LIMA, G. P. G. Purificação, caracterização bioquímica e atividade biológica in vitro contra insetos praga de um novo inibidor de tripsina isolado de sementes de Sapindus saponaria L. (Sapindaceae). 2012. 122 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-03-12T15:00:00Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_gpglima.pdf: 2370771 bytes, checksum: 509ae0531057d53f967b325467f88d5c (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-03-29T17:18:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_gpglima.pdf: 2370771 bytes, checksum: 509ae0531057d53f967b325467f88d5c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T17:18:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_gpglima.pdf: 2370771 bytes, checksum: 509ae0531057d53f967b325467f88d5c (MD5) Previous issue date: 2012 / Environmental toxicity, low biodegradability and increased resistance in agricultural pest insects and in insect vectors of diseases to insecticides traditionally used for their control have encouraged the development of chemical alternatives with greater specificity and biodegradability especially from plants. In this way, the present study aimed the purification, characterization and evaluation of activity towards pest insect digestive enzymes of a new trypsin inhibitor obtained from Sapindus saponaria seeds. This new trypsin inhibitor obtained from S. saponaria seeds (SSTI2) belongs to Potato I inhibitor family and was purified by protein precipitation with trichloroacetic acid, affinity chromatography and reverse phase chromatography using UFLC system. The native inhibitor and its fragments generated by enzymatic treatment with trypsin and pepsin were analyzed and sequenced by MALDI-TOF and ESI-TOF mass spectrometry, determining its accurate molecular mass (MM = 7571, 976 Da) and primary structure (64 of 69 amino acids). The SSTI2 showed an IC50 of 8.3 x 10-2 μmol.L-1 against bovine trypsin, and a much lower inhibitory activity on the enzymes chymotrypsin (13.24 ± 0.28%) and papain (5.28 ± 0 , 42%), but was unable to inhibit proteolysis promoted by bromelain. In spite to show moderate inhibition of total digestive enzymes (4.74 ± 0.45% to 56.06 ± 1.41%), the inhibitor was very effective upon trypsin-like enzymes present in Aedes aegypti (92.44 ± 0.99%), Anthonomus grandis (77.93 ± 0.12%), Anticarsia gemmatalis ( 32.21 ± 0.57%) and Spodoptera frugiperda (71.44 ± 1.23%) guts. This strong inhibitory effect of SSTI2 on the catalytic activity of trypsin-like peptidases of insect’s midguts suggests a possible suppressive effect on development and survival of insects fed with diets containing the inhibitor. Thus, future in vivo assays and evaluation of other biochemical properties will be important to establish the potential biotechnological application of SSTI2, especially for the combat of Ae. aegypti, A. grandis and An. gemmatalis. Furthermore, the sequence of SSTI2 elucidated in this study allows the chemical synthesis, cloning of coding gene sequence and heterologous expression of this potential new biotechnological tool. / A toxicidade ao meio ambiente, a baixa biodegrabilidade e a crescente resistência de insetos praga da agricultura e de insetos vetores de doenças aos inseticidas tradicionalmente utilizados tem estimulado o desenvolvimento de alternativas com maior biodegradabilidade e especificidade, especialmente de origem vegetal. Nesse sentido, o presente estudo consistiu na purificação, caracterização e avaliação do efeito biológico in vitro de um novo inibidor de tripsina obtido das sementes de Sapindus saponaria sobre as enzimas digestivas de insetos. Através de precipitação com ácido tricloroacético (TCA), cromatografia de afinidade à tripsina e cromatografia de fase reversa em sistema UFLC, foi purificado um novo inibidor de tripsina (SSTI2) pertencente ao grupo de inibidores do tipo Batata I, uma categoria de inibidores de peptidases serínicas com reconhecido efeito tóxico sobre insetos. O inibidor nativo e fragmentos desse gerados por tratamento enzimático com tripsina e pepsina foram analisados e sequenciados por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF e ESI-TOF, determinando assim a sua massa molecular acurada (MM = 7571, 976 Da) e elucidando a sua estrutura primária (64/69 aminoácidos). O inibidor apresentou uma IC50 de 8,3 x 10-2 μmol.L-1 contra a tripsina bovina, mas apresentou baixa atividade inibitória sobre as enzimas quimotripsina (13,24 ± 0,28%) e papaína (5,28 ± 0,42%), e não foi capaz de inibir a proteólise promovida pela bromelaína. O SSTI2 inibiu moderadamente a atividade catalítica das enzimas digestivas totais dos insetos, com percentual de inibição variando entre 4,74 ± 0,45% a 56,06 ± 1,41%. No entanto, o inibidor foi eficaz em atuar sobre as enzimas digestivas do tipo tripsina presentes nos intestinos dos insetos Aedes aegypti (92,44 ± 0,99%), Anthonomus grandis (77,93 ± 0,12%), Anticarsia gemmatalis (32,21 ± 0,57%) e Spodoptera frugiperda (71,44 ± 1,23%). Esse expressivo efeito inibitório do SSTI2 sobre a atividade catalítica das peptidases do tipo tripsina provenientes do intestino médio dos insetos sugere um possível efeito supressor no desenvolvimento e sobrevivência de insetos alimentados com dietas contendo o inibidor. Assim, futuros estudos in vivo e avaliações de outras propriedades bioquímicas do inibidor serão importantes para determinar a potencial aplicação biotecnológica do SSTI2, especialmente para o combate de A. aegypti, A. grandis e A. gemmatalis. Além disso, a sequência do SSTI2 elucidada nesse estudo possibilita a síntese, clonagem do gene codificante e expressão heteróloga dessa potencial ferramenta biotecnológica.

