Resumo: No Brasil existe um grande número de pessoas que apresentam insuficiência renal crônica e são submetidos a sessões de diálise. A hemodiálise promove a retirada das substâncias tóxicas, água e sais minerais do organismo através de uma máquina, em clínicas especializadas. A contaminação pelos micro-organismos e endotoxinas nos fluídos de diálise é um grave problema em terapia por hemodiálise e pode ser causada pela água usada para preparação do dialisato. A legislação que regulamenta a qualidade microbiológica da água destinada ao processo de diálise no Brasil é a RDC 154 de 2004 da Agencia Nacional de Vigilância Sanitária. O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade microbiológica da água dos sistemas de diálise de clínicas de Curitiba (PR). Foram realizadas análises de contagem de bactérias eterotróficas por plaqueamento em profundidade (Pour Plate), contagem de coliformes totais e contagem de Pseudomonas aeruginosa pelo método do Número mais provável (NMP/100 mL), conforme descrito em APHA; AWWA; WPCF (2005), concentração de endotoxinas bacterianas pelo método gel-clot (LAL) conforme USP 31 (2008) e a contagem de fungos seguiram as técnicas de plaqueamento em superfície e iltração por membrana. Os fungos isolados foram identificados por macro e micromorfologia e, os fungos dematiáceos foram identificados por sequenciamento de regiões ITS do rDNA. Verificou-se que na contagem de bactérias heterotróficas 95% das amostras analisadas estavam dentro dos limites estabelecidos; para contagem de coliformes totais 100% das amostras estiveram de acordo com a legislação; para ndotoxina bacteriana 85% da água analisada estavam dentro dos padrões; Pseudomonas aeruginosa esteve presente em 4% das amostras. Quanto à presença de fungos 26% das amostras apresentaram eveduras e 58% fungos filamentosos. Foram identificados os gêneros Penicillium spp., Aspergillus spp., Trichoderma spp., Fusarium spp., Acremonium spp., Beauveria spp., Cladosporium spp., Exophiala spp. eRinocladiella spp.. Os fungos dematiáceos estavam presentes em 46% das amostras analisadas, onde 12 isolados da água tratada para diálise e dialisato foram identificados por sequenciamento, sendo encontrados Exophiala pisciphila, Cladophialophora sp., Cladosporium cladosporoides, Rinocladiella atrovirens e Pseudocladosporium sp.. A presença de fungos matíaceos e endotoxinas pode apresentar um potencial patogênico à saúde já debilitada dos pacientes.

Orientador : Prof. Dr. Marcel Iván Ramírez Araya / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 31/01/2017 / Inclui referências : f. 78-87 / Resumo: O protozoário Trypanosoma cruzi, é o agente etiológico da doença de Chagas. Considerada como uma doença tropical negligenciada, esta doença acomete milhões de pessoas do mundo e atinge também mamíferos silvestres e domésticos. Para produzir uma infecção o parasito T. cruzi precisa evadir o sistema imune inato do hospedeiro. O sistema imune inato é a primeira linha de defesa contra patógenos; e o sistema complemento representa o principal mecanismo da defesa inata. O sistema complemento é formado por um conjunto de proteínas que são ativadas em cascata e, que culmina na formação de um poro na membrana do patógeno, provocando a sua lise. Todavia, muitos organismos patogênicos como o T. cruzi têm desenvolvido vários mecanismos para escapar o ataque do sistema complemento afin de progredir no seu ciclo de vida, e portanto estabelecer a infecção. Recentemente, foi descrito um novo mecanismo de evasão empregado por patógenos, que é a liberação de microvesículas. Microvesículas são estruturas bicamadas lipídicas complexas (0.1-1 ?m), oriundo da brotamento e fissão da membrana plasmática e que transportam várias moléculas derivadas das células de origem tais como proteínas e ácidos nucleicos. Nosso grupo de pesquisa recentemente descreveu alguns aspectos das características e papel das microvesículas nos mecanismos de evasão do sistema imune inata e durante os eventos de infecção, utilizando como modelo as microvesículas liberadas durante a interação de apenas uma cepa de T. cruzi com células hospedeiras. Desse modo, o presente trabalho teve como objetivo analisar microvesiculação em diferentes cepas de T. cruzi durante a interação com células hospedeiras e availar seu efeito. Apresentamos evidências de que a liberação de microvesículas é induzida durante a interação entre tripomastigotas metacíclicos de diferentes cepas de T. cruzi, G (TcI) e Y (TcII), e células sanguíneas (monócitos) e que existem diferenças na produção de microvesículas entre as diferentes cepas. Os nossos resultados também demostram o envolvimento das microvesículas isoladas nos mecanismos de resistência de T. cruzi à lise mediada pelo complemento e os mecanismos de invasão. A adição de microvesículas a 6,25% de soro humano normal aumentou a resistência dos parasitos da cepa Y à lise mediada por complemento de 50% para 80%; este fenômeno foi mais pronunciado em parasitos da cepa G, pois este aumento quase dobrou. Em termos do papel das microvesículas na infectividade de parasito, verificamos que as microvesículas induziram um aumento de invasão celular pelo parasito. Na presença de microvesículas, o número de parasitos da cepa Y invadindo células mamíferas aumentou por aproximadamente 50%, entretanto mais uma vez este fenômeno foi mais evidente para parasitos da cepa G, o número de parasitos que penetraram as células mamíferas duplicou. Curiosamente, foi observado que o papel das microvesículas na resistência à lise do complemento e na invasão é de classe específica, uma vez que as microvesículas de uma classe não tinha efeito sobre os parasitos de outra classe. Isto indica que as cepas têm mecanismos de inibição independentes e que os componentes de microvesículas poderiam ser diferentes. Finalmente foi comprovado que as microvesículas carreiam proteínas parasitárias envolvidas na interação parasitohospedeiro e que soro de pacientes chagásicos possuem anticorpos que reagem com componentes das microvesículas. Isto fornece evidências de que as microvesículas poderiam ser utilizadas por T. cruzi para transferir fatores de virulência a células hospedeiras e do potencial das mesmas como biomarcador para o diagnóstico da doença. Com esse trabalho foi possível demostrar novos aspectos da relevância de microvesículas durante a interação de diferentes cepas de T. cruzi com células hospedeiras. Palavras-chave: microvesículas. sistema complemento. invasão. / Abstract: The protozoan parasite Trypanosoma cruzi is the etiologic agent of Chagas disease. Considered a neglected tropical disease, this disease affects millions of people worldwide as well as wild and domestic mammals. In order to produce an infection, the T. cruzi parasite has to evade the host's innate immune system. The innate immune system is the first line of defense against pathogens; and the complement system represents the main mechanism of innate defense. The complement system is composed of a set of proteins that are activated in cascade, culminating in the formation of a pore in the membrane of the pathogen, resulting in its lysis. However, many pathogenic organisms such as T. cruzi have developed several mechanisms to escape the attack of the complement system, in order to progress in their life cycle, and thus establish an infection. Recently, a new evasion mechanism used by pathogens has been described, this is, the release of microvesicles. Microvesicles are complex lipid bilayer structures (0.1-1 ?m), originating from the outward blebbing and fission of plasma membrane, and which carries molecules derived from the parent cell such as proteins and nucleic acids. Our research group recently described some aspects of the characteristics and role of microvesicles as a mechanism of evasion of the innate immune system and during the infection process, using as model, the microvesicles released during the interaction of only one strain of T. cruzi with host cells. Accordingly, the objective of the present work was to analyse microvesiculation during interaction of different T. cruzi strains with host cells and to evaluate their effect. We present evidence that microvesicle release is induced during the interaction between metacyclic trypomastigotes from different T. cruzi strains, G (TcI) and Y (TcII), and blood cells (monocytes). Our results also demonstrate the involvement of microvesicles, isolated from T. cruzi and host cells interaction, in parasite resistance to complementmediated lysis and invasion mechanisms. Addition of microvesicles to 6,25% normal human serum increased parasite resistence to complement-mediated lysis from 50% to 80% in parasites of Y strain; this inhibition was more pronounced in G parasites since this increase was almost doubled. In terms of the role of microvesicles in parasite infectivity, we verified that the microvesicles induced an increase in cellular invasion by the parasite. In the presence of microvesicles, the number of parasites of the Y strain invading mammalian cells increased by approximately 50%, however once again this phenomenon was more evident for parasites of G strain, the number of parasites that penetrated the mammalian cells duplicated. Interestingly, it was observed that the role of microvesicles in resistance to complement lysis and invasion is class-specific, since microvesicles of one class had no effect on the parasites of the other class. This indicates that the strains have independent inhibition mechanisms and that the components of microvesicles could be different. Lastly, it was demonstrated that microvesicles carry parasite proteins involved in the parasite-host cell interaction and that sera from chagasic patients contain antibodies that react with microvesicular components. This provides evidence that microvesicles could be used by T. cruzi to transfer virulence factors to host cells and their potential application as a biomarker for the diagnosis of this disease. With this work, it was possible to demonstrate new aspects of the relevance of microvesicles released during the interaction of different T. cruzi strains with host cells. Key words: microvesicles. complement system. invasion.

