Los frutos secos contienen grasas insaturadas susceptibles a la oxidación, pero también contienen sustancias antioxidantes, que podrían contrarrestar su efecto pro-oxidativo. Esta tesis muestra que en ratones sanos, el consumo de piensos enriquecidos con nueces enteras o con piel de nueces, no produjo efectos adversos sobre la peroxidación lipídica plasmática, a pesar de la menor capacidad antioxidante plasmática observada, respecto al grupo control. Además, mediante un estudio clínico, aleatorizado y 12 semanas de intervención en adultos con síndrome metabólico, se observó que consumir una mezcla de frutos secos en el contexto de una dieta cardiosaludable, no produjo efectos deletéreos sobre la capacidad antioxidante, la peroxidación lipídica, ni la función endotelial, respecto al consumo de la misma dieta cardiosaludable. Además, los frutos secos podrían reducir el daño oxidativo al ADN, marcador relacionado con algunas enfermedades crónico-degenerativas. Estos resultados sugieren que consumir frutos secos contribuiría a prevenir el riesgo de enfermedades crónico-degenerativas y sus comorbilidades. / Nuts contain unsaturated fatty acids susceptible to oxidation, but also contain antioxidants, which could counteract their prooxidant effect. This thesis shows that in healthy mice, consumption of feed enriched with whole nuts or walnut skins, produced no adverse effect on plasma lipid peroxidation despite the observed lower plasma antioxidant capacity, compared to the control group. In addition, a clinical trial, 12-week randomized intervention in adults with metabolic syndrome was observed that consumption of a mixture of nuts in the context of a healthy diet did not produce deleterious effects on capcidad antioxidant, peroxidation lipid and endothelial function, in comparison with the consumption of the same healthy diet. In addition, nuts could contribute to reduce oxidative damage to DNA, oxidative marker related to the presence of some chronic degenerative diseases. These results suggest that eating nuts in the context of a healthy diet could prevent the risk of chronic degenerative disease and their comorbities.

BRAZ, Nádia de Melo. Líquido da castanha de caju como fonte de ácido anacárdico na alimentação de poedeiras comerciais. 2016. 93 f. Dissertação (mestrado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2016. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-07T17:32:14Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_nmbraz.pdf: 982080 bytes, checksum: aa9ee34ca31d17d9fa1f6cdb6aea8a0b (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-24T23:17:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_nmbraz.pdf: 982080 bytes, checksum: aa9ee34ca31d17d9fa1f6cdb6aea8a0b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-24T23:17:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_nmbraz.pdf: 982080 bytes, checksum: aa9ee34ca31d17d9fa1f6cdb6aea8a0b (MD5) Previous issue date: 2016 / The objective of this study was to evaluate the blood biochemical parameters, the enzymatic activity, lipid peroxidation of liver and tissues of the reproductive system (ovary, magnum, and uterus), as well as the effects of adding the cashew nut shell (CNSL) in the diet of laying hens on performance, quality and stability of lipid eggs. A total of 216 Hisex White commercial laying hens were distributed randomly into six treatments, with six replicates of six birds. Treatments consisted of a diet without performance promoter (PP); a diet with PP; and diets without PP, with addition of increasing levels of CNSL (0.25, 0.50, 0.75, and 1.00%). Addition of CNSL to the diet did not affect the blood biochemical parameters (uric acid, creatinine, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, total cholesterol, HDL cholesterol, LDL cholesterol, and triglycerides), in the enzymatic activity (superoxide dismutase and non-protein sulfhydryl groups) in the organs (liver, ovary, magnum and uterus), in the peroxidation of lipids from the blood serum, liver, magnum and uterus, in the performance variables and characteristics of eggs. However, the levels of 0.75% and 1.00% CNSL provided a lower TBARS content in the birds’ ovary, whereas the treatment without the growth promoter provided a higher value. The color of the yolk was superior to treatment with and without PP CNSL 0.75% in the feed in the bottom and PP treatment. Regression analysis showed a significant quadratic effect of dietary inclusion of CNSL on yolk color measured color fan, with the best estimated level to 0.62%. The color component a* was superior level of 0.50% CNSL, while treatment with PP had the lowest value. Quadratic effect was observed in lipid oxidation in the yolk of the egg station recently, reaching a minimum of 0.58% in the feed LCC. Comparing the average level of 0.75% of CNSL showed the lowest TBARS, while treatments with PP, without PP and the level of 1.00% of LCC had higher TBARS. Addition of up to 1% of the CNSL as a source of anacardic acid in the laying hen diets does not influence their blood biochemical parameters, the activity of the superoxide dismutase enzyme and non-protein sulfhydryl groups in the liver, ovary, magnum, and uterus, but improves the color of egg yolk and that the level of 0.75% of CNSL is effective in reducing lipid oxidation in the ovary and fresh gems. / A pesquisa teve como objetivo avaliar os parâmetros bioquímicos do sangue, a atividade enzimática, a peroxidação lipídica do fígado e de tecidos do sistema reprodutor (ovário, magno e útero), assim como o desempenho e a qualidade dos ovos de poedeiras comerciais alimentadas com ração contendo o líquido da castanha de caju (LCC). Um total de 216 poedeiras comerciais Hisex White foi distribuído ao acaso em seis tratamentos, com seis repetições de seis aves. Os tratamentos consistiram em: ração sem promotor de desempenho (PD); ração com PD e rações sem PD e adição de níveis crescente de LCC (0,25; 0,50; 0,75 e 1,00%). A adição de LCC na ração não influenciou nos parâmetros bioquímicos do sangue (ácido úrico, creatinina, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, colesterol total, HDL, LDL e triglicerídeos), na atividade enzimática (superóxido dismutase e grupos sulfidrílicos não-protéicos) nos órgãos (fígado, ovário, magno e útero), na peroxidação dos lipídeos do soro sanguíneo, fígado, magno e útero, nas variáveis de desempenho e nas características dos ovos. No entanto, os níveis de 0,75% e 1,00% de LCC proporcionaram menor valor de TBARS no ovário das aves, enquanto, o tratamento sem promotor de desempenho proporcionou maior valor. A cor da gema pelo leque colorimétrico foi superior para os tratamentos sem o PD e com 0,75% de LCC na ração e inferior no tratamento com PD. Pela análise de regressão, houve efeito quadrático significativo dos níveis de inclusão de LCC sobre a coloração da gema medida pelo leque colorimétrico da DSM, com o melhor nível estimado para 0,62%. O componente de cor a* foi superior no nível de 0,50% de LCC, enquanto o tratamento com o PD obteve o menor valor. Foi observado efeito quadrático na oxidação lipídica na gema do ovo recém-posto, atingindo o mínimo de 0,58% de LCC na ração. Na comparação entre as médias o nível de 0,75% de LCC apresentou menor valor de TBARS, enquanto os tratamentos com PD, sem PD e com o nível de 1,00% de LCC apresentaram maiores valores de TBARS. A adição de até 1% do LCC, como fonte de ácido anacárdico na ração das poedeiras, não influencia os parâmetros bioquímicos do sangue, a atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD) e grupos sulfidrílicos não-protéicos (NP-SH) no fígado, ovário magno e útero, o desempenho e a qualidade de ovos, mas melhora a cor da gema e, a partir da inclusão de 0,75% de LCC, reduz a peroxidação lipídica no ovário, sendo o nível de 0,75% de LCC efetivo em reduzir a oxidação lipídica das gemas frescas.

