Os impactos em ambientes aquáticos causados pela presença de pesticidas, dentre eles os organofosforados, podem provocar lesões em peixes. Assim, os efeitos o organofosforado Azodrin® 400 cujo princípio ativo é o monocrotofós, sobre as brânquias de juvenis de Piaractus mesopotamicus (pacu), foram investigados. Os peixes foram aclimatados às condições laboratoriais por uma semana. Para a determinação da faixa subletal do organofosforado Azodrin® 400, foram testadas as concentrações 6 mg/L, 3 mg/L, 1,5 mg/L e 0,75 mg/L. A faixa subletal obtida ficou entre 0.75 mg/L e 1.5 mg/L. Assim, a concentração utilizada para os testes em nível subletal foi 1,08 mg/L do organofosforado. Após a aclimatação os peixes foram expostos, via hídrica, a 1,08 mg/L do organofosforado. Os tecidos foram coletadas nos tempos 1h, 4h, 12h, 24h, 48h, 72h e 96h de exposição. Os peixes foram sacrificados após secção medular e a segunda brânquia direita foi fixada em Alfac e processada para microscopia de luz. Os cortes foram corados em Hematoxilina e Eosina (HE) e as imagens foram capturadas em fotomicroscópio Olympus BX 51 acoplado a computador através do programa Image-Pro Express. Para o estudo ultraestrutural, amostras da segunda brânquia esquerda foram fixadas em Karnovsky e em tampão cacodilato 0,2 M, pH 7,2, pós fixadas em tetróxido de ósmio 2%, pH 7,2, tratadas com acetato de uranila, desidratadas em série alcoólica crescente e emblocadas em resina (Poly/EMBED 812). Os cortes ultrafinos foram contrastados com acetato de uranila 2% e Reynolds. Para o estudo ultraestrutural micrografias foram capturadas em microscópio eletrônico de transmissão e as patologias descritas e quantificadas foram: o descolamento epitelial, hiperplasia, fusão e aneurisma. O descolamento epitelial foi quantificado a partir de uma classificação estabelecida neste trabalho em mínimo, brando, moderado, severo e intenso. O descolamento foi encontrado em todos os tempos analisados, sendo mais intenso após 48 horas de exposição. Hiperplasia de células epiteliais foi mais freqüente após 24 horas de exposição. A fusão entre lamelas secundárias adjacentes foi predominante em 96 horas de exposição. O aneurisma foi mais freqüente após 12 horas de exposição. Estas histopatologias sugerem diminuição na eficiência das trocas gasosas com conseqüentes danos para a saúde dos juvenis de pacu

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:12:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 681.pdf: 349511 bytes, checksum: c11d45243856d9bf7b1881208789a609 (MD5) Previous issue date: 2004 / As bacias hidrográficas formadas pelos rios Paraíba do Sul e Rio Guandu são as principais fontes de abastecimento de água da cidade do Rio de Janeiro; e vem recebendo grande volume de resíduos industriais e domésticos levando a altos níveis de contaminação das águas, pondo em risco mais de 10 milhões de pessoas que utilizam a água destes rios para consumo e uso doméstico. Podemos encontrar estudos que mostram a contaminação por pesticidas organoclorados nestas águas uma vez que este rio corta regiões de intensa atividade agrícola. Este trabalho teve como objetivo implementar uma metodologia para análise de compostos organoclorados em água, eselecendo através de estudos sistemáticos de laboratório, que o método é adequado à finalidade, ou seja, suas características de desempenho são capazes de produzir resultados correspondentes às necessidades do problema analítico e que estes resultados, através de uma cadeia sucessiva de comparação com padrões nacionais e internacionais, possam ser reconhecidos como válidos. Para validação do método analítico, fez-se uma avaliação das fontes de incerteza envolvida no método.Também teve como objetivo fazer uma avaliação preliminar do grau de contaminação por estes compostos na água consumida na cidade do Rio de Janeiro de acordo com os limites de tolerância eselecidos pela portaria 518 do Ministério da Saúde. Esta portaria define o padrão de poilidade em água de distribuição para fins de consumo. Nesta avaliação adotou-se como foco de estudos uma região da cidade do Rio de Janeiro que fosse abastecida apenas pelo sistema guandu. Para esta avaliação coletou-se, de forma aleatória, 18 amostras de água chegando a um resultado que 2 destas apresentaram um nível de contaminação por beta e gama-HCH e outras 3 amostras apresentaram apenas gama-HCH.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:12:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 170.pdf: 2818039 bytes, checksum: edcd3108582a855857651e89e009720d (MD5) Previous issue date: 1999 / Devido à disseminaçao do uso de inseticidas no mundo moderno, pode-se observar uma grande ocorrência de intoxicaçoes humanas, quer intoxicaçoes agudas (principalmente ingestao acidental, em crianças, e tentativa de suicídio, em adultos), quer intoxicaçoes crônicas ocupacionais. Dentre os inseticidas mais importantes na toxicologia ocupacional, clínica e de urgência, encontram-se os compostos inibidores da colinesterase, os inseticidas carbamatos e organofosforados. Tais produtos têm uma alta toxicidade, sendo bem absorvidos por todas as vias. Sao responsáveis por um grande número de intoxicaçoes, muitas destas fatais. Atualmente, no Rio de Janeiro, um pesticida agrícola da classe dos carbamatos, o aldicarb, tem sido usado ilegalmente (como raticida), sendo responsável por um grande número de intoxicaçoes humanas. Propoe-se a fazer uma caracterizaçao epidemiológica do evento Intoxicaçoes por "Chumbinho" no Rio de Janeiro, e uma revisao clínica, laboratorial e terapêutica a respeito do tema, seguidas de uma discussao de 40 casos que deram entrada no Serviço de Emergência do Hospital Universitário Antônio Pedro, com suspeita de intoxicaçao por "Chumbinho". A partir desta análise, apresenta-se uma proposta de abordagem inicial destes pacientes, tentando, desta forma, contribuir para o entendimento destas intoxicaçoes, e para a diminuiçao da mortalidade referente às mesmas, além de promover um forum de discussao sobre um tema que vem preocupando profissionais de saúde em todo o Estado.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T12:47:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Os mosquitos são insetos dípteros pertencentes a família Culicidae. As fêmeas possuem o hábito hematofágico, sendo responsáveis pela transmissão de várias doenças como: viroses, filarioses e protozoonoses. O aparecimento de resistência aos inseticidas químicos e os danos ambientais causados por eles nos apontam para a necessidade de novas alternativas para o controle de insetos. Neste trabalho, a atividade larvicida e repelente de dezesete extratos vegetais e fúngicos foram testados contra Culex quinquefasciatus. Dos dezesete extratos hidroalcoólicos e hexânicos testados cinco apresentaram atividade larvicida: Polygala sabulosa, Pachyrkizys bolbosa, Schinnus terebinthifolius, Croton celtidifolius e Nerium oleander, sendo que os extratos de P. bolbosa manteve a atividade após dois meses de armazenamento em temperatura ambiente ao abrigo da luz. De posse destes resultados, foi realizada a extração clorofórmica, butanólica, etanólica com acetato de etila e hexânica. Observamos que extratos de C. limon e C. aurantifolia apresentaram atividade larvicida sendo mantida após dois meses a de C. limon. Observamos que os extratos clorofórmico, acetato de etila e hexânico de P. bolbosa e extrato clorofórmico de P. sabulosa mantiveram a atividade larvicida.e que nenhum dos extratos testados apresentou atividade de repelência. Conclui-se que os extratos de P. bolbosa, P. sabulosa e C. limon possuem compostos inseticidas contra larvas de Cx. quinquefasciatus e que essa atividade se encontra nas frações extraídas com os solventes, clorofórmio, acetato de etila e hexano.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2009. / Submitted by Luiza Moreira Camargo (luizaamc@gmail.com) on 2011-06-10T19:50:28Z No. of bitstreams: 1 2009_EduardoEspindolaFontouraJunior.pdf: 3625551 bytes, checksum: ecced175be2af1913d34e3b45cabb164 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2011-06-13T20:39:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EduardoEspindolaFontouraJunior.pdf: 3625551 bytes, checksum: ecced175be2af1913d34e3b45cabb164 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-13T20:39:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EduardoEspindolaFontouraJunior.pdf: 3625551 bytes, checksum: ecced175be2af1913d34e3b45cabb164 (MD5) / As intoxicações por agrotóxicos têm despertado intensa preocupação, sendo uma