Submitted by ÉRICK VALENTINO null (erick_valentino@hotmail.com) on 2016-04-26T14:52:46Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL.docx: 52289760 bytes, checksum: bad0cb631390a4b8559ecc8c42eb09ce (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão final da dissertação/tese deve ser submetida no formato PDF (Portable Document Format). O arquivo PDF não deve estar protegido e a dissertação/tese deve estar em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos, se houver. Por favor, corrija o formato do arquivo e realize uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-04-29T21:55:00Z (GMT) / Submitted by ÉRICK VALENTINO null (erick_valentino@hotmail.com) on 2016-05-01T17:52:34Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL.pdf: 3662256 bytes, checksum: 2afc06f93e79f4b0b2037b646b91fce4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-05-02T19:04:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 valentino_e_me_bot.pdf: 3662256 bytes, checksum: 2afc06f93e79f4b0b2037b646b91fce4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T19:04:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 valentino_e_me_bot.pdf: 3662256 bytes, checksum: 2afc06f93e79f4b0b2037b646b91fce4 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / Pró-Reitoria de Pesquisa (PROPe UNESP) / O envelhecimento populacional tem sido considerado um dos maiores desafios de saúde pública contemporânea, entre outros fatores leva à diminuição de hormônios, à perda progressiva da massa muscular e diminuição da força muscular. O exercício físico atua positivamente sobre esse sistema, bem como os derivados sintéticos da testosterona, os quais apresentam um efeito anabólico. Assim este trabalho teve como objetivo avaliar se a associação do exercício físico potencializado ou não por dose supra-fisiológica de decanoato de nandrolona previnem alterações decorrentes da idade no músculo sóleo de ratos e nas junções neuromusculares associadas. Foram utilizados 40 ratos Sprague-Dawley machos, com 90 dias de idade, os quais foram tratados durante 8 semanas e distribuídos, de acordo com o tratamento, em grupos de animais sedentários ou treinados, com ou sem o uso deDN. O treinamento físico foi realizado por sessões de saltos em água, três vezes por semana. Após atingirem 300 dias de idade, os músculos sóleos foram coletados e realizadas as seguintes análises: Análise morfológica e morfométrica das junções neuromusculares; Análise ultraestrutural das fibras musculares e junções neuromusculares associadas; Análise Imunohistoquímica e morfométrica das fibras Fast e Slow; Análise da Distribuição dos nAChRs por meio de microscopia confocal. Os resultados mostraram que houve diminuição do peso dos animais que fizeram uso de DN, embora o peso do músculo sóleo não tenha se alterado. A morfologia geral e morfometria das JNM se mantiveram constante nos grupos estudados, sendo que ultraestruturalmente as dobras juncionais eram escassas. Quanto à distribuição dos nAChRs , os animais que realizaram exercício, apresentaram um padrão de distribuição em de braços contínuos dos nAChR, nos demais o padrão em "ilha" estava presente. Na análise das fibras fast e Slow, o padrão morfométrico e quantitativo se mantiveram em todos os grupos experimentais. Sendo que núcleos centrais e áreas focais de lesão, bem como desorganização miofibrilar, foram observadas ultraestruturalmente nos animais que usaram DN. Os resultados permitem concluir que as alterações observadas neste estudo referem-se ao fator idade e que o exercício físico realizado na juventude manteve o padrão estrutural dos nAChR presentes nos jovens, já o DN não preveniu alterações morfológicas no sistema neuromuscular decorrente da idade. / Population aging has been considered one of the greatest challenges of contemporary public health; among other factors there is decreased hormone release, progressive loss of muscle mass, and decreased muscle strength. Physical exercise has a beneficial effect on that system, as well as synthetic testosterone derivatives, which have anabolic effect. This study had the objective of evaluating whether the association of physical exercise enhanced or not by supraphysiological dose of nandrolone decanoate prevents age-related alterations in the soleus muscle of rats and in the associated neuromuscular junctions. 40 male Sprague-Dawley rats, 90 days old, were treated for 8 weeks and distributed according to the treatment in sedentary or exercised group, with or without the use of ND. Physical training was conducted by jumps in water three times per week. At the age of 300 days, the soleus muscles were collected and analyzed as follows: morphologic and morphometric analysis of neuromuscular junctions; ultrastructural analysis of muscle fibers and associated neuromuscular junctions; immunohistochemistry and morphometric analysis of fast and slow-twitch fibers; analysis of the distribution of nAChRs by confocal microscopy. The results demonstrated that there was a decreased weight in the animals that used ND, although the weight of the soleus muscle did not change. The general morphology and morphometry of the NMJ remained constant in the groups studied, and in regard to ultrastructure the junctional folds were scarce. The animals that performed exercise had a pattern of nAChRs in continuous branches, in all the other animals the "island" pattern was present. The morphometric and quantitative pattern of slow and fast-twitch fibers remained stable in all groups. Central nuclei and focal areas of injury, as well as myofibrillar disorganization were observed in the animals that used ND. The results enable the conclusion that the alterations observed in this study were consequent to aging, and that physical exercise performed in youth maintained the structural pattern of nAChR present in the young animals. ND did not prevent morphological changes in the neuromuscular system consequent to aging. / PROPe: 0057/008/13

Orientador: Maria Julia Marques / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T17:15:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taniguti_AnaPaulaTiemi_M.pdf: 2340108 bytes, checksum: d096d9870bc1650ef2e8526da0771778 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma miopatia hereditária caracterizada pela falta de distrofina. Camundongos da linhagem mdx, tal como pacientes com DMD, não expressam a distrofina, desenvolvendo distrofia muscular semelhante a DMD. A junção neuromuscular distrófica apresenta alteração no padrão de distribuição dos receptores de acetilcolina (AChRs), provavelmente devida à falta de distrofina. Alterações semelhantes na distribuição dos receptores ocorrem em fibras musculares normais regeneradas e o terminal nervoso tem papel determinante nestas alterações. O presente trabalho teve por objetivo verificar se o terminal nervoso influencia o padrão de distribuição dos AChRs nas fibras musculares regeneradas distróficas. Animais mdx com 01 mês e 06 meses de idade tiveram o músculo esternomastóideo esquerdo desnervado e injetado com cloridrato de lidocaína. O músculo contra- lateral serviu como controle. Após 10 dias, os animais foram sacrificados, os AChRs marcados com rodamina-a-bungarotoxina e observados ao microscópio confocal. Músculos inervados de animais mdx com 01 mês de idade apresentaram os AChRs distribuídos em ilhas em 75,2% das JNMs observadas (n=137), enquanto animais com 06 meses de idade apresentaram 100% das JNMs (n=114) em ilhas. Na ausência da inervação, os AChRs distribuíram-se em padrão desnervado tipo braços contínuos em 79,4% das JNMs observadas (n=90) de animais com 01 mês de idade e em padrão desnervado tipo ilhas em 100% das JNMs (n=100) de animais com 06 meses de idade. Estes resultados sugerem que o terminal nervoso contribui de forma significativa para as alterações no padrão de distribuição dos AChRs de músculos distróficos inervados / Abstract: Changes in the distribution of acetylcholine receptors have been reported to occur at the neuromuscular junction of mdx mice and may be a consequence of muscle fiber regeneration rather than the absence of dystrophin. In the present study, we examined whether the nerve terminal determines the fate of acetylcholine receptor distribution in the dystrophic muscle fibers of mdx mice. The left sternomastoid muscle of young (1 month old) and adult (6 months old) mdx mice was injected with 60 ml lidocaine hydrochloride to induce muscle degeneration-regeneration. Some mice had their sternomastoid muscle denervated at the time of lidocaine injection. After 10 days of muscle denervation, nerve terminals and acetylcholine receptors were labeled with 4-Di-2-ASP and rhodamine-a-bungarotoxin, respectively, for confocal microscopy. In young mdx mice, 75% (n=137 endplates) of the receptors were distributed in islands. The same was observed in 100% (n=114 endplates) of the adult junctions. In denervated-regenerated fibers of young mice, the receptors were distributed as branch- like aggregates in 80% of the endplates (n=90). In denervated-regene rated fibers of adult mice, the receptors were distributed in island-like aggregates in 100% of the endplates (n=100). These findings suggest that nerve-dependent mechanisms are involved in the changes in receptor distribution in young dystrophic muscles. In older dystrophic muscles other factors may play a role in their distribution / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Lea Rodrigues-Simioni, Maria Alice Cruz-Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T10:01:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franco_YokoOshima_M.pdf: 11411260 bytes, checksum: 5403f0689ceac02dc46c3ee98511f0c5 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar as atividades neurotóxica e miotóxica das peçonhas de Crotalus duhssus tenificus (Cdt,10 ng/ml), Bothrops jararacussu (Bjssu, 50 ng/ml) e de suas principais toxinas, crotoxina (CrTX, 10 ng/ml) e bothropstoxina (BthTX, 20 ng/mi), respectivamente. Utilizamos antivenenos (AV) comerciais e específicos para avaliar a capacidade de neutralização dessas atividades, em preparações biológicas (camundongo), nervo frênico-diafragma (NFD) e extensor digitorum longus (EDL). O AV eqüino comercial empregado foi produzido pelo Instituto Vital Brazii. O AV específico foi produzido por inoculação sucessiva, em coelhos, com veneno totat de Cdt, Bjssu e da toxina CrTX. O acompanhamento da produção de anticorpos foi realizado por imunodifusão e, posteriormente, confirmado pela técnica de ELISA. A atividade neurotóxica foi avaliada por intermédio de técnica miográfica e a miotóxica, através de determinação de creatinoquinase (CK), in vitro, e de análise histológica. Os dois venenos e suas respectivas toxinas produziram bloqueio neuromuscular dose-dependente e mionecrose, em diferentes graus. O estudo do bloqueio neuromuscular evidenciou diferenças entre as preparações utilizadas (NFD e EDL), quanto à sensibilidade aos venenos e toxinas, provavelmente pela constituição predominante de fibras de contração rápida (EDL) e lenta (NFD). A neutralização do bloqueio neuromuscular mostrou ser dose-dependente na preparação NFD e, a partir de determinada dose de AV, foi registrada uma facilitação importante para os AV comerciais. A neutralização cruzada também foi investigada para Bjssu e BthTX, em ambas as preparações, e novamente a resposta foi diferente entre elas. Os elevados níveis obtidos da enzima CK, liberada após 120 minutos de exposição aos AV, sozinhos, o que pretendia ser um simples controle, revefou que, possivelmente a quantidade de proteínas interfira no mecanismo liberador de CK Isto sugere que a determinação enzimática, em associação à análise histológica, pode constituir um parâmetro quantitativo de mionecrose, mas deve ser interpretada com cuidado na avaliação de lesão celular se estudada individualmente. A análise histológica revelou que a capacidade do veneno botrópico de destruir a musculatura esquelética é maior do que a do crotálico, nas condições experimentais empregadas. Os AV específicos foram eficientes na neutralização da miotoxicidade. Pode-se concluir que, o estudo da neutralização com AV produzido de frações purificadas, associada aos parâmetros miográficos e miotóxicos, pode constituir um modelo útil na dissociação entre as atividades neurotóxica e miotóxica das toxinas / Abstract: This thesis evaluates the neurotoxic and myotoxic activities of Crotalus durissus terrificus (Cdt, 10 \xg/m\) and Bothrops jararacussu (Bjssu, 50 ng/ml) venoms and their major toxins, crotoxin (CrTX, 10 ng/ml) and bothropstoxin-l (BthTX-l, 20 ng/ml), respectively, and the ability of commercial and specific antivenoms to neutralize these activities. Neurotoxic activity was studied in vitro using the phrenic nerve-diaphragm (PND) and extensor digitorum longus (EDL) preparations. Myotoxic activity was determined by measuring the release of CK in vitro from the EDL preparation as well as by histological analysis. The commercial equine antivenom employed was produced by the Instituto Vital Brazil. The specific antiCdt, antiBjssu and antiCrTX antivenoms were raised in rabbits by successive inoculations over a two month period. The antibody production was determined by both immunodiffusion and by an enzyme-linked immunosorbent assay (EUSA). Both of the venoms and their respective toxins produced a dose-dependent neuromuscular blockade as well as differing degrees of necrosis. The variation in sensitivity between the two preparations may reflect the presence of predominantly fast fibers in the EDL and slow fibers in the PND. Neutralization of the neuromuscular blockade was dose-dependent in the PND and, at elevated concentrations, the antisera produced facilitation of the preparation. Bjssu venom was more potent than Cdt venom in producing skeletal muscle damage under the conditions employed here. The specific antivenoms had a greater neutralization capacity than the commercial antivenoms. Concomitant studies on the neutralization of both neurotoxic and myotoxic activities may provide a useful model for dissociating these two activities / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Marcos Dias Fontana / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T03:25:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gregio_AnaMariaTrindade_D.pdf: 2249313 bytes, checksum: 6fac809aa95af8768f99c3cb5d8801a4 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O presente trabalho relata uma comparação entre as duas principais espécies de escorpião de importância médica: T. serrulatus e T. bahiensis. O estudo dos acidentes escorpiônico é muito importante devida sua gravidade e freqüência que ocorrem. O estudo comparativo dos venenos de escorpião T. bahiensis e T. se"ulatus foi dividido em duas partes. Primeiramente o estudo farmacológico em preparações isoladas (preparação nervo frênico-diafragma de rato, aurícula isolada, biventer cervicis de pintainho), além de pressão arterial de rato e dose mediana letal em camundongos. Nestes experimentos utilizou-se o veneno de T. serrulatus e T. bahiensis nas mesmas doses para estabelecer uma comparação de seus efeitos. A segunda parte do trabalho: estudos bioquímicos com estes venenos. Foi realizado estudos sobre atividades enzimáticas destes venenos (atividade proteolítica e hialuronidásica) e o fracionamento destes venenos através de cromatografia por gel filtração. Os principais picos destes fracionamentos foram testados em preparação nervo frênico-diafragma de rato, para verificação da atividade neuromuscular destas frações. Em preparações isoladas nervo frênico-diafragma de rato e preparação de biventer cervicis de pintainho os venenos comportaram-se de maneira semelhante, na preparação de aurícula isolada de cobaia e pressão arterial de rato pode-se constatar uma discreta diferença para o veneno de T.bahiensis, este promovia uma bradicardia e hipotensão mais acentuadas do que o veneno de T. se"ulatus. Além disso, em preparações nervo frênico diafragma de rato onde foi analisado a atividade dos venenos sobre os "twitches " o veneno de T. bahiensis demonstrou ser mais ativo nas preparações que haviam sido previamente Icurarizadas (d-Tc 14,6 11M), pois induziu o aparecimento de contraçoes espontâneas e aumento no tempo de relaxamento. Em termos de letal idade o veneno de T. se"ulatus mostrou-se mais potente que o veneno de T.bahiensis, também revelou ser mais potente no antagonismo do bloqueio neuromuscular em preparações curarizadas pela d-Tc (1 ,46 11M). A atividade hialuronidásica demonstrou níveis parecidos para ambos venenos, o que leva a crer que os venenos em estudo tenham um bom fator de difusão nas membranas. Quanto à atividade proteolítica, não foi encontrada nos dois venenos. O perfil do fracionamento foi diferente para ambos venenos, porém suas frações reproduziram os mesmos efeitos: aumento na amplitude das contrações, contrações espontânes, contraturas e bloqueio neuromuscular. Todos estes efeitos também foram visualizados com o veneno total. Nossos resultados sugerem que, as duas espécies de escorpião possuem uma taxonomia relativa, porém contém toxinas diferentes que exercem efeitos farmacológicos similares sobre preparações neuromusculares / Abstract: T. bahiensis and T.serrulatus are the main scorpion species involved in envenomations in the Brazil, the latter being the more widely distributed. Clinically, envenomations by T. serrulatus is more serious than that by T. bahiensis. In this thesis, the lethal and neurotoxic activities of venoms from these two species were compared. Male Swiss withe mice (18-20 g) were used to determine the Lv. LDso of the venoms and the rat phrenic nerve-diaphragm preparations was used to examine the neuroxic activity. The LDso for T. bahiensis and T. serrulatus venom was 0,72 (95% CI: 0,68 -0,75) mg/Kg and 0,54 (95% CI: 0,45-0,64) mg/Kg, respectively. In phrenic nerve-diaphragm preparations, both venoms (2,5 _g/ml) produced similar responses, namely, na increase in contraction amplitude and in the number of fasciculations, as well as mucle contracture followed by neuromuscular blockade. Similar effects were observed for the two venoms in the chik biventer cervicis neuromuscular preparation. T.serrulatus venom completely reverted the neuromuscular blockade produced by d-tubocurarine (d-Tc 1,46 M) in 35,0.:!: 1,8 min and 18,0.:!: 1,2 min at the concentrations of 2,5 _g/ml and 5 _glml, respectively. At these same concentrations, T. bahiensis venom produced only partial reversal after 60 mino Both venoms (100-600_g/Kg) produced marked alterations in the blood pressure of anesthesized rats, including hypo- and hypertensive responses as well as bradycardia. The latter effect was also observed in guinea-pig isolated atria. In both of these preparations, T. bahiensis venom was moe potent than T.serrulatus venom. The fractionation of T. bahiensis and T.serrulatus venoms by gel filtration on Superdex 75 resulted in 13 na 12 peaks, respectively. Ali peaks were tested neuromuscular activity in the isolated phrenic nerve-diaphragm preparation. Several peaks increased the amplitude of the contractions in indirectly stimulated preparations and produced neuromuscular blockade and fasciculations, as well as spontaneous muscle contractions. In general, the venoms of T. bahiensis and T. serrulatus produced similar pharmacological effects but differed in potency. Since Tityus scorpions venoms contain a variety of alfa and beta neurotoxins with marked neuromuscular activity, the differences seen between these two venoms may reflect variation in their content of these toxind or may indicate the presence of novel toxins with similar pharmacological effects on the mammalian neuromuscular junction / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Lea Rodrigues-Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T14:03:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Galbiatti_Charlene_M.pdf: 3708573 bytes, checksum: eb349f7f5062bd08e487dc8ae3c13167 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: No presente trabalho foram estudados os efeitos neuromusculares da toxina Bmaj-9 isolada do veneno de Bothrops marajoensis no laboratório de química