Since late 2019 a new coronavirus, SARS-CoV2, has spread through the world and caused a pandemic. The virus causes the heterogenous disease Covid-19, causing flu- like symptoms for most people but can cause Acute Respiratory Distress Syndrome and fatal outcome in some patients. The mechanism is not clearly understood, but depletion of the immunological response has been seen in patients with severe Covid-19. This study will focus on T- lymphocyte, T- cell subtypes, B- lymphocyte, NK- cell and intracytoplasmic interleukin subsets in hospitalized Covid-19 patients to examine immune phenotypes that could be related to, or cause, more severe disease. The method used is multicolour flow cytometry on whole blood and frozen PBMC. Comparison of fraction of each cell type from total cell count, with regard of underlying diseases, age, sex and other factors were done using multivariate regression analysis to evaluate mechanisms correlated to severe disease. The results showed overall lower lymphocyte counts in Covid- patients versus healthy controls. Lower lymphocyte counts were also observed in men versus women. Lower levels of NK-cells and B-cells were found in people in ages over 60 years.  Higher glucose levels were associated with lower B-cell and T-regulatory cell counts, while diabetes patients showed higher T-regulatory cell counts. No differences in proinflammatory cytokines were found between patient groups but were slightly higher in patients versus healthy controls. The conclusion of this study is that dysfunction of the immune system caused by infection of SARS-CoV2 gives lymphocytopenia and more severe outcome.

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A inflamação é um evento intrínseco ao transplante que é desencadeado após o dano causado pela cirurgia. No presente trabalho realizou-se a caracterização fenotípica e funcional das células inflamatórias presentes no enxerto, após o transplante alogênico ou singênico de pele em camundongos. Os resultados obtidos mostraram diferenças significativas na produção de citocinas pró e anti-inflamatórias entre o transplante alogênico e singênico, diferenças já detectáveis nas primeiras 24 horas pós-transplante. Mostrou-se que existe produção aumentada de IL-10 no transplante singênico em relação ao transplante alogênico indicando que a produção de IL-10 no enxerto possui um importante papel para o aceite de transplantes de pele. Além disso, na ausência de IL-10, a rejeição de enxertos alogênicos apresentou-se acelerada e surpreendentemente uma grande parcela dos enxertos singênicos não foi aceita e apresentava aspecto de fibrose com grande deposição de colágeno. O conjunto dos dados indica que a IL-10 possui um importante papel regulatório na inflamação local do enxerto. / Inflammation is an intrinsic event of transplantation that occurs due to to damage caused by surgery. In this study, phenotypic and functional characterization of inflammatory cells present in the graft was performed, after allogeneic or syngeneic skin transplantation in mice. Our results show significant differences in the production of pro and anti-inflammatory cytokines between the syngeneic and allogeneic grafts, detectable as early as 24 hours after transplantation. Higher production of IL-10 was shown in the syngeneic grafts in comparison to allogeneic grafts, indicating that production of IL-10 in the graft is important for acceptance. This is reinforced by data that shows that in the absence of IL-10, rejection of allografts is accelerated and that, surprisingly, a high percentage of the syngeneic grafts is not accepted as well, or shows fibrosis with high deposition of collagen. Taken together, this data indicates that IL-10 has an important regulatory function in the local inflammation of the graft.

