Introdução: A meningoencefalite criptocócica é uma doença oportunista causada pelo fungo encapsulado Cryptococcus sp. O quadro clínico é inespecífico e pode compreender cefaléia, febre e alteração do estado mental. A terapia recomendada é a combinação de anfotericina B e flucitosina por 14 dias (fase de indução), seguida de uma fase de consolidação com fluconazol. Os fatores associados a pior prognóstico incluem: alteração do estado mental, idade mais avançada e evidências de alta carga fúngica em líquor inicial. Estudos de coorte de pacientes com criptococose são escassos no Brasil. Objetivos: Identificar o perfil clínico-epidemiológico e fatores prognósticos de uma coorte de indivíduos com meningoencefalite criptocócica no Hospital de Clínicas de Porto Alegre, hospital terciário localizado na região sul do Brasil. Métodos: Estudo de coorte retrospectivo compreendido entre o período de janeiro de 2008 a outubro de 2015. Foram analisados as características clínico-epidemiológicas e os fatores associados à mortalidade dos pacientes internados com meningite criptocócica. Resultados: Foram identificados 79 pacientes com meningite criptocócica. A idade média dos pacientes foi 39,3±12,9 anos, variando de 5 a 67 anos. A maioria dos pacientes foi do sexo masculino (56,96%). A condição mais associada foi a infecção por HIV em 82,3% (n=65), sendo que 52,3% estavam em uso de terapia antirretroviral. A contagem mediana de linfócitos T CD4 foi de 34 céls/mm³. Cryptococcus neoformans correspondeu a 96,2% dos isolados em pacientes com meningite criptocócica. As manifestações clínicas mais comuns foram cefaléia, febre e alteração do estado mental. A pressão de abertura na punção lombar inicial variou de 30 a 130 cmH₂O. Achados em exame de imagem incluíram hidrocefalia e hipodensidades. Dilatação dos espaços de Virchow-Robin foram encontrados em apenas 2 pacientes (2,5%). A maioria dos pacientes dos pacientes (80%) recebeu anfotericina B e flucitosina como terapia de indução. A análise multivariada demonstrou que os fatores de pior prognóstico incluíram idade ≥ 50 anos, antígeno criptocócico no líquor ≥1:1000, proteínas ≥60 mg/dL em líquor de controle e admissão em unidade de terapia intensiva (UTI). Os fatores associados independentemente a mortalidade em 30 e 60 dias incluíram a presença de alteração do estado mental, déficit motor, antígeno criptocócico no líquor ≥1:1000 e admissão em UTI. A mortalidade geral, em 30 e 60 dias foi 41,9% 19,1% e 24,4%, respectivamente. 7 Conclusões: Em um hospital terciário no sul do Brasil, a criptococose meníngea ocorre predominantemente em adultos infectados pelo HIV. Na presença de febre, cefaléia e alteração do estado mental, os clínicos devem considerar um diagnóstico de criptococose meníngea para adultos infectados pelo HIV. Apesar do adequado tratamento antifúngico e do manejo da hipertensão intracraniana, a mortalidade foi alta. Os fatores de risco independentes para a mortalidade incluíram pacientes admitidos em UTI com estado mental alterado, proteína do líquor de controle elevada, títulos de antígeno criptocócico elevados no sangue e no líquor. / Background: Cryptococcal meningoencephalitis is an opportunistic disease caused by the encapsulated fungus Cryptococcus sp. Clinical findings are unspecific and may comprise headache, fever and altered mental status. The current recommended treatment is the combination of amphotericin B and flucytosine for 14 days (induction phase), followed by a consolidation period with fluconazole. Risk factors associated with death include: altered mental status, older age and evidence of high fungal burden at initial CSF examination. However, cohort studies are scant in Brazil. Objectives: Identification of clinical and epidemiological characteristics, and risk factors associated with mortality in a cohort of patients with cryptococcal meningoencephalitis admitted at a reference hospital in Brazil. Methods: A retrospective cohort study was conducted from January 2008 to October 2015 in a tertiary care hospital in Southern Brazil. Clinical and epidemiological characteristics, and risk factors associated with mortality were evaluated in patients with cryptococcal meningitis admitted to the hospital. Results: Seventy nine patients were identified. Mean age was 39,3±12,9 years. The age of the patients ranged from 5 to 67 years. Most of the patients were males (56,9%). The most common underlying condition was HIV infection 82,3% (n=65), and 52,3% of them were taking highly active antiretroviral therapy. The median CD4 count was 34 cells/mm³. Cryptococcus neoformans was the most common isolate (96%) identified in patients with cryptococcal meningitis. The most common clinical manifestations included headache, fever, and altered mental status. Initial opening intracranial pressures varied from 30 to 130 cm H20. CNS imaging abnormalities include hydrocephalus, and hypodensities. Widened Virchow- Robin spaces were described in only 2 patients (2.5%). The majority of the patients (80%) received amphotericin B, and flucytosine as induction therapy. Risk factors associated with mortality included age ≥ 50 years, CSF cryptococcal antigen ≥1:1000, CSF proteins ≥60 mg/dL in control lumbar puncture and ICU admission. Risk factors independently associated with death at 30 and 60 days included altered mental status, motor deficit, CSF cryptococcal antigen ≥1:1000 and ICU admission. Overall, 30 and 60-day mortalities were 41,9% 19,1% e 24,4%, respectively. Conclusions: In a terciary care hospital in Southern Brazil, meningeal cryptococcosis occurs predominantly in HIV infected individuals. In the presence of fever, headache and altered mental status, clinicians should consider a diagnosis of meningeal cryptococcosis for HIV 9 infected adults. Despite adequate antifungal treatment and management of intracranial hypertension, mortality was high. Independeted risk factors for mortality included patients admitted to ICU with altered mental status, elevated CSF protein, high blood and CSF cryptococcal antigen titers

O autor fez um estudo epidemiológico sobre a meningite meningocócica no município de São Paulo durante o período de janeiro de 1971 a junho de 1974. Durante esse período duas epidemias de moléstia ocorreram na área estudada. A primeira se iniciou em julho de 1971 e foi causada pelo meningococo sorogrupo C. Os primeiros casos da segunda epidemia, determinada pelo meningococo sorogrupo A, foram observados em abril de 1974, ocasião em que a primeira epidemia ainda não havia terminado. O número total de casos confirmados notificados ao Departamento Regional da Saúde da Grande são Paulo foi de 4.431. Os maiores coeficientes de morbidade foram observados: durante os meses frios; nos distritos sanitários da periferia do município, onde vive a população de menor poder aquisitivo; nos latentes. Durante os dois primeiros meses das duas epidemias, houve uma diferença significante nos grupos etários mais atingidos pela moléstia. Enquanto na primeira epidemia o grupo dos latentes foi mais atingido, na segunda epidemia grande número de casos ocorreu entre os adolescentes e adultos jovens (15-24 anos). A letalidade decresceu de 15,0por cento durante o período pré-epidêmico de 1968-1970 para 7,9por cento no periodo epidêmico de 1971-1974. Foi observada uma variação sazonal da letalidade no sentido inverso ao da morbidade. O autor considera que as migrações populacionais possam ter representado um papel importante na eclosão das epidemias e sugere uma investigação futura nesse sentido. No início do trabalho foi feita uma revisão bibliográfica sobre vacinação antimeningocócica, uma vez que a mesma parece ser o meio mais eficaz para a profilaxia da moléstia, ao lado de diagnóstico precoce e adequado atendimento médico-hospitalar. / The author has made an epidemological study of meningococal meningitis in the municipality of São Paulo, Brazil (population in 1970 - 5.931.935 inhabitants) during the period ranging from january 1971 to june 1974. Two outbreaks of meningococal meningitis occurred during this period in the area under study. The first one began in ju1y 1971, due to serogroup C neisseria meningitidis; the second one began in april 1974, when the first outbreak wasn\'t yet finished. It was caused by serogroup A neisseria meningitidis. The total number of cases reported to Great São Paulo Health Department through the time of the investigation, was 4.431. The attack rates were higher during the colder months. Peripheric districts, where a population of lower social class lives, had the majority of the cases. Infants were at greatest risk. There was, however, significant difference in the age of groups affected by the disease in the first month of both epidemics. lhe group of infants was more affected in the first epidemic than in the second where the disease occurred mostly among adolescents and young adults (15 to 24 years). The case-fatality ratios (deaths/cases) dscreased from 15 per cent (pre-epidemic period of 1968-1970) to 7,9 per cent (epidemic period of 1971-1974). There was a seasonal variation in the case-fatality ratio during the epidemic period: in colder months it decreased and in hotter months it increased. According to the author, the internal population migrations may have played a significant part in causing these epidemics and an investigation in this respect may throw a new light on the problem. Before starting her survey the author did a bibliographic revision on the subject of antimeningococcal vaccination, since it seems to be the most effective way for the prevention of the disease, together with an early diagnosis and adequate medical and hospital assistance.

Membros da família Enterobacteriaceae podem causar meningite associada com infecções hospitalares e/ou secundárias. A terapia empírica utilizada em pacientes com suspeita de meningite é, às vezes, ineficiente, devido à produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL), que é o mecanismo mais comum de resistência às cefalosporinas de amplo espectro em enterobactérias. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção de ESBL e AmpC por enterobactérias isoladas de líquido céfalo-raquidiano e sangue de pacientes com suspeita de meningite da região de Ribeirão Preto, no período de 2000 a 2005. O teste do disco combinado foi utilizado para a detecção fenotípica e a PCR foi utilizada para amplificar genes codificadores de ESBL e AmpC. Três (6,52 %) das 46 enterobactérias isoladas no período estudado foram produtoras de ESBL e abrigavam o gene blaCTX-M-2. As enterobactérias produtoras de ESBL foram: S. marcescens IAL 19, (isolada em Araraquara, 2002), P. mirabilis IAL 29 e E. coli IAL 45 (isoladas em Franca, respectivamente, 2003 e 2004). O gene blaCTX-M-2 foi detectado em três gêneros diferentes, sugerindo que o gene blaCTX-M é endêmicos na região de Ribeirão Preto. Os dados obtidos por este trabalho são importantes porque existem poucos relatos sobre a produção de ESBL por enterobactérias isoladas de líquido céfalo-raquidiano e sangue de pacientes com suspeita de meningite. / Members of Enterobacteriaceae family are cause of cause meningitis associated with nosocomial or secondary infection. The empiric therapy used in patients with suspicion of meningitis is, sometimes, inefficient due to extended-spectrum beta-lactamases (ESBL)- producing, that is the most common mechanism of resistance to cephalosporins in enterobacteria. The