de proteínas da Unicamp. Esta toxina foi ensaiada: nas preparações biventer cervicis de pintainho, nervo frênico diafragma de camundongo e no músculo gastrocnêmio de camundongo. Em preparações de ave, a Bmaj-9 causou bloqueio neuromuscular completo irreversível nas concentrações de 5, 10 e 20 µg/mL, sem afetar as contraturas evocadas pela adição exógena de ACh (110 µM). Além disso mostrou-se pouco ativa na preparação nervo frênico diafragma de camundongo. A Bmaj -9 não interferiu na resposta muscular a estímulos elétricos direto em preparações de biventer cervicis de pintainho previamente curarizadas. Ensaios bioquímicos mostraram que a Bmaj-9 exibiu uma pronunciada atividade fosfolipásica quando comparada a do veneno bruto. Assim, submetendo-se preparações incubadas com a toxina a baixa temperatura (22 °C), observou-se a ausência do seu característico efeito bloqueador neuromuscular. A análise histológica in vitro mostrou que esta fração em baixas concentrações não causou alteração morfológica significativa embora tenha determinado um leve aumento na liberação da enzima creatinoquinase. Em altas concentrações, no entanto, foi observado algum dano muscular na região periférica do músculo. In vivo, a Bmaj-9 causou uma discreta alteração morfológica e também um leve aumento nos níveis de CK após injeção intramuscular, mostrando uma correlação positiva entre os efeitos dos parâmetros estudados - lesão muscular e liberação de CK, esses dados, em nada se comparam aos efeitos de venenos ou toxinas tipicamente botrópicas. O registro do PM mostrou que a Bmaj-9 (10 µg/mL) não produziu despolarização da membrana muscular, e a medida do conteúdo e do tamanho quânticos, em preparação nervo frênico-diafragma de camundongo, mostrou que houve um leve aumento nos valores do conteúdo quânticos após 15 minutos de incubação. Após 60 minutos de incubação, o efeito da Bmaj-9 sobre os valores do conteúdo e tamanho quânticos foram, respectivamente: 70,5 ± 11 e 0,21 ± 0,06 mV. Estes não foram significativamente diferentes quando comparados com os valores controle (68,0 ± 8,9 e 0,17 ± 0,04 mV). Estes resultados sugerem que o bloqueio da transmissão neuromuscular, causado por esta toxina em baixas concentrações, seja muito provavelmente devido a uma ação pré-sináptica, resultado de sua interação com a membrana do terminal nervoso motor. / Abstract: In the present work, the neuromuscular effects of the toxin Bmaj-9 isolated from the venom of Bothrops marajoensis in the laboratory of chemistry of proteins at Unicamp were studied. This toxin was assayed in biventer cervicis preparations of little chicken, phrenic diaphragm nerve of mice and in gastrocnemius muscles of mice. In birds preparation, Bmaj-9 caused irreversible complete neuromuscular blockade in the concentrations of 5, 10 and 20 µg/mL not affecting the contractures caused by the exogenous addition of Ach (110 µM). Moreover, Bmaj-9 was not very active in the phrenic diaphragm preparation of mice. It has not interfered in the muscular response to direct electrical stimuli in biventer cervicis preparations of little chicken previously curarized. Biochemical assays showed that Bmaj-9 exhibited pronounced phospholipase activity when compared to crude venom. Thus, when preparations incubated with the toxin were submitted to low temperatures (22°C), the absence of the characteristic neuromuscular blocking effect of the fraction was observed. The histological analysis in vitro showed that even having determined a low increase on the release of the creatino-kinase enzyme, low concentrations of this fraction did not cause significant morphological alteration. Nevertheless, in high concentrations some muscular damages in the peripheral region of the muscle were observed. In vivo, Bmaj-9 caused a slight morphological alteration and also a discrete increase on the CK levels after intramuscular injection, showing a positive correlation among the effects of the parameters studies - muscular lesion and CK release. These data obtained with Bmaj-9 are extremely inferior to the ones obtained with bothropic venoms or toxins. The registration of the resting membrane potential showed that Bmaj-9 (10 µg/mL) did not produce depolarization of the muscular membrane and the measurement of the content and quantum size, in phrenic diaphragm preparation of mice, showed that a slight increase on the quantum amount was detected after 15 minutes of incubation. After 60 minutes of incubation, the effect of Bmaj-9 over the content and quantum size values was 70.5 ± 11 and 0.21 ± 0.06 mV, respectively; these values were not significantly different when compared to control values (68.0 ± 8.9 and 0.17 ± 0.04 mV). These values suggest that the blockade of the neuromuscular transmission caused by this toxin in low concentrations is probably due to a pre-synaptic action resulting from the interaction of the toxin with the membrane of the motor nerve terminal. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Lea Rodrigues Simioni, Yoko Oshima Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T21:34:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oshima_Mario_M.pdf: 4940483 bytes, checksum: bc15df4a36f3737d47cf0f530205de21 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O polietilenoglicol (PEG) tem sido amplamente utilizado em diversos setores, entre eles, o cosmético, odontológico, farmacêutico (até como carreador de fármacos a órgãos-alvo), em virtude de suas fantásticas propriedades químicas. Por tal razão, é denominada uma molécula bioativa e teve o seu consumo interno aprovado pelo Food and Drug Administration (FDA). O objetivo deste trabalho foi pesquisar os efeitos farmacológicos do PEG 400 sobre a junção neuromuscular; a partir de observações experimentais em preparações de camundongo e pintainho. Concentrações de 3 µM, 20 µM e 100 µM de PEG 400, d-Tc (6 µM), neostigmina (12 µM) e dantrolene (30 µM) auxiliaram na busca do entendimento do mecanismo do PEG sobre a junção neuromuscular. Foram utilizadas em técnicas miográfica, eletrofisiológica e análise morfológica, nas preparações nervo frênico-diafragma (NFD) de camundongos e biventer cervicis (BC) de pintainhos. Especificamente, foi investigada a ação do PEG 400 sobre o terminal nervoso, fenda sináptica, receptores nicotínicos ou fibra muscular. Os resultados obtidos através da técnica eltrofisiológica mostraram que o PEG 400 não exibe ação pré-sináptica, pois não interfere no valor do CQ e nem mesmo apresenta ação anticolinesterásica quando comparado à neostigmina como controle positivo; também não mostrou qualquer efeito em receptores nicotínicos, mas alterou a polaridade do sarcolema causando despolarização das fibras musculares (-80 mV para -16 ± 1,7 mV) para o PEG 400 (100 µM). Além disso, o PEG 400 (20 µM ) em BC, exibiu antagonismo ao dantrolene (inibidor de receptor de rianodina) e impediu seu efeito sobre a contração muscular através do Cálcio. Finalmente, o PEG 400 não causa mionecrose (3 µM e 20 µM), nem mesmo em concentrações maiores (100 µM), nas quais causa bloqueio total das respostas do músculo BC. / Abstract: Polyethyleneglycol has been widely used in several areas such as cosmetic, odontology and pharmaceutical (even as drugs carrier) due to its chemical properties. Thus, it is considered a bioactive molecule being its internal consumption approved by the Food and Drug Administration (FDA). The aim of this study was to analyze the pharmacological effects of PEG 400 over the neuromuscular junction through experimental observations in mice preparations due to the increase of the contractile response amplitude (facilitating effect). Conventional myographic techniques, morphological and electrophysiological analysis were used in mice, phrenic nerve diaphragm preparations (PND) and chick, biventer cervicis preparations (BC). Concentrations of 3 µM, 20 µM and 100 µM of PEG 400, d-Tc 6 µM, neostigmine 12 µM and dantrolene 30 µM helped in the search for the understanding of PEG mechanism. Specifically, the action of PEG 400 was investigated over the nervous terminal, the synaptic cleft, nicotinic receptors or muscle fiber. The results obtained through the electrophysiological technique showed that PEG 400 did not exhibit pre-synaptic action and did not act as an anticholinesterasic, as well as neostigmine. It has not presented action over nicotinic receptors but it presented post-synaptic action, interfering on the sarcolemma polarity and reverting the action of the Calcium antagonist, dantrolene, suggesting an interference of the contraction mechanism through Calcium and the ryanodine receptor. Finally, PEG 400 did not cause mionecrosis (3 µM and 20 µM) even in concentrations high enough to cause total muscle blockade (100 µM). / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T23:41:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Monzon_GeorginaSucasaca_M.pdf: 3056250 bytes, checksum: d246d55d0b29698ce7253fb6a9fc3f6a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O veneno botrópico possui uma mistura de substâncias protéicas necessárias para a sobrevivência da serpente, dentre elas, as mais amplamente estudadas são as fosfolipases A2, que hidrolisam glicerofosfolipídios de membrana na posição sn-2, liberando isofosfolipídios e ácidos graxos, que além de desempenhar uma ação biológica no processo de digestão de lipídios, exibem também uma ampla variedade de efeitos farmacológicos. O presente trabalho teve como objetivo, caracterizar farmacologicamente uma nova fosfolipase A2 denominada Bp-13 do veneno de Bothrops pauloensis, serpente endêmica do cerrado brasileiro, avaliando sua ação sobre a junção neuromuscular, efeito miotóxico e atividade edematogênica. A Bp-13 foi purificada utilizando-se o sistema cromatográfico HPLC de fase reversa em coluna µ-Bondapack C18; possuindo uma massa molecular de 14 035 Da e atividade catalítica de 2,43 nmol/min/mg (30-35 ºC), dependente de Ca2+ porém inibida por Mg2+, Mn2+, Cd2+ e Sr2+. A atividade neuromuscular foi avaliada em preparações biventer cervicis (BC) de pintainho, extensor digitorum longus (EDL) e nervo frênico-diafragma (NFD) de camundongo, sob estimulação elétrica indireta durante 120 min a 37 ºC. A Bp-13 (3,56 µM) induziu bloqueio neuromuscular completo e irreversível, nas preparações de mamífero, que se mostraram mais sensíveis à ação da toxina do que as preparações de ave. Em preparação BC de pintainho o bloqueio neuromuscular foi de 28 ± 2 % após 120 min de incubação com a Bp-13 (7,12 µM) e a contratura evocada após a adição exógena de ACh foi parcialmente inibida. Concentrações menores (0,71 e 1,42 µM) foram testadas na preparação NFD de camundongo, induzindo o bloqueio da resposta contrátil em 29 ± 5 % e 55 ± 6 %, respectivamente. Em alguns experimentos, onde o Ca2+ foi substituído pelo Sr2+ na solução de Tyrode houve ausência do bloqueio neuromuscular característico da Bp-13 (3,56 µM); evento semelhante foi observado quando a temperatura do banho foi alterada de 37 ºC para 24 ºC, com bloqueio de 37,4 ± 6 % da resposta contrátil. A Bp-13 (3,56 µM) foi capaz de inibir a resposta contrátil a estímulo elétrico direto em preparações NFD de camundongo previamente curarizadas. Com o estudo eletrofisiológico realizado em preparação músculo hemidiafragma de camundongo, avaliaram-se os potenciais de membrana em repouso (PM). A Bp-13 (3,56 µM) causou uma despolarização progressiva do sarcolema, alcançando valores de -80 ± 1 mV (controle) até -37 ± 3 mV após 120 min de incubação com a toxina. Em preparações músculo diafragma pré-tratadas com d-Tubocurarina (10 µM), observou-se uma redução da despolarização induzida pela da Bp-13 (-37 ± 3 mV para -58 ± 2 mV). A miotoxicidade foi avaliada in vitro através de análise morfológica do músculo diafragma de camundongo e in vivo através da determinação da atividade de creatinoquinase (CK). Na análise morfológica considerou-se fibras normais as que mantiveram íntegro o sarcolema com o formato poligonal e fibras alteradas as que apresentavam hipercontração das miofibrilas, células com lesão tipo delta, edemaciadas e vacuolizadas. A porcentagem de fibras lesadas de preparações incubadas com o veneno de Bothrops pauloensis (100 e 50 µg/mL) foi de 14,4 ± 3 % e 8,7 ± 3 % respectivamente; e com a fração Bp-13 (20 e 50 µg/mL) foi de 8,3 ± 4 % e 30,6 ± 5 %, respectivamente. Quando as preparações foram mantidas em solução de Tyrode, onde o Ca2+ foi substituído pelo Sr2+, as alterações morfológicas foram de 36,7 ± 11 %, ou seja, semelhante aos valores observados com a Bp-13 na solução de Tyrode normal. O aumento nos valores de liberação de creatinoquinase, após 30 min da injeção da Bp-13, revelou o efeito miotóxico in vivo, valores que retornaram ao normal após 6 horas. A dose de 10 µg/pata de Bp-13 injetada em ratos via intraplantar induziram a formação de edema de pata após 15 min de injeção da toxina. Conclui-se, então, que a Bp-13 é uma miotoxina, que inibe a resposta neuromuscular dependente de temperatura e de Ca2+, em preparações isoladas EDL e NFD de camundongo, sugerindo que a atividade catalítica possivelmente contribua com o evento farmacológico, embora o efeito mionecrótico in vitro não seja afetado, indicando uma dissociação entre estes efeitos. / Abstract: Bothropic venom has several substances necessary to serpent survival, among them, one of the most widely studied are phospholipase A2 enzymes, that hydrolise sn-2 from membrane phospholipids, releasing lysophospholipids and fatty acids, which beyond playing a biological action in the lipid digestion process, also exhibit a wide variety of pharmacological effects. The present work had as objective to characterize pharmacologically a new phospholipase A2 denominated Bp-13 from the Bothrops pauloensis (endemic serpent to the Brazilian cerrado) venom, evaluating its action at neuromuscular junction, myotoxic effect and edematogenic activity. Bp-13 was purified through chromatographic system, a reverse phase HPLC on a µ-Bondapack C18 column; it has a molecular mass of 14 035 Da, 2,43 nmol/min/mg (30- 35 ºC) catalytic activity Ca2+ dependent, however it was inhibited by Mg2+, Mn2+, Cd2+ and Sr2+. Neuromuscular activity was evaluated in chick biventer cervicis (BC) preparations, extensor digitorum longus (EDL) and mouse phrenic nerve-diaphragm (PND), under indirect electrical stimulation during 120 minutes, at 37oC. Bp-13 (3,56 µM) induced complete and irreversible neuromuscular block in mammalian preparations, which showed to be more sensitive to toxin action than bird preparations. In chick BC preparation, neuromuscular block was 28 ± 2 % after 120 minutes incubation with Bp-13 (7,12 µM) and evoked contracture after exogenous ACh addiction was partially inhibited. Smaller concentrations (0,71 e 1,42 µM) were tested in mouse PND preparation, inducing block of the contractile response in 29 ± 5 % and 55 ± 6 %, respectively. In some experiments, where Ca2+ was substituted for Sr2+ in Tyrode's solution, there was absence of the Bp-13 characteristic neuromuscular block (3,56 µM); similar event was observed when the bath temperature was altered from 37 ºC to 24 ºC, with a block of 37,4 ± 6 % of the contractile response. Bp-13 (3,56 µM) was able to inhibit contractile response to direct electrical stimulus in previously curarized mouse PND preparations. Through electrophysiological study performed in mouse hemidiaphragm muscle preparation, membrane potentials at rest were evaluated (MP). Bp-13 (3,56 µM) caused a progressive sarcolemma depolarization, reaching values from -80 ± 1 mV (control) until - 37 ± 3 mV after 120 minutes in toxin incubation. In d-tubocurarine (10 µM) pre-treated hemidiaphragm muscle preparations, a depolarization reduction was observed, induced by Bp-13 (-37 ± 3 mV to -58 ± 2 mV). Myotoxicity was evaluated in vitro through morphological analysis of the mouse hemidiaphragm muscle and in vivo through determination of creatinkinase (CK) activity. Regarding morphological analysis, fibers which maintained intact sarcolemma with polygonal shape were considered normal, and fibers which presented hypercontraction of myofibrils, delta type lesion cells, edemaciated and vacuolized, were considered altered fibers. Lesioned fibers from Bothrops pauloensis (100 and 50 µg/mL) venom incubated preparations were 14,4 ± 3 % and 8,7 ± 3 % , respectively; and for Bp-13 fraction (20 e 50 µg/mL) they were 8,3 ± 4 % and 30,6 ± 5 %, respectively. When preparations were Ca2+ was substituted for Sr2+, morphological maintained in Tyrode's solution, where alterations were 36,7 ± 11 %, that is similar to the observed values with Bp-13 in normal Tyrode's solution. The increase in creatinkinase release values after 30 minutes of Bp-13 injection revealed in vivo myotoxic effect, values that returned to normal after 6 hours. Bp-13 concentration of 10 µg injected in rats via intraplantar induced paw edema formation after 15 minutes of toxin injection. In conclusion, Bp-13 is a myotoxin that inhibits temperature and Ca2+ dependent neuromuscular response in mouse EDL and PND isolated preparations, suggesting that its catalytic activity possibly contributes to the pharmacological event, although in vitro myotoxic activity was unaffected by these treatments, indicating a dissociation between these effects. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T11:19:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moura_PriscilaRandazzode_D.pdf: 2478214 bytes, checksum: bbb891d96754c5530c891d237eeb45c9 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Os efeitos miotóxicos dos venenos botrópicos são inquestionáveis pela exuberante manifestação clínica e são extensivamente relatados na literatura. Já os efeitos neurotóxicos têm sido descritos sob condições in vitro, em preparações neuromusculares, com pouca ou nenhuma evidência clínica. O objetivo do presente estudo foi o de contribuir para o conhecimento sobre a caracterização bioquímica e farmacológica da Bp-12, uma nova miotoxina do veneno de B. pauloensis. O perfil cromatográfico do veneno evidenciou 18 picos, o pico 12 (Bp-12) refere-se a nova fração estudada, uma vez que em ensaios preliminares apresentou efeito sobre a JNM. O perfil eletroforético da Bp-12 mostrou a presença de uma única banda protéica com aproximadamente 14 kDa, confirmado pela espectrometria de massa (13.789,56 Da). A composição de aminoácidos apresentou alto conteúdo dos resíduos, Lys, Tyr, Gly, Pro e Cys, típicos de PLA2 básicas. A Bp-12 possui 122 resíduos de a.a.: SLFELGKMIL QETGKNPAKS LGAFYCYCGW GSQGQPKDAV DRCCYVHKCC YKKITGCNPK KDRYSYSWKD KTLVCGEDNS CLKELCECDK AVAICLRENL NTYNKKYRYF LKPLCKKADA AC, com pI de 8,55 e uma alta homologia com outras PLA2 Lys49 botrópicas (92,6 %). A preparação nervo frênico-diafragma (NFD) de camundongo foi mais sensível à ação da toxina do que a preparação biventer cervicis de pintainho. Em preparações NFD, a Bp-12 (3,6 ?M) induziu 50% de bloqueio em 17 ± 7 min, inibindo completamente a resposta contrátil a estímulos indiretos (120 min, 37 °C); o bloqueio neuromuscular irreversível também foi observado, quando o Ca2+ foi substituído pelo Sr2+ na solução de Tyrode, quando a preparação foi curarizada (estímulo direto) ou quando submetida à baixa temperatura (22 °C). O registro do PM mostrou que a partir de 15 min de incubação com a Bp-12 (3,6 ?M) ocorreu uma progressiva despolarização da membrana, com valores de -20,2 ± 1 mV (90 min, p<0,05). Após 60 min de incubação, o efeito da Bp-12 (3,6 ?M) sobre os valores do conteúdo e tamanho quântico e amplitude média foram respectivamente: 50 ± 8; 0,09 ± 0,01 e 3,0 ± 0,3 mV, estes não foram significativamente diferentes quando comparados com os valores controle (68 ± 9; 0,07 ± 0,01 e 3,3 ± 0,2 mV). Nos estudos de miotoxicidade, após 120 min de incubação com 50 ?g/mL de veneno de B. pauloensis ou de Bp-12, o músculo diafragma apresentou áreas de mionecrose da ordem de 26 ± 2 % e 27 ± 1 % (p<0,05), respectivamente. Os níveis de CK plasmático aumentaram significativamente após a administração intramuscular de Bp-12, sendo: 827 ± 92 U/L (50 ?g) e 225 ± 36 U/L (20 ?g) versus 48,3 ± 8 U/L (controle), entretanto, com a via intravenosa não houve aumento