Foi estudada a ação do fator neurotrófico ciliar (CNTF) e da interleucina 6 (IL-6) exógenos na regeneração nervosa periférica. Aplicação de CNTF recombinante humano: o nervo ciático de 12 camundongos adultos C57BL/6J (3 grupos, n=4) foi seccionado e os cotos proximal e distal ancorados com ponto único de sutura no interior de tubo de polietileno (TP) com 6 mm d e comprimento e 0,76 mm de diâmetro interno, com intervalo de 4 mm entre os cotos. Os TP foram implantados vazios ou preenchidos com uma das seguintes soluções: (1) colágeno (col.) purificado (Vitrogen, 2,4 mg/ml) em tampão fosfato (0,2M), na proporção d e 1:1; (2) col.+CNTF (1:1, com 100 ng/ml de CNTF/tubo). Após 6 semanas os tubos contendo ao cabos nervosos regenerado s (CR) foram processados e incluídos em Epon. Fibras nervosas mielínicas foram contadas na porção média dos CR com um sistema controlado por computador (Biographics). Camundongos que receberam CNTF apresentaram número significativamente maior de axônios regenerados (3027±62, média±erro padrão) em relação aos animais implantados com tubos vazios (1384±128) ou preenchidos apenas com colágeno (1639±104). Outros 12 animais adicionais tiveram o nervo ciático seccionado e reparado da mesma maneira. Após 6 semanas, um tubo contendo solução do traçador neuronal HRP foi implantado no coto distal do nervo. Decorrido um período suplementar de 3 dias, neurônios marcados foram contados na medula espinhal e nos gânglios das raízes dorsais L4,5,6- Não houve diferença significante no número de motoneurônios entre os diferentes grupos experimentais (vazio=740±21; col.=749±44; CNTF=790±14) e o s animais não-operados (794±30). Não houve também diferença significante no número de neurônios sensitivos entre os diferentes grupos experimentais (vazio=1920±59; co!.=2262±152; CNTF=2124+96) e todos apresentaram número menor de neurônios sensitivos quando comparados com os animais não operados (4211+96) Aplicação de IL-6 recombinante murina: 12 camundongos C57BL/6J adultos foram divididos em dois grupos (n=6) e implantados com TP preenchidos com: (1) Vitrogen (2,4 mg/ml) e tampão fosfato (0,2 M), na proporção d e 1:1; (2) Vitrogen + IL-6 (1:1, com 100 |ig/ml de IL-6/tubo). Após tempo d e sobrevida de 6 semanas , os tubos com os CR foram processados da mesma forma que no experimento anterior. Fibras nervosas mielínicas foram contadas na porção média d o s CR. Os resultados mostraram que os animais implantados com col.+IL-6 tinham número significativamente maior de axônios mielínicos (2025+143) que os animais injetados apenas com col. (1542±122). O gânglio L5 foi também removido dos mesmos animais e cortado seriadamente (5|am), para posterior contagem do número de neurônios sensitivos. Não houve diferença significante no número de neurônios sensitivos entre os grupos experimentais (col.=528+42, col.+IL-6=554±37); todos, no entanto, apresentaram número significantemente menor de neurônios sensitivos quando comparados com os animais não operados (1112+63). Esses resultados indicam que a aplicação local de CNTF ou IL-6 estimula a regeneração de nervos seccionados e que este efeito é devido, provavelmente, a um aumento da taxa de brotamento dos axônios em regeneração / We studied the actions of exogenous ciliary neurotrophic factor (CNTF) and interleukin-6 (IL-6) on peripheral nerve regeneration. The sciatic nerve of 12 adult C57BL/6J mice (3 groups; n=4) w a s transected and both proximal and distal nerve stumps were secured by a single 10-0 suture into a 6-mm of a polyethylene tube (PT) (0,76 mm ID) to give a final gap length of 4mm. The PT were implanted empty or filled with one of the following solutions: (1) a purified preparation of collagen (Vitrogen, 2,4 mg/ml) plus phosphate buffer solution (0,2M), in 1:1 ratio; (2) Vitrogen + human recombinant CNTF (1:1, with 100 ng/ml of CNTF/tube). After 6 weeks the tubes containing the regenerated nerve cables (NC) were processed for Epon embedding. Myelinated nerve fibers were counted from the mid-portion of the cab les with a computer-controlled system (Biographics). CNTF injected mice regenerated significantly more myelinated axons (3027±62, mean±SEM) compared to the animals implanted with tubes left empty (1384±128) or filled with collagen alone (1639±104). Next, 12 additional animals had the sciatic nerve transected and repaired a s above. After 6 weeks, HRP was applied to the distal stump of the regenerated nerves and labeled neurons were counted in the spinal cord an d L4.5.6 dorsal root ganglia (DRG). No significant difference in the number of motoneurons was detected between the experimental (empty=740±21; collagen=749±44; CNTF=790±14) and non-operated (794±30) animals. No