main objective of this study was to evaluate ESBL and AmpC-producing Enterobacteriaceae isolated of cerebrospinal fluid and blood from patients with suspicion of meningitis from the region of Ribeirão Preto city, during 2000 to 2005. Combination disk method was used for phenotypic detection and PCR was used to amplify genes encoding ESBL and AmpC. Three (6.52 %) out of 46 enterobacteria isolated in the period studied were detected as ESBL-producing and harbored the blaCTX-M-2 gene. The ESBL-producing enterobacteria were: S. marcescens IAL 19, (isolated in Araraquara city SP - Brazil, 2002), P. mirabilis IAL 29 e E. coli IAL 45 (isolated in Franca city SP- Brazil, respectively, 2003 e 2004). The blaCTX-M-2 gene was detected in three different genera isolated for a long time, suggesting that the blaCTX-M-2 gene is endemic in the region of Ribeirão Preto city. The data generated by this study are important because there are low reports about ESBL-producing enterobacteria isolated of cerebrospinal fluid and blood from patients with suspicion of meningitis.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeonamGC_TESE.pdf: 2406262 bytes, checksum: 604659dd8ff62335f952679dda971b6e (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Despite advances in antibiotic therapy, bacterial meningitis (BM) remains with high mortality and morbidity rates in worldwide. One important mechanism associated to sequels during disease is the intense inflammatory response which promotes an oxidative burst and release of reactive oxygen species, consequently leading to cell death. Activation of DNA repair enzymes during oxidative stress has been demonstrated in several neurological disorders. APE1/Ref-1 is a multifunctional protein involved in DNA repair and plays a redox function on transcription factors such as NFkB and AP-1.The aim of this study was assess the role of APE1/Ref-1 on inflammatory response and the possibility of its modulation to reduce the sequels of the disease. Firstly it was performed an assay to measure cytokine in cerebrospinal fluid of patients with BM due to Streptococcus pneumoniae and Neisseriae meningitides. Further, a cellular model of inflammation was used to observe the effect of the inhibition of the endonuclease and redox activity of APE1/Ref-1 on cytokine levels. Additionally, APE1/Ref-1 expression in cortex and hippocampus of rat with MB after vitamin B6 treatment was evaluated. Altogether, results showed a similar profile of cytokines in the cerebrospinal fluid of patients from both pathogens, although IFNy showed higher expression in patients with BM caused by S. pneumoniae. On the other hand, inhibitors of APE1/Ref-1 reduced cytokine levels, mainly TNF-?. Reduction of oxidative stress markers was also observed after introduction of inhibitors in the LPS-stimulated cell. In the animal model, BM increased the expression of the protein APE1/Ref-1, while vitamin B6 promoted reduction. Thereby, this data rise important factors to be considered in pathogenesis of BM, e.g., IFNy can be used as prognostic factor during corticosteroid therapy, APE1/Ref-1 can be an important target to modulate the level of inflammation and VIII oxidative stress, and vitamin B6 seems modulates several proteins related to cell death. So, this study highlights a new understanding on the role of APE1/Ref-1 on the inflammation and the oxidative stress during inflammation condition / A meningite bacteriana (MB) ? uma doen?a infecciosa que permanece com altas taxas de mortalidade e morbidade em todo o mundo, principalmente em pa?ses subdesenvolvidos, apesar dos avan?os na antibioticoterapia. Um dos principais mecanismos associados ?s sequelas durante a MB ? a elevada resposta inflamat?ria, que promove uma exacerbada quantidade de esp?cies reativas de oxig?nio (ERO) levando ?s c?lulas a apoptose ou necrose. A ativa??o de enzimas de reparo de DNA durante o estresse oxidativo tem sido demonstrada nas mais diversas desordens. Uma importante enzima envolvida neste processo ? a endonuclease apur?nica/apirimidinica1/fator redox-1 (APE1/Ref-1). Ela ? uma prote?na multifuncional envolvida no reparo de DNA e na redu??o de fatores envolvidos com a resposta inflamat?ria, tais como o fator nuclear kappa B (NFkB) e prote?na ativadora 1 (AP-1). Este estudo teve como objetivo identificar o envolvimento de APE1/Ref-1 na resposta inflamat?ria visando a possibilidade de sua utiliza??o como alvo terap?utico na redu??o de sequelas durante a MB. Para isto, inicialmente foi realizado uma an?lise no perfil de express?o de citocinas em l?quor de pacientes com meningite causada por Streptococcus pneumoniae e Neisseriae meningitidis visando selecionar moduladores inflamat?rios de interesse para ensaios em cultura de c?lula subsequentes. Em seguida, utilizando um modelo celular de indu??o com LPS foi avaliado o efeito da inibi??o da atividade de reparo e redox de APE1 sobre a express?o de citocinas inflamat?rias. Por fim, foi observada a express?o de APE1 no c?rtex (CX) e hipocampo (HC) de ratos com MB frente a uma terapia adjuvante com vitamina B6. Nossos resultados mostraram um perfil de moduladores inflamat?rios muito semelhante no l?quor dos pacientes com MB causada pelos pat?genos estudados, embora interferon gama (IFNy) tenha sido VI significativamente mais expresso em pacientes com S. pneumoniae do que N. meningitidis. Quanto ao uso dos inibidores das fun??es, redox e de reparo, de APE1/Ref-1 no modelo in vitro, houve redu??o significativa na express?o de algumas citocinas, principalmente o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?). Al?m disso, os inibidores demonstraram uma redu??o nos n?veis de ERO nas c?lulas estimuladas com LPS. No modelo animal, a express?o prot?ica de APE1/Ref-1, no CX e HC dos ratos, foi modulada ap?s introdu??o da vitamina B6. Portanto, esses dados fornecem um novo olhar para a fisiopatologia da MB, em que citocinas como IFNy podem ser usadas em um diagn?stico diferencial entre meningites causadas por S. pneumoniae e N. meningitidis. A prote?na de reparo de DNA, APE1/Ref-1, parece ser um alvo potencial na modula??o da resposta inflamat?ria e do estresse oxidativo, bem como a terapia adjuvante com vitamina B6 mostra ter um papel sobre a express?o de APE1/Ref-1. Consequentemente, o conhecimento obtido neste estudo pode ser importante na melhoria do progn?stico da MB, al?m de contribuir para entender a associa??o entre o reparo de DNA e inflama??o / 2020-01-01 / 2020-01-01

