A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença infecciosa de carater sistêmico. Estima-se que 350 milhões de pessoas no mundo estão expostas ao risco de infecção, com uma prevalência de 12 milhões de infectados e letalidade mundial de 59.000 casos por ano (OMS), sendo que 90%dos casos de LV ocorrem em países onde existe grande parte da população em situação de pobreza.Na América Latina a maioria dos casos ocorre no Brasil (96%) com média de 3.500 casos/ano. As áreas de maior endemia encontram-se nas regiões mais carentes do Norte e Nordeste.A donça afeta animais e o homem, podendo levar ao óbito em 100% dos casos, tendo como seu principal vetor a Lutzomyia longipalpis e como agente etiológico, a Leishmania Infantum. O Estado do Tocantins apresenta elevado número de casos autóctones, e é considerada área endêmica pelo Minisério da Saúde devido a doença estar presente na maioria dos seus municípios. A cidade de Araguaína, com 55,8% dos casos do Tocantins, é classificada pelo Ministério da Saúde como área de transmissão intensa.O objetivo geral deste trabalho foi analisar casos confirmados de Leishmaniose visceral grave CID-B55 internados no Hospital de Doenças Tropicais do Tocantins (HDT), na cidade de Araguaína - TO que evoluíram para óbito no periodo de janeiro de 2002 a dezembro de 2015. Pretendeu-se identificar e descrever dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais, e variáveis relacionadas ao tratamento. Foi feito um estudo epidemiológico, observacional, retrospectivo, descritivo, utilizando dados secundários de prontuários médicos de pacientes internados, no Hospital de Doenças Tropicais do Estado do Tocantins, na cidade de Araguaína - TO. Resultados: sexo masculino, 60,8 e 39,2% sexo feminino. 49,2% idade entre 0 e 10 anos; 20% maiores de 51 anos. Local de procedência em relação ao município 40,9% são de Araguaína; e ao Estado a 89% são do Tocantins. Presença de febre em 70,8%; esplenomegalia e hepatomegalia 76,7%. Hemoglobina < 7g/dl 50%, plaquetopenia 76,7%;leucopenia 50% e hipoalbuminemia 84,9%.Tempo de febre até a internação > que 30 dias 30,8%; Tempo de diagnóstico 5,1 dias; tempo de diagnóstico ao óbito 11,6 dias; RIFI 1/80 em 53,3%; Teste Rápido positivo 88,2% droga de escolha para tratmento foi Glucantime 43% seguida por anfotericina 32% e anfotericina lipossomal 25%. A principal causa do óbito na DO(Declaração de aÓbito) foi kalazar 33,3% e também Infecções respiratorias 31,7%.Conclui-se que a maior incidencia ocorre em individuo do sexo masculino menores de 10 anos, residentes no Estado do Tocantins, apresentando quadro febril prolongado, anemia severa e hipoalbuminemia grave, podendo este quadro ter influenciado na evolução ao óbito. / American Visceral Leishmaniasis (AVL) is an infectious disease of a systemic nature. It is estimated that 350 million people worldwide are at risk of infection, with a prevalence of 12 million infected and worldwide lethality of 59,000 cases per year (WHO), with 90% of cases of VL occurring in countries where there is of the population living in poverty. In Latin America, most cases occur in Brazil (96%) with an average of 3,500 cases / year. The most endemic areas are in the poorest regions of the North and Northeast, affecting animals and man, and can lead to death in 100% of cases, having as its main vector Lutzomyia longipalpis and as an etiological agent, Leishmania Infantum. The State of Tocantins presents a high number of autochthonous cases, considered an area endemic by the Ministry of Health because the disease is present in most of its municipalities. The city of Araguaína, with 55.8% of the Tocantins cases, is classified by the Ministry of Health as an intense transmission area. The general objective was to analyze confirmed cases of severe visceral leishmaniasis ICD-B55 hospitalized at the Tropical Diseases Hospital of Tocantins (HDT), in the city of Araguaína - TO, which evolved to death in the period from January 2002 to December 2015. The aim was to identify and describe epidemiological, clinical and laboratory data, and treatment-related variables. Study was an epidemiological, observational, retrospective, descriptive study, using secondary data from medical records of hospitalized patients, at the Tropical Diseases Hospital of the State of Tocantins, in the city of Araguaína - TO. Results: male, 60.8% and 39.2% female. 49.2% age between 0 and 10 years; 20% greater than 51 years. Place of origin in relation to the municipality 40.9% are from Araguaína; And to the State, 89% are from Tocantins. Presence of fever in 70.8%; Splenomegaly and hepatomegaly 76.7%. Hemoglobin <7g/dl 50%, thrombocytopenia 76.7%, leukopenia 50% and hypoalbuminemia 84.9%. Fever time until hospitalization > 30 days 30.8%; Diagnostic time 5.1 days; Diagnostic time at death 11.6 days; RIFI 1/80 53.3% Positive Fast test 88,2%; drug of choice for Glucantime treatment 43% followed By amphotericin 32% and liposomal amphotericin 25%. The main cause of the OD was kalazar 33,3% followed by respiratory infections 31.7%. It is concluded that the highest incidence occurs in a male under 10 years of age, living in the state of Tocantins, presenting a prolonged febrile condition, severe anemia and severe hypoalbuminemia, which may have influenced the evolution to death.

Hamsteres infectados com Leishmania (L.) chagasi são considerados um dos melhores modelos para estudo de fatores relacionados à imunossupressão que ocorre durante a leishmaniose visceral ativa, pois apresenta manifestações clínicas similares ao que ocorre no homem e não conseguem controlar a infecção. Neste estudo, hamsteres infectados intraperitonealmente com 2x107 parasitos foram utilizados para avaliação de possíveis fatores envolvidos na dinâmica da imunossupressão. Os parâmetros avaliados foram a produção de citocinas de padrão Th1 e Th2, produção de óxido nítrico por células esplênicas e detecção de apoptose em linfócitos esplênicos em tempos precoces (6, 20, 48 e 72 horas), intermediários (7 e 15 dias) e tardios (30 e 60 dias) de infecção. Inicialmente avaliamos a carga parasitária no baço e observamos aumento progressivo dependente do tempo de infecção, ratificando que hamster infectado é um bom modelo para desenvolvimento de doença. A resposta celular frente a mitógeno e antígeno de Leishmania foi o parâmetro utilizado para avaliação de imunossupressão. Observamos resposta preservada à concanavalina A em todos os tempos de infecção e resposta preservada ao antígeno de Leishmania nos tempos precoces, porém com ausência de resposta antígeno específica a partir do tempo de 7 dias de infecção. A quantificação de óxido nítrico foi determinada em sobrenadante de células esplênicas de cultura estimuladas com concanavalina A e antígeno de Leishmania, pelo método de Griess. Observamos inicialmente baixo nível de produção de óxido nítrico em todos os tempos de infecção, no entanto quando as células foram estimuladas com antígeno de Leishmania observamos níveis ainda menores nos tempos de 48 e 72 horas de infecção. O perfil de citocinas produzido foi determinado pela reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa, sendo detectado RNA mensageiro tanto de citocinas Th1, quanto Th2 em todos os tempos de infecção (precoce, intermediária e tardia), em células ex-vivo e estimuladas; e também em animais controles não infectados; não havendo um padrão de dicotomização de produção de citocinas neste modelo experimental. Detecção de apoptose em células esplênicas não aderentes (prováveis linfócitos T) ex-vivo e em cultura estimuladas com concanavalina A e antígeno de Leishmania foi avaliada pelos seguintes métodos: Anexina V, caspase 3 clivada e TUNEL por citometria de fluxo. Houve marcação da exposição de fosfatidil serina pelo método da anexina V, nos tempos de 6 horas de infecção, quando as células foram estimuladas com mitogeno ou antígeno de Leishmania; e com 48 horas e 60 dias de infecção somente quando estimuladas com antígeno de Leishmania. Em células esplênicas em cultura estimuladas com concanavalina não houve marcação de caspase 3 clivada, porém em células esplênicas ex-vivo nos tempos 20, 48 e 72 horas de infecção houve detecção de apoptose, definida por marcação de caspase 3 clivada. A marcação de células esplênicas não aderentes para quebra de DNA foi baixa em todos os tempos analisados, porém observamos aumento de marcação em células esplênicas não aderentes, estimuladas com antígeno nos tempos de 20 horas e posteriormente de 7 dias até 60 dias de infecção. Nossos resultados sugerem que a imunossupressão na leishmaniose visceral no modelo de hamsteres infectados com Leishmania (L.) chagasi é antígeno dependente e instala-se nos tempos intermediários de infecção, a partir de 7 dias. Esta imunossupressão parece estar relacionada com aumento de apoptose em linfócitos já nos tempos precoces de infecção, que pode favorecer a progressão da infecção, por ocorrer principalmente em células esplênicas antígenos reativas. Nossos dados sugerem ainda, que a imunossupressão não é decorrente da dicotomização da produção de citocinas Th1 e Th2 / Hamsters infected by Leishmania (L.) chagasi are considered one of the most remarkable models to study several characteristics related to immunosuppression, raised during active visceral leishmaniasis especially because hamsters show similar clinical manifestations as it is found in humans without surmounting the infection. In this study, hamsters infected intraperitoneally with 2x107 parasites were used to evaluate the possible factors involved in the dynamic of immunosuppression that occurs during the disease development. The evaluated parameters were the production of Th1 and Th2 cytokines profile, nitric oxide production of splenic cells and detection of apoptosis in splenic lymphocytes at early (6,20, 48 e 72 hours), intermediate (7 e 15 days) and late times (30 e 60 days) of infection. Initially, we evaluate the parasite load in the spleen and observed a progressive increase dependent on the time of infection, ratifying that infected hamsters are good models to set up the disease development. Cellular response upon mitogen or Leishmania antigen was the parameter used to evaluate the immunosuppression showing a preserved response to concanavalin A at all period of infection and a preserved response to the Leishmania antigen at all early phases however with no specific antigen response from 7 day of infection until the late phase of infection. Nitric oxide quantification was determined in the splenic cells supernatant in culture stimulated upon concanavalin A and Leishmania antigen and we observed initially low level of nitric oxide production, measured by the Griess method. Nonetheless, when the cells were stimulated upon Leishmania antigen we observed a lower level nitric oxide production at 48 and 72 hours of infection. mRNA of Th1 e Th2 cytokines profile was determined by RT-PCR at all period of infection studied in infected or non infected hamsters showing no difference at the cytokine profile in this experimental model. Detection of apoptosis in the non adherent splenic cells (probably T lymphocytes) ex-vivo and in the stimulated culture with concanavalin A and Leishmania antigen was evaluated by the following methods: annexin V-FITC, cleaved caspase 3 and TUNEL by flow cytometry analysis. There was phosphatidilserine staining by annexin method, at 6 hour of infection when cells were stimulated by mitogen or Leishmania antigen at 48 hours and 60 days of infection only when stimulated by Leishmania antigen. Splenic cells in culture stimulated by concanavalin A showed no cleaved caspase 3 staining in all period of infection studied. Otherwise, apoptosis was detected in the ex-vivo splenic cells at 20, 48 and 72 hours of infection by cleaved caspase 3 staining. We observed a low DNA break staining of non adherent splenic cells in all period analyzed, although this staining was increased in non adherent cells stimulated upon Leishmania antigen at 20 hours from 7 day of infection until 60 day of infection. Our results suggest that a visceral leishmaniasis immunosuppression in the hamsters model infected by Leishmania (L.) chagasi is antigen dependent and sets up in the intermediate phases of infection from 7 days on. This immunosuppression seems to be related to the apoptosis increase in lymphocytes already in the early period of infection probably favoring its progression especially because of its occurrence in reactive splenic antigen. Our data also suggest that the immunosuppression is not provided by dichotomization in the Th1 and Th2 cytokines profile

A Leishmaniose é uma infecção causada pelo protozoário do gênero Leishmania e transmitida pela picada de insetos. Os tratamentos atuais são caros e demorados, envolvendo compostos baseados em Sb(V), anfotericina B lipídica e miltefosina. Estudos recentes sugerem que a enzima tripanotiona redutase (TR) poderia ser um alvo específico no desenvolvimento de novos fármacos, pois ela é essencial e exclusiva dos tripanossomatídeos. Desta forma, este trabalho apresenta a síntese de novos compostos derivados da iminodibenzila com estrutura similar à clomipramina, um conhecido inibidor da TR. Tais compostos são conjugados de iminodibenzila com etilenodiamina, etanolamina e dietilenotriamina através de epicloridrina (dado-en, dado-ea e dado-dien , respectivamente). Foram obtidos com rendimentos superiores a 94% e caracterizados através de LC_MS e espectroscopia no infravermelho. Também se fez a avaliação da afinidade relativa dos novos ligantes por cobre através do teste de recuperação da fluorescência da calceína, concluindo-se que o ligante dado-dien possui uma afinidade maior com Cu (II) quando comparado com os outros ligantes sintetizados. Foram formados complexos metálicos através da adição de sulfato de cobre (II), acompanhando-se através de espectroscopia ultravioleta-visível para se obter uma estimativa da relação metal: ligante, concluindo-se que os complexos formados eram [Cu(dado-ea)]2+, [Cu(dado-en)2]2+ e [Cu(dado-dien)2]2+. A lipofolicidade foi estimada através de simulação computacional, constatando-se que os complexos formados são todos muito lipofílicos, sendo que o logP descreve na seguinte: [Cu(dado-en)2]2+ > [Cu(dado-dien)2]2+ > [Cu(dado-ea)]2+. Ensaios de atividade pró-oxidante através da oxidação da sonda fluorimétrica DHR revelaram que o complexo [Cu(dado-ea)]2+ apresentou a maior taxa de atividade pró-oxidante, sendo independente da concentração de peróxido de hidrogênio no meio reacional e alcançando seu limiar quando presente em concentração aproximada de 10 µM. Por fim, os compostos sintetizados foram testados quando à suas citotoxidades frente a promastigotas L. amazonenses e com macrófagos RAW 264,7. Quando o protozoário foi exposto a concentrações variadas dos compostos deste estudo, observou-se que os ligantes ea, en e dien tiveram os menores valores de IC50 (todos < 3µM), porém eles são muito tóxicos para serem utilizados como fármacos, Dentre os ligantes sintetizados, somente o dado-en apresentou um resultado numa faixa viável (IC50 19,9 ± 2,2 µM). Contra macrófagos RAW 264,7, dado-en apresentou IC50 > 50µM, ou seja, ele é mais tóxico para o protozoário do que para os macrófagos. A complexação com cobre não representou um aumento interessante na citotoxicidade dos compostos. O conjunto de resultados apresentados neste indica um potencial uso do composto dado-en no combate à leishmaniose. / Leishmaniasis is an infection caused by protozoa of the genus Leishmania. and transmitted by insects. Current treatments are expensive and time-consuming, involving Sb(V)-based compounds, lipossomal amphotericin B and miltefosine. Recent studies suggest that inhibition of trypanothione reductase (TR) could be a specific target in the development of new drugs, because it is essential and exclusive to trypanosomes. Thus, this work presents the synthesis of new compounds derived from iminodibenzyl with structures related to clomipramine, a known inhibitor of TR. These compounds were conjugates of iminodibenzyl with ethylenediamine, ethanolamine and diethylenetriamine, linked by epichlorohydrin. They were obtained with yields higher than 94% and their structures were confirmed by LC-MS and infrared spectroscopy. The relative affinity for copper of the new chelators was assessed by the recovery of calcein fluorescence, which showed that dado-dien has the highest affinity for Cu(II) among the new ligands. Metal complexes were synthesized by addition of copper(II) sulphate and studied by ultraviolet-visible spectroscopy, showing that the stoichiometries were [Cu(dadoea)]2+, [Cu(dado-en)2]2+ and [Cu(dado-dien)2]2+. Lipophilicity was assessed by computational methods, indicating that the complexes were all very lipophilic, with logP decreasing in the following order: [Cu(dado-en)2]2+ > [Cu(dado-dien)2]2+ > [Cu(dado-ea)]2+. Pro-oxidant activity assays by oxidation of DHR fluorimetric probe showed that [Cu(dado-ea)]2+ has the highest rate of oxidation, independent of hydrogen peroxide concentration, reaching its highest value when at ~ 10 &#181;M. Finally, the compounds were tested for citotoxicity to L. amazonensis promastigotes and RAW 264,7 macrophages. When the protozoa was exposed to varying concentrations of the compounds, it was observed that chelators ea, en and dien had the lowest values of IC50 (< 3 &#181;M). but they are too citotoxic to be used as drugs. Among the synthesized chelators, only dado-en presented a result in a pharmaceutically interesting range (IC50 19.9 ± 2.2 &#181;M). Against RAW 264,7 macrophages dado-en IC50 > 50 &#181;M. Complexation to copper did not enhance the citotoxicity of the compounds. Overall, the results in this study indicate a potential use of dado-en in combating leishmaniasis.

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-23T12:48:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Quinalia_MarianaBeatriz_M.pdf: 3702329 bytes, checksum: 7ed3bbb46f028abad9a9d677dbda482d (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Processos de alto cisalhamento têm sido utilizados para redução e homogeneização da distribuição de tamanhos de lipossomas em sua produção escalonável. No entanto, a aplicação do cisalhamento pode modificar estruturalmente essas nanopartículas, influenciando a incorporação de fármacos hidrofóbicos. Neste estudo, a chalcona sintética 3-nitro-2-hidroxi- 4,6-dimetoxichalcona (CH8), fármaco altamente hidrofóbico indicado para tratamento de leishmaniose cutânea, foi incorporada em lipossomas convencionais produzidos por processos escalonáveis de alto cisalhamento. Os lipossomas foram compostos por fosfatidilcolina de ovo e produzidos por injeção de etanol. Foram utilizados agitador mecânico com impelidor Cowles, Ultra Turrax® e microfluidizador para reduzir e homogeneizar o tamanho das partículas. A influência da taxa de cisalhamento foi controlada pelo método de Bangham seguido por extrusão em membranas. Espectros de espalhamento de raios-X a baixo ângulo mostraram que o cisalhamento leva a uma redução na distância interlamelar dos lipossomas, quando comparados ao controle. A distância interlamelar não variou com a intensidade do cisalhamento na faixa de agitação obtida com o impelidor Cowles, mas diminuiu com o aumento do cisalhamento provocado pelo Ultra Turrax®. A constante elástica, relacionada com a rigidez da bicamada e dependente da estrutura dos lipossomas, aumentou proporcionalmente com a taxa de cisalhamento para os dois agitadores. O cisalhamento também diminuiu o diâmetro médio dos lipossomas e a distribuição de tamanhos. Inicialmente, CH8 foi incorporada em lipossomas pré-formados. Os resultados mostraram que a expulsão e precipitação do fármaco incorporado foram proporcionais à intensidade do cisalhamento aplicado. Essa limitação foi contornada pela incorporação de uma baixa concentração de CH8 durante a formação dos lipossomas. A taxa de cisalhamento produzida pelo impelidor Cowles favoreceu a elasticidade da bicamada lipossomal, proporcionando alta eficiência de incorporação e capacidade de carregamento da CH8. Assim, a elasticidade da bicamada é fator determinante para a capacidade de incorporação de fármacos hidrofóbicos em lipossomas. Estas descobertas constituem uma melhoria nos processos de alto cisalhamento utilizados para carreamento de CH8 e contribuem para o desenvolvimento de formas farmacêuticas mais eficazes para o tratamento de leishmaniose cutânea / Abstract: High shear processes have been used to reduce the size and homogenize the size distribution of liposomes in their scalable production. However, high shear rates modify the liposome structure which may affect the loading of hydrophobic drugs. In this study, synthetic chalcone 3-nitro-2-hydroxy-4,6-dimethoxychalcone (CH8), a highly hydrophobic drug indicated to treat cutaneous leishmaniasis, was incorporated in conventional liposomes produced by scalable high shear processes. Liposomes were composed by egg phosphatidylcholine and produced by ethanol injection. Cowles impeller, Ultra Turrax® stirrers and microchannel microfluidizer were used to reduce and homogenize the size of the liposomes. The shear rate was controlled by Bangham's method followed by membrane extrusion. Small angle X-ray scattering spectra showed that the shearing reduced the interlamellar distance of the liposomes compared to the control. The interlamellar distance did not change with the shearing intensity in the range of Cowles stirring, but it decreased for higher shearing provided by the Ultra Turrax®. The elastic constant, which is related to the stiffness and depends on the structure of the liposomes, increased with increasing shearing intensity for both stirrers. The shearing also reduced the mean diameter of the liposomes and the size distributions. Initially, CH8 was incorporated into pre-formed liposomes. The results showed the expulsion and precipitation of loaded CH8 was proportional to the intensity of the applied shear rate. This limitation was circumvented by incorporating a low concentration of CH8 (0.2 mol/m³) during the formation of liposomes. The shear rate provided by the Cowles stirrer favored the elasticity of the bilayer and yielded high incorporation efficiency and CH8-loading. Therefore, the elasticity of the bilayer is a determining factor for the loading of hydrophobic drugs in liposomes. These findings constitute an improvement in the high shear process used to load CH8 and to the development of most effective pharmaceutical forms for the treatment of cutaneous leishmaniasis / Mestrado / Engenharia Química / Mestra em Engenharia Química

Orientador: Sérgio de Albuquerque / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T09:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mamede_KarinaPontin_D.pdf: 5876498 bytes, checksum: 9b5c5457f2756a9ea58558ebd4bc90d2 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Segundo estimativas da Organização Mundial de Saúde, a prevalência das diferentes formas de leishmaniose (tegumentar e visceral) ultrapassou 12 milhões de casos. A leishmaniose constitui um importante problema de saúde pública especialmente na América Latina e Central, África e esporadicamente na Europa e América do Norte. No Brasil, a leishmaniose cutânea é causada principalmente por Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) amazonensis, a mucocutânea por Leishmania (Viannia) braziliensis e a visceral por Leishmania (Leishmania) chagasi. O principal tratamento das infecções causadas por esse parasito é baseado principalmente no uso de antimoniais pentavalentes que, apesar da relativa eficácia, essas drogas são altamente tóxicas, provocando efeitos colaterais graves, além de determinar certa resistência parasitária. Diante disso, faz-se necessário o estudo de novas drogas eficazes para o tratamento da leishmaniose com menos efeitos colaterais. Objetivou-se com o presente trabalho avaliar a eficácia de diversos tipos de Bioterápicos homeopáticos nas escalas Centesimal (CH) e Decimal (DH), utilizando diferentes processos de preparação, com o intuito de proporcionar uma melhor eficácia no tratamento a leishmaniose, com menores taxas de efeitos colaterais. Para tal, foram utilizados Mus musculus, machos, infectados experimentalmente com 2,0x 104 formas promastigotas de L. (V) braziliensis. Os animais foram divididos em: grupo controle positivo, tratados com Glucantime; controle negativo, tratados com solução fisiológica; grupos infectados e não infectados tratados com o Bioterápico 1 (obtidos por formas promastigotas inativados pelo método do ultra-som), Bioterápico 2 (obtidos de formas amastigotas inativados por álcool 70%), Bioterápico 3 (obtidos por formas promastigotas inativados por álcool 70%), Bioterápico 4 (obtidos de formas amastigotas mais sangue de camundongos infectados) e Bioterápico 5 (obtidos de formas amastigotas mais sangue de animais infectados e mix homeopático. Os Bioterápicos 2, 3 e 4 foram preparados nas escalas centesimal e decimal. O tratamento ocorreu por um período de 60 dias, com exceção do controle positivo que foi administrado conforme o padrão terapêutico do medicamento. Após o tratamento, realizou-se provas hematológicas em todos os animais, a fim de verificar possíveis efeitos dos Bioterápicos em relação ao desenvolvimento de suas células sanguíneas. Os resultados demonstraram que os animais tratados com o Bioterápico 2 na escala decimal (DH) apresentaram uma maior redução na lesão leishmaniótica em relação aos outros grupos, porém não o suficiente para alcançar a cura parasitológica. Em relação às provas hematológicas, os resultados mais significativos observados foram aumento de monócitos nos grupos infectados e tratados com os Bioterápicos, aumento do número de macrófagos, principalmente para os grupos tratados com os Bioterápicos 2 e 3 na escala decimal, o que leva a pensar em uma possível estimulação do sistema imunológico pelos Bioterápicos utilizados / Abstract: According to the last estimative of the Wold Health Organization, the prevalence of the distinct forms of leishmaniosis (tegumentar and visceral) exceeded 12 million people. Leishmaniosis is considered an important health problem in Central and south America, Africa ·., and seldom in Europe and North America. In Brazil, cutaneous leishmaniosis is caused mainly by Leishmania (Viannia) braziliensis and Leishmania (Leishmania) amazonens1s, the mucocutaneous by Leishmania (Viannia) braziliensis and the visceral by Leishmania (Leishmania) chagasi. The main clinical treatment for these infections is based in the use of pentavalente antimonials, which presents a partial efficacy, being extremely toxic and triggering serious side effects, besides the fact of causing parasitic resistance to drug. So the use of alternative drugs with less collateral side effects for the treatment of leishmaniosis has been the goal of several researchers. This work has as objectives to evaluate the effectiveness of homeopathic biotherapics in the Centesimal (CH) and Decimal (DH) scales, using different processes of manufacturing in the attempt to induce a better efficiency for leishmaniosis. For this purpose it was used male Mus musculus experimentally infected with 2,0 x 104 promastigote forms of L. braziliensis. Animals were divided in groups: positive control group, Glucantine treated animals, negative control, treated with saline solution; infected and uninfected animals treated with Biotherapic 1 (manufactured using promastigote forms inactivated by ultra-sound). Biotherapic 2 (manufactured using promastigote forms inactivated by ultra-sound), Biotherapic 2 (manufactured using amastigote forms inactivate with alcohol 70%), Biotherapic 3 (manufactured using promastigote forms inactivated with alcohol 70%), Biotherapic 4 (manufactured from amastigote forms added with blood of infected mice) and Biothepapic 5 (manufactured from amastigote forms added with blood infected animals and homeopathic mix). The biotherapics 2, 3 e 4 were prepared in the centesimal and decimal scales. Treatment was applied for a period of 60 days, with exception of the positive control, which was administered according to the directions of the drug. After fmished the therapeutic treatment, hemogram of all animals was done in order to verify possible harmfull effects on the blood red and white cells. Our data revealed that treated with biotherapic 2 in the decimal (DH) scale displayed a more effective reduction in the leishmaniotic lesion as compared to other groups, although not sufficient to induce the parasitological cure. Concerning to the hemogram, a monocytosis was observed for infected animals treated with distinct biothepapics. It was also found enhanced number of macrophages mainly for groups treated with Biotherapics 2 and 3 in the decimal scale. These data points in the direction of a possible stimulation of the host's immune response, triggered by these biotherapics / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Natural products have, historically, played an important role in drug discovery. Nevertheless, drug resistance, pathogen evolution, and global climate change threaten human health and nearly all current anti-infective treatments on the market today. It is undeniable that new drug discovery efforts are needed with increasing urgency. Bolstered by a rich history of discovering treatments in the world around us, natural products chemists continue to look to the environment with increasing understanding and emerging technologies that allow efficient, effective isolation of new chemical entities. This thesis will describe one such endeavor. Focusing on fungal natural products, herein is described the isolation and structure elucidation of new, bio-active natural products. Further, the development and implementation of a large fungal screening program will be discussed, the results of which stand to advance microbial drug discovery in the Baker lab for years to come.

Visceral leishmaniasis (VL) causes fatal life-threatening disease, if left untreated. The current drugs have various limitations; hence, natural products from medicinal plants are being focused in search of new drugs to treat leishmaniasis. The aim of the present study was to evaluate the antileishmanial and immunomodulatory activities of F5 and F6 alcoholic fractions from Withania somnifera leaves and purified withaferin-A in Leishmania donovani-infected peritoneal macrophages and BALB/c mice. We observed that F5 (15 mu g/mL), F6 (10 mu g/mL), and withaferin-A (1.5 mu M) reduce amastigote count in peritoneal macrophages and induce reactive oxygen species and significant decrease in IL-10 mRNA expression compared to control upon treatment. Subsequently, in vivo study mice were treated with F5 (25 and 50 mg/kg b.wt.), F6 (25 and 50 mg/kg b.wt.) orally, and withaferin-A (2 mg/kg b.wt.) intraperitoneally for 10 consecutive days and a drastic reduction in parasite burden in both spleen and liver were observed. The treatment resulted in the reduction in IL-10, IL-4, and TGF-beta mRNA expression and a significant increase in IFN-gamma /IL-10 expression ratio in the treated group compared to control. The humoral response of these alcoholic fractions and withaferin-A shows increased IgG2a levels when compared with IgG1 in treated mice. Taken together, our result concludes that withanolides in alcoholic fractions demonstrate a potent antileishmanial and immunomodulatory activities in experimental VL.

Leishmania major (L. major) is an intra-macrophage protozoan parasite which differentiates from a promastigote to an amastigote upon transmission from its insect vector at 25°C to its mammalian host at 37°C. This temperature shift occurs in the same range as that used to elicit the heat shock response in prokaryotes and higher eukaryotes in which the induction of genes encoding heat shock proteins is seen. Ubiquitin is a heat inducible protein and one of the most conserved eukaryotic proteins known. Genomic libraries made from major DNA were initially screened with the ubiquitin gene from yeast. DNA sequence analyses of positive clones revealed at least 5 ubiquitin coding elements arranged head to tail without intervening sequences. The predicted protein sequence showed that ubiquitin in Leishmania differs from that of yeast and barley at 5 out of 76 amino acid positions and from that of human at only 2 positions. Further characterization revealed another ubiquitin encoding locus believed to carry only one ubiquitin encoding element. Comparisons of ubiquitin mRNA levels from L. major grown at 26°C, 37°C, and 42°C suggest that ubiquitin gene expression in these particular parasites is constitutive and that prolonged exposure at a non-lethal temperature results in a reduction of ubiquitin-specific mRNA. However, a direct correlation between parasite differentiation and ubiquitin gene expression was not defined as it could not be determined whether the described experimental conditions actually established differentiated states of L. major. / Medicine, Faculty of / Medical Genetics, Department of / Graduate

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-14T09:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_BeatrizZanchetta_M.pdf: 8346831 bytes, checksum: e0ef805cafa3599b49c6d357c8849853 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Atualmente, os lipossomas elásticos têm se destacado em relação aos lipossomas convencionais (LC), pela capacidade de atingir as camadas mais profundas da pele. Neste trabalho, lipossomas elásticos foram preparados e caracterizados quanto às suas propriedades físico-químicas, de permeação in vitro e ex vivo, e aplicados ao tratamento tópico da leishmaniose cutânea. Estes lipossomas foram compostos de lecitina de ovo, e tiveram a sua superfície modificada pela incorporação do tensoativo PEG:8L, formando os lipossomas peguilados (LP). O fármaco encapsulado foi uma chálcona sintética nitrogenada (CH8), que vem se destacando como substância antiprotozoária e apresenta dificuldade de permeação através da pele. Os resultados obtidos mostram que o PEG-8L é incorporado na bicamada lipídica dos LC, produzindo maior fluidez e elasticidade. A incorporação do PEG-8L também modifica a tensão superficial e o potencial zeta dos LC. A encapsulação da CH8 foi verificada em ambos os casos (LC e LP), com modificações na morfologia, diâmetro médio, tensão superficial e temperatura de transição de fase em relação aos LC vazios. Os estudos de permeação em membranas sintéticas de nanoporos (in vitro) mostraram que os LP possuem maior capacidade de permeação que os LC, e que a CH8 produz elasticidade aos LC aumentando sua capacidade de permeação em relação aos LP contendo CH8. Os estudos de permeação em pele de orelha de porco (ex vivo) mostraram que a CH8, em ambos os tipos de lipossomas, foi capaz de permear as camadas da pele e atingir a derme. Os resultados in vivo no tratamento da leishmaniose em camundongos mostraram que as formulações lipossomais foram mais eficientes que a CH8 livre, destacando-se a eficácia da CH8 em LC, cuja ação foi semelhante à aplicação da CH8 livre intralesional. Os resultados obtidos mostram o desenvolvimento tecnológico da preparação de LC e LP contendo CH8, e contribuem para o tratamento mais eficaz da leishmaniose cutânea. / Abstract: Nowadays, elastic liposome (EL), has gained attention when compared with conventional liposome (CL), by its capacity of reach the skin's deepest layers. In this work, elastic liposome were prepared and characterized by its physic-chemical properties, in vivo and ex vivo permeation, and its application for cutaneous leishimania topical treatment. The liposome was composed by egg lecithin, and had it surface modified by the incorporation of PEG-8L tensoactive, forming PEGylated liposome (PL). The encapsulated drug was a synthetic nitrogened chalcone (CH8), which has aroused as anti-protozoa substance and presents difficult permeation through the skin. Results obtained shows that PEG-8L was incorporated on LC's lipid bilayer, producing enhanced elasticity and fluidity. PEG- 8L incorporation also modifies the superficial tension and zeta's potencial of the CL. CH8's encapsulation was observed in both cases, presenting modification at morphology, mean diameter, superficial tension and phase transition's temperature when related with empty CL. The permeation studies in synthetic nanopores' membranes (in vitro) showed that PL has higher permeation capacity than CLf and CH8 produced some elasticity to CL increasing its permeation capacity even when related to PL containing CH8. The pig's ear skin permeation studies (ex vivo) showed that CH8 in both liposome types was capable of permeate the skin layers, reaching the dermis. Mice leishimania treatment in vivo results showed that the liposomal formulation was more efficient that free CH8, underling CH8's efficiency in CL, in which the action was similar to free CH8 intra-wound application. Results showed the technological development of CL and PL containing CH8 that contribute to a more efficiency treatment of coetaneous leishmania. / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientadores: Yuji Takahata, Rogerio Custodio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-14T14:03:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_KesleyMoraesGodinhode_D.pdf: 5766531 bytes, checksum: 5d60e17b9a5062a054d9bb7de66054f4 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O objeto de estudo desta tese é a forma mais severa e letal de Leishmaniose: a Leishmaniose Visceral, LV, cujo principal agente etiológico é a espécie Leishmania donovani. O objetivo deste trabalho é o desenvolvimento de modelos Quantitativos das Relações Estrutura-Atividade para duas séries de compostos com atividade antileishmaniose contra formas amastigotas de Leishmania donovani. A primeira série envolve vinte e um análogos de nucleosídeos pirazolo-pirimidínicos e a segunda série compreende oito antifúngicos. Para garantir a robustez dos modelos, além dos compostos que compõem as respectivas séries, foram selecionadas moléculas com conhecida atividade contra LV para compor um conjunto de teste e avaliar a capacidade de previsão dos respectivos modelos. Para a série dos nucleosídeos foram desenvolvidos modelos de regressão logística e árvore de classificação. Em ambas as abordagens os descritores Mor26v e o GAP(HOMO, HOMO-1) se mostraram relevantes para a explicação da atividade leishmanicida destes compostos. O modelo de regressão logística atingiu 90,5% para acurácia de classificação para o conjunto de trabalho e 58% para o conjunto de teste após a análise do domínio de aplicabilidade do modelo. O modelo para árvore de classificação alcançou 95% para acurácia de classificação para o conjunto de trabalho e 83% para o conjunto de teste. Para a série dos antifúngicos foi utilizado um modelo de regressão linear múltipla onde a energia eletrônica e a área da superfície polar se mostraram importantes para a atividade leishmanicida da série. Os valores previstos exibem 98% de correlação com os valores experimentais. Os valores encontrados para o conjunto de teste também estão de acordo com a literatura. Finalmente, novos compostos foram propostos para síntese e avaliação da atividade leishmanicida. / Abstract: The object of study of this thesis is the most severe and lethal form of leishmaniasis: visceral leishmaniasis, LV, whose main etiological agent is the species Leishmania donovani. The goal of this work is the development of Quantitative Structure-Activity Relationship models for two series of compounds presenting antileishmanial activity against amastigotes of Leishmania donovani. The first series includes twenty-one analogues of pyrazolo-pyrimidine nucleosides and the second series comprises eight antifungals. To ensure the robustness of the models, in addition to the compounds that make up their series, molecules with known activity against LV were selected to compose a testset and evaluate the predictive power of their models. For the series of nucleosides logistic regression models and tree classification were developed. In both approaches, the Mor26v and GAP(HOMO, HOMO-1) descriptors were relevant to explain the leishmanicidal activity of these compounds. The logistic regression model reached 90.5% for classification accuracy to the workingset and 58% for testset after analysis of the domain of applicability of the model. The classification tree model reached 95% for classification accuracy of the workingset and 86% for the testset. A multiple linear regression model was applied to the series of antifungal agents. The electron energy and polar surface area were important for the leishmanicidal activity of this series. The predicted values showed 98% of correlation with the experimental values. The values found for the testset are also in agreement with the literature. Finally, new compounds were proposed for synthesis and evaluation of leishmanicidal activity. / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências