O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a influência do uso precoce de antimicrobianos na microbiota intestinal, resposta imune e ocorrência de diarreias em bezerras recém-nascidas. Foram selecionadas 26 bezerras Holandesas distribuídas de acordo com a aplicação (ATB+) ou não (ATB-) de tulatromicina (2,5 mg/Kg - SC) até 12h de vida. Capítulo 1 Este capítulo avaliou a influência do uso precoce de antimicrobiano na sanidade de bezerras holandesas recém-nascidas, por meio do exame clínico geral. As diarreias foram detectadas por sistema de escore e matéria seca (%) nas fezes, além do escore respiratório e palpação externa da região umbilical. O desempenho das bezerras foi determinado pela estimativa do ganho de peso. As bezerras ATB- apresentaram maior frequência de mucosas esbranquiçadas (P=0,066) e inflamações umbilicais no ATB- em D3-5 (P=0,063) e D13-15 (P= 0,066). A frequência de escore fecal 2 e 3 foi semelhante entre os grupos, observando-se pico no D13-15. Os valores médios para matéria seca (%) foram menores no ATB+ no D7-9 (P=0,063) e D27-30 (P=0,084). O agente etiológico das diarreias foi o Cryptosporidium e/ou rotavírus. O ganho de peso diário (GPD) foi igual entre grupos, observando-se intensa redução no GPD em D13-15. Capítulo 2 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência do uso precoce de antimicrobianos na colonização bacteriana intestinal, por meio da detecção de material genético dos principais grupos bacterianos por meio do PCR em tempo real. Não foram observadas diferenças entre os grupos para bactérias totais e C. perfringens. As bezerras ATB- apresentaram maior quantidade de Bifidobacterium, nas fezes no D3-5 (P=0,002) e D7-9 (P=0,018). A população de Lactobacillus também apresentou tendência (P=0,097) para maior número de cópias de DNA no grupo ATB-. Ao contrário, a Escherichia coli apresentou tendência para maiores valores no grupo ATB+ no D20-23 (P=0,052) e D27-30 (P=0,072). Capítulo 3 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência do uso precoce de antimicrobianos no perfil inflamatório de bezerras holandesas recém-nascidas por meio de provas hematológicas, imunológicas, bioquímicas e eletroforéticas. Observou-se tendência para menores valores de hemoglobina (P=0,071), CHCM (P=0,057) e ferro sérico (P=0,051) no D3-5 no ATB-. Neste momento, a frequência de anemias também foi maior no ATB- (P=0,016). O número de neutrófilos (P=0,051) e a produção espontânea de EROs foi maior no ATB-, enquanto o número de linfócitos foi maior no ATB+ (P=0,061) no D7-9. Estes dados são condizentes com as análises imunes, no qual a proporção de populações de mononucleares 1 e 2 expressando o CD62L+ apresentou tendência para maior valor no ATB+ em D3-5 (P=0,098) e D7-9 (P=0,083). Após as diarreias (D13-15), os granulócitos (P=0,043) e mononucleares (P=0,089) das bezerras ATB+ apresentaram maior intensidade de fluorescência para expressão CD62L no D20-23. O grupo ATB+ também apresentou maiores teores de beta-globulina (P=0,057), gama-globulina (P=0,069) e haptoglobina (P=0,032) no D13-15. O uso precoce de tulatromicina influenciou na microbiota intestinal, imunidade inata e ocorrência de doenças no período neonatal. / The general goal of this research was to evaluate the influence of early antimicrobial use in the gut microbiota, immune response and occurrence of diarrhea in neonate heifers. It was screened 26 neonate Holstein heifers distributed according to the application (ATB+) or not (ATB-) of tulathromycin (2.5mg/Kg - SC) from birth until 12 hours of life. Chapter 1 This chapter evaluated the influence of early use of antimicrobial in the health of neonate Holstein heifer by general clinical examination. Diarrheas were detected using score system and fecal dry matter (%), besides of respiratory score and external palpation of navel region. The performance of calves was evaluated by daily weight gain. Heifers ATB- had high frequency of paleness mucous (P=0.066) and umbilical inflammation in ATB- group on D3-5 (P=0.063) and D13-15 (P= 0.066). The frequency of fecal score 2 and 3 was similar between groups, observing peak of diarrhea on D13-15. The mean values of fecal dry matter were low in ATB+ group on D7-9 (P=0.063) and D27-30 (P=0.084). The main etiologic agent of diarrheas was Cryptosporidium and/or rotavírus. The daily weight gain (DWG) was similar between groups, observing intense decrease of DWG on D13-15. Chapter 2 The aim of this chapter was to evaluate the influence of early use of antimicrobial in the microbial gut colonization by detection of genetic bacterial material using real time PCR. It was not found difference between groups for total bacteria and C. perfringens. The calves from ATB- group had high quantity of Bifidobacterium in the fecal material on D3-5 (P=0.002) and D7-9 (P=0.018). The Lactobacillus population had a tendency (P=0.097) to have high number of DNA copies in the ATB- group. On the other hand, Escherichia coli had tendency to high values in ATB+ group on D20-23 (P=0.052) and D27-30 (P=0.072). Chapter 3 The aim of this chapter was to evaluate the influence of early use of antimicrobial in the inflammatory profile of neonate Holstein heifers by hematological, immunological and biochemical tests, besides electrophoresis. It was possible to observe lower values of hemoglobin (P=0.071), CHCM (P=0.057) and serum iron (P=0.051) in ATB- group on D3-5. In this moment, the frequency of anemia also was high in ATB- group (P=0.016). The number of neutrophils (P=0.051) and spontaneous ROSs was high in ATB- group, while the number of lymphocytes was high in ATB+ group (P=0.061) on D7-9. These data were according to immune analysis, where the proportion of mononuclear population 1 and 2 expressing CD62L+ had a tendency for high values in ATB+ group on D3-5 (P=0.098) and D7-9 (P=0.083). After diarrhea (D13-15), granulocytes (P=0.043) and mononuclear cells (P=0.089) showed high fluorescence intensity of CD62L in ATB+ heifers on D20-23. ATB+ group also had high rate of beta globulin (P=0.057), gamma globulin (P=0.069) and haptoglobin (P=0.032) on D13-15. The early use of tulathromycin had influence on gut microbiota, innate immunity and occurrence of disease in the neonatal period.