Orientadora : Profª Drª Chirlei Glienke / Coorientadora : Profª Drª Daiani C. Savi / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 27/04/2017 / Inclui referências : f. 71-77 / Resumo: O Pantanal é uma planície de inundação periódica detentora de uma biodiversidade singular, e possui diversas plantas com conhecimento tradicional associado às suas propriedades medicinais. Entre estas, a planta Vochysia divergens, conhecida como Cambará, é utilizada em tratamentos de resfriados, tosse, febre e pneumonia, e se mostra promissora para a prospecção de microrganismos. Dos quais os endófitos isolados de plantas medicinais têm sido associados a uma ampla gama de metabólitos secundários com atividade biológica. Neste contexto, o presente trabalho objetivou o isolamento e a bioprospecção de actinomicetos endofíticos da planta medicinal V. divergens. Um total de 10 isolados obtidos foram identificados por meio do sequenciamento parcial do gene 16S rRNA e análise morfológica, como Aeromicrobium ponti, Williamsia serinedens, Streptomyces thermocarboxydus, Microbacterium sp., Sphaerisporangium sp., Micrococcus sp., Microbispora sp. e Actinomadura sp.. Afim de selecionar a melhor condição de cultivo para produção de metabólitos secundários, foram avaliadas duas condições diferentes de meio de cultura e temperatura. Todas as condições utilizadas resultaram na produção de metabólitos com atividade biológica, porém os melhores resultados foram no cultivo em caldo SG (Soja e glucose) a 36°C. Nestas condições, o extrato a partir da fermentação da linhagem Aeromicrobium ponti (LGMB491) apresentou atividade contra Staphylococcus aureus sensível à meticilina (MSSA) e S. aureus resistente à meticilina (MRSA), com CIM de 0,02mg/mL e 0,04mg/mL, respectivamente. O extrato oriundo da linhagem Microbacterium sp. (LGMB471) apresentou inibição total do crescimento micelial do fitopatógeno Phyllosticta citricarpa com CIM de 0,16mg/mL. Neste estudo, o conhecimento da comunidade endofítica da planta medicinal V. divergens foi ampliado por meio do isolamento de novos gêneros associados a esta planta, alguns deles isolados pela primeira vez como endófitos. Palavras chaves: Vochysia divergens. Pantanal. Actinomicetos endofíticos. MRSA. / Abstract: The Pantanal is a periodic flood plain with a unique biodiversity, and has several plants with traditional knowledge associated with its medicinal properties. The plant Vochysia divergens, known as Cambará, is used for treatment of colds, cough, fever and pneumonia, and is very promising for microorganisms' prospection. Endophytic microorganisms isolated from medicinal plants have been studied due to the production of a wide range of secondary metabolites with biological activity. In this context, the present work aimed at the isolation and bioprospection of endophytic actinomycetes from medicinal plant V. divergens. Ten strains of endophytic actinomycetes were identified by partial 16S rRNA gene sequencing and morphological analysis, as belonging to Aeromicrobium ponti, Williamsia serinedens, Streptomyces thermocarboxydus, Microbacterium sp., Sphaerisporangium sp., Micrococcus sp., Microbispora sp. and Actinomadura sp. In order to select the best culture conditions for production of secondary metabolites, two different culture media and two temperatures were evaluated. All the conditions used resulted in the production of metabolites with biological activity, but the best conditions are cultivation in SG broth at 36°C. In these conditions, the extract from the fermentation of Aeromicrobium ponti (LGMB491) showed high activity against methicillin-sensitive Staphylococcus aureus (MSSA) and methicillin-resistant S. aureus (MRSA), with MIC of 0.02mg/mL and 0.04mg/mL, respectively. The extract from the Microbacterium sp. (LGMB471) showed total inhibition of the mycelial growth of phytopathogen Phyllosticta citricarpa with MIC of 0.16mg/mL. In this study, we broadened the knowledge about the endophytic community of the medicinal plant V. divergens through the isolation of rare actinomycetes, some of them isolated for the first time as endophytes. Key-words: Vochysia divergens. Pantanal. Endophitics actinomycetes. MRSA.