das causas mais importantes de morbi-mortalidade a nível mundial. Nos países em desenvolvimento, esses compostos são utilizados sem os cuidados necessários. Este é um estudo epidemiológico, descritivo e retrospectivo, desenvolvido através da coleta de dados secundários nas fichas de investigação de intoxicações por agrotóxicos. Teve como objetivo identificar a ocorrência de intoxicações por agrotóxicos, notificadas pelo Centro Integrado de Vigilância Toxicológica do Estado de Mato Grosso do Sul, no período 2001-2007. A classe dos inseticidas foi responsável por 67,7% do total de casos de intoxicação nas zonas de moradia. Dentre as notificações, 13,6% dos casos de óbitos ocorreram por acidente laboral e 86,4% por tentativa de suicídio, sendo que 27,6% eram do sexo feminino e 72,4% masculino. A faixa etária que apresentou maior incidência está entre 20-29 anos. O uso de organofosforados foi responsável por 52,7% dos casos de intoxicação, sendo que 63,5% dos casos ocorreram pela via oral e 71,6% dos casos necessitaram de internação. Ressalta-se a necessidade de capacitação para os profissionais de saúde e a todos que atuam nesta área, inclusive os trabalhadores rurais, com ênfase na educação, prevenção, atendimento e notificação das vítimas de intoxicações. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Pesticide intoxication has brought about great concern, since it is one of the main causes of morbimortality worldwide. In developing countries, for instance, such compounds have been used carelessly. This study follows an epidemic, descriptive, and retrospective approach, developed through collection of secondary data from investigation records on pesticide intoxication. We aimed at verifying the occurrence of pesticide intoxication, as documented by the Integrated Center of Toxicological Surveillance in the Mato Grosso do Sul State from 2001 to 2007. Insecticide was responsible for 67.7% of intoxication cases in residential areas. Among the documents, 13.6% of death cases were accidents during labor, and 86.4% were attempted suicide, subjects being 27.6% female and 72.4% male. The age group with major occurrence is within 20-29 years of age. Organophosphates were responsible for 52.7% of the intoxication cases, being 63.5% through oral ingestion; 71.6% of the cases needed hospital care. Training program is highly needed, focusing on health care professionals, as weall as on all professionals who work in related areas, including rural laborers. Education, prevention, support, and documentation of victims of intoxication should be emphasized.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2010. / Submitted by Matheus Denezine (matheusdenezine@yahoo.com.br) on 2011-06-20T15:39:17Z No. of bitstreams: 1 2010_BelinPolettoMezzomo.pdf: 1043387 bytes, checksum: 342051345079f5037684bd0db915c6b8 (MD5) / Rejected by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br), reason: meu caro, ficou faltando o ABSTRACT, favor inserir. Atente-se também para a referência e inserir também o co-orientador. Grato on 2011-06-20T18:57:55Z (GMT) / Submitted by Matheus Denezine (matheusdenezine@yahoo.com.br) on 2011-06-21T13:07:09Z No. of bitstreams: 1 2010_BelinPolettoMezzomo.pdf: 1043387 bytes, checksum: 342051345079f5037684bd0db915c6b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2011-06-21T13:11:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_BelinPolettoMezzomo.pdf: 1043387 bytes, checksum: 342051345079f5037684bd0db915c6b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-21T13:11:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_BelinPolettoMezzomo.pdf: 1043387 bytes, checksum: 342051345079f5037684bd0db915c6b8 (MD5) / As proteínas inseticidas (ICPs) do Bacillus thuringiensis (Bt) são δ-endotoxinas produzidas sob a forma das inclusões cristalinas geométricas durante a esporulação e designadas como proteínas cristais (Cry). As toxinas Bt conferem a este entomopatógeno propriedades inseticidas, sendo usadas em várias formulações de bioinseticidas rotineiramente empregadas no controle biológico de pragas agrícolas. Inseticidas Bt têm a vantagem de serem muito mais específicos do que os inseticidas químicos sintéticos de amplo espectro, e, portanto, são considerados como agentes de controle de insetos