Made available in DSpace on 2014-06-12T16:27:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5548_1.pdf: 686497 bytes, checksum: 3b4b858efd0c3b59c08e97ee24bdd148 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Introdução: A oclusão temporária da veia porta causa estase venosa esplâncnica e alteração da função do intestino delgado, podendo induzir distúrbios da motilidade. Este fato ainda não é bem esclarecido, e assim, objetiva-se avaliar as alterações da atividade mioelétrica e da histologia do intestino delgado em 6 cães, além da pressão arterial média (PAM), freqüência cardíaca (FC), pressão venosa central (PVC) e pressão portal (PP), na fase de pré-oclusão e na fase de oclusão. Métodos: Realizou-se anestesia geral, monitorização invasiva da PAM, FC e PVC, laparotomia, aferição da PP, fixação de 3 pares de eletrodos na parede intestinal, biópsias jejunais e oclusão parcial da veia porta, sendo programado aumento da PP entre 2,5 e 3 vezes em relação às medidas basais iniciais. Os eletrodos foram conectados a um sistema computadorizado para captura de sinais elétricos intestinais, usando um software de aquisição para armazenamento e análise da atividade mioelétrica após o registro, que ocorreu nos 30 minutos da fase de pré-oclusão e nos subseqüentes 60 minutos de oclusão. Assim, determinou-se a variância e a média do RMS (root mean square raiz quadrada da média dos quadrados) da atividade mioelétrica. A análise estatística dos dados foi executada através dos testes de Friedman, Dunn, Cochran e t de Student. Resultados: Houve significativa diminuição da média do RMS da atividade mioelétrica na fase de oclusão portal, em comparação à fase de pré-oclusão. A freqüência percentual de hemorragia da lâmina própria aumentou durante a oclusão, sendo proporcional ao tempo de estase, com diferença significativa entre a fase de pré-oclusão e a etapa de 60 minutos de oclusão. Infiltrado inflamatório, dilatação vascular e desprendimento epitelial não apresentaram diferença entre as duas fases. Durante a estase, PAM, FC e PVC diminuíram (p = 0,326; 0,375 e 0,008; respectivamente), e PP aumentou (p = 0,015). Conclusões: A oclusão parcial da veia porta de cães promoveu diminuição da atividade mioelétrica e aumento da freqüência percentual da hemorragia da lâmina própria, além de queda da PVC, mantendo relativa estabilidade hemodinâmica

Orientador: João Jose Fagundes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:06:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rocha_AntonioAngelo_M.pdf: 9354064 bytes, checksum: 2c1f3e7dd58858060ae0eb8ca742c8d6 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A cicatrização intestinal é assunto complexo. A má cicatrização conduz a expressivos índices de morbidade e mortalidade. O entendimento da resposta intestinal às situações de adversidade é assunto amplamente pesquisado. A oxigenoterapia hiperbárica apresenta papel defmido no tratamento de várias afecções. Alguns autores relatam, experimentalmente, melhora na cicatrização de anastomoses intestinais com seu uso na presença ou não de isquemia. Porém, ainda são controversos os efeitos da hiperóxia hiperbárica na isquemia intestinal em alça íntegra sem anastomose. Neste trabalho, analisaram-se os efeitos da oxigenoterapia hiperbárica em alça cólica íntegra com três diferentes graus de isquemia induzida. Foi proposto o estudo mecânico da alça intestinal pelo teste de pressão de ruptura pela distensão por líquido para aferir a qualidade da cicatrização intestinal. Foràm utilizados 80 ratos distribuídos em quatro grupos de 20 animais. No grupo 1 (Gl), grupo controle, não se provocou isquemia. A isquemia cólica foi induzida nos grupos 2 (G2), 3 (G3) e 4 (G4). No G2, fez-se ligadura do tronco da artéria mesentérica inferior e da arcada marginal a quatro centímetros acima da reflexão peritoneal. No grupo 3, fez-se ligadura do tronco da artéria mesentérica inferior, da arcada marginal a quatro centímetros acima da reflexão peritoneal e da arcada marginal ao nível da reflexão peritoneal. No G4, ampliou-se a isquemia, por meio da ligadura dos seguintes vasos: artéria cólica média, artéria mesentérica inferior e arcada marginal ao nível da reflexão peritoneal. Logo após o ato operatório, cada grupo de vinte animajs foi dividido em dois subgrupos de dez animais cada: Com Câmara Hiperbárica (CC) e Sem Câmara Hiperbárica (SC). Os animais dos quatro subgrupos CC eram colocados em uma câmara hiperbárica experimental para inalarem oxigênio a 100%, a duas Atmosferas Absolutas, durante 120 minutos. Cada sessão em repetida diariamente, no mesmo horário, por quatro dias consecutivos. Nos intervalos entre as sessões, os animais respiravam ar ambiente e tinham livre acesso à ração e água. No quinto dia do experimento, ou seja, quarto dia de pós-operatório, os animais eram submetidos à eutanásia. Os animais dos quatro subgrupos SC foram mantidos em ar ambiente durante os cinco dias do experimento. As sessões de câmara hiperbárica não foram empregadas. Não ocorreram óbitos em nenhum dos grupos. Os testes estatísticos utilizados foram Análise de Variância (ANOVA) e Teste de Tukey. Os quatro grupos são diferentes entre si considerando o fator isquemia (p = 0,0001). O grupo 4 é mais isquêmico que o grupo 3; o grupo 3 não difere do grupo 2; porém o grupo 2 é mais isquêmico que o grupo 1. Não houve diferença estatística entre os subgrupos ce e se (p = 0,3461). A análise dos resultados deste trabalho permite concluir que: A oxigenoterapia hiperbárica não apresenta melhora sobre a isquemia induzida em alça cólica íntegra de ratos / Abstract: The intestinal cicatrization is a complex issue. A bad cicatrlzation leads to high levels of mortality and morbidity. The understanding of the intestinal answers to the adversity situations is a highly researched issue. The hyperbaric oxygen-therapy presents a defined role in the treatment of a lot of affections. Some authors report, experimentally, intestinal anastomoses cicatrization improvement with its use under the presence of ischemia or noto However, the efIects of hyperbaric hyperoxia in intestinal ischemia in upright lug without anastomosis are still controversial. The effects of hyperbaric oxygen-therapy in upright colic lug were analyzed with three different levels of induced ischemia. It was proposed a mechanical study of the intestinallug by the pressure test of the rupture by liquid distension in order to check the quality of intestinal cicatrization. Eighty rats, distributed in four groups of 20 animals in each one, were used. In group 1 (G1), the control group, ischemia was not caused. The colic ischemia was induced in groups 2 (G2), 3 (G3) and 4 (G4). In G2, it was performed the ligature of the inferior mesenteric artery trunk and ofthe marginal arcade at four centimeters above the peritoneal reflection. In group 3, it was performed the ligature of the inferior mesenteric artery trunk, of the marginal arcade at four centimeters above the peritoneal reflection and of the marginal arcade at the leveI of the peritoneal reflection. In G4, the ischemia was broaden through the ligature of the following vessels: middle colic artery, inferior mesenteric artery and marginal arcade to the leveI of peritoneal reflection. Soon afier the operatory setting each group of twenty animals was divided into two subgroups of ten animaIs each: With Hyperbaric Chamber (CC) and Without Hyperbaric Chamber (SC). The animais of the four CC subgroups were placed in an experimental hyperbaric chamber in order to inhale oxygen at 100%, at two AbsoIute Atmospheres, for 120 minutes. Each session was repeated daily, at the same time, for a four-day consecutive period. In the intervals between the sessions the animaIs could breath environrnent air and allowed to water and ration. In the fifth day after the experiment, that is, in the fourth post-operative day, the animaIs were undergone to euthanasia. The animaIs of the four SC subgroups were kept in environrnent air during the tive days of the experiment. The hyperbaric chamber sessions were not applied. There was no death in any of the groups. The statistical tests applied were the Variance Analyze (ANOVA) and the Tukey Test. Considering the ischemia factor (p=0,00001),the four groups were difIerent among them Group 4 is more ischemic than group 3; group 3 doesn't differ ttom group 2;but group 2 is more ischemic, than group I. There was no statistical difference between the subgroups ee and se (p=0.3461).The result analysis of the work leads to conclude that: The hyperbaric oxygen-therapy does not present improvement on the induced ischemia in rats upright colic lug / Mestrado / Pesquisa Experimental / Mestre em Cirurgia

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo fue implementar el método del intestino evertido en intestino de cerdos post-faena para estudiar la absorción de hierro desde matrices cargadas con hierro. Se elaboró una matriz control (C, sin hierro), con alginato de sodio (2% p/v) y suero de leche (40% p/v) y mezclas de matriz control con diferentes tipos de hierro hemo (H) al 1% y no hemo (NH) al 1% p/v. Se formaron 5 matrices: I: 100%H, II: 100%NH, III: 25%H:75%NH, IV: 50%H:50%NH y V: 75%H:25%NH. Las matrices se caracterizaron según contenido de hierro. Para realizar el método del intestino evertido se utilizaron segmentos de 10 cm de duodeno de cerdos adultos post-faena. Los trozos de intestinos se incubaron con 3g de cada matriz y se cuantificó el hierro absorbido en los sacos intestinales por espectrofotometría de absorción atómica. Las matrices presentaron un contenido de hierro (mg/g) de: C (0,09 ± 0,01), I (0,37 ± 0,02), II (4,3 ± 0,16), III (3,16 ± 0,45), IV (2,14 ± 0,14) y V (1,08 ± 0,03). La mayor absorción de hierro se produjo desde la matriz V (26,3%), que fue superior a la IV (7,8%), la cual no presentó diferencias con la III (3,7%) y I (2,0%), y éstas a su vez no mostraron diferencias con la II (1,3%) y C (0,8%). Fue posible implementar y validar el modelo del intestino evertido para estudios de absorción de hierro ex vivo en cerdos post-faena, observándose la mejor absorción para la matriz V, que contenía la mezcla con mayor porcentaje de hierro hemo. / The objective was to implement the everted intestine method in intestine of post-slaughter pigs to study the absorption of iron from matrices loaded with iron. A control matrix (C, without iron), with sodium alginate (2% w/v) and whey (40% w/v), and mixtures of control matrix with different types of iron heme (H) at 1 % and not heme (NH) at 1% w/v were made. Five matrices were formed: I: 100% H, II: 100% NH, III: 25% H: 75% NH, IV: 50% H: 50% NH and V: 75% H: 25% NH. The matrices