O Bacillus cereus é um microrganismo com ampla distribuição na natureza estando presente no solo, poeira e água, sendo caracterizado pela formação de esporos, possui potencial patogênico e deteriorante. Em condições favoráveis, esse microrganismo produz enzimas que confere características sensoriais indesejáveis e produz toxinas numa grande variedade de alimentos, principalmente em cereais e derivados. Estas toxinas produzidas são responsáveis pela ocorrência de intoxicação alimentar. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a presença de B. cereus de cereais destinados a produção de alimentos farináceos, realizar o isolamento destas bactérias quando presentes nas amostras testadas e avaliar a presença de genes relacionados aos fatores de virulência nestes isolados. Para tanto foram avaliadas 130 amostras de cereais obtidos de uma empresa processadora de grãos, sendo que deste total, 54 isolados apresentaram positividade para B. cereus. Foram realizados os testes bioquímicos de motilidade, hemolisina, decomposição da tirosina, redução do nitrato a nitrito, crescimento rizóide e corpúsculos de inclusão cristalina, para confirmação dos isolados. Dos 54 isolados, 5 foram reclassificados como Bacillus thuringiensis e 2 como Bacillus megaterium. Quanto a caracterização molecular, todos os isolados foram submetidos a análise de PCR por BOX, REP e ERIC – PCR, visto que nenhuma das técnicas apresentou diferença significativa quanto a separação do B. cereus. Os isolados foram avaliados quanto aos fatores patogênicos para os genes Bcet, Piplc, NheB, EntB, HbA e Sph, onde o grupo do arroz foi o que apresentou maior número de genes positivos. Do total dos isolados avaliados, os genes HblA e NheB foram os que apresentaram maiores números de isolados positivos. Os dados obtidos nesse trabalho evidenciaram que os genes de patogenicidade de B. cereus estão amplamente distribuídos entre os grupos que contaminam os cereais e derivados. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-12T11:44:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Valquíria Boff Martelo Reis.pdf: 1975642 bytes, checksum: 007f34e5e4fa26dbe52638a46e5918dd (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-12T11:44:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Valquíria Boff Martelo Reis.pdf: 1975642 bytes, checksum: 007f34e5e4fa26dbe52638a46e5918dd (MD5) / The Bacillus cereus is an organism widely distributed in nature and is present in soil, dust and water. This bacterium is characterized by spores formation and food deteriorating and pathogenic potential. Under favorable conditions, this microorganism produces enzymes that confer undesirable sensory characteristics and toxins in a wide variety of foods, mainly in cereals and derivatives. These toxins produced are responsible for the occurrence of food poisoning. This study aims to evaluate the presence and isolate of B. cereus on grains for the production of food starches, as well the evaluate the presence of genes related to virulence factors on these isolates. Therefore, it was evaluated 130 samples obtained from a cereal grain processing company, 54 isolates were positive for B. cereus. Biochemical tests were realized for motility, haemolysin, tyrosine decomposition, reduction of nitrate to nitrite, type of growth and corpuscles crystalline inclusion. Seven samples of 54 isolates were reclassified as 5 B. thuringiensis and 2 B. megaterium. As the molecular characterization, all isolates were analyzed by PCR BOX, REP and ERIC - PCR, whereas none of the techniques presented significant difference separating B. cereus. The isolates were also evaluated for presence of pathogenic factors genes Bcet, PIPLC, NheB, EntB, HbA and Sph, where the group from rice isolates showed the highest number of positive genes. The HblA and NheB genes were the most prevalence on the isolates. The data obtained in this study showed that genes for pathogenicity of B. cereus are widely distributed among the groups that contaminate cereals and derivatives.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-12Bitstream added on 2014-06-13T19:17:45Z : No. of bitstreams: 1 chaves_mmbc_me_botfmvz.pdf: 1213419 bytes, checksum: c6618d188eefb02feaf360154f766257 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Na égua o ambiente uterino saudável não apresenta microflora, diferente da vagina onde se sabe existir uma flora vaginal rica em microrganismos não patogênicos. Muitas bactérias da flora vaginal normal podem ser deslocadas para o interior do útero, podendo ser esta a causa principal de endometrites em éguas doadoras de embriões. A presença de Lactobacillus spp é considerada importante na flora vaginal de mulheres e tem sido pouco investigada em éguas. O presente trabalho tem como objetivo estudar a flora vaginal de éguas, doadoras de embriões, determinar os principais microrganismos presentes, relacionar os achados microbiológicos vaginais e uterinos, assim como determinar a prevalência de Lactobacillus. No experimento 1 foram utilizadas 77 éguas doadoras de embrião, 33 foram coletadas amostras vaginais e uterinas e 77 apenas vaginais. O experimento 2 contou com dois grupos (36 éguas e 10 mulheres) de swabs vaginais sendo um para cultivo e isolamento de Lactobacillus e outro para extração do DNA e PCR. As bactérias predominantes na vagina foram: Streptococcus zooepidemicus (42%), Escherichia coli (25%), Streptococcus alfa hemolítico (15%) Candida (6%), Enterobacter spp (3%), Bacillus spp (3%), Streptococcus beta hemolítico (3%) e Pseudomonas (3%).. Das 33 amostras coletadas do útero de éguas somente 39% (n=12) não apresentaram crescimento bacteriano ou fúngico. Tendo sido Streptococcus zooepidemicus o mais frequentemente encontrado (26%), seguido de Escherichia coli (15%), Candida spp (9%), Streptococcus alfa hemolítico (6%) e Enterobacter (3%). Os microrganismos isolados da vagina e que estavam concomitantemente presentes no útero de éguas foram: Streptococcus zooepidemicus (21%), Escherichia coli (12%), Candida spp (9%) e Streptococcus alfa hemolítico (6%). Em 83,3% houve concordância entre as amostras negativas na vagina e no útero (p <0,05). Em 73,7%... / Different from the vagina, were a rich microflora is present, the uterine environment is considered free of microorganisms. One possibility for the installation of endometritis in mares is the ascendent contamination from the vagina.The presence of Lactobacillus on vaginal flora is considered important in woman however there is few information on mares. The present experiment aimed to study the vaginal microflora of embryo donnor mares, to correlate the vaginal and uterine finds and also to determine the prevalence of Lactobacillus on vaginal envirioment. On experiment 1 a total of 77 mares were used and vaginal samples collected from 33 of these mares both vaginal and uterine samples were collected. On experiment 2 vaginal swabs from 36 mares and 10 women were collected for culture and isolation of Lactobacillus, DNA extration and PCR. The predominate bacteria isolated from the vagina were: Streptococcus zooepidemicus (42%), Escherichia coli (25%), Streptococcus alfa hemolítico (15%) Candida (6%), Enterobacter spp (3%), Bacillus spp (3%), Streptococcus beta hemolítico (3%) e Pseudomonas (3%). From 33 samples collected from the uterus only 39% (n= 12) did not show any microorganism on culture. Streptococcus zooepidemicus was the most frequent isolated microorganism (26%), followed by Escherichia coli (15%), Candida spp (9%), Streptococcus alfa hemolítico (6%) e Enterobacter (3%). When evaluated the microorganisms isolated from both vaginal and uterine samples Streptococcus zooepidemicus (21%), Escherichia coli (12%), Candida spp (9%) e Streptococcus alfa hemolytic (6%) were the most frequent isolated bacteria. The agreement between swabs taken from both uterus and vagina was 83.3% (p <0,05) for negative cultures and 73,7% for positive cultures (p <0,05). From 35 samples collected on group I Lactobacillus spp was isolated in only two (5,7%) eight (20%) samples showed positive ... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Vanildo Luiz Del Bianchi / Banca: Crispin Humberto Garcia-Cruz / Banca: Ranulfo Monte Alegre / Resumo: A utilização dos resíduos da agroindústria para a criação de novos produtos com valor agregado é uma ferramenta muito importante que vem merecendo destaque no país e no mundo. O Brasil é considerado um dos países que mais geram resíduos, desta forma a transformação destes compostos em novos produtos é imprescindível já que contribui para a preservação ambiental promovendo a adequada disposição dos mesmos no ambiente. Neste contexto as indústrias vinícolas têm destaque, já que o subproduto gerado por elas é de lenta decomposição e acarreta em poluição do meio ambiente. A casca e a semente da uva são responsáveis pela maior parte dos resíduos deste setor (cerca de 20 a 48%). Esta é composta por celulose (glicose), hemicelulose (xilose, arabinose) e lignina. A glicose proveniente da celulose é facilmente fermentada pela levedura Saccharomyces cerevisiae, porém a xilose da hemicelulose não é fermentada por esta levedura. O presente trabalho busca selecionar a partir da casca de uva microrganismos capazes de fermentar a xilose dos materiais lignocelulósicos em etanol contribuindo para o aumento da produção de bioetanol além de reduzir o impacto ambiental causado por estes subprodutos. Foram selecionadas três variedades de uva (Rubi, Thompson e Niagara). Alíquotas destes materiais serviram de substrato em meio liquido para o crescimento de bactérias e leveduras. Os microrganismos isolados foram testados quanto à capacidade de assimilar xilose como fonte de carbono e realizar fermentação para produção de etanol a partir deste açúcar. Duas linhagens de leveduras denominadas RL1 e RL5 (da uva Rubi) mostraram-se promissoras neste tipo de fermentação. Também foram realizados ensaios para otimizar as condições de fermentação, verificar a tolerância em níveis mais elevados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of agro-industrial residues to create new value-added products is a very important tool that is worth mentioning in the country and the world. Brazil is considered one of the countries that generate more residues, thus the transformation of these compounds into new products is essential as it contributes to environmental conservation by promoting the proper disposal of these compounds into the environment. In this context, the wine industries have highlighted, since by-product generated by them has a slow docomposition and lead to environmental pollution. The grape skin and seed are responsible for most of the residues from this sector (about 20 to 48%). The grape skin is composed of cellulose (glucose), hemicellulose (xylose, arabinose) and lignin. The glucose derived from cellulose is easily fermented by the yeast Saccharomyces cerevisiae, but xylose of hemicellulose is not fermented by this strain. This study aimed to select microorganisms of grape skins capable of fermenting xylose from lignocellulosic materials into ethanol contributing to the increase in bioethanol production and reducing the environmental impact caused by these products. Three grape varieties (Ruby, Thompson and Niagara) were selected.). Aliquots of these materials served as substrate in a liquid medium for bacteria and yeast growth. The isolated microorganisms were tested for their ability to assimilate xylose as carbon source and to carry out fermentation to ethanol production from this sugar. Two strains of yeast called RL1 and RL5 (Ruby grape) have shown promise in this type of fermentation. Additional tests were also performed to optimize the fermentation conditions and to verify the tolerance on higher levels of sugar in the wort, aerobic fermentation, to evaluate the glucose fermentation by the selected yeasts... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Crispin Humberto García-Cruz / Banca: Fernanda Maria Pagane Guereschi Ernandes / Banca: Pedro de Oliva Neto / Resumo: O uso do etanol como um combustível tem estimulado a pesquisa sobre vários aspectos do processo de fermentação. A bactéria Zymomonas mobilis possui habilidades de transformar açúcares em etanol e gás carbônico. Além disso, produz levana, polissacarídeo cuja hidrólise resulta em frutose que tem poder adoçante superior à sacarose, e pode ser utilizado na indústria alimentícia e farmacêutica. A imobilização celular tem sido cada vez mais empregada em processos fermentativos para aumentar a eficiência da fermentação e reduzir os custos associados com as trocas constantes de inóculo. O alginato é um dos suportes mais utilizados para a imobilização de células microbianas por ser de fácil utilização e apresentar uma metodologia simples e barata. O objetivo deste trabalho foi produzir etanol e levana por meio da imobilização de Zymomonas mobilis CCT 4494 em alginato, utilizando as concentrações de 5% a 30% de sacarose, pH iniciais 4,0, 5,7 e 7,0 a 30 °C e 40 °C, sem agitação. Para isto, células de Zymomonas mobilis em concentração pré-estabelecida foram adicionadas em solução de alginato de sódio 2%, e esta mistura foi gotejada em solução de cloreto de cálcio 3%, obtendo-se esferas de alginato de cálcio com 3,0 mm de diâmetro, mantidas por 30 minutos sob agitação e, adicionadas ao meio sintético de fermentação contendo as concentrações de sacarose a serem testadas e com pH inicial ajustado para cada experimento. Foram retiradas amostras a cada 24 horas durante o processo fermentativo para a determinação de crescimento celular no suporte; biomassa desprendida para o meio de fermentação; melhor tempo de incubação para a produção de etanol e levana, e pH final. As condições para produção de etanol e levana foram diferentes. A maior síntese de etanol (130,1 g/L), ocorreu na... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The using of ethanol as a fuel has stimulated research on various aspects of the fermentation process. Bacteria of the species Zymomonas mobilis are capable of turning sugars into ethanol and carbon dioxide. It also produces levan polysaccharide which hydrolysis results in fructose, having sweetness higher than sucrose, and can be used in food and pharmaceutical industries. The cell immobilization has been increasingly used in fermentation processes to improve the fermentation efficiency and reduce costs associated with the constant changes in inoculums size. The alginate is one of the most used supports for immobilization of microbial cells to be easy to use and present a methodology to use simple and inexpensive. The aim of this study was to produce ethanol and levan by immobilizing cells of Zymomonas mobilis CCT 4494 in alginate, using 5% to 30% sucrose concentrations, initial pH 4.0, 5.7, and 7.0, at 30°C and 40°C, without agitation. For this, Zymomonas mobilis cells in pre-established concentration were added to a solution of sodium alginate 2%, then this mixture was dripped into a solution of calcium chloride 3%, achieving levels of pellets of calcium alginate with 3.0 mm in diameter, kept under stirring for 30 minutes and it was added to the synthetic medium fermentation of sucrose concentrations to be tested with a initial pH value adjusted for each experiment. Samples were taken every 24 hours during the fermentation process to determine the following parameters: the cell growth on the pellets; released biomass for the fermentation medium; best incubation time for the production of ethanol and levan and final pH. The conditions for levan and ethanol production were different. The highest ethanol production (130.1 g/L), occurred at 30°C, initial pH 5.7 at a 30% sucrose concentration and 72 hours... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: As formigas da tribo Attini apresentam como hábito comum o cultivo de fungos Basidiomicetos, com os quais mantêm uma associação simbiótica permanente e obrigatória. Para proteger o ninho da infecção pelo parasita Escovopsis spp. as formigas adotaram diversos mecanismos, entre eles a associação com a actinobactéria simbionte, Pseudonocardia spp. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de actinobactérias isoladas da cutícula de formigas Attini. Na primeira parte do trabalho foi avaliada a atividade antagonista de actinobactérias isoladas de Trachymyrmex spp. sobre o parasita Escovopsis sp. e outros microfungos isolados de jardim de fungo. Admite-se que a bactéria simbionte pertença ao gênero Pseudonocardia, porém, mostramos neste trabalho que outras actinobactérias não-Pseudonocardia também estão presentes na cutícula destas formigas. Foram isoladas 38 estirpes de actinobactérias e todos apresentaram atividade inibitória sobre pelo menos uma das estirpes de Escovopsis sp. Os resultados mostraram ainda que actinobactérias não-Pseudonocardia apresentaram maior nível de inibição sobre o parasita. Contrariando a hipótese de que Pseudonocardia spp. produzem antifúngicos que atuam especificamente sobre Escovopsis spp., duas estirpes identificadas como do gênero Pseudonocardia, também apresentaram atividade sobre os microfungos. Num segundo momento, extratos das actinobactérias foram avaliados quanto à atividade antibacteriana e anti-Candida. Dentre os que apresentaram melhores resultados, o extrato do cultivo da estirpe ARTD080903-03A foi selecionado para estudos de isolamento e identificação do composto ativo. Esta estirpe foi identificada, por seqüenciamento da região 16S do rDNA, como uma possível nova espécie do gênero Streptomyces. Do extrato do meio de cultivo desta estirpe, foi isolada a antimicina rara Urauchimicina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Attini ants have a common habit of cultivating Basidiomycetes, with which they maintain a permanent and obligatory symbiotic association. To prevent nest infection by the parasite Escovopsis spp. ants have adopted several mechanisms, including the association with the symbiont actinobacteria Pseudonocardia spp. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of actinobacteria isolated from the cuticle of attini ants. Firstly, to evaluate the antagonistic activity of actinobacteria isolated from Trachymyrmex spp. on the parasite Escovopsis sp. and other microfungi isolated from fungus garden. It is assumed that the actinobacteria symbiont belongs to the genus Pseudonocardia, however, the results showed that a range of non-Pseudonocardia actinobacteria are also associated with the cuticle of these ants. All isolates showed inhibitory activity on at least one of the strains of Escovopsis sp. The results also revealed that non-Pseudonocardia had a higher level of inhibition on the parasite. Two strains of the genus Pseudonocardia, showed activity against the microfungi, contrary to the hypothesis that Pseudonocardia spp. produce antifungal metabolites that act specifically on Escovopsis sp. Secondly, extracts of the actinobacteria were screened for antibacterial and anti-Candida properties. Among those showing the best results ARTD080903-03A strain was selected for isolation and identification of active compound. This strain was identified by sequencing of 16S rDNA, as possible new specie from genus Streptomyces. From the extract of the culture medium of this strain a rare antimycin Urauchimycin A was isolated. The extract also has several compounds... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Fernando Carlos Pagnocca / Coorientador: Marta Cristina Teixeira Duarte / Banca: Lara Durães Sette / Banca: Hércules Menezes / Mestre

Orientador: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Angela Regina de Araujo / Banca: Daisy Nakamura Sato / Resumo: O problema da tuberculose no Brasil, reflete o desenvolvimento social do país, onde novas causas concorrem para o agravamento, como a epidemia de AIDS e também a multiresistência às drogas. Portanto, torna-se necessária a busca de novas alternativas terapêuticas, como a utilização de novos princípios ativos sintéticos e/ou extraídos de plantas. Em muitas partes do Brasil, existe uma rica tradição no uso de plantas medicinais para a cura de várias doenças infecciosas. Este trabalho teve como objetivo a pesquisa de metabólitos secundários bioativos de fungos endofíticos de plantas do cerrado, com atividade contra o Mycobacterium tuberculosis. Este trabalho faz parte do projeto temático "Conservação, Sustentabilidade e Uso de Plantas do Cerrado e da Mata Atlântica: Diversidade Química e Prospecção de Drogas em Potencial" dentro da linha de pesquisa "Bioprospecção em Fungos Endofíticos de Espécies Vegetais do Cerrado e da Mata Atlântica'. Neste estudo, a partir de 3 plantas do Cerrado, foram isolados 11 fungos endofíticos e destes obtidos 16 extratos brutos e 1 substância pura. A atividade anti- M. tuberculosis, foi determinada empregando o MABA, determinando a concentração inibitória mínima (CIM) de composto necessária para inibir a multiplicação de 90% das células micobacterinas. Dos 17 extratos brutos testados 3 apresentaram CIM > 250 µg/mL (17,6%), em 7 o valor de CIM foi de 250 µg/mL (41,2%), em 3 de 125 µg/mL (17,6%), em 2 de 62,5 µg/mL (11,8 %) e em outros 2 de 31,25 µg/mL (11,8%). A substância purificada, identificada como ácido pirenochaético, apresentou excelente atividade antimicobacteriana, com valor de CIM de 3,9 µg/mL. O estudo revelou atividade anti- M. tuberculosis promissora em 7 extratos brutos testados (41,2%), e na substância pura. / Abstract: The tuberculosis in Brazil shows the social development problem in the country, as there are several new causes increasing the numbers, like HIV epidemic and the drugs multi-resistance. Therefore it's necessary the research of alternative therapies as the use of new synthetic compounds and plant extracts. In most parts of Brazil, there is the tradition in the use of medical plants to the cure of various infectious diseases. The objective of this work was to research of bioactive secondary metabolites from endophytic fungi of "Cerrado" plants active against Mycobacterium tuberculosis. This work is part of the thematic project "Conservation, Sustentability and the Use of "Cerrado" Plants and from Atlantic Forest: Chemistry Diversity and Drugs Potential Prospecting" inside the research line "Bioprospection in Endophytic Fungi from Vegetable Species of "Cerrado" and Atlantic Forest". From 3 plants of "Cerrado", was isolated 11 endophytic fungi and from this, was obtained 16 crude extracts and 1 pure substance. The activity against M. tuberculosis was determined using the MABA, finding the minimal inhibitory concentration (MIC) of the drug necessary to inhibit the multiplication of 90% of bacillary growth. From 17 crude extracts tested, 3 showed MIC >250 μg/mL (17.6%), in 7, the MIC value was of 250 μg/mL (41.2%), in 3 of 125 μg/mL (17.6%), in 2 of 62.5μg/mL (11.8%) and in the last 2 was of 31.25 μg/mL (11.8%). The purified fraction, identified as pirenochaetic acid presented excellent activity against M. tuberculosis with MIC value of 3.9μg/mL. The study showed promising activity against M. tuberculosis in 7 crude extracts tested (41.2%) and at the pure substance. / Mestre

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000399343-0.pdf: 1116800 bytes, checksum: e914eb2a8671e0db3d424aa7a7225799 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Chryotherapy is the use of extremely low temperatures for tissue local destruction. Biological tissues subjected to a temperature of -20°C undergo cryogenic necrosis. It’s been successfully used as a therapeutical method in various types of oral lesions. However, there are no clinical reports about cryotherapy application in tooth. Another point is the occurrence of recurrent periapical infections, where surgical procedures are commonly needed for resolution. Thus, the aims of this research were to evaluate the effect of chryotherapy with liquid nitrogen spray on human teeth and to verify, in vitro, the effect of liquid nitrogen spray on bacteria inoculated in extracted teeth. Firstly, chryotherapy was applied in six teeth. Two 15-second applications were accomplished, and thawing was allowed to proceed within 4 minutes. The applications were performed 1mm before the apical limit and at the canal root. In the first case, the mean temperatures were -36,83°C and -38,50°C, after the first and the second freezing, respectively. In the second position, the mean temperatures were -2,66°C and 4,41°C, after first and second freezing, respectively. It’s possible to suggest that chryosurgery is able to produce lethal temperatures on human teeth. In the second part of the research, chryotherapy with liquid nitrogen was applied in human teeth contaminated with E. faecalis. Three 60-second applications were accomplished, and thawing was allowed to proceed within 4 minutes. The mean percentages of reduction of bacterium colonies was 92,00± 3,117. we might conclude that chryotherapy was effective to decrease bacterium population. / A crioterapia é uma técnica em que são utilizadas baixas temperaturas para promover necrose tecidual com finalidades terapêuticas, sendo a temperatura de -20°C considerada letal para as células. Em Odontologia seu uso é descrito no tratamento de diversas lesões, tanto em tecidos moles quanto ósseos. Não existem, porém, relatos clínicos da aplicação do congelamento em tecidos dentários. Outro aspecto é a ocorrência de situações clínicas, de infecções periapicais recorrentes, onde o tratamento endodôntico muitas vezes não é bem sucedido, sendo o paciente submetido a tratamento cirúrgico para resolução do problema. Assim, os objetivos deste trabalho foram verificar as temperaturas atingidas com o uso do spray de nitrogênio líquido em dentes humanos extraídos e também investigar se esta terapia, via canal dentário, tem efeito letal para colônias de bactérias Enterococcus faecalis, cultivadas em laboratório e inoculadas em dentes humanos extraídos. Na primeira parte do estudo, seis dentes humanos foram submetidos a dois ciclos de congelamento de 15 segundos cada, com um intervalo de descongelamento espontâneo de 4 minutos. A aplicação foi realizada em duas regiões: 1 mm aquém do ápice dentário e também na entrada do canal radicular. Com a aplicação a 1mm do ápice, foi obtida uma média aritmética de -36,83°C e de -38,50°C no ápice dentário, após primeiro e segundo ciclos, respectivamente. Com o posicionamento na entrada do canal, as médias obtidas foram -2,66°C e - 4,41°C no ápice dentário, após primeiro e segundo ciclos, respectivamente. Com base nestes resultados é possível concluir que a crioterapia apresenta capacidade de atingir temperaturas consideradas letais em tecidos dentários. Na segunda parte da pesquisa, o nitrogênio líquido foi aplicado em 11 dentes humanos contaminados com E. faecalis. Foram realizados 3 ciclos de 60 segundos, com descongelamento de 4 minutos entre cada um. A média aritmética das porcentagens de redução do número de Unidades Formadoras de Colônias de E. faecalis, foi de 92,00± 3,117 (média ± erro padrão da média). Conclui-se deste trabalho que a crioterapia foi efetiva na redução do número de bactérias intracanal, podendo apresentar uma eficácia na descontaminação do canal radicular.