Base teórica: A meningite bacteriana é uma causa importante de morbidade e mortalidade na infância. Análise do líquido cefalorraquidiano (LCR) continua a ser a ferramenta de diagnóstico padrão ouro, porém novos biomarcadores para o diagnóstico e prognóstico ainda são necessários. Receptor Desencadeador Expresso nas Células Mielóides Tipo 1 (TREM-1) é um receptor transmembrana expresso em neutrófilos e monócitos, que desempenha um papel importante na modulação da resposta inflamatória. A sua fração solúvel (sTREM-1) também é aumentada na infecção, inflamação ou doenças imunológicas. Neste estudo nós avaliamos, prospectivamente, o valor do TREM-1 como um biomarcador de meningite bacteriana aguda em pacientes pediátricos e sua possível utilização como uma ferramenta de prognóstico neste cenário. Objetivos: O objetivo primário do presente estudo é caracterizar os níveis líquóricos solúveis de TREM-1 (sTREM-1) em pacientes admitidos por suspeita clínica de meningite. Analisamos também os níveis de sTREM-1 nos casos de meningite bacteriana e viral, além de medir a sensibilidade e especificidade deste biomarcador no LCR e estudar se esse biomarcador pode ser um fator associado ao prognóstico em meningite bacteriana aguda. Métodos: Sessenta e um pacientes pediátricos, de 0 a 10 anos foram avaliados quanto à meningite e foram prospectivamente incluídos neste estudo. Na admissão, após a suspeita clínica de meningite foram submetidos à análise do LCR para o diagnóstico e uma amostra do LCR inicial foi utilizado também para análise do sTREM-1. Os pacientes foram acompanhados durante a sua internação com o registro de seu tratamento e desfecho clínico para posterior análise dos dados. Resultados: Dentre os 61 pacientes, 38 (62%) foram negativos para a meningite, 7 (11%) pacientes foram diagnosticados com meningite viral e 16 (27%) pacientes foram diagnosticados com meningite bacteriana aguda e recebeu tratamento direcionado. Sexo (p = 0,15), presença de fatores de risco identificados (p = 0,17), presença de convulsões (p = 0,31), outras complicações clínicas (p = 0,11) e mortalidade (p = 0,66) não diferiram entre os grupos. Anormalidades sensoriais (p <0,0001) e presença de cefaléia (p = 0,003) foram mais prevalentes em pacientes com meningite. Como esperado, a contagem de leucócitos, glicose e proteína no LCR foram significativamente diferentes entre pacientes com meningite e pacientes sem meningite. As concentrações de sTREM-1 no LCR de pacientes com meningite bacteriana foi superior quando comparada com pacientes com meningite viral e com controles (1204,67 pg/ml, 39,34 pg/ml e 12,09 pg/ml, respectivamente; p <0,0001). Quando sTREM-1 foi usado como um determinante de diferenciação entre pacientes com ou sem meningite bacteriana, a análise da área sob a curva ROC foi de 0,95 (IC de 95% = 0,89-1,00; p <0,0001). A presença de fatores de risco para a meningite bacteriana (p = 0,04), anormalidades sensoriais (p <0,0001), contagem de leucócitos no LCR (p = 0,01), níveis de glicose no LCR (p = 0,002), níveis de proteína no LCR (p = 0,032) e os níveis de sTREM-1 no LCR (p = 0,004) foram associados com meningite bacteriana, incluindo os níveis sTREM-1 acima do ponto de corte estabelecido de 68,0 pg/ml (p <0,0001). A meningite bacteriana (p = 0,02) e os valores de sTREM-1 maior do que o ponto de corte (68,0 pg/ml) (p = 0,04) foram associados com sequelas neurológicas graves e morte neste grupo de pacientes. Conclusão: Avaliamos os níveis sTREM-1 de crianças com suspeita clínica de meningite. Os níveis de s-TREM-1 foram aumentados nos casos de meningite bacteriana e correlacionados com o prognóstico. Os nossos resultados sugerem que níveis elevados de sTREM-1 no LCR podem ser utilizados como um biomarcador para o diagnóstico de meningite bacteriana aguda em crianças e que pode ser útil na determinação do prognóstico do paciente nesse cenário. / Background: Bacterial meningitis is an important cause of morbidity and mortality in infancy. Cerebrospinal fluid (CSF) analysis remains the gold standard diagnostic tool, however new biomarkers for diagnosis and prognosis are still required. Triggering receptor expressed on myeloid cells-1 (TREM-1) is a transmembrane receptor expressed on neutrophils and monocytes that plays an important role on the immune response. Its soluble fraction (sTREM-1) is also increased in infection, inflammation or immune diseases. In this study we evaluate the value of sTREM-1 as a biomarker of acute bacterial meningitis in pediatric patients and its possible use as a prognostic tool prospectively. Methods: Sixty-one pediatric patients, from 0 to 10 years of age were evaluated for meningitis and were prospectively included in this study. At admission, following clinical hypothesis of meningitis patients were submitted to CSF analysis for diagnosis and a sample of initial CSF was also used for TREM-1 analysis. Patients were followed during hospitalization and clinical evaluation and treatment outcome were recorded for posterior analysis. Results: Thirty-eight (62%) out of 61 patients were negative for meningitis, 7 (11%) patients were diagnosed with viral meningitis and 16 (27%) patients were diagnosed with and received treatment for acute bacterial meningitis. Sex (p = 0.15), presence of identified risk factors (p = 0.17), presence of seizures (p = 0.31), other clinical complications (p = 0.11), and mortality (p = 0.66) did not differ among groups. Sensorial abnormalities (p<0.0001) and presence of headache (p= 0.003) were more prevalent in patients with meningitis. As expected, leukocyte count, glucose, and protein levels were significantly different between patients with meningitis and patients without meningitis. Concentrations of sTREM-1 in CSF from patients with bacterial meningitis was higher when compared to patients with viral meningitis and with controls (1204.67 pg/ml, 39.34 pg/ml and 12.09 pg/ml, respectively; p<0.0001). When sTREM-1 was used as a determinant to differentiate between patients with or without bacterial meningitis, the analysis of the area under the ROC curve (AUC) was 0.95 (95% CI=0.89-1.00; p<0.0001). Presence of risk factors for bacterial meningitis (p = 0.04), sensorial abnormalities (p<0.0001), CSF leukocyte count (p = 0.01), CSF glucose levels (p = 0.002), CSF protein levels (p = 0.032) and CSF sTREM-1 levels (p = 0.004) were all associated with bacterial meningitis, including sTREM-1 levels above the established cut-off point of 68.0 pg/ml (p<0.0001). Bacterial meningitis (p = 0.02) and values of sTREM-1 higher than the cut-off point (68.0 pg/ml) (p = 0.04) were associated with death and severe neurological disabilities in this patient cohort. Conclusion: We evaluated sTREM-1 levels in CSF of children with clinical hypothesis of meningitis. The sTREM-1 levels were increased in bacterial meningitis and correlated with prognosis. Our results suggest that CSF sTREM- 1 levels can be used as a biomarker for diagnosis of acute bacterial meningitis in children and it might be useful in determining patient’s prognosis in this scenario.

Neisseria lactamica está envolvida na aquisição da imunidade natural contra Neisseria meningitidis, causadora da doença meningocócica. Vesículas de membrana externa (OMV) de N. lactamica são antígenos potenciais contra N. meningitidis. Analisou-se a cinética de biomassa, de produção de OMV, da fonte de carbono (lactato), e dos metabólitos, para maximizar a produção de OMV. Realizaram-se ensaios em biorreator, em batelada simples, batelada alimentada com lactato, com ou sem pulsos de aminoácidos e extrato de levedura (YE). Utilizou-se o meio de Catlin (MC) como meio mínimo, e analisaram-se efeitos das concentrações do lactato, aminoácidos e YE. Lactato foi consumido e citrato e acetato produzidos. Os melhores resultados obtidos foram no meio com adição de 2 g/L de YE e concentrações dobradas de lactato e 5 aminoácidos constitutivos do MC, em batelada alimentada com pulsos. O lactato apresentou efeito positivo sobre o rendimento de OMV e o YE sobre a biomassa. Os 5 aminoácidos constitutivos do MC foram necessários para obtenção de biomassa e rendimento de OMV. / Neisseria lactamica is involved with the acquisition of natural immunity to Neisseria meningitidis. N. lactamica outer membrane vesicles (OMV) are potential antigens against N. meningitidis, the pathogen of meningococcal disease. The objective of this work was to analyze the kinetics of bacterial growth, OMV production, the carbon source (lactate), and products of metabolism, to improve growing conditions and OMV production. Groups were studied in batch process, fed-batch process with lactate, fed-batch process with pulses of amino acids and YE. MC was considered as minimal medium and it was analyzed the effect of lactate, amino acids and YE. Lactate was consumed and citrate and acetate increased in the medium. The best results were in fed-batch with pulses, in MC with the double concentrations of lactate and amino acids, added with 2 g/L of YE. The lactate had a positive effect over OMV yield and YE had a positive effect over biomass. 5 amino acids of MC were necessary to obtain biomass and OMV yield.