O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a influência do uso precoce de antimicrobianos na microbiota intestinal, resposta imune e ocorrência de diarreias em bezerras recém-nascidas. Foram selecionadas 26 bezerras Holandesas distribuídas de acordo com a aplicação (ATB+) ou não (ATB-) de tulatromicina (2,5 mg/Kg - SC) até 12h de vida. Capítulo 1 Este capítulo avaliou a influência do uso precoce de antimicrobiano na sanidade de bezerras holandesas recém-nascidas, por meio do exame clínico geral. As diarreias foram detectadas por sistema de escore e matéria seca (%) nas fezes, além do escore respiratório e palpação externa da região umbilical. O desempenho das bezerras foi determinado pela estimativa do ganho de peso. As bezerras ATB- apresentaram maior frequência de mucosas esbranquiçadas (P=0,066) e inflamações umbilicais no ATB- em D3-5 (P=0,063) e D13-15 (P= 0,066). A frequência de escore fecal 2 e 3 foi semelhante entre os grupos, observando-se pico no D13-15. Os valores médios para matéria seca (%) foram menores no ATB+ no D7-9 (P=0,063) e D27-30 (P=0,084). O agente etiológico das diarreias foi o Cryptosporidium e/ou rotavírus. O ganho de peso diário (GPD) foi igual entre grupos, observando-se intensa redução no GPD em D13-15. Capítulo 2 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência do uso precoce de antimicrobianos na colonização bacteriana intestinal, por meio da detecção de material genético dos principais grupos bacterianos por meio do PCR em tempo real. Não foram observadas diferenças entre os grupos para bactérias totais e C. perfringens. As bezerras ATB- apresentaram maior quantidade de Bifidobacterium, nas fezes no D3-5 (P=0,002) e D7-9 (P=0,018). A população de Lactobacillus também apresentou tendência (P=0,097) para maior número de cópias de DNA no grupo ATB-. Ao contrário, a Escherichia coli apresentou tendência para maiores valores no grupo ATB+ no D20-23 (P=0,052) e D27-30 (P=0,072). Capítulo 3 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência do uso precoce de antimicrobianos no perfil inflamatório de bezerras holandesas recém-nascidas por meio de provas hematológicas, imunológicas, bioquímicas e eletroforéticas. Observou-se tendência para menores valores de hemoglobina (P=0,071), CHCM (P=0,057) e ferro sérico (P=0,051) no D3-5 no ATB-. Neste momento, a frequência de anemias também foi maior no ATB- (P=0,016). O número de neutrófilos (P=0,051) e a produção espontânea de EROs foi maior no ATB-, enquanto o número de linfócitos foi maior no ATB+ (P=0,061) no D7-9. Estes dados são condizentes com as análises imunes, no qual a proporção de populações de mononucleares 1 e 2 expressando o CD62L+ apresentou tendência para maior valor no ATB+ em D3-5 (P=0,098) e D7-9 (P=0,083). Após as diarreias (D13-15), os granulócitos (P=0,043) e mononucleares (P=0,089) das bezerras ATB+ apresentaram maior intensidade de fluorescência para expressão CD62L no D20-23. O grupo ATB+ também apresentou maiores teores de beta-globulina (P=0,057), gama-globulina (P=0,069) e haptoglobina (P=0,032) no D13-15. O uso precoce de tulatromicina influenciou na microbiota intestinal, imunidade inata e ocorrência de doenças no período neonatal. / The general goal of this research was to evaluate the influence of early antimicrobial use in the gut microbiota, immune response and occurrence of diarrhea in neonate heifers. It was screened 26 neonate Holstein heifers distributed according to the application (ATB+) or not (ATB-) of tulathromycin (2.5mg/Kg - SC) from birth until 12 hours of life. Chapter 1 This chapter evaluated the influence of early use of antimicrobial in the health of neonate Holstein heifer by general clinical examination. Diarrheas were detected using score system and fecal dry matter (%), besides of respiratory score and external palpation of navel region. The performance of calves was evaluated by daily weight gain. Heifers ATB- had high frequency of paleness mucous (P=0.066) and umbilical inflammation in ATB- group on D3-5 (P=0.063) and D13-15 (P= 0.066). The frequency of fecal score 2 and 3 was similar between groups, observing peak of diarrhea on D13-15. The mean values of fecal dry matter were low in ATB+ group on D7-9 (P=0.063) and D27-30 (P=0.084). The main etiologic agent of diarrheas was Cryptosporidium and/or rotavírus. The daily weight gain (DWG) was similar between groups, observing intense decrease of DWG on D13-15. Chapter 2 The aim of this chapter was to evaluate the influence of early use of antimicrobial in the microbial gut colonization by detection of genetic bacterial material using real time PCR. It was not found difference between groups for total bacteria and C. perfringens. The calves from ATB- group had high quantity of Bifidobacterium in the fecal material on D3-5 (P=0.002) and D7-9 (P=0.018). The Lactobacillus population had a tendency (P=0.097) to have high number of DNA copies in the ATB- group. On the other hand, Escherichia coli had tendency to high values in ATB+ group on D20-23 (P=0.052) and D27-30 (P=0.072). Chapter 3 The aim of this chapter was to evaluate the influence of early use of antimicrobial in the inflammatory profile of neonate Holstein heifers by hematological, immunological and biochemical tests, besides electrophoresis. It was possible to observe lower values of hemoglobin (P=0.071), CHCM (P=0.057) and serum iron (P=0.051) in ATB- group on D3-5. In this moment, the frequency of anemia also was high in ATB- group (P=0.016). The number of neutrophils (P=0.051) and spontaneous ROSs was high in ATB- group, while the number of lymphocytes was high in ATB+ group (P=0.061) on D7-9. These data were according to immune analysis, where the proportion of mononuclear population 1 and 2 expressing CD62L+ had a tendency for high values in ATB+ group on D3-5 (P=0.098) and D7-9 (P=0.083). After diarrhea (D13-15), granulocytes (P=0.043) and mononuclear cells (P=0.089) showed high fluorescence intensity of CD62L in ATB+ heifers on D20-23. ATB+ group also had high rate of beta globulin (P=0.057), gamma globulin (P=0.069) and haptoglobin (P=0.032) on D13-15. The early use of tulathromycin had influence on gut microbiota, innate immunity and occurrence of disease in the neonatal period.

Introdução: Estudos apontam maior ocorrência de complicações cardiovasculares na população com HIV/aids. Sabe-se que as alterações iniciais que posteriormente evoluem para doenças cardíacas estão relacionadas às mudanças no perfil inflamatório e oxidativo. Diversas pesquisas, utilizando diferentes populações, demonstraram que os flavonoides presentes no cacau (Theobroma cacao) e na erva mate (Ilex paraguaensis) podem melhorar a função anti-inflamatória e antioxidante do organismo. Objetivo: Avaliar o efeito da ingestão de chocolate e chá mate no perfil inflamatório e oxidativo de pessoas vivendo com HIV/aids (PVHIV/aids) em terapia antirretroviral (TARV). Metodologia: Ensaio clínico do tipo crossover, aleatorizado, cego e controlado por placebo envolvendo 92 voluntários, de 28-59 anos de idade, em tratamento regular com TARV por, no mínimo, 6 meses e com carga viral <50 cópias/mL. Os voluntários consumiram 65g de chocolate em barra (chocolate preto contendo 36g de cacau e placebo) e 3g de chá (erva mate solúvel e placebo) por 15 dias cada, seguido por 15 dias de washout entre cada período de suplementação. Além das variáveis inflamatórias e oxidativas (PCR-us, fibrinogênio, TBARS, HDL-c), foram avaliadas as seguintes características: perfil demográfico e socioeconômico, variáveis antropométricas, imunológicas e prática de atividade física. As análises estatísticas foram realizadas por análise de variância (ANOVA) utilizando o procedimento pkcross no software Stata versão 11.0. O teste t de Student pareado foi feito para comparação das médias dos parâmetros no baseline e pós suplementação. Considerou-se significante p0,05. Resultados: Os participantes eram na maioria do sexo masculino (63,0 por cento ), com média de idade de 45,0 (±7,3) anos. Observou-se média de 13,3 (5±) anos de diagnóstico de HIV, com 10,7 (±5,1) anos de uso de TARV. Quando feita análise por ANOVA houve melhora significativa apenas para o HDL-c (p = 0,05). Entretanto, na comparação entre as variáveis no baseline x chocolate preto, pelo teste t de Student pareado, observou-se aumento de HDL-c (p = 0,01) e diminuição de leucócitos (p = 0,01) e neutrófilos (p = 0,02), e quando comparados os valores das variáveis entre chocolate preto x placebo também houve diferença estatisticamente significativa para HDL-c (p = 0,05), leucócitos (p = 0,01) e neutrófilos (p = 0,03). Conclusão: Este é o primeiro estudo clínico que avaliou o efeito da ingestão de chocolate (cacau) e chá mate (erva mate) no perfil inflamatório e oxidativo de PVHIV em TARV. No presente estudo, o consumo de ambos os suplementos por 15 dias cada, não foi suficiente para melhorar os marcadores do perfil inflamatório e oxidativo destes indivíduos, apesar da alteração significativa de alguns parâmetros relacionados à inflamação e oxidação, como aumento de HDL-c e diminuição de leucócitos e neutrófilos após o consumo do chocolate preto. Tal resultado pode ser devido ao metabolismo diferenciado de PVHIV/aids, o qual sofre alterações não apenas pela própria infecção, mas também pela TARV, a quantidade e biodisponibilidade dos flavonoides nos suplementos e ao tempo de intervenção. / Introduction: There has been an increase on cardiovascular diseases occurrence in the HIV/AIDS population. It is know that initial alterations that after evolve to cardiovascular diseases are related with changes in inflammatory and oxidative disorders. Several studies in other populations demonstrated that flavonoids in cocoa (Theobroma cacao) and yerba mate (Ilex paraguaensis) may improve cardiovascular function due to its antioxidant and anti-inflammatory properties. Objective: To evaluated the effect of chocolate and yerba mate intake on the inflammatory and oxidative profile of people living with HIV/AIDS in antiretroviral therapy (ART). Methodology: Randomized, placebo-controlled, blinded cross-over trial involving 92 volunteers ages 28-59 years, in ART for at least six months and with viral load <50 copies/mL. The volunteers consumed 65g chocolate bar (36g dark chocolate containing cocoa or placebo) and 3g of tea (yerba mate soluble and placebo) for 15 day each, followed by 15 days washout period before the subsequent treatment. In addition to the inflammatory and oxidative variables (us-CRP, fibrinogen, TBARS, HDL-c) the following characteristics were evaluated: demographic and socioeconomic profile, anthropometric variables, immunological and physical activity. Statistical analyzes were performed by the cross-over analyzes of variance (ANOVA) using the procedure pkcross in Stata version 11.0. The paired Student`s t-test was also utilized. A p value 0,05 was considered significant. Results: Patients were mostly male (63 per cent ), with a mean age of 45,0 years. The mean time of HIV/AIDS diagnosis was 13,3 (5±), with 10,7 (±5,1) years of ART. There was statistically significant difference when analyzed by ANOVA only for HDL-c (p = 0,05). However, comparing the variables in the baseline x dark chocolate by the paired Student`s t-test, there were increase in the HDL-c (p = 0,01) and decrease in the leukocyte (p = 0,01) and neutrophil (p = 0,02), and when compared the values of the variables between dark chocolate and placebo also there was statistically significant difference for HDL-c (p = 0,05), leukocyte (p = 0,01) and neutrophil (p = 0,03). Conclusion: This is the first clinical study that evaluated the effect of chocolate (cocoa) and mate tea (yerba mate) consumption on inflammatory and oxidative profile of individuals with HIV/AIDS on ART. In the present study, daily consumption of neither cocoa nor yerba mate for 15 days was sufficient to improve inflammatory and oxidative profile in this group of individuals, despite the increase in HDL-c and decrease of leukocyte and neutrophil values after consumption of dark chocolate. Such an outcome in this group of individuals can be distinguished due to its metabolism, which is altered not only by the infection, but also by the ART, the amount and bioavailability of flavonoids in supplements and timing of intervention.

