Human Papillomavirus (HPV) is the cause of cervical cancers (among these, adenocarcinoma, AdCa) and is associated to a subgroup of oropharyngeal carcinomas (OPSCCs). Even if the risk for cancer development is linked to the infection by some viral genotypes, mainly HPV16 and 18, viral DNA alone seems not to be sufficient for diagnosis. Moreover, the role of the virus in OPSCCs has not been totally clarified yet. In the first part of the thesis, the performances concerning viral genotyping in clinical cervical samples of a new pyrosequencing-based test and a well-known hybridization-based assay have been compared. Similar results between the methods have been obtained. However, the former showed advantages in detecting intratype variants, higher specificity and a broader spectrum of detectable HPV types. The second part deals with the evaluation of virological markers (genotyping, viral oncoproteins expression, viral load, physical state and CpG methylation of HPV16 genome) in the diagnosis/prognosis of cervical AdCa and HPV-associated OPSCCs. HPV16 has been confirmed the most prevalent genotype in both the populations. Interestingly, the mean methylation frequency of viral DNA at the early promoter showed the tendency to be associated to invasion for cervical AdCa and to a worse prognosis for OPSCCs, suggesting a promising role as diagnostic/prognostic biomarker. The experiments of the third part were performed at the DKFZ in Heidelberg (Germany) and dealt with the analysis of the response to IFN-k transfection in HPV16-positive cervical cancer and head&neck carcinoma cell lines to evaluate its potential role as new treatment. After 24h, we observed increased IFN-b expression which lead to the up-regulation of genes involved in the antigens presentation pathway (MHC class I and immunoproteasome) and antiviral response as well, in particular in cervical cancer cell lines. This fact suggested also the presence of different HPV-mediated carcinogenic pathways between the two anatomical districts. / Il Papillomavirus umano (HPV) è causa dei carcinomi della cervice uterina (tra cui adenocarcinomi, AdCa) ed è associato ad un sottogruppo di tumori dell’orofaringe (OPSCCs). Nonostante il rischio di sviluppo di tumore sia associato all’infezione da parte di alcuni genotipi virali, principalmente HPV16 e 18, il DNA virale da solo sembra non essere sufficiente in campo diagnosico. Inoltre, per tumori orofaringei il ruolo del virus non è ancora del tutto chiaro. Nella prima parte della tesi, sono state confrontate le performance riguardo la genotipizzazione di HPV su campioni clinici cervicali di una tecnica innovativa, basata su amplificazione e pirosequenziamento, e una di routine, basata su amplificazione e ibridazione inversa. Lo studio ha evidenziato performance simili tra le due metodiche, sottolineando per il sequenziamento una maggiore specificità e capacità di rilevare varianti intratipo. Nella seconda parte sono stati analizzati marker virologici (genotipizzazione, espressione delle oncoproteine virali, carica virale, stato fisico e metilazione del genoma di HPV16) in funzione dei dati clinici disponibili, per un possibile impiego nella diagnosi/prognosi di AdCa cervicali e OPSCCs HPV-associati. HPV16 si è confermato il genotipo prevalente in entrambe le popolazioni. La frequenza di metilazione nel promotore precoce virale ha mostrato una tendenza ad essere associata ad invasione negli AdCa, e ad una prognosi peggiore negli OPSCCs, emergendo come il più promettente marker diagnostico/prognostico. La terza parte, svolta presso il DKFZ di Heidelberg (Germania), ha visto l’analisi della risposta alla transfezione di IFN-k in linee cellulari tumorali HPV16-positive della cervice uterina e della regione testa-collo, per valutarne l’impiego terapeutico. Dopo 24h, è stato osservato un incremento dell’espressione di IFN-b e, di conseguenza, una up-regolazione dei geni coinvolti nella presentazione antigenica (MHC classe I ed immunoproteasoma) e nella risposta antivirale, specialmente nelle cellule cervicali, suggerendo la presenza di diversi meccanismi patogenetici tra tumori HPV-positivi dei due distretti anatomici.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:49:40Z : No. of bitstreams: 1 machado_bfmt_me_botib.pdf: 809978 bytes, checksum: dfad13979717e24ed1396c50d10ae323 (MD5) / Esta dissertação encontra-se dividida em introdução geral e 3 capítulos, sendo estes no formato de manuscritos a serem enviados para publicação em 3 periódicos distintos. Considerando a crescente utilização dos produtos naturais, especialmente dos obtidos a partir de plantas, objetivou-se estudar a ação antibacteriana de 27 óleos essenciais de uso em aromaterapia, sobre linhagens de Staphylococcus aureus (n=10), Escherichia coli (n=9), e Pseudomonas aeruginosa (n=9), isoladas de casos clínicos humanos, utilizando a metodologia dos discos (difusão) e determinação da concentração inibitória mínima (CIM) (diluição) em Mueller Hinton Ágar (Capítulo I). Verificou-se que as linhagens de S. aureus foram mais susceptíveis que as de Gram negativas, sendo que os valores de CIM90% foi de 0,21mg/mL para os óleos de pimenta negra (Piper nigrum) e tea tree (Melaleuca alternifolia) e 26,52mg/mL para o óleo de copaíba (Copaíba officinalis). Para E. coli, o óleo de canela (Cinnamomum cassia) foi o mais efetivo, com 2,0 mg/mL para CIM90% enquanto para P. aeruginosa o valor foi de 8,29 mg/mL com cravo da índia (Syzigium aromaticum). Utilizando valores de CIM obtidos in vitro foram selecionados 5 óleos (cravo da índia-Syzygium aromaticum, gerânio-Pelargonium graveolens, lavanda -Lavandula angustifolia, palmarosa-Cymbopogon martini e tea tree-Melaleuca alternifolia) e novamente sobre linhagens de Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa, foi verificada a ação antibacteriana através da diluição individual de cada óleo em água e salina visando redução na contagem bacteriana em função do tempo (Capítulo II). Tanto nos ensaios em água quanto salina, verificou-se que o perfil de sensibilidade das linhagens bacterianas aos óleos essenciais foram próximos entre si, porém significativamente distintos comparados aos ensaios controles... / This thesis is divided into general introduction and three chapters, which are in the format of manuscripts to be submitted for publication in three separate journals. Considering the increasing use of natural products, especially those obtained from plants, aimed to study the antibacterial activity of 27 essential oils used in aromatherapy, on Staphylococcus aureus (n=10), Escherichia coli (n=9), and Pseudomonas aeruginosa (n=9), isolated from human clinical cases, using the methodology of the disks (diffusion) and determination of minimum inhibitory concentration (MIC) (dilution) on Mueller Hinton Agar (Chapter I). It was found that the strains of S. aureus were more susceptible than the Gram negative, and the values of MIC90% was 0.21 mg/mL for the oils of black pepper (Piper nigrum) and tea tree (Melaleuca alternifolia) and 26.52 mg/mL for oil Copaiba (Copaiba officinalis). For E. coli strains, the oil of cinnamon (Cinnamomum cassia) was the most effective, with 2.0 mg/mL for MIC 90% while for P. aeruginosa, the value was 8.29 mg/mL with clove (Syzigium aromaticum). Using MIC values obtained in vitro were selected five oils (cloves-Syzygium aromaticum, geranium-Pelargonium graveolens, lavender- Lavandula angustifolia, palmarosa-Cymbopogon martini and tea tree-Melaleuca alternifolia) and the bacteria Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa, antibacterial activity was checked by dilution of individual oil and saline water in order to reduce the bacterial count in function of time (Chapter II). Both tests in saline and water, it was found that the sensitivity of bacterial strains to essential oils were close together, but were significantly different compared to control tests. Essential oils have demonstrated the potential inhibitor of the three bacterial strains, and the results were different from those obtained in vitro-ágar with Gram negative... (Complete abstract click electronic access below)

Foram estudados vinhos brasileiros, elaborados por microvinificação, das variedades Cabernet Sauvignon e Merlot, safras 2007 e 2008, provenientes da Serra Gaúcha, Campanha e Serra do Sudeste, com o objetivo de diferenciá-los em função da origem geográfica, utilizando análises isotópicas e elementos minerais. Além disso, verificou-se a influência da safra de produção nos valores isotópicos. As análises isotópicas foram realizadas por espectrometria de massa de razão isotópica (IRMS) e a determinação dos minerais por absorção atômica de chama (FAA). Os melhores parâmetros para classificar os vinhos na safra de 2007 foram o 18O da água do vinho, o Mg e o Rb, enquanto que na safra de 2008 o Rb e o Li mostraram-se mais eficientes. Os resultados de 13C do etanol do vinho, Rb e Li mostraram uma diferença significativa entre variedades, independente da região estudada, em ambas as safras, com valores mais negativos de 13C e médias superiores de Rb e Li para os vinhos da variedade Cabernet Sauvignon. Os valores de 18O da água e 13C do etanol, apresentaram diferenças significativas entre safras, independente da variedade, sendo os resultados de 18O mais negativos na safra de 2007 e os de 13C mais negativos na safra de 2008. A precipitação média quinzenal antes da coleta, apresentou uma forte correlação com os valores de 18O. A análise discriminante dos valores isotópicos e minerais permitiu uma classificação de aproximadamente 80 % dos vinhos das três regiões estudadas. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-17T12:56:14Z No. of bitstreams: 1 Tese Sandra Valduga Dutra.pdf: 2931492 bytes, checksum: 55a7d44b06e23472f84e70a9c112e0bb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-17T12:56:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Sandra Valduga Dutra.pdf: 2931492 bytes, checksum: 55a7d44b06e23472f84e70a9c112e0bb (MD5) / Were studied Brazilian wines microvinificated from Cabernet Sauvignon and Merlot varieties, vintages 2007 and 2008, from Serra Gaúcha, Campanha and Serra do Sudeste, in order to to differentiate them according to geographical origin, using isotopic and mineral elements analyses. In addition, the influence of vintage production in isotope values was verified. The isotopic analysis were performed by isotope ratio mass spectrometry (IRMS) and the determination of the minerals by flame atomic absorption (FAA). The best parameters to classify the wines in the 2007 vintage were 18O of wine water, Mg and Rb, while in the 2008 vintage Rb and Li were more efficient. The results of the 13C of winw ethanol, Rb and Li showed a significative difference between the varieties independent of the region studied, in both vintages, with more negative values of 13C and higher averages of Rb and Li for the wines from the Cabernet Sauvignon variety. The 18O values of the water and 13C of ethanol showed significant differences, regardless of the variety, with more negative values of 18O for the 2007 vintage and values of 13C of ethanol more negatives in the 2008 vintage. The fortnightly average rainfall before the collection showed a strong direct correlation with the 18O values. Discriminant analysis of of isotopic and mineral elements values allowed to classify approximately 80% of the wines from the three regions studied.

Orientador: Fernando Leite Hoffmann / Banca: Iracema de Oliveira Moraes / Banca: Ana Lúcia Barretto Penna / Resumo: Trinta e uma diferentes amostras de queijo tipo "Minas Frescal" fabricadas artesanalmente, obtidas de feiras livres em municípios do Estado de São Paulo (Bady Bassitt, Bauru, Mirassol, Potirendaba e São José do Rio Preto), foram submetidas às seguintes análises microbiológicas: contagem de Staphylococcus aureus, determinação do Número Mais Provável (NMP) de coliformes totais e fecais, pesquisa de Escherichia coli, Salmonella sp e Listeria monocytogenes, de acordo com a legislação brasileira, incluindo ainda a contagem de bactérias aeróbias mesófilas (total de microrganismos aeróbios estritos e facultativos viáveis) e a enumeração de bolores e leveduras. Das amostras, foram isoladas cento e cinqüenta e cinco culturas de leveduras que foram submetidas às provas taxonômicas, morfológicas, fisiológicas e de assimilação de diversas fontes de carbono. Além disso, as leveduras foram também testadas quanto a resistência aos conservantes alimentícios benzoato de sódio e sorbato de potássio em diferentes concentrações, assim como com relação a sensibilidade ao tratamento térmico. De acordo com os resultados obtidos, observou-se que trinta (96,80%), das trinta e uma amostras de queijo tipo "Minas Frescal", apresentaram-se em desacordo com um ou mais padrões da legislação brasileira. Os resultados das provas taxonômicas demonstraram a ocorrência de quatro gêneros de leveduras, a saber: Candida edax representada por cinqüenta e nove culturas (38,06%), Cryptococcus, duas espécies, ou seja, Cryptococcus albidus por três culturas (1,94%) e Cryptococcus laurentii por sete (4,52%), Debaryomyces hansenii var. fabryii representada por oitenta e cinco (54,84%) e Saccharomyces cerevisiae por uma (0,64%). Observou-se que as leveduras de mesmas espécies, em alguns casos, diferiram em uma ou mais características da descrição padrão...