Made available in DSpace on 2014-12-05T18:36:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) luciana_miranda_ipec_mest_2011.pdf: 2273487 bytes, checksum: 2458e3ceb6d02fad0808bbad9e7f3bd5 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os antimoniais pentavalentes representam a principal opção para tratamento das leishmanioses, sendo utilizado no Brasil, o antimoniato de meglumina (Glucantime\F0D2). A variabilidade da resposta ao tratamento pode estar condicionada a fatores relacionados ao hospedeiro, aos parasitas ou mesmo aos esquemas terapêuticos empregados. Neste estudo, avaliamos amostras de Leishmania (Viannia) braziliensis em ensaios in vitro quanto à sensibilidade ao antimoniato de meglumina. Foram comparadas as DL50 observadas, tanto para formas promastigotas quanto para formas amastigotas, de amostras isoladas no momento do diagnóstico antes do tratamento (amostra A) e de amostras isoladas após o primeiro ciclo de tratamento (amostra B). Sete pares de amostras (A e B) foram selecionados, sendo quatro isolados de pacientes com falha terapêutica e três de pacientes com reativação. As formas promastigotas foram expostas a concentrações de antimoniato de meglumina entre 3,955 \03BCg e 8,1 mg/mL e avaliadas após 24 e 48 horas de exposição. As formas amastigotas, em macrófagos murinos, foram expostas a concentrações de 20, 40 e 80 \03BCg/mL de antimoniato de meglumina, cuja cinética de infecção foi avaliada em intervalos de 0, 24, 48 e 72 horas, baseada em dois parâmetros: percentual de células infectadas e número médio de amastigotas por macrófago Todas as amostras B de formas promastigotas apresentaram valores da DL50 superiores aos obtidos com as amostras A, exceto para as amostras de um paciente. Nos ensaios com formas amastigotas, as amostras B apresentaram valores da DL50 mais elevados que a amostra A em 4 casos, com aumentos que variaram de 17 a 20% em 3 pacientes e de 100% em um caso. Nos demais pacientes, os valores da DL50 de A e B foram semelhantes. Dos sete pacientes estudados, um abandonou o tratamento e seis apresentaram cura, após retratamento, pelo uso da Anfotericina B (4 casos) ou antimoniato de meglumina (2 casos). Não foi possível correlacionar os resultados obtidos neste estudo com a clínica ou a resposta ao tratamento. É possível que outros fatores relacionados aos pacientes, tais como a condição imunológica e a resposta frente à infecção possam influenciar na resposta à terapêutica antimonial / Pentavalent antimonials are the first drug of choice for leishmaniasis treatment and in Brazil meglumine antimoniate (Gl u cantime  ) is used. The variability of the re sponse to treatment may be conditioned to factors related to the host, the parasites or even the therapeutic plan. In this study we assessed the susceptibility to meglumine antimoniate of samples of Leishmania (Viannia) braziliensis in in vitro tests. We compared the DL 50 of both promastigote and amastigote forms of samples isolated at diagnosis before treatment (sample A ) and samples isolated after the first cycle of treatment (sample B ). Seven pairs of samples ( A and B ) were selected, four isolated from patients with treatment failure and three from patients with reactivation. The promastigote forms were exposed to meglumine antimoniate concentrations between 3,955 μg and 8,1 mg/mL and were assessed after 24 and 48 hours of exposition. The amastigotes, in murine macrophages, were exposed to concentrations of 20, 40 and 80 μg/mL of meglumine antimoniate, and the infection kinetics was assessed at time intervals of 0, 24, 48 and 72 hours, through two parameters: percentage of infected cells and average numbe r of amastigotes per macrophage. All B samples of promastigotes presented DL 50 values higher than those obtained with A samples, except for one patient. In tests with amastigotes, the B samples showed higher DL 50 values than sample A in 4 cases, with incr eases ranging from 17 to 20% in 3 patients and 100% increase in one case. In other patients, DL 50 values of A and B were similar. One of the seven patients studied abandoned treatment and six were clinically healed after retreatment with Anphotericin B (4 cases) or meglumine antimoniate (2 cases). It was not possible to correlate the results of this study with the clinics or response to treatment. It is possible that other patient related factors such as immunological condition or response to infection may influence the response to antimonial treatment

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T16:07:48Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T16:07:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T16:08:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-16T16:08:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A emergência de espécies de Leishmania resistentes ao antimonial é um grave problema em vários países. A quimioterapia é a medida mais importante para o controle das leishmanioses, visto que não existe ainda uma vacina eficiente para uso em humanos. Além disso, o controle vetorial é difícil em razão das características ambientais muito diversas e da existência de um grande número de reservatórios domésticos e silvestres dificulta também o controle. Os antimoniais pentavalentes, SbV, são os medicamentos de primeira escolha no tratamento de todas as formas de leishmaniose em vários países. Apesar de serem amplamente utilizados na quimioterapia das leishmanioses por mais de setenta anos, apresentam alta toxicidade no tratamento clínico. Também, alguns pacientes são resistentes ao tratamento clínico com esses compostos. Neste trabalho, realizou-se uma análise proteômica comparativa entre linhagens de L. braziliensis e L. infantum sensíveis e resistentes ao SbIII mediante a utilização da metodologia 2-DE, seguida por espectrometria de massas (LC/MS/MS). Nesta tese utiliza-se a nomenclatura L. infantum (syn. L. chagasi). A análise comparativa dos perfis proteômicos entre as linhagens de Leishmania analisadas revelou que 192 spots foram únicos e/ou mais abundantes. Dos 132 spots proteicos submetidos à análise por MS, 80 foram identificados correspondendo a 57 proteínas distintas. A análise comparativa dos dados mostrou que a maioria das proteínas com abundância diferencial em ambas as espécies está envolvida na defesa antioxidante, na resposta geral ao estresse, no metabolismo de glicose e de aminoácidos e na organização do citoesqueleto. Cinco proteínas foram mais abundantes em ambas as linhagens de Leishmania resistentes ao SbIII: triparedoxina peroxidase, alfa-tubulina, HSP83, HSP70 e HSP60. Os ensaios de Western blotting 1-DE e 2-DE confirmaram os dados da análise proteômica. Estes ensaios revelaram que a ciclofilina-A é menos expressa