O laser de baixa potência tem sido utilizado após procedimentos cirúrgicos visando acelerar o processo de reparo tecidual. No entanto, embora esse tipo de tratamento ofereça pouco ou nenhum risco à saúde do paciente, sua eficácia ainda é controversa na literatura. Este estudo foi desenvolvido para avaliar o efeito do laser de baixa potência (100 mW) sobre o processo de reparo de incisões cutâneas em dorso de ratos. Incisões de 2 cm de extensão foram confeccionadas no dorso de cinquenta e seis ratos Wistar. Após a sutura, metade dos animais recebeu laser de baixa potência em 3 pontos de aplicação, um no centro e um em cada extremidade da ferida. Em cada ponto, foi administrada uma dose de 35 J/cm2 (laser de InGaAlP, 660 nm, vermelho visível). A outra metade dos animais serviu como controle. Os tecidos incisados foram avaliados microscopicamente, de forma descritiva, em períodos de 6 horas, 2, 7 e 14 dias, levando em consideração o aspecto do revestimento epitelial e do tecido conjuntivo e a magnitude da resposta inflamatória, quando presente. Para os dois primeiros períodos, foi feita também uma avaliação morfométrica, que mensurou a densidade de fibroblastos, fibras colágenas, vasos sanguíneos e células inflamatórias no tecido conjuntivo. Na análise descritiva, as maiores diferenças foram encontradas no período de 6 horas, seguido pelo de 2 dias. Em 6 horas, o grupo tratado com laser apresentou menor resposta inflamatória que o controle e, em alguns espécimes, foi possível evidenciar início de proliferação das células do epitélio nas bordas da ferida. Em 2 dias, alguns espécimes do grupo controle ainda apresentavam células inflamatórias remanescentes, não evidenciadas no grupo laser. Nesse período, foi possível evidenciar também, em alguns espécimes do grupo laser, proliferação de fibroblastos junto às bordas da ferida. Nos períodos de 7 e 14 dias, não foram encontradas diferenças entre os grupos. Na análise morfométrica, a densidade de fibras colágenas e vasos sanguíneos foi maior para o grupo laser do que para o grupo controle em ambos os períodos avaliados, com diferença estatisticamente significante. Com base nos resultados obtidos, concluiu-se que o laser de baixa potência foi capaz de controlar a resposta inflamatória e estimular o processo de reparo tecidual em feridas cutâneas em dorso de ratos. / Low-power laser therapy has been used after surgical procedures to improve wound healing. However, although such kind of treatment offers little or no risk to the patient\'s health, its effectiveness remains controversial. This study was developed to evaluate the effect of low-power laser (100 mW) on the healing of skin incisions in rats. Two centimeters incisions were made on the back of fifty-six Wistar rats. After suturing, half of the animals received low-power laser application on three points, one on center and one on each end of the wound. For each point, a dose of 35 J/cm2 (InGaAIP laser, 660 nm, visible red) was administered. The other half of the animals served as control. The incised tissues were evaluated microscopically in a descriptive way in periods of 6 hours, 2, 7 and 14 days, considering the aspects of epithelium and connective tissue and the magnitude of inflammatory response, when present. For the first two periods, it was also done a morphometric evaluation, which measured the density of fibroblasts, collagen fibers, blood vessels and inflammatory cells in the connective tissue. In descriptive analysis, the greatest differences were found in the period of 6 hours, followed by the period of 2 days. In 6 hours, the laser-treated group showed less inflammatory response than control and, in some specimens, it was possible to see the beginning of epithelium proliferation on the edges of the wound. In two days, some specimens of the control group still showed remaining inflammatory cells, not observed in the laser group. In this period, it was also possible to see, in some specimens of the laser group, proliferation of fibroblasts along the edges of the wound. In the periods of 7 and 14 days, no differences were found between the groups. In morphometric analysis, density of collagen fibers and blood vessels was higher for the laser group in both evaluated periods, with statistically significant difference. Based on these results, it was concluded that low-power laser was able to control inflammatory response and stimulate tissue repair in skin wounds in rats.

O sucesso do tratamento com implantes osseointegráveis dependente do processo de reparo da ferida e do potencial osteogênico das células. Com o objetivo de aumentar a formação óssea na superfície dos implantes, vários tratamentos têm sido propostos, entre eles, a terapia com laser de baixa intensidade. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do laser diodo de Arseneto-Gálio-Alumínio (AsGaAl) em culturas osteogênicas humanas crescidas sobre titânio. Após exposição das culturas, aos 3 e 7 dias, a uma dose de 3 J/cm2, foram avaliados os seguintes parâmetros: 1) proliferação celular aos 10 e 14 dias; 2) atividade de fosfatase alcalina (ALP) em 10, 14 e 17 dias; 3) formação de matriz mineralizada em 17 dias; 4) imunolocalização de proteínas não-colágenas e do antígeno nuclear Ki-67 por fluorescência indireta em 8, 10, 14 e 17 dias; 5) expressão de genes relacionados ao desenvolvimento do fenótipo osteoblástico aos 14 dias. Os resultados dos ensaios de proliferação celular mostraram que a radiação laser aumentou a proliferação de 10 para 14 dias, mas tanto a atividade de ALP como a formação de matriz mineralizada aparentemente não foram afetadas. A análise das culturas por epifluorescência mostrou que as culturas controle e irradiadas apresentaram comportamento distintos. Aos 14 dias, foi demonstrado que a exposição à radiação laser, na dose utilizada, promoveu aumento na expressão relativa dos genes ALP, OC, BSP, BMP-7 e OPG e redução dos níveis de expressão de Runx2 e osteopontina, mas não afetou a expressão gênica de COL I, RANK-L e ICAM. As culturas irradiadas apresentaram áreas sem células após 24 h da última irradiação, que posteriormente foram repovoadas por células mais proliferativas e menos diferenciadas. Em conclusão, os resultados indicam que a radiação do laser diodo de AsGaAl estimula a expressão do fenótipo osteoblástico de culturas osteogênicas humanas crescidas sobre titânio. / The success of treatment with osseointegrated implants depends on wound healing and the osteogenic potential of cells. Aimed at increasing bone formation onto implant surfaces, several treatments have been proposed and low-intensity laser therapy is one of them. Thus, the purpose of this study was to investigate the effect of the Gallium-Aluminum-Arsenic (GaAlAr) diode laser on human osteogenic cultures grown on titanium. After irradiation of osteogenic cultures with 3 J/cm2 of GaAlAr laser at the days 3 and 7, the following parameters were evaluated: 1) cell proliferation at 10 and 14 days; 2) alkaline phosphatase activity (ALP) at 10 days; 3) mineralized matrix formation at day 17, 4) non-collagenous bone proteins and nuclear antigen Ki-67 immunolocalization by indirect fluorescence at 8, 10, 14 and 17 days; and 5) Expressions of a panel of genes related to osteoblastic phenotype at day 14. Apparently cell proliferation, ALP activity and mineralized matrix formation were not significantly different between irradiated and control cultures in any period. Epifluorescence revealed that control and irradiated cultures had presented different behaviors. At 24 h after irradiation procedures, irradiated cultures displayed areas with no cells, which were repopulated later on by proliferative and apparently less-differentiated cells. Laser radiation increased relative gene expression of ALP, OC, BSP, BMP-7, and OPG; reduced the gene expression of Runx2 and OPN; and did not affect the expression of COL-1, RANK-L and ICAM. Altogether these results indicated that the GaAlAr laser stimulates the expression of osteoblastic phenotype of human osteogenic culture cells grown on titanium.

Este estudo é um ensaio clínico randomizado duplo-cego que avaliou a influência do laser de baixa intensidade (LBI) na movimentação ortodôntica de caninos superiores e inferiores, comparando-os aos caninos contralaterais não irradiados (controle). Foram selecionados 11 pacientes, portadores de má oclusão de Classe I com indicação de extração dos primeiros pré-molares superiores e inferiores. O laser infravermelho de baixa intensidade foi aplicado após a ativação da retração inicial dos caninos, realizada através de mola NiTi com uma força de 150g. A aplicação do laser foi realizada em 10 pontos (5 por vestibular e 5 por lingual) nos caninos superiores e inferiores, utilizando o seguinte protocolo, em dose única mensal: canino inferior por vestibular e lingual e canino superior por vestibular Comprimento de onda de 780nm; Potência de 40mW; densidade de energia de 10J/cm2; 10 segundos por ponto; energia por ponto de 0,4J, uma energia total de aplicação de 4J para o canino inferior e 2J por vestibular dos caninos superiores e para o canino superior por palatino o protocolo foi - Potência de 70mW; densidade de energia de 35J/cm2; 20 segundos por ponto; 1,4J de energia por ponto, energia total de 7J por palatino e total de 9J para o canino superior. A retração durou 3 meses, num total de 3 aplicações de laser. Para mensuração da quantidade de movimentação dos caninos retraídos, medições clínicas mensais foram realizadas com paquímetro digital, logo após as extrações dentárias e antes de cada aplicação do laser. Para comparação da velocidade da movimentação ortodôntica entre os lados irradiado e não irradiado nos três períodos avaliados, foi empregada a Análise de Variância a um critério de medidas repetidas, seguida do Teste de Tukey. Para verificação da integridade tecidual, foram efetuadas radiografias periapicais iniciais e finais dos caninos retraídos, nas quais foram avaliados uma possível reabsorção na crista alveolar, por meio da distância da crista óssea alveolar até a junção cementoesmalte e os níveis de reabsorção radicular, por meio do índice de Levander e Malmgreen. Para isto, foi empregado o teste não paramétrico de Wilcoxon. Em todos os testes adotou-se nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram que não houve diferença estatisticamente significante na velocidade de retração dos caninos irradiados comparados aos não irradiados, em nenhum dos períodos avaliados. Em relação à influência do LBI nos níveis de reabsorções radiculares e ósseas, não foram encontradas diferenças significantes entre os grupos estudados. Concluiu-se assim que o LBI, no protocolo utilizado, não foi eficiente na aceleração da movimentação dentária e não promoveu danos aos tecidos de suporte do dente. / This study is a double-blind randomized clinical trial that evaluated the influence of low-intensity laser on orthodontic movement of upper and lower canine teeth, compared to the non- irradiated contralateral canines (control). Eleven patients with Class I malocclusion with indication of extraction of the first upper and lower premolars were selected. The infrared low-level laser was applied after the activation of initial retraction of the canine teeth, performed with NiTi coil springs with force of 150g. The laser application was performed in 10 points (5 buccal and 5 lingual) in the upper and lower canines, using the following protocol, in an only monthly dose: Lower canine buccal and lingual and upper canine buccal 780 nm wavelength; 40mW power; an energy density of 10 J/cm2; 10 seconds per point; energy per point 0,4J, a total energy of 4J applying to the lower canine and 2J the buccal of the upper canines and upper canine palatally - 70mW of power; an energy density of 35J/cm2; 20 seconds per point; 1,4J energy per point, the total energy 7J and total 9J to the upper canine. The retraction lasted three months, a total of three laser applications. To measure the amount of movement of canines retracted, monthly clinical measurements were made with a digital caliper (Mitutoyo - Japan), after tooth extractions and before each laser application. To compare the speed of orthodontic tooth movement between the irradiated and non- irradiated sides at the three movement stages, repeated measures one-way analysis of variance was used, followed by the Tukey test. For evaluation of tissue integrity, initial and final periapical radiographs of retracted canines were obtained, to evaluate a possible alveolar crest resorption by assessment of the distance from the alveolar bone crest to the cementoenamel junction, as well as the level of root resorption by the Levander and Malmgreen index, which was evaluated only on retracted canines. The nonparametric Wilcoxon test was applied for that purpose. In all tests we adopted a significance level of 5%. The results showed no statistically significant difference between the amount of retraction of the irradiated canines compared to the nonirradiated ones, in all evaluated periods. Regarding the influence of LLL in the levels of root and bone resorption, no significant differences between groups were found. It was therefore concluded that LLL in the protocol used was not effective in the acceleration of tooth movement and did not cause damage to the supporting tissues of the tooth.