No presente trabalho, foi realizada uma MULTIPLEX-PCR para a detecção do DNA bacteriano de S. agalactiae, S.pneumoniae, N. meningitidis, H. influenzae e outros possíveis agentes etiológicos bacterianos das meningites. Este ensaio combina cinco diferentes iniciadores que detectam simultaneamente o gene crtA de N. meningitidis, o gene p6 de H. influenzae, o gene fbsA de S. agalactiae, o gene lytA de S. pneumoniae e o gene universal 16S rDNA para identificar a presença de agente bacteriano. Foram analisadas 447 amostras de LCR, o ensaio detectou 27 amostras positivas para cultura bacteriana e 13 amostras com resultado de cultura negativa. Estas amostras com cultura negativa apresentavam alterações bioquímicas, hematológicas, imunológicas ou microbiológicas (bacterioscopia) sugestivas de meningite, estes dados auxiliaram na análise dos resultados do MULTIPLEX-PCR. Este ensaio não apresentou reações inespecíficas com fungos, vírus e com outros agentes bacterianos testados (amplificando somente o gene 16S rDNA). A MULTIPLEX-PCR é um ensaio rápido, confiável, de fácil execução e facilmente implementável para a confirmação de meningite bacteriana. E este método pode auxiliar no diagnóstico de meningite com cultura de LCR negativa, particularmente para pacientes que previamente iniciaram antibioticoterapia e no diagnostico diferencial de meningite bacteriana ou viral. / In this work, a MULTIPLEX-PCR has conducted for the bacterial DNA detection of S. agalactiae, S.pneumoniae, N. meningitidis, H. influenza and other possible etiologic bacterial meningitis agents. This test combines five different primers that detect simultaneously the crtA gene of N. meningitides, the p6 gene of H. influenza, the fbsA gene of S. agalactiae, the lytA gene of S. pneumoniae and the 16S rDNA universal gene to identify the presence of bacterial agent. From the 447 samples of CSF that were analyzed, the test detected 27 positive samples for bacterial culture and 13 samples with the result of negative culture. These negative culture samples presented biochemical changes, hematological, immunological or microbiological (bacterioscopy) suggestive of meningitis, these data helped in the analysis of the MULTIPLEX-PCR results. This test showed no nonspecific reactions with fungi, viruses and other bacterial agents tested (only amplifying the gene 16S rDNA). The MULTIPLEX-PCR test is a fast, reliable, easy to implement and easily implementable for of bacterial meningitis confirmation. And this method can aid in the meningitis diagnosis with negative culture of CSF, particularly for patients who previously started antibiotic therapy and in the differential diagnosis of bacterial or viral meningitis.

Orientador: Flávia Lombardi Lopes / Resumo: A meningite se caracteriza pela inflamação da aracnóide, pia-máter e líquor; causando danos às estruturas corticais e subcorticais. As meningites bacterianas estão intimamente relacionadas ao nível de desenvolvimento socioeconômico do país e são consideradas endêmicas no Brasil. Apesar dos esforços para o desenvolvimento de medicamentos e vacinas, a doença ainda possui altos índices de morbidade. Ela ocorre quando bactérias atravessam barreiras de proteção do corpo e alcançam o sistema nervoso central, desencadeando uma resposta imunológica. Sabe-se que durante o curso da doença os níveis de homocisteína do líquor aumentam, promovendo desmielinização e danos neuronais, e que a vitamina B12 é um tratamento utilizado para diminuir danos. Os microRNAs (miRNAs) são instrumentos de resposta fisiológica, tendo sua expressão modificada em diferentes tecidos, em decorrência de diferentes estímulos fisiológicos e patológicos. Estão associados ao controle da expressão de diferentes mediadores inflamatórios e sua ausência é capaz de causar danos severos a resposta imune. Considerando a importância dos miRNAs para regulação de processos imunes o presente estudo visou elucidar os padrões de expressão dos miRNAs durante o processo inflamatório da meningite pneumocócica (MP), bem como observar esses padrões em resposta ao tratamento adjuvante da doença com vitamina B12. Observamos um total de 37 miRNAs diferencialmente expressos, a infecção regulou positivamente 22 deles, e outros 7 negativ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Meningitis is characterized by an arachnoid, pia