em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. De outro lado, a pteridina redutase é mais expressa na linhagem resistente LbSbR e apresenta nível de expressão similar entre as linhagens sensíveis e resistentes de L. infantum. A triparedoxina peroxidase é mais abundante em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. Estes resultados sugerem que o aumento da expressão de enzimas da defesa antioxidante pode desempenhar papel significativo na resistência dos parasitos aos antimoniais. Em conjunto, os dados mostram que o mecanismo de resistência de Leishmania spp. ao antimônio é complexo e multifatorial. É importante ressaltar que entre as 57 proteínas identificadas como diferencialmente adundantes entre as linhagens de Leishmania spp. sensíveis e resistentes ao antimonial 17 foram identificadas anteriormente por outros autores e que as outras 40 foram observadas apenas em nossa análise proteômica de linhagens de Leishmania spp. Resistentes ao SbIII. Acreditamos que algumas dessas proteínas estejam associadas com a resposta geral ao estresse e que outras podem estar associadas ao mecanismo de resistência ao antimônio em Leishmania spp. Neste contexto, a futura análise funcional será muito importante para determinar a possível associação destas proteínas com o fenótipo de resistência de Leishmania aos antimoniais. / The emergence of drug-resistant Leishmania species is a significant problem in several countries. Chemotherapy is the most important alternative for controlling leishmaniases, since there is no effective vaccine for using in humans. Furthermore, the vector control is difficult due to different environmental characteristics and the existence of a large number of domestic and wild reservoirs. Pentavalent antimonials, Sb V, are the first-choice drugs in the treatment of all forms of leishmaniases in several Countries. Although they are widely used in the chemotherapy of leishmaniases for more than 60 years, they have high toxicity and some patients are resistant to clinical treatment with these compounds. In this study, we carried out a comparative proteomic analysis of antimony-susceptible and antimony-resistant Leishmania braziliensis (LbSbR) and Leishmania infantum (syn. L. chagasi) (LcSbR) lines using twodimensional gel electrophoresis (2-DE) followed by mass spectrometry (LC/MS/MS) for protein identification. Comparative analysis of proteomic profiles between the Leishmania lines analyzed showed that 192 spots were unique and/or most abundant. Out of 132 protein spots submitted to MS, we identified 80 that corresponded to 57 distinct proteins. Comparative analysis showed that most of the protein spots with differential abundance in both species are involved in antioxidant defense, general stress response, glucose and amino acid metabolism, and cytoskeleton organization. Five proteins were more abundant in both SbIII-resistant Leishmania lines: tryparedoxin peroxidase, alpha-tubulin, HSP83, HSP70, and HSP60. Analysis of protein abundance by Western blotting assays 1-DE e 2-DE confirmed our proteomic data. These assays revealed that cyclophilin-A is less expressed in both LbSbR and LcSbR lines. On the other hand, the expression of pteridine reductase is higher in the LbSbR line, and it has similar expression level between SbIII-susceptible and -resistant L. infantum lines. The tryparedoxin peroxidase is overexpressed in both LbSbR and LcSbR lines. These results suggest that an increased in expression of anti-oxidant defense enzymes may play a significant role in the antimonial resistance in these parasites. Together, these results showed that the mechanism of antimony-resistance in Leishmania spp. is complex and multifactorial. Interestingly, among the 17out of 57 proteins identified as differentially abundant between SbIII-susceptible and -resistant lines, were also previously identified by others authors and the other 40 proteins were observed only in our proteomic analysis of SbIII-resistant Leishmania spp. lines. We believe that some of them are associated with the general stress response and others may be associated with the mechanism of resistance of Leishmania spp. to antimony. In this context, functional analysis will be very important to determine a possible association of these proteins with the antimony-resistance phenotype in Leishmania.

Made available in DSpace on 2015-05-27T13:34:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 695.pdf: 4459312 bytes, checksum: 5c20207fa2c78a768fa3f491b2525c00 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A história natural da leishmaniose tegumentar americana apresenta poucos estudos relacionados ao conhecimento dos reservatórios associados à Leishmania (Viannia) braziliensis. Com o objetivo de caracterizar a infecciosidade experimental de Necromys lasiurius, Nectomys squamipes e Rattus rattus, para incriminação de hospedeiros reservatórios de L. (V.) braziliensis, foram realizados dois experimentos, utilizando Lutzomyia longipalpis e dez animais de cada espécie, ambos colonizados em laboratório. Como grupo controle foi utilizado dois hamsters (Mesocricetus auratus) para cada grupo de dez animais. No primeiro experimento, os animais foram inoculados com 5,5x106/ml de promatigotas de fase log de L. (V.) braziliensis e o segundo com um inóculo de 2,8x105/ml, para posterior realização de xenodiagnóstico. Amostras obtidas de sangue, pele, fígado e baço dos animais e exemplares de flebotomíneos foram processadas para a visualização do parasito, através do exame direto e detecção de DNA por meio de PCR específica para o subgênero Viannia. No primeiro experimento, 570 exemplares de fêmeas foram submetidos ao xenodiagnóstico e dentre estes, 338 foram dissecados e observados formas compatíveis com promastigotas em 7,7 por cento. Dos 26 animais, 06 apresentaram resultados positivos de infectividade no teste de PCR e 08 exemplares de flebotomíneos foram positivos. No segundo experimento, 678 fêmeas foram submetidas ao xenodiagnóstico e 467 dissecadas. No exame direto, 37,3 por cento foram positivas. Foi verificada a positividade no teste de PCR em 15, dos 29 animais submetidos ao xenodiagnóstico. 27 exemplares de flebotomíneos foram positivos na PCR específica. Estes resultados sugerem que os roedores silvestre N. lasiurus, N. squamipes e o sinantrópico R. rattus são infectivos e prováveis hospedeiros reservatórios de L. (V.) braziliensis