The family Culicidae has great public health importance for being composed by haematophagous insects in majority, which can be vector of diseases for the human being and other vertebrates. The knowledge about culicideos fauna, besides of data about various species that compose the Caatinga biome, can also bring information about species that are vector of pathogens, providing important tools in case of eventual epidemic outbreak at the region. The Caatinga biome occupies around 55% of all northeast region, representing 11% of Brazil s surface, and holds the position of the less preserved biome of the country, relative to its total area. This work aimed to realize a mosquitoes fauna survey, as well as ecologic aspects analysis for adult species in two areas of Caatinga and immature in three semi permanent breeding grounds. The study was realized in the city of Poço Redondo, semi-arid of Sergipe, where the Unidade de Conservação Monumento Natural Grota do Angico is located under exclusive domain of Caatinga. Collects were made monthly in two areas of Caatinga, between 5 p.m. and 8 p.m. using the Shannon trap for adults, and in three breeding grounds with plastic dipper method for mosquito larvae collects. On ecologic aspects analysis were used the Shannon diversity index, Pielou s equitability, Berger-Parker dominance, Nonmetric multidimensional scaling (NMDS) for species composition. A number of 1788 specimens were collected on total among adults and immature, distributed on ten genus, Aedes, Aedomyia, Anopheles, Coquilettidia, Culex, Haemagogus, Mansonia, Ochlerotatus, Psorophora and Uranotaenia and 21 species. The adults resulted in 583 specimens, 268 from shrubby Caatinga and 315 from arboreal Caatinga, dominant species were Mansonia (Man) indubitans and Ochlerotatus (Och) scapularis,there was no difference between these areas on species composition or abundance, however, the arboreal Caatinga was richer in species. In relation to the immature, breeding sede captured the larger number of specimens (N=590), followed by breeding cancela (N=436) and the smaller value on breeding trilha (N=179). Species composition did not show difference between breedings, dominant species were Anopheles (Nys) albitarsis and Culex (Cx) chidesteri. The presence of mosquitoes species with vector importance, some of that capable to adapt on anthropic ambient, associated with lack of knowledge about Caatinga s mosquitoes suggests future studies to avoid epidemiologic outbreaks in the Unidade de conservação Monumento Natural Grota do Angico . / A família Culicidae apresenta grande importância em saúde pública por ser composta de insetos em sua maioria hematófagos, os quais podem veicular diversas doenças para o homem e demais vertebrados. O conhecimento sobre a fauna de culicídeos, além de gerar informações sobre as espécies que compõem o bioma Caatinga, permite conhecer espécies vetoras de patógenos fornecendo importantes ferramentas em caso de eventuais surtos epidêmicos na região. O bioma Caatinga ocupa cerca 55% de toda a região Nordeste, representando 11% da superfície do Brasil, e detém a posição de bioma menos conservado em relação à área total. O presente trabalho objetivou realizar levantamento da fauna de mosquitos, bem como análise de aspectos ecológicos para as espécies de adultos em duas áreas de Caatinga e espécies de imaturos em três criadouros semipermanentes de solo. O estudo foi realizado no município de Poço Redondo, situado no alto sertão sergipano, na unidade de conservação Monumento Natural Grota do Angico, sob o domínio exclusivo de Caatinga. As coletas foram realizadas mensalmente em dois ambientes de Caatinga das 17 às 20 horas através de armadilha de Shannon para adultos, e em três criadouros de solo utilizando metodologia de concha para coleta de larvas. Para análise de aspectos ecológicos foram utilizados os índices de diversidade de Shannon, equitabilidade de Pielou, dominância de Berger-Parker e escalonamento multidimensional não métrico (NMDS) para composição de espécies. No total foram coletados 1788 espécimes entre adultos e imaturos, distribuídos em dez gêneros, Aedes, Aedomyia, Anopheles, Coquilettidia, Culex, Haemagogus, Mansonia, Ochlerotatus, Psorophora e Uranotaenia e 21 espécies. Os adultos somaram 583 exemplares, sendo 268 na Caatinga arbustiva e 315 na Caatinga arbórea, as espécies dominantes foram Mansonia (Man) indubitans e Ochlerotatus (Och) scapularis, a composição de espécies e a abundância não diferiram entre as áreas, no entanto a Caatinga arbórea apresentou maior riqueza de espécies. Em relação aos imaturos, no criadouro sede foi capturado maior número de espécimes (N=590), seguido do criadouro cancela (N= 436) e os menores valores no criadouro trilha (N= 179). A composição das espécies não variou entre as áreas, as espécies dominantes para imaturos foram Anopheles (Nys) albitarsis e Culex (Cx) chidesteri. A presença de espécies com importância vetorial, dentre elas algumas com capacidade de adaptação ao ambiente antropizado, aliada ao déficit de conhecimento sobre os mosquitos da Caatinga sugerem continuidade de estudos para evitar que quadros epidemiológicos possam se instalar na unidade de conservação Monumento Natural Grota do Angico.