mater and cerebrospinal fluid inflammation; causing damage to the cortical and subcortical structures. Bacterial meningitis is closely related to the level of socioeconomic development of country and is considered endemic in Brazil. Despite efforts to develop drugs and vaccines, the disease still has high rates of morbidity and mortality. Occurring when bacteria cross body protection barriers and reach the central nervous system, triggering immune response. It is known that during disease course the the levels of homocysteine increase in cerebrospinal fluid, leading to demyelination and neuronal damage, and that vitamin B12 is a treatment used to reduce those damages. MicroRNAs (miRNAs) are instruments of physiological response, having their expression modified in different tissues, due to different physiological and pathological stimuli. They are associated with expression control of different inflammatory mediators and their absence is capable of causing severe damage to the immune response. Considering the importance of miRNAs in regulation of immune processes, the present study aimed to elucidate miRNA expression patterns during the inflammatory process resulting from pneumococcal meningitis (PM), and to observe these patterns in response to adjuvant treatment of vitamin B12 in infected rats. We observed a total of 37 differentially expressed miRNAs; the infection positively regulated 22 and negatively regulated 7 of them, ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Membros da família Enterobacteriaceae podem causar meningite associada com infecções hospitalares e/ou secundárias. A terapia empírica utilizada em pacientes com suspeita de meningite é, às vezes, ineficiente, devido à produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL), que é o mecanismo mais comum de resistência às cefalosporinas de amplo espectro em enterobactérias. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção de ESBL e AmpC por enterobactérias isoladas de líquido céfalo-raquidiano e sangue de pacientes com suspeita de meningite da região de Ribeirão Preto, no período de 2000 a 2005. O teste do disco combinado foi utilizado para a detecção fenotípica e a PCR foi utilizada para amplificar genes codificadores de ESBL e AmpC. Três (6,52 %) das 46 enterobactérias isoladas no período estudado foram produtoras de ESBL e abrigavam o gene blaCTX-M-2. As enterobactérias produtoras de ESBL foram: S. marcescens IAL 19, (isolada em Araraquara, 2002), P. mirabilis IAL 29 e E. coli IAL 45 (isoladas em Franca, respectivamente, 2003 e 2004). O gene blaCTX-M-2 foi detectado em três gêneros diferentes, sugerindo que o gene blaCTX-M é endêmicos na região de Ribeirão Preto. Os dados obtidos por este trabalho são importantes porque existem poucos relatos sobre a produção de ESBL por enterobactérias isoladas de líquido céfalo-raquidiano e sangue de pacientes com suspeita de meningite. / Members of Enterobacteriaceae family are cause of cause meningitis associated with nosocomial or secondary infection. The empiric therapy used in patients with suspicion of meningitis is, sometimes, inefficient due to extended-spectrum beta-lactamases (ESBL)- producing, that is the most common mechanism of resistance to cephalosporins in enterobacteria. The main objective of this study was to evaluate ESBL and AmpC-producing Enterobacteriaceae isolated of cerebrospinal fluid and blood from patients with suspicion of meningitis from the region of Ribeirão Preto city, during 2000 to 2005. Combination disk method was used for phenotypic detection and PCR was used to amplify genes encoding ESBL and AmpC. Three (6.52 %) out of 46 enterobacteria isolated in the period studied were detected as ESBL-producing and harbored the blaCTX-M-2 gene. The ESBL-producing enterobacteria were: S. marcescens IAL 19, (isolated in Araraquara city SP - Brazil, 2002), P. mirabilis IAL 29 e E. coli IAL 45 (isolated in Franca city SP- Brazil, respectively, 2003 e 2004). The blaCTX-M-2 gene was detected in three different genera isolated for a long time, suggesting that the blaCTX-M-2 gene is endemic in the region of Ribeirão Preto city. The data generated by this study are important because there are low reports about ESBL-producing enterobacteria isolated of cerebrospinal fluid and blood from patients with suspicion of meningitis.

Padronizou-se a PCR-Multiplex para a detecção do DNA de Neisseria meningitidis. Para tanto os primers escolhidos foram: RW01, DG74 e COR28 baseados na subunidade menor do ribossomo (16S rRNA) que apresenta regiões de seqüências conservadas encontradas em todas as bactérias conhecidas. Os primers RW01 e DG74 amplificaram o fragmento universal bacteriano de 370 bp e, os primers RW01 e COR28, o fragmento específico de N. meningitidis de 279 bp em uma única etapa. Os resultados obtidos nas amostras de LCR de 168 pacientes pelos métodos de cultura e PCR-Multiplex quando comparados à bacterioscopia mostraram que tal técnica apresentou alta sensibilidade (91,3%) no estudo de amostras de LCR de bacterioscopia positiva, enquanto que a cultura apresentou resultados menores (19,7%). Nas amostras de LCR com bacterioscopia negativa a sensibilidade da PCR-Multiplex (57,8%) também foi mais elevada do que da cultura (10%). Estes dados sugerem que a técnica aqui padronizada é altamente promissora para ser utilizada como método diagnóstico da meningite meningocócica, especialmente nos casos de pacientes submetidos à terapia antibiótica prévia. / The PCR-multiplex technique was standardized to detect N.meningitidis DNA. It was used universal primer for all bacteria showing sequence of minor subunit of 16S ribossome regions (RW01, DG74) by amplification of 370bp fragment and another (COR28) for specific sequence of N. meningitidis, amplifying 279bp fragment in one step. The results obtained in CSF samples of 168 patients by culture and PCR-Multiplex technique when compared with microscopy showed high sensitivity (91,3%) in samples with positive microscopy (81) to Gram negative diplococcus, however the culture presented only 19, 7% of positivity in the same samples. In other hand the CSF samples with negative bacterioscopy (67) the PCR-Multiplex sensitivity (57,8%) was higher to culture (10,0%) too. These data indicate a high sensitivity and specificity of PCR as a tool for a rapid diagnosis of meningococcal meningitis, mainly in that patient submitted to previous antibiotic therapy as in case of this work (90% of patients) besides the possibility of a rational practice of specific treatment.

Made available in DSpace on 2016-04-27T18:12:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aline Garrido.pdf: 1630937 bytes, checksum: d1c0a35bf9447042cc76027521626759 (MD5) Previous issue date: 2007-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: In this work, the articulation between Speech Teraphy and the Psychoanalysis delimited the inquiry perspective: the relation between language and psyquism in the deaf children who had suffered precocious organic blows. It is in this perspective that the deafness as sequel of the bacterial meningitis was analyzed, since the focus, from the clinical experience, had been the possible effect of such clinical picture in the symbolic functioning of these citizens. Front to the risk and the permanent marks of the illness, as much the corporal project as the unconscious image of the body, of these children, got weak (Dolto, 2004) and, such condition, was incresead by the hospitalization (Golse, 2003). Aim: to analyze the effect of the process of precocious illness, for bacterial meningitis, in the psychic functioning and of verbal language of deaf children Method: research of physician-qualitative nature, developed through the study of two clinical cases, João and Bela, that had respectively been sick by bacterial meningitis with 1:6 and 1 year of ages having, both, acquired bilateral deep deafness as sequel. The interpretation of the clinical material, systemize through written registers and of the memory of the researcher, was based on two axles: the functioning of the language and the psychic functioning. Results: The language disturbs, presented for the participant children of the studies of cases, were not justified, exclusively, for the auditory sensorial deficit. On the basis of the premise of that language and the psyquism is lended affected (Cunha, 2004), were possible to observe that the measure where the language of the children evolves, facilitated subjective constitution to it of the same ones. A new look for these children and family allowed to dislocate them of the place of the illness for the one of interlocutors. When assuming autonomy and breaking of listening and intervention in these two levels these children had improved its familiar, interpersonal relations and the corporal position. Conclusions: The case studies had confirmed the initial proposal of this research; also it was possible to establish the relation between precocious of the illness and aggravation of the psychic prognostic of language and; in both the cases the only organic sequel of the meningitis was the deafness, the symbolic sequels had been the main target of study, this because, in the studied cases, physical and symbolic removals had occurred, between the children and its familiar ones, that, allies the communication of the illness, had generated fight it anticipated in imaginary the familiar one; thus, ahead of a so forceful organic fact, one suggests that the therapists retake, with the patient and its familiar ones, the subjective contents of clinical history since the period of illness; the etiology of the deafness (in the case, the bacterial meningitis) was boarded in its bio-psychic dimension, leaving marks on the language, in the singularity of each particular clinical case / Introdução: Neste trabalho, a interlocução entre a Fonoaudiologia e a Psicanálise delimitou a perspectiva de investigação: a relação entre linguagem e psiquismo nas crianças surdas que sofreram golpes orgânicos precoces. É nessa perspectiva que a surdez como seqüela do acometimento por meningite bacteriana foi analisada, já que o foco, a partir da experiência clínica, foram os possíveis efeitos de tal quadro clínico no funcionamento simbólico desses sujeitos. Frente ao risco e às marcas permanentes da doença, tanto o esquema corporal como a imagem inconsciente do corpo das crianças fragilizam-se (Dolto, 2004) e, tal condição, é potencializada pela hospitalização (Golse, 2003). Objetivo: analisar os efeitos do processo de adoecimento precoce por meningite bacteriana, no funcionamento psíquico e de linguagem oral de crianças surdas Método: pesquisa de natureza clínico-qualitativa, desenvolvida através do estudo de dois casos clínicos, João e Bela, que foram acometidos por meningite bacteriana respectivamente com 1:6 e 1 ano de idades tendo, ambos, adquirido surdez profunda bilateral como seqüela. A interpretação do material clínico, sistematizado através de registros escritos e da memória da pesquisadora, foi baseada em dois eixos: o funcionamento da linguagem e o funcionamento psíquico. Resultados: Os transtornos de linguagem apresentados pelas crianças não se justificavam, exclusivamente, pelo déficit sensorial auditivo. Com base na premissa de que linguagem e o psiquismo afetam-se mutuamente (Cunha, 2004), foi possível observar que, a medida em que a linguagem das crianças evoluía, facilitava-se a constituição subjetiva das mesmas. A re- significação das crianças frente à família enlutada, permitiu deslocá-las do lugar de doentes para o de interlocutores; o que favoreceu a elaboração de conflitos e a redução do sofrimento psíquico de ambos. Conclusões: Os estudos de caso confirmaram a proposição inicial desta pesquisa e também foi possível estabelecer a relação entre precocidade do acometimento e agravamento do prognóstico de linguagem e psíquico. Em ambos os casos a única seqüela orgânica da meningite foi a surdez, contudo as seqüelas simbólicas foram intensas e articuladas aos afastamentos físicos e simbólicos, entre as crianças e seus familiares. Tais afastamentos, aliados a comunicação do diagnóstico da doença, geraram o luto antecipado no imaginário familiar. Assim, diante de um fato orgânico tão contundente, sugere-se que os fonoaudiólogos retomem, com o paciente e seus familiares, os conteúdos subjetivos da história clínica desde o período de adoecimento; de tal forma que a etiologia da surdez (no caso, a meningite bacteriana) seja abordada em sua dimensão bio-psíquica, na singularidade de cada caso clínico particular

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-04-04T13:53:47Z No. of bitstreams: 1 TES_ANDREA_LUCIA_MACHADO_BARCELOS_PARCIAL.pdf: 529395 bytes, checksum: a63dcc0bee5b3691d04ddc38e874be24 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T13:53:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_ANDREA_LUCIA_MACHADO_BARCELOS_PARCIAL.pdf: 529395 bytes, checksum: a63dcc0bee5b3691d04ddc38e874be24 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Objective: To compare the ferritin levels in the cerebrospinal fluid (CSF) of children with clinical suspicion bacterial meningitis, viral and non-meningitis cases. Methods: A cohort, historical and contemporary study was conducted in two tertiaries hospitals in the southern Brazil. All children included were between 28 days and 12 years old with suspected acute meningitis. Ferritin levels in the CSF were measured in the period between 2005 and 2015 and they were compared among patients with bacterial meningitis, viral meningitis and non-meningitis. Results: Eighty one patients were included. The median age was 24 (IQR8.0-69.0) months. It was identified 32 patients with viral meningitis (39%), 23 with bacterial (28%) and 26 as non-meningitis (32%). Demographic and clinical