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Thirty-one different samples of "Minas Frescal" handmade cheese, obtained at open markets in municipalities of the State of São Paulo (Bady Bassitt, Bauru, Mirassol, Potirendaba and São José do Rio Preto), were submitted to the following microbiological analyses: Staphylococcus aureus count, determination of the Most Probable Number (MPN) of total and fecal coliforms, analysis for the presence of Escherichia coli, Salmonella sp and Listeria monocytogenes, according to Brazilian food safety regulations. Analyses also included mesophil aerobic bacteria count (total of viable strict and facultative aerobic microorganisms) and the enumeration of yeast and mold. One hundred fifty-five yeast cultures were isolated from the samples. They were submitted to taxonomic, morphological, and physiological tests, and to carbon source assimilation tests, as well. Furthermore, the cultures were also tested for resistance to the food preservatives sodium benzoate and potassium sorbate in different concentrations, and for sensibility to thermal treatment. According to the results obtained, 30 samples (96.80%) of "Minas Frescal" cheese were observed to not to comply with one or more standards set by the Brazilian regulations. The results of the taxonomic tests showed the occurrence of 4 types of yeast: Candida edax represented by 59 cultures (38.06%); 2 species of Cryptococcus, i.e., Cryptococcus albidus, 3 cultures (1.94%), and Cryptococcus laurentii, 7 cultures (4.52%); Debaryomyces hansenii, var. fabryii, represented by 85 cultures (54.84%); and Saccharomyces cerevisiae, one culture (0.64%). In some cases, yeasts of the same species were observed to differ in one or more characteristics of the standard description. As regards to the behavior of cultures in face of the preservatives, all of them were verified to be sensitive to sodium benzoate at concentrations of 0.1, 0.2 and 0.4% and to potassium sorbate...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Foram estudados vinhos brasileiros, elaborados por microvinificação, das variedades Cabernet Sauvignon e Merlot, safras 2007 e 2008, provenientes da Serra Gaúcha, Campanha e Serra do Sudeste, com o objetivo de diferenciá-los em função da origem geográfica, utilizando análises isotópicas e elementos minerais. Além disso, verificou-se a influência da safra de produção nos valores isotópicos. As análises isotópicas foram realizadas por espectrometria de massa de razão isotópica (IRMS) e a determinação dos minerais por absorção atômica de chama (FAA). Os melhores parâmetros para classificar os vinhos na safra de 2007 foram o 18O da água do vinho, o Mg e o Rb, enquanto que na safra de 2008 o Rb e o Li mostraram-se mais eficientes. Os resultados de 13C do etanol do vinho, Rb e Li mostraram uma diferença significativa entre variedades, independente da região estudada, em ambas as safras, com valores mais negativos de 13C e médias superiores de Rb e Li para os vinhos da variedade Cabernet Sauvignon. Os valores de 18O da água e 13C do etanol, apresentaram diferenças significativas entre safras, independente da variedade, sendo os resultados de 18O mais negativos na safra de 2007 e os de 13C mais negativos na safra de 2008. A precipitação média quinzenal antes da coleta, apresentou uma forte correlação com os valores de 18O. A análise discriminante dos valores isotópicos e minerais permitiu uma classificação de aproximadamente 80 % dos vinhos das três regiões estudadas. / Were studied Brazilian wines microvinificated from Cabernet Sauvignon and Merlot varieties, vintages 2007 and 2008, from Serra Gaúcha, Campanha and Serra do Sudeste, in order to to differentiate them according to geographical origin, using isotopic and mineral elements analyses. In addition, the influence of vintage production in isotope values was verified. The isotopic analysis were performed by isotope ratio mass spectrometry (IRMS) and the determination of the minerals by flame atomic absorption (FAA). The best parameters to classify the wines in the 2007 vintage were 18O of wine water, Mg and Rb, while in the 2008 vintage Rb and Li were more efficient. The results of the 13C of winw ethanol, Rb and Li showed a significative difference between the varieties independent of the region studied, in both vintages, with more negative values of 13C and higher averages of Rb and Li for the wines from the Cabernet Sauvignon variety. The 18O values of the water and 13C of ethanol showed significant differences, regardless of the variety, with more negative values of 18O for the 2007 vintage and values of 13C of ethanol more negatives in the 2008 vintage. The fortnightly average rainfall before the collection showed a strong direct correlation with the 18O values. Discriminant analysis of of isotopic and mineral elements values allowed to classify approximately 80% of the wines from the three regions studied.

A utilização de fungicidas na agricultura para controle de pragas pode causar grandes impactos ambientais e as suas ações podem alterar quantitativa e qualitativamente a microbiota de solos expostos. O tebuconazole é um fungicida sistêmico do grupo dos triazóis que inibe o passo de desmetilação do carbono 14 do 24-metilenodihidrolanosterol, na biossíntese do ergosterol. Atualmente, as lavouras recebem repetidas aplicações deste em uma mesma cultura, propiciando o aparecimento de espécies resistentes à sua ação. Através do isolamento dos microrganismos encontrados em solos contaminados pode-se encontrar espécies resistentes e capazes de degradar este xenobiótico. O objetivo desse trabalho foi isolar, selecionar e avaliar a capacidade de biodegradação de tebuconazole por isolados microbianos de solos contaminados e de ambientes Amazônicos. Os microrganismos foram isolados a partir de técnicas de isolamento utilizando diferentes soluções. As bactérias isoladas foram submetidas a experimentos de seleção e biodegradação realizados em biorreatores e tolerância em agitador horizontal. Os fungos isolados foram submetidos a esta mesma avaliação, porém em cultivos estáticos. Os fungos isolados mostraram ser resistentes a 100 mg.L-¹ de tebuconazole, no entanto não foram capazes de degradá-lo. As bactérias selecionadas que apresentaram capacidade de degradar até 51% deste fungicida e tolerância de até 1 g.L-¹ foram identificadas como Enterobacter sakazakii e Serratia marcescens. Estas cepas apresentaram características interessantes para uma potencial utilização destas em remediação ambiental. Também foram testadas várias cepas de fungos recentemente isoladas dos ambientes Amazônicos, mas os mesmos não demonstraram qualquer tipo de resistência ou capacidade biodegradadora deste fungicida. / The use of fungicides in agriculture for the control of diseases can cause great environmental impacts and their actions can quantitatively and qualitatively modify microbial systems of exposed soils. Tebuconazole is a systemic fungicide of the group of the triazol that inhibits the sterol C-14 α-demethylation of 24-methylenedihydrolanosterol, a precursor of the cell membrane component ergosterol in fungi. Currently, crops receive repeated applications of these chemicals, inducing the appearance of resistant strains of bacteria and fungi. Through the isolation of microrgansims found in these soils, resistant species can be found that could be capable of degrading these xenobiotics. Thus, the objective of this work was to isolate microorganisms from contaminated soil and to evaluate the biodegradation of tebuconazole by them, as well as to test some recently isolated fungi strains from Amazon environment for this same purpose. Microorganisms were isolated by different methods of sampling soil. Screening of bacteria was performed on bioreactors, while tolerance to tebuconazole assays were performed on shaker. Screening of fungi was performed in static cultures. Some fungi were capable of growing in concentrations of 100 mg.L-¹ of tebuconazole, but proved unable to degrade this xenobiotic. Screening of bacteria resulted in some isolated capable of degrading up to 51% of the initial concentration of tebuconazole and were capable to tolerate up to 1 g.L-¹. These strains were identified by biochemical standard procedures as being Enterobacter sakazakii and Serratia marcescens species. These bacteria present some important characteristics for potential use on environmental bioremediation. Microorganisms isolated from Amazon did not show any resistances or biodegradation capabilities towards tebuconazole.

PAES, F. A. Análise de comunidades microbianas de solo de manguezal por T-RFLP e microarranjos de DNA. 2008. XVI; 128 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Marinhas Tropicais) - Instituto de Ciências do Mar, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Solange Gomes (solagom@yahoo.com.br) on 2013-02-06T18:56:41Z No. of bitstreams: 1 Fernanda Araujo Paes.pdf: 880237 bytes, checksum: 6153306cc4bd44febecb7ee196c60094 (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid(nadsa@ufc.br) on 2013-06-04T19:13:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Fernanda Araujo Paes.pdf: 880237 bytes, checksum: 6153306cc4bd44febecb7ee196c60094 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-04T19:13:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Araujo Paes.pdf: 880237 bytes, checksum: 6153306cc4bd44febecb7ee196c60094 (MD5) Previous issue date: 2008 / Os manguezais são ecossistemas importantes e produtivos, encontrados ao longo da linha da costa de regiões tropicais e subtropicias. Processos importantes, como a ciclagem de nutrientes, estão diretamente conectados à atividade das comunidades microbianas desses solos. Dada sua posição estratégica, os manguezais são bastante impactados no mundo todo. No Brasil, áreas importantes como a da Baía de todos os Santos (BA) são severamente afetadas pela presença do petróleo. Compreender as adaptações da microbiota local e sua dinâmica, frente às alterações ambientais, é essencial para que se consiga manter ou restaurar esses ecossistemas. A presente dissertação investigou a estrutura e a função de comunidades microbianas em uma área do manguezal da baía de Todos os Santos, poluída pela indústria do petróleo. Dois locais foram amostrados – um, situado na área de refinamento dessa indústria e o outro, distante desse local e usado como controle. Além dos dados abióticos medidos, dois métodos independentes de cultivo foram utilizados: T-RFLP e microarranjos de DNA. Os resultados de ambos os sítios, nos experimentos de T-RFLP, mostraram que as duas comunidades bacterianas diferem quanto à sua estrutura. Para o sítio amostrado na área da refinaria, um número maior de OTUs sugere um estímulo ambiental, na comunidade bacteriana, fato associável ao alto teor de matéria orgânica desse local. Para os microarranjos de DNA, categorias similares de genes foram detectadas, em ambos os locais, mas a especificidade de suas sequências foi distinta. Os genes que codificam para a remediação orgânica foram os mais representativos, mais de 40% do total nos dois sítios. Mesmo detectando categorias semelhantes, apenas 4% das sequências genéticas foram comuns aos sítios. Estes dados mostram que organismos diferentes são responsáveis por funções similares em cada ponto. A diferença entre os locais, observada nos experimentos, pode ser relacionada com o fato do sítio 1 situar-se numa região fortemente afetada por hidrocarbonetos. Utilizando-se índices ecológicos, os dados de T-RFLP indicaram o sítio 1 como mais diverso, enquanto os resultados dos microarranjos de DNA mostraram o oposto. Concluindo, a estrutura e função da microbiota local são afetadas pela presença da indústria do petróleo. Estudos adicionais poderão ajudar a compreender a dinâmica dessas comunidades microbianas, frente às futuras exposições ao óleo e/ou derivados.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-27T12:52:11Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 147753 bytes, checksum: 7ff7f5018eb04189a9e9cc7e7b24b059 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T12:52:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 147753 bytes, checksum: 7ff7f5018eb04189a9e9cc7e7b24b059 (MD5) Previous issue date: 2001-11-05 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os efeitos do choque térmico, 50 o C por 30min, e do choque ácido, em pH3,5 por 2h e 30min a 37 o C, na sobrevivência de Lactobacillus UFV H2b20 à desidratação em “spray dryer” a 180 o C e na resistência a condições ambientais foi estudado. Em relação ao controle, em leite contendo 10% EST após o processamento do leite em pó, observou-se que tanto o choque térmico quanto o choque ácido conferiram às células maior tolerância ao processo de desidratação testado, sendo a diferença na sobrevivência de quase 2 ciclos logarítmicos. Fica demonstrado o efeito protetor do choque térmico e do choque ácido ao tratamento a 65 o C, por 20min, em que o controle, cerca de 10 3 UFC/ml, não logrou sobrevivência, enquanto as células pré-tratadas sofreram redução de apenas 2 ciclos logarítmicos. O mesmo efeito protetor ao tratamento em pH2,5 por 2h e 30min foi observado. No tratamento em 0,8mg/ml de lisozima por 60min não foi verificado efeito protetor ou deletério desses pré-tratamentos. No tratamento com 1% de sais biliares, verifica-se