O Paracoccidioides brasiliensis (Pb) é o agente etiológico causador da Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica endêmica de maior prevalência na America Latina e no Brasil. Através do estudo de modelo experimental, foi possível estabelecer uma comparação e classificar diversas linhagens de camundongos isogênicos infectados com Pb como resistentes e susceptíveis e o entendimento dos mecanismos de resposta imune envolvidos na doença. Uma vez infectado, o sistema imune do hospedeiro se dispõe de diversos mecanismos, tanto da imunidade inata quanto da adaptativa para conter a infecção. Os fagócitos, como macrófagos e polimorfonucleares neutrófilos (PMN), desempenham um papel central na resposta imune contra o fungo. Além de ser o elo entre imunidade inata e adquirida, os PMN são eficazes na defesa do hospedeiro contra o Pb, pois estas células ficam restritas ao local da lesão causada pelo fungo. Nesta perspectiva, a terapia utilizando laser terapia de baixa potência (LLLT) com raios infravermelhos surge como um método capaz de estimular a atividade desempenhada pelas células imunes, como PMN, sem alterar sua função, por ser descrito como um método modulador de células imunológicas. A LLLT foi aplicada com uma potência de 50mW e comprimento de onde de 780nm em dois pontos de cada pata traseira de camundongos infectados com Pb18 ou inoculados com Zymosan pelo método de bolsa de ar subcutâneo. No grupo de animais irradiados e não irradiados, foram avaliados o efeito da LLLT in vivo na produção de proteínas totais, capacidade de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e capacidade fungicida de PMN recém-isolados do local de infecção. Os resultados demonstraram que a LLLT ativa os PMNs, pois nos grupos de camundongos irradiados independentemente do estímulo para a inflamação, houve aumento na produção de proteínas totais, na capacidade fungicida e produção de ERO, em comparação com o grupo controle. Apesar do laser ter diminuído o número total de PMN colhidos de camundongos infectados com Pb18, a viabilidade destas células de todos os grupos experimentais permaneceram altamente viáveis. Os resultados demonstraram que a LLLT ativa os PMNs, o que resultou numa maior capacidade fungicida, sugerindo que o laser possa ser utilizado como terapia adicional no tratamento da PCM. / Paracoccidioides brasiliensis (Pb) is the etiologic agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), an endemic systemic mycosis most prevalent in Latin America and Brazil. Through the study of experimental model, it was possible to make a comparison and classify different strains of inbred mice infected with Pb as resistant or susceptible and the understanding the mechanisms of immune response involved in the disease. Once infected, the host immune system has several mechanisms both the innate to adaptive immunity to contain the infection. Phagocytes, such as macrophages and polymorphonuclear neutrophils (PMN) play a central role in the immune response against the fungus. Besides being the link between innate and acquired immunity, the PMN are effective in host defense against Pb because are restricted to the site of injury caused by fungus. In this perspective, therapy using Low Level Light Therapy (LLLT) with infrared laser in vivo emerges as a method to stimulate the activity stimulated by immune cells such as PMN, without changing its function, to be described as a method of modulating immune cells. LLLt was applied ate two points of paw hind mouse, a power of 50 mW and a wavelength of 780nm, mice infected with Pb18 or inoculated with Zymosan by method air pouch. On irradiated and non-irradiated animals, we assessed the effect of LLLT in vivo production of total protein production capacity of reactive oxygen species (ERO) and freshly isolated PMN fungicidal capacity of the site of infection. The results showed that the active LLLT PMNs, for groups of irradiated mice regardless of the stimulus for inflammation, there was an increase in the production of total proteins, the ability fungicide and ROS production compared with the control group. Although the laser has decreased the total number of PMNs collected from mice infected with Pb18, the viability of the cells in all experimental groups remained highly viable. The results showed that the active LLLT PMNs, resulting in a greater capacity fungicide, suggesting that the laser can be used as adjunctive therapy in the treatment of PCM. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A imunidade inata mostra-se importante na defesa do hospedeiro contra a infecção por fungos, e dentro desse contexto macrófagos e neutrófilos (PMN) desempenham papel central na paracoccidioidomicose. O tratamento desta doença inclui o uso de antifúngicos que, além do prolongado tempo de administração, podem ter diversos efeitos colaterais. A laserterapia de baixa potência (LLLT- low level laser therapy) vem sendo utlizada como tratamento adjuvante para muitas enfermidades, e já foi demonstrado seu efeito ativador em neutrófilos, se fazendo necessário compreender melhor os mecanismos imunológicos envolvidos nesse processo. Neste trabalho avaliamos os efeitos da LLLT aplicada in vivo nas patas traseiras de camundongos, infectados pela via ―air pouch‖ subcutânea com a cepa virulenta do P. brasiliensis Pb18 ou a cepa de baixa virulência Pb265, visando atingir células em formação na medula. Grupos de animais não irradiados foram utilizados como controle. Após 8 dias de infecção as células da ―air