Made available in DSpace on 2018-08-01T21:34:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10064_Dissertação_Flávia Medina da Silva.pdf: 788299 bytes, checksum: 07d6e8dd8df2ccf77b7aa3426d87206a (MD5) Previous issue date: 2016-05-12 / A doença cardíaca é considerada maior causa de morte no mundo e muitos pacientes tem como única forma de tratamento o transplantes do órgão. A bioengenharia tecidual veio como forma de auxiliar no problema de escassez de órgãos para doação, utilizando de técnicas que consistem em retirar as células do órgão mantendo os componentes da Matriz Extracelular (MEC) e recelularizar com células do próprio paciente, portanto reduzindo a concentração de moléculas imunologicamente ativas. Todos os agentes usados em descelularização alteram a composição e causam algum dano a ultraestrutura. O objetivo deste trabalho é o desenvolvimento de arcabouço cardíaco derivado de matriz extracelular (MEC) descelularizada com uso de dois agentes e com tempo de exposição reduzidos. Como modelo experimental foram utilizados 14 ratos Wistar, machos, com idade de dois meses pesando em média 330g. Após anestesia (Ketamina/Xilazina 90mg/Kg/10 mg/Kg), os animais tiverem seu tórax aberto e retirado o coração. O órgão foi canulado e perfundido através da aorta ascendente inicialmente com PBS, seguidos por perfusão com detergentes SDS 1% e Triton X-100 1%. Foram utilizadas técnicas de microscopia óptica onde as mostras após processadas foram coradas com hematoxilina e eosina (H&E), Picrosírius e marcadas com anticorpos para laminina e fibronectina. Para microscopia eletrônica de transmissão e microscopia eletrônica de varredura as amostras após processadas foram obtidas imagens em seus respectivos microscópios. A quantificação de DNA foi feita através de kit DNeasy e as amostras entre os grupos foram consideradas significativas quando p<0,05, utilizando teste t de Student. Foi encontrada ausência de células nos arcabouços descelularizados, observada por microscopia óptica e a manutenção da estrutura do arcabouço da MEC foi visualizada macroscopicamente e microscopicamente onde foi revelada alteração na microestrutura. Os principais componentes da MEC se mantiveram no arcabouço descelularizado e a concentração de DNA teve uma redução de 87,04% comparando os grupos controle e descelularizado. Com uso de apenas dois agentes e a redução do tempo de exposição o processo se manteve eficaz na retirada de células, melhor preservação dos componentes da MEC, podendo utilizar os arcabouços para recelularização.

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T04:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Felisbino_SergioLuis_M.pdf: 16539510 bytes, checksum: 4752f432df02f2aa0188c991542a16cc (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A cartilagem pode ser descrita como um tecido avascular contendo células arredondadas separadas por uma matriz predominantemente basófila. As células da cartilagem, os condrócitos, produzem uma matriz extracelular constituída principalmente de fibrilas de colágeno tipo II e de grandes proteoglicanos agregantes. Em menores quantidades são encontrados outros tipos de colágeno e proteínas não colagênicas. Existem difererltes tipos de cartilagens distintas principalmente, na composição e organização dos componentes da sua matriz extracelular. Durante o desenvolvimento, os ossos longos são precedidos por um modelo cartilaginoso. Deste modelo cartilaginoso inicial, persiste nas extremidades dos ossos um tipo de cartilagem hialina denominada de cartilagem epifisária, que compreende a cartilagem articular e a cartilagem de crescimento. Dos diferentes tipos de cartilagens, a cartilagem de crescimento é talvez a mais dinâmica. Nesta cartilagem ocorrem processos de proliferação, maturação e hipertrofia celular. Estes processos são essenciais para o crescimento longitudinal do osso e formação de osso endocondral. Estas descrições são baseadas principalmente nos aspectos encontrados em aves e mamíferos, que já foram exaustivamente estudados. Pouco se sabe destes processos em anfíbios anuros, sendo que os trabalhos anteriores muitas vezes mostram-se contraditórios no que diz respeito à ossificação endocondral e à calcificação da cartilagem epifisária. Este trabalho teve por objetivos acompanhar o desenvolvimento e o envelhecimento da cartilagem epifisária de Rana catesbeiana, descrevendo os aspectos celulares e da matriz extracelular, com especial referência ao crescimento ósseo e a calcificação da cartilagem. Cartilagens epifisárias da epífise distal do fêmur e proximal da tíbio-fíbula de animais em diferentes fases de desenvolvimento e envelhecimento foram utilizadas e submetidas a testes histoquímicos, citoquímica enzimática e análises ultraestruturais. Os resultados demonstram que o fêmur e a tíbio-fíbula são formados por ossificacão periosteal de um modelo cartilaginoso. Este osso periosteal forma uma estrutura tubular cujas extremidades se encaixam na cartilagem epifisária. Esta cartilagem epifisária possui uma cartilagem articular bem desenvolvida e apresenta projeções laterais que recobrem a face externa do osso periosteal. Entre a cartilagem lateral e o osso periosteal encontra-se o ligamento osteo-condral. Este ligamento osteo-condral contem muita fibras de colágeno do tipo I e é muito vascularizado. Internamente à extremidade do osso periosteal encontra-se a cartilagem de crescimento com as zonas de reserva, proliferação, maturação e hipertrófica. As células da zona de proliferação são achatadas e separam-se no sentido perpendicular ao longo eixo do osso, ao contrário do que acontece nos mamíferos. Os condrócitos hipertróficos mais distais apresentam aspectos de degeneração. Existem trêm sítios distintos de calcificação da cartilagem epifisária. A calcificacão da cartilagem lateral é a mais freqüente e aumenta com o envelhecimento, os outros dois sítios são encontrados na cartilagem de crescimento. Os testes de atividade de fostatase alcalina revelaram intensa atividade desta enzima nos condrócitos próximos às áreas de calcificação e nos osteoblastos dos periósteo. Ossificação endocondral só é encontrada na epífise distal do fêmur de animais velhos, sendo muito reduzida e, aparentemente, associada à presença de canais da cartilagem. É nos animais velhos que aparece também a ossificação endosteal, com a formação de canais de Havers. Células mononucleadas são aparentemente responsáveis pela erosão da matriz da cartilagem hipertrófica não mineralizada e células semelhantes a osteoclastos ou condroclastos erodem a matriz calcificada. Em conjunto, os resultados revelam um tipo especializado de cartilagem epifisária capaz de permitir um crescimento ósseo rápido e de resistir aos impactos impostos às articulações durante os saltos / Abstract: Cartilage is described as an avascular tissue with round cells embedded in a rather basophilic matrix. Cartilage cells, the chondrocytes, produce an extracellular matrix containing mainly type II collagen fibrils and proteoglycans. Minor collagens and noncollagens proteins are also present in the cartilage matrix. There are different types of cartilage, differing by the composition and organization of the matrix components. Developmentally, long bones are precceded by a cartilaginous scaffold. Cartilage tissue remains at the bone extremities where it is called epiphyseal cartilage. This cartilage can be divided in articular cartilage and in growth cartilage. Growth cartilage is probably the most dynamic cartilage because it bears processes such as cell proliferation, maturation and hypertrophy. These processes are essential for the growth of long bones and f9r endochondral bone formation. These processes are described following studies developed with birds and mammals, that were already exhaustivelly studied. Little knowledge exists on the growth of long bone in amphibians and previous publications are contradictory with regard to the endochondral ossification and the calcification of the epiphyseal cartilage. The objective of this work was to study the development and aging of the epiphyseal cartilage of Rana catesbeiana, describing the cells and extracellular matrix, with especial attention to their role in bone growth and cartilage calcification. Epiphyseal cartilage from the distal femoral epiphysis and from the proximal tibio-fibula epiphysis of animaIs with different ages were used and subjected to histochemistry, enzyme cytochemistry and ultrastructural analyses. The results showed that the femur and tibio-fibula are constructed by periosteal ossification of a cartilaginous scaffold. This periosteal bone beco me a tubular structure which inserts into the epiphyseal cartilage. Epiphyseal cartilage contains a well developed articular cartilage and presents lateral projections that cover the external face of the periosteal bone. In between the lateral cartilage and the periosteal bone there is a osteochondral ligament. This ligament contains many collagen fibers and blood vessels. The growth cartilage is found within the periosteal bone with its reserve, proliferation, maturation and hypertrophic zones. Cells of the proliferation zone are flat and divide in the longitudinal direction with to respect to the length of the bone, as opposed to what happens in mammals. Hypertrophic chondrocytes present degeneration aspects. There are three distinct calcification sites in the epiphyseal cartilage. Lateral cartilage calcification is more frequent and increase with age, while the other sites are found in the growth cartilage. Alkaline phosphatase activity was found in chondrocytes close to the calcification sites and also in the osteoblasts of the periosteum. Endochondral ossification is only found in the distal femoral epiphysis of old animaIs. However, it was very reduced and apparently associated with cartilage canaIs. Old animaIs also has endosteal bone containing haversian systems. Mononucleated cells are responsible for the erosion of the uncalcified cartilage matrix and osteoclast-like or chondroclast-like cells erode the calcified matrix. Together, the results show that the bullfrog epiphyseal cartilage is very especialized tissue able of allow a fast bone growth and to support impacts on the joint during jumps / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Maria Luiza Silveira Mello, Benedicto de Campos Vidal / Tese(doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T22:01:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taboga_SebastiaoRoberto_D.pdf: 10018541 bytes, checksum: 9e8e4476731b4e33b98f8dcc0534ee08 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Uma expressiva fração da população masculina brasileira tem sido diagnosticada com lesões na próstata ou com sintomas de prostatismo. O presente trabalho teve como objetivo a caracterização dos núcleos e da matriz extracelular, com enforque à morfologia, citoquímica, cariometria e imunocitoquímica de lesões prostáticas humanas. Foram examinadas biópsias de ressecções trans-uretrais e punção por agulha fina de um total de 26 pacientes com hiperplasia nodular prostática (HNP) e 25 pacientes com adenocarcinomas (AC) de pacientes da Região Norte do Estado de São Paulo. Dos casos acima estudados, 12 pacientes com regiões livres de comprometimento histopatológico foram considerados controles ou regiões normais (NOR). Cortes histológicos de 6-8flm de espessura foram submetidos às colorações pela hematoxilina-eosina para as análises da distribuição da cromatina e cariometria (área e perímetro nucleares e fator forma de 200 núcleos para cada paciente estudado); azul de toluidina pH 4,0 e suas variantes para estudos citoquímicos de ácidos nucléicos; Reação de Feulgen para estudo do DNA; Reação imunocitoquímica para detecção de Apoptose - Apoptag e Impregnação argêntica de Gõmõri para o estudo da matriz estracelular. Da análise das lâminas e das medidas nucleares pôde-se concluir que existem diferenças visuais, principalmente nos adenocarcinomas, onde predomina um acentuado pleiomorfismo nuclear. As diferenças cariométricas observadas, foram significativas para os valores de área e perímetro nucleares e não significativas para o fator forma, entre as três classes, utilizando-se o teste estatístico não-paramétrico de Kruskal-Wallis. Para a comparação das populações amostrais utilizou-se as medianas dos valores obtidos na cariometria, como mostra a tabela abaixo. Classes Área nuclear (m2) Perímetro nuclear (m) Fator Forma NOR 44,30 24,80 0,94 HNP 37,14 22,52 0,92 AC 60,86 29,70 0,93 valor p p=0,0001 p=0,0001 p=0,0513(ns) (ns)não significativo Entretanto, nas categorias internas da classificação dos adenocarcinomas, segundo a graduação clássica proposta por Gleason, na versão combinada e considerando apenas o primeiro dígito da graduação, não se detectaram diferenças significativas (p=O,838 para área; p=O,6076 para perímetro e p=O,9202 para fator forma). Nestas categorias vale ressaltar a grande heterogeneidade do universo amostral Assim conclui-se que os dados de morfometria não podem ser utilizados como parâmetros discriminatórios isoladamente, sem levar em. conta a histoaquitetura do tumor. Da análise dos cortes corados pelo azul de toluidina na sua variante para detecção de apoptose e da imunocitoquímica para detecção de apoptose, pôde-se concluir não serem detectadas células apoptóticas nas regiões normais e nos adenocarcinomas, mas serem detectados corpos apoptóticos nas hiperplasias, principalmente em áreas onde estaria ocorrendo a regressão do ácino hiperplástico. Isto pode sugerir que o fenômeno apoptótico seja um modulador da recuperação localizada da hiperplasia, podendo ser inclusive um parâmetro auxiliar para o acompanhamento diagnóstico durante o tratamento. Da análise dos cortes submetidos à impregnação argêntica, pôde-se concluir que as fibras colágenas na matriz extracelular do estroma prostático, em sua dinâmica supra-molecular, respondem a estímulos externos ao estroma, modificando a disposição e o grau de compactação fibrilar. Na hiperplasia nodular prostática parece não haver modificações na integridade molecular do colágeno, pois a sua afinidade pela prata e birrefringência não são alteradas. Nos adenocarcinomas com alto grau de indiferenciação, fibras colágenas finas, ramificadas e fortemente argirófilas e birrefringentes são detectadas nas regiões de proliferação tumora!. E no estroma adjacente, hospedeiro do tumor, placas hialinas de matriz extracelular sugerem degradação ou remodelação dos componentes da matriz / Abstract: An expresive fraction of the Brasilian male population has been diagnosed with prostatic lesions or presents prostatism symptons. The present work aimed at characterizing the nuclei and the extracellular matrix, emphazing the morphology, cytochemistry, kariometrics and immunocitochemistry in some human prostatic lesions. Transurethral resections and fine needle aspiration of patients presenting prostatic nodular hyperplasia (PNH - 26 cases) or adenocarcinoma (AC - 25 cases), from the north region of the São Paulo State were examined. Twelve of these cases presented regions with no histopathological alterations which were considered normal and employed as control (Ct). Six to eigth micrometers thick histological sections were stained by hematoxylin and eosin for the analysis of chromatin distribution and kariometry (nuclear area and perimeter and form factor - 200 measurements for each patient); toluidine blue at pH 4.0 and its modifications for the cytochemical study of nucleic acids; Feulgen reaction for DNA; immunocytochemistry for detection of apoptosis (Apoptag kit) and Gõmõri' s silver impregnation for study of fibrilar collagens. The analysis showed the existence of visual differences in the nuclear phenotype among the studied cases, in special in AC, which showed a amked nuclear pleomorphism. Karyometry showed significative differences in area and perimeter values but form factor, amongst the three classes, by the use of the Kruskal-Wallis non-parametric statistical testo The median values employed for comparision between the samples are shown in the table below. Classes Nuclear area (m2) Nuclear perimeter (m) F orm factor Ct 44.30 24.80 0.94 PHN 37.14 22.52 0.92 AC 60.86 29.70 0.93 P value p=0.0001 p=O.OOOl p=0.0513(ns) (ns)non-significant The different classifications of the adenocarcinomas, according to the GIeason grading, in the combined version and considering only the first grading, showed no significative differences (p=O.838 for the area, p=O.6076 for perimeter and p=O.9202 for the form factor). It is worth to refer to the Iarge heterogeneity of the nuclear popuIation. It is concluded that morphometrics cannot be used isoIatedly to discriminate prostatic Iesions, without considerations of the tumor histoarchitecture. The use of toIuidine bIue staining modification for detection ofapoptosis and the Apoptag test demonstrated the absence of apoptotic cells and in adenocarcinomas but in hyperpIasia, especially in areas of regressing hyperpIastic acina. This is suggestive that apoptosis may represent a factor invoIved in Iocalized recover of hyperpIasia and its detection is IikeIy to represent an additionaI parameter for the follow up after treatment. The anaIysis of silver impregnated tissue sections allowed for the conclusion that collagen fibers of the prostatic stroma, in their supramoIecuIar dynamics, respond to externaI stimuli, modifying their disposition and fibrillar compactation. In PNH, there is no modifications in collagen moIecuIar integrity, since the silver affinity and birefringence are similar to controIs. In AC with high degree of non-differentiation, thin and branched collagen fibers, strongIy argyrophilic and birefrlngent are detectedin regions of cell proliferation. In the adjacent stroma, host of the tumor, hya1ine pIaques are probabIe signs of matrix degradation or remodellation / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Ciências