Submitted by DENISE APARECIDA CHICONATO (denise.ac@hotmail.com) on 2016-02-04T14:10:02Z No. of bitstreams: 1 Tese_Denise_Aparecida_Chiconato.pdf: 1322746 bytes, checksum: 5a673f4bca29c82501e188fb0ce8d28d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-05T12:07:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 chiconato_da_dr_jabo.pdf: 1322746 bytes, checksum: 5a673f4bca29c82501e188fb0ce8d28d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-05T12:07:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 chiconato_da_dr_jabo.pdf: 1322746 bytes, checksum: 5a673f4bca29c82501e188fb0ce8d28d (MD5) Previous issue date: 2016-01-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A cana-de-açúcar é uma cultura mundialmente importante. O Brasil é o maior produtor mundial de cana-de-açúcar e se destaca na comercialização e exportação de açúcar e etanol originados a partir desta cultura. Os diferentes estresses abióticos alteram negativamente o desenvolvimento das plantas e, entre os estresses, a salinidade de solos se apresenta pela grave redução de produtividade, sendo o principal fator estressante em regiões de clima árido e semiárido. Este trabalho objetivou verificar os efeitos do NaCl sobre o desenvolvimento de plantas jovens de cana-de-açúcar, cultivares SP 81-3250 e IAC 87-3396, mediante o estudo de variáveis fisiológicas-bioquímicas: (I) os osmoprotetores prolina, glicina betaína e sacarose, (II) a ocorrência de alterações nutricionais pela relação Na+/K+, (III) a peroxidação lipídica (IV) a influência do NaCl na atividade da enzima redutase do nitrato; (V) o efeito do estresse salino nas trocas gasosas; (VI) o crescimento de parte aérea e raízes das diferentes cultivares de cana-de-açúcar sob estresse salino. Para tanto, foram utilizadas quatro concentrações de NaCl (0, 40, 80 e 160 mM) e realizadas as seguintes avaliações: teores de Na+ e K+ nas folhas e raízes, os osmólitos compatíveis prolina, glicina betaína e sacarose, potencial hídrico, a peroxidação lipídica, atividade da enzima redutase do nitrato, trocas gasosas, clorofilas totais, rendimento quântico do FSII e crescimento de parte aérea e raiz aos 15 e 30 dias de desenvolvimento após aplicação do estresse. A partir dos resultados, observou-se maior suscetibilidade das plantas da cv. IAC 87-3396 pelo maior acúmulo de Na+ e relação Na+/K+, maior peroxidação lipídica pelo acúmulo de MDA e maior efeito negativo sobre as trocas gasosas. Ambas as cultivares apresentaram acúmulo de prolina sob estresse, porém, plantas da cv. SP 81-3250 apresentaram, além de mais rápido acúmulo deste aminoácido, menor peroxidação lipídica e crescimento superior. Sob estresse salino severo a cv. IAC 87-3396 apresenta maior suscetibilidade. / Sugarcane is a globally important crop. Brazil is the largest producer of sugarcane and stands out in the marketing and exportation of sugar and ethanol derived from this culture. The various abiotic stresses adversely change plant growth and between the stresses, soil salinity is presented by the severe reduction in productivity, it is the main stressor in arid and semi-arid climates. This study aimed to verify the effects of NaCl on the development of sugarcane young plants, SP 81- 3250 and IAC 87-3396 cultivars, through the study of physiological-biochemical variables: (I) the osmoprotectors proline, glycine betaine and sucrose, (II) the occurrence of nutritional changes the ratio Na+/K+ (III) lipid peroxidation (IV) effect of NaCl in the activity of nitrate reductase enzyme; (V) the effect of salt stress on gas exchange; (VI) the growth of shoots and roots of the sugarcane cultivars under salt stress. Thus, it was used four concentrations of NaCl (0, 40, 80 and 160 mM) and made the following assessments: Na+ and K+ accumulation in the leaves and roots, compatible osmolytes: proline, glycine betaine and sucrose, water potential, peroxidation lipid, activity of nitrate reductase enzyme, gas exchange, total chlorophyll, quantum yield of PSII and shoot and root growth at 15 and 30 days of development after stress application. The results showed higher susceptibility of the cv. IAC 87-3396 by higher accumulation of Na+ and Na+/K+ ratio, increase in lipid peroxidation by MDA accumulation and greater negative effect on gas exchange. Both cultivars showed proline accumulation under stress, however, the cv. SP 81- 3250 showed in addition faster accumulation of this amino acid, reduced lipid peroxidation and higher growth. Under severe salt stress cv. IAC 87-3396 is more susceptible.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Chronic intake of diets containing high proportion of glucose, sucrose or fat promotes the development of insulin resistance and type 2 Diabetes mellitus. Furthermore, high levels of glucose can produce permanent chemical alterations in proteins and lipid peroxidation. δ-Aminolevulinate dehydratase (δ-ALA-D), which is the second enzyme in the heme pathway, is a sulfhydryl-containing enzyme highly sensitive to the presence of pro-oxidants elements and has been found inhibited in diabetics. Thus, the present study was designed to evaluate the effects of hyperglycidic and hyperlipidic diets on the lipid peroxidation and δ-ALA-D activity in different tissues of mice. High-glucose consumption, during 25 weeks, caused a significant increase in plasma glucose and triglyceride levels, TBARS content in kidney and liver, and a decrease in hepatic δ-ALA-D activity in relation to high-starch diet-fed animals. Blood HbA1c level and TBARS concentrations (liver, kidney, and brain) were significantly higher in mice fed the high-fat diet compared with those fed the high-starch diet, after 16 weeks. δ-ALA-D activity (liver, kidney, and brain) of mice fed the high-fat diet was significantly lower than those of mice fed the high-starch diet. Furthermore, positive correlations were found between the HbA1c and TBARS levels and negative correlations were found between the HbA1c levels and δ-ALA-D activity in all the studied