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Estudo da formação da friedelina a partir de mutações no gene da friedelina sintase

Pinheiro, Karina Alves [UNESP] 27 July 2015 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:00Z : No. of bitstreams: 1 000849826_20170730.pdf: 873601 bytes, checksum: aba6ada5ec0fbb61f3b3604c66aafb07 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-08-07T14:09:12Z: 000849826_20170730.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-08-07T14:10:16Z : No. of bitstreams: 1 000849826.pdf: 4209967 bytes, checksum: fe80c7e6b5372db8ddddd264003573c2 (MD5) / A clonagem de oxidoesqualeno ciclase das folhas de M. ilicifolia já foi estudada por nosso grupo, bem como os estudos de expressão em S. cerevisiae geneticamente modificada para melhor produção da friedelina. Para o desenvolvimento do trabalho, optou-se por realizar a expressão do gene de friedelina sintase de Kalanchoe daigremontiana obtido comercialmente, cuja sequência foi otimizada de acordo com o codon usage de S. cerevisiae. A partir das mutações sítio-dirigidas, duas mutações no gene sintético foram confirmadas. A primeira mutação do resíduo de leucina para valina na posição 483 do gene sintético levou à produção da friedelina e dos triterpenos -amirina e taraxerol enquanto a segunda mutação do resíduo de leucina para treonina na mesma posição deste gene produziu unicamente a -amirina. Após a padronização e análises das mutações no gene sintético, as mesmas mutações foram realizadas no gene da friedelina sintase de Maytenus ilicifolia. A mutação por valina levou à produção de -amirina e friedelina e, igualmente ao gene sintético, a mutação por treonina levou à formação apenas da -amirina. De acordo com a mutação gerada, os compostos produzidos pela levedura foram analisados por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas e observou-se que algumas mutações levavam a uma alteração da especificidade do produto formado pela enzima. Esses estudos sugerem que a relação da estrutura proteica-função da enzima produtora da friedelina possa estar associada ao ajuste da cavidade ativa da enzima e, quando um resíduo de aminoácido do sítio ativo é substituído por resíduos menores, a ampliação da cavidade proporciona a estabilização prévia do carbocátion em um triterpeno com menor número de rearranjos, como a -amirina. Desta forma, estes dados contribuem com o entendimento da especificidade desta enzima, são os primeiros a... / The cloning of oxidosqualene cyclase from Maytenus ilicifolia leaves and expression in Saccharomyces cerevisiae has been studied by our group to generate friedelin. The main objective of this project was to carry out the expression of friedelin synthase gene using commercially Kalanchoe daigremontiana, whose sequence has been optimized according to the codon usage of S. cerevisiae. In such studies, two mutations in the synthetic gene were confirmed. The first mutation of valine for leucine residue at position 483 synthetic gene led to the production of friedelin, β-amyrin and tararexol, while the second mutation of leucine to threonine residue, at the same position, produced exclusively β-amyrin. The same mutations were performed using the gene of friedelin synthase of Maytenus ilicifolia. The compound identities were confirmed by gas chromatography and mass spectrometry. The results suggested that the ratio of protein production-enzyme function, involved in the production of friedelin, may be associated with the active cavity of the enzyme setting, when an amino acid residue of the active site is replaced for smaller, expanding the cavity to provide the prior stabilization of the carbocation in the biosynthetic pathway of triterpenes to produce β-amyrin. Thus, these data contribute to understand the specificity of such enzyme. Furthemore, this studie was the first one to show the importance of each amino acid in the active site of the enzyme to produce a pentacyclic triterpene with the highest number of rearrangements and was the basis for future studies of enzyme engeenering to increase productivity of such compounds.
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Avaliação dos principais metabólicos secundários por espectrometria de massas e atividade hipoglicêmica de Salacia impressifolia Miers A. C. Smith

Laikowski, Manuela Merlin 27 February 2015 (has links)
A utilização de plantas na cura dos mais diversos males é tradicionalmente conhecida e utilizada há centenas de anos pela humanidade. As células vegetais produzem uma grande variedade de compostos químicos entre o metabolismo primário e secundário. Os produtos do metabolismo secundário são de especial interesse, pois são responsáveis por diversas ações biológicas. Informações etnobotânicas indicam que mais de 800 plantas são usadas como remédios tradicionais para o tratamento da diabetes. Muitas espécies pertencentes ao gênero Salacia têm sido descritas com atividade antidiabética, entre elas Salacia impressifolia. É uma espécie pertencente à família Celastraceae, conhecida popularmente no Brasil como miraruíra. Este trabalho visou desvendar a composição química desta espécie, utilizando para isso extratos obtidos a partir da casca e do caule. Em seguida, realizou-se análise química dos extratos por espectrometria de massas de alta resolução (EMAR). Nestes foram identificados 32 compostos, os quais haviam sido previamente descritos na literatura para o mesmo gênero. Entre eles destacam-se o kotalanol, salacinol e o mangiferina, com ação hipoglicemiante previamente descrita por outros autores. Para análise in vivo do potencial hipoglicemiante, realizou-se ensaio com o extrato hidroalcoólico do caule da planta em ratos com diabetes induzida por estreptozotocina. O extrato apresentou ação semelhante ao fármaco controle glibenclamida. Também foi avaliado o perfil lipídico (triglicerídeos, colesterol total e HDL) e as enzimas hepáticas TGO e TGP, onde pode-se observar aumento de HDL. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-05-06T18:00:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Manuela Merlin Laikowski.pdf: 192460 bytes, checksum: 1080985338e2e2e103da02a2651657ed (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-06T18:00:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Manuela Merlin Laikowski.pdf: 192460 bytes, checksum: 1080985338e2e2e103da02a2651657ed (MD5) / The use of plants in various ailments healing is traditionally known and used for centuries by mankind. Plant cells produce a large variety of chemical compounds between the primary and secondary metabolism. The secondary metabolism products are of special interest, as they are responsible for several biological activities. Ethnobotanic information indicates that more than 800 plants are used as traditional remedies in the treatment of diabetes. Many species of Salacia genus have been described with antidiabetic activity, including Salacia impressifolia. This specie belongs to Celastraceae family, popularly known as miraruíra in Brazil. This work aimed to develop the chemical composition of this specie through stem and stem bark extracts. Chemical analysis of the extracts was carried out by high resolution mass spectrometry (HRMS). In these extracts, 32 compounds were identified, previously described for the same genus. Among them, were identified kotalanol, salacinol and mangiferina, with hypoglycemic action previously described by others authors. For in vivo analysis of hypoglycemic activity, it was performed the hydroalcoholic stem extract in streptozotocin induced diabetics rats. The extract presented similar action to control drug glibenclamide. It was also assessed the lipid profile (triglycerides, total cholesterol and HDL) and liver enzymes AST and ALT, and it was observed an increase in HDL level.
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Estudo químico e atividade mutagênica e antirradicalar de caesalpinia ferrea /

Wyrepkowski, Carlos César. January 2014 (has links)
Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Co-orientador: Adilson Paulo Sinhorin / Banca: Juliana Rodrigues / Banca: Daniel Rinaldo / Banca: Leandro Carbo / Banca: Cássia Regina Primila Cardoso / Resumo: Caesalpinia ferrea Mart. pertence à familia Fabaceae ( Caesalpinioideae ) , cresce em todo o terr itório brasileiro, sendo largamente distribuída nas regiões norte e nordeste, conhecida vulgarmente como pau - ferro ou jucá. N este trabalho , foi realizado o estudo fitoquímico, a determinação quantitativa de metabólitos secundários, a avaliação das atividad es mutagênica e an tirradicalar e a determinação dos teores de fenóis totais do extrato etanólico das cascas do caule de C . ferrea . Análises por HPLC - ESI - IT - MS ( High Performance Liquid Chromatography - Electrospray Ionization - Ion Trap - Mass Spectrometry ) e FIA - ESI - IT - MS n ( Flow Injection Analysis - Electrospray Ionization - Ion Trap - Mass Spectrometry ), modo negativo , permitiram identificar vinte substâncias pela análise dos padrões de fragmentações e comparação com dados da literatura ( ácido gálico e der ivad o s , ácido elágico e derivados , galotaninos, elagitaninos, catequina e uma procianidina ) . No estudo fitoquímico, foram utilizadas técnicas cromatográficas usuais, como Cromatografia em Coluna Clássica (sílica gel e s ephadex LH - 20 ), MPLC ( Medium Pressure Liquid Chromatrography ) e HPLC , que forneceram um éster de ftalato, um açúcar, ácido gálico, dois derivados do ácido quínico e um derivado glicosilado do ácido elágico, que foram identificados por métodos espectroscópicos ( Ultra vi oleta e Ressonância Magné tica Nuclear) e espectrométricos ( Espectrometria de Massas ). Um método analítico foi desenvolvido utilizando a técnica de HPLC - PDA ( High Performance Liquid Chromatography - Photodiode Array Detector ) que permitiu a quantificação d e seis substâncias ( ácido gálico, ácido galoil quínico, galato de etila, dilactona do ácido valoneico, ácido elágico e ácido 3 - O - metilelágico - 4 ' - O - β - D - arabinopiranosídeo ) no extrato. Nesta... / Abstract: Caesalpinia ferrea Mart. belongs to the family Fabaceae (Caesalpin ioideae) grows throughout the Brazilian territory, being widely distributed in the northern and northeastern regions, known commonly as pau - ferro or jucá . In t his research describes the phytochemical study, and the determination of the quantitative seconda ry metabolites, the mutagenic evaluation and antiradical activities and the total phenol levels determination of the ethanolic extract from the C . ferrea Martius stem bark. The analyses by the HPLC - ESI - IT - MS (High Performance Liquid Chromatography - Electr ospray Ionization - Ion trap - Mass Spectometry) and FIA - ESI - IT - MS n (Flow Injection Analysis - Electrospray Ionization - Ion Trap - Mass Spectometry), negative mode, it allowed to identify twenty substances by the standard analyses of the fragmentation a nd comparison with the data that are in the literature (gallic acid and derived, ellagic acid and derivatives, gallotannins, ellagitannis, cathechin and proantocyanidin). In the phytochemical study, it was used common chromatographic technical, like the Cl assical Column Chromatography (silica gel and sephadex LH - 20), MPLC (Medium Pressure Liquid Chromatrography) and HPLC , that provided a phthalate ester, a sugar, a gallic acid, two quinic acid derived and a glycosylated ellagic acid derivative , that were id entified by spectroscopic (Ultraviolet and Nuclear Magnetic Ressonance) and spectrometric (Mass s pectrometry ). An analytical method was developed using th e HPLC - PDA (High Performance Liquid Chromatography - Photodiode Array Detector) , which permitted quant ification of six substances (gallic acid, gal l o y l quinic acid, ethyl gallate, valoneic acid dilactone, ellagic acid and 3 - O - metilel la gic acid - 4 ' - O - β - D - arabinopyranoside) in the extract. In this quantification, ellagic acid (57.64 ± 1.22 μg.mL - 1 ) and... / Doutor
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Espécies metalo-supramoleculares discretas polinucleares : sínteses e caracterização /

Silva, Cristiana da. January 2014 (has links)
Orientador: Adelino Vieira de Godoy Netto / Co-orientador: Regina Célia Galvão Frem di Nardo / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Victor Marcelo Deflon / Banca: Norberto Sanches Gonçalves / Banca: Eduardo Tonon de Almeida / Resumo: O objetivo central desse trabalho foi sintetizar novas arquiteturas supramoleculares homo- e heterometálicas direcionadas para o reconhecimento molecular de hóspedes a partir da estratégia da auto-montagem envolvendo íons de metais de transição e ligantes exodentados. A primeira parte deste trabalho consistiu na síntese e caracterização espectroscópica de complexos polinucleares homometálicos inéditos a partir da auto-montagem entre as subunidades angulares [PdCl2(N N)] {N N = N,N,N',N'-tetrametiletilenodiamina (tmen), 2,2'-bipiridina (bpy), 1,10-fenantrolina (fen)} e o ligante tridentado 1,3,5-tris(4- piridil)imidazol (tpyHImz). Os sólidos [{Pd(bpy)}6(tpyHImz)4]Cl12·6H2O (1B), [{Pd(tmen)}6(tpyHImz)4]Cl12·30·H2O (2B) e [{Pd(phen)}6(tpyHImz)4]Cl12·6H2O (3B) são estáveis às condições ambientes e solúveis em dmso. Já a espécie [Pd6(μ-Pz)6(μ-bpym)3] (4B) foi formada a partir da reação de auto-montagem entre o bloco de construção linear [Pd2(μ- bpym)Cl4] (bpym = 2,2'-bipirimidina) e o ânion pirazolato (Pz). Estas espécies foram caracterizadas pelas técnicas de análise elementar, espectroscopia vibracional no IV, RMN, espectrometria de massas (ESI-MS). A partir da análise dos dados espectroscópicos e dos resultados provenientes dos cálculos quânticos ab initio baseados na teoria do funcional de densidade (DFT), foi possível propor as estruturas das espécies 1B-4B. Para os compostos 1B-3B, sugere-se a formação de espécies supramoleculares cíclicas discreta catiônicas A2 6A3 4 em que seis subunidades angulares ditópicas [Pd(N N)]+2 (N N = tmen, bpy, phen) atuam como vértices e quatro subunidades angulares tritópicas tpyHImz (A3 4) formariam as arestas da nanoestrutura. No caso da espécie 4B, espera-se uma supramolécula hexanuclear de topologia triangular neutra (A2 6L4 3) em que três subunidades lineares bpym (L4) atuam como arestas enquanto que os grupos "Pd(μ-Pz)2Pd" (A2) formariam os... / Abstract: The main goal of this work was to synthesize new homo- and heterometallic supramolecular structures with molecular recognition properties self-assembled from metal ions and exodentate ligands. The first part involved the preparation and spectroscopic characterization of polynuclear homometallic complexes obtained from self-assembly reactions between angular subunits [PdCl2(N N)] {N N = N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine (tmen), 2,2'-bipyridine (bpy), 1,10-phenanthroline (fen)} and the tridentate ligand 1,3,5-tris(4- pyridyl)imidazole (tpyImz). The solids [{Pd(bpy)}6(tpyHImz)4]Cl12·6H2O (1B), [{Pd(tmen)}6(tpyHImz)4]Cl12·30·H2O (2B) e [{Pd(phen)}6(tpyHImz)4]Cl12·6H2O (3B) are air stable and sluble in dmso. The compound [Pd6(μ-Pz)6(μ-bpym)3] (4B) was self-assembled from the linear building block [Pd2(μ-bpym)Cl4] (bpym = 2,2'-bipyrimidine) and pyrazolate anion (Pz). These polynuclear species were characterized bi elemental analyses, IR and NMR spectroscopies and mass spectrometry (ESI-MS). From the inspection of spectroscopic data and DFT calculations, structural models for compounds 1B-4B were proposed. For complexes 1B-3B, it was suggested the formation of cyclic metallosupramolecules A2 6A3 4 in which six angular ditopic subunits [Pd(N N)]+2 (N N = tmen, bpy, phen) act as vertices whereas four tritopic subunits tpyHImz (A3 4) give rise to the sides of the nanostructure. In the case of 4B, it is expected a hexanuclear triangular-shaped metallomacrocycle (A2 6L4 3) in which the core "Pd(μ-Pz)2Pd" acts as vertices of the triangle whereas the sides are composed by three bischelating 2,2'-bipyrimidine ligands. The second part of this work was carried out in collaboration with Universidade de Barcelona. A series of heterometallic metallamacrocycles have been constructed from self-assembly reactions between the Au(I) organometallic compounds [(AuPy)2(μ2-diphosphane)] {diphosphane = 1,2-bis(diphenylphosphanyl)ethane (dppe), ... / Doutor
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LC-MS analysis based on probabilistic approach / LC-MS analysis based on probabilistic approach

URBAN, Jan January 2010 (has links)
Liquid chromatography (LC) in tandem with mass spectrometry (MS) is a measurement tool for obtain information about the compounds in the investigated extracts. There were already developed methods for processing and analysis of measured data sets. However, only partial problems of processing/analysis task were handled independently. Therefore, the rst part describes existing methods and techniques commonly used in the LC-MS for the processing and analysis today. In this thesis an approach based on the theory of systems is used for description of abstract model above the measured data. This model encapsulated all processing/analysis steps into appropriate and consistent mathematical space. The creation of this model via description of the measurement device and data outputs is introduced. Abstract model of LC-MS data set is used to decompose the measurement into three partial contributions, the analyte signal, the random noise and the systemic noise. The separation process of the signal could be estimated using the probabilistic approach. That probabilistic approach to the LC-MS analysis was implemented in the developed software, which was published in the Bioinformatics Journal.
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Structural Characterization of Potential Cancer Biomarker Proteins

January 2012 (has links)
abstract: Cancer claims hundreds of thousands of lives every year in US alone. Finding ways for early detection of cancer onset is crucial for better management and treatment of cancer. Thus, biomarkers especially protein biomarkers, being the functional units which reflect dynamic physiological changes, need to be discovered. Though important, there are only a few approved protein cancer biomarkers till date. To accelerate this process, fast, comprehensive and affordable assays are required which can be applied to large population studies. For this, these assays should be able to comprehensively characterize and explore the molecular diversity of nominally "single" proteins across populations. This information is usually unavailable with commonly used immunoassays such as ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) which either ignore protein microheterogeneity, or are confounded by it. To this end, mass spectrometric immuno assays (MSIA) for three different human plasma proteins have been developed. These proteins viz. IGF-1, hemopexin and tetranectin have been found in reported literature to show correlations with many diseases along with several carcinomas. Developed assays were used to extract entire proteins from plasma samples and subsequently analyzed on mass spectrometric platforms. Matrix assisted laser desorption ionization (MALDI) and electrospray ionization (ESI) mass spectrometric techniques where used due to their availability and suitability for the analysis. This resulted in visibility of different structural forms of these proteins showing their structural micro-heterogeneity which is invisible to commonly used immunoassays. These assays are fast, comprehensive and can be applied in large sample studies to analyze proteins for biomarker discovery. / Dissertation/Thesis / M.S. Biochemistry 2012
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Whole Cell Proteomics: Understanding Sperm Composition and Maturation

January 2013 (has links)
abstract: Infertility has become an increasing problem in developed countries and in many cases can be attributed to compromised sperm quality. Assessment of male fertility typically utilizes semen analysis which mainly examines sperm morphology, however many males whose sperm appear normal are sub- or infertile, suggesting that sperm from these males may be deficient in a protein or suite of proteins. To date, very little is known about the composition of sperm or the complex maturation process that confers motility and fertilization competency to sperm. Chapter 1 discusses the use of whole cell mass spectrometry to identify 1247 proteins comprising the Rhesus macaque (Macaca mulatta) sperm proteome, a commonly used model of human reproduction. This study provides a more robust proxy of human sperm composition than was previously available and facilitates studies of sperm using the rhesus macaque as a model. Chapters 2 & 3 provide a systems level overview of changes in sperm proteome composition that occurs during epididymal transit. Chapter 2 reports the proteomes of sperm collected from the caput, corpus and cauda segments of the mouse epididymis, identifying 1536, 1720 and 1234 proteins respectively. Chapter 3 reports the sperm proteome from four distinct segments of the Rhesus macaque epididymis, including the caput, proximal corpus, distal corpus and cauda, identifying 1951, 2014, 1764 and 1423 proteins respectively. These studies identify a number of proteins that are added and removed from sperm during epididymal transit which likely play an important role in the sperm maturation process. To date no comparative evolutionary studies of sperm proteomes have been undertaken. Chapter 4 compares four mammalian sperm proteomes including the human, macaque, mouse and rat. This study identified 98 proteins common to all four sperm proteomes, 82 primate and 90 rodent lineage-specific proteins and 494, 467, 566, and 193 species specific proteins in the human, macaque, mouse and rat sperm proteomes respectively and discusses how differences in sperm composition may ultimately lead to functional differences across species. Finally, chapter 5 uses sperm proteome data to inform the preliminary design of a rodent contraceptive vaccine delivered orally using recombinant attenuated Salmonella vaccine vectors. / Dissertation/Thesis / Ph.D. Biological Design 2013
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Olanzapina: uma avaliação da bioequivalência de comprimidos 10mg e estudo pré-clínico com desenvolvimento de sondas de microdiálise cerebral

BEDOR, Noely Camila Tavares Cavalcanti 29 February 2016 (has links)
Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-08-22T12:25:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Bedor_Noely_Tese.pdf: 3627031 bytes, checksum: bffd788a8d2405e29a360eb20d7a089c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-22T12:25:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Bedor_Noely_Tese.pdf: 3627031 bytes, checksum: bffd788a8d2405e29a360eb20d7a089c (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / FACEPE / CAPEs / A olanzapina é um antipsicótico atípico cujo efeito colateral ganho de peso pode ser a causa de não adesão ao tratamento. Não se sabe qual o mecanismo fisiológico que explicaria essa relação, daí a necessidade de pesquisas na área da farmacocinética (PK) e da farmacodinâmica (PD). Assim, o objetivo da tese buscou entender melhor a farmacocinética da OLZ através de estudos em humanos e animal, visando otimização na posologia, empregando correlações de PK/PD. Foi realizado um estudo de bioequivalência utilizando comprimidos teste e referência 10 mg. Em seguida, para evidenciar possíveis variações em alguns parâmetros de PK e buscar dados de PD, realizou-se um estudo de PK plasmática e microdiálise cerebral (MD) em animais. Paralelamente, foram preparadas sondas de MD em laboratório e realizada uma comparação com as sondas comercias, através de diálise e retrodiálise in vitro. Para o estudo com MD, foi realizada a cirurgia estereotáxica para implantação da sonda e punção da artéria e veia femoral, para administração da dose e coleta de amostras plasmáticas. O estudo de bioequivalência foi do tipo aberto, aleatório, cruzado 2 x 2, com 28 voluntários sadios. O método de quantificação da OLZ, em plasma humano por CL-EM/EM, mostrou-se simples, rápido e sensível com o tempo de corrida de 2 min. Os parâmetros farmacocinéticos em humanos Cmáx, Tmáx, ASC0-t e ASC0-∞ obtidos para a formulação teste e referência foram de 11,47±3,65; 12,50±3,73 ng·mL-1; 4,50±1,85; 4,30±2,37 h; 240,97±78,46 e 283,12±94,84 ng·(mL·h)-1, respectivamente, sendo os medicamentos bioequivalentes. As amostras de plasma de animais foram analisadas por CL-EM/EM e de acordo com disposição cinética, o modelo bicompartimental foi o que melhor se ajustou aos dados experimentais. Os parâmetros farmacocinéticos obtidos através de Excel, Winnolin e Pksolver foram considerados próximos. O local de inserção da sonda foi confirmado através de histologia. Os resultados da recuperação por diálise e retrodiálise para as sondas comercial e de laboratório foram 19,27±10,11; 19,42%±6,54; 23,06±2,36; 24,59±3,14, respectivamente. Portanto, as mesmas podem ser intercambiáveis. Por fim, essa tese colaborou com a formação de recursos humanos para inserir no grupo de pesquisa uma técnica pouco utilizada no Brasil, microdiálise cerebral, além de publicação de artigo em periódico internacional. / The olanzapine is an atypical antipsychotic, which confers effects as weight gain, which may be the cause of non-compliance. It is not known what the physiological mechanism that is related to weight gain, hence it is necessary improve the research in pharmacokinetics (PK) and pharmacodynamics (PD). The aim of the thesis sought to better understand the pharmacokinetics of OLZ through studies in humans and animals, aimed at optimizing the dosage regimen using PK / PD correlation. It conducted a bioequivalence study using test and reference tablets 10 mg. Then, to understand possible variations in some parameters PK and PD data fetch, it was performed a plasma PK study and brain microdialysis (MD) in animals. At the same time, MD probes were prepared at the laboratory and compared with commercial probe by dialysis and retrodialysis in vitro. For the MD study, stereotaxic surgery was performed to implant the MD probe and puncture of the femoral artery and vein was performed to dosing and collecting of plasma samples. The bioequivalence study was open, randomized, crossover 2x2 with 28 healthy participants. The method of quantification of OLZ in human plasma by LC-MS/MS developed and validated is simple, fast and sensitive with analysis time (2 min). The human pharmacokinetic parameters Cmax, Tmax, AUC0-t e AUC0-∞ obtained for the test and reference formulation were de 11.47±3.65, 12.50 ± 3.73 ng·mL-1, 4.50 ± 1.85, 4.30 ± 2.37 h, 240.97±78.46 e 283.12 ± 94.84 ng·(mL·h)-1, considering the formulations bioequivalent. Plasma samples of animals were analyzed by LC-MS / MS and according to kinetic disposition, the two-compartment model was the best fit to the experimental data. Pharmacokinetic parameters obtained from Excel, Winnolin and Pksolver were considered approximate. The insertion of the probe into the striatum of the brain of animals was confirmed by histological sections. The results for recovery by dialysis and retrodialysis for commercial and laboratory probes were 19.27% ± 10.11; 19.42% ± 6.54; 23.06% ± 2.36; 24.59% ± 3.14. Therefore, they can be interchangeable. Finally, this thesis collaborated with the training of human resources to insert in the research group, a technique not widely used in Brazil, besides publishing scientific paper in an international journal.
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Avaliação dos principais metabólicos secundários por espectrometria de massas e atividade hipoglicêmica de Salacia impressifolia Miers A. C. Smith

Laikowski, Manuela Merlin 27 February 2015 (has links)
A utilização de plantas na cura dos mais diversos males é tradicionalmente conhecida e utilizada há centenas de anos pela humanidade. As células vegetais produzem uma grande variedade de compostos químicos entre o metabolismo primário e secundário. Os produtos do metabolismo secundário são de especial interesse, pois são responsáveis por diversas ações biológicas. Informações etnobotânicas indicam que mais de 800 plantas são usadas como remédios tradicionais para o tratamento da diabetes. Muitas espécies pertencentes ao gênero Salacia têm sido descritas com atividade antidiabética, entre elas Salacia impressifolia. É uma espécie pertencente à família Celastraceae, conhecida popularmente no Brasil como miraruíra. Este trabalho visou desvendar a composição química desta espécie, utilizando para isso extratos obtidos a partir da casca e do caule. Em seguida, realizou-se análise química dos extratos por espectrometria de massas de alta resolução (EMAR). Nestes foram identificados 32 compostos, os quais haviam sido previamente descritos na literatura para o mesmo gênero. Entre eles destacam-se o kotalanol, salacinol e o mangiferina, com ação hipoglicemiante previamente descrita por outros autores. Para análise in vivo do potencial hipoglicemiante, realizou-se ensaio com o extrato hidroalcoólico do caule da planta em ratos com diabetes induzida por estreptozotocina. O extrato apresentou ação semelhante ao fármaco controle glibenclamida. Também foi avaliado o perfil lipídico (triglicerídeos, colesterol total e HDL) e as enzimas hepáticas TGO e TGP, onde pode-se observar aumento de HDL. / The use of plants in various ailments healing is traditionally known and used for centuries by mankind. Plant cells produce a large variety of chemical compounds between the primary and secondary metabolism. The secondary metabolism products are of special interest, as they are responsible for several biological activities. Ethnobotanic information indicates that more than 800 plants are used as traditional remedies in the treatment of diabetes. Many species of Salacia genus have been described with antidiabetic activity, including Salacia impressifolia. This specie belongs to Celastraceae family, popularly known as miraruíra in Brazil. This work aimed to develop the chemical composition of this specie through stem and stem bark extracts. Chemical analysis of the extracts was carried out by high resolution mass spectrometry (HRMS). In these extracts, 32 compounds were identified, previously described for the same genus. Among them, were identified kotalanol, salacinol and mangiferina, with hypoglycemic action previously described by others authors. For in vivo analysis of hypoglycemic activity, it was performed the hydroalcoholic stem extract in streptozotocin induced diabetics rats. The extract presented similar action to control drug glibenclamide. It was also assessed the lipid profile (triglycerides, total cholesterol and HDL) and liver enzymes AST and ALT, and it was observed an increase in HDL level.
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Estudo quimico do Allium tuberosum Rottl. ex Spreng biomonitorado pela avaliação da atividade anti-Candida albicans / In vitro anti-Candida activity and chemical investigation of leaves and bulbs of Allium tuberosum Rotth. ex Sprengel

Taminato, Rodrigo Luis 06 June 2006 (has links)
Orientadores: Vera Lucia Garcia Rehder, Marta Cristina Teixeira Duarte / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T20:58:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taminato_RodrigoLuis_M.pdf: 889161 bytes, checksum: 74c08f7f56d17f89884a6856839f1ba1 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: De uso freqüente na medicina popular, o gênero Allium inclui mais de 600 espécies encontradas em diversas regiões do mundo como Europa, América do Norte, África e Ásia. A maioria das espécies é comestível e possui aroma e odor característicos, sendo também utilizadas como hipocolesterolêmico, antigripal e antimicrobiano. Alguns estudos de determinação das propriedades de Allium spp. como antifúngico e de identificação de seus compostos voláteis foram conduzidos. A maior parte de seus constituintes são compostos sulfurados, embora a composição química seja variável entre os diferentes estudos. Dentre as espécies de Allium spp., o A. tuberosum Rottl. ex Spreng (Liliaceae) pertence a mesma família do alho, cebola e alho-poró, é conhecido também como "Chinese chive", sendo um importante ingrediente na culinária asiática, também utilizado como erva medicinal para muitas disfunções e doenças. Na China é popularmente chamado de "Jiucai" e no Japão de "Nirá". Os óleos essenciais das folhas e bulbos deA. tuberosum obtidos por hidrodestilação em sistema do tipo Clevenger. As fases aquosas ou hidrolatos foram extraídas com diclorometano, obtendo-se o OB (óleo essencial dos bulbos) - 810 mg (0,12%) e o OF (óleo essencial das folhas) -750 mg (0,15%). O extrato dic1orometânico obtido dos bulbos - EB, obtido em sistema Ultra-Turrax, apresentou rendimento 3,28% (497 mg).O OB foi fracionado em coluna seca, utilizando como eluente dic1orometano. Foram obtidas, 8 frações (FI a F8), analisadas por CCD. As frações 3, 4 e 5 foram agrupadas resultando nas frações: FI - 138,6mg (33%), F2 - 15,3mg (3,7%), F3 - 13,6mg (3,3 %), F4 - 51,9 (12,6%), F5 - 34,lmg (8,3%), F6 - 31,2mg (7,6%). Analisados por CG-MS observa-se que a maioria dos compostos identificados nos óleos essenciais das folhas e bulbos e das frações obtidas do OB são compostos organosulfetos (COS). As principais classes de sulfetos identificadas nas diferentes amostras de A. tuberosum, destacam-se os monosulfetos, disulfetos, trisulfetos, tetrassulfetos e sulfinatos. Na avaliação do MIC obtiveram-se atividade do OB de 200ug/mL e das frações mais ativas FI (50ug/mL) e F2 (50ug/mL). Concluii-se que os principais compostos responsáveis pela atividade anti Candida albicans do Allium tuberosum são alil,metil-disulfeto, dimetil-trisulfeto, dialildisulfeto e alil,metil-trisulfeto, presentes no óleo essencial dos bulbos e nas frações FI e F2 / Abstract: Frequently used in folk medicine, the genus Allium include more than 600 species founded in several world regions like Europe, North America, Africa and Asia. The most of species is edible and have a aroma and smell characteristics, being algo used as hypocholesterolemic, anticold and antimicrobial. Among theAllium species,A. tuberosum Rottl. ex Spreng (Liliaceae) belongs to the same family of the garlic, anion and poroallium. In the China, is popularly called "Jiucai" and in Japan, "Nirá" and is also know as "Chinese chive", a important ingredient in the Asiatic culinary. Studies aims determine the properties of Allium spp. as antifungical and aim identify their volatile compounds are described in literature. The essential oils from leaves (OF) and bulbs (OB) ofA. tuberosum were obtained by hydrodistillation in a Clevenger system, yielding 0,15% and 0,12%, respectively. The dichloromethanic extract from bulbs (EB), obtained in a Ultra-Turrax system, presented yield of 3,28%. The minimal inhibitory concentration (MIC) from oils against Candida albicans was: OF (>1000ug/mL), OB (200ug/mL) and EB (250ug/mL). The OB was fractionated in dry column by use of dichloromethane as eluent, when were obtairied six fractions: FI (33%), F2 (3,7%), F3 (3,3 %), F4 (12,6%), F5 (8,3%), F6 (7,6%), evaluated to anti-C. albicans activity. The volatile compounds present in the essential oils, extract and fractions of OB were identified by CG-MS. The major,ity compounds present in the OF, OB and in the FI and F2 from OB were organosulphides from disulphides classes, trisulphides, tetrasulphides and sulphinides, to standing out the allyl, methyl-disulphide, dimethyl-trisulphide, diallyl-disulphide and alil, methyl trisulphide. Significant quantities of limonene and sulphinades and low concentration of other sulphides were founded in EB. The MIC evaluation of fractions obtained from OB revealed a significant increase of activity for FI and F2, with MIC value of 50ug/mL, when compared to OB (200ug/mL). These results indicate that the main compounds from A. tuberosum responsible by anti-Candida activity are allyl, methyl-disulphide, dimethyltrisulphide, diallyl-disulphide and diallyl disulphide, present in higher concentration in OB and in the fractions FI e F2 / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestre em Odontologia

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