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2018-06-21T15:40:31Z No. of bitstreams: 1 Ana Carolina Araruna Alves.pdf: 1155545 bytes, checksum: 5e9fda24285778105d5ac0d8276f9036 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-21T15:40:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Carolina Araruna Alves.pdf: 1155545 bytes, checksum: 5e9fda24285778105d5ac0d8276f9036 (MD5) Previous issue date: 2016-03-29 / Rheumatoid Arthritis (RA) treatment in the last decades has evolved medications with cytokine inhibitors, which though they are today considered the gold standard in RA treatment, still do not guarantee complete remission from the disease or from hyperalgesia, and it is know that the Photobiostimulation (PBM) is also capable of acting on the expression of pro-inflammatory cytokines, being in this way an alternative treatment for RA. This research had as its objective the analysis and comparison of the effects of PBM in the acute phase of experimental RA in terms of nociception, of the number of inflammatory cells (neutrophils, macrophages, lymphocytes), and of the protein expression of inflammatory mediators (TNF-α, IL-6, IL-10), in the lavage and joint cartilage of rats. 49 male Wistar rats were used, with an approximate age of 90 days and a body weight varying from 250 to 300g. The animals were randomly distributed in 3 groups, with 21 animals in each experimental group (Rheumatoid arthritis group – RA) and the group treated with PBM (RA-LLLT), and with 7 animals in the control group. Each group was arrranged in three distinct experimental periods according to the time of euthanasia (6 hours, 24 hours, and 48 hours). For the reproduction of the lesion the animals were submitted to two inductions: the first consisted in a subcutaneous infiltration in the dorsal of each animal (in the RA and RA-LLLT groups) using 500 µg of mBSA diluted in a solution of 100 µL of complete Adjuvant de Freund (CFA), and 100 µL of PBS, with this procedure being repeated weekly for 21 days. On the 28th day, an intrajoint induction was carried out with 10 µg of mBSA diluted in 10µL of PBS, in the joint space of the right hind paw of each animal. After the joint induction, the treatment on the RA-LLLT group began, using a DMC® brand Photon Laser III, with a wave length of λ 808 nm, active medium of Gallium Arsenide, and Aluminium (AsGaAI), with a potency of 50 mW (potency density of 1,78 W/cm2) and area of the beam 0,028cm2. The final dose was of 2J, the density of energy of 71,2 J/cm2, and time of 40s by point. At the end of each test period (6 hours, 24 hours, and 48 hours) the animals were submitted to an evaluation of their nociception, followed by the extraction of joint lavage and joint cartilage, which were sent for analysis of the total count and differential cells, and for protein expression of the inflammatory mediators described. The results demonstrate biomodulation in the expression of neutrophils and macrophages amongst the control group and RA, as well as in the cytokines IL-6 and IL-10, contributing daily to the attenuation of hyperalgesia by the PBM. / O tratamento para Artrite Reumatoide (AR) com inibidores de citocinas tem sido considerado padrão-ouro nas últimas décadas embora ainda não garantam a remissão completa da doença ou da hiperalgesia, sabe-se que a Laserterapia de Baixa Intensidade (LBI) também é capaz de atuar na expressão das citocinas pró-inflamatórias, podendo ser assim, uma alternativa de tratamento para a AR. Este trabalho teve como objetivo analisar os efeitos da LBI na fase aguda de AR experimental sobre a nocicepção, sobre o número de células inflamatórias (neutrófilos, macrófagos, e linfócitos), e sobre a expressão proteica de mediadores inflamatórios (TNF-α, IL-6, IL-10) no lavado e cartilagem articular de ratos. Foram utilizados 49 ratos Wistar, machos, com idade aproximada de 90 dias e peso corporal variando de 250 a 300 g. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em 3 grupos, com 21 animais em cada grupo experimental (grupo Artrite Reumatoide - RA e o grupo tratado com laser AR-LBI), e 7 animais no grupo controle. Cada grupo foi composto por 3 tempos experimentais distintos de acordo com o tempo da eutanásia (6 horas, 24 horas e 48 horas). Para a reprodução da lesão os animais foram submetidos a duas induções: a primeira consistiu em uma infiltração subcutânea no dorso de cada animal (nos grupos AR e AR-LBI) utilizando-se 500 µg de mBSA diluído em uma solução de 100 µL de Adjuvante completo de Freund (CFA), e 100µL de PBS, esse procedimento foi repetido semanalmente por 21 dias. No 28º dia, foi realizada uma indução intra-articular com 10 µg de mBSA diluído em 10µL PBS, no espaço articular da pata direita traseira de cada animal. Após a indução articular, deu-se início ao tratamento no grupo AR-LBI, por meio do laser da marca DMC® modelo Photon Laser III, com comprimento de onda de λ 808 nm, meio ativo de Arsenieto de Gálio e Alumínio (AsGaAI), com potência de 50 mW (densidade de potência de 1,78 W/cm2), área do feixe de 0,028cm2 e aplicação sob a forma de dois pontos pelo método transcutâneo nos compartimentos medial e lateral da articulação, dose final foi de 2J, densidade de energia de 71,2 J/cm2, e tempo 40s, por ponto. Ao final de cada período experimental (6 horas, 24 horas e 48 horas) os animais foram submetidos à avaliação da nocicepção, seguido de extração do lavado articular e da cartilagem articular, que foram encaminhados às análises de contagem total e diferencial de células, e da expressão proteica dos mediadores inflamatórios descritos. Os resultados demonstram biomodulação da LBI principalmente na expressão de neutrófilos e macrófagos entre os grupos controle e AR, bem como nas citocinas IL-6 e IL-10, contribuindo diretamente para a atenuação da hiperalgesia.

Resumo O laser operando em baixa intensidade tem sido utilizado em tratamentos odontológicos visando melhorar a regeneração e cicatrização de tecidos. Com o objetivo de analisar o efeito desse laser na proliferação de fibroblastos gengivais “in vitro”, desenvolvemos uma linhagem primária a partir de fragmentos de gengiva. Trabalhamos em um modelo de estudo “in vitro” no qual cultivamos os fibroblastos em condição de déficit nutricional parcial (meio de cultivo DME com 5% de soro fetal bovino), simulando uma situação de estresse celular. Foram feitos 3 experimentos distintos, para todos utilizamos um diodo-laser de 664 nm. Para o experimento 1, células LMF foram plaqueadas em placas de Petri e após 24 horas as placas foram divididas em 4 grupos, irradiados com potência fixa de 56 mW, mas variando a fluência: 2 J/cm2, 5 J/cm2, 10 J/cm2 e 15 J/cm2. Para o experimento 2, células LMF foram plaqueadas em placas de Petri e após 24 horas as placas foram divididas em 2 grupos, irradiados com fluência fixa de 2 J/cm2, mas variando a potência: 28 mW e 56 mW. Para o experimento 3, células LMF foram plaqueadas em placas de Petri e após 24 horas as placas foram divididas em 5 grupos, irradiados com potência fixa de 56 mW, fluência fixa de 2 J/cm2, mas variando o tipo de emissão: contínua, ou intermitente com freqüências de: 10 Hz, 60 Hz, 120 Hz e 180 Hz. Foram feitas 4 irradiações, a cada 12 horas. Células que estavam em concentração de 5% de SFB e irradiadas mostraram crescimento mais acelerado em todos os grupos estudados. No experimento 1 obtivemos: células irradiadas com diferentes doses apresentaram proliferação semelhante; sendo melhores resultados para os grupos irradiados com fluência de 2 J/cm2. No experimento 2: células irradiadas com irradiância diferentes apresentaram melhores resultados para potências maiores. No experimento 3: células irradiadas com emissão contínua apresentaram maior proliferação que aquelas irradiadas com laser intermitente, sendo que quanto maior a freqüência, maior a proliferação celular. Menores doses de laser aumentaram mais a proliferação de fibroblastos; menor tempo de exposição resultou em mais alta proliferação celular; o laser emitido no modo contínuo apresentou melhores resultados em termos de proliferação que o laser intermitente, sendo que para o laser pulsado, quanto maior a freqüência, melhores resultados que freqüências menores. / Abstract The low level laser therapy (LLLT) has been used to improve wound healing. In order to verify the effect of LLLT on the in vitro proliferation of gingival fibroblasts we worked with primary culture of human gingival fibroblasts. The cell line used was LMF which grown in Dulbecco’s Modified Eagle’s medium (DME) with 5% (nutritional deficit) of fetal bovine serum (fbs) in order to simulate a cellular stress condition. Laser irradiation was carried out with diode laser with wavelength at 664 nm in three conditions. At first, we kept the output power stable at 56 mW, and set the total energy applied at 2, 5, 10 and 15 Joules. Then, the energy was set at 2 Joules and we worked with power output at 56 mW and 28 mW. At last, with the energy set at 2 Joules and the power output at 56 mW, we worked with the laser emitting in CW and pulsed modes (setting the frequencies at 10, 60, 120 and 180 Hz). We found that in the first part of the experiment (stable output power and different energy applied), the best results were achieved for the total deposited energy of 2 Joules. The conclusion for the second part (energy set at 2 Joules and different output power) was that the best results were achieved when using the highest output power. The conclusion for the last part (energy set at 2 Joules, output power set at 56mW and CW or Pulsed modes at different frequencies) was that CW mode presented the best results, and for the Pulsed mode, the highest frequency presented the best results. A lower energy rate improves in vitro fibroblasts proliferation, a lower laser exposure time results in higher proliferation and laser emitting on CW mode present best results in terms of proliferation than pulsed laser, and when pulsed lasers are being used high frequencies are better than low frequencies.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3965.pdf: 3863042 bytes, checksum: f995d87531cc46a186a0c566c0be57ea (MD5) Previous issue date: 2011-12-02 / This study aimed to evaluate the effects of low intensity laser therapy (LLLT) (830nm, 120J/cm2, 100mW) and implantation of Biosilicate® scaffolds, associated or not, in histological aspects, biomechanical properties of the bone callus and immunoexpression of proteins, growth and transcription factors related to different stages of bone repair, at 15, 30 and 45 days after surgery of bone defects induced in the tibia.of rats. For this, three studies were performed in which a total of one hundred and twenty male Wistar rats (3 months ± 280 g) were submitted to bilateral tibial defects and randomly distributed in four experimental groups with 30 animals each. In the first study the effects of the implantation of Biosilicate® scaffolds in bone defects of rats were investigated in two groups: bone defect group (GC) and bone defect treated with Biosilicate® scaffold group (GB). The implantation of the scaffold was performed subsequent to surgery of bone defect. Histological analysis revealed that animals of GB showed newly formed bone better organized at 30 and 45 days after surgery. The immunohistochemical analysis demonstrated that the Biosilicate® scaffold promoted a higher expression of COX-2 on days 15 and 30 after surgery, immunostaining positive of RUNX-2 in all periods, increased expression of RANKL on day 15 and positive immunoexpression of BMP-9 on the 45th day. However, the Biosilicate® scaffold did not increase the mechanical properties of bone callus. Thus, the implantation of Biosilicate® scaffold was effective in stimulating the repair of tibial defects, however, was not able to improve their mechanical properties. In the second study, the spatialtemporal changes in the process of bone healing in defects treated with LLLT were evaluated in two groups: GC and bone defect treated with laser group (GL). The laser treatment started immediately following the surgery of bone defects and have been 8, 15 or 23 sessions with an interval of 48 hours between them. The histological and morphometric analysis revealed that the GL showed better tissue organization at 15 and 30 days after surgery, and biggest area of newly formed bone at day 15. The immunohistochemistry showed that the LLLT promoted higher expression of COX-2 at day 15, immunostaining of RUNX-2 positive in all periods, higher immunoexpression of BMP-9 on day 30 and higher immunoreactivity of RANKL at day 15. However, the LLLT did not increase the