significativo, mostrando que a Bp-12 não produz miotoxicidade sistêmica. A Bp-12 (2,5; 5,0 e 10,0 ?g/pata) induziu edema de pata dependente da dose, caracterizada por apresentar início de ação rápido, em torno de 30 min, sendo: 0,4 ± 0,02 mL; 0,6 ± 0,05 mL e 0,7 ± 0,07 mL, respectivamente; também foi calculada a área sob a curva para cada dose injetada, cujos valores foram (mL.h): 0,5 ± 0,02 (salina); 0,9 ± 0,11; 1,3 ± 0,15 e 1,7 ± 0,19, respectivamente. Conclui-se que a Bp-12 é uma nova PLA2 Lys49 miotóxica, de caráter básico, com baixa atividade catalítica, que induz bloqueio neuromuscular irreversível dependente do tempo e da concentração e que apresenta atividades farmacológica e bioquímica características de miotoxinas botrópicas. / Abstract: The myotoxic effects caused by bothropics venoms are unquestionable by their exuberant clinic manifestation and are extensively related in literature, since the neurotoxic effects have been described in vitro conditions, in nerve-muscle preparations, with little or neither clinic evidence. The aim of this study was to contribute for the knowledge about the pharmacological and biochemical characterization of Bp-12, a new myotoxin from B. pauloensis snake venom. The elution profile of B. pauloensis crude venom after purification in one chromatographic step presented eighteen peaks ranging from Bp-1 to Bp-18. Peak 12 was named Bp-12 and resulted in one small peak with a retention time of 37 min, eluting at 56% of buffer B. The SDS-PAGE gel showed one electrophoretic band, indicating that this toxin was obtained with high homogeneity and a molecular mass of around 14 kDa, confirmed by MALDI-TOF mass spectrometry, which showed that the protein had a molecular mass of 13789.56 Da. The amino acids composition showed that Bp-12 presented high content of Lys, Tyr, Gly, Pro, and 14 half-Cys residues, typical of a basic PLA2. The sequence of Bp-12 contains 122 amino acid residues: SLFELGKMIL QETGKNPAKS LGAFYCYCGW GSQGQPKDAV DRCCYVHKCC YKKITGCNPK KDRYSYSWKD KTLVCGEDNS CLKELCECDK AVAICLRENL NTYNKKYRYF LKPLCKKADA AC, with a pI value of 8.55 and with a high homology with Lys49 PLA2 from other bothropics venoms. In mouse phrenic nerve-diaphragm (PND), the time needed for 50% paralysis was 17 ± 7 min (3.6 ?M). Bp-12 can induce indirect and directly blocked evoked twitches, even in the preparations in which Ca2+ is replaced by Sr2+ or low temperature (22 °C), being the addition of d-tubocurarine required for direct blocking. The resting membrane potential showed that after 15 min of incubation with Bp-12 (3.6 ?M), progressive despolarization decreased from -83.9 ± 1 mV to -20.2 ± 1 mV (90 min, p<0.05). Intracellular recordings of endplate potentials (EPPs) from mouse diaphragm preparations revealed that Bp-12 did no alter the quantal content (50 ± 8, t60, p>0.05 of the control). Incubation with Bp-12 (50 ?g/mL) or B. pauloensis (50 ?g/mL) for 120 min damaged 26 ± 2 % and 27 ± 1 % (p<0,05), respectively. Bp-12 (20 and 50 ?g/50 ?L) has significantly increased the release of CK levels in the serum after 60 min of i.m. administration, being the values: 827 ± 92 U/L and 225 ± 36 U/L (20 ?g/mL). However, i.v. administration has not presented significant increased. Bp-12 (2.5 - 10.0 ?g/paw) induced local oedema formation in rat paw in vivo at around 30 min, being found the values of: 0.4 ± 0.02 mL (2.5 ?g/paw), 0.6 ± 0.05 mL (5.0 ?g/paw) and 0.7 ± 0.07 mL (10.0 ?g/paw). In conclusion, Bp-12 is a new myotoxic PLA2 (Lys49), with low catalitic activity, that is able to induce irreversible neuromuscular blockade and presents biochemical and pharmacological activities characteristic of bothropics miotoxins. / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:21:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Durigon_AndreMarchi_M.pdf: 4253171 bytes, checksum: d40a5c4577ed52c635254ee0ab159b13 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: No presente estudo, os efeitos farmacológicos do veneno de Bothrops neuwiedi pauloensis foram estudados em preparações nervo frêniCCHiiafragma de camundongo e biventer cervicis de pintainho. Em preparações biventer cervicis de pintainho, na temperatura de 37°C, o veneno, (1,5, 10,50 e 100 J1g/ml) produziu bloqueio neuromuscular progressivo e dependente da concentração. Em baixas concentrações (1,5, 10 e 20 J1g1m1), as respostas ao KCI (13,4 mM), aplicado ao banho, foram parcialmente inibidas, enquanto que as respostas à ACh (110 mM ou concentrações cumulativas de 10-6 - 10-2 mM) permaneceram após a incubação com o veneno, e na vigência de bloqueio total. Em altas concentrações (50 - 100 J1g1ml), o veneno causou contratura, inibiu as respostas à ACh, ao KCI e as contrações em resposta à estimulação elébica direta. Estes efeitos não foram observados à temperatura ambiente (20 - 24° C), quando COf11)8rados aos obtidos a 37°C. Na preparação hemidiafragma de camundongo, na concentração de 20 p.gImI, o veneno inibiu irreversivelmente (60 :t 10 % de bloqueio; p < 0,05; n = 6) as respostas à estimulação elétrica indireta. Na mesma preparação a concentração de 50 J1g1ml do veneno determinou bloqueio completo das contrações musculares em resposta à estimulação elétrica indireta (n = 5) e direta (n = 6). Na ausência do ea2+ (1,8 mM), substituído pelo s.-2+ (4 mM), o p < 0,05; n = 3) após 120 min de incubação. O registro eletrofisiológico demonstrou um aumento na freqüência dos pptms (562 :t 3%; p < 0,05), após 120 min de incubação. O veneno (20 f.1g1ml) determinou um aumento (25 :t 2%; p<0,05) na freqüência dos potenciais gigantes em 9 das 10 placas examinadas após 30 min de observação (LEE et ai., 1985). O registro do potencial de repouso mostrou que após 90 min de incubação com o veneno (20 f.1g/ml) houve uma redução no valor médio do potencial de membrana de -81 :t 1,4 mV para - 41,3 :t 3,6 mV (24 fibras; p < 0.01; n = 4) em regiões de placa terminal e de -77,4 :t 1,4 mV para - 44,6 :t 3,9 mV (24 fibras; p < 0.01; n = 4) em regiões distantes da placa. Estes resultados indicam que o veneno de Bothrops neuwiedi pauloensis exibe neurotoxicidade em preparações neuromusculares isoladas e sugerem uma ação preferencial em sítios pré-sinápticos. Além disso, uma atividade enzimática parece estar envolvida na indução de seus efeitos farmacológicos, pois mostrou ser cálcio-dependente / Abstract: In the present study, the phannacological effects of Bothrops neuwiedi pauloensis venom were studied in mouse phrenic nerve-diaphragm and chick biventer cervicis preparations. In chick preparations, venom (1, 5, 10,50 and 100 J.1g1ml) produoed progressive, concentration-dependent neuromuscular blockade. At low venom concentrations (1, 5, 10 and 20 J.1g1m1) , the responses to exogenously applied KCI (13.4 mM) were inhibited whereas those to acetylcholine (ACh, 110 mM alone or cumulative concentrations of 10-6-10-2 M) were unaffected. At high venom concentrations (50 and 100 J.1g1ml) , there was pronounoed muscle contracture with inhibition of the responses to ACh, KCI and direct stimulation. These activities were not observed at 20-24°C compareci to 37°C. At 20 J.1g1m1, the venom irreversibly inhibited indirectly evoked twitches in mouse phrenic nerve-diaphragm preparations (60 ::t 10% inhibition, mean ::t SEM; p<0.05; n = 6). At 50 J.1g1m1, the venom blocked indirectly (n = 5) and directly (n=6) evoked twitches in mouse hernidiaphragms. When Ca2+ (1.8 mM) was replaced by S~ (4 mM), the venom (50 J.1g/ml) produoed only partial blockade (40.3:t 7.8% inhibition; p<0.05; n = 3) after 120 mino The venom (20 J.1g1m1) inaeased the number of miniature end-plate potentials by a maximum of 562::t 3%, (p<0.05) after 120 min, and also increased the frequency of giant miniature end-plate potentials (25 ::t 2%, 1><0.05) in 9 out of 10 end-plates -41.3:t 3.6 mV (24 fibers; p<O.01; n = 4) in the end-plate region, and trom - 77.4 :t 1.4 to -44.6 :t 3.9 mV (24 fibers; p<O.01; n = 4) in regions distant trom the end-plate. These results indicate that B. n. pauloensis venom is neurotoxic and has a presynaptic adion. They also suggest that enzymatic activity may be involved in this phannacological action / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Maria Alice da Cruz-Hofling, Lea Rodrigues-Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T21:59:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_PatriciaDourado_M.pdf: 12162774 bytes, checksum: bc20d738d02786ba6422eeb6cadaf073 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Várias são as motivações que levam ao estudo de substâncias naturais podendo ser citadas, a caracterização dos seus princípios ativos e dos seus efeitos biológicos. Dentre estas, ocupam lugar de destaque os venenos ofídicos, uma vez que é freqüente o envenenamento acidental causado por picada de serpentes, nos países de clima tropical. No Brasil, os acidentes ofídicos representam problema de Saúde Pública, sendo o gênero Bothrops responsável por cerca de 90% dos casos. Dentre os efeitos sistêmicos e locais, destaca-se a mionecrose que se manifesta rapidamente, é de difícil controle e merece atenção especial nas estratégias de tratamento. A mionecrose é provocada por proteínas miotóxicas que atuam especificamente no sítio da picada. Frente à escassez de estudos quanto à ação biológica do veneno da serpente Bothrops pirajai ("jararacussu da Bahia") uma espécie rara e exclusiva do estado da Bahia e nordeste de Minas Gerais, o presente trabalho foi proposto com o objetivo de investigar as possíveis atividades miotóxica e neurotóxica do seu veneno total e de suas frações isoladas, Piratoxina-I (prTX- I) e Piratoxina-III (PrTX-III). Para o estudo, foram utilizadas preparações neuromusculares, nervo frênico-diafragma (NFD) e extensor longo dos dedos (EDL) de camundongos. Os parâmetros utilizados foram a técnica miográfica, a determinação de creatinoquinase (CK), análise histológica e ultraestrutural. O veneno total e a fração PrTX-III nas doses de 10, 25 e 50 µg/ml causaram bloqueio dose-dependente da resposta contrátil do músculo EDL, alterações morfológicas e ultraestrututais com elevada liberação da enzima creatinoquinase (CK) na cuba. A miotoxina PrTX-I provocou bloqueio dose-dependente (doses de 5, 10 e 20 µg/ml) da resposta contrátil do músculo diafragma de camundongo e severa mionecrose constatada pela análise histológica do tecido. No entanto, esta fração não provocou alterações miográficas ou histológicas no músculo EDL. Essas diferenças quanto à sensibilidade foram provavelmente devidas às diferenças entre o EDL e o diafragma, que diferem quanto às quantidades de fibras de contração rápida e lenta. Nossos resultados sugerem que a miotoxina PrTX-I e a fração PrTX-III do veneno total de B. pirajai seriam os componentes responsáveis pela atividade miotóxica do veneno, muito embora haja evidência de que seus modos de ação podem ser distintos. Além disso, os resultados preliminares com a fração PrTX-III apontam para uma potente ação neurotóxica, fato observado também com o veneno total. / Abstract: Several reasons can be cited which motivate the study of natural substances such as the characterization of the active principles and its biological effects. Among them, the ophidic venoms stand out because it is common the occurrence of accidental envenomation after snake bites in tropical countries. In Brazil, ophidic accidents account for a major part in the context of Public Health were the genus Bothrops is responsable for about 90% of them. Myonecrosis is one ofthe local effects whose rapid onset is difficult to control and deserves special attention in the treatment approaches after envenomation. Myonecrosis is triggred by myotoxic proteins specifical1y acting in muscle fibers at the bite site. Due to the scarcity of studies about the biological actions of Bothrops pirajai (li jararacussu of Bahia") snake venom, arare and exclusive specimen living in Bahia and northeastrn of Minas Gerais, the present work was proposed viewing to investigate miotoxic and neurotoxic activities of crude venom and its fractions Piratoxin-I (PrTX-I) and Piratoxin-III (PrTX-III). The studies were performed in mice isolated muscle preparations of the extensor'digitorum longus (EDL) and phrenic nerve-diaphragm (PND) muscles through myographic, histological and ultrastructural analysis and determination of creatinokinase (CK) in the incubation bath. The venom and the fraction PrTX-III (10, 25 and 50 µg/ml) caused a dose-dependent twitch-tension blockade of the EDL muscle fibers, histological and ultrastructural changes of muscle cells and nerve endings culminating in complete necrosis of both and increased CK release in the bath. PrTX-I caused a dose dependent blockade (5, 10 and 20 µg/ml) onhe twitch tension in PND muscle fibers and severe myonecrosis. However, PrTX-I did not affect muscle fibers nor caused alter(!.tions on the twitch tension responses in EDL. These differences could be accounted for a distinct sensitivity of EDL and PND muscle fibers to the venom and PrTX-I possibly related to the amount of slow- and fast-contracting fibers present in each one. Our results suggest that PrTX-I and PrTX-III of B. pirajai venom would be the components accounting for the myotoxic activity of venom despite a distinct mechanism of action could be implied. Additionally, these preliminary results suggest a potent neurotoxic activity, also observed with the whole venom. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências