried extracts stability. For the understanding of the factors which affects the stability of the natural products, the extracts were characterized in relation to their composition (reducing sugars, proteins, lipids, low and high molecular weight carbohydrates, and titrable acidity), the calorimetric profile, determination of sorption isotherms, near infrared spectroscopy and X-ray diffraction analysis. Furthermore, the dried extracts were stored in a climatic chamber for the evaluation of the physical and chemical properties variations in relation to the time and storage conditions. Herbal dried extracts obtained from three plant species commonly used in Brazil were used in this study: Bauhinia forficata (hypoglycemiant), Maytenus ilicifolia (antiulcerogenic) and Passiflora alata (sedative and anxiolytic). The dried extracts were produced trough two different drying processes the spray drying and the spouted bed drying. In conclusion, the results obtained showed that all the studied extracts presented some deviation of the initial standards owing to its great sensibility to the environmental conditions. However, it was not possible to show how this lost would affect the effectiveness of these products. Moreover, for being such a complex mixture of components it is almost impossible the establishment of techniques that will assure that all this components will remain unchanged during the storage period. Nevertheless, some important factors for the pharmacological activity of substances as the crystallization (X-ray diffraction) or the degradation of the chemical markers (high performance liquid chromatography and spectrophotometry) can be evaluate and previewed

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BeatrizPB_DISSERT.pdf: 1734874 bytes, checksum: 6c9183abd4605927f73899354ef306e2 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The herbal medicine Sanativo? is produced by the Pernambucano Laboratory since 1888 with indications of healing and hemostasis. It is composed of a fluid extract about Piptadenia colubrina, Schinus terebinthifolius, Cereus peruvianus and Physalis angulata. Among the plants in their composition, S. terebinthifolius and P. colubrina have in common phenolic compounds which are assigned most of its pharmacological effects. The tannins, gallic acid and catechin were selected as markers for quality control. The aim of this study was the development and validation of analytical method by HPLC/UV/DAD for the separation and simultaneous quantification of gallic acid (GAC) and catechin (CTQ) in Sanativo?. The chromatographic system was to stationary phase, C-18 RP column, 4,6 x 150 mm (5 mm) under a temperature of 35 ? C, detection at 270 and 210 nm. The mobile phase consisted of 0.05% trifluoroacetic acid and methanol in the proportions 88:12 (v/v), a flow rate of 1 ml/min. The analytical method presented a retention factor of 0.30 and 1.36, tail factor of 1.8 and 1.63 for gallic acid and catechin, respectively, resolution of 18.2, and theoretical plates above 2000. The method validation parameters met the requirements of Resolution n ? 899 of May 29, 2003, ANVISA. The correlation coefficient of linear regression analysis for GAC and CTQ from the standard solution was 0.9958 and 0.9973 and when performed from the Sanativo? 0.9973 and 0.9936, the matrix does not interfere in the range 70 to 110 %. The limits of detection and quantification for GAC and CQT were 3.25 and 0.863, and 9.57 and 2.55 mg/mL, respectively. The markers, GAC and CQT, showed repetibility (coefficient of variation of 0.94 % and 2.36 %) and satisfactory recovery (100.02 ? 1.11 % and 101.32 ? 1.36 %). The method has been characterized selective and robust quantification of GAC and CTQ in the Sanativo? and was considered validated / O medicamento fitoter?pico Sanativo? ? produzido pelo Laborat?rio Pernambucano desde 1888 com indica??es de cicatrizante e hemost?tico. Trata-se de um extrato fluido composto por Piptadenia colubrina, Schinus terebinthifolius, Cereus peruvianus e Physalis angulata. Dentre as plantas de sua composi??o, S. terebinthifolius e P. colubrina possuem em comum compostos fen?licos aos quais ? atribu?da a maior parte de seus efeitos farmacol?gicos. Os taninos, ?cido g?lico e catequina foram selecionados como marcadores para controle de qualidade desse medicamento. O objetivo do presente trabalho foi o desenvolvimento e valida??o de m?todo anal?tico por CLAE/UV/DAD para separa??o e quantifica??o simult?nea de ?cido g?lico (ACG) e catequina (CQT) no fitoter?pico Sanativo?. O sistema cromatogr?fico