Submitted by BRUNO CESAR OTTOBONI LUPERINI null (bruno_luperini@yahoo.com.br) on 2016-08-25T18:35:40Z No. of bitstreams: 1 DOUTORADO LUPERINI, 2016.pdf: 1982952 bytes, checksum: f089bbc507cac5eb16520206392deff4 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-29T13:17:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 luperini_bco_dr_bot.pdf: 1982952 bytes, checksum: f089bbc507cac5eb16520206392deff4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T13:17:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luperini_bco_dr_bot.pdf: 1982952 bytes, checksum: f089bbc507cac5eb16520206392deff4 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A obesidade é uma desordem multifatorial que envolve agentes hereditários, ambientais e estilo de vida, e suas consequências não são apenas sociais ou psicológicas, mas estão também relacionadas à presença de comorbidades como hipertensão arterial, diabetes tipo 2, doenças cardiovasculares e vários tipos de câncer. Considerando que as alterações genéticas relacionadas à obesidade não são totalmente conhecidas, assim como não se sabe a possível ação da suplementação nutricional sobre tais alterações, o presente estudo teve como objetivo avaliar a relação entre a ingestão de micronutrientes, alterações genéticas e perfil inflamatório em um grupo de 30 mulheres com obesidade mórbida, com idade entre 20 e 45 anos e submetidas à cirurgia bariátrica. A suplementação nutricional consistiu da ingestão (pó diluído em água) de vitaminas e micronutrientes correspondentes a duas DRIs (Ingestão Dietética de Referência) por dia, durante 10 semanas antes e 24 após a cirurgia bariátrica. O total de 30 mulheres eutróficas saudáveis, não fumantes e pareadas por idade às obesas, constituiu o grupo de referência. Todos os parâmetros avaliados nas mulheres obesas foram mensurados em três momentos: antes da suplementação nutricional (M1); 8 semanas após o início da suplementação e uma semana antes da cirurgia bariátrica (M2); e seis meses após o procedimento cirúrgico (M3). Os testes do cometa e do micronúcleo foram utilizados para medir, respectivamente, os níveis de danos primários no DNA e as frequências de alterações citogenéticas em células do sangue periférico. As mulheres obesas, nos três momentos mensurados, apresentaram maiores níveis (p < 0,05) de danos no DNA que as eutróficas (grupo controle). No entanto, seis meses após a cirurgia bariátrica, foi significativa a redução dos danos, quando consideradas apenas as obesas, muito embora os níveis não voltassem a atingir valores próximos ao do grupo controle. Frequências aumentadas de células micronucleadas foram detectas nas mulheres obesas antes da cirurgia bariátrica em relação as eutróficas. Contudo, seis meses após a cirurgia a frequência diminuiu significativamente, ficando semelhante à do grupo controle. Diminuições significativas de citocinas inflamatórias foram observadas nas mulheres obesas, tanto após o início da suplementação de micronutrientes, como após a cirurgia. A avaliação do perfil de expressão gênica pela técnica de microarranjos de DNA mostrou que as mulheres obesas, antes da suplementação nutricional, apresentavam hiperexpressão de genes relacionados a vias de metabolismo energético e lipídico e perfil inflamatório. Após a suplementação, foram observadas modificações no perfil de expressão desses genes, além da modulação de genes de vias como viabilidade celular e reparo de DNA. Por outro lado, após o procedimento cirúrgico e a concomitante suplementação nutricional ocorreu modulação de genes envolvidos em vias de metabolismo energético e processos inflamatórios, possivelmente devido à significativa perda de peso e consequente diminuição do IMC. Concluindo, do ponto de vista genético, este estudo demonstrou a importância da suplementação nutricional em mulheres com obesidade mórbida, antes e após a cirurgia bariátrica, embora não tivesse sido possível discriminar a extensão dos seus efeitos frente à perda de peso ocorrida após o procedimento cirúrgico. / Obesity is a complex disease that originates from a combination of social, environmental and genetic factors. Furthermore, it is associated with comorbidities such as hypertension, type 2 diabetes, heart disease and various types of cancers. Since the relationship among genetic alterations, nutritional supplementation and obesity are not fully understood, this study aimed to evaluate the effects of micronutrient intake on genetic and inflammatory profile in a group of 30 morbidly obese women, aged between 20 and 45 years and undergoing bariatric surgery. The nutritional intervention consisted of two recommended dietary allowance (RDA) of vitamins and micronutrients per day, for 10 weeks before and 24 after the bariatric surgery. A total of 30 healthy normal-weight, non-smokers and matched for age to the obese women were recruited as a control group. All the checked endpoints in obese the women were measured at three moments: before nutritional supplementation (M1); 8 weeks after beginning of supplementation and one week before bariatric surgery (M2); and six months after surgery with simultaneous nutritional supplementation (M3). The comet and micronucleus tests were used to measure the levels of primary DNA damage and the frequency of cytogenetic changes in peripheral blood cells, respectively. Obese women at the three measured moments, presented higher levels (p <0.05) of DNA damage than the control group. However, six months after the bariatric surgery the genetic damage was significantly reduced compared to the obese women before nutritional supplementation, but the amount did not reached the control group level. Similarly, increased frequencies of micronucleated cells were detected in obese women before bariatric surgery compared to the control group. However, six months after surgery this frequency decreased significantly, being similar to that in the control group. Significant reduction of inflammatory cytokines was observed in obese women after four weeks after the beginning of nutritional, as well as after surgery. Gene expression profiling was investigated using DNA microarrays. Data showed upregulation of genes related to energy and lipid metabolism, and also to inflammatory pathways in obese women before nutritional supplementation. Changes in these gene expression and also modulation of gene associated to cell viability and DNA repair pathways were observed after the nutritional supplementation. Six month after the surgical procedure and nutritional supplementation genes involved in energy metabolism and inflammatory pathways were modulated, probably due to the significant weight loss. In conclusion, this study showed the importance of nutritional supplementation, both before and after bariatric surgery. However, it was not possible to distinguish the extension of its effects after surgery because of the weight loss.

