Novilhas Holandesas (n=35) foram vacinadas e distribuídas em grupos de acordo com os adjuvantes presentes nas vacinas comerciais contra BVDV e BoHV-1: Halum (hidróxido de alumínio, n=9), Oleosa (emulsão oleosa, n=10), Prezent A (composto saponina, n=10) e Salina (controle, n=6). As reações locais e sistêmicas foram avaliadas às zero horas (h), seis, 24, 48, 72 e 168h pós-vacinal. A produção de anticorpos (ACs) foi mensurada nos dias da vacinação (D0), D21 e D42. Capítulo 1 O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta inflamatória sistêmica em novilhas vacinadas contendo diferentes tipos de adjuvantes. O número de hemácias (P=0,009) e hemoglobina (P=0,028) foram maiores no grupo Prezent A após a 2a dose. Os teores de ferro foram maiores no grupo controle após 1ª e 2ª dose (P=0,000; 0,000). Em geral, no leucograma os grupos vacinados apresentaram decréscimo nos números de leucócitos (P=0,001) em 2ª dose, neutrófilos (%) (P=0,000; 0,000) em ambas aplicações e monócitos (%) (P=0,010) após 1ª dose. Os linfócitos (%) apresentaram aumento gradual após as duas doses (P=0,031; 0,000), observando-se menores proporções nos grupos Prezent A e Oleosa. Basófilos (%) após 2ª dose (P=0,012) e eosinófilos (%) (P=0,000; 0,000) foram mais reativos nos grupos Prezent A e Halum entre 24 e 72h. As novilhas Prezent A apresentaram maiores valores (P=0,000; 0,000) haptoglobina às 24 e 48h em relação aos demais grupos após a 1ª e 2ª dose. Em geral, a produção de EROs foi suprimida nas novilhas vacinadas em relação ao controle após 1a dose (P=0,018) e entre 24 à 168h após a 2a dose (P=0,002). Capítulo 2 O objetivo desta pesquisa foi avaliar os efeitos adversos associados às reações locais e sistêmicas, assim como verificar a reposta imune humoral induzida pelas vacinas. A reatividade local foi mais intensa no grupo Oleosa após a 1a dose (P=0,000), em contrapartida o grupo Prezent A após a 2a dose foi mais reativo (P=0,000). A temperatura retal foi elevada em Prezent A entre 0 a 24h em 1a dose (P=0,000). O escore de Doença Respiratória Bovina foi mais intensa no grupo Prezent A e Oleosa às 48 horas (P=0,0024). Os ACs contra BVDV foram detectados apenas em D42, observando-se médias semelhantes entre Prezent A (log2=5) e Halum (log2=5). A soroconversão foi maior em Halum (78%) em comparação ao Prezent A (40%) e oleosa (10%). Em relação ao BoHV-1, observou-se títulos e soroconversão em D21 nos grupos Halum (log2=3; 67%) e Prezent A (log2=1; 80%). No D42 verificou-se uma maior intensidade de resposta para Prezent A (log2= 6; 100%), seguido de Halum (log2=4; 100%) e Oleosa (log2=3,0; 60%). Os dados permitem concluir que a vacina contendo o adjuvante oleoso e Prezent A ocasionaram maior reatividade local, porém a Prezent A induziu maior resposta inflamatória sistêmica. A produção de ACs contra o BVDV e BoHV-1 foi mais intensa na vacina com hidróxido de alumínio e Prezent A. Estudos futuros são necessários para demonstrar os efeitos benéficos da resposta inflamatória sistêmica do Prezent A sobre a resposta imune adquirida mediada por células do tipo Th1. / Dairy heifers (n=35) were vaccinated and distributed according to adjuvants present in commercial vaccines against BVDV and BoHV-1: Halum (n=9), Oil (n=10), Prezent A (n=10) and Saline (n=6). The local and systemic reactions were evaluated at zero hours (h), 6, 24, 48, 72 and 168h post-vaccination. The production of antibodies (ABs) was measured at vaccination days (D0), D21 and D42. Chapter 1 The objective of this study was to evaluate the inflammatory systemic response in vaccinated heifers with products that contained different types of adjuvants. The numbers of red blood cells (P=0.009) and hemoglobin (P=0,028) were higher in Prezent A after the 2nd dose. The iron were higher in saline group after 1st and 2nd dose (P=0.000; 0.000). In leukogram, vaccinated groups showed a decrease in total leukocytes (P = 0.001) at 2nd dose, neutrophils (%) (P = 0.000; 0.000) in both applications and monocytes (%) (P = 0.010) . Lymphocytes (%) presented gradual increase after received two doses (P = 0.031; 0.000), showing smaller proportions in Prezent A and Oil groups. Basophils (%) after 2nd dose (P = 0.012) and eosinophils (%) (P = 0.000; 0.000) were more reactive in Prezent A and Halum groups between 24 and 72h. Prezent A group presented higher values (P = 0.000; 0.000) of haptoglobin at 24 and 48h compared to the other groups after the 1st and 2nd doses. In general, ROS production was suppressed in vaccinated heifers relative to control after the 1st dose (P = 0.018) and 24 to 168h after the 2nd dose (P = 0.002). Chapter 2 The objective of this research was to evaluate the adverse effects associated with local and systemic reactions as well measure humoral immune response induced by reproductive vaccines containing different adjuvants. Local reactivity was more intense in Oil group after the 1st dose (P = 0.000), in contrast, Prezent A group presented higher reactivity after the 2nd dose. Rectal temperature was higher in Prezent A between 0 and 48 hours in the 1st dose. Bovine Respiratory Disease score was higher in Prezent A and Oil groups at 48h (P=0.002). ABs against BVDV were detected only at D42, observing the similar averages between Prezent A (log2=5) and Halum (log2=5). The seroconversion was higher in Halum (78%) compared to Prezent A (40%) and oil (10%). The titers and seroconversion against BoHV-1 at D21 were observed in Halum (log2 = 3; 67%) and Prezent A (log2 = 1; 80%) groups. At D42 a higher response was observed for Prezent A (log2 = 6, 100%), followed by Halum (log2 = 4, 100%) and Oil (log2 = 3.0, 60%). The data allow to conclude that the vaccine containing oil adjuvant and Prezent A caused greater local reactivity, but Prezent A induced a greater systemic inflammatory response. The production of ABs against BVDV and BoHV-1 was more intense in Halum vaccine and Prezent A. Future studies are needed to demonstrate the beneficial effects of the systemic inflammatory response of Prezent A on the acquired Th1 cell-mediated immune response.

Encefalite auto-imune experimental (EAE) é o modelo animal da doença humana esclerose múltipla. Foi demonstrado que as estatinas podem ter efeitos benéficos na EAE. Diversos mecanismos de ação foram descritos para explicar esses efeitos, entre eles: estímulo a expressão de HO-1, inibição da expressão de Toll-like receptors (TLR) e inibição da produção de citocinas de padrão Th1. Estudamos o efeito de uma estatina, a sinvastatina, na evolução clínica da EAE e seus mecanismos de ação. Também avaliamos o papel do TLR4 na EAE. O tratamento com sinvastatina melhorou a evolução clínica da EAE nas doses de 1 e 5 mg/kg/dia. A análise do infiltrado celular no SNC mostrou mudança do padrão de diferenciação dos linfócitos com menor porcentagem de células produtoras de IL-17 nos grupos tratados em relação aos controles. Os animais TLR-4 -/- apresentaram melhor evolução da doença. Concluímos que o tratamento com sinvastatina melhora a evolução clínica da EAE através da inibição da produção de IL-17 e que animais TLR-4 -/- têm melhor desfecho clínico na EAE que os controles. / Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is considered the experimental model for the human multiple sclerosis disease. It has been demonstrated that statins, used as lipid-lowering agents, can have beneficial effects on EAE. Several actions have been described to explain these effects: enhancement of HO-1 expression, inhibition of Toll-like receptors expression and inhibition of Th1 cytokines. We have investigated the effect of a statin, simvastatin, on EAE clinical development and the mechanisms behind those effects. Simvastatin treatment ameliorated EAE clinical outcome at doses 1 and 5 mg/kg/day. SNC cellular infiltrates analysis showed altered pattern of differentiation with decreased percentage of IL-17-producing T lymphocytes in treated group comparing with controls. TLR4 -/- mice showed better clinical development. We concluded that simvastatin treatment ameliorates EAE clinical outcome through inhibition of IL-17 production. Mice TLR4 -/- have better EAE clinical outcome than WT controls.

Submitted by Sandra Azevedo (sandracristina@fdv.br) on 2018-08-22T11:57:14Z No. of bitstreams: 1 Alexandre Oliveira Santos Amorim.pdf: 811689 bytes, checksum: df891db590cd179a0aad19f2b90edc4b (MD5) / Rejected by Ana Paula Galdino (repositorio@fdv.br), reason: Descrever a referência da dissertação no campo "citação". on 2018-08-24T12:51:59Z (GMT) / Submitted by Sandra Azevedo (sandracristina@fdv.br) on 2018-08-27T14:55:16Z No. of bitstreams: 1 Alexandre Oliveira Santos Amorim.pdf: 811689 bytes, checksum: df891db590cd179a0aad19f2b90edc4b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Galdino (repositorio@fdv.br) on 2018-08-29T12:37:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Alexandre Oliveira Santos Amorim.pdf: 811689 bytes, checksum: df891db590cd179a0aad19f2b90edc4b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T12:37:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alexandre Oliveira Santos Amorim.pdf: 811689 bytes, checksum: df891db590cd179a0aad19f2b90edc4b (MD5) Previous issue date: 2018-03-21 / Agência 1 / O presente estudo analisa, em uma visada direta baseada no método fenomenológico Heideggeriano, o que pode ser entendido (ou não) como sendo livro para fins da imunidade tributária prevista no artigo 150, VI, “d”, da Constituição Federal de 1988. Para tanto, foram pesquisados os termos “imunidade” e “livro” no sítio eletrônico do Supremo Tribunal Federal que, em seus resultados obtidos, foram capazes de demonstrar a postura da referida Corte diante da imunização dos livros. Dentre a corrente restritiva, que permite considerar-se como livro apenas o que se enquadra na expressão “papel destinado a sua impressão” trazida no bojo do mencionado artigo 150, VI, “d”, da Constituição, e a extensiva, que amplia o preceito imunizador aos assemelhados ao papel, nota-se que o Pretório Excelso adota este último entendimento. No entanto, traçar como parâmetro diferenciador daquilo que merece ou não ser imunizado apenas a similaridade do suporte ao papel, parece ser uma visão simplista. Portanto, o presente estudo encontrou 12 elementos que merecem ser levados em conta quando um ente desvela-se como um livro, dentre os quais sua finalidade, necessidade ou não de palavras escritas e número mínimo de páginas. Cotejando-se o conceito construído no trabalho com aquele adotado pela Corte Suprema, chega-se à conclusão que o Supremo Tribunal Federal procede de maneira acertada ao adotar a corrente extensiva, mas precisa ficar atento para evitar exageros, afinal, imunizar os livros pode ser salutar de um lado – por baratear o valor final das obras – mas por outro significa perda de arrecadação tributária, que impactará negativamente nos investimentos sobre os direitos fundamentais à educação e cultura: exatamente os valores preconizados pela imunidade tributária cultural. / The present study analyzes, in a direct view based on the Heideggerian phenomenological method, what can be understood (or not) as being a book for tax immunity provided for in article 150, VI, d, of the 1988 Federal Constitution. The terms "immunity" and "book" were searched on the Federal Supreme Court's website, which, in their results, were able to demonstrate the Court's position regarding the immunization of the books. Among the restrictive current, which allows us to consider as a book only what is included in the expression "paper destined for its impression" brought in the bulge of the mentioned article 150, VI, "d", of the Constitution, and the extensive one, adopted by the Supreme Court. However, as a differentiating parameter of what deserves or not to be immunized, only the similarity of paper support seems to be a simplistic view. Therefore, the present study found 12 elements that deserve to be taken into account when an entity discloses itself as a book, among which its purpose, necessity or not of written words and minimum number of pages. Contrasting the concept constructed in the work with that adopted by the Supreme Court, one arrives at the conclusion that the Federal Supreme Court proceeds in a correct way to adopt the extensive current, but needs to be attentive to avoid exaggerations, after all, to immunize the books can be salutary on the one hand - for cheapening the final value of the works - but on the other means a loss of tax collection, which will negatively impact investments on fundamental rights to education and culture: exactly the values advocated by cultural tax immunity.

Foi avaliado o desempenho de vacina de subunidade e bactéria completa antileptospirose em matrizes suínas analisando-se os níveis de anticorpos aglutinantes e neutralizantes. A intensidade e duração da imunidade passiva nos leitões, e ativa nas matrizes suínas foi investigada pela soroaglutinação microscópica (SAM) e teste de inibição de crescimento de leptospiras (ICL) em grupos de animais tratados com vacina experimental de subunidade e leptospira completa produzida com a mesma estirpe e com duas bacterinas comerciais. O experimento foi realizado em duas fases, na primeira, sendo utilizadas 33 matrizes. Os animais foram divididos em três grupos: grupo 1 (n=11):controle; grupo 2 (n=11): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de vacina anti-leptospirose constituída da subunidade de lipopolissacarídeo (LPS) de leptospira sorovar Canicola. Grupo 3 (n=11): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de uma bacterina de bactérias completas antileptospirose. Na segunda fase foram utilizadas 24 matrizes. Os animais foram divididos em três grupos: Grupo A (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de bacterina comercial anti-leptospirose A. Grupo B (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de bacterina comercial antileptospirose B e Grupo C (n=08): controle. Tanto na primeira fase como na segunda, foram realizados exames de SAM e de ICL nas matrizes e nos seus leitões, a fim de se avaliar títulos de aglutininas e de anticorpos neutralizantes obtidos respectivamente com a imunidade ativa e passiva. Os resultados das comparações dos títulos de anticorpos aglutinantes dos grupos tratados, 2 e 3, na primeira fase, apresentaram diferença aos 32 e 68 dias pós-vacinação. Não houve diferença para os anticorpos neutralizantes. No 30º dia de vida não foram detectados anticorpos aglutinantes nos leitões das matrizes vacinadas com LPS, e para anticorpos neutralizantes, os títulos médios foram de 0,832 no grupo 2 e 0,930 no grupo 3. Os títulos de anticorpos aglutinantes dos grupos A e B, na segunda fase, apresentaram diferença entre os sorovares das bacterinas comerciais, aos 60, 90 e 120 dias pós-vacinação. Aos 60 dias, houve diferença para o sorovares Copenhageni e Icterohaemorrhagiae. Em relação aos níveis de anticorpos neutralizantes das matrizes para o sorovar Hardjo, houve persistência de títulos de anticorpos neutralizantes nas sete avaliações realizadas nas duas bacterinas comerciais empregadas, e, em títulos baixos. Nos leitões foi constatada a transferência da imunidade colostral, somente com a bacterina comercial B confirmada pela presença de anticorpos aglutinantes, aos três e oito dias de vida. A vacina de LPS de bactéria completa apresentou perspectivas para emprego na prevenção da leptospirose suína. Houve diferença e baixa resposta imunológica nas bacterinas comerciais A e B anti-leptospirose, principalmente, para os sorovares Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Pomona, Copenhageni para a bacterina comercial B. A imunidade passiva, medida por anticorpos aglutinantes conferida pelas bacterinas comerciais A e B, foi de curta duração. / It was evaluated the performance of a subunit and whole culture bacterin vaccines against leptospirosis in sows by the analysis of agglutinating and neutralizing antibodies level. The intensity and duration of passive immunity in the offspring and active immunity in sows were investigated with microscopic agglutination test (MAT) and leptospira growth inhibition (LGI) in groups of animals treated with experimental subunit vaccine and whole bacterin produced with the same serotype and with two commercial bacterin vaccines. The experiment was performed in two phases. First, 33 sows were divided into three groups of eleven animals each: group 1 was the control and group 2 received two doses with 30 days interval of anti-leptospirosis lipopolysaccharid (LPS) subunit vaccine serovar Canicola and group 3 received two doses with 30 days interval of whole leptospira bacterin. On a second phase 24 sows were divided into three groups of eight animals each: group A received two doses with 30 days interval of the commercial leptospira bacterin A. Group B received two doses with 30 days interval of a commercial leptospira bacterin B and group C was the control. Either in the first phase as in the second one, MAT and LGI were performed in the sows and its piglets in order to evaluate titers of agglutinins and neutralizing antibodies obtained with active and passive immunities respectively. The comparison of agglutinating titers of groups 2 and 3 at the first phase showed differences on days 32 and 68 post vaccination. There was no difference in relation to neutralizing antibodies. Agglutinating antibodies were not detected on thirty days old piglets, born from sows vaccinated with LPS, and for neutralizing antibodies, mean titers were 0.832 on group 2 and 0.930 on group 3. Agglutinating antibodies titers of groups A and B, on the second phase, presented differences between the commercial vaccines serovars at 60, 90 and 120 post vaccination days. At 60 days, there were differences for serovars Copenhageni and Icterohaemorrhagiae. There was persistency of low titers of neutralizing antibodies to serovar Hardjo in the sows, for the seven measurements performed with the two commercial bacterins. It was observed colostral immunity transfer to piglets with three and eight days old only for commercial vaccine B, with detectable agglutinating antibodies. LPS bacteria vaccine presented perspectives to prevent swine leptospirosis. There was difference and low immunological response for commercial vaccines A and B, especially for serovars Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae and Pomona; and for serovar Copenhageni only for commercial vaccine B. The passive immunity conferred by commercial vaccines A and B and measured by agglutinating antibodies had low duration.

Orientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Shannon Margaret Wallet / Banca: Karina Gonzales Silvério Ruiz / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Paulo Sérgio Cerri / Resumo: Inflammasomes are multi-protein complexes that can amplify the inflammatory signal in situations involving host-microbial interactions and host tissue destruction, such as chronic periodontal disease. There is a relative scarcity of information on the role of NLRC4 and NLRP3 inflammasomes in periodontal disease. In this study, we used a model of bacteria-initiated periodontal disease in WT, Ipaf-knockout (Ipaf-KO), Caspase 1-knockout (Casp1-KO) and NLRP3-knockout (NLRP3-KO) mice to describe the effect of those inflammasomes on inflammation and alveolar bone resorption. Heat-killed Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) were injected in the gingival tissues on the palatal aspect adjacent to first molars of wild-type (WT), Ipaf-KO, Casp1-KO and NLRP3-KO mice, and control animals received the suspension vehicle (PBS). Severity of bone resorption was quantitated by μCT analysis. Inflammation was assessed by immunofluorescence, verifying the presence and intensity of a pan-leukocyte (CD45) and a neutrophil (Ly6G) markers. Osteoclast number was determined by TRAP and gene expression of RANKL, MMP-13, TNF-a, IL-6 and IL-10 in the gingival tissues was evaluated by RT-qPCR. In the first publication, μCT analysis showed a significantly greater inflammatory bone resorption in Ipaf-KO mice; however there was no difference between WT and Ipaf-KO on osteoclast numbers of inflammatory infiltrate. Expression of candidate genes was also similarly increased by the induction of experimental... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflamassomos são complexos multi protéicos capazes de amplificar o sinal inflamatório em condições de interações microbiota-hospedeiro e destruição tecidual, como a doença periodontal crônica. Devido à escassez de informações sobre o papel dos inflamassomos NLRC4 e NLRP3 na doença periodontal, utilizamos neste estudo um modelo de doença periodontal induzida por bactérias em camundongos WT, Ipafknockout (Ipaf-KO), Caspase 1-knockout (Casp1-KO) e NLRP3-knockout (NLRP3-KO) para descrever o efeito destes na inflamação e reabsorção óssea alveolar. Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) inativadas pelo calor foram injetadas nos tecidos gengivais palatais adjacentes aos primeiros molares dos camundongos normais e knockout, e os grupos controle receberam o mesmo volume do veículo de suspensão (PBS). A severidade da reabsorção óssea foi quantificada por análise de μCT. A inflamação foi avaliada por imunofluorescência, verificando-se presença e intensidade da coloração por marcadores de leucócitos (CD45) e neutrófilos (Ly6G). O número de osteoclastos foi determinado por TRAP e a expressão gênica de RANKL, MMP-13, TNF-a, IL-6 e IL-10 nos tecidos gengivais avaliada por RT-qPCR. A publicação 1 mostra uma reabsorção óssea inflamatória significativamente maior nos camundongos Ipaf-KO, sem diferenças, porém, no número de osteoclastos entre WT e Ipaf-KO. A expressão dos genes-alvo aumentou com a indução da doença periodontal, exceto de TNFa e IL-10, que foram altas n... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A asma é considerada uma das mais importantes doenças crônicas na infância, devido a sua alta incidência e ao aumento na morbidade observada nos últimos anos. Diversas anormalidades imunológicas têm sido descritas em pacientes com asma, incluindo hipogamaglobulinemia e deficiência de subclasses de IgG. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunidade humoral representada pelos níveis séricos totais imunoglobulinas, subclasses de IgG e níveis salivares de IgA e a imunidade específica representada pela resposta a antígenos timo-dependentes, antígenos timo--independentes tipo 1 e timo-independentes tipo 2 em crianças com asma brônquica moderada e grave. Foram coletadas amostras de sangue pré e pós-imunização com vacina Pneumo23® e saliva de 50 crianças, com idades entre 4 e 12 anos. Foram determinados os níveis séricos de IgG, IgA, IgM, IgE e subclasses de IgG (IgG2, IgG3 e IgG4) por nefelometria. A lgA secretória determinada nas salivas, os anticorpos IgG anti-toxóide tetânico, os anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111 e os níveis séricos anticorpos IgG pré e pós-vacinais anti-S. pneumoniae foram determinados por ensaio imunoenzimático. Foram avaliados os níveis séricos de IgE específicos para Dermatophagoides pteronyssinus, e o teste cutâneo para os alérgenos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis. Foram observados níveis elevados de IgG total e das subclasses IgG2 e IgG3. Níveis altos IgG4 foram observados em 52% dos pacientes asmáticos, e deficiência de IgG4 apenas 8%. Os níveis séricos totais de IgM foram elevados em 24% dos pacientes, apenas um paciente apresentou resultado inferior ao valor de normalidade. Foi detectada deficiência de IgA sérica associada a deficiência de IgA secretória em 1 paciente. Foram detectados elevados níveis totais de IgE sérica e de anticorpos IgE anti-D. pteronyssinus (classes 4, 5 e 6). Testes cutâneos positivos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis foram observados em 73% dos pacientes. Foram observados níveis séricos adequados de anti-toxóide tetânico em 76% das amostras e níveis normais de anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111, sendo que apenas 6% das crianças apresentaram níveis elevados IgM, e 4% de IgG anti-LPS 0111. Apesar da maioria dos pacientes apresentarem resposta de anticorpos anti-pneumococo, foram encontrados 2 pacientes deficiência de resposta de anticorpos para polissacarídeos. Em conclusão, foram identificadas imunodeficiências bem caracterizadas em 3 crianças asmáticas, que poderiam claramente levar a infecções, o que prioriza a importância da avaliação imunidade humoral. / Asthma is considered to be one of the most important chronic diseases childhood, with respect to its high incidence, and the increasing morbidity observed the last years. Several abnormalities have been described in patients with asthma, including hipogammaglobulinemia and IgG subclass deficiencies. The aim was to evaluate the humoral immunity represented by total seric immunoglobulin levels, IgG subclasses and salivary IgA levels and the specific immunity represented by response to thymus-dependent, thymus-independent type 1 and thymus-independent type 2 antigens in children with persistent moderate and severe bronchial asthma. Blood samples before and after immunization with Pneumo23® and saliva were collected from 50 asthmatic children (4-12 years old). IgG, IgA, IgM, IgE and IgG subclasses were analyzed by nephelometry. Secretory IgA, anti-tetanus IgG levels, anti-¬LPS 0111 IgG and IgM levels, and pre and post-immunization anti-pneumococcal IgG antibodies were measured by immunoenzymatic assay. Anti-Dermatophagoides pteronyssinus IgE levels and Prick tests with Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blomia tropicalis were also evaluated. Elevated levels were observed of total IgG, IgG2 and IgG3 subclasses. High IgG4 levels were detected 52% of the asthmatic patients, and IgG4 deficiency in 8%. High seric total IgM levels were founded in 24% of the patients, and only one presented IgM level bellow normal age-matched controls. Seric IgA deficiency associated with secretory IgA deficiency founded in one patient. Elevated seric IgE levels and anti-D. pteronyssinus IgE antibodies (classes 4, 5 and 6) were detected. Positive prick test to Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis were observed in 73% of the patients. An adequate anti-tetanus toxoid antibody response was observed 76% of the samples and normal anti-LPS 0111 IgG and IgM levels, although 6% of children presented high anti-LPS 0111 IgM levels, and 4% presented high anti-LPS 0111 IgG levels. Although most of the patients showed a good anti-pneumococcal response, two patients presented anti-polysaccharide antibody deficiency. In conclusion, well-characterized immunodeficiencies were identified in three asthmatic children, which could clearly lead to infections, emphasizing the importance evaluating the humoral immunity.

Foi avaliado o desempenho de vacina de subunidade e bactéria completa antileptospirose em matrizes suínas analisando-se os níveis de anticorpos aglutinantes e neutralizantes. A intensidade e duração da imunidade passiva nos leitões, e ativa nas matrizes suínas foi investigada pela soroaglutinação microscópica (SAM) e teste de inibição de crescimento de leptospiras (ICL) em grupos de animais tratados com vacina experimental de subunidade e leptospira completa produzida com a mesma estirpe e com duas bacterinas comerciais. O experimento foi realizado em duas fases, na primeira, sendo utilizadas 33 matrizes. Os animais foram divididos em três grupos: grupo 1 (n=11):controle; grupo 2 (n=11): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de vacina anti-leptospirose constituída da subunidade de lipopolissacarídeo (LPS) de leptospira sorovar Canicola. Grupo 3 (n=11): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de uma bacterina de bactérias completas antileptospirose. Na segunda fase foram utilizadas 24 matrizes. Os animais foram divididos em três grupos: Grupo A (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de bacterina comercial anti-leptospirose A. Grupo B (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de bacterina comercial antileptospirose B e Grupo C (n=08): controle. Tanto na primeira fase como na segunda, foram realizados exames de SAM e de ICL nas matrizes e nos seus leitões, a fim de se avaliar títulos de aglutininas e de anticorpos neutralizantes obtidos respectivamente com a imunidade ativa e passiva. Os resultados das comparações dos títulos de anticorpos aglutinantes dos grupos tratados, 2 e 3, na primeira fase, apresentaram diferença aos 32 e 68 dias pós-vacinação. Não houve diferença para os anticorpos neutralizantes. No 30º dia de vida não foram detectados anticorpos aglutinantes nos leitões das matrizes vacinadas com LPS, e para anticorpos neutralizantes, os títulos médios foram de 0,832 no grupo 2 e 0,930 no grupo 3. Os títulos de anticorpos aglutinantes dos grupos A e B, na segunda fase, apresentaram diferença entre os sorovares das bacterinas comerciais, aos 60, 90 e 120 dias pós-vacinação. Aos 60 dias, houve diferença para o sorovares Copenhageni e Icterohaemorrhagiae. Em relação aos níveis de anticorpos neutralizantes das matrizes para o sorovar Hardjo, houve persistência de títulos de anticorpos neutralizantes nas sete avaliações realizadas nas duas bacterinas comerciais empregadas, e, em títulos baixos. Nos leitões foi constatada a transferência da imunidade colostral, somente com a bacterina comercial B confirmada pela presença de anticorpos aglutinantes, aos três e oito dias de vida. A vacina de LPS de bactéria completa apresentou perspectivas para emprego na prevenção da leptospirose suína. Houve diferença e baixa resposta imunológica nas bacterinas comerciais A e B anti-leptospirose, principalmente, para os sorovares Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Pomona, Copenhageni para a bacterina comercial B. A imunidade passiva, medida por anticorpos aglutinantes conferida pelas bacterinas comerciais A e B, foi de curta duração. / It was evaluated the performance of a subunit and whole culture bacterin vaccines against leptospirosis in sows by the analysis of agglutinating and neutralizing antibodies level. The intensity and duration of passive immunity in the offspring and active immunity in sows were investigated with microscopic agglutination test (MAT) and leptospira growth inhibition (LGI) in groups of animals treated with experimental subunit vaccine and whole bacterin produced with the same serotype and with two commercial bacterin vaccines. The experiment was performed in two phases. First, 33 sows were divided into three groups of eleven animals each: group 1 was the control and group 2 received two doses with 30 days interval of anti-leptospirosis lipopolysaccharid (LPS) subunit vaccine serovar Canicola and group 3 received two doses with 30 days interval of whole leptospira bacterin. On a second phase 24 sows were divided into three groups of eight animals each: group A received two doses with 30 days interval of the commercial leptospira bacterin A. Group B received two doses with 30 days interval of a commercial leptospira bacterin B and group C was the control. Either in the first phase as in the second one, MAT and LGI were performed in the sows and its piglets in order to evaluate titers of agglutinins and neutralizing antibodies obtained with active and passive immunities respectively. The comparison of agglutinating titers of groups 2 and 3 at the first phase showed differences on days 32 and 68 post vaccination. There was no difference in relation to neutralizing antibodies. Agglutinating antibodies were not detected on thirty days old piglets, born from sows vaccinated with LPS, and for neutralizing antibodies, mean titers were 0.832 on group 2 and 0.930 on group 3. Agglutinating antibodies titers of groups A and B, on the second phase, presented differences between the commercial vaccines serovars at 60, 90 and 120 post vaccination days. At 60 days, there were differences for serovars Copenhageni and Icterohaemorrhagiae. There was persistency of low titers of neutralizing antibodies to serovar Hardjo in the sows, for the seven measurements performed with the two commercial bacterins. It was observed colostral immunity transfer to piglets with three and eight days old only for commercial vaccine B, with detectable agglutinating antibodies. LPS bacteria vaccine presented perspectives to prevent swine leptospirosis. There was difference and low immunological response for commercial vaccines A and B, especially for serovars Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae and Pomona; and for serovar Copenhageni only for commercial vaccine B. The passive immunity conferred by commercial vaccines A and B and measured by agglutinating antibodies had low duration.

Novilhas Holandesas (n=35) foram vacinadas e distribuídas em grupos de acordo com os adjuvantes presentes nas vacinas comerciais contra BVDV e BoHV-1: Halum (hidróxido de alumínio, n=9), Oleosa (emulsão oleosa, n=10), Prezent A (composto saponina, n=10) e Salina (controle, n=6). As reações locais e sistêmicas foram avaliadas às zero horas (h), seis, 24, 48, 72 e 168h pós-vacinal. A produção de anticorpos (ACs) foi mensurada nos dias da vacinação (D0), D21 e D42. Capítulo 1 O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta inflamatória sistêmica em novilhas vacinadas contendo diferentes tipos de adjuvantes. O número de hemácias (P=0,009) e hemoglobina (P=0,028) foram maiores no grupo Prezent A após a 2a dose. Os teores de ferro foram maiores no grupo controle após 1ª e 2ª dose (P=0,000; 0,000). Em geral, no leucograma os grupos vacinados apresentaram decréscimo nos números de leucócitos (P=0,001) em 2ª dose, neutrófilos (%) (P=0,000; 0,000) em ambas aplicações e monócitos (%) (P=0,010) após 1ª dose. Os linfócitos (%) apresentaram aumento gradual após as duas doses (P=0,031; 0,000), observando-se menores proporções nos grupos Prezent A e Oleosa. Basófilos (%) após 2ª dose (P=0,012) e eosinófilos (%) (P=0,000; 0,000) foram mais reativos nos grupos Prezent A e Halum entre 24 e 72h. As novilhas Prezent A apresentaram maiores valores (P=0,000; 0,000) haptoglobina às 24 e 48h em relação aos demais grupos após a 1ª e 2ª dose. Em geral, a produção de EROs foi suprimida nas novilhas vacinadas em relação ao controle após 1a dose (P=0,018) e entre 24 à 168h após a 2a dose (P=0,002). Capítulo 2 O objetivo desta pesquisa foi avaliar os efeitos adversos associados às reações locais e sistêmicas, assim como verificar a reposta imune humoral induzida pelas vacinas. A reatividade local foi mais intensa no grupo Oleosa após a 1a dose (P=0,000), em contrapartida o grupo Prezent A após a 2a dose foi mais reativo (P=0,000). A temperatura retal foi elevada em Prezent A entre 0 a 24h em 1a dose (P=0,000). O escore de Doença Respiratória Bovina foi mais intensa no grupo Prezent A e Oleosa às 48 horas (P=0,0024). Os ACs contra BVDV foram detectados apenas em D42, observando-se médias semelhantes entre Prezent A (log2=5) e Halum (log2=5). A soroconversão foi maior em Halum (78%) em comparação ao Prezent A (40%) e oleosa (10%). Em relação ao BoHV-1, observou-se títulos e soroconversão em D21 nos grupos Halum (log2=3; 67%) e Prezent A (log2=1; 80%). No D42 verificou-se uma maior intensidade de resposta para Prezent A (log2= 6; 100%), seguido de Halum (log2=4; 100%) e Oleosa (log2=3,0; 60%). Os dados permitem concluir que a vacina contendo o adjuvante oleoso e Prezent A ocasionaram maior reatividade local, porém a Prezent A induziu maior resposta inflamatória sistêmica. A produção de ACs contra o BVDV e BoHV-1 foi mais intensa na vacina com hidróxido de alumínio e Prezent A. Estudos futuros são necessários para demonstrar os efeitos benéficos da resposta inflamatória sistêmica do Prezent A sobre a resposta imune adquirida mediada por células do tipo Th1. / Dairy heifers (n=35) were vaccinated and distributed according to adjuvants present in commercial vaccines against BVDV and BoHV-1: Halum (n=9), Oil (n=10), Prezent A (n=10) and Saline (n=6). The local and systemic reactions were evaluated at zero hours (h), 6, 24, 48, 72 and 168h post-vaccination. The production of antibodies (ABs) was measured at vaccination days (D0), D21 and D42. Chapter 1 The objective of this study was to evaluate the inflammatory systemic response in vaccinated heifers with products that contained different types of adjuvants. The numbers of red blood cells (P=0.009) and hemoglobin (P=0,028) were higher in Prezent A after the 2nd dose. The iron were higher in saline group after 1st and 2nd dose (P=0.000; 0.000). In leukogram, vaccinated groups showed a decrease in total leukocytes (P = 0.001) at 2nd dose, neutrophils (%) (P = 0.000; 0.000) in both applications and monocytes (%) (P = 0.010) . Lymphocytes (%) presented gradual increase after received two doses (P = 0.031; 0.000), showing smaller proportions in Prezent A and Oil groups. Basophils (%) after 2nd dose (P = 0.012) and eosinophils (%) (P = 0.000; 0.000) were more reactive in Prezent A and Halum groups between 24 and 72h. Prezent A group presented higher values (P = 0.000; 0.000) of haptoglobin at 24 and 48h compared to the other groups after the 1st and 2nd doses. In general, ROS production was suppressed in vaccinated heifers relative to control after the 1st dose (P = 0.018) and 24 to 168h after the 2nd dose (P = 0.002). Chapter 2 The objective of this research was to evaluate the adverse effects associated with local and systemic reactions as well measure humoral immune response induced by reproductive vaccines containing different adjuvants. Local reactivity was more intense in Oil group after the 1st dose (P = 0.000), in contrast, Prezent A group presented higher reactivity after the 2nd dose. Rectal temperature was higher in Prezent A between 0 and 48 hours in the 1st dose. Bovine Respiratory Disease score was higher in Prezent A and Oil groups at 48h (P=0.002). ABs against BVDV were detected only at D42, observing the similar averages between Prezent A (log2=5) and Halum (log2=5). The seroconversion was higher in Halum (78%) compared to Prezent A (40%) and oil (10%). The titers and seroconversion against BoHV-1 at D21 were observed in Halum (log2 = 3; 67%) and Prezent A (log2 = 1; 80%) groups. At D42 a higher response was observed for Prezent A (log2 = 6, 100%), followed by Halum (log2 = 4, 100%) and Oil (log2 = 3.0, 60%). The data allow to conclude that the vaccine containing oil adjuvant and Prezent A caused greater local reactivity, but Prezent A induced a greater systemic inflammatory response. The production of ABs against BVDV and BoHV-1 was more intense in Halum vaccine and Prezent A. Future studies are needed to demonstrate the beneficial effects of the systemic inflammatory response of Prezent A on the acquired Th1 cell-mediated immune response.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-28T14:37:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_FABIANA_LETICIA_DIGITAL.pdf: 2539644 bytes, checksum: ffb2ea48912cab654c0a8e8bdc397ac2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T14:37:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_FABIANA_LETICIA_DIGITAL.pdf: 2539644 bytes, checksum: ffb2ea48912cab654c0a8e8bdc397ac2 (MD5) Previous issue date: 2014-08-27 / FACEPE / O contato prévio com o leite de mães esquistossomóticas induziu, em camundongos adultos, potencialização da produção de anticorpos e aumento da capacidade de apresentação de antígeno pelos linfócitos B, em resposta ao antígeno heterólogo ovalbumina (OVA). Considerando a imunização com OVA um modelo vacinal, as reações inflamatórias e a produção de anticorpos em resposta a esse antígeno são importantes para o desenvolvimento de uma imunidade satisfatória do hospedeiro. Nesse sentido, as células Th1 e Th17 são importantes fatores para o desenvolvimento dessas respostas. Dessa forma, os camundongos deficientes na produção de IL-12/IL-23 (12p40 knockout-KO) são predispostos a desenvolverem uma resposta Th2 polarizada, tornando-se menos responsivos às vacinações. Diante disso, o presente trabalho investigou o efeito da amamentação em mães infectadas pelo Schistosoma mansoni sobre as imunidades humoral e celular de camundongos adultos C57BL/6 12p40 KO, em resposta ao modelo vacinal acima citado. Foram avaliados: a cinética das reações de hipersensibilidade in vivo; os níveis plasmáticos das imunoglobulinas IgG1 e IgG2a; a produção das citocinas IFN-γ, IL-17, IL-5, IL-6, IL-10 e TGF- pelas células esplênicas e a reação inflamatória provocada no coxim plantar. Para isso, camundongos machos, deficientes na produção de IL-12 e IL-23 (IL-12p40 KO) e camundongos selvagens (wild-type/WT) foram divididos nos seguintes grupos: camundongos IL-12p40 KO amamentados em mães infectadas (AI IL-12p40 KO); camundongos IL-12p40 KO amamentados em mães sem infecção (NANI IL-12p40 KO); camundongos selvagens amamentados em mães infectadas (AI WT) e camundongos selvagens amamentados em mães sem infecção (NANI WT). Cinquenta por cento dos animais de cada grupo foram imunizados com OVA em adjuvante. Os outros 50% porcento restantes permaneceram sem imunização. No grupo AI WT houve aumentado de produção de IgG2a, IL-5, TGF-β e IL-6, com baixos níveis de IL-17, em comparação ao NANI WT. Nos animais AI IL-12p40 KO, a produção de IgG2a, IL-5 e TGF-β foi mais alta do que o grupo NANI IL-12p40 KO e similar ao grupo AI WT, mas a produção de IL-6 foi mais baixa. O grupo AI WT mostrou intenso infiltrado inflamatório de eosinófilos na reação de hipersensibilidade tardia (RHT), com acentuado edema em comparação com o edema menos intenso e infiltrado inflamatório de neutrófilos do grupo NANI WT. Os animais NANI IL-12p40 KO e AI IL-12p40 KO não apresentam RHT, porém a reação inflamatória no AI IL-12p40 KO foi menos intensa que nos NANI IL-12p40 KO. Em conclusão, o contato com antígenos do parasito, através da amamentação, induziu, no descendente adulto, uma melhor resposta de anticorpo neutralizante, mesmo diante da deficiência na produção de IL-12e IL-23. Nesta condição, embora tenha havido uma notável produção de IL-5, a lactação em mães infectadas atenuou a reação inflamatória, provavelmente através da regulação cruzada entre TGF-β e IL-6, modulando, desta forma, o status de hiperativação desses animais. / The previous contact with mothers milk schistosomiasis induced in adult mice enhancement of antibody production and increased antigen presentation capacity by B lymphocytes in response to the heterologous antigen ovalbumin (OA). Considering immunization with OA one vaccine model, inflammatory reactions and antibody production in response to antigen are important for the development of a suitable host immunity. In this sense, the Th1 and Th17 cells are important factors for the development of these responses. Thus, mice deficient in IL-12/IL-23 (12p40 knockout-KO) are likely to develop a polarized Th2 response, making it less responsive to vaccination. Therefore, the present study investigated the effect of breastfeeding in mothers infected with Schistosoma mansoni on the humoral and cellular adult C57BL/6 12p40 KO in response to vaccination model mentioned above. Were evaluated: the kinetics of in vivo hypersensitivity reactions; plasma levels of IgG1 and IgG2a immunoglobulins; the production of the cytokines IFN-γ, IL-17, IL-5, IL-6, IL-10 and TGF-β by spleen cells and the inflammatory reaction induced in the footpad. To this end, male mice deficient in IL-12 and IL-23 (IL-12p40 KO) and wild-type mice (Wild-type/WT) were divided into the following groups: IL-12p40 KO mice suckled by infected mothers (IL-12p40 KO- SIM); IL-12p40 KO mice suckled by uninfected mothers (IL-12p40 KO); Wild-type mice suckled by infected mothers (SIM) and wild-type mice suckled by uninfected mothers (CONTROL). Fifty percent of animals in each group were immunized with OA in adjuvant. The other 50% remaining percent remained without immunization. In the SIM group was increased production of IgG2a, IL-5, TGF-β and IL-6, IL-17 with low levels compared to CONTROL. In animals IL-12p40 KO-SIM the production of IgG2a, IL-5 and TGF-β was higher than the IL-12p40 KO similar to group SIM, but IL-6 production was lower. The SIM group showed intense inflammatory infiltrate of eosinophils in the delayed hypersensitivity reaction (DTH), with severe edema compared with the less intense edema and inflammatory infiltration of neutrophils CONTROL group. The animals IL-12p40 KO and IL-12p40KO-SIM not have DTH, but the inflammatory reaction in the IL-12p40KO-SIM was less intense than in IL-12p40 KO. In conclusion, contact with parasite antigens, through breastfeeding, induced in adult offspring, better neutralizing antibody response, despite the deficiency in the production of IL-12 and IL-23. In this condition, though there has been a remarkable IL-5 production in lactating mothers infected with attenuated inflammatory response, probably via cross regulation between TGF-β and IL-6 modulate thereby the status of hyperactivation of these animals.

Encefalite auto-imune experimental (EAE) é o modelo animal da doença humana esclerose múltipla. Foi demonstrado que as estatinas podem ter efeitos benéficos na EAE. Diversos mecanismos de ação foram descritos para explicar esses efeitos, entre eles: estímulo a expressão de HO-1, inibição da expressão de Toll-like receptors (TLR) e inibição da produção de citocinas de padrão Th1. Estudamos o efeito de uma estatina, a sinvastatina, na evolução clínica da EAE e seus mecanismos de ação. Também avaliamos o papel do TLR4 na EAE. O tratamento com sinvastatina melhorou a evolução clínica da EAE nas doses de 1 e 5 mg/kg/dia. A análise do infiltrado celular no SNC mostrou mudança do padrão de diferenciação dos linfócitos com menor porcentagem de células produtoras de IL-17 nos grupos tratados em relação aos controles. Os animais TLR-4 -/- apresentaram melhor evolução da doença. Concluímos que o tratamento com sinvastatina melhora a evolução clínica da EAE através da inibição da produção de IL-17 e que animais TLR-4 -/- têm melhor desfecho clínico na EAE que os controles. / Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is considered the experimental model for the human multiple sclerosis disease. It has been demonstrated that statins, used as lipid-lowering agents, can have beneficial effects on EAE. Several actions have been described to explain these effects: enhancement of HO-1 expression, inhibition of Toll-like receptors expression and inhibition of Th1 cytokines. We have investigated the effect of a statin, simvastatin, on EAE clinical development and the mechanisms behind those effects. Simvastatin treatment ameliorated EAE clinical outcome at doses 1 and 5 mg/kg/day. SNC cellular infiltrates analysis showed altered pattern of differentiation with decreased percentage of IL-17-producing T lymphocytes in treated group comparing with controls. TLR4 -/- mice showed better clinical development. We concluded that simvastatin treatment ameliorates EAE clinical outcome through inhibition of IL-17 production. Mice TLR4 -/- have better EAE clinical outcome than WT controls.