characteristics at admission were similar between groups. The median CSF ferritin was 52.8 (IQR30.7-103.0) for the bacterial meningitis group, 4.1 (IQR3.0-6.7) for the viral group and 4.0 (IQR2.0-2.3) for the non-meningitis group (p<0.001). When compared in pairs, bacterial meningitis was distinguished from viral meningitis (p <0.001) and non-meningitis (p <0.001). However, ferritin levels failed to distinguish viral meningitis from non-meningitis. The CSF ferritin, with a cut-off value of 16 ng/ml, had 100% sensitivity and 98.3% specificity for bacterial meningitis. Conclusion: CSF ferritin was shown to be an excellent marker for identifying and discriminating bacterial meningitis in children with clinical symptoms of this disease. / Objetivo: Comparar os n?veis de ferritina no l?quido cefalorraquidiano (LCR) de crian?as com suspeita cl?nica de meningite bacteriana, viral e n?o meningite. Metodologia: Estudo de coorte, hist?rico e contempor?neo realizado em dois hospitais terci?rios do Sul do Brasil. Foram inclu?das todas as crian?as entre 28 dias e 12 anos de vida, que se apresentaram com suspeita cl?nica de meningite aguda, em que foram dosados os n?veis de ferritina no LCR no per?odo entre 2005 e 2015. Foram comparados os n?veis de ferritina no LCR dos pacientes com meningite viral, meningite bacteriana e n?o meningite. Resultados: Foram inclu?dos 81 pacientes. A mediana da idade foi 24 (IQR8,0-69,0) meses. Identificou-se 32 pacientes com meningite viral (39%), 23 com bacteriana (28%) e 26 com n?o meningite (32%). As caracter?sticas demogr?ficas e cl?nicas na interna??o foram semelhantes entre os grupos. A mediana da ferritina no LCR foi 52,8 (IQR30,7-103,0) para o grupo da meningite bacteriana, 4,1 (IQR3,0-6,7) para o grupo viral e 4,0 (IQR2,0-2,3) para o grupo n?o meningite (p<0,001). Quando comparados os pares, distinguiu-se meningite bacteriana da meningite viral (p<0,001) e da n?o meningite (p<0,001). Entretanto, n?o conseguiu distinguir meningite viral da n?o meningite. A ferritina no LCR, com um ponto de corte de 16ng/ml, mostrou uma sensibilidade de 100% e uma especificidade de 98,3% para o diagn?stico de meningite bacteriana. Conclus?o: A ferritina no LCR mostrou-se um marcador excelente para identificar e discriminar meningite bacteriana em crian?as com sintomas cl?nicos desta doen?a.

Introdução: Dados sobre a relação entre a farmacocinética do fluconazol (FCZ) e anfotericina B (AMB) no líquido cefalorraquidiano (LCR) e a hipertensão intracraniana (HIC) não se encontram disponíveis na literatura. Objetivos: Avaliar a influência da pressão intracraniana na concentração dos antifúngicos AMB e FCZ no LCR de pacientes com meningite criptococócica internados no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), no período de 1 ano. Métodos: Foram estudados 15 pacientes com meningite criptococócica durante os primeiros 14 dias de tratamento com AmB (1 mg/kg/dia) e FCZ (800 mg/dia). As amostras de LCR foram obtidas por meio de punções lombares de rotina realizadas nos dias 1, 7 e 14 da terapia antifúngica, respectivamente. Os valores das pressões intracranianas de abertura foram obtidos no momento de cada punção lombar. Os níveis de AmB e FCZ no LCR foram medidos pela metodologia de cromatografia líquida de alta performance (HPLC). A concentração inibitória mínima (CIM) para AmB, FCZ, voriconazol (VRZ) e flucitosina (5-FC) de cada isolado de Cryptococcus sp. foi realizada de acordo com o as normas descritas no documento M27-A3, do CLSI, publicado em 2008. Resultados: Entre os 15 pacientes incluídos no estudo, C. gattii foi isolado do LCR de 2 pacientes e C. neoformans foi isolado do LCR de 13 pacientes apresentaram. A condição de imunossupressão encontrada foi a AIDS, seguida de transplante de órgão sólido. Nove pacientes apresentaram cultura negativa de LCR no 14º dia de terapia antifúngica. Os níveis de AmB no LCR foram indetectáveis para a maioria das amostras de LCR durante os 14 dias de terapia antifúngica. Os níveis de FCZ no LCR aumentaram progressivamente do dia 1 ao dia 14 de terapia. Seis pacientes apresentaram HIC no dia 1, com variação da pressão de abertura entre 100 mmH2O e 650 mmH2O no respectivo dia. A pressão intracraniana não interferiu nas concentrações de FCZ no LCR. Não observamos correlação entre a HIC e as concentrações de AMB e FCZ no LCR de acordo com a correlação de Spearman (Spearman p= 0.122). Conclusão: São necessários mais estudos para avaliar o papel da HIC na eficácia terapêutica de diferentes agentes antifúngicos em pacientes com meningite criptococócica. / Introduction: Data considering the relationship between pharmacokinetics of fluconazole (FCZ) and amphotericin B (BPA) in cerebrospinal fluid (CSF) and intracranial hypertension (IH) are not available in the literature. Objectives: To evaluate the influence of intracranial pressure on the concentration of the antifungals AMB and FCZ in the CSF of patients with cryptococcal meningitis admitted at the Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), within a period of one year. Methods: Fifteen patients with cryptococcal meningitis were studied during the first 14 days of treatment with AmB (1 mg / kg / day) and FCZ (800 mg / day). CSF samples were obtained by means of routine lumbar punctures performed on days 1, 7 and 14 of antifungal therapy, respectively. The values of intracranial opening pressures were obtained at the time of each lumbar puncture. The levels of AmB and FCZ in the CSF were measured by high performance liquid chromatography (HPLC) methodology. The minimum inhibitory concentration (MIC) for AmB, FCZ, voriconazole (VRZ) and flucytosine (5-FC) of each isolate of Cryptococcus sp. was performed according to CLSI guideline M27-A3, published in 2008. Results: Among the 15 patients included in the study, C. gattii was isolated from the CSF of 2 patients and C. neoformans was isolated from the CSF of 13 patients presented. The immunosuppressive condition found was AIDS, followed by solid organ transplantation. Nine patients presented negative CSF culture on the 14th day of antifungal therapy. AmB levels in the CSF were undetectable for most of the CSF samples during the 14 days of antifungal therapy. CSF FCZ levels increased progressively from day 1 to day 14 of therapy. Six patients presented IH on day 1, with variation of the opening pressure between 100 mmH2O and 650 mmH2O on the respective day. Intracranial pressure did not interfere with CSF on FCZ concentrations. We did not observe a correlation between IH and the concentrations of AMB and FCZ in the CSF according to the Spearman correlation (Spearman p = 0.122). Conclusion: Further studies are needed to evaluate the role of IH in the therapeutic efficacy of different antifungal agents in patients with cryptococcal meningitis.

No presente trabalho, foi realizada uma MULTIPLEX-PCR para a detecção do DNA bacteriano de S. agalactiae, S.pneumoniae, N. meningitidis, H. influenzae e outros possíveis agentes etiológicos bacterianos das meningites. Este ensaio combina cinco diferentes iniciadores que detectam simultaneamente o gene crtA de N. meningitidis, o gene p6 de H. influenzae, o gene fbsA de S. agalactiae, o gene lytA de S. pneumoniae e o gene universal 16S rDNA para identificar a presença de agente bacteriano. Foram analisadas 447 amostras de LCR, o ensaio detectou 27 amostras positivas para cultura bacteriana e 13 amostras com resultado de cultura negativa. Estas amostras com cultura negativa apresentavam alterações bioquímicas, hematológicas, imunológicas ou microbiológicas (bacterioscopia) sugestivas de meningite, estes dados auxiliaram na análise dos resultados do MULTIPLEX-PCR. Este ensaio não apresentou reações inespecíficas com fungos, vírus e com outros agentes bacterianos testados (amplificando somente o gene 16S rDNA). A MULTIPLEX-PCR é um ensaio rápido, confiável, de fácil execução e facilmente implementável para a confirmação de meningite bacteriana. E este método pode auxiliar no diagnóstico de meningite com cultura de LCR negativa, particularmente para pacientes que previamente iniciaram antibioticoterapia e no diagnostico diferencial de meningite bacteriana ou viral. / In this work, a MULTIPLEX-PCR has conducted for the bacterial DNA detection of S. agalactiae, S.pneumoniae, N. meningitidis, H. influenza and other possible etiologic bacterial meningitis agents. This test combines five different primers that detect simultaneously the crtA gene of N. meningitides, the p6 gene of H. influenza, the fbsA gene of S. agalactiae, the lytA gene of S. pneumoniae and the 16S rDNA universal gene to identify the presence of bacterial agent. From the 447 samples of CSF that were analyzed, the test detected 27 positive samples for bacterial culture and 13 samples with the result of negative culture. These negative culture samples presented biochemical changes, hematological, immunological or microbiological (bacterioscopy) suggestive of meningitis, these data helped in the analysis of the MULTIPLEX-PCR results. This test showed no nonspecific reactions with fungi, viruses and other bacterial agents tested (only amplifying the gene 16S rDNA). The MULTIPLEX-PCR test is a fast, reliable, easy to implement and easily implementable for of bacterial meningitis confirmation. And this method can aid in the meningitis diagnosis with negative culture of CSF, particularly for patients who previously started antibiotic therapy and in the differential diagnosis of bacterial or viral meningitis.