A planta daninha Amaranthus palmeri é nativa dos Estados Unidos, porém foi pela primeira vez relatada no Brasil no ano de 2015. Embora comprovadamente com resistência múltipla aos herbicidas inibidores da ALS e da EPSPS, até o momento não foram investigadas as bases moleculares da resistência. Além disso, por causa da recente introdução da planta daninha no país, alternativas de manejo com culturas tolerantes a herbicidas necessitam ser estudadas. Sendo assim, os objetivos desse trabalho são de caracterizar a espécie de planta daninha introduzida no país, identificar os mecanismos de resistência aos herbicidas inibidores da ALS e da EPSPS presentes no biótipo, e propor abordagens de manejo em ambientes dos novos eventos transgênicos resistentes a herbicidas. Um bioensaio utilizando marcadores genéticos foi desenvolvido para confirmar que a população coletada no estado do Mato Grosso (BR-R) é A. palmeri, e não A. tuberculatus, outra espécie dióica do gênero Amaranthus. Os resultados de experimentos de curvas de dose-resposta e acúmulo de chiquimato indicaram que a BR-R possui alto nível de resistência, com DL50 de 4.426 e 3.400 g glyphosate ha-1 no primeiro e segundo experimento, respectivamente, mais que o dobro da dose típicamente recomendada para o controle da espécie e, adicionalmente, observou se acúmulo mínimo de chiquimato a concentração de 1 mM nos tecidos das plantas tratadas com o herbicida. BR-R também foi resistente a herbicidas dos grupos químicos das sulfoniluréias e imidazolinonas. O mecanismo de resistência ao glyphosate encontrado nesta população foi a super expressão gência, através do aumento no número de cópias do gene da EPSPS no genoma da planta BR-R, entre 50 e 179 cópias adicionais. Além disso, duas substituições de aminoácidos foram observadas na sequência da ALS, W574L e S653N, conferindo resistência tanto a sulfoniluréias quanto a imidazolinonas. No experimento utilizandos os herbicidas correspondentes às culturas geneticamente modificadas com novos traits de tolerância a herbicidas observou se, de uma forma geral, que as associações de herbicidas apresentaram níveis de controle mais satisfatórios. Assim, esta pesquisa confirma a introdução de da espécie A. palmeri no Brasil, assim como a resistência múltipla aos herbicidas inibidores da EPSPS e da ALS. Seu manejo é mais eficaz através da associação de herbicidas, garantindo assim o uso racional das novas tecnologias de culturas geneticamente modificadas com tolerância a herbicidas. / Palmer Amaranth (Amaranthus palmeri) is a weed species native to the United States, but it was reported in Brazil for the first time in 2015. Despite this population being resistant to EPSPS and ALS inhibitors, the molecular basis of its multiple resistance is unknown up to date. Because of this species introduction to Brazil, alternatives of management with the new herbicide-tolerant crops technologies need to be studied. The objectives of this research are to characterize the weed species introduced to Brazil, identify the mechanisms conferring resistance to ALS and EPSPS inhibitors herbicides, and to propose management approaches in environments with the new genetically modified herbicide-tolerant crops. A genotyping bioassay using genetic markers was developed to confirm that the species collected in the state of Mato Grosso (BR-R) is indeed A. palmeri and not A. tuberculatus, another dioceous species in the Amaranthus genus. Dose-response experiments and shikimate accumulation bioassay data indicate high level of resistance, with LD50 of 4,426 and 3,400 g glyphosate ha-1 in the first and second experiments, respectively, higher than the double rate tipically recommended to control it, and minimal accumulation in BR-R with 1 mM of glyphosate in treated plants in the leaf disks assay. BR-R also was resistanto to sulfonilurea and imidazolinone herbicides. The mechanism conferring resistance to glyphosate identified in this population was gene amplification, with increased EPSPS copy number - between 50 and 179 more copies in BR-R. Besides, two target-site mutations were identified in the ALS gene sequencing, W574L and S653N, conferring resistance to sulfonilureas and imidazolinones. The weed control experiment, overal, herbicide tank mixtures achieved higher levels of control. Therefore, this research confirms the introduction of A. palmeri to Brazil, as well as its multiple resistance to EPSPS and ALS inhibitor herbicides. Its control is more efficient with herbicide mixtures, which guarantees more susteinable use of the new herbicide-tolerant crop technologies.

A produção brasileira de carne de frango tem uma grande importância econômica no mundo todo devido principalmente aos avanços do melhoramento genético. O surgimento de novas tecnologias de sequenciamento (sequenciamento de nova geração) tem se tornado uma ferramenta poderosa, pois por meio da identificação de SNPs (polimorfismo de nucleotídeo único) e INDELs (deleções/inserções) possibilita a adição de novas informações ao melhoramento genético. A deposição de músculo, em especial o músculo de peito, é uma das características que mais merecem destaque por causa da sua importância nutricional e econômica. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi ressequenciar o genoma de 18 aves de duas linhagens distintas experimentais e identificar SNPs e INDELs em uma região de QTL no cromossomo 2 da galinha associado anteriormente com deposição de músculo do peito, além de caracterizar variantes potencialemente funcionais e propor mutações candidatas para estudos futuros. Para isso, dezoito galinhas de duas diferentes linhagens experimentais (corte e postura), ambas desenvolvidas pela Embrapa Suíno e Aves, foram sequenciadas pela plataforma de nova geração da Illumina. SNPs e INDELs foram identificados por meio de ferramentas de bioinformática em uma região de QTL no cromossomo 2 da galinha (105.848.755-112.648.761 pb) que foi previamente associada com deposição de músculo de peito. O sequenciamento dos 18 animais gerou em torno 2,7 bilhões de reads e após a filtragem por qualidade foram mantidas 77% das reads. Em seguida, as reads foram alinhadas ao genoma referência (Gallus_gallus-4.0, NCBI) pela ferramenta Bowtie2 e gerou em média 10,6X de cobertura de sequenciamento na região-alvo. , Foram identificados 722.832 SNPs e 63.727 INDELs para os 18 animais por meio do programa SAMtools, e após uma filtragem rigorosa, foram mantidos 77% dos SNPs (n=558.767) e 60% das INDELs (n=38.402). Com base nas variantes únicas para os 18 animais (85.765 SNPs e 7.824 INDELs) foi realizada a anotação funcional por meio da ferramenta ANNOVAR. Dentre os SNPs não sinônimos (n=153) e stopgain (n=3), 15 foram classificados como deletérios. Um dos SNPs deletérios que já foi depositado em banco de dados foi identificado no gene RB1CC1, que tem sua função relacionada ao desenvolvimento do músculo de peito. Utilizando a ferramenta DAVID foi possível analisar 37 genes relacionados aos SNPs não sinônimos, stopgain, INDELs frameshift e não frameshift. Dentre estes genes, três (DTNA, RB1CC1 e C-MOS) foram selecionados por terem suas funções relacionadas ao desenvolvimento muscular e suas mutações foram analisadas. Sendo assim, futuros estudos podem ser realizados nestes genes candidatos e nas mutações identificadas, por meio de análises de associação e validação em populações comerciais, permitindo assim uma melhor explicação o efeito do QTL estudado. / The Brazilian chicken meat production has a great economic importance in worldwide mainly due to advances in breeding. The emergence of new techniques of sequencing (nextgeneration sequencing) becomes a powerful tool because through identification of SNPs (single nucleotide polymorphism) and INDELs (deletions/insertions) allows the addition of new information for genetic improvement. The muscle deposition, particularly the breast muscle, is one of the features that are most noteworthy because of its nutritional and economic importance. Therefore the aim of this study was to perform the genome resequencing of 18 chicken from two distinct experimental lines and identify SNPs and INDELs in a QTL region on chromosome 2 previously associated with breast muscle, and characterize the variants to identify potentially function ones and propose candidate mutations for future studies. To achieve these objectives, eighteen chickens of two different experimental lines (broiler and layer), both developed by Embrapa Swine and Poultry were sequenced by Illumina next-generation platform. SNPs and INDELs were identified by bioinformatic tools in a QTL region on chicken chromosome 2 (105,848,755-112,648,761 bp) which was previously associated with breast muscle deposition. Sequencing of the eighteen animals generated around 2.7 billion of reads, and 77% of the reads were retained after filtering. The reads were aligned against the chicken genome reference (Gallus_gallus-4.0, NCBI) by Bowtie2 tool resulting in a 10.6X coverage across the target region. Using SAMtools, 722,832 SNPs and 63,727 INDELs were identified in the all individuals, and after a stringent filtration, 77% of SNPs (n=558,767) and 60% of INDELs (n=38,402) were maintained. Based on unique variants for all the animal (85,765 SNPs and 7,828 INDELs) were performed the functional annotation by ANNOVAR tool. Among the non-synonymous SNPs (n=153) and stopgain (n=3), fifteen were predicted like a deleterious mutation. One of deleterious SNPs has already deposited in public database, and it was identified in RB1CC1 gene, which function is related to breast muscle development. Using the DAVID tool was possible to analyze the 37 genes related to the non-synonymous SNPs, stopgain, frameshift and non-frameshift INDELs. Among these genes, three (DTNA, RB1CC1 and C-MOS) were selected due their functions related to muscle development and their mutations were analyzed. Therefore, further association studies can be performed with these candidate genes and their mutations, and also validation in commercial populations, allowing a better explanation of QTL effects.

A radiação ultravioleta ao atingir os seres humanos em grande quantidade e durante uma longa exposição pode provocar danos específicos ao DNA, sendo causa de várias lesões como o carcinoma epidermoide de lábio e a queilite actínica, que é considerada uma lesão precedente ao aparecimento da primeira. Entre os danos causados pela radiação UV está a alteração genética do TP53, provocando anomalias na proteína por ele codificada. A produção da proteína p53 somente é recrutada em situações de estresse como: radiação ionizante, hipoxia ou ativação de oncogenes, nas quais sua função é regular o ciclo celular e ativar vias de apoptose. Contudo, sabe-se que no processo de carcinogênese não somente as alterações não reparadas do DNA são responsáveis pelo aparecimento de uma lesão. Outro fator de extrema importância nesse processo são os mecanismos de apoptose, entre os quais estão as vias do Bcl2 e do Fas. A queilite actínica normalmente é classificada segundo seus graus de displasia, o que para alguns sugeriria os passos percorridos por essa lesão até o carcinoma epidermoide de lábio já que esta lesão possui um potencial de malignização. Os resultados deste trabalho demonstraram que não há diferença estatística na expressão gênica e imuno-histoquímica de p53 entre os diversos graus de displasia. Demonstraram ainda que as vias de apoptose de Bcl2 e Fas estavam ocorrendo normalmente. Sugere-se então que não há comprovação de que ocorra uma progressão para a malignização passando por todos os graus de displasia da queilite actínica tendo, todos a mesma possibilidade de se transformarem em um carcinoma epidermoide de lábio. / The long exposition of the human tissues to the ultraviolet radiation causes DNA damages and consequently several lesions might appear. Among them, lip squamous cell carcinoma and actinic cheilitis which is considered to be a condition that precedes squamous cell carcinomas. The TP53 mutation is a well-known effect of UV radiation, leading to the synthesis of an anomalous protein. The p53 production is only recruit in stress conditions like: ionizing radiation, hypoxia or oncogene activation, where it plays a role in cell cycle regulation and apoptosis activation. Apoptosis is also a fundamental mechanism associated to carcinogenesis. Bcl2 e Fas pathways are central in the regulation of this process. It is usual to classify the epithelial dysplasia degree in actinic cheilitis as a prognosticator. This type of classification suggests a one way path towards malignization. Our results have shown that there is no statistical difference in TP53 status and p53 expression among the different degrees of actinic cheilitis epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma. Based on the findings, there is no prove that the malignant transformation occurs as the epithelial dysplasia progresses. Therefore, should be considered that any degree has the same probability to become a lip squamous cell carcinoma

A Síndrome de Van der Woude (VWS) se caracteriza pela presença de fossetas congênitas no lábio inferior, associadas ou não à presença de fissura de lábio e/ou palato. Esta entidade é a forma sindrômica mais comum nos pacientes portadores de fissura labiopalatal, mesmo assim, ela é subdiagnosticada. Após o seqüenciamento do DNA, no ano de 2001, houve um aumento no interesse e no desenvolvimento de pesquisas na área de Genética Molecular Humana. Em 2002, pesquisadores identificaram no cromossomo 1, o gene IRF6 como sendo o responsável pela VWS. Neste trabalho, foram utilizados e analisados os prontuários de pacientes cadastrados e portadores da VWS do Hospital de Reabilitação de Anomalias Craniofaciais - HRAC - USP, juntamente com seus familiares em primeiro-grau portadores de fissura de lábio e/ou palato, com ou sem fossetas, totalizando 22 pacientes. Foram realizados exames clínicos e radiográficos, medidas antropométricas, sialometria e heredograma de todos os pacientes. Os resultados obtidos foram confrontados com os dados resultantes do estudo genético e molecular realizado por LIMA (2005), em sua tese de Doutorado. Observamos que os achados bucais são bastante comuns no fenótipo da VWS, já que em nossa amostra tivemos 68,20% dos pacientes com alguma anomalia dentária do desenvolvimento e 45,45% dos portadores da síndrome apresentavam pelo menos ausência de um dente. Sendo assim, o cirurgião-dentista tem importância chave tanto no diagnóstico e na avaliação bucal, quanto no tratamento dos pacientes portadores da VWS. / The Van der Woude syndrome (VWS) is characterized by the presence of congenital lower lip pits associated or not to cleft lip and/or palate. This disorder is the most common syndrome affecting patients with cleft lip and palate; despite of that, it is underdiagnosed. After DNA sequencing in 2001, there was an increase in the interest and development of studies on Human Molecular Genetics. In 2002, investigators identified the gene IRF6 on chromosome 1 as being responsible for the VWS. The present study comprised analysis of records of patients with VWS registered at the Hospital for Rehabilitation of Craniofacial Anomalies - HRAC - USP, as well as their first-degree relatives with cleft lip and/or palate without lip pits, adding up to 22 patients. Analysis comprised clinical and radiographic examinations, anthropometric measurements, salivary flow rate and genealogy of all patients. The results were compared with data on genetic and molecular investigations conducted in the PhD thesis of LIMA (2005). The oral findings in the present sample are very common in the phenotype of VWS, since 68.20% of patients had some type of developmental dental anomaly, and agenesis of at least one tooth was observed in 45.45% of patients. Therefore, dental professionals play a fundamental role in the diagnosis, oral examination and treatment of patients with VWS.