difference was also found in the n umber of labeled DRG neurons among the experimental groups (empty=1920±59; collagen=2262±152; CNTF=2124±96) and all had fewer labeled sensory neurons compared to the non-operated group (4211+96). For the IL-6 experiments, 12 C57BL/6J mice were divided into 2 groups (n=6) and implanted with PT filled with one of the following solutions: (1) Vitrogem (2,4 mg/ml) plus phosphate buffer solution (0,2 M), in 1:1 ratio; (2) Vitrogen + murine recombinant IL-6 (1:1, with 100 |ig/ml of IL-6/tube). Following a survival time of 6 weeks, the tubes with the regenerating nerve cables were processed for Epon embedding and myelinated nerve fiber counting. The results showed a significant difference in the number of myelinated axons between the collagen+IL-6 group (2025±143) and the collagen alone group (1542±122). The L5 DRG was also removed from the same mice, and serially sectioned (5^m) for sensory neuron counts. No significant difference was found in the number of DRG neurons between the experimental groups (collagen=528±42; collagen+IL-6=554±37). However, all had significantly fewer sensory neurons compared to the non-operated group (1112+63). These results indicate that locally applied CNTF and IL-6 stimulate peripheral nerve regeneration in adult animals, and that the effects are due to a neurite-promoting activity on axotomized neurons

A doença periodontal tem sido frequentemente associada ao parto pretermo. A plausibilidade biológica para tal associação baseia-se na hipótese de uma inflamação sistêmica de baixa intensidade de origem periodontal. Entretanto, os estudos de intervenção que investigaram o efeito da terapia periodontal durante a gestação não observaram reduções significativas na incidência de prematuridade. Como diversas citocinas têm sido associadas tanto a doença periodontal quanto ao parto pretermo, cogita-se que elas desempenhem um papel importante na associação observada. Até o presente momento, pouco se sabe a respeito da correlação entre os níveis de citocinas no soro e no fluído crevicular gengival (FCG), assim como do efeito da terapia periodontal sobre esses marcadores de inflamação em gestantes. O objetivo desta tese foi avaliar a relação entre níveis sistêmicos e periodontais de biomarcadores inflamatórios relacionados com a resposta imune periodontal e também com os mecanismos de parto. Também investigou-se o efeito da terapia periodontal sobre os níveis dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Esta tese é composta por dois estudos que utilizaram uma sub-amostra de mulheres que haviam sido recrutadas para um ensaio clínico randomizado maior que investigou o efeito da terapia periodontal sobre a incidência de prematuridade. Mulheres entre 18-35 anos e com até 20 semanas de gestação foram aleatoriamente alocadas para receber tratamento periodontal não cirúrgico completo até a 24a semana de gestação (grupo teste) ou apenas uma consulta de uma remoção de cálculo supragingival (grupo controle). Dados clínicos e amostras de sangue e FCG foram coletadas no início do estudo, entre 26-28 semanas de gestação e 30 dias após o parto. Quatro sítios periodontais por paciente foram aleatoriamente selecionados para coleta de FCG entre aqueles com maior profundidade de sondagem. Os níveis de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL- 12p70 e FNT-α foram analisados por citometria de fluxo. No estudo 1, investigou-se a correlação e concordância entre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas em 100 pacientes, utilizando dados coletados até a 20a semana de gestação. As pacientes apresentaram extensa inflamação e limitada destruição periodontal. A correlação entre os níveis de citocinas no soro e no FCG foi baixa e não significativa, com exceção da IL-12p70 que mostrou uma correlação moderada, porém significativa, entre as duas fontes (r=0.32, p=0.001). Os níveis de citocinas observados no FCG explicaram menos de 10% dos respectivos níveis observados no soro, com exceção da IL-12p70 em que eles foram responsáveis por 23% dos níveis séricos (p=0.0001, r2=0.23). A profundidade de sondagem e o sangramento a sondagem estiveram significativamente associados com os níveis de IL-1β, IL-6 e IL-8 no FCG, mas tiveram efeitos limitados sobre os níveis sistêmicos de todas as citocinas. No estudo 2, comparou-se o efeito da terapia periodontal durante a gestação (n=30) com uma consulta única de remoção de cálculo supragingival (n=30) sobre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Após o tratamento, uma redução drástica da inflamação periodontal foi observada no grupo teste, com o percentual de sangramento a sondagem reduzindo de 49.62% para 11.66% dos sítios (p<0.001). A terapia também reduziu significativamente os níveis de IL-1β e IL-8 (p<0.001) no FCG. Entretanto, nenhum efeito significativo do tratamento foi observado em relação aos níveis sistêmicos dessas citocinas. Após o parto, os níveis periodontais de IL-1β no grupo teste permaneceram significativamente menores que no grupo controle, enquanto que nenhuma diferença foi observada em relação aos níveis sistêmicos das outras citocinas avaliadas. Pode-se concluir que os níveis de citocinas no soro e FCG não estão significativamente associados em mulheres com extensa inflamação mas limitada destruição periodontal. Embora a terapia periodontal durante a gestação reduza significativamente o nível de citocinas no FCG, ela parece não ter um impacto considerável sobre os níveis sistêmicos desses biomarcadores. / Periodontal disease has been frequently associated with preterm birth. The biological plausibility for this association relies on the hypothesis of a low-grade systemic inflammation originated from periodontal disease. However, clinical studies that investigated the effect of periodontal therapy during pregnancy did not observe significant reductions in the incidence of prematurity. Several cytokines have been associated with both periodontal disease and preterm birth, and might play a key role in the observed association. To date, little is known about the correlation between serum and gingival crevicular fluid (GCF) cytokine levels, as well as the effect of periodontal therapy on these inflammatory markers in pregnant women. The aim of this thesis was to investigate the relationship between periodontal and systemic levels of inflammatory biomarkers related to periodontal immune response and also with the mechanisms of delivery. We also investigated the effect of periodontal therapy on serum and GCF cytokine levels during pregnancy and 30 days postpartum. This thesis consists of two studies that used a sub-sample of women who had been previously enrolled in a larger randomized controlled trial investigating the effect of periodontal therapy on the incidence of preterm birth. Women aged between 18-35 years and up to 20 weeks of gestation were randomly assigned to receive comprehensive nonsurgical periodontal treatment before the 24th gestational week (test group) or a single appointment of supragingival calculus removal (control group). Clinical data, blood and GCF samples were collected at baseline, between 26-28 weeks of gestation and 30 days postpartum. Four periodontal sites per patient were randomly selected for GCF collection among those with deepest probing depth. IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 and TNF-α levels were analyzed using a cytometric bead array. In the study one, we investigated the correlation and agreement between periodontal and systemic levels of these cytokines in 100 patients, using data collected until 20 weeks of gestation. Patients presented widespread periodontal inflammation but limited destruction. The correlation between serum and GCF cytokine levels was low and not significant, except for IL-12p70, which showed a moderate but significant correlation between the two sources (r = 0.32, p = 0.001). The GCF cytokine levels observed explained less than 10% of the respective serum levels observed, except for IL-12p70, which was responsible for 23% of serum levels (p = 0.0001, r2 = 0.23). Probing depth and bleeding on probing were significantly associated with IL-1β, IL-6 and IL-8 GCF levels, but had limited effects on systemic levels of all cytokines. In the study two, we compared the effect of periodontal therapy during pregnancy (n=30) or a single appointment for supragingival calculus removal (n=30) on periodontal and systemic levels of these cytokines during pregnancy and 30 days postpartum. After treatment, a remarkable reduction of periodontal inflammation was observed in the test group, with bleeding on probing reducing from 49.62% to 11.66% of the sites (p<0.001). Periodontal therapy also significantly reduced IL-1β and IL-8 GCF levels (p<0.001). However, no significant differences due to therapy were observed regarding systemic levels of these cytokines. After delivery, IL-1β GCF levels in the test group remained significantly lower than in the control group, whereas no difference was observed for systemic levels of any other cytokine evaluated. It can be concluded that serum and GCF cytokine levels are not significantly associated in women with widespread periodontal inflammation but limited destruction. Although periodontal therapy during pregnancy significantly reduces GCF cytokine levels, it seems to have a negligible impact on systemic levels of these biomarkers.