favoráveis ao meio ambiente. Entretanto, com a introdução no ambiente das plantas geneticamente modificadas que expressam as δ-endotoxinas (plantas transgênicas de colheitas), a disponibilidade biológica das proteínas Cry aumentou, e por questões de biossegurança seus efeitos devem ser rigorosamente investigados, sobretudo, para organismos não-alvo. As avaliações de plantas-Bt devem considerar tanto o seu potencial para produzir efeitos perigosos quanto a exposição de organismos sensíveis e não-alvo resultante da disseminação e persistência da toxina. Assim, objetivou-se avaliar, em camundongos albinos Swiss, a hematotoxicidade e genotoxicidade de quatro variedades de Bt esporos-cristais cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac e Cry2Aa, administrados em uma única dose oral (por gavagem) ou intraperitoneal de 27 mg/Kg (dose mínima), 136 mg/Kg (dose intermediária) ou 270 (dose máxima) mg/Kg, 24 h antes da eutanásia. Para a via oral, os efeitos de cada um dos esporos-cristais também foram testados após uma única administração de 72 h ou 7 dias antes da eutanásia; combinações binárias de Cry foram avaliadas na dose máxima, com uma única administração 24 h antes da eutanásia. Camundongos controle receberam água filtrada (controle negativo) ou ciclofosfamida (CP - controle positivo) a 27 mg/Kg. Para as avaliações de hematotoxicidade, amostras de sangue coletadas por punção cardíaca foram processadas em um analisador hematológico automatizado; para as análises de genotoxicidade, o teste do micronúcleo foi realizado em células da medula óssea dos camundongos. Os efeitos hematotóxicos e/ou genotóxicos variaram com a dose, o esporo-cristal estudado e a via de administração. Cry1Ac 136 mg/kg administrada intraperitonealmente foi a mais tóxica, provocando 100% de mortalidade nos camundongos, enquanto alterações hematológicas e da medula óssea ocorreram em função dos demais tratamentos em ambas as vias. Na via oral, as administrações com Cry provocaram hematototoxicidade seletiva para os 3 tempos de exposição, sendo particularmente tóxicas para a linhagem eritróide; leucocitose também foi observada, bem como redução significativa da proliferação de células da medula óssea, demonstrando efeitos citotóxicos, mas não genotóxicos. Tais efeitos persistiram nos outros tempos de exposição, tornando-se mais evidentes no tempo de 7 dias. Os mesmos tipos de resultados foram observados para as combinações binárias no tempo de exposição de 24 h. Assim, os resultados indicam que (1) as toxinas Cry não foram destruídas no estômago; (2) possivelmente, foram ativadas no intestino, e (3) persistiram no corpo dos animais. Também sugerem a possibilidade da existência de moléculas Cry-receptoras desconhecidas no intestino de vertebrados, ou pelo menos de receptores com alguma afinidade pelas toxinas Cry. A via intraperitoneal foi mais tóxica do que via oral, apresentando alterações leucocitárias mais graves, bem como citotoxicidade para a medula óssea e genotoxicidade. Assim, os resultados demonstraram que as toxinas Cry não são inócuas para vertebrados e que a disseminação e a persistência das toxinas Bt no ambiente em função do aumento das culturas transgênicas pode ter efeitos ecológicos e para a saúde perigosos. Além disso, levando-se em consideração a exposição contínua de humanos e animais (particularmente os domésticos) em níveis consideráveis de Bt através da dieta, os resultados sugerem que são necessários protocolos mais eficientes de avaliação, com exposição mais longa dos mamíferos a estas dietas, e envolvendo observações clínicas antes de concluir que os transgênicos Bt são seguros para a alimentação.