Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

La stéatose hépatocytaire, définie par l’accumulation de triglycérides dans les hépatocytes, est fréquente au cours de l’hépatite chronique C. La stéatose peut être induite par le VHC de génotype 3 et constitue alors une lésion cytopathique virale au cours de l’hépatite chronique C. Cette observation clinique suggère que la stéatose viro-induite est liée à la fonction d’une ou de plusieurs protéine(s) virale(s) du génotype 3 rarement portée par les protéines correspondantes de génotype non-3. L’objectif de ce travail a été d’identifier des déterminants viraux de la stéatose hépatocytaire viro-induite au cours de l’hépatite chronique C et entrevoir les mécanismes impliqués dans cette pathologie. Des analyses menées sur des séquences de VHC strictement sélectionnés pour leur génotype et leur capacité à induire une stéatose chez les patients atteints d’hépatite chronique C, ont permis de mettre en évidence des déterminants putatifs de la stéatose viro-induite. Des résidus associés au caractère stéatogène ou non stéatogène des séquences de VHC étudiées ont été identifiés dans les régions codant E1, E2 et NS3. Le caractère partiel de la compartimentation de ces mutations nécessite toutefois une étude fonctionnelle de ces séquences pour valider leur pertinence. Le motif FATG164-167 de la protéine de capside, qui a été impliqué dans l’accumulation spécifique de triglycérides par la protéine de capside, se révèle caractéristique du génotype 3 et non associé à un pouvoir stéatogène in vivo. Nous avons examiné, in vitro, selon le génotype de la protéine virale et son association avec une stéatose in vivo, d’une part les interactions entre les gouttelettes lipidiques et les protéines de capside, et d’autre part les changements morphologiques des gouttelettes lipidiques liés à l’expression de la protéine de Capside. Ces travaux montrent que les protéines de Capside de génotypes 1b et 3a sont localisées de manière similaire à la surface des gouttelettes lipidiques indépendamment du caractère stéatogènes de VHC dont elles sont issues. Néanmoins, l’expression de la protéine de capside de génotype 3 est associée à la formation de gouttelettes lipidiques plus grosses et plus nombreuses par rapport à celles de génotype 1b. Ces résultats suggèrent que l’interaction de la protéine de Capside avec les gouttelettes lipidiques pourrait jouer un rôle dans l’induction d’une stéatose par le VHC de génotype 3. L’absence de différences génétique ou fonctionnelle entre les protéines de Capside de génotype 3 issues de VHC stéatogène ou non stéatogène in vivo suggèrent cependant que d’autres protéines virales et/ou facteurs cellulaires doivent certainement être impliqués dans le développement d’une stéatose hépatocytaire chez les patients infectés par un VHC de génotype 3a / Hepatocellular steatosis is common in patients with chronic hepatitis C. Steatosis can be considered as a true cytopathic lesion induced by hepatitis C virus genotype 3, suggesting that one or more viral proteins produced during genotype 3 infection are involved in the steatogenic process, while the same proteins produced during infection by other genotypes are not. Our objective was to identify the viral determinants of HCV-induced steatosis and to understand the underlying mechanisms. Extensive analysis performed on HCV sequences selected on their genotype and their association with in vivo steatosis are revealed putative viral determinants of viral-induced steatosis in E1-E2 and NS3 proteins coding regions. However, we can not rule out the potential role of these positions in HCV-induced steatosis and experimental study should be drawn to explore this issue. In addition, the FATG164-167 motif, which has been implicated in HCV core protein induced steatosis, was constantly present on genotype 3a sequences independently of the original presence or absence of liver steatosis. We examined in vitro interactions between lipid droplets and full-length core protein isolated from patients with HCV genotype 3a infection, with and without steatosis, and from steatosis-free patients infected by hepatitis C HCV 1b. We also examined morphological changes in the lipid droplets according to the HCV genotype and the presence of steatosis in vivo. We showed that the core protein of both HCV genotypes 1b and 3a binds tightly to the surface of intracellular lipid droplets. However, cells transfected with genotype 3a contain more neutral lipids in lipid droplets, and more large lipid droplets, than cells transfected with genotype 1b sequences. This suggests that hepatitis C virus core protein-lipid droplet interaction could play a role in virus-induced steatosis. Importantly, we found no genetic or functional differences between genotype 3a core proteins from patients with and without hepatitis C virus-induced steatosis. This suggests that other viral proteins and/or host factors are involved in the development of hepatocellular steatosis in patients infected by hepatitis C virus genotype 3a

La réaction de carbamylation, comme les réactions de glycation, d’oxydation ou de carbonylation, fait partie des modifications post-traductionnelles non enzymatiques des protéines. Elle correspond à la fixation d’acide isocyanique sur les groupements aminés des protéines et conduit à la formation de produits de carbamylation, dont fait partie l’homocitrulline. Des études in vitro ont mis en évidence le caractère délétère de la carbamylation des protéines sur leur structure et leur fonction. Des études in vivo ont montré l’accumulation tissulaire des produits de carbamylation au cours de l’insuffisance rénale chronique et du vieillissement. Cependant, peu de travaux ont porté sur la carbamylation des protéines intracellulaires.Ce travail a porté sur l’étude de la carbamylation des protéines intracellulaires, leur impact sur la cellule ainsi que leur devenir. De plus, un mécanisme de réparation des protéines carbamylées a été recherché.Nous avons montré, par une approche quantitative et qualitative, que les protéines intracellulaires pouvaient être carbamylées dans des conditions physiologiques et que leur carbamylation était augmentée en présence de cyanate ou d’urée. Nous avons également montré que les cellules étaient capables d’éliminer les protéines carbamylées, en impliquant le protéasome. Un phénomène de décarbamylation a été mis en évidence, ce qui ouvre des possibilités pour la mise en place de stratégies visant à limiter ou à inverser la carbamylation. / The carbamylation reaction, like glycation, oxidation or carbonylation reactions, is a non-enzymatic post-translational modification of proteins. It corresponds to the binding of isocyanic acid to protein amino groups and leads to the formation of carbamylation-derived products (CDPs), such as homocitrulline. In vitro studies have demonstrated the deleterious effect of carbamylation of proteins on their structure and function. In vivo studies have shown tissue accumulation of CDPs during chronic kidney disease and aging. However, studies on the carbamylation of intracellular proteins are lacking.This work was devoted to the study of the carbamylation of intracellular proteins, their impact on cell and their fate. In addition, a mechanism for repairing carbamylated proteins has been investigated.Our results showed, by quantitative and qualitative approaches, that intracellular proteins were carbamylated in physiological conditions and that their carbamylation rate was increased in the presence of cyanate or urea. We also have shown that cells were able to remove carbamylated proteins by a mechanism involving the proteasome. A phenomenon of decarbamylation has been highlighted, which opens up possibilities for the implementation of strategies to limit or reverse carbamylation.

En dehors de l'hypothèse de la cascade amyloïde qui domine l'activité de recherche liée à la maladie d'Alzheimer, d'autres hypothèses ont été proposées pour expliquer la pathogénie de la maladie. Parmi celles-ci, le stress oxydant, le dysfonctionnement mitochondrial ou encore l'altération cholinergique ont été suggérés car ils sont à la base des mécanismes qui apparaissent précocement et contribuent de façon importante à la physiopathologie de la maladie. Notre projet propose d'étudier ces facteurs à travers une évaluation phénotypique histopathologique et neurochimique dans deux mutations du gène PS-1 (souris PS1/A246E et PS1/I213T) caractérisées par une surexpression du peptide Aß-42 sans amyloïdose et des troubles comportementaux peu sévères mimant des stades précoces de la maladie. Une évaluation des bases d'ADN oxydées a permis la mise en évidence d'un dommage oxydatif précoce dans des régions variées pour lesquelles le taux de peptide Aß est généralement augmenté. Des cartographies cérébrales des activités de la cytochrome oxydase et de l'acétylcholinestérase ont servi respectivement à l'étude de la fonction métabolique neuronale et de l'innervation cholinergique. Les modifications d'activité métabolique obtenues ne signent pas d'altération intrinsèque de la cytochrome oxydase mais témoignent de phénomènes compensatoires indépendants du dommage oxydatif tissulaire. Les perturbations cholinergiques sont importantes dans les deux mutations impliquant les circuits d'activation de l'attention et de la mémorisation. / In addition to the amyloid cascade hypothesis, predominant in Alzheimer's disease research, other hypotheses have been proposed to explain its pathogenesis. Among those, oxidative stress, mitochondrial dysfunction, and cholinergic alterations were suggested, based on early onset signs contributing in an important way to the physiopathology. Our project studied these factors via phenotypic evaluation in the context of histopathology and neurochemistry in two PS-1 mutations: PS1/A246E transgenic and PS1/I213T knock-in mice, characterized by overexpressed Aß-42 peptide without amyloidosis, together with mild behavioral impairments mimicking early onset Alzheimer's disease. Both mutants showed oxidative damage, as measured by DNA oxidation in regions with increased Aß. Brain regional cartographies of cytochrome oxidase and acetylcholinesterase reflected respectively neuronal metabolism and cholinergic innervation. There was no intrinsic modulation of cytochrome oxidase but rather compensatory phenomena independent of oxidative damage. Cholinergic alterations were important in each mutation, particularly in circuits associated with selective attention and memory.

Il est connu depuis de nombreuses années que le métabolisme des cellules cancéreuses diffère de celui des cellules saines. La Restriction Calorique (RC) est connue pour prolonger la durée de vie et pour limiter l’oncogenèse. Ainsi, il a été montré que la RC et ses mimétiques comme le 2-deoxyglucose (2DG) augmentent l’efficacité de la chimiothérapie et peuvent aussi induire une immunité anti-tumorale. J’ai pu montrer qu’en régulant le métabolisme via la restriction calorique (ou des mimétiques) nous pouvions moduler l’expression de la protéine anti-apoptotique Mcl-1. Ainsi nous avons établi in vivo et in vitro que la RC restaure la sensibilité des cellules de lymphome à l’apoptose induite par un inhibiteur de Bcl-2/XL, l’ABT-737. Nous avons aussi établi que ces effets sont indépendants de la protéine p53 et/ou des « protéines BH3-only ». La deuxième partie de mon travail a été d’élucider les mécanismes moléculaires mis en place lors de la Chimiothérapie Hyperthermique Intra péritonéale (CHIP) pouvant expliquer les effets bénéfiques observés chez les patients atteints d’une carcinose péritonéale (CP). Une partie de ces bénéfices sont dus à la mise en place d’une immunité anti-tumorale. En utilisant des modèles in vivo et in vitro j’ai mis en évidence l’implication de la protéine du choc thermique 90 (Hsp90) dans l’effet observé. Ainsi, l’inhibition spécifique de la Hsp90 réverse les effets protecteurs de la CHIP, soulignant l’importance de cette protéine dans notre modèle d’immunité anti-tumorale. / The link between cell metabolism and cancer at the cellular level has long been known. Caloric restriction (CR) is known to prolong lifespan and to protect from cancer incidence. The molecular mechanisms involved in these benefic effects have been evaluated and may offer new opportunities for therapeutic intervention. Moreover, CR and CR-mimetics such as 2-deoxyglucose (2DG) has been shown to enhance chemotherapy efficiency and to induce an anti-cancer immune response. During the period of my PhD I demonstrated how the modulation of metabolism through caloric restriction or through its mimetics could significantly reduce the expression of the anti-apoptotic protein Mcl-1 and sensitize lymphoma-bearing mice to apoptosis induced by a Bcl-2/XL inhibitor, ABT-737. We have demonstrated that CR can control Mcl-1 translation and sensitize cells to ABT-737-induced death regardless of the presence or absence of p53 and/or of the main “BH3-only proteins”. Then, I focused on deciphering the molecular mechanisms allowing the Hyper-thermic Intra-Peritoneal Chemotherapy (HIPEC) to be beneficial to patients suffering from peritoneal carcinomatosis. Part of the protective effect was mediated through the induction of an efficient anti-cancer immune response. Next, I showed the involvement of heat shock proteins 90 (Hsp90) in the observed effect. Indeed, when Hsp90 was blocked we lost the protection induced by the HIPEC-treated cells, therefore underling the role of Hsp90 in this HIPEC-dependent induction of anti-cancer immune response.

L'adaptation des micro-organismes à leur environnement dépend à la fois de leurs aptitudes à faire face aux paramètres physico-chimiques propre au fromage et à dégrader les substrats présents dans le milieu, tout en étant en interaction avec d'autres espèces microbiennes. La maîtrise de la dynamique des populations reste un enjeu majeur dans le but de maîtriser les étapes de la fabrication du fromage. Cela permettrait, une fois la flore sélectionnée, de raccourcir le temps d'affinage de manière significative, tout en conservant, voire en améliorant les qualités organoleptiques et sanitaires du fromage. De nombreux travaux ont mis en évidence l'incapacité d'adaptation de la flore inoculée, qui se retrouve en compétition avec la flore indigène de l'environnement fromager. L'objectif de ce travail était de mieux comprendre le métabolisme adaptatif de la levure ubiquitaire du fromage Yarrowia lipolytica. Dans un premier temps, nous avons choisi d'étudier le métabolisme de la levure en mono-culture en se focalisant sur des voies métaboliques clés de l'affinage, le catabolisme du lactate et des acides aminés. La combinaison des techniques moléculaires, microbiologiques, biochimiques et protéomiques a permis de confirmer une réelle préférence de la levure pour les acides aminés, l'absence de ces derniers pouvant provoquer un état de stress oxydant chez Y. lipolytica. De plus, une corrélation entre la consommation d'acides aminés et la production/accumulation d'ammoniac par la levure a été mise en évidence. L'ammoniac aurait un rôle i) dans l'alcalinisation du milieu, une étape essentielle dans la fabrication du fromage pour l'implantation de la flore d'affinage acido-sensible ; ii) de molécule signal entre les levures. Dans un second temps, l'étude de la levure en interaction avec deux bactéries Lactococcus lactis et Staphylococcus xylosus a été réalisée. Une première étape a consisté à comprendre les phénomènes d'interactions dans un milieu chimiquement défini, par une approche ciblée (RT-PCR quantitative) sur des gènes impliqués dans des voies de dégradation du lactate, du pyruvate et des acides aminés. L'étude en culture mixte a permis de mettre en évidence des phénomènes d'interactions entre micro-organismes en termes de croissance, mais également de complémentarité métabolique. En effet, les principaux gènes impliqués dans le catabolisme des acides aminés sont réprimés chez la levure en présence de S. xylosus. De plus, l'expression de la lactate déshydrogénase de la levure est induite par la production de lactate par les deux bactéries. Dans une seconde étape, l'étude de la levure en co-culture a été réalisée dans un milieu modèle fromager, le rétentat. Afin d'obtenir une information complète de l'adaptation métabolique de la levure aux différentes associations, une approche globale par puce à ADN à été retenue. On observe un état de stress oxydatif chez la levure en présence de S. xylosus, ainsi qu'une modification du fonctionnement mitochondriale et de l'expression des gènes de la chaîne respiratoire.

Le nonylphénol (4-n-nonylphénol) et le bisphénol A (4,4'isopropylidène-2-diphénol) sont des perturbateurs endocriniens qui ont été détectés dans des échantillons de sang, d'urine, de tissus adipeux et de lait humain. Ces molécules sont biotransformées en métabolites non-toxiques par un processus de glucuronidation. Plusieurs facteurs, incluant la co-exposition avec d'autres xénobiotiques, sont susceptibles de réduire les taux de glucuronidation. Les objectifs de cette étude étaient d'identifier et de caractériser l'impact de 14 médicaments dont la consommation est répandue sur la biotransformation de ces perturbateurs endocriniens. L'identification des interactions a été effectuée en co-incubant des hépatocytes de rat fraîchement isolés avec du nonylphénol ou du bisphénol A, et des médicaments à une concentration 50 fois plus élevée que la concentration maximale (Cmax) reportée chez l'humain suite à une dose thérapeutique. Une inhibition de la biotransformation des polluants a été observée avec la plupart des médicaments. Le naproxène (18,7 mM), l'acide salicylique (24,5 mM), la carbamazépine (1,9 mM) et l'acide méfénamique (1,45 mM) ont inhibé le métabolisme du nonylphénol et du bisphénol A à plus de 50% dans les suspensions d'hépatocytes. La caractérisation des inhibitions observées avec le naproxène, l'acide salicylique et la carbamazépine a été tentée à l'aide de microsomes hépatiques de rat. Le naproxène et la carbamazépine ont inhibé compétitivement la glucuronidation du nonylphénol et du bisphénol A. L'acide salicylique n'a montré aucune inhibition des taux de glucuronidation à une concentration de 1000 µM, suggérant ainsi que d'autres mécanismes d'action sont impliqués dans l'inhibition observée dans les hépatocytes. Des simulations effectuées à l'aide d'un modèle pharmacocinétique à base physiologique ont démontré que des niveaux thérapeutiques de naproxène peuvent entraîner une hausse du Cmax et de l'aire sous la courbe de la concentration de bisphénol A chez l'humain d'environ 1,8 fois (en assumant un Ki similaire chez le rat et l'humain). En conlusion, cette étude démontre que plusieurs médicaments peuvent inhiber la détoxication de polluants comme le nonylphénol et le bisphénol A. L'analyse de risque pour les polluants environnementaux doit donc prendre en compte la consommation de médicaments comme facteur pouvant hausser les niveaux internes pour une exposition donnée. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Nonylphénol, Bisphénol A, Médicaments, Biotransformation, Modélisation pharmacocinétique à base physiologique, Interactions.

L'apolipoprotéine D (apoD) est une glycoprotéine qui transporte plusieurs molécules hydrophobes, telles que l'acide arachidonique, le cholestérol et la progestérone. Afin d'étudier le rôle neuroprotecteur de l'apoD, des souris transgéniques (Tg) surexprimant l'apoD humaine (H-apoD) principalement au niveau du cerveau ont été générées. Bien que les souris Tg H-apoD résistent mieux à la neurodégénérescence, elles souffrent de stéatose hépatique et musculaire et sont résistantes à l'insuline. Le but de ce projet est de caractériser les mécanismes moléculaires associés à l'accumulation de lipides dans le foie des souris Tg H-apoD. L'expression de plusieurs gènes hépatiques impliqués dans le métabolisme lipidique ainsi que dans le stockage de ces lipides dans des gouttelettes lipidiques (GL) a été mesurée par RT-PCR semi-quantitative et par Western Blot. Notre étude a révélé une augmentation de plus de deux fois du facteur de transcription PPARyl dans le foie des souris Tg H -apoD par rapport aux souris sauvages. Plusieurs études suggèrent qu'une modulation de PPARyl peut mener à des troubles métaboliques, puisque PPARy induit la transcription de gènes impliqués dans l'accumulation de lipides et dans la formation des GL. Afin de mesurer son niveau d'activation, le niveau d'expression de ses gènes cibles a été mesuré. Le transporteur d'acides gras CD36, impliqué dans la captation des acides gras circulants par les hépatocytes, est surexprimé de 20 %. Cide a et Cide c, deux protéines impliquées dans la stabilisation des GL sont surexprimées de 50 %. Plin2, aussi localisée au niveau des GL et impliquée dans l'inhibition de la lipolyse, est aussi surexprimée (2 fois). Cela induit la formation de GL plus larges et donc la stéatose hépatique. Probablement en compensation, le récepteur nucléaire PPARα et son gène cible CPT1, enzyme limitant de la β-oxydation, sont surexprimés de 2,5 fois et de 20 % respectivement, augmentant ainsi la dégradation des lipides accumulés. L'AMPK est également activée, ce qui semble causer une diminution du niveau de lipogenèse (surtout par la phosphorylation de l'ACC) et de la néoglucogenèse. Ces résultats démontrent que la surexpression de l'apoD induit une surexpression et une activation de PPARyl. En induisant la transcription de ses gènes cibles, PPARy provoque l'accumulation de lipides, menant à une stéatose hépatique. Par contre, nos résultats démontrent qu'un mécanisme compensatoire est aussi induit (augmentation de la β-oxydation et diminution de la lipogenèse et néoglucogenèse) expliquant le phénotype peu sévère de la stéatose observée. Cette étude permettra de mieux comprendre le rôle de l'apoD dans le métabolisme des lipides. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : ApoD, PPARy, stéatose hépatique

Les gliomes malins prolifèrent d’une manière très anarchique et elles s’infiltrent dans le parenchyme cérébral. Plusieurs facteurs de croissance, tels que le Transforming Growth Factor Beta (TGF-ß), sont surexprimés dans les gliomes malins. La voie de signalisation du TGF-ß joue un rôle clé dans la régulation des mécanismes liés au métabolisme et à la prolifération cellulaire. L’objectif principal de cette étude est d’évaluer les effets de l’inhibition de la voie de signalisation du TGF-ß sur le phénotype des gliomes malins. Deux méthodes ont été utilisées pour inhiber la voie du TGF-ß. La première est un traitement à la chloroquine, un agent alcalinisant lysosomotropique, qui module à la hausse le pH du Trans Golgi Network (TGN )/endosome. Cet agent inhibe la furine, une protéase nécessaire à la maturation du TGF-ß, ainsi que la métalloprotéases-2 (MMP-2) qui permet la libération du TGF-ß de la matrice extracellulaire (MEC). La deuxième méthode est un traitement avec l’Avasimibe™, un agent qui inhibe l'Acyl-CoA-Acétyltransférase (ACAT) démontrée comme étant activé par le TGF-ß. Les effets de ces deux agents ont été testés sur la sécrétion de TGF-ß, sur le métabolisme et la prolifération cellulaire de la lignée de gliomes murins F98. Par l’immunobuvardage de type Western blot, notre étude a révélé la présence de la forme immature de TGF-ß1 et de Latency Associated Peptide (LAP) dans le surnageant de la lignée de gliomes murins F98. Par le test Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), l’étude a indiqué que la chloroquine et l’Avasimibe™ diminuent de 85 ± 3 % et 65 ± 1 % la concentration de TGF-ß1 mature sécrétée dans le surnageant cellulaire. Les essais WST-1 et BrdU ont montré que des expositions de 24 h et 48 h à la chloroquine et l’Avasimibe™ diminuent significativement de plus de 74 ± 9 % et 86 ± 2 % % le métabolisme et la prolifération cellulaire. La zymographie pousse à croire que les effets de chloroquine étaient associés à une inhibition de 75 ± 1 % de l’activité de la MMP-2 en 48 h. L’ajout de la chloroquine et de l’Avasimibe™ pourrait être bénéfique au traitement standard des gliomes malins en réduisant leur phénotype.

Les cellules tumorales requièrent un approvisionnement continu de nutriments pour produire de l’énergie. Cependant le micro-environnement autour de la tumeur en fournit une quantité insuffisante. Nous avons donc émis l'hypothèse qu'il existe une symbiose nutritionnelle entre les cellules stromales et les cellules tumorales, qui contribue à la tumorigenèse et, nous nous sommes concentrés sur les macrophages. Typiquement, ils sont classés comme classiques (M1-like) ou alternatifs (M2-like) et dans le stroma, les macrophages ont tendance à avoir un phénotype M2-like. Concernant leur profil métabolique, les macrophages M1-like ont un métabolisme glycolytique. Toutefois, les caractéristiques métaboliques des macrophages M2-like ne sont toujours pas clairement définies. Dans nos travaux, en utilisant la lignée cellulaire murine de macrophage, les RAW 264.7, nous avons confirmé que les macrophages M1-like sont exclusivement glycolytiques alors que les M2-like ont plutôt un profil oxydatif. Nous avons démontré qu’il existe une certaine plasticité métabolique des cellules M2-likes car elles sont capables de basculer vers la glycolyse quand la respiration mitochondriale est inhibée. De plus, un blocage de la glycolyse n'a révélé aucune adaptation métabolique des macrophages M1-like mais influe sur les cellules M2, en réduisant leur capacité respiratoire. Finalement, nous avons observé que la polarisation fonctionnelle des macrophages M1-like pourrait être affectée par des changements dans le métabolisme cellulaire. Ces données suggèrent que le métabolisme est un facteur déterminant du phénotype fonctionnel des macrophages. / Tumor cells require a constant supply of nutrients and yet, their tumor microenvironment supplies insufficient amount of nutrients. We therefore hypothesize that it exists a nutritional symbiosis between stromal cells and tumor cells which contribute to tumorigenesis. Of these stromal cells, we focused on macrophages. Typically, they are classified as inflammatory (M1-like) or alternative (M2-like) and within the stroma, macrophages tend to exhibit an M2-like phenotype. Concerning their metabolic profile, M1-like macrophages have been described to exhibit a glycolytic metabolism. However, the metabolic features of M2-like macrophages remain pretty unclear. In our work, using the mouse monocyte macrophage cell line RAW 264.7, we have confirmed that M1-like cells are exclusively glycolytic whereas M2-like macrophages appear as mainly oxidative. We were able to demonstrate some metabolic plasticity for M2 cells that shift to glycolysis when mitochondrial respiration is inhibited. The targeting of glycolysis through the blockade of downstream lactic acid export catalyzed by monocarboxylate transporters, did not reveal any metabolic adaptation of M1-like macrophages but impacted on M2 cells, reducing their respiratory rate. By manipulating metabolic features of M1- and M2-like macrophages (i.e. glycolysis vs oxidative phosphorylation), we also investigated whether metabolic pathways themselves could impact on macrophage polarization phenotype. We observed that functional M1 polarization of macrophages could be affected by changes in cell metabolism. Taken together, these data suggest that metabolism is a crucial determinant of macrophage functional phenotype.