pouch‖ foram coletadas e analisadas quanto ao número, concentração proteica, liberação de espécies reativas de oxigênio (ERO), atividade mitocondrial de PMN e perfil de migração e secreção das citocinas (GM-CSF, IFN- γ, IL-12, IL-4, IL-10 e IL-17) pelo exsudato celular. O tratamento de animais com LLLT aumentou a atividade mitocondrial, o conteúdo de proteínas e a liberação de ERO por parte dos PMN e diminuiu a secreção da IL-10 pelas células do exsudato na infecção com a cepa virulenta Pb18. Por sua vez, a infecção com a cepa de baixa virulência Pb265 também levou a um aumento na atividade mitocondrial, mas houve diminuição no conteúdo de proteínas e a liberação de ERO foi semelhante ao controle não irradiado. Não foi observada diferença na secreção das citocinas GM-CSF, IFN-γ, IL-12, IL-4 e IL-17 pelas células do exsudato estimuladas por ambas às cepas. Quanto à migração celular, os PMN constituem o principal tipo celular encontrado no local do inóculo, seguido pelos linfócitos e monócitos. O número de PMN foi diminuído no tratamento com LLLT quando o estímulo foi o Pb18 e aumentado quando foi o Pb265. Para os linfócitos ocorreu o inverso, no grupo estimulado com Pb18 o laser atuou aumentando esse tipo celular, e diminuindo quando o estímulo foi o Pb265. Já para os monócitos não houve alteração quando o estimulo foi o Pb18 e houve uma diminuição quando o estímulo foi o Pb265 no grupo tratado com LLLT. Os resultados sugerem que o tratamento com LLLT confere um potencial fungicida aos neutrófilos e uma maior resolução da infecção causada pela cepa virulenta Pb18. / Innate immunity is an important component of host defense against fungi, and in this context machophages and neutrophils (PMN) play a central role in paracoccidioidomycosis. The treatment of this disease includes the use of antifungals, which in addition to the prolonged administration time needed may cause many side effects. Low level laser therapy (LLLT) has been used as an adjuvant treatment for many ailments and its modulating effect on neutrophils has already been demonstrated; however it is necessary to better understand the mechanisms involved in this process. In this work, we evaluated the effects of LLLT applied ―in vivo‖ at the hind paws in mice, aiming the bone marrow. These mice were infected in the subcutaneous air pouch with Pb18 or Pb265 P. brasiliensis isolates. Unirradiated animals were used as controls. After 8 days of infection the cells of air pouch were collected and analyzed for the number, protein concentration and release of ROS, mitochondrial activity of PMN and migration profile and secretion of cytokines (GM-CSF, IFN-γ, IL-12, IL- 4, IL-10 and IL-17) by the cells present in the exudate. LLLT-treated animals showed increased mitochondrial activity, protein content and release of ROS by PMN and in the number of cells and decreased the secretion of IL-10 exudate cells obtained after inoculation with the virulent strain Pb18. In turn, the infection with the low virulence strain Pb265 also led to an increase in mitochondrial activity, but there was a decrease in protein concentration and the release of ROS was similar to that of the unirradiated controls.. No differences were observed in the secretion of the GM-CSF, IFN-γ, IL-12, IL-4 and IL-17 cytokines by exudate cells stimulated by any of the strains. Regarding cell migration, PMN are the main cell type found at the inoculum site, followed by lymphocytes and monocytes. The number of PMN was decreased in the treatment with LLLT when the stimulus was Pb18 and increased when it was Pb265. For the lymphocytes the reverse occurred, in the group stimulated with Pb18 the laser acted increasing this cellular type, and decreasing when the stimulus was the Pb265. For monocytes, there was no change when the stimulus was Pb18 and there was a decrease when the stimulus was Pb265 in the group treated with LLLT. The results suggest that treatment with LLLT elicits a fungicidal activity to the PMN and higher resolution of the infection caused by the virulent Pb18 strain. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A Via Alternativa é a principal via de ativação do sistema complemento (SC), sendo o Fator H (FH) um de seus principais reguladores. No presente estudo, nós investigamos os mecanismos moleculares pelo qual o paciente com a mutação Arg127His no FH possui deficiência do SC. Para isto, utilizamos fibroblastos de paciente e individuo normal estimulados com IFN-<font face=\"Symbol\">g e verificamos que as células do paciente eram capazes de produzir FH, contudo a maior parte das proteínas estava retida no retículo endoplasmático (RE). Em paralelo, transfectamos células Cos-7 com plasmídeos contendo a mutação CG453T<font face=\"Symbol\">&#174; CA453T e observamos que a mutação foi responsável pelo retardo na secreção de FH. Apesar da mutação reduzir a secreção de FH, observamos que a capacidade de FH atuar como co-factor não foi afetada. Assim, avaliamos se o uso de chaperonas químicas poderia induzir a secreção da proteína e observamos que houve aumento na secreção de FH nos fibroblastos. Desta forma, propomos o uso desses fármacos como alternativa de tratamento para melhorar a sobrevida do paciente. / Factor H (FH) is one of the most important regulatory proteins of the alternative pathway of the complement system (CS). In this study, we investigated the consequences of FH Arg127His mutation to the secretion ratio of this protein by skin fibroblasts in vitro. We stimulated the FH synthesis from patient and normal control with IFN<font face=\"Symbol\">g when we observed that the patient cells were able to synthetize FH, however this mutant protein was mainly retained at the endoplasmic reticulum. In parallel, we transfected Cos-7 cells with plasmids containing CG453T<font face=\"Symbol\">&#174; CA453T mutation and observed that the mutation was responsible for the delay in the FH secretion. Although the mutation reduced the FH secretion, we observed that the FH function was not affected. Thus, we evaluated whether the treatment with chemical chaperones could release FH to the culture supernant. We observed that patients fibroblasts treated increased the secretion of FH. In conclusion, we suggest the use of these chemical chaperones as a potential alternative therapeutic to improve the patients survival.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-04-25T12:58:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177092 bytes, checksum: 246c209ae17c914f543ab3f722afaf0d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-25T12:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177092 bytes, checksum: 246c209ae17c914f543ab3f722afaf0d (MD5) Previous issue date: 2018-02-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A doença de Chagas é causada pelo protozoário intracelular obrigatório Trypanosoma cruzi, e transmitido a humanos e animais vertebrados através do contato de uma solução de continuidade da pele com fezes de insetos triatomíneos infectados. Atualmente, a doença afeta aproximadamente 16 milhões de pessoas em todo o mundo. Somente duas drogas estão disponíveis no mercado para o tratamento de doentes: Benzonidazol e Nifurtimox, no entanto estas apresentam diversos efeitos colaterais, são contra-indicadas a pacientes imunossuprimidos e são eficientes apenas na fase aguda da doença. Levando-se em consideração a eficácia limitada e toxicidade das drogas disponíveis, o desenvolvimento de uma estratégia de vacinação representa uma alternativa para o controle desta doença. Neste sentido, nosso objetivo foi avaliar a resposta imune induzida pela vacinação utilizando a estratégia vacinal “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 de T. cruzi, em camundongos BALB/c. Os resultados indicaram que a imunização com o “prime-boost”, induziu produção de níveis semelhantes tanto de IgG1 quanto de IgG2a, e embora o grupo imunizado com três doses da rNTPDase-1 tenha produzido níveis mais elevados de anticorpos precocemente, quando a avaliação foi feita 15 dias após a última imunização, verificamos que esses níveis eram semelhantes para ambos os grupos imunizados, sendo observada produção mista desses isótipos. Também foi observado, para o grupo ”prime-boost ”, aumento significativo na produção de citocina Th1 (TNF-α) e da quimiocina MCP-1. Avaliando o perfil de células T, verificamos que os animais vacinados seguindo esse mesmo protocolo apresentaram um aumento significativo na frequência de linfócitos T CD8 (CD3 + CD8 + ), além de aumentar de forma significativa o percentual de células T CD4 e CD8 com fenótipo de memória (CD44 high CD62L), quando comparado ao grupo que recebeu três doses da rNTPDase-1 e também o grupo inoculado somente com PBS (controle). Após o desafio, observamos que a imunização tanto com a rNTPDase-1 quando com o “prime- boost” foram eficazes em reduzir a carga parasitária presente no tecido cardíaco dos animais vacinados em comparação ao grupo controle, no entanto a carga parasitária presente no grupo “prime-boost” era inferior quando comparada ao grupo imunizado somente com a rNTPDase-1. A imunização utilizando esses dois protocolos, também resultou em 100% da sobrevivência quando comparados ao grupo controle, onde 50% dos animais haviam morrido durante o período experimental. Diante dos dados observados, sugerimos que a imunização seguindo a estratégia vacinal “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 de T. cruzi, além de induzir polarização da resposta imune para o tipo Th1, também resultou em melhora na proteção. Sendo assim, imunização seguindo a estratégia vacinal “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 de T. cruzi pode ser vista como promissora no controle da doença de Chagas. / Chagas disease is caused by the required intracellular protozoan Trypanosoma cruzi, transmitted to humans and vertebrates animals through of contacto of a continuity solution skin with feces of infected triatomine insects. The disease currently affects approximately 16 million people worldwide. Only two drugs are commercially available for the treatment of patients, such as Benzonidazole and Nifurtimox, however, they have several side effects, are not indicated in immunosuppressed patients and are efficient only in the acute phase of the disease. Due to the limited efficacy and toxicity of the available drugs, the development of a vaccination strategy represents an alternative for the control of this disease. In this regard, our objective was to study the immune response induced by the vaccination using “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 de T. cruzi, in mice BALB/c. Our results indicated that immunization with prime-boost induced production of similar levels of IgG1 and IgG2a, and although the group immunized with rNTPDase-1 produced higher levels of antibodies at the immunization intervals when the evaluation was done 15 days later the last immunization, we check that these levels were similar for both immunized, being observed mixed production of these isotypes. We also observed a significant increase in the production of Th1 cytokine (TNF-α) and chemokine MCP-1 in the prime-boost group, and the T-cell profile showed that the animals vaccinated following the same protocol had a significant increase in the frequency of CD8 T lymphocytes (CD3 + CD8 + ), in addition to significantly increasing the percentage of CD4 and CD8 T cells with memory phenotype (CD44 high CD62L) when compared to the rNTPDase-1 group and also the group inoculated only with PBS (control). After the challenge, we observed that immunization with NTPDase-1 was effective in reducing the level of parasite present in the cardiac tissue of the vaccinated animals compared to the control group, however the parasite level present in the prime-boost group was lower when compared to the group immunized only with rNTPDase-1. Immunization using these two protocols also resulted in 100% survival when compared to the control group, where 50% of the animals died during the experimental period. The observed data, suggest that immunization following “prime-boost” heterólogo DNA/NTPDase-1 of T. cruzi strategy, induced polarization of the Th1-type immune response, also resulted in improved protection. Thus, immunization following the this strategy can be seen as promising in the control of Chagas' disease.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-03Bitstream added on 2014-06-13T20:40:53Z : No. of bitstreams: 1 jacomini_dlj_dr_rcla_parcial.pdf: 158359 bytes, checksum: 5b3ccdcc2d04ce3c969f5033ea58d88b (MD5) Bitstreams deleted on 2015-05-28T14:25:07Z: jacomini_dlj_dr_rcla_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-05-28T14:26:12Z : No. of bitstreams: 1 000713709.pdf: 1594949 bytes, checksum: 3eda36f23e8872cc034c5b89501ce98a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A vespa social Polybia paulista tem sido muito estudada nos campos da bioquímica, proteômica e imunologia pelas suas características de habitat, composição de seu veneno e pelas conseqüencias dos acidentes decorrentes de suas ferroadas. O cDNA de hialuronidase (GI: 302201582), um dos principais alérgenos desse veneno, foi clonado em vetores de expressão - pET-28a e pPICZA - em bactéria Escherichia coli DE3 (BL21) e em levedura Pichia pastoris, respectivamente. A proteína Hyal recombinante (Pp-Hyal-rec) de bactéria foi expressa em corpúsculos de inclusão, enquanto que a de levedura na forma solúvel. Ambas foram purificadas por cromatografia de afinidade em resina Ni2+ (Ni-NTA-Agarose). A proteína nativa de Hyal (Pp-Hyal-nat) também foi obtida e purificada até a homogeneidade por meio de cromatografia de troca catiônica em coluna Hiprep FF CM, acoplado a um sistema de Akta FPLC, e as análises realizadas por espectrometria de massa em MALDI ToF/ToF-MS. Anticorpos policlonais foram produzidos em camundongos BALB/c contra a Pp-Hyal-nat e a Pp-Hyal-rec de bactéria, demonstrando alta especificidade nos testes de imunoblotting realizados. Estes alérgenos foram avaliados quanto ao reconhecimento de imunoglobulina E (IgE) Pp-Hyal-específico no soro de pacientes sabidamente alérgicos ao veneno desta vespa. Os soros imunes foram capazes de reconhecer especificamente, em maior intensidade as bandas correspondentes à proteína Pp-Hyal-rec de bactéria (43 kDa) e a Pp-Hyal-rec de levedura (37 kDa) em relação ao alérgeno Pp-Hyal-nat (39 kDa). No extrato de veneno bruto de P. paulista, os soros reconheceram outras proteínas provavelmente correspondentes aos demais alérgenos do veneno, tais como Fosfolipase (37 kDa), Antígeno 5 (25 kDa), e proteases. Os dados aqui obtidos com ambos... / The social wasp Polybia paulista has been well studied in fields of biochemistry, proteomics and immunology due to its habitat characteristics, venom composition and the consequences of accidents arising from their stings. The hyaluronidase cDNA (GI: 302201582), one of the major venom allergens, was cloned into expression vectors - pET-28a and pPICZA - in Escherichia coli DE3 (BL21) and yeast Pichia pastoris, respectively. The recombinant protein Hyal (Pp-Hyal-rec) of bacteria was expressed in inclusion corpuscles, whereas the yeast in soluble form. Both were purified by affinity chromatography on Ni2+ (Ni-NTA-Agarose) resin. The native protein Hyal (Pp-Hyal-nat) was also obtained and purified to homogeneity by cation exchange chromatography on Hiprep CM FF column, to an Akta FPLC coupled system, and the analysis performed by mass spectrometry MALDI ToF / ToF-MS. Polyclonal antibodies were produced in BALB/c mice against Pp-Hyal-nat and Pp-Hyal-rec from bacteria, demonstrating an high specificity in the immunoblotting tests performed. These allergens were evaluated for recognition of immunoglobulin E (IgE) Pp-Hyal-specific in serum from patients known to be allergic to the venom of this wasp. The immune sera were able to recognize specifically in a higher intensity the bands corresponding to protein Pp-Hyal-rec of bacteria (43 kDa) and Pp-Hyal-rec of yeast (37 kDa) in relation to the allergen Pp-Hyal-nat (39 kDa). In the P. paulista crude venom extract, all sera recognized other proteins probably corresponding to other venom allergens, such as phospholipase (37 kD), antigen 5 (25 kDa), and protease. The data obtained here with both recombinant allergens strongly suggest the possibility of using... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Márcia Regina Brochetto Braga / Banca: Ricardo de Lima Zollner / Banca: Susana Margarida Gomes Moreira / Banca: Mario Sergio Palma / Banca: Karen Cristiane Martinez de Moraes / Resumo: A vespa social Polybia paulista tem sido muito estudada nos campos da bioquímica, proteômica e imunologia pelas suas características de habitat, composição de seu veneno e pelas conseqüencias dos acidentes decorrentes de suas ferroadas. O cDNA de hialuronidase (GI: 302201582), um dos principais alérgenos desse veneno, foi clonado em vetores de expressão - pET-28a e pPICZA - em bactéria Escherichia coli DE3 (BL21) e em levedura Pichia pastoris, respectivamente. A proteína Hyal recombinante (Pp-Hyal-rec) de bactéria foi expressa em corpúsculos de inclusão, enquanto que a de levedura na forma solúvel. Ambas foram purificadas por cromatografia de afinidade em resina Ni2+ (Ni-NTA-Agarose). A proteína nativa de Hyal (Pp-Hyal-nat) também foi obtida e purificada até a homogeneidade por meio de cromatografia de troca catiônica em coluna Hiprep FF CM, acoplado a um sistema de Akta FPLC, e as análises realizadas por espectrometria de massa em MALDI ToF/ToF-MS. Anticorpos policlonais foram produzidos em camundongos BALB/c contra a Pp-Hyal-nat e a Pp-Hyal-rec de bactéria, demonstrando alta especificidade nos testes de imunoblotting realizados. Estes alérgenos foram avaliados quanto ao reconhecimento de imunoglobulina E (IgE) Pp-Hyal-específico no soro de pacientes sabidamente alérgicos ao veneno desta vespa. Os soros imunes foram capazes de reconhecer especificamente, em maior intensidade as bandas correspondentes à proteína Pp-Hyal-rec de bactéria (43 kDa) e a Pp-Hyal-rec de levedura (37 kDa) em relação ao alérgeno Pp-Hyal-nat (39 kDa). No extrato de veneno bruto de P. paulista, os soros reconheceram outras proteínas provavelmente correspondentes aos demais alérgenos do veneno, tais como Fosfolipase (37 kDa), Antígeno 5 (25 kDa), e proteases. Os dados aqui obtidos com ambos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The social wasp Polybia paulista has been well studied in fields of biochemistry, proteomics and immunology due to its habitat characteristics, venom composition and the consequences of accidents arising from their stings. The hyaluronidase cDNA (GI: 302201582), one of the major venom allergens, was cloned into expression vectors - pET-28a and pPICZA - in Escherichia coli DE3 (BL21) and yeast Pichia pastoris, respectively. The recombinant protein Hyal (Pp-Hyal-rec) of bacteria was expressed in inclusion corpuscles, whereas the yeast in soluble form. Both were purified by affinity chromatography on Ni2+ (Ni-NTA-Agarose) resin. The native protein Hyal (Pp-Hyal-nat) was also obtained and purified to homogeneity by cation exchange chromatography on Hiprep CM FF column, to an Akta FPLC coupled system, and the analysis performed by mass spectrometry MALDI ToF / ToF-MS. Polyclonal antibodies were produced in BALB/c mice against Pp-Hyal-nat and Pp-Hyal-rec from bacteria, demonstrating an high specificity in the immunoblotting tests performed. These allergens were evaluated for recognition of immunoglobulin E (IgE) Pp-Hyal-specific in serum from patients known to be allergic to the venom of this wasp. The immune sera were able to recognize specifically in a higher intensity the bands corresponding to protein Pp-Hyal-rec of bacteria (43 kDa) and Pp-Hyal-rec of yeast (37 kDa) in relation to the allergen Pp-Hyal-nat (39 kDa). In the P. paulista crude venom extract, all sera recognized other proteins probably corresponding to other venom allergens, such as phospholipase (37 kD), antigen 5 (25 kDa), and protease. The data obtained here with both recombinant allergens strongly suggest the possibility of using... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-29T12:49:03Z No. of bitstreams: 2 Tavares, Camila-2013-dissertação.pdf: 1334667 bytes, checksum: 6be9186272c92ec6c55a5dd1f0d6e0f1 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-29T15:10:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tavares, Camila-2013-dissertação.pdf: 1334667 bytes, checksum: 6be9186272c92ec6c55a5dd1f0d6e0f1 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-29T15:10:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tavares, Camila-2013-dissertação.pdf: 1334667 bytes, checksum: 6be9186272c92ec6c55a5dd1f0d6e0f1 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Tuberculosis (TB) remains a serious global public health problem, being the main cause of deaths in patients with the acquired immunodeficiency syndrome, and the third cause of death by infectious diseases throughout the world. This situation is surprising because it is a disease that if treated properly displays high rates of healing. It is therefore important to characterize these patients to identify target populations for specific measures seeking to reduce TB deaths. We performed a retrospective descriptive study to analyze the cases of TB deaths in a State public hospital, reference for treatment of infectious diseases, located in the Central-West region of Brazil, in the period of January 1st, 2008 to December 31th, 2009. There were 283 diagnosed and reported cases of TB between 2008 and 2009, and 39 recorded deaths occurred, resulting in a lethality index of 14%. Mean age of 42 years and a median age of 37 years. Pulmonary TB was the most common form of TB (51.3% of the patients). Of the 39 TB patients who died, 56.4% (n = 22) were co-infected with HIV. The main immediate causes of death were acute respiratory failure (n = 12) and sepsis (n =8). Anemia and hypoalbuminemia were prevalent in this group, and 