teve como fase estacion?ria, coluna RP C-18, 4,6 x 150 mm (5 μm), sob a temperatura de 35 ?C, detec??o em 270 e 210 nm. A fase m?vel foi composta por ?cido trifluoroac?tico 0,05 % e metanol nas propor??es 88:12 (v/v), sob vaz?o de 1 ml/min. O m?todo anal?tico desenvolvido apresentou um fator de reten??o de 0,30 e 1,36, fator de cauda de 1,8 e 1,63, para ?cido g?lico e catequina, respectivamente, resolu??o de 18,2, al?m de pratos te?ricos acima de 2000. O m?todo atendeu os par?metros de valida??o exigidos na Resolu??o RE n? 899, de 29 de maio de 2003, da ANVISA. O coeficiente de correla??o da an?lise de regress?o linear para ACG e CQT a partir da solu??o padr?o foi de 0,9958 e 0,9973 e a partir do Sanativo? foi de 0,9973 e 0,9936, a matriz do fitoter?pico n?o interfere no intervalo de 70 a 110%. Os limites de detec??o e de quantifica??o para ACG e CTQ foram de 3,25 e 0,863, e 9,57 e 2,55 μg/mL, respectivamente. Os marcadores, ACG e CTQ, apresentaram repetibilidade (coeficientes de varia??o de 0,94 % e 2,36 %) e recupera??o satisfat?ria (100,02 ? 1,11 % e 101,32 ? 1,36 %). O m?todo ainda se caracterizou seletivo e robusto para quantifica??o de ACG e CQT no Sanativo? e foi considerado validado

La phytothérapie consiste en l’utilisation thérapeutique de plantes ou de médicaments à base de plantes, sous forme de spécialités pharmaceutiques, de préparations (magistrales ou officinales) ou de produits officinaux divisés. On entend par médicament à base de plantes (MABP) « tout médicament dont les substances actives sont exclusivement une ou plusieurs substances végétales ou préparations à base de plantes ou une association d’une ou de plusieurs substances végétales ou préparations à base de plantes ». Il s’agit donc de médicaments à part entière qui sont ainsi soumis aux mêmes exigences de qualité que celles requises pour tout autre médicament. La directive 2004/24/CE, permet toutefois quelques assouplissements autorisant à fournir des données toxicologiques et cliniques purement bibliographiques, lorsque les conditions requises pour pouvoir bénéficier d'un tel "enregistrement de l'usage traditionnel" sont remplies. Quant aux médicaments dont l'usage médical est "bien établi", ils peuvent également faire l'objet d'une dispense d'essais cliniques, mais les données toxicologiques les concernant doivent néanmoins être fournies. Cette législation européenne vise à garantir au patient la qualité, la sécurité et l'efficacité des remèdes qu'il consomme, à permettre le libre choix thérapeutique, la libre circulation des médicaments au sein de l’Union Européenne ainsi que la préservation des ressources naturelles végétales et le respect de la propriété intellectuelle et pourrait inspirer d'autres pays du monde qui ne disposent pas à ce jour des outils législatifs nécessaires à la réglementation de leurs remèdes traditionnels, en particulier les pays africains. / Herbal medicine consists in therapeutical use of plants or herbal medicinal products, in the form of patent medicines, magistral or pharmaceutical preparations or divided pharmaceutical products. It is meant by herbal medicinal product “any medicine the active substances of which are exclusively one or several herbal preparations or an association of one or several herbal substances or herbal preparations”. Herbal medicine are therefore full medicines and as such, they are submitted to the same quality requirements than those required for any other medicine. The directive 2004/24/EC of the European Parliament and ofthe Council of 31 March 2004 amending, as regards traditional herbal medicinal products, the directive 2001/83/EC on the Community code relative to medicinal products for human use, however permits some relaxings allowing to supply purely bibliographical toxicological and clinical data when the conditions required to be able to enjoy such a “traditional useregistration” are fulfilled. As regards herbal medicines the medicinal use of which have been proved as “well-established”, they are able to enjoy an exemption of clinical studies too, but toxicological data concerning these ones should nevertheless be produced. This European legislation aims to guarantee for the patient quality, safety and efficacy of the remedies he consumes, to permit free therapeutic choice and free movement of herbal medicines within the European Union, as well as preservation of natural vegetal resources (vegetal biodiversity) and respect of intellectual property of the traditional knowledges holders. It could be applicated in other countries like African countries, too.