Orientador: Patrícia Jacqueline Thyssen / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T13:21:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grella_MaiconDiego_M.pdf: 5100969 bytes, checksum: 37d1acc8cdeb7eba3791c8e14b39db4d (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Muitos levantamentos faunísticos de dípteros que foram e têm sido realizados atualmente no Brasil são precários por relatarem a presença de espécimes até níveis taxonômicos superiores ao de espécie. Dentre uma série de dificuldades que contribuem para isso estão a ausência de chaves taxonômicas para certos grupos e a insuficiência na descrição de caracteres em algumas das chaves existentes. Assim, o avanço de quaisquer outros trabalhos que queiram investigar a biologia, ecologia ou dinâmica desses organismos na natureza ou em laboratório estará comprometido, já que não é possível associar tais estudos a categorias abstratas tal como 'morfotipos'. As chaves taxonômicas interativas, elaboradas com auxílio de programas computacionais, quando comparadas às convencionais podem ser extremamente vantajosas por apresentarem banco de imagens, glossário de termos técnicos, serem mais dinâmicas no processo de inserção de novos caracteres, além de permitirem ao usuário a seleção de qualquer caráter sem uma ordem pré-determinada, garantindo maior flexibilidade durante o processo de identificação. Para elaboração das chaves interativas usando a plataforma JAVA e software Lucid® foram levantados caracteres e estados de caracteres para 20 espécies de moscas (Diptera: Calliphoridae) registradas para o Brasil, quer sejam de importância médica, veterinária ou forense. A identificação de algumas espécies de califorídeos usando a plataforma computacional não foi significativamente mais rápida quando comparada a feita por meio das chaves dicotômicas tradicionais, porém o número de erros de diagnóstico foi menor entre os usuários de chaves interativas. De qualquer modo, a chave interativa ainda pode ser superior por apresentar opções tais como exclusão, seleção ou priorização de caracteres sem exigir que o usuário siga uma ordem específica ou pré-determinada. O desenvolvimento de quaisquer ferramentas que auxiliem na busca pela identificação de um organismo, principalmente entre estudantes e profissionais não taxonomistas, é ainda mais valioso por fornecer um melhor entendimento para o conhecimento da diversidade de determinados grupos e para a descoberta de espécies novas na natureza. O trabalho final encontra-se disponível e publicado na web / Abstract: Many of the dipteran faunistic surveys carried out in the past, and the ones being conducted at the present in Brazil are precarious, because they report on the presence of specimens at taxonomic levels higher than species. The reasons for that are the lack of taxonomic keys to certain groups, and insufficient descriptions of morphological characters in some of the extant keys. Thus, the success of any study that aims to investigate the biology, ecology, and dynamics of these organisms in nature or in laboratory will be damaged, because it is not possible to associate these studies with abstract categories such as 'morphotypes'. Interactive taxonomic keys, prepared with the aid of computer programs, can be extremely advantageous when compared to conventional keys, because they contain image banks, glossary of technical terms, are more dynamic in the process of adding new characters, and allow the selection of any character without a predetermined order, ensuring greater flexibility during the identification process. For the production of interactive keys using JAVA platform and Lucid¿ software, we determined characters and states of characters for 20 species of flies (Diptera: Calliphoridae) of medical, veterinary and forensic importance from Brazil. The identification process using a Java platform was not significantly faster when compared to that done by traditional dichotomous keys, but the number of diagnostic errors was lower among users of interactive keys. Anyway, the interactive key may be superior to present options such as deletion, selection or prioritization of characters without requiring the user to follow a specific or predetermined order. The development of any tools that can aid in the identification of an organism, especially for students and non-taxonomist professionals, is even more valuable by providing a better understanding on the diversity of certain groups and on the discovery of new species in nature. The final work will be available and posted on the web / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientador: Edson Luiz Lopes Baldin / Banca: Regiane Cristina Oliveira de F.Bueno / Banca: Carlos Frederico Wilcken / Banca: André Luiz Lourenção / Banca: Jaqueline Magalhães Pereira / Resumo: No Brasil a soja, Glycine max (Linnaeus) Merril, é a principal oleaginosa, responsável pela geração de divisas, além de ser a principal cultura produtora de óleo vegetal e representar importante fonte de proteínas. Durante o desenvolvimento, a cultura é atacada por inúmeros insetos-praga, com destaque para a lagarta-falsa-medideira, Chrysodeixis includens (Walker) (Lepidoptera: Noctuidae), que tem causado danos às plantas durante a fase vegetativa e reprodutiva. Os sojicultores têm como a base para o controle dessa praga a aplicação de produtos químicos, os quais têm elevado o custo de produção. Considerando-se a importância desse inseto para a cultura da soja, aliado aos efeitos indesejáveis decorrentes da aplicação intensiva de inseticidas químicos para o controle, este trabalho teve como objetivo avaliar genótipos de soja frente ao ataque de C. includens, visando verificar a expressão de resistência. Foram realizados ensaios com mariposas (atratividade e preferência para oviposição) em casa de vegetação e com lagartas (antibiose) em condições de laboratório (T= 26 ± 2ºC, UR= 65 ± 10% e fotoperíodo= 14 h), além de análises morfológica, física e anatômica das folhas de soja. Foram avaliados os genótipos: 'IAC 17', 'IAC 18', 'IAC 19', 'IAC 23', 'IAC 24', 'IAC 100', IAC 