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2013-11-20T20:32:43Z No. of bitstreams: 1 2013_CarlaLeticiaGedielRiveroWendt.pdf: 5138733 bytes, checksum: f3c904be8c390e9de07295c904c56054 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-21T10:26:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_CarlaLeticiaGedielRiveroWendt.pdf: 5138733 bytes, checksum: f3c904be8c390e9de07295c904c56054 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-21T10:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_CarlaLeticiaGedielRiveroWendt.pdf: 5138733 bytes, checksum: f3c904be8c390e9de07295c904c56054 (MD5) / A contaminação do meio ambiente aquático é motivo de muita preocupação para a sociedade e acadêmicos, pois a escassez deste recurso e a possibilidade de prejudicar a saúde do homem geram um grande interesse em desenvolver pesquisas para análises toxicológicas, visando prevenir maiores danos à saúde do ambiente aquático e do homem. Neste trabalho foram desenvolvidos estudos para avaliar os efeitos toxicológicos do hormônio 17α-metiltestosterona. No Brasil, este hormônio é utilizado para reverter fêmeas de Oreochomis niloticus em machos, com o objetivo de melhorar a produção para a comercialização do peixe. Entretanto, são necessários mais estudos como a realização de testes genotóxicos, testes sobre o desempenho reprodutivo e toxicológicos para verificarmos os possíveis riscos ao ambiente, espécie alvo e não alvo. Investigamos os efeitos do hormônio comercializado no Brasil (cMT) através de testes do cometa, micronúcleos, anormalidades nucleares, análises histopatológicas e desempenho reprodutivo. Os testes foram aplicados em duas espécies de peixes (Oreochromis niloticus e Astyanax bimaculatus) e uma de invertebrado (Biomphalaria glabrata) com exposição aguda e crônica. Foram realizados ensaios bioquímicos através da quantificação das enzimas colinesterase (ChE), lactato desidrogenase (LDH), Glutationa S-transferase (GST) e da vitelogenina (VTG). Além disso, analisamos os efeitos toxicológicos e de subletalidade do produto ativo da metiltestosterona (aMT) e do cMT através do teste de toxicidade em embriões e adultos de Danio rerio. Os nossos resultados mostraram que a cMT não causou genotoxicidade para as espécies testadas. As análises histológicas mostraram que os efeitos nas gônadas são variáveis, dependendo da espécie, dose e tempo de exposição. Encontramos alterações reprodutivas como atresia dos ovócitos, atraso da oogênese e inibição da produção de espermatozoides. No invertebrado Biomphalaria glabrata a cMT aumentou o número de desovas e estimulou a produção de espermatozoides na gônada hermafrodita. Nos testes com embriões e adultos de Danio rerio, tanto a aMT como a cMT foram teratogênicas nas concentrações testadas, onde encontramos alterações morfológicas no embrião como úlceras na pele, atraso do desenvolvimento da cabeça e problemas no equilíbrio natatório. Os testes de subletalidade toxicológica através da avaliação dos níveis enzimáticos mostrou que os embriões foram mais sensíveis aos efeitos da MT quando comparados com os efeitos nos adultos. Observou-se quedas nos níveis de ChE e LDH nos embriões de modo concentração-dependente. Nos adultos de D. rerio também houve queda de ChE, LDH e GST, porém menos acentuadas. A produção de VTG nos embriões foi inibida, enquanto nos adultos este ―endpoint‖ não sofreu alterações significativas. Os resultados encontrados mostram que a metiltestosterona apresenta riscos as espécies estudadas, sendo que são evidentes os problemas envolvendo o sistema reprodutivo, já que o produto testado é um esteroide androgênico. Os resultados dos níveis enzimáticos em zebrafish foram variados e por isso devemos continuar pesquisando sobre os efeitos deste hormônio em espécies não alvo. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chemical contamination of aquatic environments have caused a great concern around the world. In order to protect water resources from anthropogenic activities, many toxicological assays were developed. In this work, a series of bioassays were carried out to evaluate the toxicological effects of the hormone 17α-methyltestosterone (MT). In Brazil, this hormone is widely used in Oreochromis niloticus´s fish farms to induce monosex males, increasing the yield to the market. Bioassays of genotoxicity and reproductive toxicology were performed in Oreochromis niloticus (target organism) and in non-target organisms such as Astyanax bimaculatus, Danio rerio and Biomphalaria glabrata. Genotoxicity was evaluated through micronucleus test, nuclear abnormalities and comet assay. Reproductive toxicology was studied through gonadal histopathology and by the analysis of reproductive performance. Chemical biomarkers cholinesterase (ChE), lactate dehydrogenase (LDH), glutathione S-transferase (GST) and Vitelogenin (VTG) were measured in embryos and adults of D. rerio. Commercial MT (cMT) and a reference active MT (aMT) from Sigma-Aldrich were tested in chronic and subchronic assays. The results showed that MT did not induce genotoxicity to O. niloticus, A. binaculatus and D. rerio. The histological analysis showed a variability in the gonadal effects to the studied species, according to the exposure-time and exposure-concentration. Oocyte atresia, retardation of oogenesis and inhibition of sperm production were the main reproductive changes caused by MT in the tested-species. In the invertebrate Biomphalaria glabrata (Mollusk - Gastropoda) cMT increased the number of spawns and stimulated the production of sperm in the hermaphroditic gonad. In the embryo-larval toxicity assays carried out in D.rerio, both cMT and aMT showed teratogenicity, demonstrated by morphological abnormalities in the embryos, skin ulcers and delay of development. In the larvae, it was observed head malformations, loss of balance and alteration in swimming behavior. Results of chemical biomarkers on D. rerio showed enzyme inhibition for ChE and LDH in embryos and ChE, LDH and GST inhibition in adults, however for embryos such decrease were more dramatic than adults. VTG was already decreased after exposure to MT. In conclusion, MT did not show mutagenic/genotoxic potential to the exposed species, however it was highly active as an endocrine disruptors causing changes in the reproduction of fish and mollusks.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-16T21:39:34Z No. of bitstreams: 1 TESE Thâmarah de Albuquerque Lima.pdf: 2857467 bytes, checksum: bb3a68bcfa7cd5f2b12742db8b1210a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T21:39:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Thâmarah de Albuquerque Lima.pdf: 2857467 bytes, checksum: bb3a68bcfa7cd5f2b12742db8b1210a3 (MD5) Previous issue date: 2016-03-29 / FACEPE / Lectinas, proteínas que interagem com carboidratos, isoladas da entrecasca (MuBL), cerne (MuHL) e folha (MuLL) de Myracrodruon urundeuva apresentaram atividade termiticida contra cupins operários da espécie Nasutitermes corniger. O presente trabalho teve como objetivo investigar mecanismos da ação termiticida dessas lectinas. Inicialmente, foi realizado um estudo de caracterização das atividades enzimáticas encontradas no trato digestivo de operários, de forma comparativa com os soldados da mesma espécie. Extratos de intestinos dos cupins foram avaliados quanto à presença de celulases (endoglucanases, exoglucanase e β-glicosidades), hemicelulases (β-xilosidases, α-L-arabinofuranosidase e β-D-xilanase), amilases e proteases (proteases totais, tripsina, quimotripsina e queratinase). A primeira avaliação dos mecanismos de ação correspondeu à determinação do efeito de MuBL e MuLL sobre as atividades enzimáticas detectadas no intestino dos operários. Na segunda etapa, foram investigadas possíveis proteínas que sejam alvos de ligação das lectinas no intestino dos operários. Para tanto, extratos de intestino foram submetidos à cromatografia em matrizes MuBL-Sepharose e MuLL-Sepharose. As proteínas que adsorveram à matriz foram submetidas à eletroforese e espectrometria de massas para separação e identificação. Na última etapa, operários foram submetidos por 48 h a dietas artificiais compostas por matriz de celulose e suplementadas ou não com MuBL, MuHL ou MuLL (em suas respectivas CL50); em seguida, os insetos tiveram seu intestino médio dissecados, fixados e submetidos à análise histológica, contagem de células digestivas e regenerativas e visualização de células em proliferação, células enteroendócrinas, células em apoptose e da matriz peritrófica. Todas as atividades enzimáticas avaliadas foram detectadas nos extratos de operários e soldados, sendo endoglucanase e β-D-xilanase as principais atividades detectadas. As atividades enzimáticas de operários e soldados foram detectadas em níveis diferentes e apresentaram diferentes respostas a variações de temperatura e pH indicando que as castas possuem aparatos digestivos distintos. MuBL e MuLL foram capazes de modular diferentemente as atividades enzimáticas do trato digestivo dos operários. A atividade de exoglucanase foi neutralizada por MuBL enquanto MuLL promoveu aumento dessa atividade. Atividade de