O camundongo mutante denominado bate palmas (BALB/cbapa) originou-se de mutagênese química induzida por N-ethyl-N-nitrosourea (ENU). Suas principais características fenotípicas são alterações posturais com movimentos anormais dos membros posteriores quando suspenso pela cauda, simulando o ato de bater palmas. A partir do padrão de herança a mutação foi identificada como autossômica recessiva. Os resultados do sequenciamento do exoma apontaram como forte candidato o gene lysine (K)-specific methyltransferase 2D (kmt2d, também conhecido como mll2 ou mll4), localizado no cromossomo 15 do camundongo. Essa mutação foi confirmada através de sequenciamento do DNA pelo método de Sanger. A perda da função do gene KMT2D, localizado no cromossomo 12 em humanos, foi descrita como responsável pela síndrome de Kabuki, que é uma anomalia congênita rara, autossômica dominante, também conhecida como síndrome Niikawa-Koruki. O fenótipo clínico da doença é variável, mas algumas características mais comuns são face dismórfica, anormalidades esqueléticas, alterações dermatoglíficas, leve a moderado retardo mental e retardo do crescimento pós-natal. O presente estudo teve como objetivo caracterizar o fenótipo do camundongo mutante bate palmas a partir da análise de parâmetros comportamentais. Para tanto, foram utilizados 30 camundongos mutantes bate palmas- sendo 15 machos e 15 fêmeas- e seus respectivos controles BALB/c, com oito semanas de idade no início dos experimentos. Os testes comportamentais foram realizados em ordem crescente de estresse e ordenados na seguinte sequência 1) observação direta em campo aberto dos parâmetros da atividade geral, sensoriais, psicomotores e os ligados ao sistema nervoso central e autônomo; 2) ansiedade e memória no teste do labirinto em cruz elevada; 3) memória operacional no teste do labirinto em T; 4) coordenação motora no teste da trave elevada e 5) comportamento do tipo depressivo nos testes de suspensão pela cauda e natação forçada. Os dados obtidos no presente estudo demostraram que o mutante bate palmas apresentou aumento na frequência de levantar em ambos os sexos, sugerindo comportamento estereotipado; no entanto, não houve alteração na atividade geral. Na avaliação do sistema sensorial houve redução no reflexo auricular e na resposta de aperto de cauda do mutante bate palmas. Em relação aos parâmetros psicomotores houve diminuição do reflexo de endireitamento e queda do trem posterior, sugerindo deficiência motora, como a hipotonia. Os resultados do teste de labirinto em cruz elevada identificaram menor nível de ansiedade nos mutantes em comparação aos controles. Ainda, as respostas observadas no segundo dia do teste mostraram que não houve perda de memória dos bate palmas. Além disso, o teste do labirinto em T mostrou que não houve alteração na memória espacial dos camundongos mutantes em relação aos BALB/c. Já os resultados dos testes de suspensão pela cauda e de natação forçada foram semelhantes, indicando maior tempo de imobilidade dos mutantes em comparação aos BALB/c. Analisados em conjunto, os resultados desse estudo sugerem que o mutante bate palmas apresentou alterações nos parâmetros sensoriais e psicomotores e possível comportamento estereotipado, relacionadas à mutação do gene kmt2d. / The mutant mouse denominated bate palmas (BALB/cbapa) originated from chemical mutagenesis induced by N-ethyl-N-nitrosourea (ENU). Its main phenotypic characteristics are postural alterations with abnormal movements of the hind limbs when suspended by the tail, simulating the act of clap hands. The inheritance pattern of the mutation was identified as autosomal recessive. The potential candidate gene lysine (K) -specific methyltransferase 2D (kmt2d, also known as mll2 or mll4), located on chromosome 15 of the mouse, was identified by the exome sequencing. This mutation was confirmed by DNA sequencing by the Sanger method. The loss of function of KMT2D gene, located on chromosome 12 in humans, has been described as responsible for Kabuki syndrome, which is a rare congenital anomaly, autosomal dominant, also known as Niikawa-Koruki syndrome. The clinical phenotype of the disease is variable, but some common features are dysmorphic face, skeletal abnormalities, dermatoglyphic changes, mild to moderate mental retardation and postnatal growth retardation. The present study aimed to characterize the phenotype of the mutant mouse bate palmas from the analysis of behavioral parameters. Therefore, 30 mutant mice were used - 15 males and 15 females - and their respective BALB/c controls, at eight-wk-old at the beginning of the experiments. Behavioral tests were performed in increasing order of stress and ordered in the following sequence: 1) direct observation in the open field of the parameters linked to general activity, sensorial and psychomotor systems, and those connected to the central and autonomic nervous system; 2) anxiety and memory in the elevated plus maze test; 3) operating memory in the T-maze test; 4) motor coordination in the balance beam test, and 5) depressive-like behavior in the tail suspension and forced swimming tests. The data obtained in the present study demonstrated that the mutant bate palmas presented increase in the rearing frequency in both sexes, suggesting stereotyped behavior; however, there was no change in the general activity. The evaluation of the sensory system demonstrated reduction in the auricular reflex and the tail flick response of the mutant bate palmas. Regarding to the psychomotor parameters, there were observed impairments in the surface-righting reflex and hindquarter fall, suggesting motor deficiency, such as hypotonia. The results of the elevated plus maze test identified a lower level of anxiety in the mutants compared to controls. Still, the responses observed on the second day of the test showed that there was no loss of memory of the bate palmas. In addition, the T-maze test showed that there was no change in the spatial memory of the mutant mice in relation to BALB/c mice. Data of the tail suspension and forced swimming tests were similar, indicating a longer immobilization time of the mutants compared to BALB/c mice. Taken together, the results of this study suggest that the mutant bate palmas showed impairments of the sensorial and psychomotor parameters, and possibly stereotyped behavior related to the mutation of the kmt2d gene.

A doença renal policística autossômica dominante (DRPAD) felina é caracterizada pela presença de múltiplos cistos localizados em parênquima renal e, ocasionalmente, hepáticoe pancreático, sendo uma importante causa de doença renal crônica terminal. Ela é considerada a enfermidade congênita hereditária mais prevalente dos gatos domésticos, porém, os dados epidemiológicos eclínicos existentes no Brasil são escassos, o que torna o seu controle mais difícil no país. Da mesma forma, a DRPAD em humanos constitui-se na doença renal monogênica mais comum, acometendo 1 em cada 400 a 1.000 indivíduos, com curso clínico muito semelhante a doença em gatos.No presente estudo, 252 felinos da raça Persa e mestiços de Persa do Estado de São Paulo foram avaliados através de teste genético para DRPAD. Os resultados indicaram uma prevalência de apenas 6,35% de gatos portadores da mutação para DRPAD em heterozigose, valor abaixo dos índices registrados em outros países. Do total de animais, uma coorte de 82 felinos da região metropolitana de São Paulo foi selecionada para realização de exames físico, laboratoriais, imagenológicos e genéticos. Estes animais foram separados em dois grupos de acordo com a presença (n=12) ou ausência (n=70) de alterações ultrassonográficas sugestivas de doença renal policística.A sensibilidade e a especificidade entre o teste molecular e o exame ultrassonográfico para DRPAD nos animais estudados foram ambas de 100%. Os animais com alterações genéticas e ultrassonográficas indicativas de doença renal policística autossômica dominante apresentaram aumento significativo no valor de cálcio total sérico, fração de excreção urinária de cálcio e de sódio(p=0,0219; p=0,0275; p=0,0032, respectivamente). Os demais parâmetros clínicos e laboratoriais não diferiram entre os dois grupos de animais. O exame ecocardiográfico revelou que casos de hipertrofia miocárdica foram mais frequente entre os animais positivos para DRPAD (p=0,0001). Dessa forma, é possível concluir que exames de triagem ultrassonográfica e/ou molecular devem ser utilizados para o diagnóstico de animais com DRPAD, visto que, alterações clínicas e laboratoriais sã o tardias. Exames eletro e ecocardiográficos devem ser rotineiramente realizados nos felinos císticos. Ainda, a caracterização clínica da DRPAD em gatos ressalta não apenas sua grande importância para medicina felina, mas também para a comunidade médica devido à correlação com a doença humana, representando um modelo ortólogo espontâneo, em animal de porte médio, para o estudo dessa enfermidade e validação de novos procedimentos terapêuticos. / Autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) in feline is characterized by the presence of multiple cists located in the renal parenchyma and occasionally, in liver and pancreas, and is an important cause of terminal chronic renal disease. It is considered worldwide as the most prevalent congenital illness in domestic cats. However, in Brazil the epidemiological and clinical data are barely existent, which difficultythe control of the disease. In the same way, the human ADPKD is the most common monogenic kidney disease. It affects 1 in every 400 to 1000 individuals, with a clinical course very similar to the disease in feline. In this research, 252 Persians and crossbreed cats from São Paulo state were assessed through the genetic test for ADPKD. The results indicated a prevalence of only 6.35% of cats carring the mutation for ADPKD in heterozygosis. This value is below the indexes reported in other countries. A cohort of 82 cats was selected in the metropolitan region of São Paulo to perform physical, laboratory, imaging and genetic tests. These animals were divided into two groups according to the presence (n = 12) or absence (n = 70) of ultrasound changes suggestive of polycystic kidney disease. The sensitivity and specificity between molecular tests and ultrasonography exam for ADPKD in the sample were both 100%. The animals with ultrasonography and genetic modifications, indicatives of ADPKD, presented a significant increase in the amount of total serum calcium, urinary fractional excretion of calcium and sodium(p=0,0219; p=0,0275; p=0,0032, respectively). Other clinical and laboratory parameters did not differ between the two groups of animals with and without the disease. Echocardiographic examination revealed that cases of myocardial hypertrophy were more frequent among animals positive for ADPKD (p = 0.0001). In conclusion, ultrasound exams and/ or molecular screening should be used to diagnostic animals with ADPKD, since the clinical and laboratory abnormalities are late. Electrocardiography and echocardiography examinations should be routinely performed in cystic cats. Still, the clinical characterization of ADPKD in cats not only highlights its importance to feline medicine, but also for the medical community due to the correlation with human disease, as an ortholog spontaneous model for the study of this disease.

Introdução: A cardiomiopatia dilatada é uma das principais causas de insuficiência cardíaca com alta morbidade e mortalidade. Alterações genéticas em mais de 29 genes já foram relacionadas com a doença, contudo, elas explicam apenas uma pequena porcentagem dos casos sugerindo haver então outros genes relacionados com a doença. Foram relacionados para o presente projeto quatro genes candidatos, previamente relacionados com outras doenças cardíacas, para verificação de uma possível associação com a cardiomiopatia dilata idiopática. Objetivos: Avaliar a presença e frequência de mutações nos genes ACTC1, CSRP3, FKBP1A e FKBP1B de pacientes com cardiomiopatia dilatada do Instituto do Coração de São Paulo (InCor, FMUSP), investigar se há correlações entre o genótipo e o fenótipo e estudar as alterações funcionais desencadeadas pelas mutações encontradas. Métodos: Amostras de DNA de 186 pacientes com cardiomiopatia dilatada idiopática foram selecionados de um banco de dados do Instituto do Coração e triados geneticamente para alterações nos genes selecionados. Resultados e Discussão: Foram encontradas nove novas variantes genéticas. Cinco delas também estavam presentes no grupo controle, sendo excluídas como causativas da doença. Três delas não estavam presentes no grupo controle, contudo, dados de bioinformática avaliaram as alterações com um risco baixo de serem causativas. Uma alteração no gene CSRP3, que levava a troca de aminoácido, não estava presente no grupo controle e apresentou dados indicativos de mutação causativa da doença. Lâminas cardíacas foram avaliadas para verificação de possíveis dos mecanismos de ação, contudo, houve apenas a exclusão de alguns mecanismos previamente descritos na literatura. Conclusões: Não há evidências de que as alterações nos genes ACTC1, FKBP1A e FKBP1B estariam associadas com o desenvolvimento da doença. A alteração no gene CSRP3 também é capaz de causar cardiomiopatia dilatada idiopática / Introduction: Dilated Cardiomyopathy is one of the leading causes of heart failure with high morbidity e mortality. Already known genetic alterations explain little percentage of cases suggesting that other genes would be related with the disease. Four candidates genes previously related with other cardiac diseases were selected for the project to verify a possible relationship with dilated cardiomyopathy. Objectives: Evaluate the presence and frequency of genetic alterations in ACTC1, FKBP1A, FKBP1B and CSRP3 genes in dilated cardiomyopathy patients of São Paulo Heart Institute (Incor, FMUSP). To investigate for genotype/phenotype correlations and to study functional alterations triggered by the found mutations. Methods: DNA samples from 186 patients with dilated cardiomyopathy were selected from the Incor DNA bank and genetically screened for alterations in the selected genes. Results and Discussion: Nine new genetic variants were found. Five of them were present in the control population, thus being excluded as disease causative. Three of them were not present in the control population; however, bioinformatics analysis evaluated the alterations having a low risk of being causatives. One alteration in CSRP3 gene that resulted in amino-acid change was not present in control population and exhibit indicative data of disease causing mutation. Analysis of patient heart showed no difference from some disease mechanisms described in literature. Conclusions: There are no evidences that alterations in ACTC1, FKBP1A and FKBP1B genes would associated with disease development. Alteration in CSRP3 gene is also capable to cause dilated cardiomyopathy s

O câncer da tireoide é a neoplasia endócrina mais comum, sendo responsável por cerca de 1 a 2% das neoplasias malignas da tireoide. Atualmente, a patogênese molecular do carcinoma papilífero da tireoide (CPT) tem sido relacionada à ativação aberrante da via de sinalização MAPK, desencadeada por mutações em diversos oncogenes. Destas, a mutação p.V600E do gene BRAF é a mais freqüente, sendo observada em 30%-80% dos casos. Numerosos estudos têm demonstrado que a presença dessa mutação está relacionada a uma maior agressividade do tumor e, conseqüentemente, a um prognóstico menos favorável, tornando-a um marcado importante no CPT. Contudo, poucos métodos utilizados na análise do gene BRAF em amostras de punção de nódulos tireoidianos foram satisfatórios em relação ao custo-tempo e sensibilidade do teste. Os objetivos deste estudo foram padronizar a extração de DNA a partir de amostras obtidas de PAAF guiada por ultrassom de nódulos tireoidianos; validar e determinar a eficiência e a relação custo-tempo da técnica de genotipagem por PCR em tempo real na detecção da mutação p.V600E do gene BRAF em amostras de PAAF de nódulos tireoidianos; analisar a prevalência da mutação p.V600E em pacientes com CPT; correlacionar à presença da mutação p.V600E com características clínicas e histopatológicas de maior agressividade e por fim analisar a sensibilidade, especificidade e acurácia do diagnóstico citológico em conjunto com a análise molecular da mutação p.V600E em material de PAAF. Nossa casuística foi composta por 224 pacientes, todos submetidos à tireoidectomia, cuja citologia pré-operatória foi indeterminada (Bethesda classes III a V) ou Bethesda VI (carcinoma papilífero). Foram avaliados dados clínicos e hormonais (TSH) e autoimunidade (anti-TPO e anti-TG), além das características ultrassonográficas (tamanho, estrutura, ecogenicidade, presença de microcalcificação e halo e vascularização). Os dados histológicos avaliados foram tamanho do tumor, variante histológica, invasão de cápsula, invasão vascular e linfática, extensão extratireoidiana, multicentricidade e presença de acometimento ganglionar à cirurgia. Os pacientes foram divididos em grupo benigno (n:122) e maligno (n:102), de acordo com o diagnóstico histológico final. O grupo maligno apresentou uma média de idade menor que o grupo benigno (48,9 vs 54,2 anos; p=0,008). Não observamos diferença entre os grupos com relação à dosagem sérica de TSH (p=0,467), anti-TPO (p=0,535) e anti-TG (p=0,730). Analisando as características ultrassonográficas, o tamanho e o volume dos nódulos foram maiores no grupo benigno (3,0 vs 2,6 cm e 12,38 vs 14,5 cm3; p=0,008 e p<0,001, respectivamente). Os nódulos que apresentaram hipoecogenicidade, assim como os nódulos de composição sólida, a presença de microcalcificações, ausência de halo hipoecogênico e presença de vascularização central apresentaram estatisticamente maior freqüência de malignidade. Em modelo de regressão logística, maior idade, nódulo sólido, sem halo hipoecogênico e com microcalcificações foram variáveis que influenciaram conjuntamente na presença de malignidade. No diagnóstico citológico 78,6% (176/224) dos nódulos avaliados foram classe III, IV e V, sendo que destes 35,8% (63/176) apresentaram diagnóstico histológico final maligno. Identificamos a mutação p.V600E no material de PAAF em 67,7% (69/102) dos pacientes do grupo maligno, estando presente em 70,3% (45/64) dos carcinomas papiliferos variante clássica e em 69,7% (23/33) dos carcinomas papilíferos variante folicular, sendo todos os achados confirmados em 100% das amostras através seqüenciamento automático do material obtido do tecido nodular a fresco ou parafinado dos pacientes. Nos pacientes com diagnóstico histológico de CPT (n:98), comparamos os pacientes com e sem a mutação p.V600E com relação aos dados clínicos, histológicos de pior prognóstico, presença de metástase linfonodal, classificação TNM e estádio de acordo com AJCC. Apenas a presença de idade mais avançada apresentou associação estatisticamente significativa com a presença da mutação p.V600E (p=0,041). Comparamos o diagnóstico citológico baseado na classificação de Bethesda e a análise da mutação p.V600E com o diagnóstico histológico considerado o padrão ouro para o diagnóstico de CPT. A sensibilidade, especificidade, acurácia, valor preditivo positivo e negativo do diagnóstico citológico foi de 67,4%, 94,4%, 79,8%, 93,3% e 71,2% respectivamente. Análise da mutação p.V600E isoladamente apresentou resultados similares ao do diagnóstico citológico, porém observamos que a combinação do diagnóstico citológico com análise da mutação melhorou significativamente todos os parâmetros analisados. A presença da mutação p.V600E em nossa casuística, não mostrou ser um fator isolado associado à pior prognóstico de CPT. Um maior número de pacientes e acompanhamento a longo prazo, somando-se cuidadosa avaliação clínica-morfológica com a detecção de mutação p.V600E e utilizando análises multivariadas, são necessários para esclarecer o significado prognóstico independente desta mutação. Estudos semelhantes também são necessários para encontrar uma maneira de combinar as características clínicas e ultrassonográficas, com a detecção da mutação p.V600E no material da PAAF para decidir a melhor abordagem cirúrgica / Thyroid cancer is the most common endocrine malignancy, accounting for 1- 2% of thyroid malignancies. Currently, the molecular pathogenesis of papillary thyroid carcinoma (PTC) has been linked to aberrant activation of the MAPK signaling pathway, triggered by mutations in several oncogenes. Of these, the p.V600E mutation of BRAF gene is the most frequent, being observed in 30%-80% of cases. Several studies have shown that the presence of this mutation is associated with an increased aggressiveness of the tumor and, consequently, a less favorable prognosis, making it an important set PTC. However, few methods used for analyzing samples from fine needle aspiration (FNA) of thyroid nodules were satisfactory regarding cost, time and sensitivity. The objectives of this study were to standardize the DNA extraction from samples obtained from ultrasound (US)-guided FNA of thyroid nodules; validate and determine the efficiency and cost-time of real-time PCR genotyping technique to detect p.V600E mutation from samples of FNA of thyroid nodules, to assess the prevalence of the mutation p.V600E mutation in patients with PTC, correlate the presence of the p.V600E mutation with clinical and histopathological features of higher aggressiveness and finally analyze the sensitivity, specificity and accuracy of cytological diagnosis in conjunction with molecular analysis of the p.V600E mutation in FNA material. Our series consisted of 224 patients, all underwent thyroidectomy, whose preoperative cytology was indeterminate (Bethesda classes III to V) or Bethesda VI (papillary carcinoma). We evaluated clinical data and hormone (TSH) and autoimmunity (anti-TPO and anti-TG), and the sonographic features (size, structure, echogenicity, presence of microcalcifications and halo and vasculature). The histological data were tumor size, histological variant, capsule invasion, lymphatic and vascular invasion, extrathyroidal extension, multicentricity and presence of malignant lymph nodes at surgery. Results: The patients were divided into benign (n:122) and malignant group (n:102), according to the final histological diagnosis. Malignant group had a mean age lower than the benign group (48.9 vs 54.2 years, p=0.008). There were no differences between groups regarding serum TSH (p=0.467), anti-TPO (p=0.535) and anti-TG (p=0.730). According to US characteristics, size and volume of the nodules were higher in the benign group (3.0 vs 2.6 cm and 12.38 cm 3 vs 14.5, p=0.008 and p<0.001, respectively). The nodules that showed hypoechogenicity, as well as the composition of solid nodules, the presence of microcalcifications, absence of hypoechoic halo and presence of central vascularization showed statistically higher frequency of malignancy. In the logistic regression model, older age, solid nodule without hypoechoic halo and microcalcifications were variables that influenced jointly in the presence of malignancy. In cytological diagnosis 78.6% (176/224) of nodules were evaluated as class III, IV and V, and of these 35.8% (63/176) had final histological diagnosis of malignant. The p.V600E mutation were identified in FNA material in 67.7% (69/102) of patients in malignant group, present in 70.3% (45/64) of papillary carcinoma classic variant and 69.7% (23/33) of follicular variant of papillary carcinoma, and all findings are confirmed in 100% of the samples through sequencing of the material obtained from the surgical tumor (fresh or paraffin). In patients with confirmed PTC (n:98), we compared patients with and without the mutation p.V600E according to clinical, histological poor prognosis, lymph node metastasis, and TNM stage according to AJCC. Only the presence of older age were significantly associated with the presence of the mutation p.V600E (p=0.041). We compared the cytological diagnosis based on the Bethesda classification and mutation analysis with the histological diagnosis p.V600E, the \"gold standard\" for diagnosis of PTC. Sensitivity, specificity, accuracy, positive and negative predictive value of cytological diagnosis was 67.4%, 94.4%, 79.8%, 93.3% and 71.2% respectively. Analysis of p.V600E mutation alone showed similar results to the cytological diagnosis, but we observed that the combination of cytological diagnosis with mutation analysis significantly improved all parameters analyzed. The presence of the mutation p.V600E in our series was not a single factor associated with worse prognosis of PTC. A larger number of patients and long term follow-up, adding to careful clinicalmorphological with p.V600E and mutation detection using multivariate analyzes are needed to clarify the independent prognostic significance of this mutation. Similar studies are also needed to find a combination among clinical and US, with p.V600E mutation detection in FNA material to decide the best surgical approach

Submitted by Maria Aparecida (cidazen@gmail.com) on 2017-11-27T17:43:41Z No. of bitstreams: 1 Marta Belfort.pdf: 1659970 bytes, checksum: 7aca8a1f671f32a3e25959a2840b065f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-27T17:43:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marta Belfort.pdf: 1659970 bytes, checksum: 7aca8a1f671f32a3e25959a2840b065f (MD5) Previous issue date: 2017-08-28 / FAPEMA,CNPQ. / Penile cancer (PeCa) is a rare neoplasm in developed countries; however, its incidence is high in underdeveloped countries. In Brazil, regions North and Northeast are those with the higher number of cases for the disease. Among the factors associated with this neoplasm we highlight: poor hygiene, phimosis, chronic inflammation and infection by human papilloma virus (HPV). Changes in the PI3K/AKT/PTEN cell signaling pathway have been reported for several malign neoplasms, but little is known about the involvement of this pathway in penile tumors. Thus, the aim of this study was to verify the role of HPV infection and the occurrence of copy number alterations (CNA) in genes from the signaling pathway mediated by receptors of growth factors and PI3K in a population characterized by advanced tumors and high frequency of high risk HPV. To achieve that, we collected tumor tissue samples (both fresh and in formalin-fixed paraffin-embedded tissue-FFPE) from 34 patients from two reference hospitals: Instituto Maranhense de Oncologia Aldenora Belo (IMOAB) and the Hospital Universitário Presidente Dutra from the Universidade Federal do Maranhão (HU-UFMA). Fresh tumors were submitted to detection and genotyping of HPV by Nested PCR (Polymerase Chain Reaction) and direct sequencing. CNA analyzes were carried out in FFPE tissue from a subgroup HPV positive (91.2%), of which 88.2% were at high oncogenic risk. TaqMan® Copy Number Assays (Life TechnologiesTM) and CopyCaller software version v2.0 were performed to determine copy number for EGFR, HER3, HER4, AKT1, AKT2, PI3KCA and PTEN. Increase of 3 and 4 copies was considered gains, while increase of 5 or more copies was considered amplifications. The presence of a single gene copy was referred to as loss, while the absence of two copies was named deletion. Clinical and histopathological parameters were analyzed as to the presence of HPV and to CNAs. Our data showed that EGFR/PI3K/AKT/PTEN signaling pathway is highly altered in PeCa. The results showed that 100% of the tumors presented an increase of the number of copies for HER3; out of those, 93.9% were amplified, with 84.4% having 10 or more copies. EGFR also showed an increase of copies in 87.8% of tumor samples, out of which 65.6% were amplifications, with 48.2% having more than 10 copies. Furthermore, HER4 and AKT1 also presented an increase in the number of copies of 20.6% and 15%, respectively. AKT1 had a higher frequency of tumors with a regular number of copies (78.8%). On the other hand, PI3KCA, HER4, PTEN and AKT2 presented a higher frequency of samples with deletions, presenting 56%, 52.9%, 39% and 36%, respectively. Loss of copies was also frequent on tumors, so that genes AKT2, PTEN and PI3KCA appeared in heterozygosis in 60.6%, 54.5% and 37.5%, respectively. Our data show the occurrence of genetic alterations that may justify the differential expression of growth factor receptors and the downstream genes of the PI3K/ AKT pathway in penile carcinoma. However, in this study there was no association between CNAs and clinical and histopathological variables. On the other hand, taking into consideration the high frequency of HPV in the evaluated tumors, we suggest that CNAs are related to HPV integration into genome host. Finally, we highlight the high frequency of tumors with amplifications in HER3 and EGFR, reinforcing these markers as targets for specific therapies in CaPe. / Câncer de pênis (CaPe) é uma neoplasia rara em países desenvolvidos, entretanto, sua incidência é elevada em países subdesenvolvidos. No Brasil, as regiões Norte e Nordeste são as regiões com os maiores números de casos da doença. Dentre os fatores de risco, destaca-se a má higiene do órgão genital, fimose, inflamação crônica e infecção pelo papilomavírus-humano (HPV). Tem sido reportada alterações na via de sinalização celular PI3K/AKT/PTEN em diversas neoplasias malignas, entretanto, pouco se sabe sobre o envolvimento dessa via nos tumores de pênis. Assim, buscou-se neste trabalho verificar o papel da infecção por HPV e a ocorrência de alteração no número de cópias (CNAs) em genes da via de sinalização controlada por receptores dos fatores de crescimento e PI3K, em uma amostra caracterizada por tumor avançado e alta frequência de HPV de alto risco. Para isso, foram coletadas amostras de tecido tumoral (fresco e de tecido fixado com formalina e embebido em parafina - FFPE) de 34 pacientes provenientes de dois hospitais de referência, Instituto Maranhense de Oncologia Aldenora Belo (IMOAB) e o Hospital Universitário Presidente Dutra da Universidade Federal do Maranhão (HU-UFMA). As amostras de tumor fresco foram submetidas a detecção e genotipagem de HPV por Nested PCR (Polymerase Chain Reaction) e sequenciamento direto. As análises de CNAs foram realizadas em amostras de FFPE, HPV positivas (91,2%), das quais 88,2% eram de alto risco oncogênico. Utilizou-se o ensaio TaqMan® Copy Number Assays (Life TechnologiesTM) e o software CopyCaller versão 2.0 para determinação do número de cópias dos genes EGFR, HER3, HER4, AKT1, AKT2, PIK3CA e PTEN. Aumento de 3 e 4 cópias foi considerado ganho, enquanto aumento de 5 ou mais cópias foi considerado amplificação. A presença de uma única cópia gênica foi nomeada perda, enquanto a ausência de duas cópias foi nomeada deleção. Os parâmetros clínicos e histopatológicos foram analisados quanto a presença de HPV e também quanto a CNAs. A via de sinalização celular EGFR/PI3K/AKT/PTEN revelou-se altamente alterada nos tumores de pênis. Observou-se que 100% dos tumores apresentaram aumento de número de cópias do gene HER3. Destes, 93,9% apresentaram-se amplificados, sendo que 84,4% apresentavam 10 ou mais cópias. O gene EGFR apresentou aumento de cópias em 87,8% das amostras, das quais 65,6% eram amplificações, sendo que 48,2% apresentavam mais de 10 cópias. Além desses, os genes HER4 e AKT1 também apresentaram aumento de cópias gênicas, em 20,6% e 15%, respectivamente. AKT1 apresentou maior porcentagem de tumores com número normal de cópias (78,8%). Por outro lado, os genes PI3KCA, HER4, PTEN e AKT2 apresentaram maiores frequências de amostras com deleções, com 56%, 52,9%, 39% e 36%, respectivamente. As perdas também foram frequentes nos tumores, de modo que os genes AKT2, PTEN e PI3KCA apresentaram-se em heterozigose em 60,6%, 54,5% e 37,5%, respectivamente. Nossos dados mostram a ocorrência de alterações genéticas que podem justificar a expressão diferencial dos receptores de fatores de crescimento e de genes downstream da via PI3K/AKT em carcinoma peniano. No entanto, não foi encontrada associação entre CNAs e as variáveis clínicas e histopatológicas. Por outro lado, considerando-se a alta frequência de HPV nos tumores avaliados, levanta-se a possibilidade de haver uma relação entre a integração do HPV no genoma do hospedeiro e a ocorrência de CNAs em CaPe. Finalmente, destacamos a alta frequência de tumores com amplificações em HER3 e EGFR, abrindo a possibilidade desses marcadores serem utilizados como alvos para terapias específicas em CaPe.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2018-06-22T19:18:01Z No. of bitstreams: 1 LORRAYNNE GUIMARÃES OLIVEIRA.pdf: 972251 bytes, checksum: 3d1335f8344b25e2c479fd95096c777d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-22T19:18:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LORRAYNNE GUIMARÃES OLIVEIRA.pdf: 972251 bytes, checksum: 3d1335f8344b25e2c479fd95096c777d (MD5) Previous issue date: 2018-03-08 / At the end of 1987 was one of the most serious radiological accidents in history, occurred in Goiânia-Goiás-Brazil, causing the contamination of the environment, succeending in the external irradiation and the internal contamination of several people. The direct and indirect effects of radiation initiate a series of biochemical and molecular signaling events that can repair the damage or culminate in permanent physiological changes or cell death. Mammalian cells have integrated response systems that detect DNA damage, activate signaling cascades, and realize repair. Chromosomal rearrangements induced by exposure to ionizing radiation can occur by Double Strand Break in the DNA (DSB). The main DNA repair mechanism responsible for the repair of DSBs is Nonallelic Homologous Recombination (NAHR). Through the NAHR process, the Low Copy Repeats known also with Segmental Duplications (LCRs / SDs) can lead to DNA rearrangements, such: deletions, duplications, inversions and translocations. Chromosomal Microarray Analysis (CMA) based on SNP array, is established on the identification of Copy Number Variantion (CNV), including gains and losses. The goal of this study was to investigate the effect of the presence of LCRs in the formation of new CNVs observed in the offspring of individuals exposed to low doses of IR of Cesium-137. The exposed group consisted of 12 families, of which at least one parent was directly exposed to IR Césio-137, including a total of 40 individuals (12 couples and 16 children born after the accident). The absorbed dose for the exposed individuals was estimated at ≤0.2 Gray. A group with 8 families of individuals not exposed to IR was used as control. The statistical tests used were Chi-Square, Pearson's Chi-Square, ANOVA, Spearman's Correlation, Kruskal Wallis, Likelihood Ratio and Linear Linear Association. All analyzes were performed with a significance level of 5% (p <0.05). We identified 50 (10.6%) and 23 (9.7%) CNVs that were being flanked by LCRs for the case and control groups, respectively. The test showed no significant difference. The comparison of gain and loss CNVs flanked by LCRs showed a significant difference where LCRs were significantly more associated with gain CNVs. The presence of LCRs was often associated with more longer CNVs, suggesting that CNVs originating from NAHR tend to be bigger. The CNV rates mutation and paternal meiosis in F1 generation of the case and control groups showed a significant difference. Men exposed to IR transmit more CNVs again small when compared to transmission based on maternal exposure and between controls. The estimation of rate mutation in LCR-mediated CNVs analyzed in F1 generation and in their biological parents was a useful biomarker in the retrospective evaluation of parental exposure to IR in human populations, especially for Burden mutation rate estimation. / No final de 1987 houve um dos mais graves acidentes radiológicos da história, ocorrido em Goiânia-Goiás-Brasil, ocasionando a contaminação do ambiente, sucedendo na irradiação externa e a contaminação interna de várias pessoas. Os efeitos diretos e indiretos da radiação iniciam uma série de eventos de sinalização bioquímica e molecular que podem reparar o dano ou culminar em mudanças fisiológicas permanentes ou morte celular. As células de mamíferos integraram sistemas de resposta que detectam danos no DNA, ativam cascatas de sinalização e efetuam o reparo. Os rearranjos cromossômicos induzidos pela exposição à radiação ionizante podem ocorrer por quebras na dupla fita do DNA (DSB). O principal mecanismo de reparo do DNA, responsável pela reparação de DSBs é a Recombinação Homóloga Não Alélica (NAHR). Através do processo de NAHR, as Repetições de poucas cópias conhecidas também com Duplicações Segmentares (LCRs / SDs) podem levar a rearranjos de DNA, como: deleções, duplicações, inversões e translocações. A análise Cromossômica em Microarranjos (CMA) baseada em SNP array, fundamenta-se na identificação de Variação no Número de Cópias (CNV), incluindo ganhos e perdas. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da presença de LCR na formação de CNVs novas observadas na prole de indivíduos expostos a baixas doses de RI de Césio-137. O grupo exposto foi constituído por 12 famílias, dos quais pelo menos um dos progenitores foi diretamente exposto à RI de Césio-137, incluindo um total de 40 indivíduos (12 casais e 16 filhos nascidos após o acidente). A dose absorvida para os indivíduos expostos foi estimada em ≤0,2 Gray. Um grupo com 8 famílias, de indivíduos não-expostos à radiação ionizante foi usado como controle. Os testes estatísticos utilizados foram Qui–Quadrado, Qui-Quadrado de Pearson, ANOVA, Correlação de Spearman, Kruskal Wallis, Razão de verossimilhança e Associação Linear por Linear. Todas as análises foram realizadas com nível de significância de 5% (p<0,05). Identificamos 50 (10,6%) e 23 (9,7%) CNVs que estavam sendo flanqueadas por LCRs, para os grupos caso e controle, respectivamente. O teste não demonstrou diferença significante. A comparação de CNVs de ganho e perda flanqueadas por LCRs mostrou diferença significativa onde LCRs estavam significativamente mais associadas as CNVs de ganhos. A presença de LCRs esteve associada frequentemente em CNVs mais longas, sugerindo que CNVs originadas a partir de NAHR tendem a ser maiores. As taxas de mutações de CNV e a meiose paterna na geração F1 dos grupos caso e controle demonstram diferença significativa. Homens expostos à RI transmitem mais CNVs de novo pequenas quando comparado com a transmissão em função da exposição materna e entre controles. A estimativa da taxa de mutação em CNVs mediadas por LCRs analisada na geração F1 e em seus pais biológicos foi um biomarcador útil na avaliação retrospectiva de exposição parental