74-2832, IAC 78-2318, PI 171451, PI 229358, PI 227687, PI 274453, PI 274454, D 75-10169, L 1-1-01, 'Coodetec-208' e 'Conquista'. A preferência para oviposição foi avaliada em testes com e sem chance de escolha no interior de casa de vegetação. A antibiose foi avaliada em laboratório (T= 26 ± 2ºC, UR= 65 ± 10% e fotoperíodo= 14 h) confinando-se lagartas de C. includens nos diferentes genótipos e avaliando-se a duração total da fase larval; a viabilidade larval (%); a viabilidade... / Abstract: In Brazil, soybean, Glycine max (Linnaeus) Merrill, is the main oilseed, responsible for the generation of foreign exchange, besides being the main producing culture of vegetable oil and represent an important source of protein. During development, the crops are attacked by numerous insect pests, especially the soybean looper, Chrysodeixis includens (Walker) (Lepidoptera: Noctuidae), which has caused damage to plants during the vegetative and reproductive stage. Soybean farmers have as the basis for control of this pest the application of chemicals, which have high production costs. Considering the importance of this insect for the soybean crop, coupled with the undesirable effects of intensive application of chemical insecticides for control, this study aimed to evaluate soybean genotypes against attack C. includens, to check the expression of resistance. Trials with moths (attractiveness and preference for oviposition) under greenhouse and larvae (antibiosis) under laboratory conditions (T = 26 ± 2 º C, UR = 65 ± 10% and photoperiod = 14 h) were performed, and the analysis morphological, physics and anatomy of soybean leaves. Genotypes were evaluated: 'IAC 17', 'IAC 18', 'IAC 19', 'IAC 23', 'IAC 24', 'IAC 100', IAC 74-2832, IAC 78-2318, PI 171451, PI 229358, PI 227687, PI 274453, PI 274454, D 75- 10169, L 1-1-01, 'Coodetec-208' and 'Conquista'. The oviposition preference was evaluated in tests with and without choice inside the greenhouse. The antibiosis was evaluated under laboratory conditions (T = 26 ± 2 º C, UR = 65 ± 10% and photoperiod = 14 h) confining larvae of C. includens in different genotypes and evaluating the total duration of the larval... / Doutor

Orientador: Edson Luiz Baldin / Banca: André Luiz Lourenção / Banca: Carlos Frederico Wilcken / Resumo: O Brasil se destaca como um importante produtor de feijão (Phaseolus vulgaris). Porém, o ataque de diversos insetos-praga tem comprometido sua produtividade a campo. A lagarta-falsa-medideira, Chrysodeixis includens (Walker) (Lepidoptera: Noctuidae), é considerada uma espécie de importância crescente para a cultura do feijão, devido aos danos ocasionados nas últimas safras. Diante disso, surge a necessidade de estudar métodos de controle complementares ao método químico convencional, que apresentem eficiência e ao mesmo tempo, sejam menos agressivos ao meio ambiente. O presente trabalho teve como objetivo avaliar diferentes genótipos de feijoeiro, visando à seleção de materiais resistentes frente ao ataque de C. includens. Inicialmente, foram realizados testes preliminares com 59 genótipos, os quais foram divididos em três grupos, de acordo com a coloração das folhas (escura, clara e intermediária). A antixenose (oviposição) foi avaliada em teste com chance de escolha. Foram selecionados 12 materiais com potencial para resistência e dois padrões comerciais suscetíveis, para as etapas subsequentes. Com esses genótipos foram realizados ensaios de antixenose (oviposição), no interior de casa de vegetação, além de atratividade, antixenose (alimentação) e biologia com lagartas, em condições de laboratório (T= 26 ± 2º C, UR= 65 ± 10 % e fotoperíodo= 14 h). Com relação à oviposição de C. includens em teste sem chance de escolha, os genótipos 'IAC Jabola', Arcelina 1, 'IAC Boreal', 'Flor de Mayo' e 'IAC Formoso' apresentaram resistência do tipo antixenose (oviposição). Discos foliares dos 14 genótipos avaliados foram igualmente atrativos a lagartas de terceiro ínstar após seis horas de exposição. Em testes com e sem chance de escolha, os genótipos Arcelina 4, 2 'BRS Horizonte', 'Pérola', H9A102-1-1-1-52, 'IAC Boreal', 'IAC Harmonia ... / Abstract: Brazil is one of the biggest producer of common bean (Phaseolus vulgaris), but the attack of several insect pests has compromised their productivity in the field. The soybean looper Chrysodeixis includens (Walker) (Lepidoptera: Noctuidae) species is considered to be of increasing importance in growing bean due to the losses caused in the last harvests. Therefore, it is necessary to study additional control methods to the conventional chemical one, which is both efficient and less harmful to the environment. The objective of this paper is to evaluate different genotypes of bean aiming at the choice of materials resistant to the attack of C. includens. At first, preliminary tests were performed with 59 genotypes which were divided into three groups according to the color of the leafs (dark, light, and intermediate). The antixenosis (oviposition) was evaluated in a test with choice chance. 12 materials with potential to resistance and two susceptible commercial standards were selected for the following steps. With such genotypes antixenosis (oviposition) assays were performed inside the greenhouse, in addition to assays of attractiveness, antixenosis (feeding), and biology with loopers in lab conditions (T= 26 ± 2º C, RH= 65 ± 10 % and photoperiod = 14 h). Regarding oviposition of C. includes in a test without choice, the genotypes 'IAC Jabola', Arcelina 1, 'IAC Boreal', 'Flor de Mayo', 'IAC Formoso', 'Rubi', and 'IAPAR 44' presented resistance type antixenosis (oviposition). After six hours of exposure, leaf discs of 14 genotypes evaluated were equally attractive to third instar loopers. In tests with and without choice chance, the genotypes Arcelina 4, 'BRS Horizonte', 'Pérola', H9A102-1-1-1-52, 'IAC Boreal', 'IAC Harmonia', and 'IAC Formoso' were less consumed by third instar loopers. In the biology assay, the genotypes 'IAC Boreal', 'IAC Harmonia... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:58:14Z : No. of bitstreams: 1 000754266.pdf: 1934909 bytes, checksum: e561fe663a3222db7f013bbec7d20de0 (MD5) / O Brasil se destaca como um importante produtor de feijão (Phaseolus vulgaris). Porém, o ataque de diversos insetos-praga tem comprometido sua produtividade a campo. A lagarta-falsa-medideira, Chrysodeixis includens (Walker) (Lepidoptera: Noctuidae), é considerada uma espécie de importância crescente para a cultura do feijão, devido aos danos ocasionados nas últimas safras. Diante disso, surge a necessidade de estudar métodos de controle complementares ao método químico convencional, que apresentem eficiência e ao mesmo tempo, sejam menos agressivos ao meio ambiente. O presente trabalho teve como objetivo avaliar diferentes genótipos de feijoeiro, visando à seleção de materiais resistentes frente ao ataque de C. includens. Inicialmente, foram realizados testes preliminares com 59 genótipos, os quais foram divididos em três grupos, de acordo com a coloração das folhas (escura, clara e intermediária). A antixenose (oviposição) foi avaliada em teste com chance de escolha. Foram selecionados 12 materiais com potencial para resistência e dois padrões comerciais suscetíveis, para as etapas subsequentes. Com esses genótipos foram realizados ensaios de antixenose (oviposição), no interior de casa de vegetação, além de atratividade, antixenose (alimentação) e biologia com lagartas, em condições de laboratório (T= 26 ± 2º C, UR= 65 ± 10 % e fotoperíodo= 14 h). Com relação à oviposição de C. includens em teste sem chance de escolha, os genótipos ‘IAC Jabola’, Arcelina 1, ‘IAC Boreal’, ‘Flor de Mayo’ e ‘IAC Formoso’ apresentaram resistência do tipo antixenose (oviposição). Discos foliares dos 14 genótipos avaliados foram igualmente atrativos a lagartas de terceiro ínstar após seis horas de exposição. Em testes com e sem chance de escolha, os genótipos Arcelina 4, 2 ‘BRS Horizonte’, ‘Pérola’, H9A102-1-1-1-52, ‘IAC Boreal’, ‘IAC Harmonia... / Brazil is one of the biggest producer of common bean (Phaseolus vulgaris), but the attack of several insect pests has compromised their productivity in the field. The soybean looper Chrysodeixis includens (Walker) (Lepidoptera: Noctuidae) species is considered to be of increasing importance in growing bean due to the losses caused in the last harvests. Therefore, it is necessary to study additional control methods to the conventional chemical one, which is both efficient and less harmful to the environment. The objective of this paper is to evaluate different genotypes of bean aiming at the choice of materials resistant to the attack of C. includens. At first, preliminary tests were performed with 59 genotypes which were divided into three groups according to the color of the leafs (dark, light, and intermediate). The antixenosis (oviposition) was evaluated in a test with choice chance. 12 materials with potential to resistance and two susceptible commercial standards were selected for the following steps. With such genotypes antixenosis (oviposition) assays were performed inside the greenhouse, in addition to assays of attractiveness, antixenosis (feeding), and biology with loopers in lab conditions (T= 26 ± 2º C, RH= 65 ± 10 % and photoperiod = 14 h). Regarding oviposition of C. includes in a test without choice, the genotypes ‘IAC Jabola’, Arcelina 1, ‘IAC Boreal’, ‘Flor de Mayo’, ‘IAC Formoso’, ‘Rubi’, and ‘IAPAR 44’ presented resistance type antixenosis (oviposition). After six hours of exposure, leaf discs of 14 genotypes evaluated were equally attractive to third instar loopers. In tests with and without choice chance, the genotypes Arcelina 4, ‘BRS Horizonte’, ‘Pérola’, H9A102-1-1-1-52, ‘IAC Boreal’, ‘IAC Harmonia’, and ‘IAC Formoso’ were less consumed by third instar loopers. In the biology assay, the genotypes ‘IAC Boreal’, ‘IAC Harmonia...

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 408527 bytes, checksum: 3f5ff39d24998982838ce196768d85c4 (MD5) Previous issue date: 2011-02-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Predators capture, kíll and consume theír prey. Thís ís the only ap- proach consídered ín rnost studíes Of predator-prey ínteractíons. However, sorne recent studíes have been concerned Wíth the índírect effects Of pre- datíorL When threatened, prey can change theír behavíor, thus reducing theír chances Of death. Frorn thís perspectíve, experíments performed wíth rnosquítoes specíes ín aquatíc envíronments shows that, ín several ínstances, preys are able to ídentífy the presence Of predators. Thís perceptíon leads to behavíoral alteratíons such as fernale ovíposítíon repellency and reduced foragíng 1arvae. However, the type Of sígnal perceíved by the prey, the írn- portance Of índuced responses to the survíval Of índívíduals, and the reasons for these evolve ín sorne species and not others, remain under díscussíon. The objectíve Was to deterrníne Whether chemícal cues of predator larva Toxorhyn- chites theobaldi (Díptera: Culícídae) are capable Of ínñuencíng the behavíor Of fernales and ímmatures ín three prey species Of the sarne farníly, although wíth Very dístínct behavíor (Culea: molli8, Limatus durhamii and Aedes al- bopictu5). We found that, the ínfusíon Where T. theobaldi larvae Was shel- tered, probably releasíng chernícal sígnals, had a lower proportíon of larvae (5.4 %) of C. molli5, cornpared Wíth control (95.6 %), índícatíng ovíposítíon repellency. Meanwhíle, the other two specíes ovíposíted índíscrímínately on ínfusíon treated and controL We also observed that the presence of traces of the sarne predator, C. mollis larvae spend rnost of theír tíme ín rest (82.7 compared Wíth no sígns of T. theobaldi (49.3 %). However. L. durhamii and A. albopictus larvae do not show behavíoral changes ín the presence of the sarne sígnals. Yet, C. mollis larvae ís preyed upon ín a smaller proportíon than the others, suggestíng that these changes ínñuence ín species Vulnera- bílíty. Frorn these results, ít ís argued that the líkelíhood of the development of defensive responses índuced by predatíon rísk ís related to several factors such as hístoríc of contact Wíth the predator, the ovíposítíon strategy of the females and the ñxed and ñexíble behavíor standard and posítíoníng of 1ar- Vae. Also ís díscussed the ímportance of natíve predators to curb the ínvasíon of exotíc species and díseases spread by these Vectors. / Predadores capturam, abatem e consomem suas presas. Esta é a única abordagem considerada na maior parte dos estudos da ínteração predador- presa. Entretanto, alguns trabalhos recentes têrn se preocupado com os efeitos indiretos da predação. Quando ameaçadas, presas podem alterar seu comportamento, reduzindo suas chances de morte. Sob essa perspectiva, experimentos realizados com espécies de mosquitos em ambientes aquáticos demonstram que, em diversas situações, presas são capazes de identificar a presença de predadores. Tal percepção induz alterações comportamentais como a repelência de ovíposição das fêmeas e redução no forrageamento das 1arvas. Entretanto, o tipo de sinal percebído pelas presas, a importância das respostas induzidas para a sobrevivência dos indivíduos, e as razões destas evoluírem ern algumas espécies, e não em outras, permanecem em discussão. O objectivo do trabalho foi verificar se pistas químicas da presença larva predadora Toxorhynchites theobaldi (Díptera: Culícídae) influenciam o comportamento tanto de fêmeas ovípositantes quanto de imaturos de três espécies de presas da mesma famílía, entretanto com comportamentos bastante distintos, sendo elas Culex molli5, Limatus durhamii e Aedes albopictus (Díptera: Culícídae). Verificamos que, na infusão onde larvas de T. theobaldi permaneceram abrigadas previamente, liberando possíveis sinais químicos, foi encontrada uma menor proporção de larvas (5,4%) de C. molli5, quando comparado com o controle (95,6%) , indicando repelência na ovíposição Enquanto isso, as outras duas espécies ovíposítaram indiscriminadamente na infusão tratada e na controle. Observamos tarnbérn que, na presença de indícios desse mesmo predador, imaturos de C. mollis passaram maior parte do tempo ern repouso (82,7%), quando compadrado com a ausência de sinais de T. theobaldi (49,3%). Entretanto, ímaturos de L. durhamii e A. albopic- tus não apresentam alterações comportamentais na presença dos mesmos sinais. Ainda, C. mollis é predado em uma menor proporção que as demais, sugerindo que essas alterações influenciam na Vulnerabilidade das espécies. A partir desses resultados, é discutido que a probabilidade da evolução de respostas defensivas induzidas pelo risco de predação está relacionada a diversos fatores como o histórico de contato com o predador, a estratégia de ovíposição das fêmeas e o padrão fixo e flexicível de comportamento e posícionarnento das 1arvas. É abordada também a importância dos predadores nativos em conter a invasão de espécies exóticas e a disseminação de doenças por elas Veiculadas.

LIMA, Glauber Pacelli Gomes de. Purificação, caracterização bioquímica e atividade biológica in vitro contra insetos praga de um novo inibidor de tripsina isolado de sementes de Sapindus saponaria L. (Sapindaceae). 119 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-20T13:23:01Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_gpglima.pdf: 2370771 bytes, checksum: 509ae0531057d53f967b325467f88d5c (MD5) / Approved for entry into archive by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-05-23T11:59:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_gpglima.pdf: 2370771 bytes, checksum: 509ae0531057d53f967b325467f88d5c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T11:59:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_gpglima.pdf: 2370771 bytes, checksum: 509ae0531057d53f967b325467f88d5c (MD5) Previous issue date: 2012 / Environmental toxicity, low biodegradability and increased resistance in agricultural pest insects and in insect vectors of diseases to insecticides traditionally used for their control have encouraged the development of chemical alternatives with greater specificity and biodegradability especially from plants. In this way, the present study aimed the purification, characterization and evaluation of activity towards pest insect digestive enzymes of a new trypsin inhibitor obtained from Sapindus saponaria seeds. This new trypsin inhibitor obtained from S. saponaria seeds (SSTI2) belongs to Potato I inhibitor family and was purified by protein precipitation with trichloroacetic acid, affinity chromatography and reverse phase chromatography using UFLC system. The native inhibitor and its fragments generated by enzymatic treatment with trypsin and pepsin were analyzed and sequenced by MALDI-TOF and ESI-TOF mass spectrometry, determining its accurate molecular mass (MM = 7571, 976 Da) and primary structure (64 of 69 amino acids). The SSTI2 showed an IC50 of 8.3 x 10-2 μmol.L-1 against bovine trypsin, and a much lower inhibitory activity on the enzymes chymotrypsin (13.24 ± 0.28%) and papain (5.28 ± 0 , 42%), but was unable to inhibit proteolysis promoted by bromelain. In spite to show moderate inhibition of total digestive enzymes (4.74 ± 0.45% to 56.06 ± 1.41%), the inhibitor was very effective upon trypsin-like enzymes present in Aedes aegypti (92.44 ± 0.99%), Anthonomus grandis (77.93 ± 0.12%), Anticarsia gemmatalis ( 32.21 ± 0.57%) and Spodoptera frugiperda (71.44 ± 1.23%) guts. This strong inhibitory effect of SSTI2 on the catalytic activity of trypsin-like peptidases of insect’s midguts suggests a possible suppressive effect on development and survival of insects fed with diets containing the inhibitor. Thus, future in vivo assays and evaluation of other biochemical properties will be important to establish the potential biotechnological application of SSTI2, especially for the combat of Ae. aegypti, A. grandis and An. gemmatalis. Furthermore, the sequence of SSTI2 elucidated in this study allows the chemical synthesis, cloning of coding gene sequence and heterologous expression of this potential new biotechnological tool. / A toxicidade ao meio ambiente, a baixa biodegrabilidade e a crescente resistência de insetos praga da agricultura e de insetos vetores de doenças