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T11:00:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_JoaoBatistaGifoni_M.pdf: 3162759 bytes, checksum: 46d80701210065c63dcf033bd929c9df (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A matriz extracelular de cartilagem é constituída por moléculas de colágeno, proteoglicanos e proteínas não colagênicas. Estes componentes normalmente interagem fortemente entre si sendo dessa forma só extraídos em presença de agentes caotrópicos como o c1oreto de guanidina 4M. A extração utilizando estes agentes geralmente é precedida de homogeneização em solução de PBS (NaCl 0,15M, 5mM de tampão fosfato de sódio pH 7,4), seguida de uma centrifugação onde o sobrenadante é descartado, e a extração é continuada com o precipitado. Neste trabalho foram analisados os componentes presentes no extrato em PBS da cartilagem xifóide de frango, e comparado com o extrato obtido com c1oreto de guanidina. Também foram avaliadas a estabilidade dos componentes da matriz diante da presença de PBS e c1oreto de guanidina. Foram identificadas as proteínas com Mr de 30,40,52,58 e 110 kDa no extrato em PBS. Pequenos proteoglicanos foram detectados nos extratos obtidos a partir do tratamento em guanidina mas não em PBS, o que sugere a existência de interações que não foram rompidas com soluções de baixa força iônica. Análise dos efeitos de PBS e guanidina em cortes de cartilagem posteriormente corados com azul de toluidina e ponceau S, mostraram que embora o PBS extraia alguns componentes da matriz, não tem efeito sobre a organização do tecido, como ocorre quando o tratamento é feito com cloreto de guanidina. Os resultados encontrados sugerem que parte das proteínas não colagênicas da matriz não estão envolvidas em processos interativos / Abstract: The extracelular matrix of cartilages is composed of colagen, proteoglycans and non colagenous proteins. These components may interact strongly amongst themself, so they only can be extracted using chaotropic agents as guanidinium chloride 4M. Normally the extraction in this treatment is preceded by a homogeneization in PBS solution (0.15M NaCl, 5mM phosphate buffer pH 7.4), followed by a centrifugation to obtain a preciptate which is used for extraction in guanidinium.chloride. In this work the components of the chicken xyphoide cartilage present in the PBS extract were analyzed and compared with the extract obtained with guanidinium chloride. The stability of matrix components was also analyzed. In the PBS extract were identified the proteins with 30, 40, 52, 58 and 110 kDa. Small proteoglycans were detected in the guanidinium but not in PBS extracts, sugesting that they are strongly bound to other components of the matrix. The analysis of the effects of PBS and guanidinium in cartilage sections afterward stained with toluidine blue and ponceau S, showed that a1though PBS doesnot remove substantial amount of glycosaminoglycans, it causes structural changes in the organization of the extracelular matrix. However the effect is much smaller than the guanidinium. Our results indicate that part of the non collagenous protein are not entangled in interactive processes / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Antonio Fernando Martorelli de Lima / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-28T04:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Palioto_DanielaBazan_D.pdf: 2504166 bytes, checksum: 52e0762b51537a46a411499bc0275b40 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O conhecimento das diferenças morfológicas e proliferativas de fibroblastos do ligamento periodontal (FLP) e fibroblastos gengivais (FG) são fundamentais para o melhor entendimento do papel destas células nos eventos de homeostasia, doença e regeneração periodontal. O primeiro objetivo desse estudo foi comparar as características morfológicas, o potencial proliferativo e a síntese protéica de FLP e de FG. Os fibroblastos foram