Neisseria meningitidis é o agente mais prevalente entre os casos de meningite bacteriana, acompanhados de altas taxas de letalidade, causando também outras doenças invasivas. Os objetivos deste estudo foram: caracterizar as cepas de N. meningitidis de pacientes com doença meningocócica no Rio Grande do Sul (RS), de 2003 a 2005, assim como determinar a diversidade de tipos de PorA e avaliar uma técnica de PCR em tempo real para detectar o DNA de N. meningitidis em amostras clínicas. Alguns isolados e amostras clínicas foram caracterizados por MLST e tipagem de PorA, e amostras clínicas foram amplificados por uma técnica de PCR em tempo real utilizando como alvo o gene bexA. Este estudo demonstrou alta prevalência de algumas linhagens hipervirulentas e emergência de algumas delas, incluindo as linhagens W135:P1.5,2:complexo ST-11, e C:P1.22,14-6:complexo ST-103. Estas linhagens são provavelmente responsáveis pelos aumentos de incidência dos sorogrupos W135 e C observados no período. Os complexos clonais mais prevalentes foram os complexos ST-32, ST-103, ST-11, ST-41/44. Os tipos de PorA mais encontrados para o sorogrupo B foram P1.19,15, P1.7,16, e P1.18-1,3, representando uma distribuição de tipos de PorA diferente de outros estados do Brasil, o que tem implicações na escolha e na eficácia de vacinas baseadas em OMPs. A caracterização detalhada e precisa das cepas de meningococo é um elemento importante nos estudos da epidemiologia, biologia populacional e evolução do meningococo, e fornece informações para o desenvolvimento de estratégias de controle da doença. Os resultados de sensibilidade (96%) e especificidade (97%) alcançados pela PCR para N. meningitidis, testando 186 amostras clínicas, foram adequadas para a sua utilização como método de confirmação de casos de meningite por meningococo, excluindo a etapa de extração de DNA das amostras clínicas, o que diminui o custo da reação. / Neisseria meningitidis is the most prevalent agent among bacterial meningitis cases, with high fatality rates and also causing other invasive diseases. The aims of this study were: to characterize N. meningitidis strains causing invasive disease in Rio Grande do Sul (RS), during 2003 to 2005, as well as to determine the diversity of PorA VR types; and to evaluate a real time PCR assay to detect N. meningitidis DNA in clinical specimens. To achieve that, isolates and clinical specimens were characterized by MLST and PorA VR typing, and clinical specimens were amplified by real time PCR using target sequence from gene bexA. This study demonstrated high prevalence of some hypervirulent lineages and emergence of new ones, including the lineages W135:P1.5,2:ST-11 complex, and C: P1.22,14-6:ST-103 complex. These lineages are probably responsible for the increasing incidence of serogroups C and W135 observed. The most prevalent clonal complexes were ST-32, ST-103, ST-11 e ST-41/44 complexes. The most prevalent PorA VR types found for serogroup B were P1.19,15, P1.7,16, and P1.18-1,3, representing a different distribution of PorA types if compared to other states of Brazil. The different distribution of PorA VR types in RS has implications in vaccine design and efficacy. Detailed and accurate meningococcal characterization is an important element in studies of meningococcal epidemiology, population biology, and evolution and provides information for the design of control strategies. Good sensitivity (96%) and specificity (97%) were achieved for N. meningitidis PCR, testing 186 specimens. The method is appropriate to be used for confirmation of cases of meningococcal meningitis, and eliminating the DNA purification step reduces reaction costs.

Infecções por Neisseria meningitidis são uma importante causa de morbidade e mortalidade em todo o mundo devido à habilidade do patógeno em provocar epidemias e até pandemias. Por ser capaz de se recombinar geneticamente existe uma grande variabilidade de tipos circulantes que podem diferir de acordo com a população atingida e localização geográfica. Por isso os objetivos deste estudo foram: avaliar a epidemiologia da doença meningocócica (DM) em pacientes do Rio Grande do Sul (RS), caracterizar fenotípica e genotipicamente isolados de N. meningitidis utilizando métodos convencionais e propor um novo método de tipagem para o estudo de surtos, bem como avaliar sua susceptibilidade à penicilina. Para isso foi realizado um estudo retrospectivo de coorte em 2.215 casos de DM notificados entre 1995 a 2003 no RS. Foi observada uma redução de quase 50% dos casos durante o período e a taxa de letalidade foi de 22%. Ainda assim, uma incidência marcante continua sendo observada mesmo depois do final do período epidêmico, em 1999, onde as faixas etárias de crianças entre 1 e 4 anos e menores de 1 ano representam juntas quase 55% dos casos notificados, com uma média de incidência de 11,3/100.000 hab e 31.3/100.000 hab, respectivamente. A maioria dos casos foi atribuída ao sorogrupo B (69,8%), que