Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T02:04:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Matthiesen_AlcyrJose_M.pdf: 2439730 bytes, checksum: 195b3aef1010687757fea8a898b4bb9c (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A difusão de toxinas do sítio de inoculação de veneno é atribuída à ação de enzimas como colagenases, elastases, hemorraginas e hialuronidases que degradam os componentes da lâmina basal e da matriz extracelular. Neste trabalho avaliamos a atividade hialuronidásica de vários venenos animais e investigamos algumas propriedades da enzima encontrada no veneno da cascavel sul americana Crota/us durissus terrificus. A atividade hialuronidásica foi medida por um método turbidimétrico usando-se ácido hialurônico como substrato e também por detecção in situ após SDS PAGE. A hialuronidase foi parcialmente purificada por gel filtração em coluna de Sephacryl S200 HR. O perfil de eluição foi monitorado a 280nm e as frações foram testadas para atividade enzimática. A capacidade de antisoros em neutralizar a enzima foi avaliada medindo-se a atividade residual após co-incubação durante 30 min à 37°C. De modo geral, os venenos investigados possuíam atividade hialuronidásica, com níveis mais altos em venenos de artrópodes [15.3+-4.7 ¿ 166+-19.2 unidades (TRU ou "turbidity reducing units")/mg] do que em serpentes (O - 7.0+-1.7 TRU/mg; média+-E.P.M.; n=3-6). Houve variação dentro e entre espécies e subespécies, conforme observado com os venenos botrópicos e crotálicos, respectivamente. Assim, a atividade hialuronidásica de diferentes amostras de veneno de C. d. terrificus variou de 4.5:tO.5 à 13.2:t4.8 unidades TRU/mg, (n=3-6), enquanto a de C. d. cascavella e C. d. collilineatus era de 25.7:t1.2 e 6.8:t1.1 TRU/mg, respectivamente. A hialuronidase mostrou pH ótimo de 4,0, e atividade máxima na presença de 50-100 mM de NaCI. A enzima perdeu atividade acima de 37°C, e também perdeu 50% de atividade durante as primeiras 6 h em solução (acetato de sódio 0,1 M, pH 6,0, contendo 0,15 NaCI), mas depois se manteve relativamente constante até 24 h, independente da temperatura de incubação (4°C, 25°C, 37°C). A cromatografia do veneno de C. d. terrificus por gel filtração resultou em um pico de atividade hialuronidásica com peso molecular >30.000, o que foi confirmado por eletroforese (SDS-PAGE) seguido por detecção de atividade in situo Com esta técnica, apenas uma banda de atividade foi observada com os diferentes lotes de veneno e o peso molecular foi estimado em -75.000. A atividade da enzima foi inibida de forma dose-dependente por antisoros comerciais (anti-botrópico, anti-crotálico, anti-elapídico e anti-escorpiônico), sendo o anti-escorpiônico o menos eficaz; em altas doses, todos inibiram a atividade em >90%. Estes resultados indicam que há variação nos ní.veis de atividade hialuronidásica no veneno de C. d. terrificus, mas que existe apenas uma isoforma. As propriedades desta enzima se assemelharam às de outras hialuronidases de venenos. A neutralização da atividade enzimática por diferentes antisoros comerciais indicou que há identidade imunológica entre hialuronidases de diferentes venenos / Abstract: Animal venoms contain enzymes capable of degrading basement membrane and extracellular matrix components. We examined the collagenase, elastase and hyaluronidase activities of several venoms and some of the properties of hyaluronidase in Crotalus durissus terrificus (South American rattlesnake) venom. Collagenase and elastase were assayed colorimetrically. Hyaluronidase activity was measured turbidimetrically and by in situ detection following SDS-PAGE. The enzyme was also partially purified by gel filtration on Sephacryl S200 HR. Neutralization of hyaluronidase by antisera was tested by measuring the residual activity afier co-incubation. Arthropod and snake venoms showed similar levels of collagenase; elastase activity varied from O - O.713 ~nm/mg/24 h. The hyaluronidase content of arthropod venoms [15.3+-4.7 to 166:!:19.2 units/mg; mean +-SEM] was higher than in snake venoms (<7.0+-1.7 units/mg; n=3-6). In C. d. terrificus venoms, hyaluronidase activity varied from 4.5+-0.5 to 13.2+-4.8 units/mg (n=3-6). C. d. terrificus hyaluronidase eluted as a single peak afier gel filtration and migrated as a single band (~75 kDa) based on in situ detection afie r SDS-PAGE. The pH optimum was 4.0, with maximum activity in 0.05-0.1 M NaCI. The enzyme lost activity at >37°C and after 6 h in solution (-50% reduction) at 4°C, 25°C and 37°C. Commercial antisera neutralized the enzyme. These propertiesof C. d. terrificus hyaluronidase were similar to those of other venom hyaluronidases / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Ana Paula de Souza Pardo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:46:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Planello_AlineCristiane_M.pdf: 940083 bytes, checksum: 36ed3b0b3b0d10c144805116e08917dd (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Objetivo: As Metaloproteinases da Matriz ( MMPs) são enzimas que degradam a matriz extracelular (MEC) e tem sido associadas às desordens temporomandibulares (DTM). Nós investigamos a freqüência dos -1607 1G/2G MMP1 polimorfismo (rs1799750), -1171 6A/5A MMP3 polimorfismo (rs3025058) e -1562 C/T MMP9 polimorfismo (rs3918242) em indivíduos com sinais de degeneração da ATM, diagnosticados por exame de imagem, a fim de analisar a associação desses polimorfismos e a DTM. Métodos: A população estudada foi composta por 115 indivíduos diagnosticados por exame de imagem (grupo DTM) e 117 controles. Os polimorfismos genéticos foram determinados por PCR/RFLP. Resultados: A freqüência do genótipo 2G/2G no gene MMP1 foi significantemente mais alta no grupo DTM do que no grupo Controle (p = 0.008). O genótipo 2G/2G no grupo DTM mostrou um risco aumentado para a DTM com um OR = 2.25 ( 95% IC = 1.26 - 3.99) quando comparado com os genótipo 1G/2G e 1G/1G. A freqüência dos alelos do gene MMP1 não mostrou diferença significativa entre os grupos (p > 0.05). A distribuição dos genótipos e alelos dos genes MMP3 e MMP9 não mostrou diferença significativa (p > 0.05). Conclusão: Nossos resultados mostram a associação entre o polimorfismo -1607 MMP1 e a suscetibilidade à DTM / Abstract: Objective. Matrix metalloproteinases (MMPs) degrade extracellular matrix components and have been implicated to play an important role in temporomandibular joint disorder (TMD). We investigated the frequency of -1607 1G/2G MMP1 polymorphism (rs1799750), -1171 6A/5A MMP3 polymorphism (rs3025058) and -1562 C/T MMP9 polymorphism (rs3918242) in individuals with TMJ degeneration diagnosed by image exam in order to analyze the association of these MMPs polymorphisms and TMD. Methods. The studied population comprised 115 TMD individuals diagnosed by image exam and 117 healthy controls. Genotypes were determined using polymerase chain reaction/Restriction fragment length polymorphism PCR/RFLP. Results. The MMP1 2G/2G genotype was significantly higher in the TMD group than in the Control group (p = 0.008). The genotype 2G/2G in the TMD group showed an increased risk to TMD with an OR = 2.25 (95% CI = 1.26 - 3.99) when compared with 1G/2G and 1G/1G genotypes. Analysis of MMP1 allele frequencies showed no significant difference (p > 0.05). The MMP3 and MMP9 genotypes distribution and alleles frequency did not differ between the groups (p > 0.05). Conclusion. Our results report the association of -1607 MMP1 gene polymorphism and increased risk to TMD / Mestrado / Histologia e Embriologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientador: Ricardo Della Coletta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-01T23:13:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MartelliJunior_Hercilio_D.pdf: 3278041 bytes, checksum: 0cc24c4b3107647288798f4d02c27e47 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Fibromatose Ggengival Hereditária (FGH) representa uma condição oral incomum, caracterizada por aumento gengival fibrótico e generalizado. Para elucidar algumas características regulatórias que resultam nesta condição, linhagens celulares de fibroblastos de pacientes de uma mesma família com FGH foram isolados e analisados em relação ao efeito de diidrotestosterona (DHT) na proliferação celular e de TGF-ßl, IL-6 e INF-? na expressão e produção de colágeno tipo I, Hsp47, MMP-I e MMP-2. Adicionalmente, analisamos o efeito de DHT na produção de IL-6 e determinamos os níveis de expressão de receptores de andrógenos em fibroblastos de GN e de FGH. Os resultados indicaram que DHT simultaneamente estimulou a proliferação celular e inibiu a produção de IL-6 em fibroblastos de GN e de FGH. A expressão de receptores para andrógenos foi detectada em fibroblastos de GN e de FGH; contudo, a expressão foi maior em fibroblastos de GN. Ensaios de RT-PCR, westem blot, ELISA e enzimografia demonstraram que a expressão e produção de colágeno tipo I e Hsp47 foram significativamente maiores em fibroblastos de FGH comparados a fibroblastos de GN, enquanto a expressão de MMP-I e MMP-2 foram menores em fibroblastos de FGH. A adição de TGF-ßl e IL-6 à fibroblastos de GN e de FGH promoveram um aumento na expressão de colágeno tipo I e Hsp47 e uma diminuição de MMP-I e MMP-2. INF-y reduziu a expressão de colágeno tipo I e Hsp47, apresentando menor efeito na expressão de MMP-I e MMP-2. Estes resultados demostram que DHT coordena a proliferação celular e a produção de IL-6 em fibroblastos de GN e de FGH e que TGF-ßl e IL-6 estimulam a síntese de colágeno e reduzem a atividade proteolítica de fibroblastos de FGH, os quais favorecem o acúmulo de matriz extracelular / Abstract: Hereditary Gingival Fibromatosis (HGF) is an uncommon oral condition characterized by a fibrous gingival enlargement. To further elucidate some of the regulatory features resulting in this condition, the culture characteristics of cell lines of gingival fibroblasts derived from patients ofthe some family with HGF were isolated and analyzed on the effect of DHT on proliferation rate and on the effect of TGF-ßl, IL-6 and INF-? on expression and production of type I collagen, Hsp47, MMP-I and MMP-2. Additionally, we analyzed the effect of DHT on IL-6 production and determined the expression levels of androgen receptors in NG and HGF fibroblasts. The results indicated that DHT simultaneously upregulated the cell stimulates proliferation and downregulated the production of IL-6 production by NG and HGF fibroblasts. Androgen receptor levels was identified in both NG and HGF fibroblasts; however, the levels in NG were higher than those observed in HGF. Our results obtained from RT-PCR, Westem blot, ELISA and enzymography assays demonstrated that the expression and production of type I collagen and Hsp47 were significantly higher in fibroblasts from HGF than from NG, whereas MMP- 1 and MMP-2 expression and production were lower in fibroblasts from HGF patients. Addition of TGF-ßl and IL-6 promoted an increase in type I collagen and Hsp47 and decrease in MMP-I and MMP-2 expression. INF-y reduced both type I collagen and Hsp47 expression, whereas had a slight effect on expression of MMP-I and MMP-2. These results show that DHT coordinates the proliferation and production of IL-6 by NG and HGF fibroblasts and that enhanced TGF-ß1 and IL-6 production simultaneously increase the synthesis and reduce the proteolytic activies of HGF fibroblasts, which favor the accumulation of extracellular matrix / Doutorado / Estomatologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientador : Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T01:37:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Catalano_Ricardo_M.pdf: 6185165 bytes, checksum: ace65328615f679660b215a5f54c4f1c (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Os tendões em geral, possuem funções importantes relacionadas com a transmissão das forças de tração geradas pela contração muscular para o osso. São estruturas adaptadas à resistir a forças de tração, e em alguns tendões podem resistir também a forças de compressão. A organização dos componentes da matriz extracelular proporcionam ao tendão grande flexibilidade, resistência e uma certa elasticidade. Estas características biomecânicas permitem ao tendão realizar trabalho com eficiência funcional