maior sobrevivência do controle quando comparado com as amostras pré-tratadas. Houve sobrevivência de 10% xdas células do controle e 1% das células pré-tratadas, nos primeiros 30min de exposição. Nas células submetidas ao choque ácido, houve efeito deletério nos primeiros 30min e efeito protetor nos demais períodos demonstrando seu efeito protetor na manutenção do número de células sobreviventes a esse tratamento. Observou-se melhor efeito do tratamento com ácido, quando comparado ao choque térmico. / The objectives of this work were to determine the effect of heat shock, 50 o C for 30min, and of acid shock, pH3.5 for 2hr and 30min at 37 o C, on the survival of Lactobacillus UFV H2b20 to milk spray drying and its resistance to stress conditions thereafter. Both heat and acid shocks increased the cell tolerance to the dehydration process, since the heat and acid treated cells presented a number of survivors two log cycles greater than that of the control, i. e. the non-shocked cells. Both pre-treatments, heat and acid, conferred resistance to heat treatment at 65 o C for 20min, yelding a number of survivors at least two log cycles greater than that of the control. The same protective effect was observed when heat and acid pre-treated cells were subject to pH2.5 for 2h and 30min. No effect was detected on the resistance to lisozyme. Exposure to 1% bile salts for 30min resulted in the survival of 10% of the control cells and of only 1% of the heat or acid pre-treated cells. However, a protective effect of the acid shock was observed after 30min of exposure to bile salts. The control and the heat shocked xiicells continued to die and the acid pre-treated cells survived for longer periods of time. As a pre-treatment, acid was more effeective than heat shock. / Dissertação antiga

A utilização de fungicidas na agricultura para controle de pragas pode causar grandes impactos ambientais e as suas ações podem alterar quantitativa e qualitativamente a microbiota de solos expostos. O tebuconazole é um fungicida sistêmico do grupo dos triazóis que inibe o passo de desmetilação do carbono 14 do 24-metilenodihidrolanosterol, na biossíntese do ergosterol. Atualmente, as lavouras recebem repetidas aplicações deste em uma mesma cultura, propiciando o aparecimento de espécies resistentes à sua ação. Através do isolamento dos microrganismos encontrados em solos contaminados pode-se encontrar espécies resistentes e capazes de degradar este xenobiótico. O objetivo desse trabalho foi isolar, selecionar e avaliar a capacidade de biodegradação de tebuconazole por isolados microbianos de solos contaminados e de ambientes Amazônicos. Os microrganismos foram isolados a partir de técnicas de isolamento utilizando diferentes soluções. As bactérias isoladas foram submetidas a experimentos de seleção e biodegradação realizados em biorreatores e tolerância em agitador horizontal. Os fungos isolados foram submetidos a esta mesma avaliação, porém em cultivos estáticos. Os fungos isolados mostraram ser resistentes a 100 mg.L-¹ de tebuconazole, no entanto não foram capazes de degradá-lo. As bactérias selecionadas que apresentaram capacidade de degradar até 51% deste fungicida e tolerância de até 1 g.L-¹ foram identificadas como Enterobacter sakazakii e Serratia marcescens. Estas cepas apresentaram características interessantes para uma potencial utilização destas em remediação ambiental. Também foram testadas várias cepas de fungos recentemente isoladas dos ambientes Amazônicos, mas os mesmos não demonstraram qualquer tipo de resistência ou capacidade biodegradadora deste fungicida. / The use of fungicides in agriculture for the control of diseases can cause great environmental impacts and their actions can quantitatively and qualitatively modify microbial systems of exposed soils. Tebuconazole is a systemic fungicide of the group of the triazol that inhibits the sterol C-14 α-demethylation of 24-methylenedihydrolanosterol, a precursor of the cell membrane component ergosterol in fungi. Currently, crops receive repeated applications of these chemicals, inducing the appearance of resistant strains of bacteria and fungi. Through the isolation of microrgansims found in these soils, resistant species can be found that could be capable of degrading these xenobiotics. Thus, the objective of this work was to isolate microorganisms from contaminated soil and to evaluate the biodegradation of tebuconazole by them, as well as to test some recently isolated fungi strains from Amazon environment for this same purpose. Microorganisms were isolated by different methods of sampling soil. Screening of bacteria was performed on bioreactors, while tolerance to tebuconazole assays were performed on shaker. Screening of fungi was performed in static cultures. Some fungi were capable of growing in concentrations of 100 mg.L-¹ of tebuconazole, but proved unable to degrade this xenobiotic. Screening of bacteria resulted in some isolated capable of degrading up to 51% of the initial concentration of tebuconazole and were capable to tolerate up to 1 g.L-¹. These strains were identified by biochemical standard procedures as being Enterobacter sakazakii and Serratia marcescens species. These bacteria present some important characteristics for potential use on environmental bioremediation. Microorganisms isolated from Amazon did not show any resistances or biodegradation capabilities towards tebuconazole.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-05Bitstream added on 2014-06-13T19:14:42Z : No. of bitstreams: 1 shinya_ty_me_sjrp.pdf: 938343 bytes, checksum: c5a013f3a467162e18061087abbec274 (MD5) / Devido à necessidade de obtenção de novas moléculas com ação antimicrobiana, o presente trabalho visou investigar a capacidade antagônica do extrato produzido pelo fungo Trichosporon asahii. O extrato foi obtido pela fermentação do fungo em fermentador de bancada 7L, a 28°C por 72 horas. O caldo fermentado foi centrifugado a 2500 rpm por 20 minutos, sendo o sobrenadante a fração denominada extrato bruto, que foi seco em estufa (37°C) e ressuspendido em água destilada, para testes de ação antimicrobiana contra os micro-organismos Candida albicans, Malassezia pachydermatis, Trichophyton mentagrophytes, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 e ATCC 27853, Xanthomonas campestris pv campestris. O teste de sensibilidade foi o de Concentração Bactericida e Fungicida Mínima (CBM e CFM), através da macrodiluição em tubos e plaqueamento. Numa segunda etapa, o extrato bruto foi submetido a uma separação líquido-líquido utilizando os solventes hexano e diclorometano, obtendo-se frações aquosa e orgânica. Numa última etapa de purificação, o extrato diclorometânico passou por uma cromatografia de troca-iônica, cromatografia em sílica gel e precipitação com sulfato de amônio. Foram calculados alguns parâmetros de fermentação do T. asahii, através dos métodos de quantificação de açúcares redutores, pH, viabilidade e brotamento das leveduras e quantidade total de células. O teste de sensibilidade do extrato bruto demonstrou apenas atividade antibacteriana (30000 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 9027, 33000 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 27853 e 75000 µg/mL sobre X. campestris). Observou-se uma diminuição da CBM para a fração diclorometânica (17500 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 9027, 20000 µg/mL sobre P. aeruginosa ATCC 27853 e 60000 µg/mL sobre X. campestris). Na pré-purificação, o método que demonstrou maior eficácia para o propósito... / Nowadays there is a demand for new natural molecules that may contribute to the control of pathogenic microorganisms. In this study it was aimed to investigate the antimicrobial ability of the broth produced by the culture of the fungus Trichosporon asahii. The extract was obtained by fermentation of T. asahii bench 7 L fermenter at 28° C for 72 hours. The fermented broth was centrifuged at 2500 rpm for 20 minutes, and the supernatant fraction termed crude extract, which was dried in oven (37° C) and resuspended in distilled water for testing antimicrobial activity against the microorganisms Candida albicans, Malassezia pachydermatis, Trichophyton mentagrophytes, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 and ATCC 27853 and Xanthomonas campestris pv campestris. The method used for quantification of antibiotic was the Minimum Bactericidal and Fungicidal Concentration (MBC and MFC) by macrodilution tubes and plating. In a second stage, the crude extract was subjected to liquid-liquid separation using dichloromethane and hexane solvents to yield aqueous and organic fractions. A new purification step from the dichloromethanic fraction passed through an ion exchange chromatography, silica gel chromatography and by precipitation with ammonium sulfate. It was also calculated some fermentation parameters of T. asahii by analytical methods for quantifying reducing sugars, pH, cell viability, budding yeasts and total cells. The MBC test showed only antibacterial activity (33,000 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 27853, 30,000 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 9027 and 75,000 µg/mL for X. campestris). There was a decrease in the MBC for the dichloromethanic fraction (20,000 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 27853, 17,500 µg/mL for P. aeruginosa ATCC 9027 and 60,000 µg/mL for X. campestris). In the pre-purification step, the ion exchange chromatography was the more effective method... (Complete abstract click electronic access below)