aos inseticidas tradicionalmente utilizados tem estimulado o desenvolvimento de alternativas com maior biodegradabilidade e especificidade, especialmente de origem vegetal. Nesse sentido, o presente estudo consistiu na purificação, caracterização e avaliação do efeito biológico in vitro de um novo inibidor de tripsina obtido das sementes de Sapindus saponaria sobre as enzimas digestivas de insetos. Através de precipitação com ácido tricloroacético (TCA), cromatografia de afinidade à tripsina e cromatografia de fase reversa em sistema UFLC, foi purificado um novo inibidor de tripsina (SSTI2) pertencente ao grupo de inibidores do tipo Batata I, uma categoria de inibidores de peptidases serínicas com reconhecido efeito tóxico sobre insetos. O inibidor nativo e fragmentos desse gerados por tratamento enzimático com tripsina e pepsina foram analisados e sequenciados por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF e ESI-TOF, determinando assim a sua massa molecular acurada (MM = 7571, 976 Da) e elucidando a sua estrutura primária (64/69 aminoácidos). O inibidor apresentou uma IC50 de 8,3 x 10-2 μmol.L-1 contra a tripsina bovina, mas apresentou baixa atividade inibitória sobre as enzimas quimotripsina (13,24 ± 0,28%) e papaína (5,28 ± 0,42%), e não foi capaz de inibir a proteólise promovida pela bromelaína. O SSTI2 inibiu moderadamente a atividade catalítica das enzimas digestivas totais dos insetos, com percentual de inibição variando entre 4,74 ± 0,45% a 56,06 ± 1,41%. No entanto, o inibidor foi eficaz em atuar sobre as enzimas digestivas do tipo tripsina presentes nos intestinos dos insetos Aedes aegypti (92,44 ± 0,99%), Anthonomus grandis (77,93 ± 0,12%), Anticarsia gemmatalis (32,21 ± 0,57%) e Spodoptera frugiperda (71,44 ± 1,23%). Esse expressivo efeito inibitório do SSTI2 sobre a atividade catalítica das peptidases do tipo tripsina provenientes do intestino médio dos insetos sugere um possível efeito supressor no desenvolvimento e sobrevivência de insetos alimentados com dietas contendo o inibidor. Assim, futuros estudos in vivo e avaliações de outras propriedades bioquímicas do inibidor serão importantes para determinar a potencial aplicação biotecnológica do SSTI2, especialmente para o combate de A. aegypti, A. grandis e A. gemmatalis. Além disso, a sequência do SSTI2 elucidada nesse estudo possibilita a síntese, clonagem do gene codificante e expressão heteróloga dessa potencial ferramenta biotecnológica.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-12Bitstream added on 2014-06-13T19:24:11Z : No. of bitstreams: 1 000754014.pdf: 1942424 bytes, checksum: 471e068ee68e37f4b3c0be947e861dc1 (MD5) / No Brasil a soja, Glycine max (Linnaeus) Merril, é a principal oleaginosa, responsável pela geração de divisas, além de ser a principal cultura produtora de óleo vegetal e representar importante fonte de proteínas. Durante o desenvolvimento, a cultura é atacada por inúmeros insetos-praga, com destaque para a lagarta-falsa-medideira, Chrysodeixis includens (Walker) (Lepidoptera: Noctuidae), que tem causado danos às plantas durante a fase vegetativa e reprodutiva. Os sojicultores têm como a base para o controle dessa praga a aplicação de produtos químicos, os quais têm elevado o custo de produção. Considerando-se a importância desse inseto para a cultura da soja, aliado aos efeitos indesejáveis decorrentes da aplicação intensiva de inseticidas químicos para o controle, este trabalho teve como objetivo avaliar genótipos de soja frente ao ataque de C. includens, visando verificar a expressão de resistência. Foram realizados ensaios com mariposas (atratividade e preferência para oviposição) em casa de vegetação e com lagartas (antibiose) em condições de laboratório (T= 26 ± 2ºC, UR= 65 ± 10% e fotoperíodo= 14 h), além de análises morfológica, física e anatômica das folhas de soja. Foram avaliados os genótipos: ‘IAC 17’, ‘IAC 18’, ‘IAC 19’, ‘IAC 23’, ‘IAC 24’, ‘IAC 100’, IAC 74-2832, IAC 78-2318, PI 171451, PI 229358, PI 227687, PI 274453, PI 274454, D 75-10169, L 1-1-01, ‘Coodetec-208’ e ‘Conquista’. A preferência para oviposição foi avaliada em testes com e sem chance de escolha no interior de casa de vegetação. A antibiose foi avaliada em laboratório (T= 26 ± 2ºC, UR= 65 ± 10% e fotoperíodo= 14 h) confinando-se lagartas de C. includens nos diferentes genótipos e avaliando-se a duração total da fase larval; a viabilidade larval (%); a viabilidade... / In Brazil, soybean, Glycine max (Linnaeus) Merrill, is the main oilseed, responsible for the generation of foreign exchange, besides being the main producing culture of vegetable oil and represent an important source of protein. During development, the crops are attacked by numerous insect pests, especially the soybean looper, Chrysodeixis includens (Walker) (Lepidoptera: Noctuidae), which has caused damage to plants during the vegetative and reproductive stage. Soybean farmers have as the basis for control of this pest the application of chemicals, which have high production costs. Considering the importance of this insect for the soybean crop, coupled with the undesirable effects of intensive application of chemical insecticides for control, this study aimed to evaluate soybean genotypes against attack C. includens, to check the expression of resistance. Trials with moths (attractiveness and preference for oviposition) under greenhouse and larvae (antibiosis) under laboratory conditions (T = 26 ± 2 º C, UR = 65 ± 10% and photoperiod = 14 h) were performed, and the analysis morphological, physics and anatomy of soybean leaves. Genotypes were evaluated: ‘IAC 17’, ‘IAC 18’, ‘IAC 19’, ‘IAC 23’, ‘IAC 24’, ‘IAC 100’, IAC 74-2832, IAC 78-2318, PI 171451, PI 229358, PI 227687, PI 274453, PI 274454, D 75- 10169, L 1-1-01, ‘Coodetec-208’ and ‘Conquista’. The oviposition preference was evaluated in tests with and without choice inside the greenhouse. The antibiosis was evaluated under laboratory conditions (T = 26 ± 2 º C, UR = 65 ± 10% and photoperiod = 14 h) confining larvae of C. includens in different genotypes and evaluating the total duration of the larval...

Dengue is an important arboviral disease transmitted to humans through the bite of female mosquito Aedes aegypti. As there is no vaccine available, the control of disease occurs, mainly, by the reduction of mosquito population and personal protection to prevent contact between hosts and vectors. Given the increasing process of chemical resistance to insecticides, natural products emerge as safer alternatives for integrated control of endemic diseases. The aim of this work was to evaluate the larvicidal and repellent activities of essentials oils extracted from Xylopia laevigata, Xylopia frutescens and Lippia pedunculosa and of their majority compounds, piperitenone oxide and r-limonene. The larvicidal activity was investigated by exposure of third instar larvae to different concentrations of essentials oils. After 24 hours of exposition, larvae showing lack of mobility or inability to move to water s surface were considered as dead. The repellency effect was based on the suppression of mosquitoes landing on human skin. Essentials oils were diluted in ethanol and applied directly over the volunteer s skin. For each essential oil were performed 12 tests, in which oils concentrations ranged from 0.1 to 10%. The essential oil of L. pedunculosa and its major volatile compounds were shown to be toxic for Ae. aegypti larvae, with CL50 lower than 60 ppm. In the other hand, plants of Xylopia genus just proved to be toxic to Ae. aegypti when in concentrations higher than 1000 ppm. This fact make their use in large-scale unfeasible. All plants tested provided some degree of protection against mosquitoes landing. However only the essential oil of L. pedunculosa and piperitenone oxide provided 100 % of protection against mosquito landings when tested in concentrations lower than 1%. Although its performamnce against dengue mosquitoes, the essential oil of L. pedunculosa shows toxicity the human skin. Therefore, further studies are required to get formulations which are able to provide longer time protection. / A dengue é uma importante arbovirose transmitida ao homem por meio da picada do mosquito fêmea Aedes aegypti. Como não há vacinas, o controle da transmissão da doença se dá, principalmente, com a redução da população de mosquitos e a adoção de medidas de proteção individual que impeçam o contato entre hospedeiros e vetores. Diante do agravamento do processo de resistência aos inseticidas químicos, os produtos de origem vegetal se apresentam como alternativas mais seguras para o controle integrado de doenças vetoriais endêmicas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade repelente e larvicida dos óleos essenciais extraídos das plantas Xylopia laevigta, Xylopia frutescens e Lippia pedunculosa, bem como seus constituintes voláteis, óxido de piperitenona e r-limoneno sobre mosquitos Ae. aegypti. A atividade larvicida foi investigada a partir da exposição de larvas de terceiro estádio às diferentes concentrações dos óleos essenciais e componentes voláteis. Após 24 horas de exposição foram contabilizadas as larvas mortas, considerando mortalidade a ausência de mobilidade ou incapacidade da larva em se mover até a superfície da água. A ação repelente foi observada a partir da supressão de pousos dos mosquitos sobre a pele humana. Os óleos essenciais e compostos químicos foram diluídos em etanol e aplicados diretamente sobre a pele dos voluntários. Para cada produto foram realizados doze testes, nos quais as concentrações variavam de 0,1 à 10%. Tanto o óleo essencial obtido a partir da L. pedunculosa quanto os seus principais compostos voláteis mostraram-se tóxicos para larvas de Ae. aegypti, apresentando CL50 inferior à 60 ppm. Em contrapartida, as plantas do gênero Xylopia apenas mostraram-se tóxicas para as larvas quando em concentrações superiores à 1000 ppm, fato que inviabiliza a sua utilização em larga escala. No que diz respeito à ação repelente, todos os produtos avaliados forneceram algum grau de proteção contra pouso de mosquitos adultos sobre a pele humana. Entretanto, apenas o óleo essencial da L. pedunculosa e o óxido de piperitenona foram capazes de fornecer 100% de proteção, quando testados em concentrações inferiores a 1%. Apesar de eficaz na repelência contra o mosquito transmissor da dengue, o óleo essencial da L. pedunculosa apresentou toxidade sobre a pele humana. Portanto, mais estudos fazem-se necessários a fim de que sejam elaboradas formulações de uso tópico capazes de veicular adequadamente os constituintes químicos dos óleos por um prolongado período de tempo.