were characterized according to iron content. To perform the everted gut sac method, 10 cm segments of duodenum of post-slaughter adult pigs were used. The pieces of intestines were incubated with 3g of each matrix and the iron absorbed in the intestinal sacs was quantified by atomic absorption spectrophotometry. The matrices had an iron content (mg/g) of: C (0,09 ± 0,01), I (0,37 ± 0,02), II (4,3 ± 0,16), III (3,16 ± 0,45), IV (2,14 ± 0,14) y V (1,08 ± 0,03). The highest iron absorption occurred from matrix V (26.3%), which was higher than IV (7.8%), which in turn did not present differences with III (3.7%) and I (2, 0%), and these showed no differences with II (1.3%) and C (0.8%). It was possible to implement and validate the everted intestine model for ex vivo iron absorption studies in post-slaughter pigs, observing the best absorption for the matrix, which contained the mixture with the highest percentage of heme iron. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11140249

Orientador: Fernando Zambuzzi Willian / Resumo: Artigo 1 Dos transplantes intestinais convencionais à Engenharia de Tecidos: estado da arte Resumo O intestino delgado é responsável pela realização de múltiplas funções, incluindo motilidade, digestão e absorção. Nos distúrbios gastrointestinais, algumas dessas funções são prejudicadas ou perdidas. A ressecção do segmento doente é uma abordagem comum. No entanto, os pacientes sofrem de complicações e de baixa qualidade de vida. Substituições funcionais são, portanto, necessárias para restaurar, reparar ou substituir partes danificadas do intestino. A Engenharia de Tecidos e a Medicina Regenerativa fornecem uma abordagem alternativa para reconstruir diferentes segmentos do trato gastrointestinal. Os desafios são grandes e a área é extremamente promissora. Artigo 2 Avaliação e caracterização de scaffolds de matriz extracelular para aplicações na Engenharia de Tecidos do trato gastrointestinal Resumo Várias estratégias têm sido exploradas para aumentar o número de enxertos de intestino delgado para transplantes e, principalmente, para diminuir as taxas de rejeição deste órgão transplantado. Avanços recentes na Medicina Regenerativa estão fornecendo novas abordagens para os estudos de reparação ou substituição funcional do intestino afetado, seja por traumas ou por doenças. Neste contexto, a Engenharia de Tecidos pode ser uma opção para produzir scaffolds biocompatíveis para a produção de segmentos de intestino delgado em laboratório. Desta forma, o objetivo deste estudo foi ava... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: From conventional intestinal transplants to Tissue Engineering: state of the art ABSTRACT The small intestine is responsible for performing multiple functions including motility, digestion and absorption of food and nutrients. In gastrointestinal disorders, some of these functions are impaired or lost. Resection of the diseased segment is a common approach; however, patients suffer from complications and poor quality of life. Functional replacements are therefore necessary to restore, repair or replace damaged parts of the gut. Tissue Engineering and Regenerative Medicine provide an alternative approach to reconstruct different segments of the gastrointestinal tract. There are many challenges and the research field is extremely promising. Evaluation and characterization of extracellular matrix scaffolds for applications in Tissue Engineering of the gastrointestinal tract ABSTRACT Several strategies have been explored to increase the number of small bowel grafts intended for transplants and, mainly, to decrease the rejection rates of this transplanted tissue. Recent advances in Regenerative Medicine are providing new approaches for studies of functional repair or replacement of the affected bowel, whether by trauma or disease. In this context, Tissue Engineering has become an option to produce biocompatible scaffolds in order to produce segments of the small intestine in the laboratory, mainly through the application of ex-vivo tissue decellularization methodologies. Thus, the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Styelid ascidians are diverse in developmental modes, varying from strictly sexual solitary species to highly integrated colonies. Circulatory stem cells (CSCs) accomplish fundamental roles in developmental processes of styelid ascidians. In the colonial styelids, CSCs enable budding and are capable of giving origin to the germline in certain species. The function of these cells have been tested experimentally in models within Styelidae. However, the understanding of coloniality as an evolutionary novelty requires reconstructing the possible ancestral CSCs characteristics in Styelidae. To address this issue, this work analyzes the possible developmental origin and the identity of putative CSCs among blood cell populations. The first chapter of this dissertation aimed to characterize and compare the hemocyte populations in two solitary styelids: Styela plicata and Styela canopus. In addition, the early development, the metamorphosis and the early maturation were compared in both species. After metamorphosis, S. canopus briefly develops a network of extracorporeal vessels with numerous terminal ampullae. These characters are usually associated to colonial ascidians, and were