e otimização operacional. A matriz extracelular de tendão é constituída por colágeno, proteoglicanos e proteínas não colagênicas. A organização e distribuição destes componentes são diferentes para diferentes tecidos dependendo da presença de forças de tração e compressão a que estão sujeitas. O objetivo deste trabalho foi analisar a organização estrutural e a composição da matriz extracelular de tendões submetidos a forças periódicas de tração. Para tanto, foram analisados tendões de cauda de ratos suspensos e comparados a ratos controle. Foram realizadas análises bioquímicas de componentes da matriz, e análise morfológica utilizando microscopia de luz normal e polarizada além da microscopia eletrônica de transmissão. As análises revelaram que os tendões caudais sob tração sofrem. modificações estruturais e físico químicas. Foi observado que no caso dos tendões suspensos, ocorreu uma maior compactação e organização das moléculas colagênicas, e que também um dos pequenos proteoglicanos, o decorim provavelmente sofre alterações em sua estrutura / Abstract: Tendons are structures capable of undergoing different adaptations to accomplish their function with efficiency. In this work we have analyzed the modifications in tendons of rat tails, which were submitted to periodic tension forces. Morphological and biochemical analyses were carried out. A waviness aspect of collagen bundles was observed for suspended tendons but not in control tendons. Also higher linear dichroism values were observed for suspended tendons, indicating the existence of a re-arrangement of the collagen bundles when submitted to tension forces. Ultrastructural analysis, showed that in the case of suspended tendons, the diameter of the fibrils of collagen were larger compared with the control. The biochemical analysis, showed no differences between the composition of the extracellular matrix of suspended and control tendons, but it was remarkable the behavior of the polydisperse proteoglycan with 140 kDa, that migrated faster in SDS PAGE, in the case of suspended tendons, indicating probably a diminishing in the size of the glycosaminoglycan chain present in that proteoglycan. It is discussed the possible effect of the polydisperse component in the increased diameter of collagen fibrils in the case of suspended tendons / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sebastião Roberto Taboga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:27:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Corradi_LaraSilvia_M.pdf: 4218766 bytes, checksum: 31f98a583235b641f6facc93ba1715e1 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: o desenvolvimento e diferenciação da próstata são induzidos por andrógenos; via interações epitélio-mesenquimais, e na vida adulta, a glândula é mantida funcionalmente ativa por interações semelhantes entre o epitélio e o estroma. Descompensações hormonais, geralmente observadas durante a senescência, causam um desequilíbrio destas interações homeostáticas e podem promover o aparecimento de patologias prostáticas. A hiperplasia e o câncer estão entre as doenças que mais fTeqüentemente atingem a próstata e os hormônios androgênicos; juntamente com outros fatores, exercem papel importante na etiologia destas lesões. O entendimento da fisiologia androgênica e sua função no desenvolvimento e manutenção da próstata normal e no envolvimento com as doenças que a afetam é fundamental para a compreensão das interações epitélio-estroma. Na próstata a ação androgênica é acentuada devido à conversão da testosterona em diidrotestosterona pela 5a.- redutase, enzÍma presente, principalmente, em células basais e estromais. Por essas razões, o objetivo deste estudo foi avaliar as alterações na morfologia tissular da próstata ventral do gerbilo adulto (Meriones unguiculatus), incluindo modificações na arquitetura tecidual, na ultra-estrutura celular, além do arranjo das fibras da matriz extracelular, decoITentes do tratamento com finasterida, um inibidor competitivo da enzima 5a.-redutase. Os resultados obtidos após 10 dias de tratamento oral; com 100mglkg/dia de finasterida, revelaram uma intensa reorganização do compartimento estromal e modificações epiteliais frente a nova situação hormonal. O compartimento glandular epitelial reduziu-se de tamanho e teve a atividade sintética diminuída, enquanto no compartimento estromal as fibras de colágeno e as reticulares acumularam-se de maneira marcante na base do epitélio, assumindo fenótipos bem diferentes dos observados na próstata dos animais controle. A camada de músculo liso tornou-se menos compactada, com abundante material granular amorfo e fibras colágenas e reticulares entremeando as células musculares lisas. Além disso, este material granular amorfo também acumulou-se notavelmente na base do epitélio. Algumas das células da camada muscular lisa por sua vez, passaram a apresentar aspecto desdiferenciado, com contorno irregular e espinhoso, enquanto outras mostraram-se bem reduzidas, com citoplasma condensado e várias vesículas de pinocitose na membrana celular. Deste modo, estes resultados permitem indicar que a inibição da atividade enzimática da 5a.-redutase afetou as interações homeostáticas entre epitélio e estroma, o que pode estar potencialmente envolvido com alterações hormonais / Abstract: Prostatic deve1opment and differentiatíon are induced by androgens acting via mesenchymal-epithelial interactions, and during adult life the gland is maintained functionally active by reciprocal homeostatic stromal-epithelial interactions. Hormonal alterations, usually associated with the physical aspects of aging, leads to disruptions of this homeostatic interactions and may initiate and promote several prostate diseases. The benign prostatic hyperplasia and cancer are among the most fi-equently prostatic pathologies and androgens, together with others factors, play important roles in the etíology ofthese lesions in the prostate. Understanding the physiology of androgen production and its role in development and maintenance of the normal prostate and in prostate cancer, it is vital in order to comprehend the complex interactions between epithelium and stroma. Within the prostate, the androgen action is enhanced due to the conversion of testosterone in dihydrotestosterone, by 5a-reductase, an enzyme mostly present in basal and stromal cells. Thus, the objective ofthis study was to analyze the alterations in tissular morphology of the adult gerbil (Meriones unguiculatus) ventral prostate, including modifications in the tissue architecture, cell ultrastructure and extracellular matrix fibers arrangement, following finasteride therapy, a competitive Sa-reductase inhibitor. The data obtained afier oral frnasteride administration, at a dose of 100mglkglday through 10 days revealed a striking reorganization ofthe stromal compartment and epithelial modifications, probably due to the new hormonal situation. The glandular epithelial compartment shrinked and its secretory activity decreased. In the stromal compartment, there was a notable collagen and reticular fibers accumulation around the epitheliurn, which assumed very different phenotypes when compared to the control animaIs' prostate. The smooth musc1e layer underwent a loosening, interspersed with abundant amorphous granular material, collagen and reticular fiber. This amorphous granular material also accumulated in the base of the epithelium. Some smooth musc1e cells exhibited a dedifferentiated aspect with a higWy irregular external contour and numerous spine-like cytoplasmic projections, whereas others were reduced, showing a condensed cytoplasm and many caveolae in the cell surface. ln these regards, the results lend support to conc1ude that the 5a-reductase inhibition affected the homeostatic epithelial-stromal interactíons, what can be critically involved with the alterations of hormonallevels / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Benedicto de Campos Vidal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:11:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paoli_Flaviade_M.pdf: 13532312 bytes, checksum: e1da24a994eb94382a8c6665b5814297 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Dois tendões de frangos com idades de 21 e 41 dias da região tibiotarsus foram utilizados: o tendão calcaneus communis e o tendão flexor digitorum superficialis, que são submetidos a forças compressivas e tensionais, respectivamente. O objetivo deste estudo foi detectar diferenças morfológicas e funcionais, de ordem molecular e de cristalinidade entre esses dois tendões. Tendões que trafegam sobre uma articulação possuem características fibrocartilaginosas em resposta a forças compressivas apresentando grandes quantidades de glicosaminoglicanos livres e organizados com os feixes de colágeno. Por outro lado, tendões que são submetidos a forças tensionais possuem menores quantidades de glicosaminoglicanos, fato esse indicado por uma metacromasia menos evidente na coloração com Azul de Toluidina e por apresentarem valores maiores em testes de intumescimento em ácido acético a 3%. Análises de curvas de birrefringência de forma revelam um maior estado de agregação ordenada e uma maior cristalinidade neste tendão, demonstrada por maiores valores de retardas ópticos. Células do tendão calcaneus communis exibem grandes variações morfológicas, assim como seus núcleos, que possuem formas que vão da fusiforme até a arredondada, semelhantemente a condrócitos. Foi também observado aumento da quantidade de DNA nesses núcleos, com o avanço da idade, comparativamente à quantidade determinada em eritrócitos de frangos, utilizados como controle para os parâmetros geométricos e absorciométricos analisados. Portanto, todos esses dados indicam que estes tendões, por necessitarem de processos adaptativos constantes, possuem uma maior organização e orientação de seus componentes, além de uma alta atividade metabólica de suas células / Abstract: Two tendons of chickens with 21 and 41 days old from tibiotarsus region were utilized: calcaneus communis tendon and fIexor digitorum superficialis tendon that are submitted to compressive and tensional forces, respectively. The aim of this study was to detect morphological and functional differences, related with molecular order _nd crystallinity between these two tendons. Tendons that pass above joints have fibrocartilagenous characteristics in response to compressive forces, presenting high amounts of free glycosaminoglycans and organized with the collagen bundles. Otherwise, tendons subjected to tensional forces have minor glycosaminoglycans amount, in agreement with the decreased metachromasy after toluidine blue staining and with the great values found in the intumescing tests with 3% acetic acid. Form birefringence curves analyses reveal a higher ordered aggregational state and crystallinity in this tendon according to the optical retard values. Cells of the calcaneus communis tendon exhibit great morphological variations, as its nuclei, wich have forms ranging from elongated to round, similar to chondrocytes. Its was also watched an increase on the DNA amount at these nuclei with the ages advance when compared to the amount found in chicken erythrocytes, here utilized as control for the geometric and absorciometric parameter. However, ali these data indicate that these tendons, for needing constant adaptative processes, have a high organization and orientation of their components, besides a high metabolic activity of the cells / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:13:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tomiosso_TatianaCarla_M.pdf: 4297076 bytes, checksum: 448864ccd931233cf60f718db755d078 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A cartilagem articular é um tecido conjuntivo hialino que apresenta células e abundante matriz extracelular, sendo essa composta de colágenos, glicoproteínas não colagênicas e proteoglicanos. Este trabalho teve como objetivo descrever a composição e organização da matriz extracelular de cartilagem articular de avestruz. Esta ave de grande porte e de interesse comercial, quando mantida em cativeiro, tem sido acometida por artrose nas articulações do tarsometatarso com sério comprometimento para a saúde do animal e consequências econômicas. Para tanto consideramos as cartilagens articulares das superfícies proximal e distal do tarsometatarso. A cartilagem proximal foi dividida em porção lateral e intermediária-medial, enquanto que da cartilagem da superfície distal foi analisada só a porção central. As análises estruturais das regiões da cartilagem, coradas com azul de toluidina, mostraram porções meta cromáticas e fibrilares. As fibrilas, intensamente birrefringentes ao exame pela microscopia de polarização, mostraram-se dispostas em várias direções, especialmente na região dista / Abstract: The articular cartilage is a hyaline connective tissue that contains cells and a great amount of extracellular matrix, which is composed of collagen, non-collagenous glycoproteins, and proteoglycans. This work aimed to describe the composition and organization of the extracellular matrix from articular cartilage of ostrich, which is a big bird with commercial importance and that commonly suffers of arthritis at the tarsometatarsical articulations when living in captivity conditions, teading to serious commitments to the animal's health, beyond the economical consequences. For this purpose. we have considered the articular cartilages of the proximal and distal surfaces of the tarsometatarsus. The proximal cartilage was divided into lateral, and intermediary-medial portions. From the distal surface only the central portion was analyzed. Structural analyses after toluidine blue staining showed presence of metachromatic and fibrilar components. The fibrils, intensely birefringent at polarization microscopy. were arranged in many directions, especially in distal cartilage. To extract the extracellular matrix components 4 M guanidinium chloride was utilized. The components were fractionated in DEAE-Sephacel and analyzed by SDS-PAGE. Quantitation of proteins and glycosaminoglycans was done utilizing colorimetric methods. The quantitative analysis revealed that the distal region, which is subjected to higher compressive forces, contaíns more proteins and glycosaminoglycans than the proximal region. The SDS-PAGE analysis of the fractions eluted from the DEAE-Sepachel showed the presence of proteíns with Mr from 17 to 121 kDa. In ali regions, polydisperse components wíth Mr around 67, 80-100, and 250-300 kDa, were found. These components probably correspond to the small proteoglycans fíbromodulin, decorín and biglycan. Glycosaminoglycans analysis in agarose-propylene diamine gel showed only the presence of chondroitin-suftate. The possible decorin found is a proteoglycan of chondroitin-sufate, and not dermatan-sulfate, as observed in other cartilages. Structurally the distal region exhibited ffbí11s arranged in several directions, probably because of a highest compressive strenght / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Laurecir Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T15:50:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Esquisatto_MarceloAugustoMarretto_D.pdf: 7708123 bytes, checksum: 0787246c940f80a3c6f05b0cf0d848bd (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: o tendão calcanear e o tendão flexor digital profundo de ratos são estruturas adaptadas para resistir às forças de tensão. Em algumas regiões, estes tendões também suportam forças de compressão. Nestes locais o tecido fibroso desenvolve uma metaplasia fibrocartilaginosa. O objetivo desse trabalho foi analisar o comportamento mecânico dos tendões, bem como a organização estrutural e a composição da matriz extracelular das regiões submetidas à tensão e tensão/ compressão em três idades diferentes (30dl180d/730d). O tendão calcanear foi dividido em região proximal (tensão) e distal ( compressão) e o tendão flexor digital profundo em duas regiões de tensão (proximal e distal) e uma de compressão (intermediária). A área ocupada pela fibrocartilagem no tendão calcanear apresentou crescimento longitudinal com a idade, enquanto que no tendão flexor digital profundo o desenvolvimento ocorreu transversalmente. Os proteoglicanos estão concentrados na matriz pericelular das células diferenciadas nos dois tendões. A presença de proteoglicanos entre as fibras colágenas parece diminuir nos indivíduos mais velhos no tendão calcanear e aumentar no tendão flexor digital profundo. As regiões de tensão não apresentaram variações entre as idades quanto à organização das fibras colágenas e basofilia na matriz extracelular. A ultraestrutura das células da região de compressão apresentou um citoplasma rico em filamentos do citoesqueleto. A matriz pericelular dos fibrocondrócitos no tendão flexor digital profundo, rica em proteoglicanos e fibrilas de colágeno, apresentou aumento na espessura nos animais mais velhos. No tendão calcanear, nas mesmas idades, a matriz pericelular passa por alterações progressivas, resultando numa malha de fibrilas de colágeno nos indivíduos idosos. Nas regiões de tensão as células apresentaram citoplasma rico em retículo endoplasmático rugoso. No tendão calcanear a capacidade de síntese das células parece diminuir antes que no tendão flexor digital profundo. Em ambos os tendões as fibrilas de colágeno apresentaram diâmetros menores na região de compressão em relação a de tensão. As médias dos diâmetros das fibrilas de colágeno de todas as regiões apresentaram aumento entre as idades de 30 e 180d com diminuição nos indivíduos de 730d. As regiões de tensão do tendão calcanear e flexor digital profundo apresentaram intumescimento mais acentuado em ácido acético que as de compressão. O conteúdo de água apresentou valores semelhantes entre as todas regiões e idades. A presença de glicosaminoglicanos foi maior nos indivíduos mais jovens. Contudo, nos animais mais velhos foram detectados conteúdos maiores nas regiões de compressão. O conteúdo de proteínas solúveis foi maior nas regiões de tensão enquanto que os conteúdos de ácido urânico e glicosaminoglicanos sulfatados foram mais proeminentes nas regiões de compressão. O glicosaminoglicano predominante em todas as regiões do tendão calcanear e flexor digital profundo foi o dermatam sulfato. O condroitim sulfato também foi detectado, mas somente na região de compressão de indivíduos com 30d. Fibromodulim e o decorim foram detectados em todas as regiões e idades. O teste imunoquímico para fibromodulim demonstrou diferentes graus de associação com o colágeno entre as idades. O decorim parece mais evidente nas regiões de compressão de animais com 180d. O tendão calcanear apresentou aumento progressivo da tensão de ruptura e módulo elástico durante o envelhecimento enquanto que no tendão flexor digital profundo foram observados aumento nos valores entre 30d e 180d e diminuição aos 730d. Os tendões analisados parecem apresentar respostas biológicas semelhantes aos diferentes tipos de forças a que são submetidos, no entanto, as variações qualitativas e quantitativas observadas devem estar relacionadas às diferenças na exigência funcional durante o envelhecimento / Abstract: The rat calcanear and digital flexor tendons are structures which are adaptated to resist tension forces. In some regions, these tendons also support compression forces. In these areas the fibrous tissue develops a fibrocartilage metaplasia. The aim of this work was to analyse the mechanic behaviour of these tendons, structural organization and extracelIular matrix composition of the different regions subjected to tension and tension/compression of the tendons during aging (30/180/730 days old). The calcanear tendon was divided into the proximal region (tension) and distal region (compression) and digital flexor tendon into two tension areas (proximal and distal) and one compression area (intermediate). The fibrocartilage of calcanear tendon increased 10ngitudinalIy with age, while in the digital flexor tendon, it developed transversalIy. Proteoglycans are concentrated in the pericellular matrix ofboth tendons' differentiated celIs. The presence of the proteoglycans in the colIagen fibres seem to decrease during aging in the calcanear tendon and increase in the digital flexor tendon. The colIagen fibres organization and basophilia in the extracelIular matrix of tension regions did not change during aging. The ultrastructure of the celIs in the compression region revealed a cytoplasm rich in cytoskeleton filaments. The pericelIular matrix, rich in proteoglycans and fibrils, progressively increases with aging in the flexor digital tendon. During this period, it undergoes progressive alterations in calcanear tendon which result in a network of fine fibrils in older individuaIs. In the tension region, celIs present a cytoplasm rich in rough endoplasmic reticulum. Cells ITom calcanear tendon seem decrease their synthetic metabolism before those in the digital flexor tendon. Collagen fibrils in compression regions ITom both tendons present smaller diameters. The mean diameter ITom fibrils in all regions show an increase among 30d and 180d and a decrease within 730 days old animais. In relation to compression regions, the tension regions from both tendons show a swelIing increment in acetic acid. Water content was similar in all regions and ages. Glycosaminoglycan content was higher in young animais. During aging, however, the compression regions showed higher glycosaminoglycan contento The content of soluble protein was higher in tension regions, whereas in compression regions was observed a prominent content of uronic acid and glycosaminoglycan in the extracts. Dermatan sulfate was the most abundant glycosaminoglycan found in all regions ITom calcanear and digital flexor tendon. Chondroitin sulfate was only detected in compressive regions of 30 days old rats. Fibromodulin and decorin were present in all regions and ages. Fibromodulin's immunoblotting demonstrated different degrees of association with collagen during aging. Decorin seems to be more prominent in compression regions ITom 180 days old animals. The calcanear tendon presents a progressive rise in tension of rupture and elastic modulus during aging whereas in the digital flexor tendon it was observed a progressive rise in the values among 30 and 180 days and a decrease in 730 days old rats. The tendons se em to present similar biological responces to different types of forces which they were submitted. The observation of quantitative and qualitative variations, however, must be related to differences in functional stress during aging / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Ciências

Orientador: Sergio Luis Felisbino / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:10:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JustulinJunior_LuisAntonio_M.pdf: 10236686 bytes, checksum: 4ad6350b1b5ac9de674a75c18e876eef (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A próstata (Pvl e a vesícu1a seminal (VS) são glândulas andrógeno-dependentes que sofrem atrofia e recuperação após privação e reposição androgênica, respectivamente. Em ambos eventos são observadas alterações tanto no compartimento epitelial quanto no estromal. Os aspectos relacionados às alterações epitelias provocadas pela reposição hormonal na próstata de ratos castrados estão bem descritos na literatura. Entretanto as alterações estromais e a atividade de metaloproteinases de matriz (MMPs) não estão descritas, tão pouco um estudo comparativo da resposta proliferativa entre a PV e a VS. Desta forma, este trabalho teve por objetivos: a) comparar a resposta da PV e da VS de ratos castrados submetidos ao processo de recuperação glandular por reposição hormonal; b) caracterizar o processo de reorganização estromal da próstata ventral de ratos castrados submetidos à reposição hormonal; c) avaliar a atividade das MMPs-2 e 9 durante a castração e reposição hormonal. Para tanto, ratos Wistar adultos machos (3 meses de idade) foram divididos em 3 grupos experimentais: controle, castrado (remoção dos testículos), e castrado tratado com testosterona. Os animais do grupo castrado foram sacrificados após 3, 5, 7, 21, 24, 26, 28, e 31 dias após a castração, enquanto os do grupo castrado tratado receberam, após 21 dias de castração, doses diárias de propionato de testosterona (4mg/kg/dia) e foram sacrificados após 3, 5, 7 e 10 dias de reposição. Finalmente, os animais do grupo controle foram sacrificados ao 3°., 7°., 21°. e 31° dias após o início do experimento. Os animais foram pesados e mortos. As próstatas ventrais (PV) e as vesículas seminais (VS) foram pesadas e processadas para análises histoquímicas, imunohistoquímicas, morfométricas, estereológicas, ultra-estruturais e análises bioquímicas por zimografia. Os resultados foram avaliados estatisticamente. Com a castração tanto a PV quanto a VS sotteram o característico processo de involução, com perda de peso, redução de área epitelial e luminal, e aumento da área estromal. Esses eventos foram revertidos progressivamente com a reposição hormonal. Entretanto, ao final do tratamento, a VS respondeu mais intensamente à reposição com testosterona do que a PV, superando significativamente o peso das glândulas dos grupos controle, enquanto o peso da PV não atingiu o peso das glândulas dos grupos controle. Esta diferença entre as duas glândulas também foi observada no índice de proliferação (IP) celular obtido pela marcação imunohistoquímica para PCNA. As células epitelias da VS apresentaram um IP aproximadamente três vezes superior às da VP. Embora a castração promova um aparente aumento da área estromal, nossos resultados de peso absoluto do estroma revelaram que ocorre na verdade uma diminuição no conteúdo estromal, com uma possível degradação da matriz extracelular. Embora, as fibras colágenas, reticulares e elásticas, condensadas durante a castração, tenham sido progressivamente distendidas e dispersadas ao redor dos duetos durante a reposição hormonal, ocorreu um aumento progressivo no volume absoluto do estroma, sugerindo a síntese destes componentes durante o tratamento. Este resultado confirma as observações ultra-estruturais de fibroblastos e células musculares lisas com citoplasmas repletos de organelas envolvidas na síntese protéica (Cisternas dilatadas de reticulo endoplasmático rugoso e Complexo de Golgi). Na degradação dos componentes da matriz extracelular do estroma durante a castração certamente ocorre com a participação das metaloproteinases de matriz (MMPs) 2 e 9, as quais exibiram aumento de atividade gelatinolítica de suas forma latentes e principalmente de suas formas ativas. A MMP-9 apresentou maior atividade durante a fase fmal da involução glandular, enquanto a MMP-2 apresentou aumento de atividade tanto na involução, quanto na recuperação glandular. Esses resultados demonstram que hormônios androgênicos modulam a fisiologia da próstata, influenciando o conteúdo e a organização da matriz extracelular do estroma através das células musculares lisas e, principalmente, dos fibroblastos / Abstract:The ventral prostate (VP) and the seminal vesic1e (SV) are both androgen dependents, in which undergoe atrophy and regrowth processes afier androgen deprivation and reposition. In both events, it was observed alterations in the epithelium as well as in the stromal compartiments. The aspects related to the prostate epithelium induced by testosterone replacement in castrated rats are very well discribed, however the estromal modifications and matrix metalloproteinases (MMPs) activity are not, even not a comparative study of proliferative responsiveness between VP and SV to testosterone replacement. In this sense, the aim of this work was: a) to compare the responsiveness to androgen reposition of the VP and SV involuted; b) to describe the process of stromal reorganization of castrated ventral prostate submited to testosterone replacemnt; c) to analyse the gelatinolitic activity of MMP-2 and MMP-9 in the ventral prostate during castration and androngen reposition; For this, male adult Wistar rats (3 months-old) were divided into 3 experimental groups: control, castrated (testis excision), and castrated plus testosterone replacement. The animals from castrated group were sacrificed at 3,5, 7, 21, 24, 26, 28 and 31 days after castration, while those from testosterone replacement, afier 21 days of castration, started to receive daily doses of testosterone propionate (4mg/kg/day) and were sacrificed at 3, 5, 7 and 10 days afier testosterone replacement. Finally, the animals from control group were sacrificed at 3, 7, 21 and 31 days afier beginning the experimento The animals were killed and weighted. The VPs and SVs were weighted and processed for histochemistry, immunohistochemistry, morphometric-stereological, ultra-structural and zymography analyses. The results were analysed statistically. Castration induced the characteristic process of involution. This process was progressively reverted by the testosterone replacement. However, at the end of the treatment, the more responsiveness of SV was demonstrated. The SV from TESTO group overcome the control value, while the VP did not reach the control value. This difference between two glands was also observed in the proliferation index (PI) obtained by the immunoreaction for PCNA. The epithelial cells from involuted SV presented a PI value about 3 times higher than that from VP. In despite castration promote an increase in the stromal area, our results from stromal absolute volume showed a reduction in the estromal compartiment, with a probably degradation of extracellular matrix. Moreover, the condensed colagen, reticular and elastic fibers have been distended and dispersed during testosterone replacement. In fact occured a progressive increase in the stromal absolute volume, suggesting synthesis of this components. These results confnm the ultrastructural observations of fibroblasts and smooth musc1e cell with enlarged rough endoplamatic reticulum cistems and Golgi complex evident. In the degradation of extracellular matrix components from stroma during castration, certainly the participation of MMPs is present. MMP-2 and -9 exhibited increased gelatinolytic activity of latent and mainly of active forms. The MMP-9 presented higher activity during the late phase of glandular involution, while the MMP-2 presented increased activity in both castration and testosterone replacement processes. These results shown that androgen modulate the prostate physiology and influence the composition and organization of stromal extracellular matrix through smooth muscle cells and mainly fibroblasts / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T19:46:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vilamaior_PatriciaSimoneLeite_M.pdf: 6633365 bytes, checksum: ebacaef83c22bcea00b2580b04e24c8e (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A próstata é a glândula de maior volume e expressividade funcional anexa ao aparelho reprodutor masculino de mamíferos. Histologicamente é constituída de porções glandulares túbulo-alveolares. Em roedores, a glândula prostática está representada por pares de lobos ventrais, dorsais e laterais. O desenvolvimento embrionário e pós-natal, bem como a manutenção da estrutura e do funcionamento da próstata, são eventos dependentes de níveis constantes de andrógenos circulantes. A remoção destes andrógenos em animais adultos leva a próstata a um processo de involução que inclui uma redução de tamanho e diminuição ou perda da função secretora. O fato de a próstata humana ser o sítio de um grande número de doenças, nas quais os hormônios exercem um papel importante na etiologia, levou à necessidade de se conhecer as respostas deste órgão frente à ação hormonal em diferentes condições fisio-patológicas. O presente estudo teve como objetivo estudar os efeitos da remoção de andrógenos, por orquiectomia, sobre alguns componentes do estroma da próstata ventral de ratos adultos (Rattus rattus norvegicus), uma vez que as alterações decorrentes da castração no compartimento epitelial já são bem conhecidas e ainda pouco se sabe sobre as modificações no compartimento estromal. A identificação de alguns dos componentes da matriz extracelular foi efetuada utilizando-se métodos de rotina: hematoxilina-eosina e azul de toluidina, métodos histoquímicos, resorcina-fucsina de Weigert, para o sistema elástico; tricrômico de Masson e picrossíriushematoxilina, para fibras colágenas; impregnação pela prata para fibras reticulares; métodos imuno-histoquímicos, para detecção de glicosaminoglicanos(queratam sulfato e condroitim sulfato), e métodos ultra-estruturais. A análise dos efeitos da castração sobre o estroma foi efetuada em próstatas removidas aos 7, 14 e 21 dias após a castração. Os resultados demonstraram que após a castração ocorrem modificações no compartimento estromal, como o aumento da densidade dos componentes celulares e fibrilares tais como células musculares lisas e fibras do sistema elástico e colágenas, respectivamente. Observaram-se ainda um aumento da imunorreatividade do queratam sulfato e perda da imunorreatividade do condroitim sulfato na membrana apical das células epiteliais. Da análise dos componentes fibrilares foi possível observar um aumento na quantidade e espessura das fibras do sistema elástico e um aumento e uma maior agregação das fibras colágenas após a castração. Além da hiperplasia, observou-se que as células musculares lisas apresentaram fenótipos diferenciados, assumindo características ultra-estruturais de células sinteticamente ativas, nas condições de privação hormonal. Este fato indica que este tipo celular pode estar diretamente envolvido na síntese de alguns componentes macromoleculares do estroma prostático. As interações entre mesênquima e epitélio que ocorrem durante a morfogênese têm sua importância reconhecida, entretanto não se pode negligenciar a importância destas i nterações nos processos de manutenção e remodelação do estroma no órgão maduro. Neste sentido, o aprofundamento do conhecimento sobre a matriz extracelular, com base nos resultados obtidos neste trabalho, parece ser de grande importância / Abstract: The prostate is an acessory gland of the mammalían reproductive system with great volume and high functional importance. Histologically, it is a tubuloalveolar gland. In rodents, the prostatic gland is composed of paired ventral, dorsal and lateral lobes. The embryonic and post.natal development, and the maintenance of the prostatic structure and phísiology are dependent on stable levels of circulanting androgens. The remova I of these androgens in adult animais leads to an involution process, characterized bya reduction in size and a decrease or loss of the secretory function. The fact that the human prostate is the site of a number of díseases, which are in many cases also dependent of hormonal regulation, stimulates the investigation on the response of this organ to different hormonal therapies. This study was developed to verify the effects of androgen withdrawal, by orchiectomy, on some components of the rat ventral prostate. The identification of some extracellular matrix components was performed using routine procedures such as haematoxylin_eosin and toluídine blue staining; hístochemical methods as Weigert's resorcin.fuchsin for elastic system fibers; Masson's trichrome and picrosirius.haematoxylin, for collagen fibers; silver impregnation for reticular fibers; immunohistochemical methods for keratan sulfate and chondroitin sulfate detection and ultrastructural methods. The castration effects on some of the stromal components were examined on prostates removed at the 7, 14 and 21 days after castration. The results showed that castration promotes modifications in the stromal compartment, such as an increased density of cellular (smoth muscle cells) and fibrilar (collagen and elastin) components. It was possible to identify an increase in the amount and thickness of elastic system fibers and an increase in the number and compactness of collagen fiber. The smooth muscle cells presented differentiated phenotypes, attaining ultrastructural features of synthetically active cells. This fact indicates that these cells may be directly involved in the synthesis of some macromolecular components of the prostatic stroma. There is also an increase in keratan sulfate immunoreactivity and loss of reactivity for chondroitin sulfate at the apical membrane of epithelial cells. The mesenchymal.epithelial interactions are important during morphogenesis and they cannot be neglected in the maintenance and remodelling processes of the adult organ. Thus, continuing studies on the extracellular matrix, based on our studies, seems to be of great importance / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas