A análise de fármacos é fundamental nas diversas fases do desenvolvimento farmacêutico, tais como em estudos de formulação, estabilidade e controle de qualidade do produto. O mesilato de gemifloxacino (MGF), liberado para uso clínico no Brasil em novembro de 2006 com o nome comercial de Factive®, é uma fluorquinolona indicada para o tratamento da exacerbação aguda da bronquite crônica e da pneumonia adquirida da comunidade. A literatura pesquisada apresenta poucos relatos de determinação quantitativa e de estudos de estabilidade do fármaco em comprimidos revestidos. Anteriormente aos estudos, foi realizada a caracterização da substância química de referência (SQR) de MGF por espectrofotometria no infravermelho (E IV), ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN 1H) e carbono (RMN 13C), análise térmica por calorimetria exploratória de varredura (DSC) e determinação da faixa de fusão. Métodos analíticos para determinação qualitativa e quantitativa foram desenvolvidos e validados por espectrofotometria na região do ultravioleta (E UV) e visível (E VIS), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), eletroforese capilar (EC) e ensaio microbiológico pelo método de cilindros em placas. A validação de um método de dissolução baseado em dados in vivo do fármaco também foi realizada. A elucidação do produto de degradação isolado em condições alcalinas foi realizada por E IV, RMN de 1H, 13C e correlação (COSY, HSQC e HMBC), espectrometria de massas (EM) e emissão atômica. Estudos de citotoxicidade, fototoxicidade, genotoxicidade e fotogenotoxicidade foram empregados para conhecimento da toxicidade dos produtos analisados. / The drug analysis is essential in all areas of the pharmaceutical development, such as during formulation studies, stability and quality control of the product. Gemifloxacin mesylate (GFM), approved for clinical use in Brazil in November of 2007 with the commercial name of Factive®, is a fluoroquinolone prescribed for the treatment of acute exacerbations of chronic bronchitis and community-acquired pneumonia. The research literature shows a few studies of quantitative determination and stabilities studies of the drug in coated tablets. Previously, it was performed the characterization of the reference chemical substance of GFM by infrared spectrometry (IR), nuclear magnetic resonance of 1H (1H NMR) and 13C (13C NMR), thermal analysis by differential scanning calorimetry (DSC) and determination of the melting range. Analytical methods for qualitative and quantitative determination were developed and validated by ultraviolet (UV) and visible (Vis) spectrophotometry, highperformance liquid chromatography (HPLC), capillary electrophoresis (CE) and microbiological assay applying the cylinder–plate method. The validation of the dissolution method based on in vivo data of the GFM was also performed. The elucidation of the isolate degradation product in alkaline conditions was performed by IR, 1H, 13C and correlation (COSY, HSQC and HMBC) NMR, and mass spectrometry (MS). Cytotoxicity, phototoxicity, genotoxicity and photogenotoxicity studies were carried out for the toxicity knowledge of the analyzed products.

Objetivos: os objetivos gerais deste trabalho foram desenvolver, validar e comparar métodos indicativos de estabilidade para a análise do cloridrato de butenafina (BTF), matéria-prima e forma farmacêutica, bem como determinar a cinética de degradação do fármaco em condição de estresse. Adicionalmente, o trabalho visou à validação de método para avaliar e comparar a penetração/permeação cutânea da BTF de diferentes formulações. Métodos: Um método indicativo de estabilidade para análise da BTF por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi desenvolvido e validado, conforme normas do ICH. A cinética de degradação do fármaco (matériaprima e creme) frente à luz UVC foi determinada. Testes para o desenvolvimento de método quantitativo por eletroforese capilar para a análise do fármaco isoladamente e presente na formulação foram realizados. O método analítico cromatográfico previamente desenvolvido para a formulação semi-sólida foi validado para a quantificação de BTF na pele suína. Em seguida, as penetrações/permeações cutâneas do fármaco utilizando células de Franz foram analisadas visando à comparação de duas formulações comerciais (uma delas brasileira e a outra americana). Resultados e Conclusões: O método de CLAE indicativo de estabilidade desenvolvido demonstrou ser adequado para a determinação da substância ativa na formulação mesmo na presença de produtos de degradação, bem como para a quantificação do fármaco na pele suína e no fluído receptor. Os principais fatores extrínsecos que promovem a degradação do fármaco foram estabelecidos: luz, oxidação e meio básico (este último somente na presença de excipientes). A determinação da cinética de fotodegradação como sendo de primeira ordem demonstra que o processo é dependente da concentração do fármaco, reforçando a necessidade de proteção frente à luz. Já o método por eletroforese capilar mostrou-se não específico frente à formulação placebo simulado, inviabilizando seu uso para o creme. Na avaliação da permeação cutânea das formulações brasileira e americana não foi detectada presença considerável do fármaco no fluído receptor para ambos os produtos. Já na verificação da penetração, não houve diferença significativa na retenção do fármaco na epiderme, entretanto, na derme a diferença foi estatisticamente significativa, com maior concentração retida na análise da formulação americana (α = 0,05). / Objectives: The aim of the present work was to develop, validate and compare stability indicating methods to quantify butenafine hydrochloride (BTF), raw material and commercial cream, as well as to establish the degradation kinetics of the drug in a stress condition. Also, the study had the goal of validating a method to assess and compare the cutaneous permeation/penetration of two different formulations. Methods: A stability-indicating method for the analysis of BTF by high performance liquid chromatography (HPLC) was developed and validated according to the ICH guidelines. The degradation kinetics of the drug (raw material and cream) under the UVC light was determined. Analyzes to develop and validate an analytical method by capillary electrophoresis, to quantify the drug by itself and in the cream, were performed. The chromatographic method previously developed for the semi-solid product was validated to quantify the drug in porcine skin. Then, the cutaneous permeation/penetration of BTF, through the Franz-type cell, was analyzed to compare two different commercial formulations (one of them is Brazilian and the other is American). Results and Conclusions: The developed stability-indicating method was adequate to determine the active substance in the formulation even in the presence of the degradation products, as well as to quantify the drug in porcine skin and in the receptor fluid. The main extrinsic factors that promote the drug degradation were established: light, oxidative and basic media (the last in the presence of the excipient ingredients). The photodegradation kinetics was determined as first order showing that the process is dependent on the drug concentration, reaffirming the necessity of protection against light. The method by capillary electrophoresis was not specific considering the placebo formulation, hindering its use to the cream. During the cutaneous permeation analysis, no drug was found in the receptor media of both the Brazilian and the American formulations. No difference was verified to the epidermis, although to the dermis there was a statistical distinction as the concentration of retained drug from the American formulation was higher (α = 0,05).

LINHARES JUNIOR, Gilberto Ferreira. Desenvolvimento e validação de metodologia cromatográfica para determinação de bisfenol A em simulantes de alimentos de ensaios de migração. 2012. 101 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Tecnologia de Alimentos, Fortaleza-CE, 2012 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-06-08T15:09:14Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_gflinharesjunior.pdf: 1691103 bytes, checksum: 0abb8d914beb4b36dee06bc962679c7b (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-06-08T15:09:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_gflinharesjunior.pdf: 1691103 bytes, checksum: 0abb8d914beb4b36dee06bc962679c7b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-08T15:09:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_gflinharesjunior.pdf: 1691103 bytes, checksum: 0abb8d914beb4b36dee06bc962679c7b (MD5) Previous issue date: 2012 / This study aimed to develop and chromatographic method for the determination of bisphenol A in four different food simulants using high performance liquid chromatography and diode array detector (PDA) to support in enasios migration. The simulating used were A (purified water), B (solution aquosade 3% acetic acid), C (aqueous 10% ethanol) and D (aqueous 95% ethanol). Preliminary assessment of the analytical conditions was conducted in order to establish those that confer the best results, which were the system of mobile phase acetonitrile-water in the ratio 70:30 by volume, 40 ° C oven and length of the column wavelength of 201 nm. The retention time of the bisphenol A was found to be 3.25 minutes. For simulating the method of treatment consists of evaporation of sample 1 ml of sample at 60 ° C with duration of 1 hour and 45 minutes (A and C), 2 hours (B) and 1 hour (D). In sequence, the method was evaluated with respect to the parameters of analytical validation, including linearity, limit of detection and quantification, repeatability, intermediate precision between different analysts and between different days, recovery, selectivity and robustness. The method for simulating the coefficient for determining (r ²) or greater than 0.9988 in the range tested (50 to 2000 ppb); detection limit and quantitation, respectively, 14.7 ppb and 48.9 ppb; coefficient variation in repeatability of 2.07% for the inter-day precision of 1.05% and the accuracy of inter-Analyst 1.76%, recovery of 97.9% (CV = 1.3%) (50 ppb ), 99.2% (CV = 0.7%) (1000 ppb) and 103.6% (CV = 0.4%). The results for the simulant B includes coefficient of determination (r ²) 0.9972 or higher; limit of detection and quantification, respectively, 7.8 ppb and 26.0 ppb; coefficients of variation for repeatability of 3.74%, inter day precision, accuracy and 0.14% cross-Analyst 0.2%, 94.8% recovery (CV = 4.8%) (50 ppb) and 99.8% (CV = 0.2% ) (1000 ppb) and 92.3% (CV = 1.2%) (2000 ppb). For the simulant C results include a coefficient of determination (r ²) 0.9988 or higher; limit of detection and quantification, respectively, 4.8 ppb and 16.1 ppb, coefficient of variation for repeatability of 2.84%, accuracy inter-day precision of 1.37% and inter-analysts of 0.14%; de104 recovery, 6% (CV = 2.5%) (50 ppb), 99.8% (CV = 1.3%) ( 1000 ppb) to 102.5% (CV = 2.9%) (2000 ppb). The results for simulating D was 0.9984 r ² or more, detection limit and quantitation, respectively, 13.7 ppb and 45.6 ppb; coefficient of variation of 2.0% to repeatability, accuracy of an inter-day 9% and accurate inter-de1 analysts, 2%; recuperção 92.6% (CV = 1.76%) (50 ppb) and 99.9% (CV = 0.9%) (1000 ppb) and 104 8% (CV = 2.7%) (2000 ppb). There were no significant interferences to the method tested and proved to be robust. / Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e metodologia cromatográfica para a determinação de bisfenol A em quatro diferentes simulantes de alimentos utilizando cromatografia líquida de alta eficiência e detector de arranjo de diodo (PDA) para suporte em enasios de migração. Os simulantes utilizados foram A (água purificada), B (solução aquosade ácido acético a 3%), C (solução aquosa de etanol a 10%) e D (solução aquosa de etanol a 95%). A avaliação preliminar das condições de análise foi conduzida com a finalidade de estabelecer aquelas que conferem os melhores resultados, os quais foram o sistema de fase móvel acetonitrila-água na proporção volumétrica 70:30, temperatura de 40°C do forno da coluna e comprimento de onda em 201 nm. O tempo de retenção do bisfenol A encontrado foi de 3,25 minutos. Para os simulantes, o método de tratamento consistiu da evaporação de 1 ml de amostra amostra a 60°C com duração de 1 hora e 45 minutos (A e C), 2 horas (B) e 1 hora (D). Em sequência, o método foi avaliado com relação aos parâmetros de validação analítica, incluindo linearidade, limite de detecção e de quantificação, repetibilidade, precisão intermediária entre analistas diferentes e entre dias diferentes, recuperação,seletividade e robustez. O método desenvolvido para o simulante A apresentou coeficiente de determinação (r²) 0,9988 ou superior no intervalo testado (50 a 2000 ppb); limite de detecção e de quantificação , respectivamente, 14,7 ppb e 48,9 ppb; coeficiente de variação para repetibilidade de 2,07%, para a precisão inter-dias de 1,05% e para a precisão inter-analistas de 1,76%; recuperação de 97,9% (CV= 1,3%) (50 ppb), 99,2% (CV= 0,7%) (1000 ppb) e 103,6% (CV= 0,4%). Os resultados obtidos para o simulante B incluem coeficiente de determinação (r²) 0,9972 ou superior; limite de detecção e de quantificação, respectivamente, 7,8 ppb e 26,0 ppb; coeficientes de variação para repetibilidade de 3,74%, precisão inter-dias de 0,14% e precisão inter-analistas de 0,2%; recuperação de 94,8% (CV= 4,8%) (50 ppb), 99,8% (CV= 0,2%) (1000 ppb) e 92,3% (CV= 1,2%) (2000 ppb). Para o simulante C os resultados incluem coeficiente de determinação (r²) 0,9988 ou superior; limite de detecção e de quantificação, respectivamente, 4,8 ppb e 16,1 ppb; coeficiente de variação para repetibilidade de 2,84%, precisão inter-dias de 1,37%e precisão inter-analistas de 0,14%; recuperação de104,6% (CV= 2,5%) (50 ppb), 99,8% (CV= 1,3%) (1000 ppb) e 102,5% (CV= 2,9%) (2000 ppb). Os resultados para o simulante D foram r² 0,9984 ou superior; limite de detecção e de quantificação,respectivamente, 13,7 ppb e 45,6 ppb; coeficiente de variação para repetibilidade de 2,0%, precisão inter-dias de 1,9% e precisão inter-analistas de1,2%; recuperção de 92,6% (CV= 1,76%) (50 ppb), 99,9% (CV= 0,9%) (1000 ppb) e 104,8% (CV= 2,7%) (2000 ppb). Não foram observados interferentes importantes para o método testado, mostrando-se robusto.

Natural organic matter (NOM) is a diverse blend of decomposed animal and plant material found in different natural water sources. Due to its large and complex structure, NOM is difficult to both remove and characterize in water. Therefore, there is a need to separate NOM into its components before it can be characterized. The aim of this project was to fractionate NOM through a novel size exclusion chromatography (SEC) composite (poly (styrene-divinyl benzene) (PS-DVB) and Polysilsesquioxane (PSQ)) packed column. Raw and final water samples from Mid-Vaal (MV), Olifantspoort (LO), Mtwalume (MT) and Preekstoel (P) were investigated. Poly (styrene-divinyl benzene) (PS-DVB) and polysilsesquioxane were both synthesized and optimized at various temperatures, compositions and time periods. An end-capping material such as hexamethyldisilizane (HMDS) was added on the PSQ to prevent active silanol groups on the polysilsesquioxane (PSQ) from reacting with active sites of NOM (our analyte). The E-PSQ (end-capped PSQ) and PS-DVB materials were packed in eight different SPE cartridges first, before the materials could be packed in the SEC column. This packing was done to check for the best mass composition of the E-PSQ and PS-DVB. From the obtained SPE results, both the EPSQ and PS-DVB were packed in one SEC/GPC column at a ratio of 1:1 in order to form the composite hybrid material. The packed SEC column was connected to an HPLC instrument and various column efficiency tests were evaluated. The results for the test of interactions with acidic compounds implied that the column can be used for the acidic analytes such as those forming NOM composition (humic acids, fulvic acids) and the column had minimum silanol groups. For hydrophobic interactions the stationary phase strength was different to that of the commercial columns and it could selectively elute molecules based on their different masses. The steric selectivity test showed that the stationary phase could separate and distinguish between molecules with similar hydrophobicity and structure but different shapes (o-terphenyl and triphenylene). The Hydrogen bonding capacity (HBC) test showed that the column had minimum silanol groups and the end-capping was successful on the E-PSQ. After fractionation of all the water samples, the MT raw showed NOM peaks around 1.8 mins, 3.4 mins and 5.3, and the final showed NOM peaks around 1.8 mins and 5.5 mins. The Mid-Vaal (MV) raw and final samples shows NOM peaks at around 1.8 mins and 6 mins. The Preekstoel (P) final water had one NOM peak at around 1.8 mins and raw samples had two NOM peaks around 1.8 mins and 6 mins. / Chemistry / M. Sc. (Chemistry)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Studies on the topical use of diclofenac in horses deal mostly with pharmacokinetics and the clinical effect of the medication, few studies addressed its tolerability or its oral use. The aim of this study was to obtain data related to pharmacokinetics and distribution of diclofenac sodium in synovial fluid after oral or topical administration in healthy ponies as well as to evaluate the tolerability of oral and topical diclofenac sodium administered on a frequency similar to a treatment period. Healthy ponies were divided into three groups and treated with topical (group I, n = 6) or oral (group II, n = 6) diclofenac at a dose of 2.5 mg kg-1 and oral phenylbutazone (group III, n = 3) at a dose of 2.2 mg kg-1. To evaluate the bioavailability blood samples were collected at different times, from 30 minutes to 144 hours and synovial fluid samples 6, 12 and 24 hours, after starting treatment. Blood samples collected 24 hours before and until 144 hours after starting treatment were used for CBC, WBC, biochemical and coagulation profiles. A significant difference was found between group I and group II on prothrombin time, activated partial thromboplastin time, fibrinogen, hematocrit, hemoglobin, erythrocytes, total leukocytes, neutrophils, band cells, lymphocytes, eosinophils, and alkaline phosphatase. Similar results were found between group II and group III, however, the activated partial thromboplastin time did not differ. Even though the plasma concentration of diclofenac sodium was higher in group II than in group I, the synovial concentration tended to be higher in group I. The diclofenac bioavailability and tolerability data obtained in ponies showed that the topic administration delivered therapeutic concentrations of diclofenac and proved to be safer, as the oral administration resulted in blood changes. / Os estudos sobre a utilização tópica do diclofenaco conduzidos na espécie equina abordam em sua maioria a farmacocinética e o efeito clínico desta medicação. A tolerabilidade frente ao diclofenaco e a utilização deste medicamento por via oral têm sido pouco estudadas. Nossos objetivos foram obter dados relacionados à farmacocinética sanguínea e distribuição do diclofenaco de sódio no líquido sinovial, após a administração oral e tópica em pôneis sadios, bem como avaliar a tolerabilidade do diclofenaco de sódio administrado por via oral e tópica, usando uma frequência de administração semelhante a um período de tratamento. Pôneis clinicamente sadios foram divididos em três grupos e tratados com diclofenaco por via tópica (grupo I, n=6) e oral (grupo II, n=6), na dose de 2,5 mg kg-1 e fenilbutazona oral (grupo III, n=3) na dose de 2,2 mg kg-1. Para avaliar a biodisponibilidade foram coletadas amostras de sangue em diferentes momentos, desde 30 minutos até 144 horas após início do tratamento e amostras de líquido sinovial as 6, 12 e 24 horas, após o início do tratamento. Amostras de sangue foram coletadas a cada 24 horas até 144 horas após início do tratamento para hemograma, leucograma, bioquímico e coagulograma. Diferenças significativas foram encontradas entre o grupo I e o grupo II em determinados tempos no tempo de protrombina, tempo de tromboplastina parcial ativado, fibrinogênio, hematócrito, hemoglobina, hemácias, leucócitos totais, segmentados, bastonetes, linfócitos, eosinófilos e fosfatase alcalina. Resultados semelhantes foram observados entre o grupo II e o grupo III, no entanto o tempo de tromboplastina parcial ativado não apresentou diferença. Embora a concentração plasmática do diclofenaco de sódio no grupo II tenha sido mais elevada que no grupo I, a concentração sinovial foi maior no grupo I. Os dados obtidos sobre a biodisponibilidade e tolerabilidade do diclofenaco em pôneis mostram que a aplicação tópica é superior à oral por resultar em concentrações sinoviais mais elevadas do fármaco, além de ser mais segura, pois não alterou significativamente os parâmetros avaliados.

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-27Bitstream added on 2014-12-02T11:21:14Z : No. of bitstreams: 1 000693706.pdf: 2880957 bytes, checksum: 43d4b15dffaa346d602b5f57917996d4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Amplamente utilizado no tratamento de vários tipos de câncer e na psoríase, o metotrexato (MTX) é um quimioterápico, estruturalmente análogo do ácido fólico, que apesar de sua eficácia apresenta uma série de efeitos adversos, sendo a hepatotoxicidade o mais grave. Atualmente os sistemas nanoestruturados líquido-cristalinos de fase lamelar estão sendo utilizados como dispositivos para liberação modificada de fármacos, sendo vantajosos na liberação tópica de várias substâncias, conforme suas características de interação com o estrato córneo e as outras camadas da pele, evitando assim efeitos adversos sistêmicos. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver sistemas nanoestruturados líquido-cristalinos de fase lamelar, acrescidos de MTX, caracteriza-los do ponto de vista físico, realizar a análise estrutural das formulações, através de microscopia de luz polarizada (MLP), espalhamento de raios-X a baixo ângulo (SAXS) e suas propriedades reológicas, executar os testes de estabilidade preliminar (TEP) das formulações, validar o método analítico para a quantificação de MTX por CLAE e executar ensaios de liberação, permeação e retenção in vitro. As formulações preparadas a partir da mistura do poliéter funcional siloxano (Dow Corning® 5329) como tensoativo, com silicone fluido de co-polímero glicol (Dow Corning® 193C) como fase oleosa titulados em fase aquosa, composta por tampão fosfato de potássio monobásico 0,01M pH 7,4, apresentaram fases líquido-cristalinas do tipo lamelar, confirmados pelos ensaios de MLP e SAXS. Os TEPs evidenciaram que as formulações A, B e C mantiveram-se estáveis durante o período do estudo. Os estudos do comportamento reológico das formulações apresentaram-se como fluidos pseudoplásticos não–newtonianos tixotrópicos ... / Widely used in the treatment of some types of cancer, the methotrexate (MTX) is a chemotherapeutic, structurally analog of the folic acid, although its effectiveness, presents a series of adverse effect, being the most serious hepatotoxicity. Currently, the liquid crystal lamellar phase is being used of devices for modified release of drug demonstrated to be advantageous in the release topic of some substances, given to the characteristics of interaction with the stratum corneun and other layers of the skin, avoiding systemic adverse effects. The aims of this research had been to develop and to characterize liquid crystalline nanostructure systems of lamellar phase, increased of MTX of the physical point of view, also carry through the structural analysis of the formulations through by polarized light microscopy (PLM), small-angle X-ray scattering (SAXS) and rheological properties. Perform stability studies of the chosen formulations, validate the analytical method of quantification of MTX for High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and carry through release assay, cutaneous permeation and skin retention in vitro for the chosen formulations. The formulations prepared by the mixture of polyether functional siloxane as surfactant, with silicone polyether copolymer as oily phase and phosphate buffer 0,01M pH 7,4 as aqueous phase demonstrating lamellar liquid-crystalline phases, confirmed by assays of PLM and SAXS. The stability studies showed that formulations A, B and C remained stable throughout the period of the study. The study of the rheological behavior of the formulations presented as not Newtonian pseudoplastic fluid and thixotropic ...

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarceloVPA_DISSERT.pdf: 3152615 bytes, checksum: 2a3513c0df769468fec98423bf2dba29 (MD5) Previous issue date: 2013-03-21 / Tuberculosis is a serious disease, but curable in practically 100% of new cases, since complied the principles of modern chemotherapy. Isoniazid (ISN), Rifampicin (RIF), Pyrazinamide (PYR) and Chloride Ethambutol (ETA) are considered first line drugs in the treatment of tuberculosis, by combining the highest level of efficiency with acceptable degree of toxicity. Concerning USP 33 - NF28 (2010) the chromatography analysis to 3 of 4 drugs (ISN, PYR and RIF) last in average 15 minutes and 10 minutes more to obtain the 4th drug (ETA) using a column and mobile phase mixture different, becoming its industrial application unfavorable. Thus, many studies have being carried out to minimize this problem. An alternative would use the UFLC, which is based with the same principles of HPLC, however it uses stationary phases with particles smaller than 2 ?m. Therefore, this study goals to develop and validate new analytical methods to determine simultaneously the drugs by HPLC/DAD and UFLC/DAD. For this, a analytical screening was carried out, which verified that is necessary a gradient of mobile phase system A (acetate buffer:methanol 94:6 v/v) and B (acetate buffer:acetonitrile 55:45 v/v). Furthermore, to the development and optimization of the method in HPLC and UFLC, with achievement of the values of system suitability into the criteria limits required for both techniques, the validations have began. Standard solutions and tablets test solutions were prepared and injected into HPLC and UFLC, containing 0.008 mg/mL ISN, 0.043 mg/mL PYR, 0.030 mg.mL-1 ETA and 0.016 mg/mL RIF. The validation of analytical methods for HPLC and UFLC was carried out with the determination of specificity/selectivity, analytical curve, linearity, precision, limits of detection and quantification, accuracy and robustness. The methods were adequate for determination of 4 drugs separately without interfered with the others. Precise, due to the fact of the methods demonstrated since with the days variation, besides the repeatability, the values were into the level required by the regular agency. Linear (R> 0,99), once the methods were capable to demonstrate results directly proportional to the concentration of the analyte sample, within of specified range. Accurate, once the methods were capable to present values of variation coefficient and recovery percentage into the required limits (98 to 102%). The methods showed LOD and LOQ very low showing the high sensitivity of the methods for the four drugs. The robustness of the methods were evaluate, facing the temperature and flow changes, where they showed robustness just with the preview conditions established of temperature and flow, abrupt changes may influence with the results of methods / A tuberculose ? uma doen?a grave, por?m cur?vel em praticamente 100% dos casos novos, desde que obedecidos os princ?pios da moderna quimioterapia. S?o considerados f?rmacos de 1? linha no tratamento ? tuberculose: isoniazida, pirazinamida, etambutol e rifampicina. De acordo com USP 33 - NF28 (2010) as an?lises cromatogr?ficas para 3 dos 4 f?rmacos (isoniazida, pirazinamida e rifampicina) duram em m?dia 15 minutos e mais 10 minutos para a obten??o do 4? f?rmaco (etambutol) utilizando outra coluna, com outra mistura de fase m?vel, tornando esta aplica??o na pr?tica industrial desfavor?vel. Uma das alternativas ? utilizar o CLUE, o qual baseia-se nos mesmos princ?pios da CLAE, por?m utiliza fases estacion?rias com part?culas menores que 2 ?m. Dessa forma pretende-se com o presente estudo desenvolver e validar novos m?todos anal?ticos para determina??o simult?nea de tuberculost?ticos por CLAE/DAD e CLUE/DAD. Para isto, foi realizado um screening anal?tico, o qual verificou que ? necess?rio um gradiente de sistema de fase m?vel A (tamp?o acetato:metanol 94:6 v/v) e B (tamp?o acetato:acetonitrila 55:45 v/v). Posteriormente, ao desenvolvimento e otimiza??o do m?todo em CLAE e CLUE com a obten??o dos valores de adequabilidade do sistema dentro dos limites de aceita??es vigente para ambos as t?cnicas, as valida??es deram-se in?cio. Solu??es padr?es e solu??es testes dos comprimidos foram preparadas e injetadas no CLAE e CLUE, contendo isoniazida, pirazinamida, etambutol e rifampicina nas concentra??es de 0,008, 0,043, 0,030 e 0,016 mg.mL-1, respectivamente. A valida??o dos m?todos anal?ticos foram realizadas para: especificidade / seletividade, intervalos da curva anal?tica, linearidade, limite de detec??o, limite de quantifica??o, exatid?o, precis?o (repetibilidade, precis?o intermedi?ria) e robustez. Os m?todos foram adequados para determina??o dos 4 f?rmacos separadamente sem interfer?ncia nos demais. Precisos, devido ao fato de que os m?todos demonstraram que mesmo com varia??o de dias, al?m da repetibilidade, os valores ficaram dentro da faixa preconizada na legisla??o vigente. Lineares (R > 0,99), ou seja, os m?todos foram capazes de demonstrar que os resultados obtidos eram diretamente proporcionais ? concentra??o do analito na amostra, dentro de um intervalo especificado. Exatos, uma vez que os m?todos foram capazes de apresentar valores de coeficiente de varia??o e porcentagem de recupera??o dentro dos limites exigidos (98 a 102%). Os m?todos mostraram LD e LQ com n?veis baixos demonstrando que os m?todos possuem elevada sensibilidade aos quarto f?rmacos. A robustez foi avaliada frente ?s altera??es de temperatura e fluxo, onde os m?todos demonstraram-se robustos apenas nas condi??es previamente estabelecidas de temperatura e fluxo, altera??es bruscas podem acarretar influ?ncia nos resultados dos m?todos

Thesis submitted in fulfilment of the requirements for the degree Master of Technology: Biomedical Technology in the Faculty Health and Wellness Sciences at the Cape Peninsula University of Technology, 2013 / The accurate and consistent measurement of antioxidants is crucial to evaluating their biological role in the prevention and delay of cancer and other pathological conditions. Hence, the performance of the analytical method utilized should be evaluated for acceptable levels of accuracy, precision and other performance parameters according to internationally accepted standards. Additionally, the measure and influence of existing errors should be evaluated and the method optimized to reduce such errors. In furtherance of this vital aim, this research project sought out to optimize and validate two bio-analytical assays for the measurement of total antioxidant capacity and L-ascorbic acid (L-AA), respectively in food commodities. The validation procedure was performed in accordance with ISO 17025 international standard. The first study in this thesis evaluated, optimized and validated the hydrophilic oxygen radical absorbance capacity (H-ORACFL) assay using fluorescein for total antioxidant capacity in various food and beverage products. The assay demonstrated good results with regard to accuracy, precision, linearity, specificity, limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) and robustness. The extraction solvent (60% ethanol) recovered excellent antioxidant yields for most samples tested. The optimization of the method in terms of temperature and sample usage on the micro-plate significantly (p<0.05) reduced errors and subsequently improved precision substantially.

A análise de fármacos é fundamental nas diversas fases do desenvolvimento farmacêutico, tais como em estudos de formulação, estabilidade e controle de qualidade do produto. O mesilato de gemifloxacino (MGF), liberado para uso clínico no Brasil em novembro de 2006 com o nome comercial de Factive®, é uma fluorquinolona indicada para o tratamento da exacerbação aguda da bronquite crônica e da pneumonia adquirida da comunidade. A literatura pesquisada apresenta poucos relatos de determinação quantitativa e de estudos de estabilidade do fármaco em comprimidos revestidos. Anteriormente aos estudos, foi realizada a caracterização da substância química de referência (SQR) de MGF por espectrofotometria no infravermelho (E IV), ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN 1H) e carbono (RMN 13C), análise térmica por calorimetria exploratória de varredura (DSC) e determinação da faixa de fusão. Métodos analíticos para determinação qualitativa e quantitativa foram desenvolvidos e validados por espectrofotometria na região do ultravioleta (E UV) e visível (E VIS), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), eletroforese capilar (EC) e ensaio microbiológico pelo método de cilindros em placas. A validação de um método de dissolução baseado em dados in vivo do fármaco também foi realizada. A elucidação do produto de degradação isolado em condições alcalinas foi realizada por E IV, RMN de 1H, 13C e correlação (COSY, HSQC e HMBC), espectrometria de massas (EM) e emissão atômica. Estudos de citotoxicidade, fototoxicidade, genotoxicidade e fotogenotoxicidade foram empregados para conhecimento da toxicidade dos produtos analisados. / The drug analysis is essential in all areas of the pharmaceutical development, such as during formulation studies, stability and quality control of the product. Gemifloxacin mesylate (GFM), approved for clinical use in Brazil in November of 2007 with the commercial name of Factive®, is a fluoroquinolone prescribed for the treatment of acute exacerbations of chronic bronchitis and community-acquired pneumonia. The research literature shows a few studies of quantitative determination and stabilities studies of the drug in coated tablets. Previously, it was performed the characterization of the reference chemical substance of GFM by infrared spectrometry (IR), nuclear magnetic resonance of 1H (1H NMR) and 13C (13C NMR), thermal analysis by differential scanning calorimetry (DSC) and determination of the melting range. Analytical methods for qualitative and quantitative determination were developed and validated by ultraviolet (UV) and visible (Vis) spectrophotometry, highperformance liquid chromatography (HPLC), capillary electrophoresis (CE) and microbiological assay applying the cylinder–plate method. The validation of the dissolution method based on in vivo data of the GFM was also performed. The elucidation of the isolate degradation product in alkaline conditions was performed by IR, 1H, 13C and correlation (COSY, HSQC and HMBC) NMR, and mass spectrometry (MS). Cytotoxicity, phototoxicity, genotoxicity and photogenotoxicity studies were carried out for the toxicity knowledge of the analyzed products.

Objetivos: os objetivos gerais deste trabalho foram desenvolver, validar e comparar métodos indicativos de estabilidade para a análise do cloridrato de butenafina (BTF), matéria-prima e forma farmacêutica, bem como determinar a cinética de degradação do fármaco em condição de estresse. Adicionalmente, o trabalho visou à validação de método para avaliar e comparar a penetração/permeação cutânea da BTF de diferentes formulações. Métodos: Um método indicativo de estabilidade para análise da BTF por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi desenvolvido e validado, conforme normas do ICH. A cinética de degradação do fármaco (matériaprima e creme) frente à luz UVC foi determinada. Testes para o desenvolvimento de método quantitativo por eletroforese capilar para a análise do fármaco isoladamente e presente na formulação foram realizados. O método analítico cromatográfico previamente desenvolvido para a formulação semi-sólida foi validado para a quantificação de BTF na pele suína. Em seguida, as penetrações/permeações cutâneas do fármaco utilizando células de Franz foram analisadas visando à comparação de duas formulações comerciais (uma delas brasileira e a outra americana). Resultados e Conclusões: O método de CLAE indicativo de estabilidade desenvolvido demonstrou ser adequado para a determinação da substância ativa na formulação mesmo na presença de produtos de degradação, bem como para a quantificação do fármaco na pele suína e no fluído receptor. Os principais fatores extrínsecos que promovem a degradação do fármaco foram estabelecidos: luz, oxidação e meio básico (este último somente na presença de excipientes). A determinação da cinética de fotodegradação como sendo de primeira ordem demonstra que o processo é dependente da concentração do fármaco, reforçando a necessidade de proteção frente à luz. Já o método por eletroforese capilar mostrou-se não específico frente à formulação placebo simulado, inviabilizando seu uso para o creme. Na avaliação da permeação cutânea das formulações brasileira e americana não foi detectada presença considerável do fármaco no fluído receptor para ambos os produtos. Já na verificação da penetração, não houve diferença significativa na retenção do fármaco na epiderme, entretanto, na derme a diferença foi estatisticamente significativa, com maior concentração retida na análise da formulação americana (α = 0,05). / Objectives: The aim of the present work was to develop, validate and compare stability indicating methods to quantify butenafine hydrochloride (BTF), raw material and commercial cream, as well as to establish the degradation kinetics of the drug in a stress condition. Also, the study had the goal of validating a method to assess and compare the cutaneous permeation/penetration of two different formulations. Methods: A stability-indicating method for the analysis of BTF by high performance liquid chromatography (HPLC) was developed and validated according to the ICH guidelines. The degradation kinetics of the drug (raw material and cream) under the UVC light was determined. Analyzes to develop and validate an analytical method by capillary electrophoresis, to quantify the drug by itself and in the cream, were performed. The chromatographic method previously developed for the semi-solid product was validated to quantify the drug in porcine skin. Then, the cutaneous permeation/penetration of BTF, through the Franz-type cell, was analyzed to compare two different commercial formulations (one of them is Brazilian and the other is American). Results and Conclusions: The developed stability-indicating method was adequate to determine the active substance in the formulation even in the presence of the degradation products, as well as to quantify the drug in porcine skin and in the receptor fluid. The main extrinsic factors that promote the drug degradation were established: light, oxidative and basic media (the last in the presence of the excipient ingredients). The photodegradation kinetics was determined as first order showing that the process is dependent on the drug concentration, reaffirming the necessity of protection against light. The method by capillary electrophoresis was not specific considering the placebo formulation, hindering its use to the cream. During the cutaneous permeation analysis, no drug was found in the receptor media of both the Brazilian and the American formulations. No difference was verified to the epidermis, although to the dermis there was a statistical distinction as the concentration of retained drug from the American formulation was higher (α = 0,05).