not found in S. plicata. With respect to the hemocyte populations, similar morphotypes were present in both species. However, S. canopus shows a lower frequency of vacuolated cells, which may be due to a reduced level of cytotoxicity in the tunic relative to S. plicata. These differences observed between S. canopus and S. plicata may be related to differences in the degrees of gregariousness or body size among the two species. In order to investigate possible approaches to distinguish and isolate CSC populations in a solitary styelid model, I used imaging flow cytometry. Putative CSCs were identified through measurement of morphological parameters and aldehyde dehydrogenase (ALDH) activity. The correlation between these parameters allowed to determine 2 gates enriched with particular cell types. A significant difference was found on the ALDH+ population within a gate of cells with low granularity, suggesting the presence of cells among circulatory hemocytes. To scrutinize the biogenesis of CSCs in S. plicata, I present a description of a candidate hematopoietic niche in this species. An exhaustive histological survey for hemoblast-like cells was performed, and complemented with immunohistochemistry with stem cell (piwi) and proliferation (pHH3) markers. The morphological and expression profiles of the intestine support the intestinal submucosa (IS) as a hematopoietic niche. At this region there are aggregations of cells with and undifferentiated morphological profile, corroborated by ultrastructural analysis. Furthermore, the IS holds high cellular proliferation and frequency of piwi+ cells. Ascidians are considered interesting models to investigate asexual reproduction and modular development. This study represents an advancement towards understanding the processes, cell populations and structures that may be related to facilitating the appearance of this evolutionary novelty / As ascídias da família Styelidae são diversas em modos de desenvolvimento, variando de espécies estritamente sexuais solitárias até colônias altamente integradas. As células-tronco circulatórias (CTCs) desempenham papéis fundamentais nos processos do desenvolvimento de ascídias styelídeas. Nas especies coloniais deste grupo, as CTCs permitem a brotação e são capazes de originar a linha germinativa em certas espécies. A função dessas células tem sido testada experimentalmente em modelos dentro de Styelidae. No entanto, a compreensão da colonialidade como uma novidade evolutiva requer reconstruir as características das possíveis CTCs ancestrais para Styelidae. Com o fim de abordar essa questão, este trabalho analisa a possível origem do desenvolvimento e a identidade de CSCs putativas entre populações de células sanguíneas de styelídeas solitárias. O primeiro capítulo desta dissertação teve como objetivo caracterizar e comparar as populações de hemócitos em dois espécies solitárias: Styela plicata e Styela canopos. Além disso, o desenvolvimento inicial, a metamorfose e a maturação do juvenil foram comparados em ambas as espécies. Após a metamorfose, S. canopus desenvolve brevemente uma rede de vasos extracorpóreos com numerosas ampolas terminais. Esses caracteres são geralmente associados a ascídias coloniais e não foram encontrados em S. plicata. Com relação às populações de hemócitos, morfotipos semelhantes estavam presentes em ambas as espécies. No entanto, o S. canopos apresenta menor frequência de células vacuoladas, o que pode ser devido a um nível reduzido de citotoxicidade na túnica em relação a S. plicata. Essas diferenças observadas entre S. canopos e S. plicata podem estar relacionadas a diferenças nos graus de gregariedade ou tamanho corporal entre as duas espécies. A fim de investigar possíveis abordagens para distinguir e isolar populações de CTCs em um modelo de styelídeo solitário, usei citometria de fluxo com adquisição de imagem. As CTCs putativas foram identificadas através da medição de parâmetros morfológicos e da atividade da aldeído desidrogenase (ALDH). A correlação entre estes parâmetros permitiu determinar 2 gates enriquecidos com tipos celuláres particulares. Uma diferença significativa foi encontrada na população ALDH+ dentro de um gate de células com baixa granularidade, sugerindo a presença de células-tronco circulatórias. Para examinar a biogênese das CTCs em S. plicata, foi realizada uma descrição de um nicho hematopoiético candidato nesta espécie. Um exame histológico exaustivo para células semelhantes a hemoblastos foi realizado e complementado com imunohistoquímica com marcadores de células-tronco (piwi) e proliferação (pHH3). Os perfis morfológicos e de expressão do intestino sustentam a submucosa intestinal (SI) como nicho hematopoiético. Nesta região há agregações de células com morfolia indiferenciada, corroborada pela análise ultraestrutural. Além disso, a SI mantém alta proliferação celular e freqüência de células piwi+. As ascídias são consideradas modelos interessantes para investigar a reprodução assexuada e o desenvolvimento modular. Este estudo representa um avanço na compreensão dos processos, populações celulares e estruturas que podem estar relacionadas a facilitar o surgimento desta novidade evolutiva

As doenças do trato digestório nos equinos apresentam altas taxas de morbidade e mortalidade, com diferentes etiologias. Em alguns casos, o emprego da biopsia intestinal se faz necessário para auxílio no diagnóstico dessas enfermidades. No entanto, as técnicas convencionais podem trazer riscos aos pacientes, por serem invasivas, ou não serem elucidativas por apresentarem limitações de acesso a determinados segmentos. O presente estudo teve como objetivo validar uma técnica de biopsia intestinal, intracorpórea, assistida por videolaparoscopia, ainda não descrita na literatura, para coleta de fragmentos de mucosa de jejuno e cólon menor de equinos, que sejam considerados adequados para avaliação histológica. Para tanto, foram utilizados seis equinos machos, da raça Puro Sangue Árabe, com idade de dois anos, sem histórico prévio de doenças do trato digestório, com peso médio de 267 kg. Todos os animais foram submetidos ao mesmo procedimento laparoscópico, instituindo-se apenas jejum alimentar prévio de oito horas. Os equinos foram acompanhados com exame físico e de ultrassonografia abdominal, desde o dia precedente às laparoscopias, até o 15º dia do período pós-operatório, bem como avaliados por meio de hemograma, provas de funções hepática e renal, e análise do líquido peritoneal nos dias 0, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14, 21 e 30. O tempo cirúrgico foi cronometrado, sendo registrado o tempo total, iniciado na criação do primeiro portal de acesso e finalizado ao término da sutura de pele, e os tempos parciais para biopsia de jejuno e cólon menor separadamente, com início na apreensão do segmento intestinal e término quando constatada a polimerização da cola cirúrgica sobre o orifício de acesso da agulha. De cada segmento obtiveram-se dez fragmentos, e posteriormente submetidos à análise histológica. Atribuiu-se escore para cada um deles, sendo considerado 0 fragmentos com qualidade ruim; 1 para qualidade boa e 2 para qualidade ótima. Por sua vez, os considerados viáveis foram somente os que se enquadraram nos escores 1 e 2. Amostras avaliadas como adequadas 11 apresentaram no mínimo 50% dos fragmentos viáveis. A média do tempo total de procedimento foi de 66,50 minutos (± 7,87), enquanto a média do tempo parcial para biopsia de jejuno foi de 14,2 minutos (± 4,3) e a de cólon menor 12,7 minutos (± 5,0). Clinicamente, os animais apresentaram desconforto abdominal nas primeiras 48 horas. Os exames ultrassonográficos do abdômen não revelaram alterações condizentes com peritonite ao longo de todo experimento. Os parâmetros laboratoriais apresentaram apenas características inflamatórias, sendo que o líquido peritoneal permaneceu alterado até o 21º de pós-operatório, havendo normalização de todos os seus valores no 30º dia do estudo. Na inspeção laparoscópica de dois equinos (E2, E4) foi identificada aderência de porção de omento no diafragma. Nas avaliações histológicas de jejuno, uma amostra (E5) de seis foi considerada inadequada, com 5/12 fragmentos viáveis, e em cólon menor, duas (E1, E2) de seis, foram inadequadas, com 4/9 e 5/10 fragmentos viáveis respectivamente. A nova técnica de biopsia intestinal possibilitou a coleta de amostras adequadas de mucosa para análise histológica, de forma segura para os animais, uma vez que as alterações clínicas e laboratoriais foram aquelas relacionadas ao processo inflamatório, compatível com procedimentos laparoscópicos na espécie / Gastrointestinal diseases in horses result in high rates of morbidity and mortality, with different aetiologies. In some cases, an intestinal biopsy is needed to aid in the diagnosis of such diseases. However, the conventional techniques can pose risks to patients for being invasive or for not being elucidating due to having limitations in accessing certain segments. The objective of this study was to validate an intestinal biopsy technique, intracorporeal, assisted by laparoscopy, which has not yet been described in the literature, to collect mucosal fragments from the jejuno and small colon, which might be considered suitable for histological assessment. For such, six male horses were used, Arabian breed, with two years of age, without any records of abdominal diseases, weighing 267 kg in average. All horses were subjected to the same laparoscopic procedure, fasting for eight hours previously to the procedure. All horses were monitored through physical examination and abdominal ultrasonography, from the day previous to laparoscopy, until the 15th postoperative day, as well as hemogram, tests of liver and kidney functions, and analysis of the peritoneal fluid in days 0, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14, 21 and 30. The total laparoscopic procedure time was registered, starting at the moment of the first incision and ending at the moment of the skin closure. The partial times for the jejunal biopsy and small colon biopsy were recorded as well, starting at the grasping of the intestinal segment and ending at the moment of polymerization of the surgical adhesive on the needle access site. From each segment, ten fragments were collected and later subjected to histological analysis. A score was assigned for each one of them, being scored \"0\" fragments of poor quality; \"1\" fragments of good quality and \"2\" fragments of optimal quality. The samples considered viable were only the ones which scored 1 and 2. The samples deemed as adequate showed at least 50% of it fragments to be viable. The average of the surgery total time was of 66,50 minutes (± 7.87), whereas the average of the jejunal biopsy was of 14.2 minutes (± 4.3) and the small colon biopsy time was of 12.7 minutes ( ± 5.0). Clinically, the animals showed mild abdominal 13 discomfort in the first 48 hours. Ultrasonographic examination of the abdomen did not reveal any alterations consistent with peritonitis throughout the entire experiment period. Laboratory parameters presented inflammatory characteristics, and the peritoneal fluid remained altered until the 21th postoperative day, with normalization of all its values on the 30th day of the study. During the laparoscopic inspection of two horses (E2, E4) was identified partial omental adhesion with the diaphragm. In the jejunal histological evaluations, one sample (E5) of six was considered inadequate, with 5/12 viable fragments, and as for the small colon, two (E1, E2) of six were inadequate, with 4/9 and 5/10 viable fragments respectively. The new technique proposed allowed a safe collection of adequate mucosal samples for histological analysis, since clinical and laboratory abnormalities identified were related to the inflammatory process associated to the laparoscopic techniques in horses

Os diversos estudos com a suplementação de glutamina em situações de estresse fisiológico demonstram o essencial papel deste aminoácido no metabolismo. Agudamente, a suplementação com glutamina aumenta a glutaminemia. Cronicamente, verifica-se maior concentração de glutamina em tecidos, tais como o muscular e o hepático. Entretanto, não é conhecido se esses efeitos são decorrentes diretos da suplementação oral com glutamina ou da redução de sua captação a partir da membrana basolateral de enterócitos. O estudo da cinética na absorção de glutamina traz informações relacionadas à proporção da concentração de glutamina absorvida e a retida no tecido intestinal, de acordo com as doses utilizadas, e aponta quais são as alterações decorrentes da sepse induzida pela endotoxemia. O objetivo deste trabalho foi investigar a cinética de absorção de glutamina em camundongos submetidos à endotoxemia, o que não fora previamente investigado em outros trabalhos. Para avaliar a cinética da absorção intestinal de glutamina foi realizada eversão intestinal em camundongos machos, o que permite a coleta dos líquidos das camadas mucosa e serosa com maior precisão. Foram utilizadas doses de 10, 20, 40 e 50 mM de L-glutamina associada a [14C]-glutamina, nos tempos 0, 5, 10, 20, 30, 40, 60, 90 e 120 minutos. Os resultados obtidos demonstraram que em alta concentração de glutamina (50 mM) ocorre maior absorção em relação à retenção tecidual e esta é realizada por transporte ativo de aminoácidos. Os animais que foram submetidos à endotoxemia por LPS (5mg/kg) apresentaram alterações estruturais no tecido intestinal, detectadas pela histologia. Neste grupo, a retenção tecidual de glutamina foi significativamente maior do que no grupo controle, sobretudo na presença de glicose. Conclui-se que a cinética na absorção de glutamina é dose e tempo dependente em animais saudáveis e que, em condições de endotoxemia, ocorre maior retenção de glutamina no tecido intestinal na presença de glicose. Sugere-se que a via da hexosamina está envolvida; no entanto, mais estudos são necessários para esclarecer tais mecanismos. / The various studies of glutamine supplementation in stressful situations demonstrate the physiological role of this essential amino acid in metabolism. Acutely, supplementation with glutamine improves glutaminemia. Chronically, there is a greater concentration of glutamine in tissues such as muscle and liver. However, it is not known whether these effects are direct result of glutamine oral supplementation or reduced uptake within the basolateral membrane of enterocytes. The kinetic study of the absorption of glutamine provides information related to the ratio of concentration of glutamine absorbed and retained in the intestinal tissue, according to the doses used, and points out the changes resulting from sepsis induced by endotoxemia. The objective of this study was to investigate the kinetics of glutamine uptake in mice subjected to endotoxemia. To evaluate the kinetics of intestinal absorption of glutamine intestinal eversion was performed in male mice, allowing to collect the liquid layers of mucosa and serosa with greater precision. The doses used were 10, 20, 40 and 50 mM L-glutamine associated with [14C]-glutamine at 0, 5, 10, 20, 30, 40, 60, 90 and 120 minutes. The results showed that high concentrations of glutamine (50 mM) a higher absorption occurs in relation to tissue retention and this is accomplished by active transport of amino acids. The animals subjected to endotoxemia by LPS (5mg/kg) showed structural changes in the intestinal tissue, detected by histology. In this group, the tissue retention of glutamine was significantly higher than in the control group, especially in the presence of glucose. It is concluded that the kinetics of glutamine uptake is dose and time dependent in healthy animals, and in conditions of endotoxemia, there is greater retention of glutamine in intestinal tissue in the presence of glucose. It is suggested that the hexosamine pathway is involved; however, more studies are needed to clarify these mechanisms.

Resumo não disponível

Styelid ascidians are diverse in developmental modes, varying from strictly sexual solitary species to highly integrated colonies. Circulatory stem cells (CSCs) accomplish fundamental roles in developmental processes of styelid ascidians. In the colonial styelids, CSCs enable budding and are capable of giving origin to the germline in certain species. The function of these cells have been tested experimentally in models within Styelidae. However, the understanding of coloniality as an evolutionary novelty requires reconstructing the possible ancestral CSCs characteristics in Styelidae. To address this issue, this work analyzes the possible developmental origin and the identity of putative CSCs among blood cell populations. The first chapter of this dissertation aimed to characterize and compare the hemocyte populations in two solitary styelids: Styela plicata and Styela canopus. In addition, the early development, the metamorphosis and the early maturation were compared in both species. After metamorphosis, S. canopus briefly develops a network of extracorporeal vessels with numerous terminal ampullae. These characters are usually associated to colonial ascidians, and were not found in S. plicata. With respect to the hemocyte populations, similar morphotypes were present in both species. However, S. canopus shows a lower frequency of vacuolated cells, which may be due to a reduced level of cytotoxicity in the tunic relative to S. plicata. These differences observed between S. canopus and S. plicata may be related to differences in the degrees of gregariousness or body size among the two species. In order to investigate possible approaches to distinguish and isolate CSC populations in a solitary styelid model, I used imaging flow cytometry. Putative CSCs were identified through measurement of morphological parameters and aldehyde dehydrogenase (ALDH) activity. The correlation between these parameters allowed to determine 2 gates enriched with particular cell types. A significant difference was found on the ALDH+ population within a gate of cells with low granularity, suggesting the presence of cells among circulatory hemocytes. To scrutinize the biogenesis of CSCs in S. plicata, I present a description of a candidate hematopoietic niche in this species. An exhaustive histological survey for hemoblast-like cells was performed, and complemented with immunohistochemistry with stem cell (piwi) and proliferation (pHH3) markers. The morphological and expression profiles of the intestine support the intestinal submucosa (IS) as a hematopoietic niche. At this region there are aggregations of cells with and undifferentiated morphological profile, corroborated by ultrastructural analysis. Furthermore, the IS holds high cellular proliferation and frequency of piwi+ cells. Ascidians are considered interesting models to investigate asexual reproduction and modular development. This study represents an advancement towards understanding the processes, cell populations and structures that may be related to facilitating the appearance of this evolutionary novelty / As ascídias da família Styelidae são diversas em modos de desenvolvimento, variando de espécies estritamente sexuais solitárias até colônias altamente integradas. As células-tronco circulatórias (CTCs) desempenham papéis fundamentais nos processos do desenvolvimento de ascídias styelídeas. Nas especies coloniais deste grupo, as CTCs permitem a brotação e são capazes de originar a linha germinativa em certas espécies. A função dessas células tem sido testada experimentalmente em modelos dentro de Styelidae. No entanto, a compreensão da colonialidade como uma novidade evolutiva requer reconstruir as características das possíveis CTCs ancestrais para Styelidae. Com o fim de abordar essa questão, este trabalho analisa a possível origem do desenvolvimento e a identidade de CSCs putativas entre populações de células sanguíneas de styelídeas solitárias. O primeiro capítulo desta dissertação teve como objetivo caracterizar e comparar as populações de hemócitos em dois espécies solitárias: Styela plicata e Styela canopos. Além disso, o desenvolvimento inicial, a metamorfose e a maturação do juvenil foram comparados em ambas as espécies. Após a metamorfose, S. canopus desenvolve brevemente uma rede de vasos extracorpóreos com numerosas ampolas terminais. Esses caracteres são geralmente associados a ascídias coloniais e não foram encontrados em S. plicata. Com relação às populações de hemócitos, morfotipos semelhantes estavam presentes em ambas as espécies. No entanto, o S. canopos apresenta menor frequência de células vacuoladas, o que pode ser devido a um nível reduzido de citotoxicidade na túnica em relação a S. plicata. Essas diferenças observadas entre S. canopos e S. plicata podem estar relacionadas a diferenças nos graus de gregariedade ou tamanho corporal entre as duas espécies. A fim de investigar possíveis abordagens para distinguir e isolar populações de CTCs em um modelo de styelídeo solitário, usei citometria de fluxo com adquisição de imagem. As CTCs putativas foram identificadas através da medição de parâmetros morfológicos e da atividade da aldeído desidrogenase (ALDH). A correlação entre estes parâmetros permitiu determinar 2 gates enriquecidos com tipos celuláres particulares. Uma diferença significativa foi encontrada na população ALDH+ dentro de um gate de células com baixa granularidade, sugerindo a presença de células-tronco circulatórias. Para examinar a biogênese das CTCs em S. plicata, foi realizada uma descrição de um nicho hematopoiético candidato nesta espécie. Um exame histológico exaustivo para células semelhantes a hemoblastos foi realizado e complementado com imunohistoquímica com marcadores de células-tronco (piwi) e proliferação (pHH3). Os perfis morfológicos e de expressão do intestino sustentam a submucosa intestinal (SI) como nicho hematopoiético. Nesta região há agregações de células com morfolia indiferenciada, corroborada pela análise ultraestrutural. Além disso, a SI mantém alta proliferação celular e freqüência de células piwi+. As ascídias são consideradas modelos interessantes para investigar a reprodução assexuada e o desenvolvimento modular. Este estudo representa um avanço na compreensão dos processos, populações celulares e estruturas que podem estar relacionadas a facilitar o surgimento desta novidade evolutiva

Submitted by Natalia Vieira (natalia.vieira@famerp.br) on 2016-05-19T22:35:49Z No. of bitstreams: 1 carlarodrigueszanin_dissert.pdf: 1343932 bytes, checksum: 87ed11d894ae43ccaba6aec342c754e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T22:35:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carlarodrigueszanin_dissert.pdf: 1343932 bytes, checksum: 87ed11d894ae43ccaba6aec342c754e8 (MD5) Previous issue date: 2015-07-31 / Irritable Bowel Syndrome (IBS) is a chronic gastrointestinal disorder that causes significant impairment on the patients´ quality of life. It is associated with anxiety, depression and stress. The objective of this study was to evaluate the impact of cognitive-behavioral therapy (CBT) associated with the conventional treatment of IBS . Fourteen adult patients (21 and 65 years old) participated in the study. They were attended once in a week during four months and had a six month-follow up in the outpatient clinic of a school hospital in the interior of São Paulo state . A convenience sample for the intervention groups (cognitive-behavioral therapy - CBT) and control (Conventional Treatment – CT) was used as selection standard. Hospital Scale of Anxiety and Depression ; Inventory of Stress-Related Symptoms; Scale of Modes Coping Problems; Quality of life; Visual Analog Scale (VAS ) and a register with sociodemographic data were used. Patients in both groups showed symptoms of anxiety, depression and stress, with reduction of symptoms in the evaluation after the four months and their follow up , in the CBT with significant clinical improvement of anxiety and depression and stress symptoms. No significant changes were observed in pre- and follow up of the CT G according to the symptoms of anxiety, depression and pain. All patients in both groups had pain at baseline, with a reduction in pain intensity in the post (4 months) at follow up (6 months), in the CBT, showing significant difference. At follow up (TC G and CBT G) a significant difference pointing out a decrease of pain complaints after psychological intervention in CBT G, suggesting that CBT has shown efficacy on the pain control treatment of IBS patients . Most of quality of life domains were assessed as unsatisfactory for both groups, with clinical improvement in post intervention assessment and follow up, in the CBT G. Comparing the follow up of the CT G and CBT G, data showed significant differences in the domains functional capacity, physical aspect, social aspect and emotional aspect, pointing out that psychological intervention plays an important role in the control and reduction of physical and emotional symptoms as well as showing significant difference in pre- and post intervention and pre and follow up in the CBT G. The least used coping strategy was facing the problem and social GTC in the pre and follow-up, the CBT G, the social confrontation was the least used in the pre. However, there was acquisition of coping strategies observed in post evaluation (4 months) and follow up (6 months) in the GTCC. The results showed some anxiety, depression, stress and impaired quality of life in this sample as well as positive impact of CBT for the control of physical and emotional symptoms and improvement in the quality of life and acquisition of coping strategies, demonstrating the need for appropriate intervention for patients with IBS. / A Síndrome do Intestino Irritável (SII) é um transtorno gastrintestinal crônico que acarreta prejuízos significativos na qualidade de vida dos pacientes e está associada à ansiedade, depressão e estresse. O objetivo do estudo foi avaliar o impacto da terapia cognitivo-comportamental (TCC) associado ao tratamento convencional da SII. Participaram do estudo 14 pacientes adultos (21 a 65 anos) em acompanhamento uma vez na semana durante quatro meses no Ambulatório de um Hospital de Ensino do interior paulista e follow-up de seis meses. A seleção foi por amostra de conveniência para os grupos de intervenção (Terapia Cognitivo-Comportamental - GTCC) e controle (Tratamento Convencional – GTC). Foram utilizados Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão; Inventário de Sintomas de Stress; Escala Modos de Enfrentamento de Problemas; Qualidade de Vida; Escala Visual Analógica (E.V.A.) e ficha com dados sóciodemográficos. Pacientes de ambos os grupos, apresentaram sintomas de ansiedade, depressão e estresse, com redução dos sintomas na avaliação, após os quatro meses e no follow up, no GTCC, com melhora clínica significante tanto dos sintomas de ansiedade, depressão e estresse. Não houve mudanças significantes na avaliação pré e follow up do G TC quanto aos sintomas de ansiedade, depressão e dor. Todos os pacientes de ambos os grupos apresentaram dor na avaliação inicial, com redução da intensidade da dor no pós (4 meses) no follow up (6 meses), no G TCC, mostrando diferença significante. No follow up (G TC e G TCC) houve diferença significante indicando diminuição das queixas de dor, após intervenção psicológica no G TCC, sugerindo que a TCC tem demonstrado eficácia no tratamento dos pacientes com SII para o controle da dor. A maioria dos domínios de qualidade de vida foi avaliado como insatisfatório para ambos os grupos, apresentando melhora clínica na avaliação pós intervenção e no follow up, no G TCC. Em comparação no follow up do GTC e GTCC, os dados mostraram diferenças significantes nos domínios capacidade funcional, aspecto físico, aspecto social e aspecto emocional, indicando que a intervenção psicológica desempenha papel importante no controle e redução dos sintomas físicos e emocionais, bem como apresentou diferença significante na avaliação pré e pós intervenção e pré e follow up no GTCC. A estratégia de enfrentamento menos utilizada foi o enfrentamento no problema e social no GTC na avaliação pré e follow up, no GTCC, o enfrentamento social foi o menos utilizado na avaliação pré. Entretanto houve aquisição de estratégias de enfrentamento observadas na avaliação pós (4 meses) e follow up (6 meses) no GTCC. Os resultados demonstraram a presença de ansiedade, depressão, estresse e prejuízos na qualidade de vida presentes nessa amostra e impacto positivo da TCC para o controle dos sintomas físicos e emocionais, bem como melhora na qualidade de vida e aquisição de estratégias de enfrentamento, demonstrando a necessidade de intervenção adequada para pacientes com SII.