α-L-arabinofuranosidase foi inibida por MuLL e não afetada por MuBL. Ambas as lectinas estimularam a atividade de α-amilase e inibiram as atividades de proteases. As matrizes MuBL-Sepharose e MuLL-Sepharose ligaram a proteína apolipoforina. MuBL-Sepharose também ligou proteína com homologia a transportadores do tipo ABC (ATP-binding cassette) e tripsina. MuBL, MuHL e MuLL causaram forte desorganização no epitélio do intestino médio dos operários, reduzindo o número de células digestivas, regenerativas e enteroendócrinas. A ingestão das lectinas resultou em morte das células intestinais por apoptose. A matriz peritrófica foi visualizada nos tratamentos controle e com as lectinas, contudo a marcação foi menos intensa em intestinos de cupins que ingeriram MuBL. Os resultados mostram que as lectinas foram capazes de cruzar essa matriz peritrófica e causar danos às células do epitélio intestinal. Em conclusão, podemos afirmar que: 1) operários e soldados de N. corniger apresentam aparatos digestivos diferenciados, com elevada eficiência para digerir biomassa celulósica; 2) a ação termiticida das lectinas MuBL e MuLL pode estar relacionada com a modulação de processos digestivos e absortivos no trato intestinal de operários, tendo como alvos enzimas digestivas, a proteína transportadora apolipoforina e transportadores ABC; 3) MuBL, MuHL e MuLL atuam promovendo desestruturação do epitélio intestinal de operários, causando morte de células digestivas, regenerativas e enteroendócrinas. Esses resultados constituem os primeiros relatos sobre alvos moleculares e celulares de lectinas termiticidas. / Lectins, proteins that interact with carbohydrates, isolated from the bark (MuBL), heartwood (MuHL) and leaf (MuLL) of Myracrodruon urundeuva showed termiticidal activity against workers of Nasutitermes corniger termite. This study aimed to investigate mechanisms of the termiticidal action of these lectins. Initially, a study was conducted in order to characterize the enzyme activities found in the digestive tract of workers, in comparison with the soldiers of the same species. Termite gut extracts were assessed for the presence of cellulases (endoglucanase, exoglucanase, and β-glucosidase), hemicellulases (β-xylosidase, α-L-arabinofuranosidase and β-D-xylanase), amylases and proteases (total protease, trypsin, chymotrypsin and keratinase). The first evaluation of the action mechanisms corresponded to the determination of MuBL and MuLL effects on the enzyme activities detected in the gut of the workers. In the second step, we investigated possible proteins that would be lectin binding targets in the gut of workers. Therefore, worker gut extracts were subjected to chromatographies on MuBL-Sepharose and MuLL-Sepharose matrices. Proteins that adsorbed to the matrices were submitted to electrophoresis and mass spectrometry for separation and identification. In the last step, workers were submitted for 48 h to artificial diets composed of cellulose matrix and supplemented or not with MuBL, MuHL or MuLL (at their respective LC50); then, the insects had their midguts dissected, fixed and evaluated by histological analysis, counting of digestive and regenerative cells, and visualization of proliferative, enteroendocrine and apoptotic cells, as well as of peritrophic matrix. All the enzyme activities evaluated were detected in worker and soldier extracts, being endoglucanase and β-D-xylanase the main activities detected. The enzyme activities of workers and soldiers were detected at different levels and showed different responses to temperature and pH, indicating that these castes have different digestive apparatuses. MuBL and MuLL were able to modulate differently the enzyme activities from the digestive tract of workers. MuBL neutralized the exoglucanase activity while MuLL promoted increase in this activity. α-L-arabinofuranosidase activity was inhibited by MuLL and was not affected by MuBL. Both lectins stimulated the α-amylase activity and inhibit the activity of proteases. The MuBL-Sepharose and MuLL-Sepharose matrices bound the protein apolipophorin. MuBL-Sepharose also bound proteins with homology to ABC (ATP-binding cassette) transporters and trypsin. MuBL, MuHL and MuLL caused strong disorganization in the midgut epithelium of workers, reducing the number of digestive, regenerative and enteroendocrine cells. Ingestion of lectins resulted in death of intestinal cells by apoptosis. The peritrophic matrix was visualized in the control and lectin treatments but the labeling was less intense in gut of termites that ingested MuBL. These results show that the lectins were able to cross this peritrophic matrix and cause damage to the cells of the midgut epithelium. In conclusion, we can state that: 1) N. corniger workers and soldiers have different digestive apparatus, with high efficiency to digest cellulosic biomass; 2) the termiticidal action of MuBL and MuLL can be linked to modulation of digestive and absorptive processes in the intestinal tract of workers, targeting digestive enzymes, the transporter protein apolipophorin and ABC transporters; 3) MuBL, MuHL and MuLL promoted disruption of the midgut epithelium of workers, causing death of digestive, regenerative and enteroendocrine cells. These results are the first reports on molecular and cellular targets of termiticidal lectins.

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T03:20:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_MarciaDias_M.pdf: 2104234 bytes, checksum: f6ddb940e92ef6ade2a98d85f613bf58 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Neste trabalho estudamos alguns dos efeitos dos inseticidas, organofosforados e carbamatos, sobre o sistema imunológico. Foram estudados 40 indivíduos expostos ocupacionalmente a estes inseticidas e 40 indivíduos-controle, sem história de exposição ocupacional a estes compostos. A atividade das colinesterases no sangue foi utilizada como indicador de exposição. Os testes imunológicos utilizados foram: . resposta imune-inespecífica avaliada através da atividade fagocitária e lítica dos neutrófilos tfente aos antígenos Candida albicans e Candida pseudotropicalis, capacidade do neutrófilo se reduzir o corante nitroblue tetrazolium (NBT) e locomoção de neutrófilos (Quimiotaxia) resposta imune-humoral avaliada através das dosagens séricas das imunoglobulinas IgG, IgA e IgM. Os resultados demonstraram uma redução significativa na atividade lítica de neutrófilos, tfente ao antígeno C. albicans nos indivíduos expostos aos inseticidas; no entanto, a atividade fagocitária estava normal. As atividades fagocitária e lítica dos neutrófilos frente ao antígeno C. pseudotropicalis, permaneceram inalteradas. Observaamos também uma diminuição significativa na produção de superóxidos, avaliada pelo teste de redução do corante NBT. Através da quimiotaxia, observamos uma diminuição significativa na locomoção de leucócitos. Em relação às dosagens séricas da imunoglobulinas, não observamos nenhuma alteração quando comparadas ao grupo controle / Abstract: In this work, some effects of the organophosphate and carbamate insecticides on the immune response were investigated. We have studied forty workers ocupationally exposed to these insecticides and forty non-exposed control individuaIs. To monitor exposure we used cholinesterase activity in red bfood cells as an indicator of exposure. Phagocytosis and killing of Candida a/bicans and Candida pseudotropicalis by neutrophils, neutrophil chemotaxis, nitroblue tetrazolium reduction and leve1s of IgG, IgM and 19A were measured. The results obtained demonstrated that the phagocytic function of neutrophi1s in exposed workers did not differ from that of the control individuals. On the other hand, lysis of C. à/bicans by neutrophi1s was significantly decreased even in those workers with normal cholinesterase activity. Conversely, the lysis of C. pseudotropicalis by neutrophils was not altered. We also observed a significant decrease of nitrqblue tetrazolium reduction and neutrophil chemotaxis in the exposed group. Regarding the levels of IgM, 19A and IgG we observed no significant alterations as compared to controls / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências

Orientador: Carlos Fernando S. Andrade / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T18:20:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_LucianaUrbanodos_M.pdf: 4510361 bytes, checksum: 0a5a452200effa839f1b5a1c677a9813 (MD5) Previous issue date: 1997 / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas