Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-18. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:13Z : No. of bitstreams: 1 000854399_20170917.pdf: 841767 bytes, checksum: d9701c2b442b36a8040601e348fb5b26 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-09-22T12:16:26Z: 000854399_20170917.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-09-22T12:17:16Z : No. of bitstreams: 1 000854399.pdf: 8066776 bytes, checksum: 2890b7319e866efe0214261d4b186fbf (MD5) / A espécie Casearia sylvestris Sw. (Salicaceae) é um importante representante do gênero Casearia Jacq. destacando-se nos pontos de vista químico, farmacológico, econômico, biotecnológico e ecológico. Por possuir alta capacidade adaptativa, encontra-se amplamente disseminada nas Américas Central e do Sul, sendo que, no Brasil, ocorre em praticamente todos os biomas. Os dados morfo-anatômicos, químicos e genéticos disponíveis sobre C. sylvestris, indicam relação próxima entre variedade lingua e bioma Cerrado e entre variedade sylvestris e Mata Atlântica, havendo também dados descrevendo diferenças genéticas significativas entre estas duas variedades. Em ecótonos Cerrado/Mata Atlântica, estas duas variedades co-existem, havendo principalmente nessas regiões indivíduos com características intermediárias, tanto do ponto de vista morfo-anatômico quanto genético. Há também indícios de que em C. sylvestris var. lingua/Cerrado ocorram predominantemente compostos fenólicos, enquando em C. sylvestris var. sylvestris/Mata Atlântica predominam os diterpenos clerodânicos. Assim, este trabalho tem como objetivo principal avaliar e confirmar indícios de que a composição química, no que concerne a metabólitos secundários, está relacionada e/ou condicionada pelos biomas, e principalmente associada aos respectivos morfotipos predominantes e, portanto, sob forte controle genético. Para tanto, desenvolveu-se e validou-se um método analítico por UHPLC-DAD para a análise simultânea de compostos fenólicos e diterpenos clerodânicos produzidos pelas duas variedades de C. sylvestris. Através do estudo metabolômico destas duas variedades utilizando foram identificados 15 diterpenos clerodânicos em C. sylvestris var. sylvestris e 14 flavonoides glicosilados e uma catequina em C. sylvestris var. lingua. O estudo dos ciclos circadiano e sazonal de ambas as variedades evidenciou um... / The species Casearia sylvestris Sw (Salicaceae) is an important representative of the Casearia Jacq. genus, due to its chemical, pharmacological, economic, environmental and biotechnological aspects. Because of its high adaptive capacity, this species is widespread in Central and South America and, in Brazil, it occurs in practically all biomes. The morpho-anatomical, chemical and genetic data available on C. sylvestris, indicate close relationship between the variety lingua and the Cerrado biome, and between the variety sylvestris and Atlantic Forest. Also, there are data describing significant genetic differences between these two varieties. In ecotones Cerrado/Atlantic Forest, it can be found these two varieties, including individuals with intermediate characteristics, considering both morpho-anatomical and genetic ones. There is evidence that in C. sylvestris var. lingua/Cerrado occur predominantly the phenolic compounds, while in C. sylvestris var. sylvestris/Atlantic Forest the clerodane diterpenes predominate. So, the main objective of this work is to evaluate if the chemical composition, considering the secondary metabolites, is related to and/or conditioned by biomes, and mainly associated to their predominant morphotypes and, therefore, under strong genetic control. To evaluate this, an analytical method using UHPLC-DAD was developed and validated for the simultaneous analysis of phenolic compounds and clerodane-type diterpenes produced by the two C. sylvestris varieties. The metabolomic study allowed the identification of 15 clerodane-type diterpenes in C. sylvestris var. sylvestris and 14 glycosylated flavonoids and one catechin in C. sylvestris var. lingua. The study of the circadian rhythm and seasonal cycle of both varieties showed a decrease in the production of the two secondary metabolites classes in the reproductive period. In the infraspecific chemical...