27 patients required mechanical ventilation. This study found that hospitalized patients who died had the following characteristics: bilateral pulmonary disease, low levels of hemoglobin and hematocrit, albumin, and those co-infected with HIV that has been admitted to the ICU required MV. Prospective studies aiming to analyze the risk factors for death from TB are needed to better understand this process. / A tuberculose (TB) continua a ser um grave problema de saúde pública mundial, sendo a principal causa de morte em pacientes com a síndrome da imunodeficiência adquirida, ea terceira causa de morte por doenças infecciosas em todo o mundo. Esta situação é surpreendente uma vez que é uma doença que se tratada adequadamente apresenta elevadas taxas de cura. Por isso, é importante caracterizar esses pacientes para identificar populações-alvo de medidas específicas visando reduzir mortes por tuberculose. Foi realizado um estudo descritivo e retrospectivo para analisar os casos de mortes por tuberculose em um hospital público do Estado, referência para o tratamento de doenças infecciosas, localizado na região Centro-Oeste do Brasil, no período de 01 de janeiro de 2008 a 31 de dezembro de 2009. Houve 283 casos diagnosticados e notificados de tuberculose entre 2008 e 2009 com 39 mortes, resultando em um índice de letalidade de 13,8%. A média de idade de 42 anos e uma média de idade de 37 anos. A TB pulmonar foi aforma mais comum da doença (51,3% dos pacientes). Dos 39 pacientes que morreram de tuberculose, 56,4% (n = 22) foram coinfectados com HIV. As principais causas imediatas de óbito foram insuficiência respiratória aguda (n = 12) e sepse (n = 8). Anemia e hipoalbuminemia foram prevalentes no grupo, e 27 pacientes necessitaram de ventilação mecânica. Este estudo identificou que os pacientes internados que evoluíram para o óbito tinham as seguintes características: doença pulmonar bilateral, baixos níveis de hemoglobina e hematócrito, albumina, e a maioria dos co-infectados com HIV com admissão na UTI e ventilação mecânica(VM). Estudos prospectivos com o objetivo de analisar os fatores de risco para morte por tuberculose são necessários para entender melhor este processo.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-13T17:29:54Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Flávia.pdf: 1128860 bytes, checksum: 42e7e0ff6c678d2edae8e8d9c7311c94 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-03-23T13:26:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Flávia.pdf: 1128860 bytes, checksum: 42e7e0ff6c678d2edae8e8d9c7311c94 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T13:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Flávia.pdf: 1128860 bytes, checksum: 42e7e0ff6c678d2edae8e8d9c7311c94 (MD5) / FAPESB / Introdução: Têm-se debatido o papel de microrganismos na imunomodulação de doenças alérgicas atópicas cuja prevalência tem aumentado. A Micobactéria emerge, então, como um potencial agente imunomodulador. Objetivo: Identificar os perfis de citocinas induzidos pelo extrato de Mycobacterium bovis e pelo PPD e como elas são induzidas em adolescentes atópicos e não atópicos de Salvador, Bahia. Metodologia: O estudo utilizou amostra de conveniência de 55 indivíduos cujo sangue periférico coletado fora utilizado no cultivo de sangue total. As células foram estimuladas com 5μg do extrato de M. bovis ou 5μg do PPD. Utilizou-se o Multiplex para verificar o perfil de citocinas (IFNγ, IL-10, TNFα, IL-13, IL-5 e IL-17) induzido em 24h. A atopia foi determinada através da presença de IgE acima de 0,7 kU/mL para pelo menos um alérgeno (Blomia tropicalis, Dermatophagoides pteronissinus, Blatella germanica e Periplameta americana). A amostra foi dicotomizada em respondedor e não respondedor com base no limite mínimo de detecção do kit para cada citocina e o teste Exato de Fisher foi aplicado. Resultados: O estímulo com PPD e com extrato induziu mudanças significativas nas frequências de respondedores à IL-5, IL-13 e IL- 17, e à IL-5, IL-13, IL-17 e IFNγ, respectivamente. 97,7% dos indivíduos foram produtores de IL-10 em resposta ao extrato. Os compostos não induziram alterações significativas nas frequências de respondedores entre os grupos de atopia. Conclusão: As dosagens de citocinas serão finalizadas, incluindo-se a do sobrenadante de 120h, permitindo a aplicação de teste estatístico com maior poder para verificação dos efeitos dos compostos utilizados / Introduction: The role of microrganisms in immunomodulation of atopic allergic diseases whose prevalence has increased has been discussed. Mycobacteria emerges as a potential immunomodulatory agent. Objective: Identify the cytokine profile inducede by Mycobacterium bovis extract and PPD and how they are induced in adolescentes atopic and non-atopic from Salvador, Bahia. Methodology: This study used a convenience sample of 55 individuals. Pefipheral blood samples were used in the whole blood culture. The cells where stimulated with 5μg of M. bovis extract or 5μg of PPD. Multiplex was used to verify cytokine profile (IFNγ, IL-10, TNFα, IL-13, IL-5 e IL-17) induced in 24h. Atopy was determined by the presence of IgE above 0.7 kU / mL for at least one allergen (Blomia tropicalis, Dermatophagoides pteronissinus, Blatella germanica e Periplameta americana). The sample was dichotomized into responder and non-responder based on the minimum limit of kit detection for each cytokine and Fisher's Exact Test was applied. Results: The stimulation with PPD and with the extract induced significant changes in the frequency of responders to IL-5, IL- 13 and IL-17, and the frequency of responders to IL-5, IL-13, IL-17 and IFNγ, respectively. 