aumentou significativamente. Também foi observada uma diminuição significativa dos casos pelo sorogrupo C. Os fenótipos B:4,7:P1.19,15, B:15:P1.7,16 e B:NT:P1.3 representam quase 50% de todos os isolados sorotipados. Cinqüenta e seis isolados obtidos de pacientes do RS, durante o primeiro ano não-epidêmico, somados a 20 isolados dos estados de Santa Catarina e Paraná, Dinamarca e França foram genotipados por Multilocus Sequence Typing (MLST). Foram identificados 20 Sequence Types (STs) distintos, dos quais 8 foram caracterizados como tipos novos, encontrados somente no RS. ST-33 (27%) e ST-259 (18%) foram os tipos mais freqüentes, ambos pertencentes ao complexo clonal ST-32/ET-5. Os casos ST-259 do RS demonstraram uma maior tendência de desfecho de casos fatais. Não foram encontrados isolados ST-259 entre os controles geográficos ou em outros estudos previamente realizados no Brasil. Nossos resultados sugerem que estes dois clones observados durante todo o período de estudo, somados à emergência do ST-103 contribuem para a manutenção da alta incidência da DM no RS. Quase 18% dos isolados apresentaram suscetibilidade reduzida à penicilina. A presença de suscetibilidade reduzida ou plena à penicilina associada ao clone ST-461 foi estatisticamente significativa (P=0,017) quando comparada à resistência nos demais clones. Nenhum isolado demonstrou atividade para a ß-lactamase. Também foi padronizado um novo método de genotipagem, chamado de Variable Site Specific-PCR (VSS-PCR) que apresentou um excelente poder discriminatório, de baixo custo operacional e de fácil execução e interpretação, que poderá ser utilizado em estudos de surtos da DM, assim que seja validado. / Neisseria meningitidis infections are an important cause of morbidity and mortality worldwide because of the pathogen ability to cause epidemics and pandemics. The recombination ability results in a large variability of circulating types that can differ depending on the infected population and geographic localization. Considering these aspects, the aims of this study were: to evaluate meningococcal disease epidemiology affecting patients from the state of Rio Grande do Sul (RS), phenotypic and genotypic characterization of N. meningitidis isolates, using conventional methods and standardizing a new method for outbreak study; and evaluation of penicillin susceptibility. A retrospective cohort study was carried out among 2,215 meningococcal disease (MD) cases reported from 1995 to 2003 in RS, Brazil. A reduction of almost 50% in the overall incidence was observed, and the case-fatality rate during this period was 22%. Even so, high incidence of MD continued to be observed after the epidemic period which ended in 1999. The age group of 1-4 years old and infants under 1 year of age represent together almost 55% of the reported cases with a mean incidence of 11.3/100,000 pop and 31.3/100,000 pop, respectively. The majority of cases were caused by N. meningitidis serogroup B (69.8%), which increased significantly. There was a significant decrease in serogroup C cases. The phenotypes B:4,7:P1.19,15, B:15:P1.7,16 and B:NT:P1.3 represented almost 50% of all serotyped cases. Fifty-six isolates obtained from RS patients during the first non-epidemic year 2000 plus 20 isolates from other southern Brazilian states (Santa Catarina and Paraná), Denmark and France were typed by Multilocus Sequence Typing (MLST). Twenty different Sequence Types (STs) were identified, 8 of them found only in RS. ST-33 (27%) and ST-259 (18%) were the most frequent, both belonging to the ST-32/ET-5 complex. The ST-259 cases showed a trend towards higher risk of fatal outcome. ST-259 isolates were not detected among geographic controls or in other studies carried out in Brazil. Our data suggest that these two clones wich occurred over the entire study period and the emergence of the ST-103 isolates contributed to the continued high incidence of MD in RS. Almost 18% of isolates presented moderate resistance to penicillin. The decreased susceptibility or complete resistance to penicillin associated to ST-461 clone was statistically significant (P=0,017) when compared to the other clones. None of the isolates have showed ß-lactamase activity. We standardized a new genotyping method, called Variable Site Specific-PCR (VSS-PCR) that shows high discriminatory power, lower costs, easy performance and interpretation, which may be used in MD outbreaks, after its validation.

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A meningite bacteriana é uma inflamação das meninges, podendo ser ocasionada pela bactéria Streptococcus pneumoniae que provoca uma intensa resposta imunológica no hospedeiro. Apesar dos avanços, esta doença ainda representa uma grande taxa de mortalidade e de morbidade no mundo inteiro. Os processos inflamatórios ativados durante a meningite pneumocócica aumentam a produção de citocinas e quimiocinas provocando uma cascata de mediadores inflamatórios, bem como a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO), culminando na produção aumentada (e deposição) de proteínas amiloides. O aumento da produção e deposição do peptídeo β-amiloide, proporciona locais de ligação adicionais para receptor de produtos finais da glicação avançada (RAGE) nos neurônios e microglia. A interação do receptor RAGE com seu ligante (β-amiloide, por exemplo) é capaz de estimular múltiplas vias de sinalização intracelular, incluindo a ativação e a translocação para o núcleo do fator de transcrição NF-κB, que leva à produção de citocinas, quimiocinas, moléculas pró-inflamatórias, moléculas de adesão e indiretamente o estresse oxidativo. Isso pode levar a lesões neuronais causando prejuízo de memória e aprendizagem, bem