Submitted by MAIARA STEFANINI BORGES null (borges.maiara@iq.unesp.br) on 2016-03-22T21:06:41Z No. of bitstreams: 1 MAIARA STEFANINI BORGES.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-23T13:30:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 borges_ms_me_araiq.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-23T13:30:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 borges_ms_me_araiq.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Micro-organismos endofíticos, geralmente fungos e bactérias, vivem sistematicamente no interior das plantas sem causar, aparentemente, danos a seus hospedeiros. Fungos endofíticos representam um importante grupo de fungos com potencial fármaco e biotecnológico e podem ser isolados de diversas plantas medicinais. A espécie vegetal Eugenia jambolana Lam. tem sido intensamente explorada química e biologicamente devido a seus usos populares e por apresentar diversas atividades biológicas. Logo, o estudo de fungos endofíticos, associados a esse espécie vegetal, apresenta-se como uma estratégia promissora na obtenção e identificação de substâncias potencialmente bioativas. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo principal a avaliação química do fungo endofítico Saccharicola sp. isolado de Eugenia jambolana Lam. Este endófito foi cultivado em pequena escala nos meio de cultura liquido (MDB) e sólido (Milho) e em escala ampliada no meio Czapek. O caldo foi separado dos micélios após 28 dias (meios líquidos) e 21 dias (meio sólido) por filtração e o filtrado foi submetido à partição líquido/líquido com AcOEt fornecendo, após a evaporação do solvente, os respectivos extratos brutos. Os extratos foram avaliados frente a produção metabólica por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H e também avaliados frente aos ensaios biológicos. Portanto para os extratos MDB, Milho Fr.CH3CN, Milho Fr. aquosa e Milho Fr.Hexânica, foram realizados ensaios antifúngico, antioxidante e anticolinesterásico, onde estes extratos demonstraram ser promissores. O extrato obtido em escala ampliada (Czapek) foi fracionado em cartucho SPE (extração em fase sólida), resultando em seis frações (Ss.C.Fr1- Ss.C.Fr6). Do estudo da fração Ss.C.Fr1 foi possível o isolamento de uma substância o Ácido fusárico (1) e a fração Ss.C.Fr3 resultou no isolamento de 6,7 dihidroxi- 4,6 dimetil octanoato de metila (2), substância inédita. O extrato obtido em escala reduzida (Milho Fr.CH3CN) foi submetido a fracionamento em coluna de sílica gel de fase reversa (C18), resultando em oito frações (Ss.M. CH3CN Fr1 - Ss.M. CH3CN Fr8). O estudo da fração Ss.M. CH3CN Fr5 resultou no isolamento da substância 4-hidroximeleina (3). O estudo da fração Milho Fr.Aquosa-XAD resultou no isolamento de duas substâncias Timidina (4) e Adenosina (5). Portanto, o estudo químico com o fungo endofítico Saccharicola sp. resultou no isolamento de cinco substâncias puras. Sendo assim, este trabalho visou isolar substâncias potencialmente bioativas através da investigação dos extratos e frações de Saccharicola sp.. / Endophytic microorganisms, often bacteria and fungi systematically live within the plant without apparent harm their hosts. Endophytic fungi represent an important group of fungi with biotechnological potential and may be isolated from various medicinal plants. The plant species Eugenia jambolana Lam. has been intensively explored chemically and biologically due to its popular uses and it has several biological activities. Thus, the study of endophytic fungi associated with this plant species, presents itself as a promising strategy in obtaining or identifying potentially bioactive substances. Within this context, this study aimed to evaluate the chemical endophytic fungus Saccharicola sp. isolated from Eugenia jambolana Lam., encoded as Ej-c04. This endophyte was cultivated on a small scale to a liquid culture medium PDB solid Corn and enlarged scale for the Czapek medium. The broth was separated from the mycelium after 28 days (liquid media) and 21 days (solid medium) by filtration and the filtrate was subjected to liquid / liquid partition with ethyl acetate providing after evaporation of the solvent, their crude extracts. The extracts were evaluated against metabolic production by TLC, CLAE-DAD and 1H NMR also evaluated and compared to the bioassay. So for MDB extracts, Fr.CH3CN Corn, aqueous Fr. Corn and Corn Fr.Hexânica, tests were performed antifungal, antioxidant and anticholinesterase where these extracts have shown promise.The extract obtained in enlarged scale (Czapek) was fractionated on SPE cartridge (solid phase extraction), resulting in six fractions (Ss.C.Fr1- Ss.C.Fr6). From Ss.C.Fr1 fraction was possible to isolate a substance fusaric acid (1) and Ss.C.Fr3 fraction resulted in the isolation of (2E, 4E) - 6,7 dihydroxy-4,6-dimethyl octanoate (2) novel substance. The extract obtained in small scale (Corn Fr.CH3CN) was subjected to fractionation column of silica gel reversed phase (C18) resulting in eight fractions (Ss.M. CH3CN- Fr1 - CH3CN Ss.M. Fr8). The study fraction Ss.M. CH3CN Fr5 resulted in the isolation of 4-hidroximeleina substance (3). The study of fraction Corn Fr. Aqueous -XAD resulted in the isolation of two substances Thymidine (4), adenosine (5). Therefore the chemical study of the endophytic fungus Saccharicola sp. resulted in the isolation of five pure substances Thus, this study aimed to isolate potentially bioactive substances through the investigation of extracts and fractions of Saccharicola sp..