Após um trauma, características de resiliência protegem o indivíduo de desenvolver o transtorno de estresse pós-traumático (TEPT) ou outro transtorno mental. O TEPT é um transtorno mental e comportamental, caracterizado por alta morbidade e grandes prejuízos sociais. Resiliência é o processo de negociação, de manejo e de adaptação frente a uma situação de estresse significativo ou trauma. Acredita-se que fatores ambientais e neurobiológicos estejam envolvidos na capacidade de resiliência e no desenvolvimento de TEPT. Método: estudo transversal de casos e controles pareados por sexo e idade. Foram estudados 33 pacientes com TEPT e 33 controles saudáveis que sofreram trauma. Os instrumentos usados foram a Escala de Resiliência, o Questionário de Estilo Defensivo (DSQ), o Questionário de Trauma na Infância (CTQ) e o instrumento Parental Bonding (PBI). As variáveis biológicas estudadas foram cortisol sérico, Interleucina-6 (IL-6) e Interleucina-10 (IL-10) séricas. Resultado: Houve diferença significativa entre os grupos no fator I da escala de resiliência (p=0,019); nos mecanismos de defesas maduras, maiores em resilientes (p<0,001); no abuso emocional (p=0,001) e físico (p=0,003) durante a infância maior em pacientes com TEPT; e em níveis de IL-10 menores em TEPT (p=0,029). Os níveis de IL-6 e cortisol sérico não mostraram diferença significativa. Conclui-se que a resiliência e o trauma na infância parecem ter influência no desfecho de TEPT e que níveis reduzidos de IL-10 em pacientes com TEPT demonstram a alteração do sistema imune nesta patologia. / After a traumatic event, characteristics of resilience protect individuals from developing posttraumatic stress disorder (PTSD) or other mental conditions. PTSD is a mental and behavioral disorder characterized by high morbidity and significant social impairment. Resilience is the process of negotiating, handling and adapting to a highly stressful situation or trauma. Environmental and neurobiological factors are believed to be involved in the capacity for resilience and the development of PTSD. Method: Cross-sectional study of cases and controls matched for age and sex, consisting of 33 patients with PTSD and 33 healthy controls who experienced trauma. Instruments used were the Resilience Scale, Defense Style Questionnaire (DSQ), Childhood Trauma Questionnaire (CTQ) and the Parental Bonding Instrument (PBI). The biological variables studied were serum cortisol, Interleukin-6 (IL-6) and Interleukin-10 (IL-10) levels. Result: There was a significant intergroup difference in factor I of the resilience scale (p=0.019), with higher results in resilient subjects for mature defense mechanisms (p<0.001) and among patients with PTSD for emotional (p=0.001) and physical abuse (p=0.003) during childhood, as well as lower IL-10 levels for PTSD (p=0.029). No significant difference was recorded in serum cortisol and IL-6 levels. It was concluded that resilience and childhood trauma influence the outcome of PTSD and that lower IL-10 levels in patients with PTSD indicate immune system alterations in this pathology.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2007. / Härtill 5 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2007. / Härtill 4 uppsatser.

Τα τελευταία χρόνια, ανοσολογικές διεργασίες άσηπτης φλεγμονής έχουν αναγνωρισθεί ότι συμμετέχουν τόσο στην πρόκληση, όσο και στην (πρώιμη ή όψιμη) έκβαση των ισχαιμικών αγγειακών εγκεφαλικών επεισοδίων (Ι-ΑΕΕ). Στην παρούσα μελέτη ελέγχθηκε κατά πόσον η γενετική προδιάθεση, προς εντονότερη (ή ασθενέστερη) ανοσολογική απάντηση, θα μπορούσε να προβλέπει το οξύ Ι-ΑΕΕ, τη νευρολογική του εξέλιξη, την 6μηνη έκβασή του και την ανάπτυξη κοινών νευροψυχιατρικών επιπλοκών (κατάθλιψη, νοητική έκπτωση). Για το σκοπό αυτό αναλύθηκε η πιθανή προγνωστική αξία 5 σημειακών λειτουργικών πολυμορφισμών στα γονίδια φλεγμονωδών κυτταροκινών (IL4-589C>T, IL10-1082G>A, TNFa-308G>A, IL6-174G>C και IL12B 1188A>C) σε 145 διαδοχικούς ασθενείς με οξύ Ι-ΑΕΕ και ισάριθμους μάρτυρες. Επιπρόσθετα, η μελέτη αξιολόγησε το ρόλο της αντιφλεγμονώδους κυτταροκίνης αντιπονεκτίνης στην οξεία φάση του Ι-ΑΕΕ, καθώς και την πιθανή προβλεπτική της αξία στη νευρολογική του εξέλιξη, την πρόγνωση και την 6μηνη έκβασή του. Τα κύρια αποτελέσματα της μελέτης μπορούν να συνοψισθούν ως εξής: - Σε έναν ομογενή Eλληνικό πληθυσμό, οι λευτουργικοί πολυμορφισμοί IL4-589C>T, IL10-1082G>A, TNFa-308G>A, IL6-174G>C και IL12B 1188A>C δεν προβλέπουν την επέλευση ενός Ι-ΑΕΕ, την ηλικία έναρξης της νόσου ή την ανάπτυξη κατάθλιψης και νοητικής έκπτωσης όψιμα μετά το Ι-ΑΕΕ. - Ο IL4-589CT γονότυπος σχετίστηκε με την τάση της νόσου για υποτροπή. - Ο IL10-1082GG αρχέγονος γονότυπος προέβλεπε την πρώϊμη νευρολογική επιδείνωση και τη χειρότερη λειτουργική του έκβαση 1ου και 3ου μήνα. - Ο TNFa-308GG αρχέγονος γονότυπος συνέβαλλε ευεργετικά στην καλύτερη λειτουργική έκβαση κατά τον 6ο μήνα. - Ο IL12B 1188AC ετεροζυγώτης προέβλεπε σημαντικά τα ελαφρύτερα Ι-ΑΕΕ και στη χαμηλότερη θνητότητα από αυτά. - Τα αυξανόμενα επίπεδα αντιπονεκτίνης ορού σχετίζονται με μείωση των πιθανοτήτων για ένα Ι-ΑΕΕ, ανεξάρτητα από τους κλασσικούς παράγοντες κινδύνου. - Η αντιπονεκτίνη ορού βρίσκεται κατεσταλμένη στην οξεία φάση του Ι-ΑΕΕ, αλλά και 6 μήνες μετά. Τα χαμηλά της επίπεδα δεν αποτελούν αντίδραση οξείας φάσης, αλλά αντικατοπτρίζουν το σταθερό αντιφλεγμονώδη ρόλο της. - H αντιπονεκτίνης ορού οξείας φάσης μετά ένα Ι-ΑΕΕ δεν προβλέπει τη νευρολογική εξέλιξη και την 6μηνη έκβαση της νόσου στον άνθρωπο. Προτείνουμε ότι στο μέλλον η έγκαιρη ταυτοποίηση των γενετικά προδιατεθειμένων ατόμων για βαρύτερη νόσο και επιβαρυμένη έκβαση μετά ένα Ι-ΑΕΕ, θα επιτρέπει την αναγνώριση ομάδων ασθενών με τις μεγαλύτερες ανάγκες εντατικοποιημένης αποκατάστασης και βελτιστοποίησης των ιατρικών μας θεραπειών. Επιπρόσθετα, προτείνουμε ότι η αντιπονεκτίνη θα μπορούσε να αποτελεί ένα δυνητικό θεραπευτικό στόχο τροποποίησης του αγγειακού κινδύνου. / Immune processes of aseptic inflammation have been recently recognized as key participants into both the occurrence and (early or late) outcome of an ischemic stroke (IS). The current study tested whether the genetic predisposition for an enhanced (or suppressed) immunological response, could be predicting the occurrence, neurological evolution, 6-month outcome, and two common neuropsychiatric complications (depression, cognitive impairment) of an IS. For this purpose, 5 functional single nucleotide polymorphisms in the genes of inflammatory cytokines (IL4-589C>T, IL10-1082G>A, TNFa-308G>A, IL6-174G>C and IL12B 1188A>C) were analyzed for their putative prognostic value in 145 consecutive acute IS patients and in an equal-sized control group. Moreover, the present study evaluated the role of an anti-inflammatory cytokine, adiponectin, into the acute phase of an IS, as well as its possible predicting value in the neurological evolution, prognosis and 6-month outcome of the ischemic event. The main results of this study may be summarized as follows: - In a homogenous Greek population, the functional polymorphisms IL4-589C>T, IL10-1082G>A, TNFa-308G>A, IL6-174G>C and IL12B 1188A>C do not predict IS occurrence, age of disease onset, or the development of late post-stroke depression and cognitive impairment. - The IL4-589CT mutant genotype was associated with relapsing IS. - The IL10-1082GG ancestral genotype significantly predicted early stroke pregression and worse functional outcome on months 1 and 3. - The TNFa-308GG ancestral genotype beneficially contributed into better 6-month functional outcome. - The IL12B 1188AC heterozygote significantly predicted milder strokes and decreased IS mortality. - Increasing serum adiponectin levels are associated with reduced odds for an IS, independently of common vascular risk factors. - Low serum adiponectin is present at the acute phase and 6 months after an IS. Suppressed adiponectin levels are not an effect of the acute-phase response, but reflect its solid anti-inflammatory role. - Acute post-stroke serum adiponectin does not predict neurological evolution and 6-month outcome of an IS in humans. We propose that early identification of genetically predisposed subjects, for a more severe disease and for a worse outcome, will allow in the future the recognition of those IS sufferers, who would most benefit from intensive rehabilitation programs, and optimization of our medical therapies. Moreover, we propose that adiponectin may represent a promising candidate for the therapeutic risk modification of common vascular complications.