como prejuízo a integridade da Barreira Hematoencefálica (BHE). Estratégias terapêuticas sugerem que RAGE é um importante alvo para o tratamento de doenças inflamatórias, visto que a inflamação aumenta a síntese de β-amiloide e regula positivamente RAGE, e a ativação dessa via induz disfunção cognitiva em longo prazo por apoptose neuronal. Recentes estudos sugerem que a inflamação no Sistema Nervoso Central (SNC) pode desempenhar um papel fundamental para o desenvolvimento de doenças neurodegenerativas. Portanto o objetivo deste trabalho foi determinar se a ativação da via β-amiloide-RAGE está associada à disfunção cognitiva em longo prazo em sobreviventes de meningite e se a modulação da inflamação com um inibidor específico de RAGE, o FPS-ZM1 iria melhorar esses efeitos. Em modelo experimental de meningite pneumocócica, foi avaliado a produção de citocinas: Fator de Necrose Tumoral α (TNF-α), interleucina 1β (IL-1β), e Interleucina 6 (IL6); RAGE e proteína do grupo 1 de alta mobilidade (HMGB1); integridade da BHE no hipocampo e no córtex pré-frontal; e também dano na memória de habituação e reconhecimento de objetos novos de ratos Wistar adultos 10 dias após o tratamento com FPS-ZM1. Nos testes a inibição do RAGE com o FPS-ZM1 preveniu a produção destas citocinas no córtex pré-frontal, diminuiu a quebra da BHE em 12, 18 e 24h tanto no hipocampo quanto no córtex, e diminuiu dano cognitivo 10 dias após a indução. Demonstrando um papel importante do RAGE na meningite causada pelo S. pneumoniae, tornando o FPS-ZM1 um possível tratamento adjuvante para esta doença, podendo prevenir danos neurológicos de longo prazo como apresentados na Doença de Alzheimer.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-01T18:23:08Z No. of bitstreams: 1 Milena Soares dos Santos Análise da composição clonal dos Streptococcus pneumoniae não susceptíveis a penicilina....pdf: 2536157 bytes, checksum: ee1fe922b8d1366faa0d4a8bea4d3b9f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-01T18:23:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Milena Soares dos Santos Análise da composição clonal dos Streptococcus pneumoniae não susceptíveis a penicilina....pdf: 2536157 bytes, checksum: ee1fe922b8d1366faa0d4a8bea4d3b9f (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O Streptococcus pneumoniae permanece como principal causa de doenças infecciosas que conduzem a elevada morbi-mortalidade em todas as faixas etárias, principalmente nas crianças. Desde a década de 1990, a resistência antimicrobiana deste microrganismo tem aumentado mundialmente, representando mais de 30% de resistência à penicilina em todos os isolados de doença pneumocócica invasiva em algumas áreas geográficas. Neste estudo, relatamos os casos identificados através de uma vigilância ativa para a meningite bacteriana em Salvador, Bahia, no período de janeiro de 1996 a dezembro de 2007. Para avaliar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos dos isolados dos pacientes com meningite por S.pneumoniae, utilizamos a microdiluição em caldo e isolados com CIM de penicilina ≥ 0.125μg/mL foram considerados como não-susceptíveis à penicilina (PNSP). A diversidade clonal foi estudada por Box-A PCR, PFGE e MLST e a distribuição de pili foi investigada em 133 amostras, selecionadas de forma aleatória em cada grupo clonal, através das técnicas de PCR e seqüenciamento do gene rlrA. Um total de 748 pacientes com meningite por S.pneumoniae foi identificado durante os 12 anos de vigilância. Foram encontrados 135 (19%) isolados de S. pneumoniae não-susceptíveis à penicilina sendo que destes, 85 (63%) eram crianças <5 anos de idade e 28 (20,7%) dos pacientes apresentavam alguma doença precedendo a meningite. A incidência média anual de PNSP foi estimada em 2,47 por 100.000 habitantes para todas as faixas etárias, 1,69 casos/100.000 habitantes para crianças menores de 5 anos e 1,37 casos/100.000 habitantes para crianças menores de 1 ano. A taxa de letalidade obtida para todas as idades foi de 39,2%. Os sorotipos mais prevalentes entre os isolados de PNSP foram: 14 (46,7%; 63/135) 23F (17,8%; 24/135), 6B (14,8%; 20/135), 19F (8,1%; 11/135) e 19A (4,4%; 6 / 135). Os isolados do sorotipo 14 foram identificados como o grupo clonal predominante 32,6% (44/135) e foram caracterizados como ST66 e como ST156 com alta resistência à ceftriaxona. Os outros sorotipos apresentaram maior diversidade clonal e novos STs foram encontrados, entre outros sorogrupos. Foram detectados 22% (29/133) de isolados portadores de pili, independente de composição clonal ou perfil de resistência. Baseada na vacina pneumocócica conjugada 10-valente, prevista para ser implementada no Brasil este ano, esperamos 89% de proteção contra PNSP em crianças menores de 5 anos de idade. As alterações previstas na população pneumocócica, ao longo dos anos após a implementação desta vacina, ressaltam a importância do monitoramento através de vigilância ativa. / Streptococcus pneumoniae remains an important cause of infectious diseases leading to high morbidity and mortality in all age groups, especially in children. Since the 1990s, resistance of this organism to penicillin has emerged worldwide accounting for >30% of all invasive pneumococcal isolates in some geographic areas. In this study, active surveillance for bacterial meningitis was performed from January 1996 to December 2007. Antimicrobial susceptibility testing used broth microdilution and isolates with penicillin MIC ≥ 0.125μg/mL were considered penicillin non-susceptible. Clonal diversity was studied by Box-A PCR, PFGE and MLST and pili detection was determinated by PCR and sequencing of rlrA gene. A total of 748 patients with pneumococcal meningitis were identified during 12 years of surveillance. We found 135 (19%) S. pneumoniae isolates to be penicillin-nonsusceptible, which 85 (63%) were children < 5 years age and 28 (20.7%) patients had previous acute illness. The annual incidence of PNSP was estimated to 2.47 per 100,000 for all age groups, 1.69 cases/100.000 population for children younger than 5 years, and 1.37 cases/100.000 inhabitants for children under 1 year. The case-fatality rate obtained for all ages was 39.2%. The most prevalent serotypes PNSP isolates were among the 14 (46.7%; 63/135), 23F (17.8%; 24/135), 6B (14.8%; 20/135), 19F (8.1%; 11/135) and 19A (4.4%; 6/135). Serotype 14 isolates were identified as the predominant clonal group [32.6% (44/135)] and were characterized as ST66 and as ST156 with high resistance to ceftriaxone. The other serotypes were more diverse and new ST´s were found among others serogroups. We detected 22% (29/133) of pili positive among the isolates, independently of clonal patterns or susceptibility profile. Based on 10-valent pneumococcal vaccine, which will be implemented in Brazil in 2010, we expect 89% protection against PNSP in children < 5 years of age. Changes in the pneumococcal population over the coming years following implementation of this vaccine should be monitoring throughout active surveillance.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-09-18T13:52:18Z No. of bitstreams: 1 Eder Silva dos Anjos. Caracterização...2013.pdf: 1214899 bytes, checksum: 285b9e9fed3b500c66d7173ea5a7c440 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-18T13:52:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eder Silva dos Anjos. Caracterização...2013.pdf: 1214899 bytes, checksum: 285b9e9fed3b500c66d7173ea5a7c440 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / O advento das vacinas pneumocócicas conjugadas veio contribuir de forma decisiva para a redução da incidência dos casos de doença invasiva por S. pneumoniae em vários países do mundo. Em contrapartida, tem-se verificado um aumento de casos decorrentes de sorotipos não vacinais, que escapam da vacina e reduzem o seu efeito a partir da expansão de clones pré-existentes com consequente substituição de sorotipos e/ou do fenômeno de troca capsular (capsular switching). No Brasil, a vacina conjugada 10-valente (PCV10) foi introduzida no calendário nacional de imunização a partir de 2010. Este estudo teve como objetivo caracterizar através de técnicas fenotípicas e moleculares os sorotipos não-vacinais (SNVT) de S.pneumoniae, isolados de pacientes com meningite nos períodos anterior (janeiro/2008 - junho/2010) e posterior (julho/2010 - dezembro/2012) à implementação da vacina pneumocócica conjugada 10-valente (PCV10), na cidade de Salvador, Bahia. Os isolados de S. pneumoniae foram identificados através de métodos microbiológicos clássicos e a determinação do tipo capsular foi realizada através da técnica de Multiplex-PCR e/ou reação de Quellung. A sensibilidade a oito antimicrobianos foi realizada através da técnica de microdiluição em caldo e a caracterização genotípica por intermédio das técnicas de PFGE e MLST. Foram identificados 170 casos de meningite pneumocócica durante a vigilância epidemiológica realizada no Hospital Couto Maia, em Salvador, com 148 apresentando cultura positiva para S. pneumoniae a partir do líquor e/ou hemocultura. A incidência da meningite pneumocócica reduziu de 0,9/100.000 habitantes (2008) para 0,36/100.000 habitantes (2012). No período pré-vacinal, os SNVT mais frequentes foram: 3 (n=6; 12%), 19A (n=4; 8%), 6A (n=4, 8%); no período pós-vacinal os SNVT 12F (n=6; 22,2%), 10A (n=3; 11,1%), 15B (n=2; 7,4%) e 18B (n=2; 7,4%) foram os mais frequentes. Cerca de 78% dos isolados apresentaram resistência a um ou mais antibióticos. A não susceptibilidade à penicilina foi encontrada nos sorotipos 19A (3 isolados), 9N (1 isolado) e 12F (1 isolado). Por PFGE, foi observada uma grande diversidade genética com a maioria (66,2%) dos isolados pertencendo a grupos não clonais. O grupo clonal X foi composto por dois isolados do sorotipo 19A (ST2878), do período pré-vacinal, não susceptível à penicilina. A técnica de MLST realizada em 26 isolados permitiu a identificação de quatro novos STs e apresença de STs (ST180, ST193 e ST218) genotipicamente semelhantes aos clones mundiais Netherlands3-31, Greece21-30 e Denmark12F-34. É necessária a continuidade da vigilância epidemiológica da meningite pneumocócica, visando avaliar os efeitos benéficos da vacinação e a dinâmica da distribuição de sorotipos em nossa região. / The licensure and subsequent widespread use of pneumococcal conjugate vaccines have contributed for the reduction in the overall incidence of invasive pneumococcal disease worldwide. However, the emergence of Streptococcus pneumoniae nonvaccine serotypes (SNVT), which escape from the vaccine by the expansion of pre-existing clones following serotype replacement and/or by capsular switching is a matter of concern. In 2010, Brazil introduced the 10-valent conjugate pneumococcal vaccine (PCV10) into its routine National Immunization Program. Our aim was to characterize the phenotypic and genotypic profile of S. pneumoniae non-vacine serotypes (SNVT) isolated from patients with meningitis before (January 2008 – June 2010) and after (July 2010 – December 2012) the introduction of PCV10 in Salvador, Bahia. The pneumococcal isolates were identified by classical microbiological methods and submitted to capsular deduction by multiplex-PCR and/or Quellung reaction. The antimicrobial susceptibility was performed the broth microdilution method. The genotypic profile was assessed by PFGE and MLST. We identified 170 cases of pneumococcal meningitis during the epidemiological surveillance at the Hospital Couto Maia, in Salvador, with 148 showing positive culture for S. pneumoniae from the cerebrospinal fluid and/or blood culture. The incidence of pneumococcal meningitis decreased from 0.9/100.000 (2008) to 0.36/100.000 inhabitants (2012). In the pre-vaccine period the most frequent SNVT were: 3 (n=6, 12%), 19A (n=4, 8%), 6A (n=4, 8%). In the post-vaccine period, the SNVT 12F (n=6, 22.2%), 10A (n=3, 11.1%), 15B (n=2, 7.4%) and 18B (n=2, 7.4%) were the most prevalent. About 78% of the isolates were resistant to one or more antibiotics. The non-susceptibility to penicillin was found among serotypes 19A (3 isolates), 9N (1 isolate) and 12F (1 isolate). By PFGE, a wide genetic diversity was found with the majority of the isolates (66.2%) belonging to non-clonal groups. The clonal group X comprised two isolates of the serotype 19A (ST2878) from the pre-vaccine period presenting non-susceptibilty to penicillin. MLST assay performed in 26 isolates allowed the identification of four new STs and the presence of STs (ST180, ST193 and ST218) with genotipic similarities of the worldwide clones Netherlands3-31, Greece21-30 and Denmark12F-34. Continued surveillance studies are necessary to evaluate the benefits of vaccination and the serotype dynamics in our region

Made available in DSpace on 2014-10-07T19:33:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 151.pdf: 1034631 bytes, checksum: 4633720fcfb8cd5c7e25a06a27819fe0 (MD5) Previous issue date: 2005 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Infecções virais agudas do Sistema Nervoso Central (SNC), como as meningites e encefalites, são responsáveis por uma elevada morbidade, especialmente em crianças. Os enterovírus não-polio (EVNP) são responsáveis por mais de 80 por cento dos casos de meningite viral em que o agente etiológico é identificado. No presente estudo nós mostramos a freqüência de ocorrência de enterovírus em surtos e casos esporádicos de meningite viral no Brasil no período de dezembro de 1998 a dezembro de 2003. Das 1022 amostras de Líquido Cefalorraquidiano (LCR) analisadas pelo Laboratório de Enterovírus -FIOCRUZ, 162 (162/1022 -15,85 por cento) apresentaram isolamento viral em culturas de células RD e/ou HEp2. Destas, 139 (139/163 -85,27 por cento) foram identificadas por sequenciamento genômico parcial como echovírus 30. Outros enterovírus identificados foram: coxsackievírus B5 (6/162- 3,70 por cento), echovírus 13 (6/162- 3,70 por cento), echovírus 18 (5/162- 3,08 por cento), echovírus 6 (2/162- 1,23 por cento), echovírus 25 (2/162- 1,23 por cento), echovírus 1 (1/162- 0,61 por cento) e echovírus 4 (1/162- 0,61 por cento). A idade dos pacientes variou de 28 dias de vida a 68 anos. Os sintomas mais frequentes foram febre (77,00 por cento), cefaléia (69,51 por cento), ânsia de vômito (71,30 por cento), rigidez na nuca (41,35 por cento), convulsão (7,13 por cento) e diarréia (3,74 por cento). Durante o período de estudo, cinco surtos de meningite viral foram identificados e confirmados, sendo três no estado do Paraná (sul do Brasil), um em Pemambuco (nordeste do Brasil) e um no Rio Grande do Sul (sul do Brasil). Echovirus 30 causou quatro dos cinco surtos, e echovírus 13 foi responsável pelo último surto. Além dos surtos, 734 casos esporádicos também foram identificados durante o período de estudo e 59 destes casos apresentaram isolamento viral (59/734 -8,03 por cento). Echovírus 30 foi responsável pela maioria destes casos esporádicos (42/59 -71,18 por cento). Este estudo chama a atenção para o echovírus 30 como o principal agente etiológico envolvido em casos esporádicos e em surtos de meningite viral ocorridos no Brasil durante o período de estudo. / Acute viral infections of the Central Nervous System (CNS), as meningitis and encephalitis, are responsible for a high morbidity, particularly in children. Non-polio enteroviruses (NPEV) are responsible for over 80% of viral meningitis in which the etiologic agent is identified. In the present study we show the frequency of occurrence of enteroviruses in both outbreaks and sporadic cases of viral meningitis occurred in Brazil during the period of December 1998 to December 2003. From 1022 samples of Cerebrospinal Fluid (CSF) analyzed at the Enterovirus Laboratory, FIOCRUZ, 162 162/1022 - 15,85%) were positive regarding viral isolation in RD and/or HEp2 cells. From this total, 139 (139/162 - 85,27%) were identified by partial genome sequencing as being echovirus 30. Other identified enteroviruses were: coxsackievirus B5 (6/162 – 3,70%), echovirus 13 (6/162 - 3,70%), echovirus 18 (5/162 - 3,08%), echovirus 6 (2/162 - 1,23%), echovirus 25 (2/162 - 1,23%), echovirus 1 (1/162 - 0,61%) and echovirus 4 (1/162 0,61%). The age of the patients ranged from 28 days to 68 years old. The most frequent symptoms were fever (77,00%), headache (69,51%), vomiting (71,30%), neck stiffness 41,35%), convulsion (7,13%) and diarrhea (3,74%). Throughout the surveillance period, ive viral meningitis outbreaks were identified and confirmed, being three at Paraná State southern Brazil), one at Pernambuco (northeast Brazil) and one at Rio Grande do Sul southern Brazil). Echovirus 30 caused four out of the five outbreaks, and echovirus 13 caused the last one. Besides the outbreaks, 734 sporadic clinical cases were also identified during the period of study and 59 of these were positive with regard viral isolation (59/734 8,03%). Echovirus 30 accounted for the majority of these sporadic cases (42/59 – 71,18%). This study calls the attention to the echovirus 30 as the most prevalent etiological agent involved in both sporadic cases and outbreaks of viral meningitis occurred in Brazil during the period of study.