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-30. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:51Z : No. of bitstreams: 1 000860163_20160930.pdf: 428080 bytes, checksum: feee8dad4c0713653518a6d60b5255ab (MD5) Bitstreams deleted on 2016-10-03T12:15:51Z: 000860163_20160930.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-10-03T12:16:37Z : No. of bitstreams: 1 000860163.pdf: 1938508 bytes, checksum: 6a842a8089433f10026b8fae86e79bbd (MD5) / As avaliações deste trabalho foram feitas in vivo e in vitro. O objetivo do trabalho in vivo foi avaliar o efeito de fontes de óleo de soja em associação com glicerina em dietas para ruminantes sobre a fermentação ruminal, síntese de proteína microbiana, eficiência da biohidrogenação ruminal e fluxo ruminal de ácidos graxos. Oito novilhos da raça Nelore, com peso inicial de 554,13 ± 36,35 kg e idade média de 30 meses, com cânula ruminal e duodenal, foram alimentados com dietas contendo glicerina (100 g/kg MS) e fontes de óleo de soja (50 g/kg MS). Foram fornecidas quatro tipos de dietas com proporção forragem:concentrado (30:70), silagem de milho foi fornecida como volumoso, e o concentrado diferenciado pela fonte de óleo de soja: 1) dieta controle CO; 2) dieta com soja grão SG; 3) dieta com óleo de soja OS; e 4) dieta com gordura protegida comercial GP. Os animais foram divididos em dois quadrados latinos 4x4, com quatro períodos experimentais de 16 dias cada. As médias foram submetidas à análise de contrastes ortogonais. O uso de fontes de óleo de soja (5% EE) em associação com glicerina (100 g/kg MS) não afeta o consumo da MS, mas sim a digestibilidade da MS, FDNcp e EE; não resultando em mudanças no pH ruminal e nas concentrações dos ácidos graxos de cadeia curta. Não houve redução na produção de acetato (65,63 Mm/L), mas a produção de propionato foi incrementada (40,02 Mm/L) possivelmente pela inclusão da glicerina, provocando redução na relação acetato:propionato (1,69). A eficiência da síntese de nitrogênio microbiana foi favorecida para a dieta OS (15,14 g N-Mc/kg de MOAFN). O nitrogênio retido no tecido foi maior na dieta SG (46,74%). Os tratamentos afetaram as concentrações e o perfil dos ácidos graxos no rumen e o fluxo ruminal de ácidos graxos. A taxa de passagem para o ácido linoléico foi afetada com o menor valor para OS e maior valor para SG e GP; no entanto, a taxa... / Evaluations of this work were done in vivo and in vitro. The purpose of the in vivo study was to evaluate the effect of soybean oil sources in combination with glycerin in diets for ruminants in ruminal fermentation, microbial protein synthesis, ruminal efficiency and intestinal flow of fatty acids. Eight steers Nellore, with initial weight of 554.13 ± 36,35 kg and average age of 30 months, with ruminal and duodenal cannulas were fed diets containing glycerol (100 g/kg DM) and soybean oil sources ( 50 g/kg DM). Were provided four types of diets with proportion to forage:concentrate (30:70), corn silage was provided as roughage, and the concentrate was different soybean oil sources: 1) control diet CO; 2) diet with soybean GS; 3) diet with soybean oil OS; and 4) diet with commercial protected fat GP. The animals were divided into two Latin squares 4x4, with four experimental periods of 16 days each. Means were submitted to analysis of orthogonal contrasts. The use of soybean oil sources (5% EE) in combination with glycerin (100 g/kg DM) does not affect the consumption of MS, but the DM, FDNap and EE; not resulting in changes in rumen pH and concentrations of short-chain fatty acids. There was no reduction in the production acetate (65.63 Mm/L), but propionate production was increased (40.02 Mm/L) possibly due to the inclusion of glycerin, causing reduction in acetate: propionate ratio (1.69). The efficiency of microbial nitrogen synthesis was enhanced for diet OS (15.14 g N-Mc/kg MOAFR). Nitrogen retained in the tissue was greater in the diet SG (46.74%). The treatments affected the concentration and profile of fatty acids in the rumen and ruminal flow of fatty acids. The pass rate for linoleic acid was affected with the lowest value for OS and greater value for GS and GP; however, the biohydrogenation rate for linoleic and linolenic acid was higher for. The greater efficiency of the biohydrogenation of linoleic acid and oleic acid was to OS

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-17Bitstream added on 2014-06-13T19:33:27Z : No. of bitstreams: 1 souza_mc_me_jabo.pdf: 333310 bytes, checksum: 37cfc8757cedd14ed24ec276ff06a4ea (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho teve por objetivos: (i) selecionar genótipos de tangerinas resistentes a infecção por Alternaria alternata, e estabelecer relações entre níveis de severidade da doença entre folhas e frutos, (ii) avaliar a contribuição de metabólitos na resistência de folhas maduras de tangerinas a A. alternata, (iii) selecionar genótipos de tangerina resistentes a infecção por Elsinoe fawcettii. Para tais experimentos foram utilizados 22 genótipos de tangerina pertencentes ao banco de germoplasma da Estação experimental de Citricultura de Bebedouro, Bebedouro-SP. (i) Dentre os materiais genéticos resistentes, foram constatados quatro genótipos de clementinas (Citrus clementina), seis mandarinas, sendo duas pertencentes a C. reticulata, duas a C. tangerina, uma a C. deliciosa e uma a C. nobilis; um tangelo (C. tangerina x C. paradisi); dois híbridos de mandarinas, sendo um resultante do cruzamento entre C. nobilis x C. deliciosa, e o outro de C. clementina x C. reticulata; um híbrido de tangor (C. clementina x C. sinensis) e dois híbridos de satsumas (C. unshiu x C. deliciosa.). Também foi constatado indícios de relação entre severidade de doença em folhas jovens destacadas e incidência natural de doença em frutos. (ii) Ao final dos experimentos, não foi observado influência desses metabólitos na defesa das folhas maduras de tangerina a MMA. (iii) Dente os genótipos avaliados, foram observados 10 materiais genéticos resistentes a verrugose. Dentre estes materiais, observou-se que os genótipos Commune, Caffin, Bruno, Burgess, Peau Lisse, Zanzibar, Beuty of Glen Retreat, Rode King e Encore também se apresentaram resistentes a MMA. Estes materiais são promissores para o cultivo de tangerinas em áreas de ocorrência destas doenças, e poderão contribuir com futuros trabalhos de melhoramento genético para resistência a MMA e verrugose. / The aims of this work were: (i) select tangerine genotypes resistant to Alternaria alternata infection and classify relative degrees of disease severity among leaves and fruits, in order to ultimately control the pathogen; (ii) evaluate metabolites contribuition on mature leaves of tangerines to A. alternata; (iii) select tangerine genotypes resistant to Elsinoe fawcettii. For such experiments 22 tangerines genotypes from germoplasm bank at Estação experimental de Citricultura de Bebedouro, Bebedouro-SP were used. (i) Among the resistant genetic materials, four clementines genotypes (Citrus clementina), six mandarines, being two of C. reticulata, two C. tangerina, one C. deliciosa and one C. nobilis; one tangelo (C. tangerina x C. paradisi); two mandarines hybrids, being one resulted between C. nobilis x C. deliciosa crossing, and other at C. clementina x C. reticulata; one tangor hybrid (C. clementina x C. sinensis) and two satsumas hybrids (C. unshiu x C. deliciosa) were found. A consistent relationship was noted among level of susceptibility in leaves (as evaluated following either natural infection or artificial inoculation), severity and susceptibility of fruit, suggesting a new methodology for diagnosis, identification and selection of Citrus spp. varieties resistant to A. alternata. (ii) At the end of experiments, it was not found any relationship between the presence of these metabolites and resistance to MMA on tangerines mature leaves. (iii) Among the genotypes evaluated, 10 genetic materials resistant to scab were observed. Finally, Commune, Caffin, Bruno, Burgess, Peau Lisse, Zanzibar, Beuty of Glen Retreat, Rode King and Encore cultivars, being resistant to A. alternata and also to E. fawcettii, exhibited good agronomic characteristics and, consequently, show a promising economic exploration.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-05Bitstream added on 2014-06-13T21:03:52Z : No. of bitstreams: 1 graca_jp_dr_jabo.pdf: 1264001 bytes, checksum: 1cd2f99dfd9f1cb64530bb34a99f6048 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A pulverização com os tratamentos água; água + Tween 20; e água + Tween 20 + cis-Jasmone nos genótipos BRS 134, IAC 100 e Dowling afetaram negativamente o peso de insetos-praga da soja. Plantas de soja pulverizadas no estádio R6 com os tratamentos foram utilizadas para avaliar o efeito do cis-Jasmone sobre ganho de peso do percevejo-marrom, Euschistus heros. Plantas da cultivar Dowling tratadas com cis-Jasmone reduziram significativamente o peso do percevejo. A aplicação do cis-Jasmone também provocou a produção de isoflavonoides nas vagens e nos grãos. Nas vagens foi observado o aumento das formas glicosídicas (daidzina e genistina) e das malonís (daidzina e genistina), assim como das agliconas (daidzeína, gliciteína e genisteína). No grão, observou-se o aumento das concentrações de daidzeína e malonil genistina. Plantas dos mesmos genótipos no estádio V3, foram pulverizadas com os mesmos tratamentos. As folhas de plantas tratadas com Tween 20 e cis-Jasmone reduziram o peso de Anticarsia gemmatalis tanto na cultivar IAC 100 como Dowling. A produção de isoflavonóides nas folhas foi afetada pela aplicação do Tween 20 e cis-Jasmone, aumentando a concentração da malonil (daidzina, glicitina e genistina) e da aglicona daidzeína. Pelas análises foi observado aumento da concentração da fitoalexina coumestrol nas plantas tradadas com Tween 20 e cisJasmone. A influência negativa no peso dos insetos e aumento da concentração dos isoflavonóides sugere que o Tween 20 e o cis-Jasmone tem papel importante na indução da rota dos fenilpropanoides e que estes compostos afetam o desenvolvimento de insetos-praga / The spray treatments water; water + Tween 20; and water + Tween 20 + cis-Jasmone in the genotypes BRS 134, IAC 100 and Dowling had negative effects on the weight of insect-pests of soybean. Soybean plants sprayed with treatments at R6 stage were used to evaluate the effect of cis-Jasmone on the weight gain of brown stinkbug, Euschistus heros. Plants of Dowling treated with cis-Jasmone significantly reduced the weight of the stink-bug. The application of cis-Jasmone also triggered the production of isoflavonoids in soybean pods and grains. In the pods, it was observed increasing in the glycosidic (daidzin and genistina), and the malonyl (daidzin and genistin), as well as the aglycone (daidzein, glycitein and genistein) forms. In the grain isoflavonoids daidzein and malonyl genistein concentrations increased. Plants of the same genotypes at V3 stage were sprayed with the same treatments. Leaf plants treated with Tween 20 and cis-Jasmone reduced the weight of Anticarsia gemmatalis in the cultivar IAC 100 and Dowling. The production of isoflavonoids in leaves was affected by Tween 20 and cisJasmone sprayings, increasing the concentration of malonyl (daidzin, genistin and glycitin) and aglycone daidzein. By these analyzes, it was observed increasing in phytoalexin coumestrol concentration in plants treated with Tween 20 and cis-Jasmone. The negative influence on the weight of insects and on the increase of isoflavonoid concentrations suggests that the Tween 20 and cis-Jasmone plays an important role in inducing pathway of phenylpropanoids and that these compounds affect development of insect-pests

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseAQLS.pdf: 12035597 bytes, checksum: 9708ca94fb3128572883e445067600b8 (MD5) Previous issue date: 2007-12-11 / The plant Murraya paniculata is native in Asia where its root barks have produced the contraceptive and hormonal alkaloid yuehchukene. In Brazilian specimens no alkaloid was detected. This had inspired new researches about the microorganisms that interact with it in Brazil, including the present work. Therefore, 1711 endophytic microorganisms were isolated from four host plants, in São Paulo State, and the seasonal colonization indexes, the microbial frequencies and the specificities of the identified groups per tissues (microhabitats) were verified. Among the obtained endophytes, 1061 were filamentous fungi and 650 were bacteria, with 62% and 38% of frequency and 33% and 20% of colonization index, respectively. The colonization indexes of the bacteria in comparison to the of fungi were lower in all gatherings and hosts, principally for leaves that, had shown the bigger frequency for the fungi and the smaller for the bacteria. Fungi were clustered in 20 morphological groups, 15 identified to genus level and five unknown, including two Mycelia sterilia. The recognized genera were Fusarium, Colletotrichum and its teleomorphs Giberella and Glomerella respectively, Trichoderma, Phomopsis, Paecilomyces, Penicillium, Aspergillus, Epicoccum, Pestalotiopsis, Alternaria, Xylaria, Nigrospora and Guignardia and the unknown were named A-E groups. The more frequent genera were rich in diversity, according to morphological and molecular data. A more diversity of fungi genera were verified in the winter (17) and a less in the spring (9) as the endophytic fungi were smaller in quantity in the summer (44.7%) and greater in the autumn (77.7%). From a sample of 59 isolates and six fungi as prototypes genomic DNAs were obtained and their ITS-1 regions were sequenced. The unknown strain B (Fed) had sequenced its 5.8s and ITS-2 regions. 21 species were identified by their ITS-1 regions and two others were hypothesized as novelty: one Trichoderma and the Fed that all morphological and chemotaxonomic studies appoint as a new species. Trichoderma associated to M. paniculata were in majority from barks and had showed great diversity of species (9). It was evaluated too the potential of the endophytes from host for bioactive metabolite production. The more promising groups for extracellular substances were the fungi Penicillium, with bactericidal and antiprotozoal actions, Pestalotiopsis, active against Candida, and Trichoderma, with fungicidal and bactericidal activities. For Fed it was noted its intracellular metabolites as strong bactericidal and its volatiles as anti-fungi. By looking for the active principles of those microorganisms, from Penicillium citrinum the citrinin and an undetermined alkaloid were obtained and from Trichoderma koningii 13 metabolites, including four koninginins related to those biological activities observed were identified. From Fed-3, 10 substances were obtained, seven fixed and three volatile, including a novel manosil guaiane type sesquiterpene and the new, as natural substances, 3-Hydroxy-5-phenylmethyl- (3S,5R)-b10-O-tetrahydrofuran-2-one and chloroacetonitrile. The chloroacetonitrile was suggested as the active principle of the Fed s volatiles. This work was important to reveal the diversity of the endophytes from Brasilian M. paniculata, the high variability of their more frequent genera, two possible novel species and the potential of them to produce bioactive and new metabolites. This work is hoped to contribute for understanding the endophytic microorganism biodiversity as well as their chemical and biotechnological potential. / A planta Murraya paniculata é de origem asiática e em seu continente de origem foi isolado, das cascas das raízes, o alcalóide yuehchukeno que apresenta atividade anticoncepcional e hormonal. Em espécimes brasileiros nenhum alcalóide foi detectado, o que inspirou novas pesquisas envolvendo o estudo dos microrganismos que interagem com esta, incluindo o presente trabalho. Assim, foram isolados 1.711 microrganismos endofíticos de quatro hospedeiras, no estado de São Paulo, verificando-se os índices de colonização sazonal, a freqüência e a especificidade dos grupos identificados por tecidos (micro-habitat). Dos isolados, 1.061 eram fungos filamentosos e 650 eram bactérias, com freqüências de 62% e 38% e índices de colonização de 33% e 20%, respectivamente. Os menores índices de colonização foram observados para as bactérias em todas as coletas, principalmente nas folhas que apresentaram a maior freqüência para os fungos. Os fungos endofíticos foram classificados em 20 grupos morfológicos, 15 identificados ao nível de gênero e cinco desconhecidos, sendo dois Micelia sterilia. Os gêneros identificados foram Fusarium, Colletotrichum e seus telemorfos Giberella e Glomerella rescpectivamente, Trichoderma, Phomopsis, Paecilomyces, Penicillium, Aspergillus, Epicoccum, Pestalotiopsis, Alternaria, Xylaria, Nigrospora e Guignardia e os não identificados foram denominados como grupos A-E. Foi também detectada grande diversidade dentro dos gêneros mais freqüentes, pela morfologia e por marcadores moleculares. Foi verificada maior diversidade de gêneros de fungos no inverno (17) que na primavera (9). A população de fungos endofíticos foi menor no verão (44,7%) em contraste com o outono (77,7%). De uma amostragem de 59 isolados e seis controles foram extraídos os DNAs genômicos e seqüenciadas as regiões ITS-1. Para a linhagem indeterminada B (Fed) foi sequenciada a região 5,8s e a ITS-2. Foram identificadas 21 espécies pela região ITS-1 e detectadas duas possíveis espécies novas: uma de Trichoderma e o Fed cujos estudos morfológicos e quimiotaxonômicos apóiam esta hipótese. Os Trichoderma associados a M. paniculata foram isolados principalmente das cascas e apresentaram 9 espécies, sendo uma indeterminada. Foi também avaliado o potencial para produção de substâncias bioativas de endófitos. Os grupos mais promissores para a produção de substâncias extracelulares foram os dos fungos Penicillium com ação bactericida e anti-protozoária, Pestalotiopsis candicida e Trichoderma fungicida e bactericida. Fed com substâncias intracelulares de forte ação bactericida e de voláteis fungicidas. Buscou-se ainda o isolamento dos princípios ativos tendo sido isolados de Penicillium citrinum a citrinina e um alcalóide indeterminado, de Trichoderma koningii 13 substâncias, das quais quatro koningininas relacionadas às atividades biológicas detectadas. De Fed-3 foram identificadas 10 substâncias, sete fixas e três voláteis, incluindo um sesquiterpeno guaiano manosilado inédito e as substâncias 3-Hidróxi- 5-fenilmetil-(3S,5R)-b10-O-tetrahidrofuran-2-ona e cloroacetonitrila, isoladas pela primeira vez de fonte natural. A esta última é sugerida a ação fungicida dos voláteis. Esta pesquisa foi oportuna ao revelar a diversidade de microrganismos associados à hospedeira, a alta variabilidade entre e dentre os gêneros, incluindo duas possíveis novas espécies, e o potencial na produção de moléculas bioativas e inéditas. Espera-se ter contribuído para o conhecimento da biodiversidade dos microrganismos endofíticos e do potencial químico e biotecnológicos que eles representam.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5859.pdf: 8428715 bytes, checksum: 1818210d95744ce8daf3a59dda0bf966 (MD5) Previous issue date: 2014-03-21 / Financiadora de Estudos e Projetos / Marine microorganisms are living beings with extraordinary abilities, once they have developed physiological and metabolic capabilities that allow them to survive in an environment filled with adverse conditions, such as high pressure, excessive salinity and extreme temperatures. Thus, these living beings have great potential for the production of metabolites which normally cannot be produced by soil bacteria. The overall objective of this study was to elucidate the metabolite profile of the bacterium Streptomyces cebimarensis SS99BA-2 isolated from marine sediment in São Sebastião, a city located in the northern coast of São Paulo State, using the LC-SPE/NMR hyphenated technology. Ethyl acetate and butanol extracts of bacterial fermentation broths showed, respectively, biological activity against Escherichia coli and Candida albicans, and cytotoxic activity against tumour cells SF-295 (central nervous system). The optimization of the chromatographic conditions, together with the optimization of parameters for SPE retention, and for NMR acquisition and processing, led to the identification of at least eight known substances. This strategy did not require bench isolation methods, from very small amounts, approximately 3 mg, of crude extracts and permited to identify: maltol, 5-hydroximaltol, 4-hydroxibenzoic acid, N-acetyltyramine, isomaltol, 3-(N)-propanesulfonic acid, dehydroxinocardamine and nocardamine. In addition, six new compounds were isolated, including four belonging to a rare class of pyrazin-2(1H)-onic secondary metabolites named: giovaninone A, giovaninone B, giovaninone C and giovaninone D, and two belonging to an extremely cytotoxic class of antitumor phosphated polyketides: thomasicine A and thomasicine B. The results show that the LC-SPE/NMR coupling technology is extremely useful in the natural products field, since organic compounds can be identified in a rapid, safe and reproductible way. Moreover, it can be observed that the chemistry of marine microorganisms is still very little explored and reveal a promising field in the obtaining of potential candidates for pharmaceuticals, since these organisms are able to be cultivated in large scale through the use of bioreactors. / Micro-organismos marinhos são seres com habilidades extraordinárias, uma vez que apresentam características fisiológicas e metabólicas que lhes permitem sobreviver num ambiente repleto de condições adversas, como alta pressão, salinidade excessiva e temperaturas extremas. Muitos deles também apresentam um grande potencial para a produção de metabólitos que normalmente não podem ser produzidos por bactérias terrestres. Diante disso, o objetivo geral do presente estudo foi elucidar o perfil metabólico de uma linhagem de bactéria isolada de sedimento marinho em São Sebastião, litoral norte do estado de São Paulo, Streptomyces cebimarensis SS99BA-2, utilizando a técnica hifenada LC-SPE/NMR. Extratos de acetato de etila e butanólicos dos caldos fermentativos dessa bactéria apresentaram, respectivamente, atividade biológica contra Escherichia coli e Candida albicans e atividade citotóxica contra células tumorais SF-295 (sistema nervoso central). A otimização da separação cromatográfica, somada à otimização dos parâmetros de retenção por SPE e de aquisição e processamento de RMN, levou à identificação de pelo menos oito substâncias conhecidas sem a necessidade de isolamento de bancada a partir de quantidades muito pequenas, aproximadamente 3 mg, de extratos brutos: maltol, 5-hidróximaltol, ácido 4-hidróxibenzóico, isomaltol, N-acetiltiramina, ácido 3-(N-morfolino)-propanossulfónico, dehidróxinocardamine e nocardamine, além de seis compostos inéditos na literatura, sendo quatro pertencentes à uma classe rara de metabólitos secundários pirazin-2(1H)-ônicos: giovaninona A, giovaninona B, giovaninona C e giovaninona D e dois pertencentes à uma classe de policetídeos fosfatados antitumorais com potencial citotóxico: thomasicina A e thomasicina B. Os resultados mostram que a técnica hifenada LC-SPE/NMR é extremamente valiosa na área de produtos naturais, uma vez que substâncias orgânicas podem ser identificadas de forma rápida, segura e reprodutível. Além disso, verifica-se que a química de micro-organismos marinhos ainda é muito pouco explorada e revela um campo promissor na obtenção de possíveis candidatos a fármacos, uma vez que esses organismos são passíveis de cultivos em larga escala através do uso de bioreatores.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2027.pdf: 10143285 bytes, checksum: fd172e3d0d0149c5a14f335d7f813025 (MD5) Previous issue date: 2008-02-14 / Financiadora de Estudos e Projetos / This work describes the use of the high performance liquid cromatography (HPLC) technic coupled to the mass spectrometry technique for the analysis of fungal extracts, and the main purpose was the detection of meroterpens produced by P. Brasilianum. The fungal species P. Brasilianum was cultivated in a variety of artificial culture media: rice, wheat, maize, rice broth, solid decanted from rice broth and liquid medium Czapeck. In all the culture media tested the fungus presented a very good development, and also, the ions related to the meroterpens in study were detected in all the fungal extracts produced by these cultivations, except in Czapeck medium. The atmospheric pressure chemical ionization (APCI) was compared to the electrospray ionization, for the meroterpens analysis, and the result obtained was a great increase in detection power for this class of compounds, with the use of APCI. The P. brasilianum fungus was cultivated in Czapeck medium in the presence of Pinus taeda resin, alizarin, oleanolic, benzoic, salicylic, 2,5-dihydroxybenzoic, 2,6-dihydroxy-4-methyl-benzoic, 3,5-dinitrosalicylic, 3,5-dinitrobenzoic and ferulic acids, and 2 ,4 ,6 -trihydroxyacetophenone. The presence of these exogenous aditives modified the fungal metabolic profile, because the cromatographic profiles of the extracts produced showed a differentiation, in comparation to the fungal extract without aditive. Only the fungal extract produced in the presence of ferulic acid presented the meroterpens PSP-3 and PSP-8. The fungal extracts produced without any aditive also did not present meroterpens. / Este trabalho descreve o uso da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) acoplada com a técnica de espectrometria de massas para análise de extratos fúngicos, visando principalmente a detecção de meroterpenos, produzidos por P. brasilianum. A espécie fúngica P. brasilianum foi cultivada em diversos meios de cultura artificiais: arroz, trigo, milho, caldo de arroz, filtrado do caldo de arroz e meio líquido Czapeck. Em todos os meios de cultivo testados o fungo apresentou um ótimo crescimento, e também, em todos os extratos fúngicos produzidos através destes cultivos foram detectados íons relacionados aos meroterpenos de interesse, exceto no meio Czapeck. A técnica de ionização química a pressão atmosférica (APCI) foi comparada com a de electrospray, para a análise destes meroterpenos, e o resultado obtido foi um aumento significativo no poder de detecção desta classe de compostos com o uso de APCI. O fungo P. brasilianum foi cultivado em meio Czapeck, na presença de resina de Pinus taeda, alizarina, ácidos oleanólico, benzóico, salicílico, 2,5-dihidroxibenzóico, 2,6-dihidroxi-4-metilbenzóico, 3,5-dinitrosalicílico, 3,5-dinitrobenzóico e ferúlico, e a 2 ,4 ,6 -trihidroxiacetofenona. A presença destes aditivos exógenos modificou o perfil metabólico do fungo, pois os perfis cromatográficos dos extratos produzidos se diferenciaram em relação ao extrato fúngico sem nenhum aditivo. Somente o extrato fúngico produzido na presença de ácido ferúlico apresentou os meroterpenos PSP-3 e PSP-8. Os extratos fúngicos produzidos na ausência de aditivos também não apresentaram meroterpenos.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2881.pdf: 3532657 bytes, checksum: 5670ee3071139d4a77feaf760225b2f8 (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Universidade Federal de Minas Gerais / Studies about interaction between microorganisms and plants are focused mainly in the vegetal tissues like roots, steam and leaves. Fruits are a right target for microorganism attacks. Nevertheless, endophytic microorganisms isolated from fruits, seems to be not so explored in chemical point of view. Thus, in this work, it was developed the chemical study about the metabolism referred to endophytic microorganisms from edible fruits, commonly consumed in Brazil: banana, pear, apple and guava fruit. Through HPLC/UV analysis, it were realized and compared, the isolated microorganisms metabolic development, in different media cultures. It was included the media with the proper host fruits. The indolic alkaloid n-acetiltryptamine was isolated from a extract of the bacteria associated to the pear fruit (BP1). From the extracts of guava fruit endophytic fungus, Cladosporium uredinicola (FG1), it were isolated four new depsides in literature: 3-hidroxi-2,5-dimetilfenil 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoate (D1), 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenil 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoate(D2), 3-hidroxi-2,5- dimetilfenil 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi-2,4-dimetilbenzoate (D3) e 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenil 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6- hidroxi-2,4-dimetilbenzoate (D4). The identification of these metabolites was performed according to the respective data from RMN 1 D and 2D, and MS of high and low resolution. It was checked the MIC intervals of D1, D3 and D4 against five tested bacteria. It was realized the bactericide activity of D1 in a concentration of 25μg/mL against Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis. It was also verified the photosynthesis inhibitory activity of depsides D1 and D3 produced by the fungus. The fungus C.uredinicola, showed a great depsides production ability. However, this production showed signifcants alterations when fenolic substrates were given to the fungus, in a usual culture media. The estimative of D3 and D4 production curve was also established. The LC-MS/MS technique use, allowed the selective depsides D3 and D4 detection in guava fruit extract, in low concentration ranges. / Estudos envolvendo a interação entre micro-organismos e plantas enfocam predominantemente tecidos vegetais como raízes, caules e folhas. Embora os frutos sejam alvos fáceis de ataques microbianos, micro-organismos endofíticos de frutos parecem não ser tão explorados do ponto de vista químico. Sendo assim, neste trabalho, buscou-se enfatizar o estudo químico do metabolismo referente à microbiota endofítica de frutos comestíves popularmente consumidos no Brasil, a banana, a pêra, a maçã e a goiaba. Através de análises por HPLC/UV, foram verificados e comparados os desenvolvimentos metabólicos, em diferentes meios de cultura, dos micro-organismos isolados, incluindo àqueles constituídos com as próprias frutas hospedeiras. Foi isolado o alcalóide indólico Nacetiltriptamina a partir de um extrato da bactéria associada à pêra (BP1). Dos extratos do fungo Cladosporium uredinicola (FG1), associado à goiaba, foram isolados quatro novos depsídeos na literatura: 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,5- dimetilfenila (D1), 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenila (D2), 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi-2,4-dimetilbenzoato de 3- hidroxi-2,5-dimetilfenila (D3) e 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi- 2,4-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenila (D4). A identificação destes metabólitos foi realizada de acordo com os respectivos dados de RMN 1 D e 2D e EM de alta e baixa resolução. Foram verificados os intervalos de MIC para D1, D3 e D4, frente a cinco bactérias testadas, destacando-se a atividade bactericida de D1, a 25μg/mL, contra Pseudomonas aeruginosa e Bacillus subtilis. Verificou-se também a atividade inibitória da fotossíntese de D1 e D3. Contudo, o fungo C.uredinicola, mostrou-se como um potente produtor de depsídeos. Esta produção mostrou significativas alterações quando compostos fenólicos foram administrados ao fungo junto ao meio de cultura usual de crescimento. Foi também estabelecida a estimativa da curva de produção para os metabólitos D3 e D4 produzidos pelo fungo. A utilização da técnica LC-MS/MS permitiu a detecção seletiva dos depsídeos D3 e D4 em extrato da fruta goiaba em baixas faixas de concentração.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2014-11-10T11:58:13Z : No. of bitstreams: 1 000793282.pdf: 2189333 bytes, checksum: ade87064e6ad823747e7dc2b4797f125 (MD5) / O presente trabalho teve como objetivos estudar as categorias e mecanismos de resistência de genótipos de couve a Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1797). Os experimentos foram conduzidos no Departamento de Fitossanidade da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Câmpus de Jaboticabal/SP, sendo os testes realizados no Laboratório de Resistência de Plantas a Insetos, sob condições ambientais controladas (temperatura: 27±2 ºC, 70±10% de U.R. e fotofase de 12 horas). Nos experimentos para avaliar a preferência alimentar por genótipos de couve, utilizou-se inicialmente 25 genótipos, os quais sofreram processo de seleção através de testes com e sem chance de escolha, em delineamento estatístico inteiramente casualizado em ambos os testes, adotando-se 10 repetições por tratamento. Foi avaliada a atratividade a 1; 5; 10; 15; 30; 60; 120; 360; 720; 1440 e 2880 minutos, contando as lagartas que se alimentavam nos genótipos e, ao término do experimento, quantificou-se a área foliar consumida. Adicionalmente, testou-se a hipótese de que a angulação formada entre o contato da gota de água e a superfície foliar esteja relacionada à quantidade de cera epicuticular, que pode ser um indicativo de resistência e ou suscetibilidade. Para avaliar a antibiose, lagartas de primeiro ínstar foram individualizadas em placas de Petri fornecendo diariamente folhas de cinco genótipos selecionados nos testes anteriores. Foi avaliada o peso de lagartas aos 16 dias de idade, peso de pupas com 24 horas de idade, período larval e pupal, longevidade de adultos, viabilidade total e fecundidade, por duas gerações subsequentes, em delineamento experimental inteiramente casualizado com 80 repetições por tratamento. Foi realizada a análise bromatológica para a determinação do valor nutritivo das plantas e a análise quantitativa do metabólico secundário sinigrina e avaliação qualitativa ... / This work aimed to evaluate the resistance categories and mechanisms in kale genotypes to Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797). Experiments were conducted in the Departamento de Fitossanidade of Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Campus de Jaboticabal, SP, Laboratório de Resistência de Plantas a Insetos, under environmental controlled conditions (27 ± 2 ºC temperature, 70 ± 10% R.H., and 12 hours photophase). In the feeding preference experiments, 25 genotypes were initially used, which were screened through free-choice and no-choice tests in a completely randomized design with 10 replications per treatment. The attractiveness was evaluated at 1; 5; 10; 15; 30; 60; 120; 360; 720; 1440 and 2880 minutes by counting larvae feeding on the genotypes, and at the end of the experiment the leaf area consumed was quantified. In addition, the hypothesis that the angle formed between the contact of the water drop and the leaf surface is related to the amount of epicuticular wax was tested, which may be an indicative of resistance and/or susceptibility. To evaluate the antibiosis, neonate larvae were individualized into Petri dishes and leaves of the five genotypes screened from the prior assays were provided to the larvae. The weight of 16 day-old larvae, weight of 24 hour-old pupae, duration of the larval and pupal periods, adult longevity, total viability and fecundity were recorded in two successive generations in a completely randomized design with 80 replications per treatment. Bromatological analysis was done to determine the nutritive value of the plants and the quantitative analysis of the secondary metabolite sinigrin and qualitative evaluation of several glucosinolates were also performed. In the antibiosis assay, in addition to the identification of the kale genotypes resistant to S. frugiperda, the levels of resistance were determined through multivariate analysis ...