Made available in DSpace on 2015-10-07T18:58:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 erica_vasconcellos_ ini_mest_2009.pdf: 461741 bytes, checksum: 8582bf5d16e3931c7a3ea5ae8a371368 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O objetivo deste estudo foi descrever a eficácia e a segurança do antimoniato de meglumina (AM) intralesional (IL) no tratamento de uma série de casos de leishmaniose cutânea (LC) e contra-indicação de terapia sistêmica, atendidos no ambulatório do Laboratório de Vigilância em Leishmanioses (LabVigileish) do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC) \2013 Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ), entre 1º de janeiro de 2000 e 31 de dezembro de 2006. Os pacientes não relatavam história de tratamento prévio para LC, preenchiam os critérios de elegibilidade e assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido. Houve diagnóstico parasitológico de LC nos 24 pacientes incluídos no estudo. Em cada tratamento, o AM foi aplicado intralesionalmente, por até 4 vezes, de acordo com a resposta terapêutica. Os desfechos de eficácia e segurança foram monitorados nos dias 1, 15, 30, 45, 60, 75, de acordo com o número de aplicações ILIL. Os pacientes foram acompanhados nos meses 1, 3, 6, 9, 12, 18 e 24, após a epitelização das lesões, considerada como critério para boa resposta imediata ao tratamento. Destes, 83.3% alcançaram a cura de suas lesões apenas com tratamentos IL de AM, com poucos eventos adversos (EA). Somente 3 necessitaram de tratamento com anfotericina B e 1 com AM sistêmico Observou-se diferença significativa entre: o tempo de evolução para cura das lesões nos membros inferiores e em outras localizações, e entre a quantidade de medicação total infiltrada nos grupos com e sem cura somente com AM IL. Não houve diferença significativa quanto ao número total de lesões nestes grupos nem quanto ao desfecho \201Ccura\201D em relação ao sexo. Entre os grupos com e sem reativação das lesões após boa resposta inicial ao tratamento, não encontramos diferenças significativas em relação à área da lesão, à quantidade de medicação infiltrada por área de lesão, nem à quantidade total de medicação infiltrada no primeiro tratamento. Nenhum paciente desenvolveu lesões mucosas, no período de seguimento entre 1 e 60 meses. Não houve toxicidade relevante em nenhum dos pacientes tratados com AM IL. Pode-se dizer que o tratamento IL foi eficaz e pouco tóxico na terapia de pacientes com contra-indicação ao tratamento convencional para LC e com poucas opções terapêuticas / This observational, retrospective, case series study’s objective was to describe safety and efficacy of intralesional meglumine antimoniate (MA ) in the treatment of cutaneous leishmaniasis (CL) patients and contraindications to systemic therapy of the outpatient clinic of the Leishmaniasis Surveillan ce Laboratory (LabVigileish), Evandro Chagas Clinical Research Inst itute (IPEC), Oswaldo Cruz Foundation (FIOCRUZ), between 2000, 1 rst January, to 2006, 31 rst December. Patients did not relate history of previous therapy for CL, fu lfilled the elegibility criteria and signed the informed consent form. In each treatment, MA was applied intralesionally, up to four times, according to the therapy res ponse. Efficacy and safety outcomes were monitored in days 1, 15, 30, 45, 60 and 75, according to the number of IL injections. Patients were followed-up in t he 1rst, 3rd, 6th, 9th, 12th, 18th and 24th months after lesions epithelization, consi dered a good immediate respons e to therapy criteria. All of the 24 patients had parasitologic confirmed CL. From these, 83.3% reached cure only with IL treatment, with few adver se events (AE). Three patients needed amphotericin B and one patient was s ubsequently treated with systemic MA. We observed a significant difference between: the evolution time to cure in lower limbs lesions, and in other locati ons, and between the amount of injected medication in the groups with and without cure only with IL MA.There was no statistical significant difference in relation to the total lesions nu mber in these groups, as well as cure in relation to sex. Between groups with and without lesions reacti vation after good initial response to therapy, we found no significant difference in regard to the lesion area, the amount of infiltrated medication for lesion area, nor to the total amount of infiltrated medication in t he first treatment. No patient developed mucosal lesions in a follow-up period from 1 to 60 months. There was no relevant toxicity in any patient treated with IL MA. Intralesiona l treatment was efficient and presented little toxicity in the treatment of patients with contra indications to systemic therapy

Made available in DSpace on 2015-12-29T16:20:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mauricio_saheki_ini_mest_2013.pdf: 3864342 bytes, checksum: 26a6397d32ef9389da0be24484b9110a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-05-21 / Fundamento: Na atualidade, há um corpo crescente de pesquisas que apontam para novas drogas e esquemas alternativos de antimônio para o tratamento da leishmaniose tegumentar americana (LTA). Nesse contexto, as recomendações dos consensos mais recentes convergem para a necessidade urgente de ensaios clínicos na LTA. Embora o tratamento alternativo com dose baixa de antimônio venha sendo utilizado nos últimos 30 anos, a evidência disponível provém de dois estudos retrospectivos, dois estudos prospectivos e relatos de caso. Em nosso conhecimento, este é o terceiro estudo randomizado que compara dose baixa com a dose alta de antimônio pentavalente (Sb5+) para o tratamento da LTA. Métodos: Em um estudo de não inferioridade, randomizado, controlado, cego realizado no estado do Rio de Janeiro, uma área endêmica de transmissão de Leishmania (Viannia) braziliensis, o tratamento em dose baixa de antimoniato de meglumina (5 mg Sb5+/kg/dia durante 30 dias) foi comparado com o tratamento em dose alta (20 mg Sb5+/kg/dia durante 20 dias) para leishmaniose cutânea americana (LCA). Participantes com idade \2265 13 anos com diagnóstico parasitológico de LCA foram randomizados para tratamento com dose baixa ou dose alta de antimoniato de meglumina. Os investigadores foram mascarados para o tratamento alocado. O desfecho primário foi a cura clínica no dia 360 nas populações de intenção de tratar modificada (mITT) e por protocolo (PP). Os desfechos secundários foram tempo de epitelização, tempo de cura clínica, grau de redução da lesão e da úlcera no dia 30. A margem de não inferioridade predeterminada foi de 15%. Este estudo foi registrado no endereço eletrônico ClinicalTrials.gov, registro número NCT01301924 Resultados: Entre outubro de 2008 e dezembro de 2011, um total de 60 pacientes com LCA foi alocado para receber tratamento com antimoniato de meglumina em dose baixa ou em dose alta (30 por grupo). Na população de mITT, o desfecho primário foi atingido em 76,7% dos pacientes em dose alta versus 73,3% dos pacientes em dose baixa (diferença de risco 3,3%, IC 