biomechanical properties of bone callus. Thus, the LLLT improved the process of bone healing, but was unable to improve its biomechanical properties. In the third study the effects of the association of LLLT with implants of Biosilicate® scaffolds in bone healing were investigated in three experimental groups: GC, GB and Biosilicate® scaffold irradiated with laser group (GBL). The implantation of the scaffold was performed following the surgery of bone defect. The laser treatment started immediately after surgery and were performed 8, 15 or 23 sessions with an interval of 48 hours between them. At 15 days after surgery, the histological analysis revealed granulation tissue and newly formed bone juxtaposed to the surface of scaffolds in GB and GBL. Thirty days after injury, the GB and GBL had better organized newly formed bone compared to the CG. At day 45 was possible to observe granulation tissue in the defects of the GBL. In the GB, the peak of immunoexpression of COX-2 occurred on the 15th day and in the GBL, on the 30th day. The GB and GBL showed positive immunoexpression of BMP-9 up to 45th day after surgery, while RANKL immunoexpression was higher in the GBL at day 30. However, 30 and 45 days after injury, the animals of GB and GBL showed statistically lower values of maximum load compared to the CG. Thus, the association of the scaffold Biosilicate® with laser irradiation has osteogenic activity during the bone repair, however, the scaffold Biosilicate® associated or not with the laser irradiation is not effective to improve mechanical properties of the bone callus. Finally, we concluded that LLLT (λ = 830 nm, 120J/cm2) and implantation of Biosilicate® scaffolds, associated or not, were effective to stimulate the bone consolidation by improving the development of newly formed bone and activating immunoexpression of proteins, growth and transcription factors related to different stages of bone healing in tibial defects in rats. However, these therapeutic modalities associated or not, were unable to improve mechanical properties of the bone callus. / Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da terapia laser de baixa intensidade (LLLT) (830nm, 120J/cm2, 100mW) e do implante de scaffolds de Biosilicato®, associados ou não, nos aspectos histológicos, propriedades biomecânicas do calo ósseo e na imunoexpressão de proteínas, fatores de crescimento e de transcrição relacionados a diferentes etapas do reparo ósseo, ao 15º, 30º e 45º dia após a cirurgia de defeitos ósseos induzidos em tíbias de ratos. Cento e vinte ratos machos da linhagem Wistar (3 meses de idade ± 280 gramas) foram submetidos a defeitos tibiais bilaterais e distribuídos aleatoriamente em 4 grupos experimentais com 30 animais cada. No primeiro estudo investigaram-se os efeitos do implante de scaffolds de Biosilicato® em defeitos ósseos de ratos, a partir de dois grupos experimentais: grupo defeito ósseo controle (GC) e grupo defeito ósseo tratado com scaffold de Biosilicato® (GB). O implante do scaffold foi realizado em seguida à cirurgia de defeito ósseo. A análise histológica revelou que os animais do GB apresentavam osso neoformado mais organizado ao 30º e 45º dia após a cirurgia. A imunoistoquímica demonstrou que o scaffold de Biosilicato® promoveu maior expressão de COX-2 nos dias 15 e 30 de após a cirurgia, imunoexpressão positiva de RUNX-2 em todos os períodos, maior expressão de RANKL no 15º dia e imunoexpressão positiva de BMP-9 no 45º dia. Porém, o scaffold de Biosilicato® não aumentou as propriedades mecânicas do calo ósseo. Assim, o implante de scaffold de Biosilicato® foi eficaz em estimular o reparo de defeitos tibiais, porém, não foi capaz de melhorar suas propriedades mecânicas. No segundo estudo, foram avaliadas as mudanças temporais-espaciais no processo de reparo ósseo em defeitos tratados com LLLT, a partir de dois grupos experimentais: GC e grupo defeito ósseo tratado com laser (GL). O tratamento com laser iniciou-se imediatamente após a cirurgia dos defeitos ósseos e realizaram-se 8, 15 ou 23 sessões, com um intervalo de 48h entre elas. As análises histológica e morfométrica revelaram que o GL apresentou melhor organização tecidual aos 15º e 30º dias após a cirurgia, e maior área de osso neoformado no 15º dia. A imunoistoquímica mostrou que a LLLT promoveu maior expressão de COX-2 no 15º dia, imunoexpressão positiva de RUNX-2 em todos os períodos avaliados, maior imunoexpressão de BMP-9 no 30º dia e maior imunorreatividade do RANKL no 15º dia. Porém, a LLLT não aumentou as propriedades biomecânicas do calo ósseo. Assim, a LLLT melhorou o processo de consolidação óssea, mas não foi capaz de melhorar suas propriedades biomecânicas. O terceiro estudo investigou os efeitos da associação da LLLT com implantes de scaffolds de Biosilicato® na consolidação óssea, a partir de três grupos experimentais: GC, GB e grupo scaffold de Biosilicato® irradiado com laser (GBL). O implante do scaffold foi realizado em seguida à cirurgia de defeito ósseo. O tratamento com laser iniciou-se imediatamente após a cirurgia e foram realizadas 8, 15 ou 23 sessões, com um intervalo de 48h entre elas. Ao 15º dia pós-lesão a análise histológica revelou tecido de granulação e osso neoformado justapostos à superfície dos scaffolds no GB e GBL. Trinta dias após a lesão, o GB e GBL apresentavam osso neoformado mais organizado em comparação ao GC. Ao 45º dia, foi possível observar tecido de granulação nos defeitos do GBL. No GB, o pico de imunoexpressão da COX-2 ocorreu no 15º dia e no GBL, no 30º dia. Os GB e GBL apresentaram imunoexpressão positiva da BMP-9 até o 45º dia após a cirurgia, enquanto que para o RANKL, a imunoexpressão foi maior no GBL no 30º dia. No entanto, 30 e 45 dias após a lesão, os animais dos GB e GBL apresentaram valores estatísticamente menores de carga máxima em comparação ao GC. Assim, a associação do scaffold de Biosilicato® com o laser exerce atividade osteogênica durante o reparo ósseo, no entanto, o scaffold de Biosilicato® associado ou não a irradiação laser não é eficaz em melhorar as propriedades mecânicas do calo ósseo. Finalmente, podemos concluir que a LLLT e o implante de scaffolds de Biosilicato®, associados ou não, foram eficazes em estimular a consolidação óssea, melhorando o desenvolvimento de osso neoformado e ativando a imunoexpressão de proteínas, fatores de crescimento e de transcrição relacionados a diferentes etapas do reparo ósseo em defeitos tibiais em ratos. No entanto, estas modalidades terapêuticas, associadas ou não, não foram capazes de melhorar as propriedades mecânicas do calo ósseo em ensaio de flexão na posição de tração.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do laser de baixa intensidade na regeneração de defeitos ósseos críticos preenchidos com diferentes biomateriais. Foram utilizados 80 ratos machos adultos (Rattus norvegicus, albinus, Wistar) e um defeito de tamanho crítico (5 mm) foi criado na calvária de cada animal. Os animais foram divididos em 8 grupos experimentais (n=10): 1) Grupo C (Controle - coágulo sanguíneo), 2) Grupo LB (Laser de baixa intensidade - GaAlAs), 3) Grupo OA (osso autógeno), 4) Grupo OALB (osso autógeno + laser de baixa intensidade), 5) Grupo VB (vidro bioativo - Biogran), 6) Grupo VBLB (Biogran + laser de baixa intensidade), 7) Grupo BO (osso bovino - Bio-Oss®) e 8) Grupo BOLB (Bio-Oss® + laser de baixa intensidade). Os animais foram submetidos à eutanásia aos 30 dias pós-operatórios. Foram avaliadas as áreas de osso neoformado (AON) e de partículas remanescentes (APR). Os dados foram submetidos ao teste paramétrico ANOVA, seguido pelo teste de Tukey (p<0,05). O efeito fotobiomodulador do laser foi demonstrado no presente estudo uma vez que todos os grupos apresentaram maiores quantidades de AON quando comparados com o grupo C (9,96 ± 4,49%). Ao ser associado aos biomateriais, foi estatisticamente significativo somente quando relacionado ao Bio-Oss® (BOLB 48,57± 28,22). A menor área de APR foi encontrada nos grupos irradiados pelo laser, com diferença significativa somente no grupo BOLB (48,57± 28,22, p < 0,05). O laser de baixa intensidade demonstrou melhores resultados na regeneração óssea de defeitos de tamanho críticos, com maior taxa de AON, quando associado ao Bio-Oss®. / The purpose of this study was to evaluate the effect of low intensity laser on the regeneration of bone defects filled with different biomaterials. Eighty male rats (Rattus norvegicus, albinus, Wistar) were used and a critical size defect (5 mm) was created in the calvaria of each animal. The animals were divided into 8 experimental groups (n = 10): 1) Group C (Control - blood clot), 2) Group LB (Low intensity laser - GaAlAs), 3) Group OA (autogenous bone), 4) OALB group (autogenous bone + low intensity laser), 5) Group VB (bioactive glass - Biogran®), 6) VBLB Group (Biogran® + low intensity laser), 7) BO Group (bovine bone - Bio-Oss®) and 8) BOLB Group (Bio-Oss® + low intensity laser). The animals were submitted to euthanasia after 30 days postoperative. The areas of neoformed bone (AON) and of remaining particles (APR) were evaluated. The data were submitted to the ANOVA parametric test, followed by the Tukey test (p <0.05). The photobiomodulatory effect of the laser was demonstrated in the present study since all groups presented higher amounts of AON when compared to group C (9.96 ± 4.49%). When associated with biomaterials, it was statistically significant only when related to Bio Oss® (BOLB 48.57 ± 28.22, p < 0,05). The lowest APR area was found in the groups irradiated by the laser, with significant difference only in the BOLB group (48.57 ± 28.22). The low intensity laser showed better results in bone regeneration of critical size defects, with a higher AON rate, when associated with Bio-Oss®.

A mucosite oral é uma lesão induzida pelo tratamento quimioterápico, radioterápico ou pela associação de ambos. Esta consiste em uma inflamação da mucosa oral que pode gerar dor, interferir na qualidade de vida, predispor a infecções e gerar interrupções no tratamento do câncer. Devido a estes motivos, o seu tratamento se faz necessário. Há evidências científicas que comprovam que a terapia com LASER de baixa intensidade é uma forma de tratamento eficaz para estas lesões orais e, alguns autores, defendem que o LED representa uma alternativa ao LASER, sendo uma terapia mais barata e mais rápida que este. No entanto, poucas pesquisas foram realizadas com o LED e não há na literatura nenhum trabalho que compare clinicamente o efeito da terapia LED e LASER de baixa intensidade no tratamento das mucosites. Com isso, o objetivo desta pesquisa foi comparar o efeito das fototerapias LED e LASER no tratamento da mucosite oral induzida por quimioterapia. Quarenta pacientes com mucosite oral induzida por quimioterapia, foram divididos em dois grupos, onde um recebia o tratamento com LASER diodo (660nm, 40mW, 6J/cm2, 0,24J por ponto) e o outro com LED (630nm, 80mW, 0,24J/cm2, 0,24J por ponto) durante 10 dias consecutivos, excluindo os finais de semana. Os pontos anatômicos de aplicação eram os mesmos para ambas as fototerapias e foram distribuídos pelos lábios, comissuras, mucosa labial e jugal, palato mole e duro, língua e assoalho bucal. A cada consulta, antes da aplicação das fototerapias, foi realizada a avaliação do grau de mucosite por meio da escala da Organização Mundial da Saúde (OMS) e da dor através da Escala Visual Analógica (EVA). Após a realização das análises estatísticas, observou-se que o LED para os graus iniciais 1 e 2 de mucosite apresentou ação analgésica estatisticamente melhor do que a do LASER (p=0,012 e 0,022, respectivamente), mas seu efeito sobre a cicatrização das lesões de mucosite foi semelhante ao do LASER. Para o grau inicial 3 de mucosite, o LED promoveu uma melhor cicatrização (p=0,028) e uma ação analgésica semelhante a do LASER. Em conclusão, a fototerapia com LED mostrou-se mais eficaz que o LASER para a diminuição do grau de mucosite e do escore de dor nas condições do presente trabalho. / Patients submitted to chemotherapy and/or head and neck radiotherapy are usually affected by oral complications, especially oral mucositis and severe pain, which demands support therapy. Although the management of such oral complications by phototherapy with LASER (Laser Phototherapy - LPT) and with LEDs has been studied, the comparison between these therapies has not been studied yet. Thus, the aim of this study is to compare the effect of these two therapies against chemotherapy-induced oral mucositis (CIOM) and pain. Forty patients with CIOM were submitted to phototherapy according to 2 groups: G1, red low power LASER; G2, red LED. The treatment was done during 10 days. The LPT was done using an InGaAlP LASER (660nm/40mW/6Jcm-²/0,24J per point). The LED phototherapy was done using 0,24J per point/80mW/630nm. CIOM grade was assessed at each session in accordance to the World Health Organization (WHO). The patient self-assessed pain was measured by means of the visual analogue scale (VAS). The results showed that both treatments were effective, however, patients with initial mucositis grade 3, submitted to LED phototherapy presented significant decrease in the mean CIOM grades when compared with patients submitted to LASER phototherapy. In addition, LED showed better results in pain relief of patients with initial mucositis grade 1 and 2 (p=0,012 e 0,022, respectively) when compared with LASER therapy. In conclusion, phototherapy with LED is more effective than LPT on the management of CIOM which in turn would improve the patients quality of life.

O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) sobre o Enterococcus faecalis (E. faecalis), in vitro, utilizando a clorofila (CL) como agente fotossensibilizador (FS) e o diodo emissor de luz (LED) como fonte de luz. A cultura pura de E. faecalis foi ativada em caldo de BHI a 37oC por 24h. O cultivo do microrganismo foi centrifugado a 3000rpm por 15min, e o pellet re-suspenso em 0,85% de solução salina. As concentrações da bactéria foram ajustadas para 107UFC mL-1 (unidades formadoras de colônias por mililitro). Diferentes tipos de solventes para a CL foram testados: éter, álcool de cereais, Tween 80 e P-123. 100l do inóculo e o mesmo volume da solução teste foram inseridos em cada poço da placa de microtitulação. A mistura foi agitada e aguardou-se 1min. 25l da suspensão foi removida e diluições seriadas foram realizadas. Alíquotas de cada diluição foram espalhadas na superfície da placa, armazenadas em microaerofilia e incubadas na estufa por 24h a 37oC. O número de UFC foi contado em cada placa. Para o experimento da TFDa, os grupos foram divididos em: controle (G1); TBO 1min (G2); CL+Tween 1min (G3); CL+Tween 5min (G4); CL+P-123 1min (G5); CL+P-123 5min (G6); CL+Tween 1min + LED 1min (G7); CL+Tween 1min + LED 5min (G8); CL+Tween 5min + LED 1min (G9); CL+Tween 5min + LED 5min (G10); CL+P-123 1min + LED 1min (G11); CL+P-123 1min + LED 5min (G12); CL+P-123 5min + LED 1min (G13); CL+P-123 5min + LED 5min (G14); TBO 1min + LED 1min (G15); TBO 1min + LED 5min (G16); LED 1min (G17); LED 5min (G18).Um volume de 100l da suspensão bacteriana foi inserido em poços da placa e o mesmo volume da solução do FS foi adicionado. A CL foi solubilizada em soluções aquosas de Tween ou P-123. Cada poço foi agitado e o tempo de préirradiação foi de 1 ou 5min. O LED foi acionado durante 1 ou 5min. 25l da suspensão foi submetida a diluições seriadas e as alíquotas de cada diluição foram espalhadas na superfície da placa em Ágar BHI. As placas foram armazenadas e colocadas na estufa a 37oC por 24h. Os experimentos foram realizados em triplicata e as UFC em cada placa foram contadas. As UFC foram transformadas em valores de Log10 UFC para normalizar os dados para análise estatística. A média e o desvio padrão (DP) de cada experimento foram calculados. Os resultados mostraram que o Tween e o P-123 foram os solventes mais eficazes para diluição da CL. A TFDa com utilização da CL diluída em Tween ou P-123 com tempo de pré-irradiação de 5min e com a ação do LED por 5min causou uma pequena diminuição na contagem bacteriana. A CL diluída em Tween com tempo de 1min teve uma redução significante da contagem bacteriana. O TBO quando associado ao LED durante 1min provocou uma leve redução no número de UFC. A irradiação pelo LED durante 5min foi capaz de causar uma diminuição significativa da quantidade de UFC. / The aim of this study was to investigate the effect of Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) against Enterococcus faecalis (E. faecalis), in vitro, using chlorophyll (CL) as photosensitizer (FS) agent and light-emitting diode (LED) as light source. Pure culture of E. faecalis was cultivated in BHI broth at 37oC for 24h. The culture was centrifuged at 3000rpm for 15min, and the pellets were resuspended in 0.85% saline solution. The bacterial concentrations were adjusted to 107CFU mL-1 (colony forming units per milliliter). Different types of solvents for CL were tested: ether, grain alcohol, Tween 80 and P-123. 100l of inoculum and the same volume of the test solution were inserted into each well of the microtitre plate. The mixture was mixed and 1 min was awaited. 25l of the suspension was removed and serial dilutions were performed. Aliquots of each dilution were spread on the surface of the plates, stored in microaerophilic conditions and incubated for 24h at 37oC. The number CFU was counted in each plate. For aPDT experiment, the groups were divided into: control (G1); TBO 1min (G2); CL+Tween 1min (G3); CL+Tween 5min (G4); CL+P-123 1min (G5); CL+P-123 5min (G6); CL+Tween 1min + LED 1min (G7); CL+Tween 1min + LED 5min (G8); CL+Tween 5min + LED 1min (G9); CL+Tween 5min + LED 5min (G10); CL+P-123 1min + LED 1min (G11); CL+P-123 1min + LED 5min (G12); CL+P-123 5min + LED 1min (G13); CL+P-123 5min + LED 5min (G14); TBO 1min + LED 1min (G15); TBO 1min + LED 5min (G16); LED 1min (G17); LED 5min (G18). A volume of 100l of bacterial suspension was inserted into the well of microtitre plate and the same volume of FS was added. CL was solubilized in aqueous solution of Tween and P-123. Each well was mixed and preirradiation time was 1 or 5min. LED was irradiated during 1 or 5 min. 25l of suspension was subjected to serial dilutions and aliquots of each dilution were spread on the surface of agar BHI plates. The plates were stored and incubated at 37oC for 24h. Experiments were performed in triplicate and CFU in each plate were counted. The results showed that Tween and P-123 were the most effective solvents for CL dilution. aPDT with diluted CL in Tween or P-123 with pre-irradiation time of 5min and with LED irradiation for 5min caused a small decrease in bacterial count. CL diluted in Tween with 1min time showed a significant reduction in bacterial count. TBO when associated with LED irradiation of 1min caused a slight reduction on CFU number. LED irradiation during 5min caused a significant reduction in CFU count.