A doença periodontal tem sido frequentemente associada ao parto pretermo. A plausibilidade biológica para tal associação baseia-se na hipótese de uma inflamação sistêmica de baixa intensidade de origem periodontal. Entretanto, os estudos de intervenção que investigaram o efeito da terapia periodontal durante a gestação não observaram reduções significativas na incidência de prematuridade. Como diversas citocinas têm sido associadas tanto a doença periodontal quanto ao parto pretermo, cogita-se que elas desempenhem um papel importante na associação observada. Até o presente momento, pouco se sabe a respeito da correlação entre os níveis de citocinas no soro e no fluído crevicular gengival (FCG), assim como do efeito da terapia periodontal sobre esses marcadores de inflamação em gestantes. O objetivo desta tese foi avaliar a relação entre níveis sistêmicos e periodontais de biomarcadores inflamatórios relacionados com a resposta imune periodontal e também com os mecanismos de parto. Também investigou-se o efeito da terapia periodontal sobre os níveis dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Esta tese é composta por dois estudos que utilizaram uma sub-amostra de mulheres que haviam sido recrutadas para um ensaio clínico randomizado maior que investigou o efeito da terapia periodontal sobre a incidência de prematuridade. Mulheres entre 18-35 anos e com até 20 semanas de gestação foram aleatoriamente alocadas para receber tratamento periodontal não cirúrgico completo até a 24a semana de gestação (grupo teste) ou apenas uma consulta de uma remoção de cálculo supragingival (grupo controle). Dados clínicos e amostras de sangue e FCG foram coletadas no início do estudo, entre 26-28 semanas de gestação e 30 dias após o parto. Quatro sítios periodontais por paciente foram aleatoriamente selecionados para coleta de FCG entre aqueles com maior profundidade de sondagem. Os níveis de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL- 12p70 e FNT-α foram analisados por citometria de fluxo. No estudo 1, investigou-se a correlação e concordância entre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas em 100 pacientes, utilizando dados coletados até a 20a semana de gestação. As pacientes apresentaram extensa inflamação e limitada destruição periodontal. A correlação entre os níveis de citocinas no soro e no FCG foi baixa e não significativa, com exceção da IL-12p70 que mostrou uma correlação moderada, porém significativa, entre as duas fontes (r=0.32, p=0.001). Os níveis de citocinas observados no FCG explicaram menos de 10% dos respectivos níveis observados no soro, com exceção da IL-12p70 em que eles foram responsáveis por 23% dos níveis séricos (p=0.0001, r2=0.23). A profundidade de sondagem e o sangramento a sondagem estiveram significativamente associados com os níveis de IL-1β, IL-6 e IL-8 no FCG, mas tiveram efeitos limitados sobre os níveis sistêmicos de todas as citocinas. No estudo 2, comparou-se o efeito da terapia periodontal durante a gestação (n=30) com uma consulta única de remoção de cálculo supragingival (n=30) sobre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Após o tratamento, uma redução drástica da inflamação periodontal foi observada no grupo teste, com o percentual de sangramento a sondagem reduzindo de 49.62% para 11.66% dos sítios (p<0.001). A terapia também reduziu significativamente os níveis de IL-1β e IL-8 (p<0.001) no FCG. Entretanto, nenhum efeito significativo do tratamento foi observado em relação aos níveis sistêmicos dessas citocinas. Após o parto, os níveis periodontais de IL-1β no grupo teste permaneceram significativamente menores que no grupo controle, enquanto que nenhuma diferença foi observada em relação aos níveis sistêmicos das outras citocinas avaliadas. Pode-se concluir que os níveis de citocinas no soro e FCG não estão significativamente associados em mulheres com