Orientador: João Paulo de Castro Marcondes / Resumo: A obesidade é uma desordem multifatorial que envolve agentes hereditários, ambientais e estilo de vida, e suas consequências não são apenas sociais ou psicológicas, mas estão também relacionadas à presença de comorbidades como hipertensão arterial, diabetes tipo 2, doenças cardiovasculares e vários tipos de câncer. Considerando que as alterações genéticas relacionadas à obesidade não são totalmente conhecidas, assim como não se sabe a possível ação da suplementação nutricional sobre tais alterações, o presente estudo teve como objetivo avaliar a relação entre a ingestão de micronutrientes, alterações genéticas e perfil inflamatório em um grupo de 30 mulheres com obesidade mórbida, com idade entre 20 e 45 anos e submetidas à cirurgia bariátrica. A suplementação nutricional consistiu da ingestão (pó diluído em água) de vitaminas e micronutrientes correspondentes a duas DRIs (Ingestão Dietética de Referência) por dia, durante 10 semanas antes e 24 após a cirurgia bariátrica. O total de 30 mulheres eutróficas saudáveis, não fumantes e pareadas por idade às obesas, constituiu o grupo de referência. Todos os parâmetros avaliados nas mulheres obesas foram mensurados em três momentos: antes da suplementação nutricional (M1); 8 semanas após o início da suplementação e uma semana antes da cirurgia bariátrica (M2); e seis meses após o procedimento cirúrgico (M3). Os testes do cometa e do micronúcleo foram utilizados para medir, respectivamente, os níveis de danos primários no DNA e as f... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Obesity is a complex disease that originates from a combination of social, environmental and genetic factors. Furthermore, it is associated with comorbidities such as hypertension, type 2 diabetes, heart disease and various types of cancers. Since the relationship among genetic alterations, nutritional supplementation and obesity are not fully understood, this study aimed to evaluate the effects of micronutrient intake on genetic and inflammatory profile in a group of 30 morbidly obese women, aged between 20 and 45 years and undergoing bariatric surgery. The nutritional intervention consisted of two recommended dietary allowance (RDA) of vitamins and micronutrients per day, for 10 weeks before and 24 after the bariatric surgery. A total of 30 healthy normal-weight, non-smokers and matched for age to the obese women were recruited as a control group. All the checked endpoints in obese the women were measured at three moments: before nutritional supplementation (M1); 8 weeks after beginning of supplementation and one week before bariatric surgery (M2); and six months after surgery with simultaneous nutritional supplementation (M3). The comet and micronucleus tests were used to measure the levels of primary DNA damage and the frequency of cytogenetic changes in peripheral blood cells, respectively. Obese women at the three measured moments, presented higher levels (p <0.05) of DNA damage than the control group. However, six months after the bariatric surgery the genetic damage w... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Introdução: Estudos apontam maior ocorrência de complicações cardiovasculares na população com HIV/aids. Sabe-se que as alterações iniciais que posteriormente evoluem para doenças cardíacas estão relacionadas às mudanças no perfil inflamatório e oxidativo. Diversas pesquisas, utilizando diferentes populações, demonstraram que os flavonoides presentes no cacau (Theobroma cacao) e na erva mate (Ilex paraguaensis) podem melhorar a função anti-inflamatória e antioxidante do organismo. Objetivo: Avaliar o efeito da ingestão de chocolate e chá mate no perfil inflamatório e oxidativo de pessoas vivendo com HIV/aids (PVHIV/aids) em terapia antirretroviral (TARV). Metodologia: Ensaio clínico do tipo crossover, aleatorizado, cego e controlado por placebo envolvendo 92 voluntários, de 28-59 anos de idade, em tratamento regular com TARV por, no mínimo, 6 meses e com carga viral <50 cópias/mL. Os voluntários consumiram 65g de chocolate em barra (chocolate preto contendo 36g de cacau e placebo) e 3g de chá (erva mate solúvel e placebo) por 15 dias cada, seguido por 15 dias de washout entre cada período de suplementação. Além das variáveis inflamatórias e oxidativas (PCR-us, fibrinogênio, TBARS, HDL-c), foram avaliadas as seguintes características: perfil demográfico e socioeconômico, variáveis antropométricas, imunológicas e prática de atividade física. As análises estatísticas foram realizadas por análise de variância (ANOVA) utilizando o procedimento pkcross no software Stata versão 11.0. O teste t de Student pareado foi feito para comparação das médias dos parâmetros no baseline e pós suplementação. Considerou-se significante p0,05. Resultados: Os participantes eram na maioria do sexo masculino (63,0 por cento ), com média de idade de 45,0 (±7,3) anos. Observou-se média de 13,3 (5±) anos de diagnóstico de HIV, com 10,7 (±5,1) anos de uso de TARV. Quando feita análise por ANOVA houve melhora significativa apenas para o HDL-c (p = 0,05). Entretanto, na comparação entre as variáveis no baseline x chocolate preto, pelo teste t de Student pareado, observou-se aumento de HDL-c (p = 0,01) e diminuição de leucócitos (p = 0,01) e neutrófilos (p = 0,02), e quando comparados os valores das variáveis entre chocolate preto x placebo também houve diferença estatisticamente significativa para HDL-c (p = 0,05), leucócitos (p = 0,01) e neutrófilos (p = 0,03). Conclusão: Este é o primeiro estudo clínico que avaliou o efeito da ingestão de chocolate (cacau) e chá mate (erva mate) no perfil inflamatório e oxidativo de PVHIV em TARV. No presente estudo, o consumo de ambos os suplementos por 15 dias cada, não foi suficiente para melhorar os marcadores do perfil inflamatório e oxidativo destes indivíduos, apesar da alteração significativa de alguns parâmetros relacionados à inflamação e oxidação, como aumento de HDL-c e diminuição de leucócitos e neutrófilos após o consumo do chocolate preto. Tal resultado pode ser devido ao metabolismo diferenciado de PVHIV/aids, o qual sofre alterações não apenas pela própria infecção, mas também pela TARV, a quantidade e biodisponibilidade dos flavonoides nos suplementos e ao tempo de intervenção. / Introduction: There has been an increase on cardiovascular diseases occurrence in the HIV/AIDS population. It is know that initial alterations that after evolve to cardiovascular diseases are related with changes in inflammatory and oxidative disorders. Several studies in other populations demonstrated that flavonoids in cocoa (Theobroma cacao) and yerba mate (Ilex paraguaensis) may improve cardiovascular function due to its antioxidant and anti-inflammatory properties. Objective: To evaluated the effect of chocolate and yerba mate intake on the inflammatory and oxidative profile of people living with HIV/AIDS in antiretroviral therapy (ART). Methodology: Randomized, placebo-controlled, blinded cross-over trial involving 92 volunteers ages 28-59 years, in ART for at least six months and with viral load <50 copies/mL. The volunteers consumed 65g chocolate bar (36g dark chocolate containing cocoa or placebo) and 3g of tea (yerba mate soluble and placebo) for 15 day each, followed by 15 days washout period before the subsequent treatment. In addition to the inflammatory and oxidative variables (us-CRP, fibrinogen, TBARS, HDL-c) the following characteristics were evaluated: demographic and socioeconomic profile, anthropometric variables, immunological and physical activity. Statistical analyzes were performed by the cross-over analyzes of variance (ANOVA) using the procedure pkcross in Stata version 11.0. The paired Student`s t-test was also utilized. A p value 0,05 was considered significant. Results: Patients were mostly male (63 per cent ), with a mean age of 45,0 years. The mean time of HIV/AIDS diagnosis was 13,3 (5±), with 10,7 (±5,1) years of ART. There was statistically significant difference when analyzed by ANOVA only for HDL-c (p = 0,05). However, comparing the variables in the baseline x dark chocolate by the paired Student`s t-test, there were increase in the HDL-c (p = 0,01) and decrease in the leukocyte (p = 0,01) and neutrophil (p = 0,02), and when compared the values of the variables between dark chocolate and placebo also there was statistically significant difference for HDL-c (p = 0,05), leukocyte (p = 0,01) and neutrophil (p = 0,03). Conclusion: This is the first clinical study that evaluated the effect of chocolate (cocoa) and mate tea (yerba mate) consumption on inflammatory and oxidative profile of individuals with HIV/AIDS on ART. In the present study, daily consumption of neither cocoa nor yerba mate for 15 days was sufficient to improve inflammatory and oxidative profile in this group of individuals, despite the increase in HDL-c and decrease of leukocyte and neutrophil values after consumption of dark chocolate. Such an outcome in this group of individuals can be distinguished due to its metabolism, which is altered not only by the infection, but also by the ART, the amount and bioavailability of flavonoids in supplements and timing of intervention.

Orientador: Silke Anna Theresa Weber / Resumo: Introdução: A Síndrome da Apneia Obstrutiva do Sono (SAOS) é uma desordem com alta incidência na população, associada a risco elevado de doença cardiovascular. O tratamento ouro é a pressão positiva contínua nas vias aéreas, proporcionada pelo uso do Continuous Positive Airway Pressure (CPAP). A SAOS está associada a produção de resposta inflamatória no indivíduo assim como ao aumento do estresse oxidativo provocado pelos fenômenos hipóxia/reoxigenação. O tratamento com CPAP normaliza os eventos respiratórios e a estrutura do sono, porém existem muitos estudos controversos em relação ao tratamento com o CPAP e a redução dos marcadores inflamatórios e de estresse oxidativo. Também não há consenso quanto ao tempo mínimo de uso de CPAP para observar uma resposta à repercussão nociva da SAOS. Objetivo: Avaliar os níveis séricos de citocinas pró e anti-inflamatórias e de marcadores de estresse oxidativo em pacientes com SAOS tratados com CPAP pelo período de sete dias. Pacientes e Métodos: Trata-se de um ensaio clínico randomizado duplo-cego, com aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa local (CAAE: 20839713.3.0000.5411). Foram convidados a participar do estudo 60 pacientes adultos (acima de 18 anos), de ambos os gêneros, com diagnóstico polissonográfico de SAOS, atendidos no Ambulatório de Ventilação Domiciliar, da Faculdade de Medicina de Botucatu, Unesp. Os grupos foram constituídos por seleção aleatória da amostra, a qual viabilizou a distribuição dos sujeitos em dois grupos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Obstructive Sleep Apnea Syndrome (OSAS) is a disorder with high incidence in population, associated to high cardiovascular risk factor. Its main treatment uses Continuous Positive Airway Pressure (CPAP). OSAS is associated to the production of inflammatory response in the individual as well as to the increase of oxidative stress caused by hypoxia/ re-oxygenation phenomena. Treatment with CPAP normalizes respiratory events and sleep structure, but there are many controversial studies regarding treatment with CPAP and reduction of inflammatory markers and oxidative stress. There is not a consensus in relation to the minimum time of CPAP utilization to observe a response to the harmful outcome of OSAS. Objective: To evaluate the serum levels of pro- and anti-inflammatory cytokines and markers of oxidative stress in OSAS patients treated with CPAP for seven days. Patients and Methods: It was a randomized double-blind clinical trial approved by the local Committee of Ethics in Research (CAAE: 20839713.3.0000.5411). 60 male and female adult patients (over 18 years old) with polysomnographic diagnosis of OSAS, attended at the Homecare Ventilation Clinic of Botucatu Medical School, UNESP, were invited to participate in the study. The groups were distributed by random sampling selection which allowed the distribution into two groups where Group I consisted of patients using CPAP at minimum pressure of 4 cmH2O (n=30) and Group II was formed by patients utilizing CPAP at ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A fibrose pulmonar é uma doença pulmonar crônica caracterizada pelo acúmulo excessivo de matriz extracelular (MEC) e um remodelamento na arquitetura pulmonar. Embora já se saiba da participação do estresse oxidativo e da inflamação na fibrose de forma isolada, é importante observar como se comporta o estresse oxidativo na fibrose quando esta ocorre associada a uma doença de base. O presente estudo teve como objetivo investigar o perfil inflamatório e oxidativo na fibrose pulmonar associado ao enfisema pulmonar prévio. Camundongos C57BL/6 foram divididos em três grupos: grupo controle (n=5) que receberam salina intranasal (50 l) e foram sacrificados no 21 dia; grupo bleomicina (BLEO) (n=15) que receberam bleomicina intratraqueal (0.1 U/animal) no dia 0 e foram sacrificados nos 7 (n=5), 14 (n=5) e 21 (n=5) dias e grupo PPE (elastase) + BLEO (n=21) que receberam elastase (3U/animal) e após 14 dias receberam bleomicina e foram sacrificados nos 14(n=7), 21 (n=7), 28 (n=7) e 35 (n=7) dias. Foram realizadas análises histológicas através de H&E e picro-sirius; análises bioquímicas para superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa-S-transferase (GST) e ELISA para Interleucina (IL)-1&#946; e IL-6. A fibrose pulmonar ocorreu a partir do 14 dia (p<0.001) e o enfisema concomitante a fibrose pulmonar a partir do 28 dia (p<0.001) e um aumento de fibras colágenas no grupo BLEO 21(p<0.001) e PPE + BLEO 21(p<0.001). As enzimas antioxidantes CAT (p<0.01), SOD (p<0.01) e GPx (p<0.01) reduziram e a GST aumentou no grupo BLEO 21 dias (p<0.05). No grupo PPE + BLEO 21 dias houve redução das enzimas antioxidantes CAT, SOD, GPx (p<0.05) e GST. Os níveis de óxido foram altos nos grupos BLEO 21 dias (p<0.01) e PPE + BLEO 21 dias (p<0.01). A IL-1&#946; mostrou-se elevada no grupo BLEO 7 dias quando comparado ao controle (p<0.001) e ao grupo PPE + BLEO 7 dias (p<0.01). Concluímos que a resposta inflamatória inibiu a ação do sistema antioxidante contribuindo para o agravamento da lesão. Isso sugere que terapias anti-inflamatórias podem contribuir tanto para redução da resposta inflamatória quanto de forma indireta no sistema antioxidante. / Pulmonary fibrosis (PF) is a chronic lung disease characterized by excessive accumulation of extracellular matrix (ECM) and remodeling in the lung architecture. Although it is already known the role of oxidative stress and inflammation in the isolated pulmonary fibrosis, it is important to observe how it behaves oxidative stress in pulmonary fibrosis when it occurs associated with an underlying disease. The present study aimed to investigate the inflammatory status and oxidative pulmonary fibrosis associated with pulmonary emphysema prior. C57BL / 6 mice were divided into three groups: control group (n = 5) who received intranasal saline (50l) and were sacrificed at 21 days, bleomycin (BLEO) group (n=15) who received intratracheal bleomycin (0.1U/animal) in the day 0 and were sacrificed at 7 (n=5), 14 (n=5) and 21 (n=5) days and the PPE + BLEO group (n=21) received elastase (PPE)(3U/animals) and 14 days after receiving bleomycin and were sacrificed at 14 (n = 7), 21 (n = 7) 28 (n = 7) and 35 (n = 7) days. Histological analysis was achieved using H&E and Sirius red staining; biochemical analysis for superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione-S-transferase (GST) and ELISA for IL-1&#946; and IL-6 were conducted. Pulmonary fibrosis occurred from day 14 (p<0.001) emphysema and pulmonary fibrosis from day 28 (p <0.001) and occurred an increase of collagen fibers in the BLEO group 21days (p<0.001) and PPE + BLEO 21days (p <0.001). Antioxidant enzymes CAT (p <0.01), SOD (p <0.01), and GPx (p <0.01) were reduced and GST increased in the BLEO group 21 days (p<0,05). In the PPE + BLEO group 21 days occurred an decreased antioxidant enzymes CAT, SOD, GPx (p <0.05), and GST. Oxide levels were higher in the BLEO groups 21 days (p <0.01), and PPE + BLEO group 21 days (p <0:01). IL-1&#946; was elevated in the group BLEO 7 days when compared to control (p <0.001) and the PPE + BLEO group 7 days (p<0.01). The inflammatory response inhibited the action of the antioxidant system contributes to the aggravation of the injury. This suggests that anti-inflammatory therapies may contribute to reducing the inflammatory response as indirectly to the antioxidant system.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A fibrose pulmonar é uma doença pulmonar crônica caracterizada pelo acúmulo excessivo de matriz extracelular (MEC) e um remodelamento na arquitetura pulmonar. Embora já se saiba da participação do estresse oxidativo e da inflamação na fibrose de forma isolada, é importante observar como se comporta o estresse oxidativo na fibrose quando esta ocorre associada a uma doença de base. O presente estudo teve como objetivo investigar o perfil inflamatório e oxidativo na fibrose pulmonar associado ao enfisema pulmonar prévio. Camundongos C57BL/6 foram divididos em três grupos: grupo controle (n=5) que receberam salina intranasal (50 l) e foram sacrificados no 21 dia; grupo bleomicina (BLEO) (n=15) que receberam bleomicina intratraqueal (0.1 U/animal) no dia 0 e foram sacrificados nos 7 (n=5), 14 (n=5) e 21 (n=5) dias e grupo PPE (elastase) + BLEO (n=21) que receberam elastase (3U/animal) e após 14 dias receberam bleomicina e foram sacrificados nos 14(n=7), 21 (n=7), 28 (n=7) e 35 (n=7) dias. Foram realizadas análises histológicas através de H&E e picro-sirius; análises bioquímicas para superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa-S-transferase (GST) e ELISA para Interleucina (IL)-1&#946; e IL-6. A fibrose pulmonar ocorreu a partir do 14 dia (p<0.001) e o enfisema concomitante a fibrose pulmonar a partir do 28 dia (p<0.001) e um aumento de fibras colágenas no grupo BLEO 21(p<0.001) e PPE + BLEO 21(p<0.001). As enzimas antioxidantes CAT (p<0.01), SOD (p<0.01) e GPx (p<0.01) reduziram e a GST aumentou no grupo BLEO 21 dias (p<0.05). No grupo PPE + BLEO 21 dias houve redução das enzimas antioxidantes CAT, SOD, GPx (p<0.05) e GST. Os níveis de óxido foram altos nos grupos BLEO 21 dias (p<0.01) e PPE + BLEO 21 dias (p<0.01). A IL-1&#946; mostrou-se elevada no grupo BLEO 7 dias quando comparado ao controle (p<0.001) e ao grupo PPE + BLEO 7 dias (p<0.01). Concluímos que a resposta inflamatória inibiu a ação do sistema antioxidante contribuindo para o agravamento da lesão. Isso sugere que terapias anti-inflamatórias podem contribuir tanto para redução da resposta inflamatória quanto de forma indireta no sistema antioxidante. / Pulmonary fibrosis (PF) is a chronic lung disease characterized by excessive accumulation of extracellular matrix (ECM) and remodeling in the lung architecture. Although it is already known the role of oxidative stress and inflammation in the isolated pulmonary fibrosis, it is important to observe how it behaves oxidative stress in pulmonary fibrosis when it occurs associated with an underlying disease. The present study aimed to investigate the inflammatory status and oxidative pulmonary fibrosis associated with pulmonary emphysema prior. C57BL / 6 mice were divided into three groups: control group (n = 5) who received intranasal saline (50l) and were sacrificed at 21 days, bleomycin (BLEO) group (n=15) who received intratracheal bleomycin (0.1U/animal) in the day 0 and were sacrificed at 7 (n=5), 14 (n=5) and 21 (n=5) days and the PPE + BLEO group (n=21) received elastase (PPE)(3U/animals) and 14 days after receiving bleomycin and were sacrificed at 14 (n = 7), 21 (n = 7) 28 (n = 7) and 35 (n = 7) days. Histological analysis was achieved using H&E and Sirius red staining; biochemical analysis for superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione-S-transferase (GST) and ELISA for IL-1&#946; and IL-6 were conducted. Pulmonary fibrosis occurred from day 14 (p<0.001) emphysema and pulmonary fibrosis from day 28 (p <0.001) and occurred an increase of collagen fibers in the BLEO group 21days (p<0.001) and PPE + BLEO 21days (p <0.001). Antioxidant enzymes CAT (p <0.01), SOD (p <0.01), and GPx (p <0.01) were reduced and GST increased in the BLEO group 21 days (p<0,05). In the PPE + BLEO group 21 days occurred an decreased antioxidant enzymes CAT, SOD, GPx (p <0.05), and GST. Oxide levels were higher in the BLEO groups 21 days (p <0.01), and PPE + BLEO group 21 days (p <0:01). IL-1&#946; was elevated in the group BLEO 7 days when compared to control (p <0.001) and the PPE + BLEO group 7 days (p<0.01). The inflammatory response inhibited the action of the antioxidant system contributes to the aggravation of the injury. This suggests that anti-inflammatory therapies may contribute to reducing the inflammatory response as indirectly to the antioxidant system.

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Objective: In this work, an evaluation platform based on cellular inflammatory changes caused by exposure to eye irritants was proposed, as well as the development of a biomimetic corneal model from human keratinocytes, which was characterized and evaluated for applicability in ocular toxicity studies. Methods: Inflammatory profile of HaCat keratinocytes was determined after exposure to 13 different chemicals with different classification for ocular irritation (irritants and non-irritants) using Cytometric Bead Array (CBA) and ELISA methods. 3D models were obtained by cultivating HaCat cell line onto a collagen type I matrix, in air-liquid interface for five days. Morphological characterization was carried out through Hematoxylin-eosin staining and corneal epithelial biomarkers expression was assessed using indirect immunofluorescence. Predictive capacity assessment was performed by exposure of model to test substances with subsequently tissue viability assessment. Finally, applicability of system was verified by testing five marketed eyebrow Henna samples which were considered non-irritants due the lack of adequate labelling. Results and Discussion: A qualitative and quantitative correlation was established regarding the HaCat cells inflammatory profile and eye irritation degree of evaluated substances. The epithelial model presented similar morphology and biomarkers expression patterns similar to the found in human corneal epithelium, so that tissue viability after exposure to test substances reduced proportionately to the irritant potential of them. Furthermore, 3D model classified four of the five evaluated Henna samples as moderate or mild irritants. Conclusion: The developed epithelial model presented morphological and functional properties similar to those founded in human corneal epithelium, which enabled the distinction between irritants and non-irritants and it is also applicable to the investigation of botanical mixtures ocular toxicity potential. / Introdução: A avaliação da toxicidade ocular de produtos cosméticos tem sido mundialmente realizada mediante a utilização de métodos alternativos desde que a experimentação animal foi proibida para esse fim em muitos países. Nesse contexto, os modelos epiteliais reconstruídos têm sido internacionalmente utilizados para essa finalidade, os quais não encontram-se disponíveis no Brasil por questões burocráticas que limitam a importação e utilização dos mesmos no território nacional. Objetivo: Neste estudo, foram propostos uma plataforma de avaliação baseada em alterações celulares inflamatórias ocasionadas pela exposição a agentes irritantes oculares, bem como o desenvolvimento de um modelo biomimético de córnea a partir de queratinócitos humanos, o qual foi caracterizado e avaliado quanto à aplicabilidade para aplicação em estudos de toxicidade ocular. Metodologia: O perfil inflamatório dos queratinócitos HaCat foi determinado após exposição à 13 diferentes substâncias químicas, com diferentes perfis de irritação ocular (irritantes e não irritantes), por meio das técnicas de Cytometric Bead Array (CBA) e ELISA. Os modelos 3D foram obtidos mediante o cultivo da linhagem HaCat sobre uma matriz de colágeno tipo I, em interface ar-líquido por cinco dias. A caracterização morfológica do modelo foi realizada por meio de coloração com Hematoxilina-eosina e a expressão de biomarcadores do tecido epitelial da córnea utilizando-se imunofluorescência indireta. A avaliação da capacidade preditiva do modelo foi realizada mediante exposição deste às substâncias supracitadas, com posterior avaliação da viabilidade tecidual. Por fim, a aplicabilidade do sistema para avaliação de misturas foi verificada avaliando-se cinco amostras de Hena de sobrancelha comercializadas, sendo consideradas não irritantes pela ausência de rotulagem adequada. Resultados e discussão: Foi estabelecida correlação qualitativa e quantitativa em relação ao perfil inflamatório e à severidade das substâncias teste avaliadas. O modelo desenvolvido apresentou morfologia e expressão de biomarcadores semelhantes aos padrões encontrados na córnea humana, de modo que a viabilidade tecidual após a exposição às substâncias reduziu de maneira diretamente proporcional ao potencial irritante das mesmas. Ademais, das cinco amostras de Hena avaliadas, o modelo classificou quatro como irritantes moderados ou leves. Conclusão: O modelo epitelial desenvolvido apresentou características morfológicas e funcionais semelhantes às da córnea humana, permitindo a distinção entre substâncias irritantes e não irritantes, sendo também aplicável à investigação da toxicidade ocular de misturas botânicas.