Orientador: Sônia Regina Panzarini Barioni / Co-orientador: Cláudio Aparecido Casatti / Banca: Jéssica Lemos Gulinelli / Banca: Maurício Zardo / Banca: Idelmo Rangel Garcia Junior / Banca: Celso Koogi Sonoda / Resumo: Recentes investigações sugerem que a deficiência de estrógeno, contribue para alteração nos tecidos periodontais. Considerando o estudo do traumatismo dento-alveolar em indivíduos com essa condição, o objetivo do trabalho foi analisar o efeito da ovariectomia sobre os tecidos periodontais após o reimplante dentário imediato por meio da análise histomorfométrica, imunoistoquímica e micro-ct em ratas. Oitenta ratas Wistar (Rattus norvegicus, albinus) com ciclos estrais normais foram divididas aleatoriamente em dois grupos: Grupo ovariectomizadas (OVX), e Grupo Sham (grupo controle). Após 2 meses da ovariectomia, foi realizado extração dos incisivos superiores seguido de reimplante dentário imediato e os animais sofreram eutanásia aos 28, 45 e 60 dias após o reimplante. Foi realizada a análise histomorfométrica e imunoistoquímica com avaliação das proteínas PCNA, OPG, CASPASE-3, RUNX-2 e TRAP. Em todos os grupos houve reinserção do ligamento periodontal no tecido ósseo e cemento e a imunorreatividade à PCNA foi evidente em células periodontais independente do grupo Sham ou OVX. A reabsorção radicular externa esteve mais acentuada a partir dos 45 dias com células imunorreativas à TRAP presentes na superfície óssea e dentária. Todavia, uma considerável parcela também estava dispersa no ligamento periodontal em todos os grupos. Não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos para as proteínas PCNA e TRAP. Já a análise histomorfométrica revelou diferença estatisticamente significante entre os grupos nos detalhes histomorfométricos do ligamento periodontal e raíz dentária para os sub-itens de intensidade... / Abstract: Recent researchs suggest estrogen deficiency leads to changes in periodontal tissues. In order to study dental traumatology under this condition, the aim of the study was analyze the effects of ovariectomy on periodontal tissues following immediate tooth replantation through histomorphometric, immunohistochemistry and μ-ct analysis in rats. Eighty Wistar rats (Rattus norvegicus albinos) with normal estrous cycles were randomly divided into two groups (n = 20 per group): 1) Group ovariectomized (OVX), and 2) Sham group (control group). After two months, the rats were followed by extraction of upper right incisor and immediate replantation. The rats were sacrificed immediately 28, 45 and 60 days after tooth reimplantation. Histomorphometric and immunohistochemical analysis was performed by evaluation of PCNA, OPG, CASPASE-3, RUNX-2 and TRAP proteins. Periodontal ligament was reinseted in the bone and cementum and the immunohistochemical analysis revealed PCNA expression in the periodontal ligament independent of Sham or OVX group. At 45 days, the external root resorption was greater with expression of TRAP proteins in the bone and tooth surface. However, in both groups, were also dispersed in the periodontal ligament. There was no statistically significant difference between the groups for the PCNA and TRAP proteins. The histomorphometric analysis showed statistically significant difference between groups in the histomorphological details of periodontal ligament and root resorption for the sub-items: intensity of chronic inflammatory infiltrate at 60 days (p <0.01), the organization of the periodontal ligament at 45 days (p <0:05) and depth... / Doutor

Orientador: Roberta Okamoto / Coorientador: Tetuo Okamoto / Banca: Idelmo Rangel Garcia Júnior / Banca: Thallita Pereira Queiroz / Resumo: (1) Objetivos: Avaliar por meio da análise histométrica e imunoistoquímica, o potencial osteocondutor de grânulos de hidroxiapatita e beta- tricálcio fosfato (Bone Ceramic - Straumann®) no processo de reparo de defeitos ósseos críticos em calvária de ratos. (2) Métodos: Foram utilizados ratos divididos em três grupos (n=8), submetidos à eutanásia aos 14 dias e 28 dias pós-cirúrgicos. Em cada animal foi realizado um defeito ósseo de 5mm na calvária, sendo o Grupo Coágulo (GC) com o defeito preenchido somente com coágulo; Grupo Osso Autógeno (GA), preenchido com osso autógeno e Grupo Bone Ceramic (GBC), com osso aloplástico (Straumann®). Foi avaliada a área de tecido ósseo presente na região central dos defeitos ósseos. Para a comparação entre os valores obtidos, foi realizado o teste ANOVA e como pós-teste, Tukey. Foi adotado como nível de significância p<0,05. Foi realizada análise imunoistoquímica, com os anticorpos primários contra OC, RUNX 2, TRAP e VEGF, para a avaliação dos diferentes estágios do processo de reparo ósseo. Como análise adicional, foram obtidads imagens 3D das cálvarias em microtomografia. (3) Resultados: O local do defeito ósseo originalmente tratado com BC foi totalmente preenchido por um conglomerado de biomateriais e osso neoformado, o qual foi estatisticamente superior ao GC, em ambos os períodos analisados (p<0,05). Remanescentes de BC eram visíveis e estavam em íntimo contato com o tecido ósseo. Além disso, no grupo GA as observações foram semelhantes, porém foi notado fechamento total do defeito aos 28 dias e houve maior área de neoformação óssea em todos os períodos analisados, comparando-se aos demais biomateriais (p<0,05). Defeitos que foram preenchidos com CO apresentaram apenas um tecido conjuntivo delgado fechando o defeito... / Abstract: (1)Objectives: To evaluate by histometric and immunohistochemical analysis, the osteoconductive potential of hydroxyapatite granules and beta-tricalcium phosphate (Bone Ceramic - Straumann ®) in the repair of critical bone defects in rat calvaria process. (2)Methods: The rats were divided into three groups (n = 8) and submitted to euthanasia at 14 days and 28 days post-surgery. In each animal a 5 mm calvaria bone defect was performed. In Blood Clot Group (CG) the defect was filled only with clot; in the Autogenous Bone Group (AG) the defect was filled with autogenous bone and in Bone Ceramic Group (BC), with alloplastic bone (Straumann ®).The bone tissue area was evaluated in the central region of bone defects. The results were submitted to ANOVA and Tukey's test at 5% level of significance. For the evaluation of the different stages of the bone healing process, immunohistochemical analysis was performed with primary antibodies against OC, RUNX 2, TRAP and VEGF. As an additional analysis, calvaria's 3D images were obtained in microtomography. (3)Results: The bone defect treated with BC was filled with a conglomerate of biomaterials and bone formation, which was statistically higher than CG in both periods analyzed. Remnants of BC were visible and were in intimate contact with bone tissue. Furthermore, the AG group observations were similar, but it was observed a complete defect closure after 28 days and there was a greater area of bone formation in all periods analyzed, comparing to other biomaterials (p <0.05). The defects filled with CO showed only a slender conjunctive tissue closing the bone defect. The TRAP protein was lightly immunomarked, while immunostaining of VEGF was moderate. The osteocalcin immunostaining was present in all analyzed periods (14 and 28 days). The AG group's 3D image showed full compatibility bone... / Mestre

Orientador: Eduardo Hochuli Vieira / Banca: Idelmo Rangel Garcia Júnior / Banca: Lenadro Eduardo Klüppel / Resumo: Os autores tiveram como objetivo neste trabalho avaliar comparativamente o comportamento do beta-tricalcio fosfato (β-TCP) ChronOs® e do osso autógeno (OA) em seios maxilares por meio de análise tomográfica, histológica, histométrica e imunoistoquímica. Para o presente estudo foram realizados levantamento e preenchimento do assoalho do seio maxilar unilateralmente com OA em 12 seios e com β-TCP puro em 11 seios maxilares. Nos períodos de 07 dias e 06 meses, os pacientes foram submetidos à tomografia para análise quantitativa do volume residual de enxerto após reabsorção e remodelação. Previamente à instalação dos implantes, foram realizadas perfurações com broca trefina para coleta do material e envio para análises. Na análise volumétrica não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos. A análise histológica evidenciou presença de grânulos sendo absorvidos e substituídos e tecido ósseo maduro no grupo teste. A quantidade de tecido ósseo neoformado foi maior no grupo do biomaterial. A análise imunoistoquímica comprovou a capacidade osteoindutiva do osso autógeno, não presente no grupo teste. Em conclusão, o ChronOs®, é um material biocompatível e osteocondutor com resultados clínicos similares ao osso autógeno neste modelo de estudo proposto, mesmo sem apresentar capacidade osteoindutiva. / Abstract: The aim of this study was to analyze the behavior of the beta-tricalcium phosphate (β-TCP) ChronOs® and autogenous bone (AB) in maxillary sinus floor augmentation by comparing computed tomography (CT), histological, histometric and immunohistochemical analysis. For this study, grafting of the maxillary sinus was performed unilaterally with AB in 12 sinuses and with pure β - TCP in 11 maxillary sinuses. In periods of 07 days and 06 months, patients underwent CT for quantitative comparative analysis of residual volume after graft resorption and remodeling. Prior to implant placement, drilling with trephine for material collection and analyzes were performed. In CT volumetric analysis there was no statistically significant difference between groups. Histological analysis revealed the presence of granules being absorbed and substituted and mature bone in the β - TCP group. The amount of newly formed bone was also higher in the test group. Immunohistochemical analysis confirmed the osteoinductive capacity of AB group, not seen in the β - TCP group. In conclusion, Chronos® is a biocompatible and osteoconductive material with similar clinical results to the autogenous bone in this proposed model, even without osteoinductive properties. / Mestre

Orientador: Eduardo Hochuli Vieira / Banca: Roberta Okamoto / Banca: Nicolas Homsi / Resumo: A proposta deste estudo é avaliar o comportamento do enxerto ósseo composto de beta tricálcio fosfato (B-TCP) misturado ao osso autógeno na proporção de 1:1 frente a reabsorção, neoformação óssea e atividade molecular na enxertia do seio maxilar de humanos. Nove seios maxilares foram enxertados com esse material (Grupo Teste) e 12 com osso autógeno (Grupo Controle). Após 7 a 15 dias, os pacientes foram submetidos a uma tomografia computadorizada (TC) cone bean para mensurar o volume inicial do enxerto (T1). Decorrido 6 meses de reparação óssea, uma nova TC foi realizada para avaliar o volume final (T2) e verificar as alterações volumétricas dos materiais. Após 6 meses, no momento da instalação dos implantes dentais, biópsias foram colhidas por meio de uma broca trefina para avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica. As taxas de reabsorção encontradas não foram significantes (p=0.17) com médias em torno de 38.3% ± 16.6 para o grupo teste e 45.7% ± 18.6 no grupo controle. Houve significância estatística na taxa de neoformação óssea do grupo teste (25.4% ± 6.4) em comparação com o grupo controle (38.6% ± 10.5). A análise imunoistoquímica teve como objetivo avaliar as proteínas Runx2, VEGF, TRAP e Osteocalcina. Os resultados encontrados com a imunomarcação destas, mostram que este enxerto possui um alto turnover celular e um tecido conjuntivo apresentando células em um curso de diferenciação celular. Visto isso, o enxerto do B-TCP misturado ao osso autógeno 1:1 em seio maxilar apresenta características moleculares com capacidade osteogênica promissora / Abstract: The aim of this study is to evaluate the behavior of beta tricalcium phosphate (B-TCP) mixed with autogenous bone compost graft in the rate 1:1 analyzing bone reabsorption, bone formation and molecular activity in grafting human maxillary sinus floor augmentation. Nine maxillary sinus were grafted with this material (Test group) and 12 with autogenous bone graft alone (Control Group). After 7 - 15 days, patients were submitted to an initial computed tomography (CT) to measure the initial graft volume (T1). After 6 months of bone healing, new CT was performed by patients to evaluate bone graft final volume (T2) and the graft volumetric changes. During dental implants placement, biopsies were collected with a 3.0 mm trephine burr and processed to histomorphometric and immunohistochemistry analisys. The average of reabsorption rates of test group were 38.3% ± 16.6 and 45.7% ± 18.6 to control group (p=0.17). The new bone formation was statistical significant between test group (25.4% ± 6.4) and control group (38.6% ± 10.5) (p<0.05). The immunohistochemistry analysis evaluated Runx2, VEGF, TRAP and Osteocalcin proteins. Outcomes showed a high cellular turnover with a pathway cellular differentiation in connective tissue. Thus, B-TCP mixed with autogenous bone graft in maxillary sinus presents propitious molecular characteristics to osteogenic capacity / Mestre

Orientador: Irene Bastos Franceschini Vicentini / Coorientador: Fernanda Antunes Alves da Costa / Banca: Rosicleire Veríssimo Silveira / Banca: Luciene Patrici Papa / Resumo: Sabe-se que em camarões peneídeos, a vitelogenina é sintetizada no ovário e hepatopâncreas, mas a contribuição relativa desses dois tecidos na síntese de vitelogenina ainda é incerta. Este processo pode diferir ainda de acordo com a espécie e estágio vitelogênico ou muda. Assim o presente estudo analisou a localização da produção de vitelogenina através de técnicas imunohistoquímicas, bem como, a quantificação do seu mRNA através do Real Time PCR em fêmeas de Artemesia longinaris em diferentes estágios de maturação ovariana (rudimentar - RU, em maturação - EM e maduro - MA). A espécie de camarão estudada apresenta altíssimo valor econômico. Assim, o estudo dos mecanismos da reprodução podem gerar dados para futuros projetos de produção em escala comercial, contribuindo com a preservação dos estoques naturais. A partir de análises moleculares confirmou-se a síntese de vitelogenina no ovário e hepatopâncreas de fêmeas de A. longinaris durante a maturação ovariana. Os níveis de expressão relativa de transcritos de vitelogenina no ovário e no hepatopâncreas durante a maturação ovariana demonstram que a dinâmica da síntese de vitelogenina é inversamente proporcional. A imunohistoquímica localizou a síntese endógena de vitelogenina nas células foliculares, nos oócitos pré-vitelogênicos e oócitos em vitelogênese inicial. E a síntese exógena de vitelogenina foi localizada nas células R dos túbulos hepatopancreáticos. Ainda, visto a grande contribuição do hepatopâncreas ao ciclo reprodutivo e às demais funções fisiológicas do animal, analisou-se o perfil celular do túbulo hepatopancreático nos estágios de maturação ovariana. Este órgão apresenta comportamento celular que se adapta ao ciclo reprodutivo em fêmeas, ou seja, o ciclo celular do hepatopâncreas além de obedecer a um ciclo digestivo é adaptado ao ciclo reprodutivo / Abstract: It is known that in penaeid shrimp the vitellogenin is synthesized into the ovary and hepatopancreas, but the relative contribution of these two tissues in the synthesis of vitellogenin remains uncertain. This process differs according to the species and vitellogenesis stage or molt. Thus the present study examined the location of vitellogenin production by immunohistochemical techniques, as well as the quantification of its mRNA by Real Time PCR in female Artemesia longinaris at different stages of ovarian maturation (immature - RU, maturing EM and mature - MA). The shrimp species investigated presented a very high economic value. The study of the mechanisms of reproduction can generate data for future projects of commercial scale production contributing with the preservation of wild stocks. The molecular analyzes have confirmed the vitellogenin synthesis in the ovary and hepatopancreas of A. longinaris females during ovarian maturation. the relative expression level of vitellogenin transcripts in the ovary and the hepatopancreas during ovarian maturation show that the dynamics of vitellogenin synthesis is inversely proportional. By immunohistochemistry, it was located the endogenous synthesis of vitellogenin in follicular cells, in pre-vitellogenic oocytes and oocytes in early vitellogenesis. And the synthesis exogenous of vitellogenin was localized in cells R of hepatopancreaticos tubules. Also, given the great contribution of hepatopancreas reproductive cycle and other physiological functions of the animal, we analyzed the cellular profile of the hepatopancreatic tubule at stages of ovarian maturation. This organ has a cellular behavior that adapts to the reproductive cycle in females, in other words, the cellular cycle of hepatopancreas beyond to follow a digestive cycle is adapted to the reproductive cycle / Mestre

Orientador: Mirela Tinucci Costa / Banca: Aleksandro Schafer da Silva / Banca: Leucio Câmara Alves / Banca: Aureo Evangelista Santana / Banca: Annelise Carla Camplesi / Resumo: O tratamento de cães com leishmaniose visceral no Brasil tem gerado polêmicas discussões entre os diversos segmentos de profissionais da saúde. De um lado os Médicos Veterinários pressionados pelos proprietários dos cães que querem ter o direito de decidir por um tratamento ou pela eutanásia de seus animais; de outro os Ministérios da Saúde e da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) que se mostram contrários a qualquer tratamento, motivados pelo risco de se criar cepas do parasita resistentes aos fármacos, os quais também podem ser empregados em pacientes humanos. Argumentos científicos que possam embasar essa polêmica devem ser explorados. Uma das possibilidades de se avaliar o desenvolvimento de resistência a fármacos pode ser conseguida por meio da pesquisa da expressão da glicoproteína-P (gp-P) e proteína de resistência a múltiplas drogas (MRP1), que atuam como bombas de efluxo expulsando xenobióticos de células, responsáveis pelo fenótipo MDR (resistência a múltiplas drogas). Avaliamos, pela técnica de imuno-histoquímica, a reatividade da gp-P e MRP1, clone C494 e ABCC1, respectivamente, na pele de 11 cães naturalmente infectados por Leishmania (L.) infantum chagasi antes e após serem submetidos a dois protocolos de tratamento: Alopurinol e vacina inativada (n=4) e Alopurinol, vacina inativada e domperidona (n=7) e quantificamos formas amastigotas na pele pela mesma técnica. Todos os animais após 3 e 6 meses de tratamento tiveram melhora clínica evidente e tiveram contagem negativa de formas amastigotas do parasita. Pele de cães com LV expressaram gp-P e MRP1, antes e após o tratamento, no entanto, este experimento permitiu concluir que a gp-P e MRP1 não foram bons marcadores para avaliar a eficácia terapêutica da LVC e para prever possíveis estados de resistência a fármacos. Todavia, o entendimento sobre a participação de marcadores de resistência a múltiplas drogas na pele de ... / Abstract: The treatment of dogs with visceral leishmaniasis in Brazil has generated controversial debate among various segments of health professionals. On one side, veterinarians pressured by dog owners want to have the right to decide between treatment and euthanasia of their animals. On the other hand, the Ministry of Health and the Ministry of Agriculture, Livestock, and Supply (MAPA) are opposed to treatment because of the risk of creating strains of the parasite resistant to drugs that are also used for human patients. Scientific arguments that can support this controversy should be explored. One possibility for assessing the development of drug resistance can be achieved through research of the expression of Pglycoprotein (P-gp) and multidrug resistance-associated protein (MRP1). These proteins, which are responsible for the MDR phenotype (multiple drug resistance), act as efflux pumps which expel xenobiotics from cells. Using immunohistochemistry, the reactivity of P-gp (clone C494) and MRP1 (clone ABCC1) in the skin of 11 dogs naturally infected by Leishmania (L.) infantum chagasi was analyzed before and after undergoing two treatment protocols: Allopurinol and inactivated vaccine (n=4) and Allopurinol, inactivated vaccine, and domperidone (n=7). Quantification of Leishmania amastigotes in the skin was also achieved via immunohistochemistry. All of the animals after 3 and 6 months of treatment had clinical improvement and tested negative for amastigote forms of the parasite. Yet, the skin of dogs positive for CVL (canine visceral leishmaniasis) expressed P-gp and MRP1 before and after treatment, illustrating that P-gp and MRP1 were neither good markers for evaluating the therapeutic efficacy of CVL nor for predicting the possible states of drug resistance. However, an understanding of the participation of markers for multiple drug resistance in the skin of dogs under treatment for CVL can be of great importance for the development of an ... / Doutor

Orientador: Renée Laufer Amorim / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Kellen de Sousa Oliveira / Resumo: A próstata canina pode desenvolver espontaneamente lesões proliferativas, associadas com a idade, inflamação e os hormônios, tais como: a hiperplasia prostática benigna (HPB), a atrofia inflamatória proliferativa (PIA) e o carcinoma prostático (CaP). Consequentemente, o cão pode ser usado para o estudo do processo carcinogênico da próstata no homem. Alterações na expressão gênica, proteica e na função do PTEN e TP53 foram detectadas nas lesões pré-neoplásicas e neoplásicas da próstata humana. A super-expressão da oncoproteína MDM2 e a perda de marcação nuclear do receptor andrógeno (AR) foram correlacionados com progressão tumoral e ineficiência ao tratamento anti-andrógeno do CaP no homem. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão proteica de PTEN, MDM2, p53 e AR para determinar seu papel no processo carcinogênico da próstata canina e validar os resultados obtidos pelo grupo de pesquisa com a técnica de hibridação genômica comparativa (CHG) nesses genes. Com isso, foi construído um microarranjo de tecido (TMA), com 74 amostras da glândula prostática canina, divididas em 18 HPB, 22 PIA, 19 CaP e 15 próstatas de tecido normal. A técnica de imuno-histoquímica para os anticorpos PTEN, MDM2, p53, e AR, foi realizada pelo método de peroxidase e DAB. O PTEN, p53 e AR apresentaram perda de marcação nuclear nos carcinomas prostáticos quando comparados com o tecido prostático normal. Na oncoproteína MDM2, o tecido normal obteve marcação nuclear e citoplasmática discreta enquanto no CaP, mais de 85% das amostras apresentaram super-expressão citoplasmática/nuclear. A perda de marcação nuclear do PTEN, p53 e AR, e o ganho da expressão de MDM2 também foi relatado no CaP do homem, sugerindo que existem semelhanças nas alterações moleculares da rede PTEN/MDM2/p53 e AR em ambas as espécies no processo de carcinogênese prostática. Por conseguinte, a espécie cão é um ... / Abstract: The canine prostate may spontaneously develop prostatic proliferative lesions, associated with aging, inflammation and hormones, such as: benign prostatic hyperplasia (BPH), proliferative inflammatory atrophy (PIA) and prostatic carcinoma (PCa). Consequently, the dog can be used for the study of carcinogenesis process in the prostate of men. Changes in PTEN and TP53 gene and protein expression and function were detected in preneoplasic and neoplasic lesion of human prostate. MDM2 oncoprotein overexpression and loss of nuclear staining of androgen receptor (AR) were correlated with tumor progression and inefficiency antiandrogen treatment of PCa in men. In this context, the aim of this study was to evaluate PTEN, MDM2, p53 and AR protein expression to determine their role in carcinogenic process of the canine prostate. We built a tissue microarray (TMA), with 74 samples of canine prostate, divided into 18 BPH, PIA 22, 19 PCa and 15 prostates of normal tissue. The immunohistochemistry was carried for PTEN, MDM2, p53, and AR antibodies with peroxidase method and DAB. The PTEN, p53 and AR showed loss of nuclear staining in canine prostate carcinoma compared with normal prostate tissue. MDM2 oncoprotein, in normal tissue was discrete cytoplasmic and we observed nuclear staining in CaP, while more than 85% of the samples showed cytoplasmic/nuclear overexpression. The loss of nuclear staining of PTEN, p53 and AR, and the gain of MDM2 expression was also reported in human PCa, suggesting that there are similarities in the molecular alterations of PTEN/MDM2/p53 network and AR in both species in the process prostate carcinogenesis. Therefore, the dog is a potential model for the study of molecular signaling pathways as PTEN/MDM2/p53 and AR involved in human PCa / Mestre

Orientador: José de Anchieta de Castro e Horta Junior / Coorientador: Jackson Cioni Bittencourt / Banca: Luiz Fernando Takase / Banca: Luciana Pinato / Resumo: O hormônio concentrador de melanina (MCH) do rato é um nonadecapeptídeo presente em neurônios localizados, principalmente, na área hipotalâmica lateral (LHA) que se projetam para diversas regiões do neuro-eixo. O MCH está envolvido em diversas funções, tais como: reprodução, certos aspectos do comportamento motivado, atividade locomotora, percepção sensorial, controle de temperatura, memória, aprendizagem, ansiedade, ciclo sono-vigília e comportamento alimentar. Nesse, o MCH atua como neuropeptídeo orexígeno. Durante o envelhecimento, ocorre a diminuição no consumo de energia associada à idade. Nesse trabalho, analisamos em diferentes faixas etárias, as variações da expressão do MCH na área hipotalâmica lateral, empregando métodos esterológicos (para estimar o número de neurônios MCH-ir, área, volume e densidade neuronal), reconstrução tridimensional (para estudo da distribuição dos neurônios MCH-ir) e densitometria óptica de tecido hibridizado para reconhecimento do RNAm do ppMCH (para mensuração da área hibridizada, densidade óptica média e densidade óptica integrada [DOI]) na LHA e em suas regiões. Foram utilizados 35 ratos Sprague-Dawley machos, divididos em 7 grupos experimentais de diferentes idades: 14 (lactente), 28 (pré-púbere), 50 (púbere), 90 (adulto jovem), 210 (adulto maduro), 540 (adulto senescente) e 750 (adulto senil) dias pós-natais. Os animais foram submetidos à perfusão transcardíaca, seus encéfalos coletados e processados para análise da expressão do MCH na área hipotalâmica lateral, segundo protocolos de imuno-histoquímica e hibridização in situ. A LHA apresentou um aumento significativo no número de neurônios apenas entre os grupos de 14 e 28 dias e sua área e volume foram significativamente menores apenas no grupo de 14 dias em relação a todos os grupos, com exceção do grupo de 750 dias. No entanto, com relação a densidade neuronal não foram observadas... / Abstract: The Melanin-Concentrating Hormone (MCH) is a nonadecapeptide located mainly in neurons in the lateral hypothalamic area (LHA), which innervate several regions of neuraxis. MCH is involved in many functions as reproduction, aspects of motived behaviors, motor activity, sensorial information, temperature control, memory, learning, anxiety, sleep-wake cycle and feeding behavior in which the MCH plays an orexigenic role. The energy consumption in aging is reduced as well as, the expression of MCH presents alterations associated with age. Therefore, we analyzed the variations in the expression of MCH at different ages in the lateral hypothalamic area, using stereology (to estimate the number of MCH-ir neurons, area, volume and neuronal density), 3D reconstruction (to study the distribution of MCH-ir neurons) and optical density after in situ hybridization protocol for ppMCH RNAm (to measure the hibridizated area, the mean optical density and the integrated optical density [IOD]) in the LHA and its three regions. In this study, 35 animals were divided in 7 experimental groups of 14 (neonate), 28 (prepubescent), 50 (pubescent), 90 (young adult), 210 (middle aged adult), 540 (senescent adult) and 750 (elderly adult) postnatal days. All the animals were perfused via the ascending aorta, the brains were collected and processed by immunohistochemistry and in situ hybridization protocols to analyze the expression of MCH in the lateral hypothalamic area. LHA neurons number increased only between groups of 14 and 28 days, and its area and volume significantly smaller in 14-days group when in respect to all other groups but the 750-days one. However, there weren't differences in neuronal density among groups. MCH-ir neurons distribution in LHA and contiguous regions was similar among all groups as well. Hypothalamic MCH-ir neurons has shown uniform rates in and out of LHA, but after analyzing its distribution in mamillary, tuberal and anterior ... / Mestre

Orientador: Rogério Dias / Coorientador: Daniel Spadoto Dias / Banca: Maria Aparecida Custódio Domingues / Banca: Waldir Pereira Modotte / Resumo: Objetivo: Avaliar a expressão imunoistoquímica de receptores de estrogênio (RE) e progesterona (RP), de proteínas relacionadas à proliferação celular (Ki-67), à neoangiogênese (endoglina - CD105), à adesão celular (claudinas 3 e 4) e proteínas da matriz extracelular (metaloproteinases 2 e 9 - MMP 2 e MMP 9) nos pólipos endometriais e no câncer de endométrio comparativamente ao endométrio normal. Tipo de Estudo: Estudo transversal comparativo com amostra de conveniência. O levantamento foi realizado através de banco de dados do Laboratório de Patologia Clínica da Faculdade de Medicina de Botucatu. Local: Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" - UNESP. Pacientes: Foram realizados estudos imunoistoquímicos de 30 amostras de pólipos endometriais sem atipias e de 30 amostras de adenocarcinoma endometrial do tipo endometrioide e confrontados com os resultados da análise de 30 amostras de endométrio normal (grupo controle). Intervenções: Dados epidemiológicos, clínicos e antropométricos foram levantados através de análise dos prontuários. Para análise dos casos de adenocarcinoma de endométrio e dos controles foi empregada a técnica de tissue microarray (TMA). Os blocos de parafina, com os cortes do maior fragmento de lesão polipoide e os blocos receptores de TMA foram utilizados para avaliação imunoistoquímica de RE, RP, CD105, Ki-67, claudinas 3 e 4, MMP-2 e MMP-9. Resultados Principais: Identificou-se diferença significativa entre os grupos na expressão de RE (P<0,001) e RP (P<0,05), do Ki-67 (P<0,001), do CD105 (P<0,001) e da claudina 3 (P<0,001). Não foram identificadas diferenças nos marcadores pesquisados entre pólipos e câncer de endométrio (P≥0,05). A expressão de MMP-2 e MMP-9 foi praticamente ausente nos três grupos. Conclusões: Nas amostras pesquisadas, não foram demonstradas diferenciações entre os... / Abstract: Objective: To evaluate the immunohistochemical expression of estrogen receptors (RE), progesterone receptors (RP), cell proliferation (Ki-67), neoangiogenesis (endoglin - CD105), cell adhesion (claudin 3 and 4) and extracellular matrix proteins (metalloproteinases 2 and 9 - MMP 2 and MMP 9) in endometrial polyps and endometrial cancer compared to normal endometrium. Design: Comparative cross-sectional study with occasional sample. The survey was conducted from the database of the Clinical Pathology Laboratory of Botucatu Medical School - Unesp. Setting: Clinics Hospital from Botucatu Medical School, São Paulo State University - UNESP. Patients: Were performed immunohistochemical studies of 30 samples of endometrial polyps without atypia and 30 samples of endometrioid adenocarcinoma of endometrium confronted with the results of 30 normal endometrial samples (control group). Interventions: Epidemiological, clinical and anthropometric data were collected through analysis of medical records. To analyze the cases of endometrial adenocarcinoma and controls we used the tissue microarray technique (TMA). Paraffin blocks, with the larger fragment of polypoid lesions and recipient blocks of TMA were used to evaluate immunohistochemical expression of ER, PR, CD105, Ki-67, claudin 3 and 4, MMP-2 and MMP-9. Main Results: We identified a significant difference between groups in ER (P <0.001) and PR expression (P<0.05), Ki-67 (P<0.001), CD105 (P<0.001) and claudin 3 (P<0.001). No difference was found between polyps and endometrial cancer (P≥0,05). The expression of MMP-2 and MMP-9 was virtually absent in all three groups. Conclusions In the studied samples according to the immunohistochemical parameters evaluated no differentiation between polyps and endometrial cancer was observed. There was no expression of MMP-2 and -9 in endometrial tissues analyzed. Further studies are necessary to better understand ... / Mestre

Orientador: Silvio Alencar Marques / Coorientador: Mariangela Esther Alencar Marques / Banca: Hamilton Ometto Stolf / Banca: Gisele Alborghetti Nai / Banca: Cléverson Teixeira Soares / Banca: Alexandre Todorovic Fabro / Resumo: Fundamentos: O equilíbrio homeostático do sistema imune é imprescindível para o controle e evolução do quadro clínico das neoplasias linfoides da pele e dos processos inflamatórios. Dentro desse equilíbrio imunológico, a função das células T reguladoras é controverso tanto nos casos de micose fungoide quanto nas dermatoses inflamatórias que são os principais diagnósticos diferenciais. O anti-FOXP3 é o imunomarcador mais específico para as células T reguladoras. Objetivo: Identificar e quantificar a presença de células T reguladoras através do marcador imunoistoquímico anti-FOXP3 em cortes histológicos de casos de micose fungoide em fases clínicas iniciais, e comparar com a presença ou não do mesmo marcador em casos de psoríase vulgar, dermatite eczematosa e líquen plano. Métodos: Foram estudadas 77 biópsias de 64 pacientes, sendo 30 casos de micose fungoide e 34 de dermatoses inflamatórias, consultados entre 1999 a 2014 no arquivo do serviço de Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu - Universidade Estadual Paulista. As biópsias foram revistas e seus resultados imunoistoquímicos comparados de acordo com as categorias entre grupo de casos e grupo controle. Resultados: A classificação do escore epidérmico para o imunomarcador FOXP3 foi significativamente menor na micose fungoide que nas dermatoses inflamatórias (p<0,001). A principal discrepância ocorreu com o líquen plano, no qual 90% foram FOXP3+ em mais de 50% dos linfócitos intraepidérmicos, enquanto que apenas 10% dos casos de micose fungoide alcançaram esses níveis de positividade. Conclusões: Embora a maioria dos diagnósticos das lesões iniciais de micose fungoide dependam principalmente da correlação clínica-histopatológica, a diferença estatisticamente significante da proporção de FOXP3+ intraepidérmico comparando-se com as dermatoses inflamatórias permite a inclusão desse imunomarcador no painel imunoistoquímico para o... / Abstract: Background: The homeostatic balance of the immune system is essential for clinical evolution and control of cutaneous lymphoid neoplasias and inflammatory diseases. Regarding immunological balance the role of regulatory T cells remain unclear either in mycosis fungoides or their clinical differential diagnosis like inflammatory dermatosis. Anti- FOXP3 antibody is the most specific marker of regulatory T cells. Objective: To determine and quantify regulatory T cells using anti-FOXP3 antibody in histopathological samples of early lesions of mycosis fungoides and compare it with psoriasis vulgaris, eczematous dermatitis and lichen planus by a scoring system for FOXP3 expression. Methods: Data from 77 biopsies from 64 patients, 30 cases corresponding to mycosis fungoides and 34 to inflammatory dermatosis, observed between 1999 and 2014 at the Department of Patholgy at Botucatu Medical School - Sao Paulo State University. Biopsies were reviewed and the FOXP3 labeled cells results compared according to cases or control group. Results: Intraepidermal FOXP3 positivity was significantly lower in mycosis fungoides than inflammatory dermatosis (p<0,001). Especially significant was that 90% of lichen planus cases resulted in 50% or more of epidermal lymphocytes scored FOXP3+ whereas only 10% of mycosis fungoides group have reached this level. Conclusions: Despite the majority of early lesions of mycosis fungoides diagnosis depend mainly on clinical and histopathological correlation, the statistical significance of intraepidermal FOXP3 positivity comparing with inflammatory dermatosis allow us to include this antibody to help defining the diagnosis or giving support to suspect cases morfologically dubious of mycosis fungoides / Doutor