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Estudo do metabolismo, quimica e farmacocinetica do principal metabolito da diidroergocristina / Metabolic, chemical and pharmacokinetics of the main diidroergocristine metabolite

Guzzo, Giovanni Carvalho 14 August 2018 (has links)
Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T18:13:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guzzo_GiovanniCarvalho_D.pdf: 1951061 bytes, checksum: eddc16b466ad966ac80f17737bb7d32d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Diidroergocristina (DHEC) é um fármaco semi-sintético, derivada do alcalóide do Ergot, principalmente utilizada para enxaqueca e estudada em distúrbios cognitivos relacionados ao envelhecimento. No presente estudo, o seu principal metabólito 8-hidroxidiidroergocristina (8'-OH-DHEC) foi produzido através de incubação de preparações enzimáticas de fígado de boi usando o Mesilato de Diidroergocristina como substrato. Foi feita uma avaliação de qual o melhor método de preparação enzimática a ser utilizado para produção do padrão do metabólito ativo em grande escala através da comparação de atividade enzimática entre microssomos e S12, ambos extraídos de heptócitos de fígado bovino. A purificação desse metabólito foi feita através da utilização de uma coluna cromatográfica clássica com sílica gel e cromatografia líquida de fase reversa. Sua identificação foi baseada em mensuração de sua massa molecular por espectro de fragmentação de massa e Ressonância Magnética (NMR - 1H/13C). Através da produção dessa substância in vitro, um método rápido, sensível e robusto de determinação da DHEC e seu principal metabólito foi desenvolvido e validado em LC-MS/MS a partir de análise de plasma humano. Bromocriptina foi utilizado com padrão interno e os limites de quantificação da DHEC e 8-OH-DHEC foram 10 pg/ml e 20 pg/ml, respectivamente. Os parâmetros farmacocinéticos foram investigados em 12 voluntários masculinos através da administração de uma dose única oral de 18mg de DHEC, via oral (Ikevert®). O Cmax de DHEC observado foi 0,28 ± 0,22 µg/l; o Tmax 0,46 ± 0.26h; a ASC 0,39 ± 0,41 µg/l.h; com meia-vida de 3,50 ± 2.27 h. O pico de concentração do 8-OH-DHEC foi 5,63 ± 3,34 µg/l; com Tmax de 1,04 ± 0,66 h; e ASC de 13,36 ± 5,82 µg/l.h; observando uma meia-vida de 3,90 ± 1,07 h. A administração de 18mg de DHEC foi bem tolerada, sem associação com qualquer reação adversa. Os resultados farmacocinéticos obtidos foram comparados com dados anteriores obtidos para a DHEC por meio de radioimunoensaio (RIA). Uma diferença nos parâmetros farmacocinéticos de Cmax e ASC é observada entre os métodos analíticos e sua possível relação na prática clínica é discutida / Abstract: Dihydroergocristine (DHEC) is a semi-synthetic drug mainly used for migraine and studied in age-related cognitive impairment. In this study, its major metabolite 8'-hydroxy-dihydroergocristine (8'-OH-DHEC) was produced in incubates of a bovine liver preparation using dihydroergocristine mesylate (DHECM) as substrate. An evaluation of the best enzymatic preparation method was done in order to verify the adequate process for massive production of the metabolite. A comparison between microssomes and S12 was performed, where both preparations were extracted from bovine hepatocytes. Purification was achieved by flash silica gel column and reverse phase liquid chromatographies, and identification was based on accurate molecular mass measurements, mass fragmentation spectra and NMR (1H/13C) chemical shifts. By using the substance produced in vitro, a fast, sensitive, specific and robust LC/MS/MS method for the simultaneous determination of DHEC and its major metabolite in human plasma was developed and validated. Bromocriptine was used as internal standard and limits of quantification for DHEC and 8'-OH-DHEC were 10 pg/ml and 20 pg/ml, respectively. Pharmacokinetic parameters were investigated on 12 male healthy volunteers to whom a single dose of 18 mg DHECM was administered in tablets (Iskevert®). The peak of DHEC was 0.28 ± 0.22 µg/l, the tmax 0.46 ± 0.26 h, the AUClast 0.39 ± 0.41 µg/l.h and the terminal elimination half-life 3.50 ± 2.27 h. The peak of 8'-OH-DHEC was 5.63 ± 3.34 µg/l, the tmax 1.04 ± 0.66 h, the AUClast 13.36 ± 5.82 µg/l.h and the terminal elimination half-life 3.90 ± 1.07 h. Dosing of 18 mg DHECM was well tolerated, causing no adverse events. The pharmacokinetics parameters observed on this study were compared to those obtained in DHEC analysis by radioimmunoassay (RIA). A difference in Cmax and AUC is observed between both methods and its clinical implications are discussed / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica
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Proteínas de Bacillus Pumilus envolvidas na degradação de petróleo e diesel.

Santos, Jefferson Ferreira dos 11 April 2014 (has links)
Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-06T19:29:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jefferson Ferreira dos Santos.pdf: 12615415 bytes, checksum: 28e029e2822cb4b7e87ef5b2dc18919b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-06T19:38:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jefferson Ferreira dos Santos.pdf: 12615415 bytes, checksum: 28e029e2822cb4b7e87ef5b2dc18919b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-06T19:42:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jefferson Ferreira dos Santos.pdf: 12615415 bytes, checksum: 28e029e2822cb4b7e87ef5b2dc18919b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-06T19:42:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jefferson Ferreira dos Santos.pdf: 12615415 bytes, checksum: 28e029e2822cb4b7e87ef5b2dc18919b (MD5) Previous issue date: 2014-04-11 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The ever increasing consumption of fossil fuels puts oil as one of the most important products of human consumption. Undeniable technological and even social breakthroughs are coming era of "post-oil" . But this unbridled consumption has led to serious environmental aquatic ecosystems and land damage. Viable alternatives that promote the recovery of areas affected by these compounds are undoubtedly of utmost importance given the current scenario. Bioremediation has proven very promising in this area . And increasingly, new technology are aggregated to this field of research in an attempt to obtain more conclusive results, thus improving the overall understanding of how microorganisms interact in promoting bioremediation. This is precisely what has been proposed in this work. The use of Mass Spectrometry (MS) for identification of proteins of bacteria capable of growth in xenobiotics. Initially was selected near the Refinaria Isaac Sabbá (REMAN) species B. pumilus, with the potential ability to grow in petroleum and diesel. After conducting tests using oil and diesel separately with unique carbon sources, was proven capacity for growth of the species in these xenobiotics. Better growth/biomass production was recorded in crops having diesel as finte carbon, as well as the best protein yield. The proteomic profile in petroleum, diesel and yeast extract was determined. Comparisons between these profiles showed very marked difference between them. For analysis via mass spectrometry were selected 96 spots of B. pumilus were selected and identified by Peptide Mass Fingerprint (PMF) . Of this total 54 protein spots were identified. Some with potential involvement in direct bioremediation processes by B. pumilus. However, further studies are necessary to effective proof of proteins in the pathways of degradation of xenobiotics. / O consumo cada vez crescente dos combustíveis fósseis coloca o petróleo como um dos mais importantes produtos do consumo humano. Inegáveis avanços tecnológicos e até mesmo sociais são advindos da era “Pós-Petróleo”. Porém, esse consumo desenfreado tem gerado graves danos ambientais aos ecossistemas aquáticos e também terrestres. Alternativas viáveis capazes de promover a recuperação de áreas afetadas por esses compostos são sem dúvida de extrema importância diante do cenário atual. A biorremediação tem se mostrado bastante promissora nessa área. E cada vez mais novas tecnologia são agregadas a esse campo de investigação na tentativa de obter resultados mais conclusivos, melhorado assim, o entendimento global de como os microorganismos interagem na promoção da biorremediação. É justamente isso o que foi proposto nesse trabalho. O emprego da espectrometria (MS) de massa para identificação de proteínas de bactéria com capacidade de crescimento em xenobióticos. Inicialmente foi selecionada nas proximidades da Refinaria Isaac Sabbá (REMAN) a espécie B. pumilus, com potencial capacidade de crescer em petróleo e diesel. Após a realização de testes usando petróleo e diesel, separadamente, com fontes únicas de carbono, foi comprovada a capacidade de crescimento da espécie nesses xenobióticos. Melhor crescimento/produção de biomassa foi registrado nos cultivos tendo o diesel como finte de carbono, bem como o melhor rendimento protéico. O perfil proteômico em petróleo, diesel e extrato de levedura foi determinado. As comparações entre tais perfis demonstrou diferenças bastante acentuadas entre eles. Para análise via espectrometria massas foram selecionados 96 spots de B. pumilus e identificados por Peptide Mass Fingerprint (PMF). Desse total de spots, 54 proteínas foram identificadas. Algumas delas com potencial envolvimento nos processos diretos de biorremediação apresentada por B. pumilus. Porém, mais estudos são necessário para efetiva comprovação dessas proteínas nas vias de degradação de xenobióticos.
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CristalizaÃÃo, anÃlise preliminar de difraÃÃo de raios X, determinaÃÃo da massa molecular e seqÃÃncia protÃica por espectrometria de massa de uma lectina de sementes de Dioclea virgata / Crystallization, preliminary analysis of X-ray diffraction, determination of protein molecular weight and sequence by mass spectrometry of a lectin from Dioclea virgata

Emmanuel Silva de Marinho 16 August 2010 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A lectina de sementes de Dioclea virgata (Dvir) foi purificada e submetida a experimentos de cristalizaÃÃo, determinaÃÃo da massa molecular e sequÃncia protÃica por espectrometria de massa Os cristais da proteÃna foram obtidos complexados com X-man e utilizando o mÃtodo de difusÃo de vapor a uma temperatura constante de 293 K, e cresceu em uma condiÃÃo contendo 0,5 M de sulfato de amÃnio, 0,1 M de citrato de sÃdio tribÃsico dihidratado pH 5,6 e 1,0 M de sulfato de lÃtio monohidratado. Um completo conjunto de dados foi coletado em 1,8 à de resoluÃÃo usando uma fonte de radiaÃÃo sÃncrotron. O cristal de Dvir pertence a um grupo espacial I222 ortorrÃmbico centrado, com parÃmetros de cÃlula unitÃria a = 647.5 Ã, b = 86.6 Ã, c = 90.2 à e os Ãngulos α = 90 0 β = 90 γ = 90.0Â.A melhor soluÃÃo para a pesquisa de substituiÃÃo molecular teve um coeficiente de correlaÃÃo de 77,1% e um Rfactor de 44,6%. A lectina possui massa molecular de 25412 Da  2 (cadeia α) em pH 6,5 ou superior, se encontra em um arranjo tetramÃrico e se apresenta como dÃmero na unidade assimÃtrica sugerindo um empacotamento cristalino similar a outra lectina da subtribo Diocleinae, D. guianensis, D. rostrata, a respeito do sÃtio de ligaÃÃo a carboidrato e os contatos dimÃricos / The lectin from Dioclea virgata (Dvir) was purified and subjected to crystallization experiments, determination of protein molecular weight and sequence by mass spectrometry. The crystals of the protein complexes were obtained by X-man and using the vapor diffusion method at a constant temperature of 293 K and grew in a condition containing 0.5 M ammonium sulphate, 0.1 M sodium citrate tribasic dihydrate pH 5.6 and 1.0 M lithium sulphate monohydrate. A complete data set was collected at 1.8 à resolution using a synchrotron radiation source. Dvir The crystal belongs to a centered orthorhombic space group I222, with unit cell parameters a = 647.5 Ã, b = 86.6 Ã, c = 90.2 à and angles α = 90.0  β = 90  γ = 90.0 Â. The best solution for the detection of molecular replacement had a correlation coefficient of 77.1% and 44.6% of rfactor. The lectin has a molecular mass of 25 412 Da  2 (α chain) at pH 6.5 or higher, is in a tetrameric arrangement and presents as a dimer in the asymmetric unit suggests a crystal packing similar to other lectin subtribe Diocleinae, D. guianensis, D. rostrata, regarding the carbohydrate-binding site and contacts dimeric
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Avaliação de sistemas de cromatografia líquida uni e bidimensional acoplados a espectrometria de massas na análise do proteoma dos corpos protéicos do milho / Maize protein bodies proteome by LC-MS/MS and LC/LC-MS/MS

Rogério de Campos Bicudo 22 June 2007 (has links)
O valor nutricional do milho é limitado devido ao seu alto conteúdo de proteínas de reserva (zeínas), que são deficientes em aminoácidos essenciais como lisina e triptofano. Por esse motivo, a Embrapa (Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária) desenvolveu a variedade de milho BR473, que tem um excelente valor energético e um maior conteúdo protéico quando comparado ao milho comum. Tal variedade possui 0,9 e 4,0 g/kg de grão de triptofano e lisina, respectivamente, contra 0,6 e 2,6 do milho comum. O alto conteúdo de lisina em algumas variedades de milho como a opaco-2 (o2), por exemplo, é relacionado à presença de proteínas não-zeínas. Para identificar essas proteínas, o que poderia explicar o alto conteúdo protéico da variedade BR473, foi analisado o proteoma dos corpos protéicos dos grãos desse milho. Para tal, foram usadas e avaliadas as cromatografias uni e bidimensional, acopladas a espectrometria de massas (LC-MS/MS e LC/LC-MS/MS), uma vez que tais técnicas se tornaram ferramentas poderosas para seqüenciamento e identificação de proteínas. Neste trabalho, foram identificadas seis proteínas por LC-MS/MS e dezesseis proteínas por LC/LC-MS/MS. / The nutritional value of maize seed is limited due to its high content of zeins (storage proteins), which are deficient in essential amino acids as lysine and tryptophan. Because of this, Embrapa (Brazilian Agricultural Research Corporation) developed the BR 473 maize variety, which has excellent energetic value and higher proteic content than the normal maize. BR 473 maize variety has 0.9 and 4.0 g/kg of grain of tryptophan and lysine, respectively, against the 0.6 and 2.6 from normal maize. The high lysine content in some maize varieties as opaque-2 (o2), for example, has been related to the presence of non-zein proteins. In order to identify them, which could explain the high proteic content of BR 473 maize variety, the protein bodies proteome of these grains were analyzed. For this purpose, one and two-dimensional liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS and LC/LC-MS/MS) were used and evaluated, since these techniques have become a powerful tool for protein sequencing and identification. We have identified six proteins by LC-MS/MS and sixteen proteins by LC/LC-MS/MS.
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Caracterização parcial dos produtos de eletrooxidação do dipiridamol em acetonitrila e em meio aquoso ácido / Partial caracterization of dipyridamole electrooxidation products in acetonitrile and acid aqueous medium

Michelle Lima 08 April 2008 (has links)
Neste trabalho foram estudados os produtos gerados pela eletrooxidação do 2,6-bis(dietanolamina)-4,8-dipiperidinapirimida-[5,4-d] pirimidina, Dipiridamol. Atualmente o Dipiridamol é um dos fármacos que induzem vasodilatação coronariana mais utilizados em Cardiologia Nuclear em diferentes técnicas aplicadas na aquisição e processamento de imagens (cintilografia miocárdica de perfusão, cintilografia de necrose miorcárdica, ressonância magnética do coração, ventriculografia e angiocardiografia radio-isotópica). Na prática clínica, o emprego do dipiridamol baseia-se na diminuição da agregação plaquetária, elevação dos níveis de adenosina e na potencialização dos efeitos da Aspirina®. A eletrooxidação do Dipiridamol em acetonitrila é caracterizada por dois processos consecutivos envolvendo a perda de um elétron em cada etapa de oxidação. Diferentemente do meio aprótico, a eletrooxidação do Dipiridamol em meio aquoso ácido, apresenta apenas uma única etapa de oxidação que corresponde à perda de dois elétrons. A eletrooxidação foi realizada em condições de potencial controlado para a retirada de um ou de dois elétrons. Espectros de Absorção Ótica e de Fluorescência foram obtidos após as eletrooxidações para o acompanhamento da estabilização e caracterização parcial dos produtos de oxidação eletroquímica nos diferentes meios. Após a estabilização dos produtos utilizou-se a técnica de Extração em Fase Sólida para a retirada do sal eletrolítico, obtendo-se dois tipos de frações, uma aquosa e outra metanólica, na eletrooxidação em acetonitrila. Essas frações foram estudadas por meio de Espectrometria de Massas acoplada à Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (LC-MS). Não foi utilizada Extração em Fase Sólida para os compostos obtidos pela eletrólise em meio aquoso ácido, os quais, foram analisados diretamente por LC-MS. Os produtos obtidos das eletrooxidações do Dipiridamol foram parcialmente caracterizados. Todas as eletrólises levaram à formação de isômeros com m/z de 472 [M+H]+, 269 [M+H]+, 519 [M+H]+ e 505 [M+H]+. A elucidação estrutural completa destes produtos não foi possível devido à instabilidade e à baixa concentração dos mesmos o que impossibilitou a realização de estudos mais detalhados de caracterização estrutural. / In this work the products obtained in the eletrooxidation reactions of 2,6- bis(diethanolamino)-4,8-dipiperidinopyrimido-[5,4-d] pyrimidine (Dipyridamole) were studied. Dipyridamole is a drug that induce the coronary vasodilatation mostly used in Nuclear Cardiology in different techniques based on acquisition and image processing ( perfusion heart cintilography, heart necrosis cintilography, heart magnetic resonance, ventriclegraphy and radio-isotopic coronary angioplasty). In clinical medicine, Dipyridamole is used for decreasing platelet aggregation, increasing the adenosine levels and co-activating Aspirine® effects. The eletrooxidation of the Dipyridamole in acetonitrile is characterized by two consecutives processes involving the release of one electron in each stage of oxidation. Differently from aprotic medium, the electrooxidation of Dipyridamole in acid aqueous media shows a single oxidation stage corresponding to the release of two electrons. Electrooxidation was performed in Controlled Potential Conditions using a potential necessary to remove one or two electrons. Optical Absorption and Fluorescence Emission Spectra were obtained after the electrooxidation to monitor the electrochemical oxidation products stabilization in different media. After allowing the products stabilization Solid Phase Extraction tecnique was used to remove the electrolytical salt, and, two different fractions were obtained, an aqueous one and a methanolic one upon the electrooxidation in acetonitrile. These fractions were studied by Mass Spectrometry combined with High Performance Liquid Chromatography. (LC-MS). Solid Phase Extraction was not used for the products obtained in acid aqueous medium eletrolysis, and they were directly analyzed by LCMS. The products obtained from Dipiridamol eletrooxidations were partially characterized. Every electrooxidation formed isomers with m/z de 472 [M+H]+, 269 [M+H]+, 519 [M+H]+ and 505 [M+H]+. The complete structural elucidation of these products was not possible due to their instability and the low concentration obtained in the purification, which was insufficient for futher detailed studies such as nuclear magnetic resonance analysis.
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Caracterização química dos neonicotinóides em águas superficiais via cromatografia liquída de alta eficiência acoplada  a espectrometria de massas em tandem (HPLC-MS/MS) / Chemical characterization of neonicotinoids in surface waters by high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (HPLC MS/MS)

Priscila Oliveira Amaral 22 February 2017 (has links)
O presente estudo teve como propósito o desenvolvimento de um método para a determinação e a validação de uma metodologia para a identificação e quantificação de Neonicotinóides em águas superficiais coletadas na região de Bauru, no estado de São Paulo. As técnicas analíticas estudadas para o desenvolvimento deste método foram a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas em tandem (HPLC - MS/MS), a cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas (GC/MS) e a cromatografia a gás acoplada ao detector de captura de elétrons (GC/ECD). A classe de pesticidas Neonicotinóides foi escolhida para este trabalho por estar relacionada com um súbito desaparecimento de abelhas em colônias de todo o mundo. Este fenômeno é conhecido como colapso de desordem das colônias (Colony Collapse Disorder CCD) e o mesmo é caracterizado por uma rápida perda na população de abelhas adultas. Os Neonicotinóides utilizados neste estudo foram os compostos Clotianidina, Imidacloprido e Tiametoxam que foram proibidos na sua utilização como pesticidas na Europa pelo regulamento de execução nº 540/2011. As amostras foram concentradas utilizando as técnicas de extração em fase sólida (SPE) e extração líquido líquido (LLE) e injetadas no HPLC MS/MS, GC/MS e GC/ECD. As técnicas de GC/ECD e GC/MS não foram satisfatórias para a determinação na matriz água, pois, o limite de detecção (10 mg L-1), esta acima do valor máximo permitido na legislação da agência de proteção ambiental americana (0,6 μg L-1). A técnica de HPLC MS/MS utilizando o modo de monitoramento de reações múltiplas (MRM) provou se adequada para este estudo por obter limites de quantificação entre 5,89 a 8,06 μg L-1 e uma linearidade entre 0,9963 e 0,9993 para os três compostos. / The present study aimed to develop a method for the determination and validation of a method for the identification and quantification of Neonicotinoids in surface waters collected in the Bauru region, in the state of São Paulo. The analytical techniques studied for the development of this method were the high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (HPLC - MS / MS), gas chromatography with mass spectrometry (GC / MS) and gas chromatography with electron capture detector (GC / ECD). The class of pesticides Neonicotinoids was chosen for this work because it is related to a sudden disappearance of bees in colonies around the world. This phenomenon is known as Colony Collapse Disorder (CCD) and it is characterized by a rapid loss in the population of adult bees. The Neonicotinoids used in this study were the compounds Clothianidin, Imidacloprid and Thiamethoxam which were banned in their use as pesticides in Europe by Implementing Regulation No. 540/2011. The samples were concentrated using solid phase extraction (SPE) and liquid liquid extraction (LLE) techniques and injected into HPLC-MS / MS, GC / MS and GC / ECD. The GC / ECD and GC / MS techniques were not satisfactory for determination in the water matrix because the detection limit (10 mg L-1) is above the maximum allowed by the US Environmental Protection Agency (0.6 μg L-1). The HPLC - MS / MS technique using the multiple reaction monitoring (MRM) proved to be adequate for this study because it obtained quantification limits between 5.89 and 8.06 μg L-1 and a linearity between 0.9963 and 0.9999 for the three compounds.
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Análise do perfil lipídico do sêmen bovino / Analysis of the lipid profile of bovine semen

Mariana Aparecida Fonseca 09 April 2012 (has links)
A composição dos lipídeos de membrana está entre os fatores que podem influenciar a capacidade fecundante do espermatozoide. Sabidamente os lipídeos desempenham papéis indispensáveis na membrana dos espermatozoides, participando dos processos de interação entre gametas e influenciando o comportamento físico-químico dos espermatozoides durante os procedimentos de criopreservação. Estas moléculas apresentam uma ampla gama de propriedades químicas que tornam complexa a sua análise. Atualmente a espectrometria de massas (MS) por ionização e dessorção a laser assistida por matriz (MALDI) representa uma potente ferramenta para a análise de lipídeos. Assim, a proposta deste trabalho buscou verificar a ocorrência de diferença no perfil lipídico de espermatozoides bovinos obtidos por MALDI utilizado técnica de análise direta dos espermatozoides e análise após a extração lipídica pelo método de Bligh e Dyer. Além disso, este trabalho analisou o perfil lipídico de espermatozóides bovinos que receberam ou não suplementação de antioxidantes. Após coleta, lavagem e separação dos espermatozoide, estes foram submetidos à extração lipídica ou destinados íntegros à obtenção do perfil lipídico (método direto). O perfil lipídico do extrato lipídico ou de espermatozoides íntegros foi adquirido por MALDI em modo positivo e com matriz DHB (ácido dihidroxibenzoico). A análise dos dados foi realizado com o software Metaboanalist utilizando ferramentas de análise multivariada (análise de componentes principais - PCA) e de identificação de íons com intensidade diferencial entre grupos de comparação (teste t, volcano plot). Com essas análises foi possível identificar que ocorre diferença no perfil lipídico dos espermatozoides bovinos quando obtidos a partir de análise direta ou extração de lipídeos. Não foram observadas diferentes entre grupos submetidos ou não à suplementação com vitaminas. O método direto é capaz de proporcionar um perfil lipídico representativo e de fácil aquisição. / The membrane lipid composition is amongst the factors that influence the fertilization competence of the spermatozoa. It is also known that lipids play fundamental roles at spermatozoa membranes, participating in many processes, such as spermatozoaoocyte interaction and determining the physical-chemical behavior of spermatozoa membranes during cryopreservation. These molecules show a wide range of chemical properties, making complex its analysis. Currently, mass spectrometry (MS) through matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI) represents a powerful tool for lipids analysis. Hence, this proposal aimed to evaluate differences in bovine spermatozoa lipid profile obtained through MALDI using direct sample analysis of spermatozoa or analysis of spermatozoa lipid extract obtained by Bligh-Dyer technique. Moreover, this proposal evaluated lipid profile of spermatozoa from bull that received or not antioxidant supplementation. After collection, washing and separation, the spermatozoa were submitted to lipid extraction or straightforward destined to lipid profile acquisition (direct method). The lipid profiles of spermatozoa lipid extracts or from whole spermatoloza were obtained by MALDI in positive mode with DHB matrix (dihydrozybenzoic acid). Data analysis was performed with Metaboanalyst software using multivariated analysis (Principal component analysis - PCA) and tools for identification of differential ions between comparison groups (t-test, volcano plot). Results show differences in spermatozoa lipid profile obtained by direct method or after lipid extraction. No differences were observed in bovine spermatozoa derived from bulls supplemented or not with vitamins. The direct method can generate a representative and easily obtained lipid profile.
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Novas estratégias "ômicas" aplicadas a produtos farmacêuticos / Novel "omic" strategies applied to pharmaceutical products

Oliveira, Diogo Noin de, 1986- 24 August 2018 (has links)
Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T16:45:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_DiogoNoinde_M.pdf: 1761420 bytes, checksum: 44f281d866001f2469fed828f8218583 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Com a larga distribuição e o crescimento de mercado da indústria de cosméticos, esta deve sempre seguir processos de produção e controle de qualidade altamente eficazes. Ensaios analíticos dessa natureza são realizados utilizando-se técnicas de cromatografia, podendo ou não ser acopladas a análises por espectrometria de massas. Entretanto, esses procedimentos requerem fases extensas de preparo de amostra, englobando desde processos de extração até mesmo a reações de derivatização. Num cenário industrial, isso se reflete em grande demanda de tempo e, portanto, custos adicionais. Tendo em vista esse escopo, apresentamos uma nova plataforma "ômica" ¿ a Cosmetômica, que propõe o uso de metodologias simplificadas e de grande eficácia em termos de preparo de amostra e facilidade na aquisição de dados. Amostras de diferentes tipos de cosméticos são analisadas através da técnica de espectrometria de massas por imagem (MALDI-MSI), qualitativa e quantitativamente, através da integração de dados tanto analíticos quanto estatísticos. É possível controle total de toda a cadeia produtiva, desde a matéria-prima até o produto acabado, sendo esse último o objeto de estudo do presente trabalho / Abstract: With the large distribution and the increasingly promising market of cosmetic industry, highly-qualified productive and quality control processes are mandatory for companies to follow. Analytical procedures for QC are commonly carried out using instrumental approaches such as chromatography ¿ coupled or not with mass spectrometry. However, these procedures require sample preparation steps, which may comprise extraction and even sample derivatization. In an industrial scenario it may reflect in great demand of time, with elevated costs as the main consequence. Within this scope, we present a new "omic" platform ¿ Cosmetomics, which proposes the use of simple and effective methods in terms of sample preparation and readiness of data acquisition. Samples from different types of daily use cosmetics are analyzed by mass spectrometry imaging (MALDI-MSI), both qualitative and quantitatively, through the integration of analytical and statistical data. It is possible, therefore, full control of the whole productive chain, from the raw material up to the finished product, which was the elected sample class of our study / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas
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Efeito da aplicação de flúor fosfato acidulado na composição proteica da película salivar formada sobre esmalte / Effect of acidulated phosphate fluoride application on the protein composition of salivary enamel pellicle

Masson, Nádia, 1983- 22 August 2018 (has links)
Orientador: Adriana Franco Paes Leme / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T17:14:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Masson_Nadia_M.pdf: 2480697 bytes, checksum: 8edab99b43557ac621635c6c1d19b060 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A película adquirida é um filme protéico resultante da adsorção seletiva de proteínas presentes na saliva total à superfície dental. Devido ao seu contato com a superfície de esmalte, a película adquirida no esmalte desempenha um papel importante nos estágio iniciais da formação da placa dental por meio da modulação da aderência bacteriana. Tem sido reportado que o tratamento do esmalte com produtos de alta concentração de fluoreto leva a formação de uma camada de mineral do tipo fluoreto de cálcio ("CaF2") em sua superfície. Sabe-se que a adsorção protéica ao esmalte é um processo específico e dependente da natureza da superfície e pouco se conhece da influência da camada de "CaF2" na composição da película salivar. A proposta deste estudo foi avaliar a composição da película salivar formada in vitro quando da aplicação de flúor fosfato acidulado no esmalte. Para tal, blocos de esmalte bovino foram aleatoriamente divididos em 3 grupos de tratamento. Cada bloco foi exposto ao tratamento com água destilada (controle negativo), solução de ácido fosfórico (controle ativo - H3PO4 0,1 M pH 3,5) ou solução de flúor fosfato acidulado (NaF 0,5 M em H3PO4 0,1 M pH 3,5) por 4 minutos. Os blocos foram então lavados, secos e imersos em saliva humana por 2 horas para a formação da película salivar. A película adquirida de cada grupo foi extraída, submetida ao protocolo de digestão com tripsina e os peptídeos gerados foram analisados por cromatografia líquida de fase reversa acoplada a uma interface com ionização por nanoelectrospray em um espectrômetro de massas LTQ Velos Orbitrap. Após processamento e análise dos dados gerados pelo espectrômetro de massas utilizando o programa Proteome Discoverer e ScaffoldQ+ foram identificadas 56 proteínas. Cada grupo de tratamento apresentou uma quantidade similar de proteínas totais identificadas e 17,8% das proteínas totais estavam presentes em todos os grupos de tratamento. Doze proteínas foram exclusivas do grupo tratado com água destilada, 11 exclusivas do grupo tratado com ácido fosfórico e 12 do grupo tratado com flúor fosfato acidulado. A quantificação relativa por contagem de espectros demonstrou que quando da aplicação de flúor fosfato acidulado no esmalte a abundância de algumas proteínas diminui, dentre elas a proteína histatina-1. Entretanto, a abundância da proteína de S100-A9, confirmada por western blot, aumentou quando a superfície de esmalte foi tratada com flúor fosfato acidulado. Os dados sugerem que a modificação causada no esmalte pela aplicação de flúor fosfato acidulado influencia a composição da película adquirida no esmalte podendo ter um impacto na posterior colonização bacteriana inicial / Abstract: The acquired pellicle is a protein film resulting from the selective adsorption of proteins present in whole saliva onto tooth surfaces. Because of its contact with enamel surfaces, the enamel pellicle plays an important role in the initial stages of plaque formation by modulating bacterial attachment. High concentrated fluoride product treatment of enamel has been reported to result in the formation of a layer of a CaF2-like material ("CaF2") on the enamel surface. Protein adsorption to enamel is a specific process dependent on the nature of the surface, and little is known about the influence of this "CaF2" layer on pellicle composition. The purpose of this investigation was to gain further insights into the in vitro pellicle components when APF application is performed. Bovine enamel blocks were randomly divided in 3 groups. Each block was exposed to distilled water (negative control), or phosphoric acid (active control - 0.1 M H3PO4 pH 3.5) or acidulated phosphate fluoride (APF) (0.5 M NaF in 0.1 M H3PO4 pH 3.5) solution for 4 minutes. Blocks were then washed, dried and immersed in human saliva for 2 hours for enamel pellicle formation. AEP from each group was collected, subjected to trypsin digestion protocol and the peptides generated were analyzed by reverse-phase liquid chromatography coupled with nanoelectrospray ionization in a LTQ Velos Orbitrap mass spectrometer. After analyses of the data by Proteome Discoverer e ScaffoldQ+ programs 56 proteins were identified. Each treatment group presented a similar amount of total identified protein and 17.8% of total proteins were present in all four groups. Twelve proteins were exclusively in the group treated with water, 11 proteins were exclusively in the group treated with phosphoric acid and another 12 proteins were only present in the discs treated with APF solution. Relative proteomic quantification showed that the abundance of some proteins decreases with APF application, such as histatin-1. However, the concentration of S100 - A9, confirmed by immunoblotting analyses, increases when enamel surface was treated with APF solution. These data suggest that the modification caused on enamel surface by APF application influences the composition of AEP and may have an impact on initial bacterial attachment / Mestrado / Cariologia / Mestra em Odontologia
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Monitoramento dos produtos de oxidação do biodiesel por espectrometria de massas ambiente com ionização Sonic-Spray (EASI-MS) / Oxidation products of biodiesel monitoring by easy ambient Sonic-Spray ionization mass spectrometry (EASI MS)

Godoy, Adriana Teixeira, 1984- 22 August 2018 (has links)
Orientador: Marcos Nogueira Eberlin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-22T20:17:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Godoy_AdrianaTeixeira_M.pdf: 2223321 bytes, checksum: 134f9e40cc70f5375ebda2fa6ada3b8c (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Biodiesel é uma fonte de energia renovável de interesse mundial e uma das alternativas mais atraentes para substituir os combustíveis derivados do petróleo. Devido a sua natureza química, durante um longo período de armazenamento pode sofrer reações de oxidação influenciadas por alguns fatores, tais como temperatura, exposição à luz e ao oxigênio. A formação de produtos de oxidação no biocombustível diminui a sua qualidade. Métodos clássicos físico-químicos para análises da qualidade de óleos e gorduras, atualmente vem sendo aplicados ao biodiesel. Estas análises consomem uma quantidade elevada de solvente e requerem extenso tempo de análise. A técnica de espectrometria de massas ambiente com ionização sonic-spray (EASI-MS) tem sido aplicada com sucesso como um método rápido e direto para avaliar os parâmetros de qualidade de biodiesel, incluindo tipificação da matéria prima graxa, contaminantes orgânicos típicos, quantificação de biodiesel em blendas de diesel/biodiesel e adulteração com óleos vegetais. O objetivo deste trabalho foi monitorar o processo de oxidação de amostras de biodiesel de óleo de soja e de óleo residual de fritura mantidas em diferentes condições de armazenamento empregando a técnica EASI-MS, assim como identificar marcadores do processo oxidativo. Para comparação foram também realizadas análises de caracterização físico-química: índice de acidez, índice de iodo, índice de peróxido, viscosidade cinemática e estabilidade oxidativa. Os resultados obtidos por EASI-MS foram compatíveis com os resultados das análises físico-químicas realizadas nas mesmas amostras. A técnica de EASI-MS permitiu monitorar a oxidação do biodiesel de uma maneira rápida e sem preparo de amostra fornecendo uma visão geral sobre a formação dos produtos primário de oxidação, os hidroperóxidos / Abstract: Biodiesel is a renewable source of global concern and one of the most attractive alternatives to replace petroleum fuels. Due to its chemical nature over a long period of storage can suffer oxidation reactions influenced by some factors such as temperature, exposure to light and oxygen. The oxidation products formed in the biodiesel decreases its quality. Classical methods for physico-chemical analyzes of the quality in oils and fats, is now being applied to biodiesel. These analyzes consume a large amount of solvent and require extensive analysis time. The technique Easy Ambient Sonic-Spray Ionization mass spectrometry (EASI-MS) has been successfully applied as a fast and direct method to evaluate the quality parameters of biodiesel including the type of raw fat material fat, typical organic contaminants, biodiesel's quantification in blends of diesel/biodiesel and adulteration with vegetable oils. The aim of this work was to monitor the oxidation process in samples of biodiesel from soybean oil and waste frying oil kept under different storage conditions by EASI-MS, as well as identifies markers of oxidative process. For comparison analyzes were also carried out physico-chemical characterization: acid number, iodine value, peroxide value, kinematic viscosit and oxidative stability. The results obtained by EASI-MS were consistent with the results of the physico-chemical analyzes performed on the same samples. EASI-MS allowed monitoring the oxidation of biodiesel quickly and without sample preparation by providing an overview of the formation of the primary product of oxidation, hydroperoxide / Mestrado / Quimica Analitica / Mestra em Química

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