extensa inflamação mas limitada destruição periodontal. Embora a terapia periodontal durante a gestação reduza significativamente o nível de citocinas no FCG, ela parece não ter um impacto considerável sobre os níveis sistêmicos desses biomarcadores. / Periodontal disease has been frequently associated with preterm birth. The biological plausibility for this association relies on the hypothesis of a low-grade systemic inflammation originated from periodontal disease. However, clinical studies that investigated the effect of periodontal therapy during pregnancy did not observe significant reductions in the incidence of prematurity. Several cytokines have been associated with both periodontal disease and preterm birth, and might play a key role in the observed association. To date, little is known about the correlation between serum and gingival crevicular fluid (GCF) cytokine levels, as well as the effect of periodontal therapy on these inflammatory markers in pregnant women. The aim of this thesis was to investigate the relationship between periodontal and systemic levels of inflammatory biomarkers related to periodontal immune response and also with the mechanisms of delivery. We also investigated the effect of periodontal therapy on serum and GCF cytokine levels during pregnancy and 30 days postpartum. This thesis consists of two studies that used a sub-sample of women who had been previously enrolled in a larger randomized controlled trial investigating the effect of periodontal therapy on the incidence of preterm birth. Women aged between 18-35 years and up to 20 weeks of gestation were randomly assigned to receive comprehensive nonsurgical periodontal treatment before the 24th gestational week (test group) or a single appointment of supragingival calculus removal (control group). Clinical data, blood and GCF samples were collected at baseline, between 26-28 weeks of gestation and 30 days postpartum. Four periodontal sites per patient were randomly selected for GCF collection among those with deepest probing depth. IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 and TNF-α levels were analyzed using a cytometric bead array. In the study one, we investigated the correlation and agreement between periodontal and systemic levels of these cytokines in 100 patients, using data collected until 20 weeks of gestation. Patients presented widespread periodontal inflammation but limited destruction. The correlation between serum and GCF cytokine levels was low and not significant, except for IL-12p70, which showed a moderate but significant correlation between the two sources (r = 0.32, p = 0.001). The GCF cytokine levels observed explained less than 10% of the respective serum levels observed, except for IL-12p70, which was responsible for 23% of serum levels (p = 0.0001, r2 = 0.23). Probing depth and bleeding on probing were significantly associated with IL-1β, IL-6 and IL-8 GCF levels, but had limited effects on systemic levels of all cytokines. In the study two, we compared the effect of periodontal therapy during pregnancy (n=30) or a single appointment for supragingival calculus removal (n=30) on periodontal and systemic levels of these cytokines during pregnancy and 30 days postpartum. After treatment, a remarkable reduction of periodontal inflammation was observed in the test group, with bleeding on probing reducing from 49.62% to 11.66% of the sites (p<0.001). Periodontal therapy also significantly reduced IL-1β and IL-8 GCF levels (p<0.001). However, no significant differences due to therapy were observed regarding systemic levels of these cytokines. After delivery, IL-1β GCF levels in the test group remained significantly lower than in the control group, whereas no difference was observed for systemic levels of any other cytokine evaluated. It can be concluded that serum and GCF cytokine levels are not significantly associated in women with widespread periodontal inflammation but limited destruction. Although periodontal therapy during pregnancy significantly reduces GCF cytokine levels, it seems to have a negligible impact on systemic levels of these biomarkers.