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Estudo da resposta imunológica induzida por Arnica montana L

Marques, Márcia Faria [UNESP] 28 November 2006 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-11-28Bitstream added on 2014-06-13T19:03:11Z : No. of bitstreams: 1 marques_mf_dr_arafcf.pdf: 489556 bytes, checksum: 3a823a4709ec5fb7e7742d4749cdba7f (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A resposta imunológica engloba amplo contexto envolvendo várias células, sendo o macrófago uma das mais importantes na resposta imune-celular. Os macrófagos peritoneais quando ativados liberam mais de cem compostos ao meio extracelular, entre eles os compostos reativos de oxigênio e de nitrogênio, além das citocinas: fator de necrose tumoral-a (TNF-a), interferon-g (IFN-g) e interleucinas (IL-1, 4, 6 e 12). Existem vários estímulos à membrana macrofágica que podem desencadear a liberação de NO, contribuindo para uma ação antimicrobiana, inflamatória, vasodilatadora, neurotransmissora, ou até mesmo de citotoxicidade ou inibição/ativação linfocitária e da agregação de plaquetas. Atualmente há uma forte tendência em se estudar produtos naturais quanto à capacidade de atuação no sistema imunológico. Os medicamentos homeopáticos, conhecidos há mais de 210 anos, visam à ativação das próprias defesas do organismo para eliminar a doença. Estudos baseados em cultivos obtidos de macrófagos podem ser úteis para um melhor entendimento da resposta imunológica. Considerando a importância farmacológica de Arnica montana L. (Asteraceae), planta originária das regiões montanhosas do norte da Europa, este estudo avaliou a liberação de H2O2, NO, TNF-a, IFN-g e IL-1, 4, 6 e 12 no sistema imunológico através de macrófagos peritoneais expostos a preparações fitoterápicas e homeopáticas desta planta. Os resultados mostraram que a Arnica montana L. foi capaz de promover a liberação de NO, TNF-a, IFN-g e IL-6. As preparações homeopáticas também apresentaram um efeito inibitório na produção de NO e TNF-a induzida pelo LPS. A análise dos resultados deste trabalho sugere que a Arnica montana L. pode modular a ativação dos macrófagos. / The immunological response includes wide context involving several cells, being the macrophage one of the most important in the cellular immune response. The peritoneal macrophages when activated they liberate more than a hundred compound to the environment extracellular, among them compound reactive of the oxygen and nitrogen and the tumoral necrosis factor -a (TNF-a), gamma-interferon and interleukynes. The nitric oxide (NO) it is synthesized by several cellular types through isoforms of the enzyme nitric oxide synthase (NOS). The enzyme inducible nitric oxide synthase (iNOS) it produces NO starting from activators mechanisms macrophages. Several incentives to the membrane macrophagical that can unchain the liberation of NO, contributing to actions antibacterial, inflammatory, vasodilatation, neurotransmission, or even of citotoxicity or inhibition/activation of lymphocytes. Now there is a strong tendency in studying natural products with relationship to the capacity of performance in the immune system. Macrophages are involved in many different processes but their main function is to provide a defense line against microbial invasion and tumor cells. Once homeopathic medications are aimed at activation of the body's own defense mechanisms to fight an existing disease, assays based in macrophages culture may be useful to enlighten some questions. Considering the pharmacological importance of Arnica montana L. this study evaluated the action of NO in the immune system through peritoneal macrophages exposed to the preparations of this plant. The results showed that some of the tested preparations were capable to promote the liberation of NO, TNF-a, INF- e IL-6 in cultures of peritoneal macrophages murine. A relationship among the synthesis of NO and TNF- was observed. Analyzing the results, it is suggested that preparations of Arnica montana L. can modulate macrophage activation.
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Imunolocalização do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I) e do fator de crescimento epidermal (EGF) em ovários caninos e seus efeitos sobre a maturação in vitro de oócitos: avaliação nuclear

Cardilli, Diogo José [UNESP] 03 February 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-03Bitstream added on 2014-06-13T20:06:41Z : No. of bitstreams: 1 cardilli_dj_dr_jabo.pdf: 6509698 bytes, checksum: 4403a0fa2e7c324d529f667bac1f88ca (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Facta / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito dos fatores de crescimento IGF-I e EGF sobre a maturação nuclear de oócitos caninos e também imunolocalizar estes fatores em amostras de ovários de cadelas. Foram selecionados 787 complexos cumulus-oocitos (COCs), provenientes de ovários de 34 cadelas, em diferentes fases do ciclo estral, submetidas a ovário-histerectomias eletivas. Os COCs foram dividos em três grupos para diferentes tratamentos, A (TCM 199, n=199), B (TCM 199 + 100ng/mL de EGF, n=208) e C (TCM 199 + 100 ng/mL IGF-1, n=204). Após 96 horas de incubação a 38 °C em atmosfera de 5% de CO2, 50% dos oócitos, desprovidos das células do cumulus, de cada grupo foram corados com Bisbenzimida H33342 (Hoechst) e 50% com 4',6-Diamidino-2-phenylindole (Dapi). A adição de EGF ou de IGF-1 ao meio TCM 199 não foi benéfica à maturação in vitro (MIV) de oócitos de cadelas, e a coloração Hoechst foi mais eficaz para a avaliação dos estágios de maturação nuclear de oócitos de cadelas. Os tratos reprodutivos das 34 cadelas foram coletados, fixados, processados e incluídos em parafina. Os fragmentos de ovários foram cortados, montados em lâmina, desparafinIzados e reidratados. A técnica de Imuno-histoquímica foi realizada utilizando os seguintes anticorpos: Anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem), Anti- IGF-1-pc (Ab-2, Calbiochem). As amostras foram incubadas overnight. O anticorpo primário foi detectado utilizando IgG secundária biotinilada de cabra anti-coelho ou de coelho anti-cabra, com complexo avidina-biotina-peroxidase. A detecção da reação foi feita com o AEC (Vector). A imuno-histoquímica revelou a presença de EGF e do IGF-1 no ovário da cadela. O EGF foi imunolocalizado no citoplasma das células foliculares (CF) e nos oócitos de folículos secundários e terciários e também na parede vascular, nos cordões... / The aim of the present study was to assess the effect of the addition of EGF or IGF-1 to the culture medium TCM 199 on nuclear maturation of canine oocytes and to determine the distribution of these growth factors in the ovary of the bitch. 787 comulus-oocyte complexes (COCs) were sampled during different phases of the oestral cycle from 34 bitches submitted to elective ovariohysterectomy. The COCs were distributed into three groups: A (TCM 199, n= 199); B (TCM 199 + 100ng/ml of EGF, n=208) and; C (TCM 199 + 100ng/ml of IGF-1, n=204). Following 96 hours of incubation at 38 ºC, in sterile atmosphere with 5% CO2, the nuclear maturation stage was evaluated following bisbenzimide 33342 (50%) or 4',6-Diamidino-2-phenylindole staining (50%). The addition of EGF or IGF-1 to the TCM 199 did not favour the IVM of canine oocytes. The bisbenzimide 33342 staining was better than 4',6-Diamidino-2- phenylindole staining in the assessment of nuclear maturation stage of canine oocytes. . Reproductive tracts from 34 bitches at the different phases of the estrous cycle were collected, fixed and processed with paraffin embedding. Sections were cut, mounted, dried, deparaffinized and rehydrated. Immunocytochemistry was performed using a dilution of the following antisera: anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem) and Anti-IGF-1-pc (Ab- 2, Calbiochem ). Samples were incubated overnight. Primary antibody binding was detected using a biotynilated secondary goat-anti-rabbit or rabbit anti-goat IgG with avidin-biotin-peroxidase complexing. The detection reagent was AEC (Vector). Immunohistochemistry revealed the presence of EGF and IGF-1 in the ovary of the bitch. EGF was localized in the cytoplasm, while IGF-1 staining was nuclear. EGF was immunolocalized in the follicular cells (FC) and in... (Complete abstract click electronic access below)
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Pesquisa de anticorpos anti-borrelia e anti-babesia em soro de doadores de sangue

Arão, Cesar Augusto Brandão 06 1900 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2007. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-01-13T17:20:35Z No. of bitstreams: 1 2007_CesarAugustoBrandao.pdf: 1606040 bytes, checksum: 1b55dae1cae3f78adbec4e55331bcf0f (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-01-13T21:51:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_CesarAugustoBrandao.pdf: 1606040 bytes, checksum: 1b55dae1cae3f78adbec4e55331bcf0f (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-13T21:51:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_CesarAugustoBrandao.pdf: 1606040 bytes, checksum: 1b55dae1cae3f78adbec4e55331bcf0f (MD5) Previous issue date: 2007-06 / A doença de Lyme e a babesiose são zoonoses emergentes de importância sócio-econômica para o país, sendo necessária a caracterização epidemiológica e laboratorial. Este trabalho tem como objetivo reconhecer indivíduos portadores assintomáticos através da pesquisa de anticorpos anti-Borrelia burgdorferi pelos métodos de ELISA e Western blotting e anti- Babesia bovis pelo método de ELISA em soro de cento e quinze doadores de sangue sadios do banco de sangue do Hemosul em Campo Grande-MS. Utilizaram-se como substratos antigênicos, sonicados totais da B. burgdorferi sensu stricto (cepa americana G39/40) e da B. bovis. Positividade para anticorpos anti-B. burgdorferi ocorreu em 7,8% das amostras analisadas pelo ELISA. Todos os resultados positivos identificados por esta técnica foram confirmados pelo Western blotting. Para anticorpos anti-Babesia bovis uma prevalência de 10,4% foi verificada. Concomitância dos anticorpos foi observada em dois (1,73%) dos cento e quinze doadores pesquisados. Os resultados obtidos neste estudo são um indicativo da ampla distribuição desses agentes em nossa região e da possibilidade de haver casos humanos sem sintomatologia. Assim, ressaltamos a importância de se realizarem mais estudos clínicolaboratoriais e epidemiológicos em nosso estado, o que possibilitará uma maior compreensão da interação entre essas duas zoonoses em nosso ambiente. ___________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Lyme diseases and babesiosis are emerging zoonosis with socio-economic importance to the country, and it is necessary the laboratorial and epidemiological characterization. This study has the aim of recognizing asymptomatics individuals through the research of anti- Borrelia burgdorferi antibodies using the method of ELISA and Western blotting and anti- Babesia bovis by ELISA in the serum of one hundred and fifteen blood donors of Hemosul in Campo Grande-MS. It has been used as antigen, whole sonicated of B. burgdorferi sensu stricto (american strain G39/40) and from B. bovis. Positivity was observed for the antibodies to Borrelia burgdorferi in 7,8% of the samples analyzed by ELISA. All the positive results identified by this technique were confirmed by Western blotting. For anti-Babesia bovis antibodies a prevalence of 10,4% was verified. Concomitance of the two antibodies was observed in two (1,73%) of the one hundred and fifteen donors researched. The results observed in this study indicate the widespread distribution of these agents in our region and the possibility of existing human cases without symptoms. This way, we stand out the importance of carrying out more clinico-labotarial and epidemiological studies in our State, which will make possible a better understanding of the interaction between these two zoonosis in our environment.
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Modulação da resposta imune do hospedeiro por componentes da parede celular de Cryptococcus neoformans

Caxito, Samyra Mara Coelho 10 March 2017 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-05-11T17:59:48Z No. of bitstreams: 1 2017_SamyraMaraCoelhoCaxito.pdf: 1139297 bytes, checksum: 24f3a0eef6fd020d0c115c27afb54541 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-05-16T16:04:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_SamyraMaraCoelhoCaxito.pdf: 1139297 bytes, checksum: 24f3a0eef6fd020d0c115c27afb54541 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T16:04:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_SamyraMaraCoelhoCaxito.pdf: 1139297 bytes, checksum: 24f3a0eef6fd020d0c115c27afb54541 (MD5) / A incidência de infecções fúngicas sistêmicas vem se elevando com o aumento de situações em que se observa supressão do sistema imune do paciente, tornando-se este, um problema de saúde mundial. Cryptococcus neoformans é um fungo cosmopolita e mundialmente distribuído, que se apresenta como uma levedura encapsulada, presente no ambiente, acometendo, especialmente, pacientes imunodeprimidos e apresentando índice de mortalidade acima de 60%. Embora existam extensivos estudos sobre a estrutura capsular das leveduras do fungo C. neoformans, pouco se sabe sobre a interação deste patógeno com o hospedeiro, particularmente no que diz respeito aos componentes de sua parede celular. Estudos em algumas espécies de fungos vem apontando os componentes presentes na parede destes micro-organismos, como forte imunomodulador durante a interação patógeno-hospedeiro, podendo estes componentes serem empregados em estudos na elaboração de vacinas. Nesse trabalho, foi avaliada a capacidade da fração 1 (F1) extraída da parede celular de diferentes linhagens de C. neoformans em modular a resposta imune do hospedeiro. Inicialmente, foram realizados ensaios in vitro, para avaliar a viabilidade celular de macrófagos de camundongo, empregando diferentes concentrações das frações, extraídas a partir das linhagens de C. neoformans H99, B3501 e da linhagem mutante cap67Δ. Em seguida, foi avaliada a capacidade das fracões em induzir a produção de citocinas nas células do hospedeiro. Os dados mostram que, após 18 horas de interação, as frações das linhagens B3501 e cap67Δ induziram elevados níveis de TNF-α, demonstrando que há uma prévia ativação desses fagócitos sem alterar a viabilidade celular. Além disso, foi avaliado a atividade microbicida e de fagocitose de macrófagos previamente estimulados com essas frações, seguindo com interação com leveduras de C. neoformans. Os dados demonstram que, no intervalo de 24 horas após interação, houve uma diminuição significativa no número de leveduras recuperadas a partir dos macrófagos. Além disso, houve também um aumento significativo no número de leveduras fagocitadas. Nos testes in vivo, usando camundongos fêmeas da linhagem C57Bl/6, as frações foram previamente aplicadas nos animais, e em seguida os animais foram infectados com leveduras de C. neoformans H99. Os resultados mostram um aumento significativo na sobrevida dos animais que receberam o tratamento com as frações 14 em relação aos não tratados. Em conjunto, esses resultados claramente sugerem que os estímulos realizados com a fração F1 da parede de C. neoformans, são capazes de imunomodulador a resposta do hospedeiro, resultando em uma ação protetora contra a infecção a fúngica. Esses resultados abrem margem para possíveis alvos terapêuticos, além de contribuir com os estudos na elaboração de vacinas contra a infecção causada por C. neoformans. / The incidence of systemic fungal infections has been aggravated by the increase in diseases that induce a suppression of the immune system, making it a global health problem. Cryptococcus neoformans is a globally distributed, cosmopolitan fungus that presents as an encapsulated yeast present in the environment, especially affecting immunosuppressed patients and showed a mortality rate above 60%. Although there are extensive studies on the capsular structure, composed especially of polysaccharides involving the yeasts of C. neformans, little is known about the interaction of this pathogen with the host, particularly with respect to the components of its cell wall. Studies in some species of fungi have pointed out the components present in the wall of these microorganisms, as a strong immunomodulator during pathogen-host interaction, and these components can be used in studies in the elaboration of vaccines. In this study the captivity of the different fractions extracted from the cell wall of C. neoformans was evaluated in modulating the immune response of the host. Initially, in vitro assays were performed to assess the cell viability of mouse macrophages cultured with different concentrations of b-glucan fraction from H99, B3501 and a mutant strain cap67Δ strains of C. neoformans. Following, it was investigated the ability of these fractions to induce cytokine production in host cells. The data show that after 18 hours interaction, the fractions of strains B3501 and cap67Δ increased the TNF-α levels, showing that these fractions are able to activate the macrophage response without affecting the cell viability. Moreover, we evaluate the microbicidal and phagocytosis capacity of macrophages, previously stimulated with these fractions, during interaction with C.neoformans yeast. The data showed that after 24 hour of interaction, the number of yeasts recovered from macrophages was significantly decreased. Furthermore, there was a significant increase in the number of yeast phagocytosed. Mice treated with b-glucan fraction previously of C. neoformans infection showed a increased survival compared to the mouse not treatment. Taken together, these results clearly suggest that cell wall components is able to stimulate host immune response, resulting in an increased host immunity. These results open to the new therapeutic possibilities, beyond gives support on adjuvant therapeutic research during C. neoformans infections.
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Identificação de lncRNAs em linfócitos T humano estimulados com anticorpos anti-CD3 recombinantes

Almo, Manuela Maragno do 28 July 2017 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-10-20T19:25:19Z No. of bitstreams: 1 2017_ManuelaMaragnodoAlmo.pdf: 3817901 bytes, checksum: c5848ca9cf270712ed9d10ff3b406472 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-24T12:44:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ManuelaMaragnodoAlmo.pdf: 3817901 bytes, checksum: c5848ca9cf270712ed9d10ff3b406472 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-24T12:44:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ManuelaMaragnodoAlmo.pdf: 3817901 bytes, checksum: c5848ca9cf270712ed9d10ff3b406472 (MD5) Previous issue date: 2017-10-24 / A terapia com anticorpos anti-CD3 pode induzir a imunossupressão e diversos mecanismos foram propostos para explicar tais efeitos. Apesar disso, os mecanismos imunorregulatórios dessas moléculas ainda não foram elucidados. Um dos mecanismos propostos envolve a participação de lncRNAs (RNAs longos não codificadores), que atuam em linfócitos T regulatórios, regulando diversas vias, inclusive aquelas envolvidas na tolerância imunológica. Em trabalhos anteriores do grupo de Imunologia Molecular, células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram cultivadas na presença ou ausência do anticorpo monoclonal OKT3 ou de um fragmento recombinante da sua versão humanizada (Silva et al., 2009). O RNA de células T CD3+ tratadas foram submetidos a sequenciamento de alto desempenho. A partir dos dados obtidos previamente, no presente trabalho, foram identificadas regiões com expressão diferencial sob o tratamento desses anticorpos, que poderiam corresponder a novos lncRNAs. Para uma melhor caracterização desses transcritos, foram extraídos RNAs de linfócitos TCD3+ , em seguida retrotranscritos, clonados e sequenciados pelo método Sanger. Dentre as sequências testadas, foram identificados dois lncRNAs putativos regulados em linfócitos T tratados com anticorpos anti-CD3 humanos. Os níveis desses transcritos foram determinados em ensaios de PCR em tempo real. Análise de similaridades de sequências em bancos de dados, indicam que esses transcritos correspondem a isoformas com alta similaridade aos lncRNAs: GAPLINC e lnc-DC. Ambos apresentaram uma diminuição da expressão nas amostras tratadas com os anticorpos, sugerindo que eles possam estar associados a processos imunomodulatórios. / Anti-CD3 antibody therapy may induce immunosuppression and several mechanisms have been proposed to explain such effects. Despite of that, the immunoregulatory mechanisms of these molecules have not yet been completely elucidated. One of the proposed mechanisms involves the participation of lncRNAs (long non-coding RNAs), which act on regulatory T lymphocytes, regulating several pathways, including those involved in immunological tolerance. In previous work of Molecular Immunoloy Group, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were cultured in the presence or absence of the monoclonal antibody OKT3 or a recombinant fragment of their humanized counterpart (Silva et al., 2009). RNAs from treated and untreated CD3+ T cells were subjected to Next Genereation Sequencing (NGS). This previous work pointed out regions with differential expression in samples treated with the antibodies, which could correspond to new lncRNAs. For a better characterization of these transcripts, RNA was extracted from antibody treated TCD3+ lymphocytes, which were retrotranscribed, cloned and sequenced by the Sanger method. Among the sequences tested, two putative lncRNAs that were regulated on T lymphocytes treated with human anti-CD3 antibodies were identified. The levels of these transcripts were determined in real-time PCR assays. Analysis in databases indicates that these transcripts correspond to isoforms with high similarity to lncRNAs: GAPLINC and lnc-DC. Both were downregulated in samples treated with the antibodies, suggesting that they may be associated with immunomodulatory processes.
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Influência da pentoxifilina na infecção pelo Plasmodium berghei ANKA em camundongos susceptíveis ou resistentes às formas graves da malária : aspectos histopatológicos

Corazza, Danilo 12 February 2015 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-29T17:06:58Z No. of bitstreams: 1 2015_DaniloCorazza_Parcial.pdf: 479104 bytes, checksum: bcf2308e28506da1d7ea87452e96914e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-20T11:42:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_DaniloCorazza_Parcial.pdf: 479104 bytes, checksum: bcf2308e28506da1d7ea87452e96914e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-20T11:42:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_DaniloCorazza_Parcial.pdf: 479104 bytes, checksum: bcf2308e28506da1d7ea87452e96914e (MD5) / A malária ainda é um problema grave para a saúde pública mundial, com bilhões de pessoas vivendo em áreas de risco de infecção, e milhões de pessoas acometidos pela doença, levando a cerca de quase um milhão de mortes anualmente. É uma doença febril aguda e nas formas graves pode apresentar prostração, alteração do estado de consciência, convulsões e edema pulmonar. As manifestações patológicas como o paroxismo febril, malária cerebral e choque, são decorrentes da resposta inflamatória exacerbada, com consequente aumento da adesão de células e o sequestro de eritrócitos principalmente no endotélio das vênulas pós-capilar. A pentoxifilina (PTX) é uma droga com capacidade imunomoduladora, regulando a produção de citocinas inflamatórias como o fator de necrose tumoral (FNT) e com potencial uso para prevenir as formas graves da malária por diminuir a produção do FNT. Este trabalho avaliou a influência da PTX sobre as alterações histopatológicas do cérebro, fígado e pulmão em camundongos susceptíveis ou não as formas graves da malária. Foram estudados camundongos machos com 8 semanas de idade das linhagens C57BL/6, CBA e BALB/c compondo quatro grupos, sendo que dois grupos foram infectados com 106 eritrócitos parasitados com Plasmodium berghei ANKA, tratados a partir do terceiro dia após a infecção, com 8mg/kg/dia de PTX e o outro grupo tratado com NaCl 0,9%. Outros dois grupos não foram infectados porém, seguiram o mesmo tratamento com PTX e NaCl 0,9%. No sexto dia da infecção os camundongos foram sacrificados e após perfusão cardíaca, foram retirados os órgãos (cérebro, fígado e pulmão), e procedido o processamento histológico. As lâminas foram coradas com Hematoxilina-Eosina (HE) e avaliadas em microscopia óptica. Observamos que a PTX foi capaz de diminuir a necrose de neurônios nos modelos CBA e BALB/c, porém, o contrário foi observado no modelo C57BL/6, onde a droga aumentou a necrose de neurônios no cérebro. Observamos também que no córtex cerebral, a PTX aumentou a congestão vascular no modelo C57BL/6, mas diminuiu a congestão vascular nos camundongos CBA e BALB/c. No fígado dos camundongos C57BL/6 e BALB/c dos animais infectados e tratados com a PTX observamos menor número de células de Kupffer com pigmento malárico. No pulmão dos camundongos C57BL/6 observamos aumento da permeabilidade da membrana alvéolo-capilar, que também foi observada nos camundongos CBA e no BALB/c após infecção pelo plasmódio. Contudo, após a administração da PTX, houve redução na congestão vascular. Nossos dados sugerem que as três linhagens de camundongos possuem mecanismos diferentes de resposta em cada órgão, evidenciando a heterogeneidade da influência da droga em camundongos com diferentes bases genéticas, e evidenciando a necessidade de melhor esclarecimento das vias pelas quais a droga age em cada órgão. / Malaria is still a major problem for global public health, with billions of people in contamination risk areas, and millions affected by the disease, leading to around nearly one million deaths annually. It is an acute febrile illness and in severe forms can present prostration, altered state of consciousness, seizures and pulmonary edema. Pathological manifestations, as febrile paroxysm, cerebral malaria and shock, are due to the increased inflammatory response, with consequent increase in cell adhesion and sequestration of erythrocytes mainly in the endothelium of post-capillary venules. Pentoxifylline (PTX) is a drug with immunomodulatory capacity, regulating the production of inflammatory cytokines, such as tumor necrosis factor (TNF), and with a potential use to prevent severe forms of malaria by reducing the production of TNF. This study evaluated the influence of PTX on the histopathological changes in the brain, liver and lung in mice susceptible or not to severe forms of malaria. C57BL/6, CBA and BALB/c male mice (8 weeks old) were studied. They comprised four groups, in which two were infected with 106 Plasmodium berghei ANKA parasitized erythrocytes and treated with PTX (8 mg/kg/day) or 0.9% NaCl from the third day after infection onward. The two other remaining groups were not infected, but followed the same treatment, with PTX or 0.9% NaCl. On the sixth day after infection, mice were sacrificed and underwent to a cardiac perfusion, the organs were removed (brain, liver and lung) and carried to a histological processing. The slides were stained with hematoxylin-eosin (HE) and evaluated by light microscopy. We observed that the PTX was able to decrease neuronal necrosis in CBA and BALB/c mice. However, the opposite was observed in C57BL/6 mice, in which PTX increased the neuronal necrosis in brain. We also observed that in the cerebral cortex, PTX increased vascular congestion in C57BL/6 model, but decreased vascular congestion in CBA and BALB/c mice. In the liver of the C57BL/6 and BALB/c mice of infected animals that were treated with PTX, it was observed fewer Kupffer cells showing malaria pigment. In lungs of C57BL/6 mice, there was an increase in the permeability of the alveolar-capillary membrane, which was also observed in CBA mice after Plasmodium infection. However, after treatment with PTX, there was a reduction in vascular congestion. Our data suggest that the three strains of mice have different mechanisms of response in each organ, showing the heterogeneity of drug influence, and highlighting the need to better understanding of the ways by which the drug acts in each organ from each of these experimental malaria models.
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Efeito de Interleucina-6 sobre a atividade fungicida e produção de citocinas por monócitos humanos, infectados in vitro com cepa virulenta de paracoccidioides brasiliensis

Siqueira, Keila Zaniboni [UNESP] January 2004 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T18:32:16Z : No. of bitstreams: 1 siqueira_kz_me_botfm.pdf: 206406 bytes, checksum: 537429d637477b520782ea075ff9330d (MD5) / O efeito interleucina-6 (IL-6) sobre a atividade fungicida e a produção de citocinas foi avaliado em cultura de monócitos humanos, infectados com cepa virulenta (Pb18) de Paracoccidioides brasiliensis. Monócitos de sangue periférico, obtidos de indivíduos saudáveis, foram pré-incubados por 24h na ausência ou presença de IL-6 recombinante humana e, a seguir, infectados com cepa virulenta Pb18 do fungo durante 4h e 18h na proporção de 50 monócitos para uma célula fúngica. A atividade fungicida de monócitos foi avaliada por plaqueamento das co-culturas em BHI-ágar e determinação da recuperação de fungos viáveis e, a produção de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-a), IL-6 e IL-10 por monócitos foi determinada nos sobrenadantes das culturas por ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados demonstraram que a pré-incubação de monócitos com IL-6 e desafio com Pb18 durante 4h induziu aumento significativo na recuperação fúngica em comparação às culturas controles não-estimuladas com esta citocina. Monócitos infectados com P. brasiliensis, na ausência de IL-6, produziram níveis de TNF-a, IL-6 e IL-10 significativamente maiores após 18h de co-cultivo em comparação aos experimentos de 4h de incubação. O tratamento de monócitos com IL-6 induziu um efeito inibitório na produção de TNF-a e IL-10 por essas células durante a infecção com P. brasiliensis, representado por 79,5% e 75,6% de redução nos níveis de TNF-a e IL-10, respectivamente, após 18h de cultivo. Por outro lado, efeito estimulatório da IL-6 sobre a produção autócrina dessa citocina foi observado nessas culturas e revelado por acréscimo de 84,8% em 4h e 59,4% em 18h de co-cultura. A redução nos níveis de TNF-a e estimulação na produção de IL-6 podem ser responsáveis pelo aumento significante no crescimento do fungo em monócitos humanos, induzido por tratamento prévio com IL-6... / The effect of interleukin-6 (IL-6) on fungicidal activity and cytokine production was evaluated in human monocytes cultures infected with virulent strain (Pb18) of Paracoccidioides brasiliensis. Peripheral blood monocytes obtained from healthy individuals were pre-incubated for 24h with or without human recombinant IL-6, and then challenged with Pb18 by co-culture during 4h and 18h in a ratio of 50:1 monocytes:fungi. Fungicidal activity of monocytes was assessed by viable fungi recovery from co-cultures plating in BHI-agar, and tumor necrosis factor-alpha (TNF-a), IL-6 and IL-10 production by monocytes were determined in culture supernatants by enzyme immunoassay (ELISA). The monocytes pre-incubation with IL-6, and further challenge with Pb18 during 4h led to significant higher fungi recovery when compared to non-treated cocultures. Monocytes infected with P. brasiliensis in the absence of IL-6, produced ? significantly higher levels of TNF-a, IL-6 and IL-10 after 18h of coculture in comparison to experiments of 4h-incubation with the fungus. The pretreatment of monocytes with IL-6 induced an inhibitory effect on TNF-a and IL- 10 production by these cells during 18h of fungus infection, respectively represented by 79.5% and 75.6% reduction in TNF-a and IL-10 levels. On the contrary an autocrine stimulatory effect on IL-6 production was detected in these cultures, revealed by an elevation of 84.8% at 4h and 59.4% at 18h in IL- 6 levels. The reduction in TNF-a levels and stimulation in IL-6 production might be responsible for the significant increase of fungus growth in human monocytes induced by previous treatment with IL-6. Together, the results suggest that IL-6 may exert a modulatory effect on monocyte-P.brasiliensis interaction by inhibiting TNF-a production and promoting the growth of a fungus virulent strain in these cells.
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Efeito de Interleucina-6 sobre a atividade fungicida e produção de citocinas por monócitos humanos, infectados in vitro com cepa virulenta de paracoccidioides brasiliensis /

Siqueira, Keila Zaniboni. January 2004 (has links)
Orientador : Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Resumo: O efeito interleucina-6 (IL-6) sobre a atividade fungicida e a produção de citocinas foi avaliado em cultura de monócitos humanos, infectados com cepa virulenta (Pb18) de Paracoccidioides brasiliensis. Monócitos de sangue periférico, obtidos de indivíduos saudáveis, foram pré-incubados por 24h na ausência ou presença de IL-6 recombinante humana e, a seguir, infectados com cepa virulenta Pb18 do fungo durante 4h e 18h na proporção de 50 monócitos para uma célula fúngica. A atividade fungicida de monócitos foi avaliada por plaqueamento das co-culturas em BHI-ágar e determinação da recuperação de fungos viáveis e, a produção de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-a), IL-6 e IL-10 por monócitos foi determinada nos sobrenadantes das culturas por ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados demonstraram que a pré-incubação de monócitos com IL-6 e desafio com Pb18 durante 4h induziu aumento significativo na recuperação fúngica em comparação às culturas controles não-estimuladas com esta citocina. Monócitos infectados com P. brasiliensis, na ausência de IL-6, produziram níveis de TNF-a, IL-6 e IL-10 significativamente maiores após 18h de co-cultivo em comparação aos experimentos de 4h de incubação. O tratamento de monócitos com IL-6 induziu um efeito inibitório na produção de TNF-a e IL-10 por essas células durante a infecção com P. brasiliensis, representado por 79,5% e 75,6% de redução nos níveis de TNF-a e IL-10, respectivamente, após 18h de cultivo. Por outro lado, efeito estimulatório da IL-6 sobre a produção autócrina dessa citocina foi observado nessas culturas e revelado por acréscimo de 84,8% em 4h e 59,4% em 18h de co-cultura. A redução nos níveis de TNF-a e estimulação na produção de IL-6 podem ser responsáveis pelo aumento significante no crescimento do fungo em monócitos humanos, induzido por tratamento prévio com IL-6... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The effect of interleukin-6 (IL-6) on fungicidal activity and cytokine production was evaluated in human monocytes cultures infected with virulent strain (Pb18) of Paracoccidioides brasiliensis. Peripheral blood monocytes obtained from healthy individuals were pre-incubated for 24h with or without human recombinant IL-6, and then challenged with Pb18 by co-culture during 4h and 18h in a ratio of 50:1 monocytes:fungi. Fungicidal activity of monocytes was assessed by viable fungi recovery from co-cultures plating in BHI-agar, and tumor necrosis factor-alpha (TNF-a), IL-6 and IL-10 production by monocytes were determined in culture supernatants by enzyme immunoassay (ELISA). The monocytes pre-incubation with IL-6, and further challenge with Pb18 during 4h led to significant higher fungi recovery when compared to non-treated cocultures. Monocytes infected with P. brasiliensis in the absence of IL-6, produced ? significantly higher levels of TNF-a, IL-6 and IL-10 after 18h of coculture in comparison to experiments of 4h-incubation with the fungus. The pretreatment of monocytes with IL-6 induced an inhibitory effect on TNF-a and IL- 10 production by these cells during 18h of fungus infection, respectively represented by 79.5% and 75.6% reduction in TNF-a and IL-10 levels. On the contrary an autocrine stimulatory effect on IL-6 production was detected in these cultures, revealed by an elevation of 84.8% at 4h and 59.4% at 18h in IL- 6 levels. The reduction in TNF-a levels and stimulation in IL-6 production might be responsible for the significant increase of fungus growth in human monocytes induced by previous treatment with IL-6. Together, the results suggest that IL-6 may exert a modulatory effect on monocyte-P.brasiliensis interaction by inhibiting TNF-a production and promoting the growth of a fungus virulent strain in these cells. / Mestre
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Imunolocalização do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I) e do fator de crescimento epidermal (EGF) em ovários caninos e seus efeitos sobre a maturação in vitro de oócitos : avaliação nuclear /

Cardilli, Diogo José. January 2012 (has links)
Orientador: Gilson Helio Toniollo / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Kellen de Sousa Oliveira / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Maria Denise Lopes / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito dos fatores de crescimento IGF-I e EGF sobre a maturação nuclear de oócitos caninos e também imunolocalizar estes fatores em amostras de ovários de cadelas. Foram selecionados 787 complexos cumulus-oocitos (COCs), provenientes de ovários de 34 cadelas, em diferentes fases do ciclo estral, submetidas a ovário-histerectomias eletivas. Os COCs foram dividos em três grupos para diferentes tratamentos, A (TCM 199, n=199), B (TCM 199 + 100ng/mL de EGF, n=208) e C (TCM 199 + 100 ng/mL IGF-1, n=204). Após 96 horas de incubação a 38 °C em atmosfera de 5% de CO2, 50% dos oócitos, desprovidos das células do cumulus, de cada grupo foram corados com Bisbenzimida H33342 (Hoechst) e 50% com 4',6-Diamidino-2-phenylindole (Dapi). A adição de EGF ou de IGF-1 ao meio TCM 199 não foi benéfica à maturação in vitro (MIV) de oócitos de cadelas, e a coloração Hoechst foi mais eficaz para a avaliação dos estágios de maturação nuclear de oócitos de cadelas. Os tratos reprodutivos das 34 cadelas foram coletados, fixados, processados e incluídos em parafina. Os fragmentos de ovários foram cortados, montados em lâmina, desparafinIzados e reidratados. A técnica de Imuno-histoquímica foi realizada utilizando os seguintes anticorpos: Anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem), Anti- IGF-1-pc (Ab-2, Calbiochem). As amostras foram incubadas overnight. O anticorpo primário foi detectado utilizando IgG secundária biotinilada de cabra anti-coelho ou de coelho anti-cabra, com complexo avidina-biotina-peroxidase. A detecção da reação foi feita com o AEC (Vector). A imuno-histoquímica revelou a presença de EGF e do IGF-1 no ovário da cadela. O EGF foi imunolocalizado no citoplasma das células foliculares (CF) e nos oócitos de folículos secundários e terciários e também na parede vascular, nos cordões... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to assess the effect of the addition of EGF or IGF-1 to the culture medium TCM 199 on nuclear maturation of canine oocytes and to determine the distribution of these growth factors in the ovary of the bitch. 787 comulus-oocyte complexes (COCs) were sampled during different phases of the oestral cycle from 34 bitches submitted to elective ovariohysterectomy. The COCs were distributed into three groups: A (TCM 199, n= 199); B (TCM 199 + 100ng/ml of EGF, n=208) and; C (TCM 199 + 100ng/ml of IGF-1, n=204). Following 96 hours of incubation at 38 ºC, in sterile atmosphere with 5% CO2, the nuclear maturation stage was evaluated following bisbenzimide 33342 (50%) or 4',6-Diamidino-2-phenylindole staining (50%). The addition of EGF or IGF-1 to the TCM 199 did not favour the IVM of canine oocytes. The bisbenzimide 33342 staining was better than 4',6-Diamidino-2- phenylindole staining in the assessment of nuclear maturation stage of canine oocytes. . Reproductive tracts from 34 bitches at the different phases of the estrous cycle were collected, fixed and processed with paraffin embedding. Sections were cut, mounted, dried, deparaffinized and rehydrated. Immunocytochemistry was performed using a dilution of the following antisera: anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem) and Anti-IGF-1-pc (Ab- 2, Calbiochem ). Samples were incubated overnight. Primary antibody binding was detected using a biotynilated secondary goat-anti-rabbit or rabbit anti-goat IgG with avidin-biotin-peroxidase complexing. The detection reagent was AEC (Vector). Immunohistochemistry revealed the presence of EGF and IGF-1 in the ovary of the bitch. EGF was localized in the cytoplasm, while IGF-1 staining was nuclear. EGF was immunolocalized in the follicular cells (FC) and in... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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O papel do inflamassoma na infecção induzida pelo Cryptococcus neoformans

Saavedra, Pedro Henrique Viana 05 February 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-05-13T13:38:11Z No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueVianaSaavedra.pdf: 1314251 bytes, checksum: ee5b0094f71f46179c6f13bef2a69329 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-05-15T11:34:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueVianaSaavedra.pdf: 1314251 bytes, checksum: ee5b0094f71f46179c6f13bef2a69329 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-15T11:34:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueVianaSaavedra.pdf: 1314251 bytes, checksum: ee5b0094f71f46179c6f13bef2a69329 (MD5) / Cryptococcus neoformans é um fungo encapsulado patogênico humano que afeta principalmente indivíduos imunossuprimidos. Sua cápsula é um dos mais importantes fatores de virulência, e está envolvida com os processos de evasão da resposta imune e disseminação no hospedeiro. Neste trabalho foi investigado a ativação do inflamassoma por C. neoformans e o papel de sua cápsula nesse processo. Observou-se que o mutante acapsular de C. neoformans induziu elevados níveis da secreção de IL-1β e ativação da protease caspase-1. A secreção de IL-1β foi analisada em macrófagos derivados de medula deficientes para as proteínas ASC, caspase-1, NLRP3 e NLRC4, demonstrando que essa secreção depende do inflamassoma NLRP3, mas não de NLRC4. Além disso, os componentes do inflamassoma se mostraram dispensáveis para fagocitose e atividade antifúngica frente a infecção. Os mecanismos envolvidos no processamento de IL-1β foram dependentes de catepsina B frente ao dano lisossomal e sinalização via quinase Syk. Foi demonstrado também que a sinalização por IL-1β não aumenta a atividade antifúngica de macrófagos. No entanto, ela participa na restrição da taxa de infecção por mecanismos desconhecidos. Estes resultados mostram pela primeira vez que C. neoformans ativa o inflamassoma NLRP3 de forma dependente de caspase-1 através da liberação de catepsina B e sinalização via Syk, levando a produção de IL-1β e restrição da taxa de infecção. Adicionalmente, esses dados demonstram que os isolados encapsulados conseguem diminuir a ativação do inflamassoma. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cryptococcus neoformans is an encapsulated human pathogenic fungus that affects primarly immunocompromised individuals. It has a prominent capsule that is an important virulence factor, which is involved in immune response evasion and fungal dissemination. In the present study we investigated whether C. neoformans was able of triggering inflammasome activation and the role of its capsule in this event. The results showed that the acapsular mutant induced high levels of IL-1β secretion and caspase-1 activation. IL-1β -/- -/-secretion induced by C. neoformans was assessed in WT, Asc , Casp1 , -/- -/- Nlrp3 and Nlrc4 bone marrow-derived macrophages, showing IL-1β secretion to be dependent on NLRP3, but independent on NLRC4 inflammasome. In addition, inflammasome components were dispensable for C. neoformans uptake or killing. The mechanisms underlying IL-1β processing and release were dependent on cathepsin B release following lysosomal destabilization and Syk tirosine kinase signaling. We also demonstrate that IL- 1β signaling is not required to restrict intracellular yeast, but limited the rate of infection by an unknown mechanism. Together, our data show for the first time that acapsular C. neoformans activates the NLRP3 inflammasome and IL-1β secretion in a caspase-1 dependent manner and that the mechanisms involved in this event rely on cathepsin B released during lysosomal damage and Syk signaling, leading to restriction of infection rate. Furthermore, our results show that encapsulated C. neoformans is able to dimish inflammasome activation.

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