95% unicaudal: -15,2 a 21,9%; p=0.15) (não inferioridade não demonstrada). Na análise PP, a cura clínica no dia 360 foi observada em 84,6% dos pacientes em dose alta versus 75,9% em dose baixa (diferença de risco 8,8%, IC 95% unicaudal: -9,2% a 26,7%; p=0,28) (não inferioridade não demonstrada). Não foi observada diferença significativa nos desfechos secundários. Embora a diferença na frequência de efeitos adversos não tivesse sido significativa entre os grupos de tratamento, pacientes tratados em dose alta tiveram efeitos adversos clínicos (p=0,04) e laboratoriais (p=0,01) mais graves do que aqueles que receberam dose baixa. Interpretação: Este estudo pode constituir como evidência para as recomendações de um consenso recente que determina a utilização dos dias 180 a 360 como o desfecho de tempo ideal para avaliar cura clínica e levanta a questão intrigante sobre o melhor tempo para definir cura clínica na LTA. Embora a hipótese de não inferioridade não tenha sido formalmente determinada neste estudo, tendo em vista sua segurança e tolerabilidade, o tratamento com antimônio em dose baixa pode ser considerada como uma alternativa aceitável em pacientes incapazes de tolerar ou que apresentem contraindicação ao tratamento padrão em alta dose de antimônio / Background: There is an expanding field of research focusing on alternative schemes of antimony and new drugs to treat American tegumentary leishmaniasis (ATL). In thi s setting, recent guidelines convey that clinical trials are urgently needed. Although the alternative low dose antimony treatment has been used for the past 30 years, the available evidence comes from two retrospective, two prospective cohort studies and case reports. To o ur knowledge, this is the third randomized trial comparing low dose and high dose pentavalent antimony (Sb5+) to treat ATL. Methods: In a randomized, controlled, single blind, non - inferiority trial undertaken in Rio de Janeiro State, Braz il, an endemic area of Leishmania (Viannia) braziliensis transmission, low dose regimen of meglumine antimoniate (5 mg Sb5+/kg/day for 30 days) was compared with high dose regimen (20 mg Sb 5+/kg/day for 20 days) to treat American cutaneous leishmaniasis ( ACL). Participants aged ≥ 13 years with parasitologically confirmed ACL were randomly assigned to low dose or high dose treatment with meglumine antimoniate. Investigators were masked to treatment allocation. The primary endpoint was clinical cure at day 3 60 on modified intention to treat (mITT) and per protocol (PP) populations. Secondary endpoints were time to epithelization, time to clinical cure, adverse events, degree of total lesion and ulcer diameter reduction at day 30. The predetermined non - inferio rity margin was 15%. This trial is registered with ClinicalTrials.gov, number NCT01301924. Results: Between October, 2008, and December, 2011, a total of 60 patients with ACL were randomly assigned to low dose or high dose treatment of meglumine antimoniat e (30 per group). In the mITT population, the primary endpoint was reached in 76.7% given standard high dose versus 73.3% of patients given low dose treatment (risk difference 3.3%, one sided 95% CI: - 15.2 to 21.9%; p=0.15) (non - inferiority not confirmed). In PP analysis, clinical outcome was successful in 84.6% of patients given high dose versus 75.9% of patients given low dose treatment (risk difference 8.8%, one sided 95% CI: - 9.2% to 26.7%, p=0.28) (non - inferiority not confirmed). There were no signific ant differences in secondary measures. Although the occurrence of adverse events was not significantly different, patients in the high dose regimen were significantly more likely to have severe clinical (p=0.04) and laboratory (p=0.01) adverse events than those assigned to the low dose treatment. Interpretation: This study parallels a recent guideline that recommends day 180 - 360 as the ideal endpoint for clinical cure and raises the intriguing question about the optimal cutoff time to define clinical cure i n cutaneous leishmaniasis. Although the hypothesis of non - inferiority was not formally met in this trial, given its safety and tolerability, the low dose antimony regimen could be regarded as an acceptable alternative in patients unable to tolerate or who have a contraindication to the standard high dose treatment.

Made available in DSpace on 2016-01-07T13:36:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 bianca_vitorio_ioc_mest_2014.pdf: 8997482 bytes, checksum: 58bdb04feb407967d076809db7227935 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As diversas espécies de Leishmania são parasitas de considerável importância médica e econômica. As drogas atualmente utilizadas no tratamento da leishmaniose apresentam efeitos adversos, alta toxicidade, elevado custo e surgimento de cepas resistentes. Nesse contexto, inibidores proteolíticos é uma alternativa para o tratamento desta doença. Este estudo está focado nas calpaínas, que compreendem uma família de cisteína peptidases neutras dependentes de cálcio, envolvidas numa ampla variedade de funções fisiológicas. As calpaínas estão envolvidas em importantes doenças humanas, portanto inibidores de calpaínas já vêm sendo desenvolvidos e testados para o tratamento dessas doenças, alguns encontra-se em estágios avançados de triagem clínica. Dessa forma, o presente trabalho avalia a expressão e identificação de homólogos das calpaínas em Leishmania braziliensis e o efeito do inibidor de calpaínas MDL28170 em ensaios in vitro. Através da busca por sequências no GenBank, alinhamentos múltiplos, filogenia e análise de domínios conservados nas sequências obtidas, selecionamos como alvo inicial sequências de calpaínas que possuíam o maior número de domínios conservados. A análise da expressão gênica relativa indica que 13 das 20 calpaínas estudadas apresentam níveis constitutivos de mRNA nas formas procíclica e metacíclica de L. braziliensis. A expressão de cinco alvos é maior na forma procíclica, e a de um alvo é maior na forma metacíclica e há expressão estágio específica de apenas um alvo na forma procíclica. A partir de análises in silico, das sequências proteicas dessas calpaínas, selecionamos uma região consenso e um peptídeo correspondente a essa região foi sintetizado e empregado na imunização de coelhos A reatividade do anticorpo gerado (Anti-TryTrip CALPAIN) foi avaliada por Western blotting, citometria de fluxo e imunocitoquímica. Em ensaios de Western blotting,verificamos que o anticorpo foi capaz de reagir contra uma proteína de 50 kDa. Já na imunolocalização foi possível observar calpaínas dispersas no citoplasma, membrana e núcleo. Além disso, através de citometria de fluxo, as moléculas homólogas às calpaínas foram identificadas em maior abundância no interior das células. Nos ensaios de inibição com o MDL28170, inibidor de calpaínas, foi possível observar a redução da proliferação nas formas promastigotas recém isoladas e múltiplas passagens de forma dose-dependente nas diferentes concentrações do inibidor ao longo de quatro dias. O efeito reversíveldo inibidor também foi avaliado nas formas promastigotas, com taxas menores comparado com o controle. O efeito do inibidor, também foi capaz de diminuir de maneira dose-dependente o índice de associação e aumentou o percentual de células com parasitos aderidos durante o processo de interação com macrófagos peritoneais. O parasito aumentou a expressão de uma peptidse clássica (gp63) quando tratado com o MDL28170, já a expressão de calpaínas e cpb não foi alterada pelo estresse induzido pelo composto. Estes dados sugerem mais estudos para melhor caracterizar as calpaínas em L. braziliensis e sugerem uma maior avaliação para uma possível associação de moléculas similares as calpaínas com a virulência ou não do parasito. Assim este trabalho acrescenta novas possibilidades para a utilização de inibidores de calpaínas como um potencial alvo de desenvolvimento para o tratamento da leishmaniose / The various species of Leishmania are parasites of considerable medical and economic importance. The drugs used in the treatment of leishmaniasis have adverse effects, high toxicity, high cost and emergence of resistant strains. In this context, proteolytic inhibitors could be an alternative for the treatment of this disease. This study is focused on calpains, which comprise a family of neutral cysteine peptidases, which are strictly dependent of calcium, and are there of known as Calcium Dependent Peptidases.These enzymes play a variety of physiological functions, and are involved in human diseases, therefore calpains inhibitors are under trial to treat these diseases. Thus, this study aimed to assess calpain expression levels in Leishmania braziliensis, as well as the effect of the calpain inhibitor MDL28170 in vitro. Through the searching for sequencesin GenBank, multiple alignments, and phylogenetic analysis of the obtained sequences conserved domains, selected as an initial target sequences of calpain which possessed the greatest number of conserved domains. In this sense, we assessed the expression levels of mRNA from a group of twenty sequences containing archetypal calpain domain. The analysis indicated that 13 out of the 20 studied calpains have constitutive levels of mRNA between the procyclic and metacyclic forms of L. braziliensis, while five calpains presented higher expression levels at the procyclic stage, and only one sequence is augmented at the metacyclic stage. One calpain molecule was found to be procyclic-specific. After that, we selected a consensus region and a peptide was synthesized and used to immunize rabbits. The reactivity of the antibody (anti-calpainTryTrip) was evaluated by Western blotting, flow cytometry and immunocytochemistry. In Western blotting assays, we found that the anti-calpain TriTryp antibody was able to recognize a 50 kDa protein. The immunolocalization assays revealed calpain molecules present at the membrane, nucleus and dispersed throughout the cytoplasm. Also, by flow cytometry, molecules homologous to calpains have been identified in abundance within cells. In inhibition assays employing MDL28170, a potent and specific calpain inhibitor, it was possible to observe a dose-dependent reduction in the proliferation rate, either in freshly isolated promastigotes or multiple passages parasites. MDL28170 presents a reversible inhibitory effect. The inhibitor was also able to decrease in a dose-dependent manner the association index and the percentage of host cells with attached parasites during the process of interaction with peritoneal macrophages. Finally, MDL28170 enhanced the expression of gp63 molecules, while cpb and calpains expression were not affect. Further studies to better characterize the calpain in L. braziliensis should be performed, aiming to add new possibilities for the exploitation of calpain inhibitors as a potential for the treatment of leishmaniasis. / The various species of Leishmania are parasites of considerable medical and economic importance. The drugs used in the treatment of leishmaniasis have adverse effects, high toxicity, high cost and emergence of resistant strains. In this context, proteolytic inhibitors could be an alternative for the treatment of this disease. This study is focused on calpains, which comprise a family of neutral cysteine peptidases, which are strictly dependent of calcium, and are there of known as Calcium Dependent Peptidases.These enzymes play a variety of physiological functions, and are involved in human diseases, therefore calpains inhibitors are under trial to treat these diseases. Thus, this study aimed to assess calpain expression levels in Leishmania braziliensis, as well as the effect of the calpain inhibitor MDL28170 in vitro. Through the searching for sequencesin GenBank, multiple alignments, and phylogenetic analysis of the obtained sequences conserved domains, selected as an initial target sequences of calpain which possessed the greatest number of conserved domains. In this sense, we assessed the expression levels of mRNA from a group of twenty sequences containing archetypal calpain domain. The analysis indicated that 13 out of the 20 studied calpains have constitutive levels of mRNA between the procyclic and metacyclic forms of L. braziliensis, while five calpains presented higher expression levels at the procyclic stage, and only one sequence is augmented at the metacyclic stage. One calpain molecule was found to be procyclic-specific. After that, we selected a consensus region and a peptide was synthesized and used to immunize rabbits. The reactivity of the antibody (anti-calpainTryTrip) was evaluated by Western blotting, flow cytometry and immunocytochemistry. In Western blotting assays, we found that the anti-calpain TriTryp antibody was able to recognize a 50 kDa protein. The immunolocalization assays revealed calpain molecules present at the membrane, nucleus and dispersed throughout the cytoplasm. Also, by flow cytometry, molecules homologous to calpains have been identified in abundance within cells. In inhibition assays employing MDL28170, a potent and specific calpain inhibitor, it was possible to observe a dose-dependent reduction in the proliferation rate, either in freshly isolated promastigotes or multiple passages parasites. MDL28170 presents a reversible inhibitory effect. The inhibitor was also able to decrease in a dose-dependent manner the association index and the percentage of host cells with attached parasites during the process of interaction with peritoneal macrophages. Finally, MDL28170 enhanced the expression of gp63 molecules, while cpb and calpains expression were not affect. Further studies to better characterize the calpain in L. braziliensis should be performed, aiming to add new possibilities for the exploitation of calpain inhibitors as a potential for the treatment of leishmaniasis.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:20:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 erica_vasconcellos_ipec_dout_2013.pdf: 1997597 bytes, checksum: dd29c2d42df0755c4d5b6f0aadc02691 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leishmaniose tegumentar americana é uma doença que acomete a pele e as mucosas das vias aerodigestivas superiores. Os antimoniais pentavalentes vêm sendo empregados há muitas décadas como fármacos de primeira linha para o seu tratamento. Pacientes com poucas lesões cutâneas, com impossibilidade de receber medicação parenteral regular ou com sinais de toxicidade importante ao antimonial por via sistêmica, podem ser submetidos ao tratamento intralesional com antimoniato de meglumina. Objetivos: descrever a eficácia e a segurança do antimoniato de meglumina administrado por via intralesional, para o tratamento da leishmaniose cutânea. Método: Foi realizado um estudo descritivo, retrospectivo, tipo série de casos, de pacientes atendidos no Laboratório de Vigilância em Leishmanioses do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas \2013 FIOCRUZ, de 2002 até julho de 2011, que tivessem sido tratados para leishmaniose cutânea com aplicação intralesional de antimoniato de meglumina, após tratamento sistêmico com o mesmo fármaco Além disso, relatamos dois casos especiais de pacientes tratados com antimoniato de meglumina intralesional: o primeiro, de um paciente que apresentou resistência ao antimoniato de meglumina sistêmico e intralesional, não tolerou anfotericina B e respondeu apenas à pentamidina. O outro, de paciente com eczema generalizado após antimoniato de meglumina sistêmico e que desenvolveu eczema bolhoso em local de aplicação intralesional do mesmo fármaco. Resultados: Pacientes com leishmaniose cutânea apresentaram boa resposta terapêutica ao antimoniato de meglumina administrado por via intralesional com um mínimo de efeitos adversos, geralmente sem necessidade de mudar o fármaco para outros de mais difícil administração e alto custo, e sem desenvolvimento de lesões mucosas. Medicamentos de segunda ou terceira escolha são eficazes, na ausência de resposta prévia ao antimoniato de meglumina sistêmico e intralesional. A via intralesional deve ser evitada em caso de farmacodermia ao antimoniato de meglumina sistêmico / American tegumentary leishmaniasis is a disease that affects the skin and mucous membranes of the upper aerodigestive tract. Pentavalent antimonial compounds have been used for decades as a first - line drugs for its treatment. Patients with few skin lesions, with inability to receive parenteral medication regularly or with signs of significant toxicity to antimony systemically, may be subjected to treatment with intralesional meglumine antimoniate. Objectives: To describe the efficacy and safety of meglumine antimoniate administered intralesiona lly, for the treatment of cutaneous leishmaniasis. Methods: We conducted a descriptive, retrospective case series of patients treated at the Leishmaniasis Surveillance Laboratory, Evandro Chagas Clinical Research Institute, Oswaldo Cruz Foundation, Rio de Janeiro, Brazil , from 2002 until July 2011, which had been treated for cutaneous leishmaniasis with intralesional meglumine antimoniate after systemic treatment with the same drug. In addition, we report two special cases of patients treated with intralesi onal meglumine antimoniate: the first, a patient who was resistant to systemic and intralesional meglumine antimoniate, did not tolerate amphotericin B and answered only to pentamidine. The other one reports a patient with generalized eczema after systemic meglumine antimoniate and moderate eczema at the place of intralesional injection of the same drug. Results: Patients with cutaneous leishmaniasis showed good therapeutic response to intralesional meglumine antimoniate, with a minimum of adverse effects, generally without changing the drug to other one of more difficult and costly administration, without development of mucosal lesions. Drugs of second or third choice are effective in the absence of prior response to systemic meglumine antimoniate and intra lesional. The intralesional route should be avoided in cases of pharmacodermia after systemic meglumine antimoniate

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:20:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 marcelo_lyra_ipec_dout_2013.pdf: 10453682 bytes, checksum: b9ea286c54dc58ea1120e40d6282f61b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Neste estudo comparamos esquemas de alta e baixa dose de antimoniato de meglumina (AM) para o tratamento da forma cutânea de leishmaniose tegumentar americana, em pacientes oriundos do estado do Rio de Janeiro. OBJETIVO: Comparar a eficácia representada pela cura imediata (epitelização em 120 dias), tardia (cicatrização em 360 dias) e definitiva (ausência de reativação ou lesão mucosa em 720 dias) e toxicidade (clínica, laboratorial e eletrocardiográfica) com duas diferentes doses de tratamento com AM para leishmaniose cutânea (LC) e comparar os critérios de cura clínica aqui adotados com aqueles estabelecidos pelo Ministério da Saúde. MÉTODO: Ensaio clínico de não inferioridade, controlado, randomizado, cego e de fase III, com 60 pacientes com LC alocados em dois grupos de tratamento: (A) 20mg Sb5+/kg/dia por 20 dias e (B) 5mg Sb5+/kg/dia por 30 dias administrados por via intramuscular. RESULTADOS: Pacientes dos grupos A e B apresentaram, respectivamente: Cura imediata 90,0% e 86,7%, com tempo médio de epitelização de 58,7 e 54,9 dias; cura tardia por intenção de tratar 76,7% e 73,3%; e cura tardia por análise de protocolo 84,6% e 75,9%. Dos 53 pacientes que apresentaram epitelização em até 120 dias, 44 (83,4%) evoluíram para cura tardia. Quando avaliados conjuntamente, os efeitos adversos (EA) clínicos, laboratoriais e eletrocardiográficos foram mais frequentes no grupo A que no grupo B (médias 7,9 e 4,7) e mais graves [RR= 2,22 (IC 95% 1,22-4,06) p=0,0045] no grupo A. Os EA clínicos graus 2 e 3 foram mais frequentes no grupo A; RR=6,5 (IC 95% 1,60-26,36) p=0,001 Os EA laboratoriais foram mais frequentes RR=1,39 (IC 95% 0,99-1,93) p=0,05 e mais graves (graus 2, 3 ou 4) RR=4,67 (IC 95% 1,49-14,59) p=0,0016 no grupo A. Hiperlipasemia foi a alteração laboratorial mais frequente e mais grave. Pacientes do grupo A apresentaram um RR=4,0, p=0,006 de desenvolver hiperlipasemia moderada a grave, com fração atribuível de 75%. Dez pacientes (16,7%) necessitaram suspender o tratamento temporariamente por apresentarem QTc >0,46ms, entretanto não houve diferença entre os grupos.CONCLUSÃO: A dose de 5mg Sb5+/kg/dia mostrou-se menos tóxica, mais segura e de menor custo no tratamento da LC, especialmente em idosos e pacientes com co-morbidades, atualmente com restritas opções terapêuticas. Entretanto, a hipótese de não inferioridade da dose baixa em relação a dose alta não pôde ser comprovada A epitelização com 120 dias, seguida de progressiva melhora no sentido da cicatrização em 360 dias sugere um possível benefício com a flexibilização dos critérios de cura da LC / In this study, we compare schemes of high and low dose of meglumine antimoniate (MA) for the treatment of cutaneous form of American tegumentary leishmaniasis in patients from Rio de Janeiro. OBJECTIVE: To compare the efficacy represented by immediate healing ( epithelialization in 120 days) , late healing (scarring within 360 days ) and final healing (no reactivation or mucosal lesion in 720 days) and clinical , laboratory and electrocardiographic toxicity with two different schemes of treatment with MA for cutaneous leishmaniasis (CL ) and compare the clinical cure criteria adopted here with those established by the Ministry of Health. METHOD : Randomized, controlled, blind, phase III clinical trial, of non-inferiority with 60 patients presenting CL divided into two treatment groups: (A) 20 mg Sb5+ / kg / day for 20 days and (B) 5 mg Sb5+ / kg / day for 30 days administered intramuscularly. RESULTS : Patients in groups A and B presented, respectively : immediate healing of 86.7 % and 90.0 % , with a mean time of epithelialization of 58.7 and 54.9 days; late healing by intention to treat of 76.7 % and 73.3%; and late healing by protocol analysis of 84.6 % and 75.9 % .From 53 patients who presented epithelialization within 120 days , 44 (83.4 %) had late healing . When considered together, the clinical, laboratory andelectrocardiographic adverse effects (AE) were more frequent in group A than in group B ( mean 7.9 and 4.7 ) and more severe [RR = 2.22 (IC CI 95% 1.22-4.06 ) p = 0.0045] in group A. The clinical AE grades 2 and 3 were more frequent in group A; RR = 6.5 ( CI 95% 1.60- 26.36 ) p = 0.001 . The laboratorial AE were more frequent RR = 1.39 ( CI 95% 0,99 - 1.93 ) p = 0.05 and more severe (grades 2 , 3 or 4 ) RR = 4.67 ( CI 95% 1.49 - 14.59 ) p = 0.0016 in group A. Hyperlipasemia was the most frequent and severe laboratory abnormality , patients in group A had a RR = 4.0, p = 0.006 of developing moderate to severe hyperlipasemia, with attributable fraction of 75 % . Ten patients ( 16.7% ) had to discontinue treatment temporarily since they presented QTc > 0.46 ms , however there was no difference between the groups.CONCLUSION : Although the hypothesis of noninferiority between schemes has not been formally proven , these findings subsidize the use of the 5mgSb5+ / kg / day dose, less toxic , safer and less expensive to treat CL , especially in the elderly and patients with co - morbidities , currently with restricted therapeutic options . Epitelization in 120 days, followed by progressive improvement towards healing within 360 days suggests a possible benefit with the relaxation of criteria for cure of CL.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 fernanda_oliveira_ipec_dout_2011.pdf: 3783514 bytes, checksum: 22fcadff51352547d6bc3ff6d3c09f88 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a diversidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis nos níveis inter e intrapacientes, diretamente em lesões cutâneas e mucosas de indivíduos com leishmanioses mucocutânea (LMC), disseminada (LD) e mucosa (LM), incluindo indivíduos coinfectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Um total de 61 amostras procedentes de 38 pacientes foi analisado pelas técnicas da reação em cadeia da polimerase (PCR), da reação em cadeia da polimerase com primer único em condições de baixa estringência (LSSP-PCR) e da análise fenética, tendo como alvo molecular a região variável do minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA). Neste estudo, predominaram indivíduos do sexo masculino e com acometimento mucoso nasal. A presença de DNA do parasita foi evidenciada pela banda diagnóstica de 750 pb, em todas as amostras analisadas, possibilitando o diagnóstico específico. Na investigação do perfil genotípico de subpopulações de L. (V.) braziliensis, através da LSSP-PCR, foi revelado o polimorfismo genético intrafragmento traduzido como uma assinatura do kDNA do parasito para cada amostra. Assinaturas de kDNAs similares em amostras de paciente coletadas ao mesmo tempo (mucosa oral e nasal), e a divergência nos perfis genéticos em amostras coletadas em tempos diferentes na mesma localização (mucosa nasal) sugerem a clonalidade do inóculo inicial, como consequência da estrutura populacional clonal de Leishmania No estudo da variabilidade genética de L. (V.) braziliensis nos níveis inter e intrapacientes foram evidenciadas similaridades genotípicas entre as amostras de lesões cutânea e mucosa intrapacientes. As análises fenética e estatística possibilitaram afirmar que a diversidade genética no nível intrapacientes é menor do que a observada entre os pacientes. Nenhuma associação pode ser observada entre os perfis genéticos de L. (V.) braziliensis e as formas clínicas da doença (LM, LMC, LD), e nem em relação à localização da lesão cutânea ou mucosa (nasal ou oral). O polimorfismo genético de L. (V.) braziliensis também foi evidenciado nos pacientes coinfectados pelo HIV, cuja análise fenética reuniu os perfis genéticos em dois grupos distintos, os quais discriminaram entre as amostras obtidas de pacientes com coinfecção Leishmania/ HIV daquelas obtidas de pacientes não coinfectados. A discriminação de perfis genéticos diferenciados de L. (V.) braziliensis em pacientes coinfectados pelo HIV sugere que a imunossupressão tem impacto na estrutura populacional do parasita. Os nossos resultados corroboram a complexidade genética existente nos parasitos do gênero Leishmania, reforçando a diversidade na dinâmica populacional e na plasticidade genética de L. (V.) braziliensis / Oliveira, F S. C linic al and molecular study in mucocutaneous leishmaniasis : Diagno ses and s creening of subpopulation of Leishmania (Viannia) braziliensis in the inter and intrapatient levels . Rio de Janeiro, 2011 . 10 1 f. Thesis [ PhD in Clinic research in Infectious Diseases ] – Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. ABSTRACT The present study has as its main objective to evaluate the genetic diversity of L eishmania (V iannia ) braziliensis in the inter and intrapatient levels, directly from cutaneous and mucosal lesions of individuals with mucocutaneous (MCL), disseminated (DL) and mucosal (ML) leishmaniasis, including individuals with the human immunodeficiency virus (HIV) infection . A total of 61 samples recovered from 38 patients was analyzed by the techniques of pol y merase chain reaction (PCR), low - s tringency single - specific - primer PCR (LSSP - PCR) and phenetic analysis, directed to the variable region of the kinetoplast DNA ( kDNA ) minicirc les. In this study, male individuals with nasal mucosa involvement predominated . The presence of the parasite’s DNA was revealed by the diagn osis band of 750 bp, in all analyzed samples, making the specific diagnosis possible. In the investigation of the genotypic profile of the subpopulations of L. (V.) braziliensis , through LSSP - PCR, it was revealed the intrafragment genetic polymorphism tran slated as a kDNA signature for each sample. Similar kDNAs signatures in patient’s samples collected simult aneously (oral and nasal mucosa ), and the divergence in the genetic profiles in samples collected at different times on the same location (nasal mucos a ) suggest the clonality of the initial inoculu m , as a consequence of the clonal population structure of Leishmania. In the study of the genetic variability of L. (V.) braziliensis in the int er and intr a patient levels, genotypic similarities were observed among the cutaneous and mucos al lesions intrapatients. The statistic and phenetic analyzes made it possible to assure that the genetic diversity in the intrapatient level is lower than the observed among the patients. No association could be observed betw een the genetic profiles of L. (V.) braziliensis and the clinical forms of the disease (ML, MCL, DL) and neither in relation to the location of the cutaneous or mucosal lesion (nasal or oral). The genetic polymorphism of L. (V.) braziliensis was also detec ted in the HIV - infected patients . The phenetic analysis has grouped the genetic profiles into two different clusters, which discriminated between samples from patients with Leishmania / HIV co - infections from that of non - HIV - i nfected patients. The discrimin ation of L. (V.) braziliensis divergent genetic profiles in patients co - infected with HIV suggests that the immunosupression has some impact on the parasite’s populat ional structure. Our result s corroborate the genetic complexity in parasites of the genus Leishmania reinforcing the diversity in the populacional dynamics and genetic plasticity of L. (V.) braziliensis .

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-24T16:49:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf: 750718 bytes, checksum: 69e1b7d13b430597210880a96a2027d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-24T16:49:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf: 750718 bytes, checksum: 69e1b7d13b430597210880a96a2027d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-24T16:49:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf: 750718 bytes, checksum: 69e1b7d13b430597210880a96a2027d5 (MD5) Previous issue date: 2015 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:24:54Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf.txt: 70515 bytes, checksum: 03b3fccd821cb9508501f357620a7f85 (MD5) Dissertacao_BCM_DiegoHenriqueFagundesMacedo.pdf: 750718 bytes, checksum: 69e1b7d13b430597210880a96a2027d5 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Leishmania RNA vírus (LRVs) são comumente encontrados infectando espécies de Leishmania, especialmente as do subgênero Viannia. O LRV1 é um vírus RNA de cadeia dupla (Totiviridae) descrita pela primeira vez em cepas de Leishmania guyanensis e Leishmania braziliensis da região amazônica. Dados anteriores demonstraram que cepas infectados com LRV1 provoca um perfil pró inflamatório mais Exacerbado parcialmente causada pela activação de receptores Toll like 3 (TLR3) através do cDNA viral. A presença de cepas infectadas pelo LRV1 já foi detectado em biópsia de pacientes com leishmaniose cutânea (LC) da cidade de Caratinga, Minas Gerais. No entanto, não há informações da frequência de LRV1 para outras regiões endêmicas do Estado. O principal objetivo deste estudo é a prospecção da presença de LRV1 em cepas de Leishmania braziliensis isoladas de regiões no estado de Minas Gerais incluindo São João das Missões, onde são relatados muitos casos de CL na reserva indígena de Xacriabá e também formas atípicas de leishmaniose cutânea causadas por L. braziliensis que nunca antes haviam sido prospectadas para o LRV1. As reacções de PCR utilizaram iniciadores para a cápsideo viral e o cDNA de L. guyanensis (MHOM/BR /75/M4147) foi utilizado como controlo positivo. Foram prospectadas 41 cepas de L. braziliensis de várias regiões do Estado de Minas Gerais e alguns outros de outras regiões. A presença de LVR1 em parasitos isolados a partir de pacientes não foi observada. Esses resultados sugerem que a frequência de LRV1 em cepas de L. braziliensis parecem ser muito baixa na região Sudeste do Brasil / Leishmania RNA virus (LRVs) are commonly found infecting Leishmania species, especially from the subgenus Viannia. LRV1 is a doublestranded RNA virus (Totiviridae) first described in Leishmania guyanensis and Leishmania braziliensis strains from the Amazon region. Previous reports have shown that L. guyanensis infected with LRV1 causes a higher pro-inflammatory profile partially caused by the activation of Toll like receptors 3 (TLR3) by the viral dsRNA. The presence of LRV1 infected strains was already detected in biopsy from patients with cutaneous leishmaniasis (CL) from Caratinga, Minas Gerais state. However, no information for LRV1 presence are available for other endemic regions of the State. The main objective of this study is to prospect the presence of LRV1 in Leishmania strains isolated from regions in the state of Minas Gerais, including São João das Missões, where many cases of CL are reported in the Indigenous reserve of Xacriabá and atypical forms of cutaneous leishmaniasis caused by leishmania braziliensis whose were never prospected for LRV1. The detection was by PCR reactions used primers for the viral capsid and cDNA from L. guyanensis (MHOM/BR/75/M4147) was used as positive control. We prospected 41 strains of L. braziliensis from various regions of the Minas gerais State and a few others from other regions. The presence of LVR1 in parasites isolated from patients was not detected. Those results suggest that the frequency of LRV1 in L. braziliensis strains seems to be very low in the Southeast of Brazil.