tissues. The effects of short-term high-sucrose consumption (4 weeks) on sub-acute cadmium treatment also were analyzed. There was a significant increase in TBARS levels (spleen and liver) in cadmium and high-sucrose plus cadmium-treated mice. Testicular δ-ALA-D activity of cadmium and sucrose plus cadmium-treated animals was significantly inhibited, whereas the enzyme activity increased in blood and spleen. Also, Na+/K+-ATPase activity was significantly decreased in brain and kidney of sucrose plus cadmium-treated animals. High-glucose or high-sucrose consumption, during 30 weeks, caused an important increase in body weight, abdominal fat index, and plasma glucose levels; and, a positive correlation was observed between the abdominal fat index and blood glucose levels. TBARS levels were significantly increased in brain and kidney of both high-glucose and high-sucrose fed mice. There was a significant inhibition of the δ- ALA-D activity in blood, brain, kidney, and spleen of both high-glucose and highsucrose- fed mice. The aged animals had reduced enzyme activity (kidney and spleen) and increased TBARS levels (kidney, liver) in relation to young mice. DTTreactivation of δ-ALA-D of high-glucose and high-sucrose groups was significantly elevated in relation to control, indicating a more oxidative status of this enzyme. This fact also was observed as control, high-glucose, and high-sucrose groups were compared to young mice. In general, the results of this study indicate that consumption of high-glucose, high-glucose, and high-fat diet promotes oxidative stress related to hyperglycemia, which in turn can stimulate glycation and oxidation of proteins leading to δ-ALA-D inhibition in mice. Furthermore, high-sucrose consumption and sub-acute cadmium treatment have interactive effects on cerebral and renal Na+/K+-ATPase, showing that a short-term intake of high quantity of sucrose can aggravate the toxicity of Cd2+. Importantly, δ-ALA-D activity alterations found in this work stated this enzyme as a potential target for screening the physiologic or pathologic protein glications and oxidations caused by both Diabetes mellitus and aging. / A ingestão crônica de dietas com alto teor de glicose, sacarose e lipídios promove o desenvolvimento de resistência à insulina e DM tipo 2. Além disso, altos níveis de glicose podem produzir alterações químicas permanentes em proteínas e peroxidação lipídica. A enzima sulfidrílica δ-ALA-D, a segunda enzima da rota de síntese do heme, é altamente sensível a elementos pró-oxidantes e sua atividade pode estar inibida em diabéticos. Desta forma, este estudo foi designado para avaliar os efeitos de dietas hiperglicídicas e hiperlipídicas sobre os níveis de peroxidação lipídica e a atividade da enzima δ-ALA-D em diferentes tecidos de camundongos. O consumo de uma dieta rica em glicose, durante 25 semanas, causou um aumento significativo nos níveis plasmáticos de glicose e triglicerídios, na quantidade de TBARS no rim e no fígado, e um decréscimo na atividade da δ-ALA-D hepática quando comparado ao consumo de uma dieta rica em amido. O nível sanguíneo de HbA1c e as concentrações hepática, renal, e cerebral de TBARS foram mais altos em camundongos alimentados com uma dieta rica em gordura do que naqueles alimentados com uma dieta rica em amido, após 16 semanas de tratamento. As atividades hepática, renal e cerebral da δ-ALA-D também foram menores nos camundongos alimentados com a dieta rica em gordura. Além disso, foi encontrada uma correlação positiva entre os níveis de HbA1c e a concentração de TBARS e uma correlação negativa entre os níveis de HbA1c e a atividade da δ-ALA-D em todos os tecidos analisados. Os efeitos do alto consumo de sacarose (durante 4 semanas) sobre um tratamento sub-agudo com cádmio também foram analisados. Houve um aumento nos níveis de TBARS no baço e no fígado dos grupos tratados com cádmio ou sacarose + cádmio. A atividade da δ-ALA-D testicular dos animais tratados com cádmio ou sacarose + cádmio foi inibida, enquanto houve um aumento na atividade desta enzima no sangue e no baço dos animais. Além disso, a atividade da Na+/K+- ATPase diminuiu no cérebro e no rim dos animais tratados com sacarose + cádmio. O consumo de dietas ricas em glicose e sacarose, durante 30 semanas, aumentou o peso corporal, o índice de gordura abdominal e a glicemia; e, uma correlação positiva foi observada entre o índice de gordura abdominal e os níveis sanguíneos de glicose. Os níveis de TBARS também foram elevados no cérebro e no rim e houve uma inibição na atividade da δ-ALA-D no sangue, no cérebro, no rim e no baço de ambos os grupos. Além disso, os grupos tratados tiveram redução na atividade da δ-ALA-D e níveis elevados de TBARS em relação a animais jovens. O DTT, o qual reduz pontes dissulfeto, aboliu o efeito inibitório das dietas sobre a atividade da δ-ALA-D; e, a reativação da δ-ALA-D pelo DTT nos grupos tratados com glicose e sacarose foi elevada em relação ao controle, indicando um status mais oxidativo desta enzima. Isto também foi observado quando os grupos tratados foram comparados com camundongos jovens. De uma forma geral, os resultados deste estudo indicam que o consumo de dietas ricas em glicose, sacarose e gordura promove um estresse oxidativo relacionado à hiperglicemia, o que poderia estimular a glicação e a oxidação de proteínas e inibir a δ-ALA-D em camundongos. Nossos dados também indicam que o alto consumo de sacarose, mesmo por um curto período, pode agravar a toxicidade do cádmio sobre camundongos. Especificamente, as alterações na atividade da δ- ALA-D encontradas nesse trabalho colocam esta enzima como um alvo em potencial para acompanhar as oxidações fisiológicas ou patológicas causadas tanto pelo DM quanto pelo envelhecimento.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-01Bitstream added on 2014-06-13T20:45:04Z : No. of bitstreams: 1 formariz_tp_dr_arafcf.pdf: 7691525 bytes, checksum: 94043336bdc9deef558a861d71f08c56 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Dependendo da composição, uma mistura de tensoativos, óleo e água podem formar agregados supramoleculares com diferentes estruturas, que por sua vez podem influenciar significativamente na velocidade e no perfil de liberação de fármacos. Neste trabalho sistemas microemulsionados contendo Óleo de Rícino Polioxil-40-Hidrogenado (ORPH), Fosfatidilcolina de Soja (FS) e Oleato de Sódio (OS) como tensoativos, Colesterol (CHO) como fase oleosa e tampão Tris-HCl 0,01M pH 7,2 como fase aquosa, foram estudados. Microemulsões (ME) com e sem o fármaco antitumoral doxorrubicina (DOX) foram preparadas e sua microestrutura foi caracterizada por reologia, microscopia de luz polarizada, espalhamento de luz a baixo ângulo (SAXS), difração de raio-X (DRX). Após a caracterização físico-química, avaliou-se a estabilidade física, a toxicidade aguda, os parâmetros bioquímicos com marcadores de cardiotoxicidade (CKMb) e hepatotoxicidade (AST, ALT) e atividade antitumoral “in vivo” da DOX veiculada nas ME. Os ensaios reológicos revelaram que o comportamento tixotrópico das amostras é dependente da sua composição. As medidas de microscopia de luz polarizada, SAXS e DRX indicam que o aumento da proporção de CHO/Sistema tensoativo permite à cristalização do colesterol em fases polimorfas as quais restrigem a mobilidade das moléculas de DOX na fase interna da ME. Esses resultados também revelam que o aumento da concentração de colesterol na mistura fase oleosa/sistema tensoativo permite a formação de estruturas ordenadas com arranjos lamelares e cristais de CHO. Os estudos de estabilidade mostraram que a inclusão do OS a mistura tensoativa (EU/FS) favorece a estabilidade da ME. Os experimentos de toxicidade aguda (ratos Wistar e camundongos Swiss) mostraram que a DOX-ME apresentaram uma dose letal média (DL50) maior do que a forma farmacêutica... / Depending on the composition, the mixture of surfactant, oil and water, may form supramolecular aggregates with different structures which can significantly influence the drug release. In this work several microemulsion (ME) systems containing soya phosphatidylcholine (SPC) and polyoxyethylenglycerol trihydroxystearate 40 (ORPH) and Sodium Oleate (SO) as surfactant, cholesterol (CHO) as oil phase, and 0.01M Tris-HCl pH 7.2 as an aqueous phase were studied. MEs with and without the antitumoral drug doxorubicin (DOX) were prepared. The microstructures of the systems were characterized by rheological behavior, polarized light microscopy, small-angle X-ray scattering (SAXS) and X-ray diffraction (XRD). After the physicochemical characterization, the DOX was incorporated in the microemulsions, its physical stability, acute toxicity, biochemistry parameters with cardiotoxicity (CKMB) and hepatotoxicity (AST, ALT) and “in vivo” antitumoral activity from ME were also evaluated. The rheological behaviour reveals that depending on the composition ME system could exhibit a tixotropic behaviour. The measures of polarized light microscopy, SAXS and XRD showed that the high O/S ratio leads to the crystallization of cholesterol polymorphs phases which restricts the mobility of the DOX molecules into the ME structure. The increase of the cholesterol fraction in the oil phase/surfactant mixture leads to the formation of ordered structures with lamellar arrangements and CHO crystals. The stability studies showed that the OS incorporated in the surfactant mixtures (EU/FS) improves the stability of ME. The acute toxicity experiments (Wistar rats and Swiss mice) showed that the average lethal dose (DL50) of DOX-ME was greater than the DOX free. The biochemistry parameters (CKMB, AST e ALT) results showed that the cardiotoxic and hepatotoxic ...(Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Paulo Cesar Ciarlini. / Banca: Raimundo de Souza Lopes. / Banca: Gisele Fabrino Machado. / Resumo: À semelhança do que ocorre em homens e gatos, o estresse oxidativo associado à insuficiência renal crônica (IRC) canina pode afetar a função dos neutrófilos. Em cães urêmicos com IRC ocorre aumento do estresse oxidativo e os neutrófilos tornam-se menos viáveis e funcionais. Dezoito cães adultos urêmicos com insuficiência renal crônica foram comparados com 10 cães adultos controle. Foram determinados o hemograma, a urinálise, o perfil bioquímico plasmático, a peroxidação lipídica plasmática, a capacidade antioxidante total (CAT) do plasma, a produção de superóxido, a taxa de viabilidade e a apoptose dos neutrófilos. As taxas plasmáticas de uréia (P<0,01), creatinina (p<0,01) e colesterol (p<0,001) de cães urêmicos foram significativamente superiores aos do controle. Em cães com uremia o volume globular (p<0,0001), a densidade urinária (p<0,015) e a peroxidação lipídica plasmática (p<0,001) foram significativamente menores quando comparado aos do grupo controle. Os neutrófilos de cães urêmicos apresentaram uma maior taxa de apoptose espontânea (0,018±0,016 vs 0,30± 0,23, p< 0,001) e induzida com Camptotecina (4,34±3,93 vs 26,29±18,52, p<0,01). Comparado aos do grupo controle, os valores médios da fluorescência gerada pela produção de superóxido dos neutrófilos isolados de cães urêmicos foi menor na presença (162,93±173,09 vs 49,10±41,22, p< 0,001) e na ausência de estimulo com PMA (1182,5± 1253,5 vs 212,9±294,25 p< 0,01). Durante o estresse oxidativo em cães urêmicos portadores de IRC ocorre uma aceleração da apoptose que diminui o número de neutrófilos viáveis e a produção neutrofílica de superóxido. Os mecanismos de como o estresse oxidativo da uremia acelera a apoptose e diminui o metabolismo oxidativo dos neutrófilos em cães permanecem a ser determinados / Abstract: Similar to what occurs in men and cats oxidative stress associated with chronic renal failure (CRF) can affect the function of canine neutrophils. In uremic dogs with CRF is increased oxidative stress and neutrophils become less viable and functional. Eighteen dogs adult uremic patients with chronic renal failure were compared with 10 control adult dogs. We measured the blood count, urinalysis, serum biochemical profile, lipid peroxidation, plasma total antioxidant capacity (TAC) of plasma, the production of superoxide, the rate of viability and apoptosis of neutrophils. Plasma levels of urea (P <0.01), creatinine (p <0.01) and cholesterol (p <0.001) in uremic dogs were significantly above baseline. In dogs with uremia the packed cell volume (p <0.0001), urine specific gravity (p <0.015) and plasma lipid peroxidation (p <0.001) were significantly lower when compared to the control group. Neutrophils in uremic dogs showed a higher rate of spontaneous apoptosis (0.018 ± 0.016 vs. 0.30 ± 0.23, p <0.001) and induced with Camptothecin (4.34 ± 3.93 vs 26.29 ± 18.52, p <0.01). Compared to the control group the mean fluorescence generated by the superoxide production of neutrophils isolated from uremic dogs was lower in the presence (162.93 ± 49.10 vs 173.09 ± 41.22, p <0.001) and in the absence of stimulation with PMA (1182.5 ± 212.9 vs. 1253.5 ± 294.25 p <0.01). During the oxidative stress in uremic dogs with CRF is an acceleration of apoptosis which reduces the number of viable neutrophils and neutrophil production of superoxide. As the mechanisms of oxidative stress in uremia accelerates apoptosis and oxidative metabolism of neutrophils in dogs it remains to be determined / Mestre

O colesterol é um importante componente das membranas celulares em eucariotos superiores, desempenhando papéis estruturais e funcionais. O colesterol possui uma insaturação em sua estrutura sendo, portanto, alvo de oxidação mediada por espécies reativas de oxigênio e/ou nitrogênio. A oxidação não enzimática do colesterol gera, como produtos primários, os hidroperóxidos de colesterol. Tais moléculas, por sua vez, são altamente reativas e podem reagir com metais livres e/ou metaloproteínas, trazendo consequências à celula. Neste sentido, o primeiro capítulo deste trabalho tem como objetivo estudar a reação dos hidroperóxidos de colesterol (ChOOH) com o citocromo c (citc), uma heme proteína envolvida no transporte de elétrons na mitocôndria. Análises de espectroscopia no UV-Vis mostraram que o ChOOH promove o bleaching da banda Soret do citc de uma maneira dose-dependente. Mais ainda, esta reação leva à formação de radicais centrados em carbono tanto na proteína como no lipídeo, sugerindo uma redução homolítica do ChOOH. Como consequências, pode-se observar a oligomerização do citc, um processo que pode influenciar no transporte de elétrons bem como na sinalização para a apoptose. A partir da reação do citc com ChOOH podem surgir, direta ou indiretamente, outras espécies reativas, como aldeídos, cetonas e epóxidos. Dentre estas, destacam-se os aldeídos de colesterol, em particular o colesterol secoaldeído (CSec) e o carboxialdeído (ChAld), uma vez que foram encontrados elevados em placas ateroscleróticas e em tecidos cerebrais de pacientes com doenças neurodegenerativas. Tais espécies podem reagir com resíduos de aminoácidos provocando alterações estruturais e funcionais em proteínas. Neste sentido, o segundo capítulo deste trabalho tem como objetivo estudar a reação do ChAld com citc. Usando modelos mimétivos de membrana e espectrometria de massas, foi mostrado que o ChAld modifica covalentemente o citc por um mecanismo consistente com a formação de bases de Schiff. Tal modificação ocorre preferencialmente em resíduos de lisina que interagem com a membrana. Estas modificações influenciam na afinidade do citc pela membrana, aumentando sua aderência, o que pode ter influência no transporte de elétrons e sinalização para a apoptose. No terceiro e último capítulo deste trabalho nós buscamos uma ferramente analítica que permitisse analisar modificação de proteínas promovidas por produtos de oxidação de colesterol e outros esteróis. Em um estudo realizado em colaboração com o grupo do professor Porter na Universidade de Vanderbilt, utilizamos ensaios baseados em click chemistry para buscar proteínas modificadas. Para isso, foram sintetizados derivados de colesterol e 7-deidrocolesterol (7-DHC, precursor imediato do colesterol) contendo um grupo alquinil na sua cadeia lateral. Este grupo pode ser ligado a um grupo azida por meio de uma reação de cicloadição, em um processo conhecido como click chemistry. Após a síntese e caracterização dos derivados lipídicos contendo o grupo alquinil na cadeia lateral, células Neuro2a foram tratadas com o alquinil-7-DHC e o alquinil-colesterol para averiguar seu metabolismo. Análises por HPLC-MS/MS mostraram que ambos derivados contendo o grupo alquinil foram metabolisados e convertdos nos respectivos ésteres. Usando um modelo celular para a doença conhecida como Sindrome de Smith-Lemli-Opitz (SLOS), doença caracterizada pela deficiência na enzima 7-deidrocolesterol redutase, foi mostrado que o acúmulo característico de 7-DHC nos pacientes pode levar a uma maior modificação de proteínas promovidas por seus derivados, o que pode contribuir para o desenvolvimento da doença. / Cholesterol is an important component of eukaryotic cellular membranes, where it has an influence in the fluidity and stability. Due to the presence of a double bond in its structure, cholesterol can be oxidized by reactive oxygen and nitrogen species. This non-enzymatic oxidation generates, as primary products, cholesterol hydroperoxides. Such molecules, in turn, are highly reactive and can react with free metal ions and/or metalloproteins, affecting cell metabolism. Therefore, the first chapter of the present study aims to investigate the reaction of cholesterol hydroperoxides (ChOOH) with cytochrome c (cytc), a heme protein involved in the mitochondrial electron transport. Spectroscopic analyses in the UV-Vis region showed that ChOOH induces a dose-dependent bleaching of cytc\'s Soret band. In addition, this reaction leads to the formation of carbon-centered radicals on both protein and lipid, suggesting a homolytic reduction of ChOOH. As consequences, cytc undergoes oligomerization, a process that can influence electron transport and apoptosis signaling. The reaction of cytc and ChOOH can produce, directly or indirectly, reactive species such as epoxides, aldehydes and ketones. Among them, cholesterol aldehydes, such as cholesterol secoaldehyde (CSec) and cholesterol carboxyaldehyde (ChAld), are of particular interest, since they were previously found elevated in atherosclerotic plaques and brain tissue of patients bearing neurodegenerative diseases. These species can also react with amino acid residues leading to protein denaturation and malfunction. With that in mind, the second chapter of this study aims to investigate the reaction of ChAld and cytc. Using mimetic membrane models and mass spectrometry analyses, we showed that ChAld covalently modifies cytc through a mechanism consistent with the formation of Schiff base adducts. Such modification occurs mostly at lysine residues that are known to interact with the membrane. The modifications have an influence in the affinity of cytc to the membrane, where they increase its binding to the membrane, a process that could affect the electron transport and apoptosis signaling. In the last and third chapter of this study we wanted an analytical tool that allowed the investigation of protein adduction promoted by cholesterol and other sterols-derived oxidation products. In a study performed in collaboration with the Porter group from Vanderbilt University, we used analyses based on click chemistry to search for protein adduction. To address that, we first synthesized derivatives of cholesterol and 7-dehydrocholesterol (7-DHC, the immediate precursor of cholesterol) containing an alkynyl group in the side chain. The alkynyl group can be ligated to an azide group through a cycloaddition reaction, in a process known as click chemistry. After the synthesis and characterization of alkynyl derivatives, Neuro2a cells were treated with alkynyl-7-DHC and alkynyl-cholesterol to check their metabolism. HPLC-MS/MS analyses showed that both alkynyl derivatives are metabolized and converted into their respective esters. In addition, using a cell model for Smith-Lemli-Optiz Syndrome (SLOS), a disease characterized by the deficiency in the dehydrocholesterol reductase 7, we showed that the characteristic accumulation of 7-DHC in SLOS patients might be associated with protein adduction promoted by its oxidation products, which might contribute to the development of the disease.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-23Bitstream added on 2014-06-13T20:08:22Z : No. of bitstreams: 1 silva_acra_me_araca.pdf: 170186 bytes, checksum: 3af21aa14d120cf2727d86a2dd2a16b9 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / À semelhança do que ocorre em homens e gatos, o estresse oxidativo associado à insuficiência renal crônica (IRC) canina pode afetar a função dos neutrófilos. Em cães urêmicos com IRC ocorre aumento do estresse oxidativo e os neutrófilos tornam-se menos viáveis e funcionais. Dezoito cães adultos urêmicos com insuficiência renal crônica foram comparados com 10 cães adultos controle. Foram determinados o hemograma, a urinálise, o perfil bioquímico plasmático, a peroxidação lipídica plasmática, a capacidade antioxidante total (CAT) do plasma, a produção de superóxido, a taxa de viabilidade e a apoptose dos neutrófilos. As taxas plasmáticas de uréia (P<0,01), creatinina (p<0,01) e colesterol (p<0,001) de cães urêmicos foram significativamente superiores aos do controle. Em cães com uremia o volume globular (p<0,0001), a densidade urinária (p<0,015) e a peroxidação lipídica plasmática (p<0,001) foram significativamente menores quando comparado aos do grupo controle. Os neutrófilos de cães urêmicos apresentaram uma maior taxa de apoptose espontânea (0,018±0,016 vs 0,30± 0,23, p< 0,001) e induzida com Camptotecina (4,34±3,93 vs 26,29±18,52, p<0,01). Comparado aos do grupo controle, os valores médios da fluorescência gerada pela produção de superóxido dos neutrófilos isolados de cães urêmicos foi menor na presença (162,93±173,09 vs 49,10±41,22, p< 0,001) e na ausência de estimulo com PMA (1182,5± 1253,5 vs 212,9±294,25 p< 0,01). Durante o estresse oxidativo em cães urêmicos portadores de IRC ocorre uma aceleração da apoptose que diminui o número de neutrófilos viáveis e a produção neutrofílica de superóxido. Os mecanismos de como o estresse oxidativo da uremia acelera a apoptose e diminui o metabolismo oxidativo dos neutrófilos em cães permanecem a ser determinados / Similar to what occurs in men and cats oxidative stress associated with chronic renal failure (CRF) can affect the function of canine neutrophils. In uremic dogs with CRF is increased oxidative stress and neutrophils become less viable and functional. Eighteen dogs adult uremic patients with chronic renal failure were compared with 10 control adult dogs. We measured the blood count, urinalysis, serum biochemical profile, lipid peroxidation, plasma total antioxidant capacity (TAC) of plasma, the production of superoxide, the rate of viability and apoptosis of neutrophils. Plasma levels of urea (P <0.01), creatinine (p <0.01) and cholesterol (p <0.001) in uremic dogs were significantly above baseline. In dogs with uremia the packed cell volume (p <0.0001), urine specific gravity (p <0.015) and plasma lipid peroxidation (p <0.001) were significantly lower when compared to the control group. Neutrophils in uremic dogs showed a higher rate of spontaneous apoptosis (0.018 ± 0.016 vs. 0.30 ± 0.23, p <0.001) and induced with Camptothecin (4.34 ± 3.93 vs 26.29 ± 18.52, p <0.01). Compared to the control group the mean fluorescence generated by the superoxide production of neutrophils isolated from uremic dogs was lower in the presence (162.93 ± 49.10 vs 173.09 ± 41.22, p <0.001) and in the absence of stimulation with PMA (1182.5 ± 212.9 vs. 1253.5 ± 294.25 p <0.01). During the oxidative stress in uremic dogs with CRF is an acceleration of apoptosis which reduces the number of viable neutrophils and neutrophil production of superoxide. As the mechanisms of oxidative stress in uremia accelerates apoptosis and oxidative metabolism of neutrophils in dogs it remains to be determined

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA031.pdf: 1145474 bytes, checksum: c0b1de06e1b4bd1edef0960f67c23580 (MD5) Previous issue date: 2010-01-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Different formulations from a same drug can show different pharmacodynamic effects. So, this crossover study aimed to evaluate the hemodynamic and metabolic effects of a new nanoemulsion propofol formulation in comparison to the lipidic emulsion commercially available. Six female mongrel dogs, average weight of 14.8±1.2kg were used. The animals were alocated into two groups: GNANO (n=6), where the animals received nanoemulsion propofol for induction and maintenance of anesthesia, and GEMU (n=6), where the lipidic emulsion of propofol was used. In both groups a dose sufficient for intubation were administered, and for maintenance a rate of 0.4mg kg-1 min-1, intravenous, during a 90-minute period. 100% oxygen was delivered for all animals, and they were maintained at spontaneous breathing. Parameters were measured at baseline (M-10), immediately after induction (M0), and at every 15 minute interval until a 90 minute infusion period is achieved. The necessary dose for intubation was from 8.3±1.0mg kg-1 at GNANO and 7.9±0.4mg kg-1 at GEMU. Both formulations presented a cardiovascular depression, reducing the systolic (SAP), mean (MAP) and dyastolic (DAP) arterial pressures by aproximatelly 30%. In addition, the nanoemulsion presented a reduction of approximately 22% of cardiac index (CI), associated with a 25% reduction of the stroke volume index (SVI). Both formulations showed a slight acidemia, due to a sudden increase at the carbon dioxide concentration after induction of anesthesia. However, none of the formulations presented a significant respiratory depression. There were no clinically important changes related to renal and hepatic function, as well as in relation to haematological parameters. 6.5±3.9, 38.8±8.4, 54.7±25.3 e 56.3±23 minutes at GNANO and 16.5±7.6, 42.5±23.8, 54.0±19 e 60.5±21 minutes at GEMU were the necessary period for extubation, sternal recumbency, deambulation and total recovery, respectively. We observed the occurrence of adverse neurological effects, characterized by opisthotonos, in approximatelly 33% of the animals in both groups. In conclusion, the propofol nanoemulsion presented clinical, hemodynamic, respiratory, hemogasometric and biochemical characteristics similar to the lipid emulsion formulation commercially available, and both are appropriated and safe for the induction and maintenance of anesthesia in healthy dogs / Diversos estudos demonstram que diferentes formulações de um mesmo fármaco podem apresentar efeitos farmacodinâmicos distintos. Frente a isto, objetivou-se com este estudo avaliar os efeitos hemodinâmicos e metabólicos de uma nova formulação de propofol em nanoemulsão, em comparação à emulsão lipídica atualmente disponível. Foram utilizadas seis cadelas hígidas, mestiças, 2 a 4 anos, com peso médio de 14,8±1,2kg, sendo controle delas mesmas. Os animais foram alocados em dois grupos: Grupo Nanoemulsão (GNANO, n=6), no qual os animais receberam propofol em nanoemulsão para indução e manutenção anestésica e Grupo Emulsão (GEMU, n=6), no qual se utilizou a emulsão lipídica de propofol. Em ambos os grupos foi administrada uma dose de indução suficiente para intubação, e a manutenção foi realizada com 0,4mg/kg/min, pela via intravenosa, por 90 minutos. Todos os animais receberam oxigênio a 100% através de um sistema sem reinalação de gases e foram mantidos sob ventilação espontânea. Os parâmetros foram avaliados no momento basal (M-10), imediatamente após a indução (M0), e posteriormente a cada 15 minutos até 90 minutos de infusão (M90). A dose necessária para indução foi de 8,3±1,0mg/kg no GNANO e 7,9±0,4mg/kg no GEMU. Ambas as formulações apresentaram depressão cardiovascular, com uma redução máxima de aproximadamente 30% das pressões arterial sistólica (PAS), média (PAM) e diastólica (PAD). Além disso a nanoemulsão apresentou uma redução de aproximadamente 22% do índice cardíaco (IC), associada à uma redução de cerca de 25% do índice sistólico (IS). Ambas as formulações apresentaram uma leve acidemia, decorrente de um aumento súbito da concentração de CO2 após a indução. Entretanto, nenhuma das formulações apresentou depressão respiratória significativa. Não houve alterações de importância clínica referente às funções renal e hepática, bem como em relação aos parâmetros hematológicos. Os tempos de extubação, decúbito esternal, deambulação e de recuperação total foram de 6,5±3,9, 38,8±8,4, 54,7±25,3 e 56,3±23 minutos no GNANO e de 16,5±7,6, 42,5±23,8, 54,0±19 e 60,5±21 minutos no GEMU, respectivamente. Observou-se a ocorrência de efeitos adversos de cunho neurológico, caracterizados por opistótono em aproximadamente 33% dos animais em ambos os grupos. Conclui-se que o propofol em nanoemulsão apresenta características clínicas, hemodinâmicas, respiratórias, hemogasométricas e bioquímicas semelhantes à formulação em emulsão lipídica comercialmente disponível, sendo ambas adequadas e seguras para a indução e manutenção anestésica em cães hígidos

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA067.pdf: 666461 bytes, checksum: 5e9cce1bde4afb2aa807b32906354bd9 (MD5) Previous issue date: 2010-10-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / It is clear that different formulations of propofol have differentiated pharmacokinetic and pharmacodynamic profiles. Thus, this study aimed to evaluate the cardiovascular, respiratory, haemogasometric and metabolic effects, as well as observe possible side effects of the new formulation of propofol in nanoemulsion compared to the propofol in lipid emulsion commercially available. For this purpose, 12 healthy female cats, average weight of 2.6 ± 0.4 kg, were assigned into two groups: Nanoemulsion (NAG, n = 6) and Emulsion (EMG, n = 6), in which the animals received propofol in nanoemulsion or in lipid emulsion, respectively, as induction agent, both at a sufficient dose for intubation. Immediately after induction, the animals were intubated and supplemented with 100% oxygen through a nonrebreathing circuit. Subsequently, the propofol infusion was started with the respective formulation, at a constant rate of 0.3 mg kg-1 min-1, and maintained for 90 minutes. The parameters were evaluated at the following moments: T-10, T0, T15, T30, T45, T60, T75, T90, corresponding to the baseline evaluation and 0, 15, 30, 45, 60, 75 and 90 minutes after starting the infusion, respectively. Data were compared using repeated measures ANOVA (data over time) followed by the Student Newman Kews test when justified or t-tests as appropriate (significance taken as p&#8804;0.05). The dose required for induction was 9.5 ± 1.3 mg kg-1 and 10 ± 1 mg kg-1 for EMG and NAG, respectively. In the EMG, a reduction was observed in the heart rate, respiratory rate (f), pH, and systolic (SAP), diastolic (DAP) and mean (MAP) arterial pressure in all the moments when compared to the basal evaluation. The f decreased only in T90, and the pH in the T0, T15 and T90, when using the nanoemulsion. The PaCO2, PaO2 and SaO2 remained higher during all the infusion period in both groups in comparison to the baseline. HCO3 increased in all the moments in the EMG and in the T15, T30, T60 and T90 in the NAG. The CVP was lower than the baseline only in T60 and T90 in the NAG. Between groups, lower values occurred in all the moments evaluated for SAP, MAP, DAP and pH in the EMG in comparison to the NAG. The f was lower from T30 to T75 in the GEM, while the PaCO2 was higher between T15 and T90 in this group. No significant alterations occurred to the BIS values. The time necessary for extubation, sternal recumbency, ambulation and total recovery were 40.6±30.7, 91±37.5, 134.5±54.5, and 169.1±55.4 minutes in the NAG and 68.8±37.3, 133.3±85.3, 171.3±77.1, and 233.1±60.6 minutes in EMG. The presence of undesired effects directly related to the use of propofol was not observed for any of the formulations. There were no clinically important changes regarding the hematological parameters and the renal function, however, values higher than the physiological ones were noted for the enzyme alanine aminotransferase (ALT) from 12 to 72 hours in the EMG and from 48 to 72 hours in the NAG. We conclude that the propofol in nanoemulsion presents clinical and biochemical characteristics similar to the lipid emulsion commercially available. However, the nanoemulsion formulation provides greater cardiovascular and respiratory stability for both induction and continuous rate infusion in healthy cats / Sabe-se que diferentes formulações de propofol apresentam padrão farmacocinético e farmacodinâmico diferenciados. Desta forma, objetivou-se avaliar os efeitos cardiovascular, respiratório, hemogasométrico e metabólico, bem como os possíveis efeitos colaterais da nova formulação de propofol em nanoemulsão, em comparação ao propofol em emulsão lipídica comercialmente disponível. Para tal, foram utilizadas 12 gatas, hígidas com peso médio de 2,6±0,4kg, as quais foram alocadas em dois grupos: Grupo Nanoemulsão (GNA, n=6), os quais receberam como agente indutor propofol em nanoemulsão e Grupo Emulsão (GEM, n=6) que receberam propofol em emulsão lipídica, ambos em dose suficiente para intubação. Imediatamente após, os animais foram intubados e suplementados com oxigênio 100%, por meio de sistema sem reinalação de gases. Em ato contínuo, iniciou-se a infusão de propofol com a respectiva formulação na taxa de 0,3mg/kg/min., durante 90 minutos. Os parâmetros foram avaliados em: T-10, T0, T15, T30, T45, T60, T75, T90, correspondentes a: basal, 0, 15, 30, 45, 60, 75 e 90 minutos após início da infusão, respectivamente. Para análise estatística foi utilizado a Análise de Variância (ANOVA) com repetições múltiplas entre os tempos do mesmo grupo e para comparação entre grupos, o teste t de Student (P<0,05). A dose necessária para indução foi de 9,5±1,3mg/kg e 10±1mg/kg para GNA e GEM, respectivamente. No GEM, houve redução, em todos os momentos, quando comparados ao basal, da freqüência cardíaca, freqüência respiratória (f), pH e das pressões arteriais sistólica (PAS), diastólica (PAD) e média (PAM). A f do GNA reduziu apenas em T90 e o pH em T0, T15 e T90. A PaCO2, PaO2, e SaO2 aumentaram em ambos os grupos, em todos os momentos quando comparados ao basal. O HCO3 aumentou em todos os momentos do GEM e em T15, T30, T60 e T90 no GNA. A PVC foi menor apenas em T60 e T90 em relação ao basal, no GNA. Entre grupos, constatou-se redução, em todos os momentos, para os valores de PAS, PAM, PAD e pH no GEM em relação ao GNA, a f do GEM foi menor de T30 até T75 em relação ao GNA. A PaCO2 do GEM foi maior de T15 até T90. Não foi observada diferença significativa entre os valores do índice biespectral (BIS). Os tempos de extubação, decúbito esternal, deambulação e de recuperação total foram de 40,6±30,7; 91±37,5; 134,5±54,5; e 169,1±55,4 minutos no GNA e de 68,8±37,3; 133,3±85,3; 171,3±77,1; e 233,1±60,6 minutos no GEM, respectivamente. Não foi constatada a presença de efeitos colaterais diretamente relacionados ao uso do propofol em ambas as formulações. Não foram observadas alterações de importância clínica referentes aos parâmetros hematológicos e função renal. Observou-se aumento, acima do limite fisiológico, da enzima Alanina Aminotransferase (ALT) observados de 12 às 72h no GEM e de 48 às 72h no GNA. Conclui-se que o propofol em nanoemulsão apresenta características clínicas e bioquímicas semelhantes à formulação em emulsão lipídica comercialmente disponível. A formulação em nanoemulsão proporciona maior estabilidade cardiovascular e respiratória para indução e infusão contínua em gatas hígidas