Esta tese teve como objetivo verificar a resposta celular de fibroblastos pulpares após a variação nos parâmetros de fotobiomodulação. Fibroblastos pulpares de dentes decíduos humanos em 4a passagem foram plaqueados, deixados a aderir, submetidos a privação nutricional, e em seguida irradiados com laser de baixa intensidade a 660 nm. Os grupos em estudo foram baseados na variação da potência e tempo, resultando em dosimetrias diferentes, variando entre 2,5 a 6,2 J/cm2. No artigo 1, o efeito dos diferentes parâmetros da fotobiomodulação foram verificados por meio da expressão gênica do COL1 por RT-PCR, nos períodos de 6, 12 e 24 horas. No artigo 2, avaliou-se a síntese proteica de fatores angiogênicos (VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D, VEGFR1, VEGFR2, FGF-2, PDGF, PLGF, PECAM-1, e BMP-9) por ELISA Multiplex, nos períodos de 6, 12 e 24 horas após fotobiomodulação, no sobrenadante e lisado celular. Os dados foram analisados por ANOVA a dois critérios seguido pelo teste de Tukey (p<0.05) nos dois artigos. No artigo 1, a comparação intragrupo da expressão gênica do COL1 mostrou que a variação da fotobiomodulação com mais tempo (50 s) e menor potência (5 mW) em uma densidade de energia de 6,2 J/cm2 mudou o padrão de expressão gênica do COL1 pelos fibroblastos pulpares de 12 h para 6 h. A comparação intergrupo da expressão genica COL1 não mostrou diferenças estatisticamente significativas. No artigo 2, fibroblastos pulpares secretaram e produziram todas as proteínas testadas antes e após a fotobiomodulação, exceto PDGF no lisado. A comparação intragrupo, no artigo 2, mostrou padrões similares da síntese proteica dos fatores angiogênicos para todos os grupos: a secreção de VEGF-A, VEGF-C, VEGFR1 e BMP-9 aumentou significativamente no sobrenadante enquanto que FGF-2 e VEGF-A aumentou significativamente no lisado. A comparação intergrupo da sintese de proteínas revelou que a dosimetria 2,5 J/cm2 aumentou a secreção de VEGF-D (p=0.4779), VEGFR1 (p=0.8570) e BMP-9 (p=0.0042) no sobrenadante e VEGFR1 (p=0.0128) e VEGF-D (p=0.0036) no lisado; e diminuiu VEGF-A (p=0.0176), VEGF-C (p=0.0328), PDGF (p=0.0077), PLGF (p=0.0004) no sobrenadante e PLGF (p=0.0094) e BMP-9 (p= 0.5645) no lisado. A dosimetria de 3.7 J/cm2 aumentou VEGF-A p=0.8410), FGF-2 (p=0.4778), BMP-9 (p=0.0042) e VEGFR1 (p=0.8570) no sobrenadante e VEGF-A (p=0.8412), VEGF-C (p=0.5908) e VEGFR1 (p=0.0128) no lisado; e diminuiu VEGF-A (p=0.0176), PDGF (p=0.0077) e PLGF (p=0.0004) no sobrenadante e PLGF (p=0.0094) e BMP-9 (p=0.0276) no lisado. Concluiu-se que as dosimetrias de 2,5 a 6,2 J/cm2 biomodularam a expressão gênica de COL1, e as dosimetrias de 2,5 J/cm2 e 3.7 J/cm2 biomodularam a síntese proteica de vários fatores angiogênicos. Na dosimetria de 6,2 J/cm2, o maior tempo e a menor potência mudaram o padrão da expressão gênica de COL1 pelos fibroblastos pulpares. A dosimetria de 3.7 J/cm2 foi a mais efetiva na produção e secreção de fatores angiogênicos. / This thesis aimed to verify the cellular response of pulp fibroblasts after the variation in photobiomodulation parameters. Pulp fibroblasts at 4th passage were plated, led to adhere, subjected to serum starvation, and subsequently irradiated with 660 nm lowlevel laser. The study groups were based on the variation of the power and time, resulting in different dosimetries ranging from 2.5 to 6.2 J/cm2. In article #1, the effect of different photobiomodulation parameters were verified through the COL1 gene expression by RT-PCR, at 6, 12, and 24 hours. In article #2, the protein synthesis of angiogenic factors (VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D, VEGFR1, VEGFR2, FGF-2, PDGF, PLGF, PECAM-1, and BMP-9) was measured by ELISA Multiplex assay, at 6, 12, and 24 hours, in the supernatant and lysate. Data were analyzed by two-way ANOVA followed by Tukey test (p<0.05) in both articles #1 and #2. In article #1, the intragroup comparison of the COL1 gene expression showed that the variation of PBM application with longer time (50 s) and smaller power (5 mW) at the energy density of 6.2 J/cm2 changed the COL1 mRNA expression pattern by pulp fibroblasts from 12 h to 6 h. The intergroup comparison of COL1 gene expression revealed no statistically significant differences. In article #2, pulp fibroblasts secreted and produced all the tested proteins before and after PBM, except for PDGF in the lysate. The intragroup comparison, in article #2, showed similar patterns of angiogenic factors synthesis for all groups: the secretion of VEGF-A, VEGF-C, VEGFR1, and BMP-9 increased significantly in the supernatant, while FGF-2 and VEGF-A increased significantly in the lysate. The intergroup comparison of the protein synthesis revealed that the dosimetry of 2.5 J/cm2 exhibited upregulation of VEGF-D (p=0.4779), VEGFR1 (p=0.8570), and BMP-9 (p=0.0042) in supernatant and VEGFR1 (p=0.0128) and VEGF-D (p=0.0036) in lysate; and downregulation of VEGF-A (p=0.0176), VEGF-C (p=0.0328), PDGF (p=0.0077), and PLGF (p=0.0004) in supernatant and PLGF (p=0.0094) and BMP-9 (p= 0.5645) in lysate. The dosimetry of 3.7 J/cm2 upregulated VEGF-A (p=0.8410), FGF-2 (p=0.4778), BMP-9 (p=0.0042), and VEGFR1 (p=0.8570) in supernatant and VEGF-A (p=0.8412), VEGF-C (p=0.5908), and VEGFR1 (p=0.0128) in lysate; and downregulated VEGF-A (p=0.0176), PDGF (p=0.0077), PLGF (p=0.0004) in supernatant and PLGF (p=0.0094) and BMP-9 (p=0.0276) in lysate. We concluded that the energy densities from 2.5 to 6.2 J/cm2 biomodulated the COL1 gene expression, but red laser at 2.5 J/cm2 and 3.7 J/cm2 biomodulated the synthesis of several angiogenic proteins. At the energy density of 6.2 J/cm2, longer application time and smaller power changed the pattern of COL1 gene expression by pulp fibroblasts. However, the dosimetry of 3.7 J/cm2 was the most effective for the production and secretion of angiogenic factors.