97,7% of subjects were producers of IL-10 in response to the extract. The compounds did not induce significant changes in the frequency of responders between atopy groups. Conclusion: Cytokines dosages will be finalized including the 120h supernatant, allowing the application of statistical analysis with the largest verisimilitude as the power and verify the effects of these compounds used.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-10-24T17:23:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_PedroAugustoCarvalhoCosta.pdf: 2613947 bytes, checksum: 08fad24a8075a76fe3f727816f49fdb0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-24T17:23:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_PedroAugustoCarvalhoCosta.pdf: 2613947 bytes, checksum: 08fad24a8075a76fe3f727816f49fdb0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou / No Brasil a malária ainda é considerada um grande problema de saúde pública. Embora o número de casos de malária esteja diminuindo, a incidência foi maior que 300.000 casos nos últimos dois anos. Destes casos, o Plasmodium vivaxfoi considerado o principal agente causador, com 90% de incidência. A resposta imune adaptativa, com o auxílio da imunidade inata, tem a função de superar as estratégias impostas pelos agentes infecciosos, levando ao controle da infecção. A ativação de células T envolve além da sinalização através do receptor de célula T (TCR), sinalização secundária desencadeada por moléculas reguladoras. A combinação das interações mediadas por estes regula a extensão, qualidade e duração da ativação de células T e, portanto, influenciam significativamente no curso das respostas imunes em questão. O objetivo desse trabalho é avaliar o fenótipo de células T de pacientes infectados pelo P. vivax com o foco na expressão de moléculas reguladoras como morte programada-1 (PD-1), co-estimulador induzível de células T (ICOS), antígeno 4 associado ao linfócito T citotóxico (CTLA-4), domínios de mucina e imunoglobulina de célula T (TIM-3) e gene 3 de ativação linfocitária (LAG-3). Células mononucleares do sangue periférico foram coletadas de pacientes infectados pelo P. vivax em Porto Velho, RO. Os linfócitos foram analisados por citometria de fluxo. Os resultados demonstram um aumento de citocinas inflamatórias e uma diminuição no número de linfócitos em pacientes infectados pelo P. vivax. Na literatura, a expressão desses receptores inibidores e moléculas co-estimulatórias é associada com a diminuição de função de células T. Nossos resultados demonstram um aumento da expressão das moléculas citadas acima em pacientes infectados pelo P. vivax. O aumento da expressão de algumas dessas moléculas correlacionam com o dano hepático e com plaquetopenia em pacientes infectados pelo P. vivax. Além disso, foi observado um aumento da expressão de um marcador específico da proliferação celular, o Ki67, em pacientes infectados pelo P. vivax. A caracterização fenotípica aqui realizada sugere disfuncionalidade das células T. Estudos adicionais devem ser realizados para avaliar a função destas moléculas durante a malária. / In Brazil, malaria is still considereda major public healthproblem. Although the number of malaria cases is declining, the incidence was greater than 300,000 cases in the past two years. Of these cases, Plasmodium vivax was considered the main causative agent, with 90% incidence. The adaptive immune response, along with innate immunity, has the function to overcome the strategy imposed by infectious agents, leading to infection control. The activation of T cells involves signaling through the T cell receptor (TCR) and regulatory receptors. The combination of these interactions regulates the extent and quality of the T cell activation and therefore influences significantly the course of immune responses in question. The aim of this study is to evaluate the phenotype of T cells from patients infected with P. vivaxfocusing on the expression of regulatory receptors such as programmed death-1 (PD-1), inducibleT cell stimulator (ICOS), cytotoxic T lymphocyte attenuator (CTLA-4), T-cell immunoglobulin and mucin domain domain 3 (TIM-3) and lymphocyte activation gene-3 (LAG-3). Peripheral blood mononuclear cells were collected from patients infected with P. vivax in Porto Velho, RO. Lymphocytes were analyzed by flow cytometry. Our data demonstrate an increase in inflammatory cytokines levels and a decrease in the number of lymphocytes during malaria. It has been described that the expression of these inhibitory receptors and costimulatory molecules is associated with decreased T cell function. Our results demonstrate that P. vivax infection triggers an increase in the expression of all molecules mentioned above. Increased expression of someof these molecules correlates with liver damage and thrombocytopenia. Moreover, we observed increased expression of a proliferation marker, the Ki67, in the same patients. The phenotype observed suggests a T cell dysfunction. Further studies have to be performed to evaluate the role of these molecules during malaria.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T14:41:55Z No. of bitstreams: 1 Tese_TatianeTeixeiradeMelo.pdf: 3978043 bytes, checksum: 1a0b6aa00d756ed3ab737751773db659 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T14:42:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_TatianeTeixeiradeMelo.pdf: 3978043 bytes, checksum: 1a0b6aa00d756ed3ab737751773db659 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T14:42:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_TatianeTeixeiradeMelo.pdf: 3978043 bytes, checksum: 1a0b6aa00d756ed3ab737751773db659 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:42:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_TatianeTeixeiradeMelo.pdf: 3978043 bytes, checksum: 1a0b6aa00d756ed3ab737751773db659 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Segundo a Organização Mundial da Saúde (WHO), atualmente 200 milhões de pessoas estão infectadas por espécies do gênero Schistosoma, uma vacina, administrada sozinha ou em combinação com drogas anti-helmínticas, seria importante para o controle da esquistossomose. Recentemente, nosso grupo demonstrou que uma preparação do tegumento de esquistossômulo do S. mansoni (Smteg) é capaz de elicitar uma diminuição estatisticamente significativa na carga parasitária quando formulado com adjuvante de Freund. Neste trabalho nós avaliamos a imunoproteção induzida em camundongos pelo Smteg sem adjuvante ou Smteg associado ao Alum ou Alum + CpG. Na ausência de adjuvante não houve diminuição estatisticamente significativa da carga parasitária. Apesar disso, o Smteg foi capaz de ativar a resposta imune produzindo níveis significativos de anticorpos específicos, aumentando a porcentagem de células TCD4+IFN-γ+ e de células TCD4+IL-10+ no baço e aumentando a produção das citocinas IFN-γ e IL-10 pelas células esplênicas e IL-10 por células dendríticas,. Ao contrário, a associação Smteg/alum/CpG-ODN foi capaz de induzir uma redução parcial na carga parasitária (43,1%) além de uma reduzir significativamente o número de ovos eliminados nas fezes. Esta resposta protetora foi associada com um perfil predominantemente do tipo Th1, com o aumento na produção de IgG2c, IFN-γ e TNF-α. O papel dos anticorpos na eliminação do parasito em animais imunizados com o Smteg também foi avaliado, e demonstramos que anticorpos específicos estão envolvidos na eliminação do parasito. Uma vez observada a importância dos anticorpos na imunidade protetora, realizamos análises proteômicas e sorológicas pela técnica de Western-blotting bidimensional (2D-WB) para identificar candidatos vacinais. Uma das proteínas identificadas, a ciclofilina do S. mansoni (SmCyp), foi utilizada como antígeno em um protocolo de imunização gênica, porém não observamos redução significativa da carga parasitária e do número de ovos nas fezes e no intestino e fígado de camundongos imunizados, apesar da imunização diminuir significativamente a área dos granulomas hepáticos em animais imunizados. Nossos resultados demonstram a importância do tegumento do esquistossômulo do S. mansoni como fonte de antígenos vacinais para a esquistossomose mansoni; a importância dos anticorpos na eliminação do parasito e identifica proteínas candidatas a serem utilizadas em formulações vacinais, abrindo novas possibilidades de estudos avaliando as mesmas em diferentes formulações e estratégias vacinais em ensaios pré-clinicos / According to the World Health Organization (WHO), currently 200 million people are infected by Schistosoma species, the vaccine, administered alone or in association with antihelminthic drugs, would be important to control schistosomiasis. Recently, our group demonstrated that the schistosomula tegument preparation from S. mansoni (Smteg) is able to induce a significant reduction in worm burden when formulated to Freund adjuvant. In this work we evaluated the protection induced by Smteg without adjuvant or Smteg with Alum or Alum + CpG. Without adjuvant any significant reduction in parasite burden was observed. However, Smteg immunization activate immune response inducing significant production of specific antibody; increased percentage of TCD4+IFN-γ+ and TCD4+IL-10+ cells in spleen and increased production of IFN-γ and IL-10 cytokines by spleen cell and IL-10 by dendritic cells. On the other hand Smteg/alum/CpG-ODN formulation was able to induce partial reduction in worm burden (43.1%) and also a significant reduction in the number of eggs eliminated in the feces. This protective response was associated with a predominant Th1 type of immune response, with increased production of specific IgG2c, IFN-γ and TNF-α. The role of antibodies in the elimination of parasites in animals immunized with Smteg was also evaluated and we have demonstrated that specific antibodies are involved in the elimination of the parasite. Once we have observed the importance of antibodies in protective immunity, we performed proteomic and serological analyzes by two-dimensional Western blotting (WB 2D) technique to identify vaccine candidates. One of the identified proteins, the S. mansoni cyclophilin (SmCyp), was used as antigen in a genetic immunization protocol, although no significant reduction in parasite burden and the number of eggs in the feces and intestine and liver of immunized mice was observed, immunization significantly decrease the area of hepatic granulomas in immunized animals. Our results demonstrate the importance of S. mansoni schistosomula tegument as a source of vaccine targets for schistosomiasis; the importance of antibodies in parasite elimination and also identify proteins to be used in vaccine formulations, opening new studies possibilities in the evaluation of these candidates in different formulations and vaccination strategies in preclinical trials.