cultivados pela técnica do explante a partir de fragmentos gengival e do ligamento periodontal de um mesmo paciente. As células foram isoladas e plaqueadas para análise em microscopia de contraste de fase e microscopia óptica. O índice de proliferação celular foi determinado por contagem automática de células nos dias 1, 4, 7, 15 e 21 e pelo ensaio de incorporação de bromodioxiuridina (BrdU). A síntese de proteína total foi verificada por eletroforese em gel de poliacrilamida e zimografia. Os resultados mostraram que FLP são maiores e mais alongados que os FG em condições de subconfluência e confluência celular. Os FLP proliferam mais rapidamente que os FG nos períodos de 1, 4 e 7 dias (P<0,05). Nos períodos subsequentes de 15 e 21 dias, não houve diferença estatística significativa entre o número de células do dois tipos celulares. O índice de incorporação de BrdU demonstrou potencial proliferativo de 65,1 .:t 11,0 % para FLP e 41,2.:t 17,1% para FG (P<0,05). A síntese de proteína total verificada em nosso experimento no período de 24 horas mostrou resultados similares para FLP e FG. Nossos resultados demonstraram que FLP e FG são diferentes na morfologia e na capacidade proliferativa, porém são semelhantes na síntese protéica. O segundo objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da matriz protéica do esmalte (EMD), do fator de crescimento insulina-símile (IGF-I) e da associação dos dois fatores sobre o potencial proliferativo e a capacidade de adesão e migração celular de fibroblastos do ligamento periodontal humano. Esse estudo foi conduzido utilizando a análise de proliferação por contagem automática de células (Coulter Counter_ / Abstract: The knowledge of morphological and proliferative differences between Gingival Fibroblasts (GF) and Periodontal Ligament Fibroblast (PDL) is essential to understand the role of each cell on the homeostasis, disease process and regeneration Df the periodontium. The first objective of this study was to compare the PDL and GF morphology, proliferation rate and protein synthesis. PDL and GF were explanted from tissues Df the same patients. To characterize and compare the cells morphology, PDL and GF were plated for optical and phase contrast microscopy. The proliferation rates were determined by automated count at days 1, 4, 7, 15 and 21, and by Bromodeoxyuridine Labelling Index (BrdU). The total protein content was analyzed by means of electrophoresis in 10% polyacrylamide gel and zimography containing gelatin as substrate. PDL were greater and more elongatOO than GF in subconfluence and confluence conditions. The proliferative rate Df PDL was higher than GF at 1, 4, and 7 days (P < 0.05). At 15 and 21 days there was no statistically significant difference between cells number. The BrdU Index demonstrated a proliferative potential Df 65.1 ! 11.0 % for PDL and 41.2 :t 17.1 % for GF (P < 0.05).The synthesis of protein in a period of 24 hours was similar for both PDL and GF. Our results demonstrated that PDL and GF are different in morphology and in proliferative capacity, however, they do not differ in protein synthesis. The second objective of the present study was to evaluate the effects of the enamel matrix protein (EMD) the effects of Insulin growth factor-I (IGF-I) and the association of the these two factors on periodontal ligament fibroblasts. The study was based on the proliferation rate, and cellular attachment and migration. The proliferation rate was determined by counting the cells afier 1, 3, 7 and 10 days with the help of a automated counter (Coulter Counter). The cellular attachment was analyzed by means of colorimetric assays. Migration assays was performed in Boyden chambers for a period of 4h and analyzed by means of colorimetric assays. EMD has significantly raised the proliferation rate from a minimum concentration of 50 uglml up to maximum concentration of 200 uglml in a 24h period. The proliferation rate continuing to be raised in a period of 3,7 and 10 days (P < 0.05). IGF-I has not altered the proliferation rate at any concentration. The association of EMD + IGF-I raised the proliferation rate independently of the concentration. However, the association has not resulted on further significant effect when compared to the use of EMD alone. The cellular attachment and migration was not altered by EMD, IGF-I or EMD + IGF-I. Our results showed that EMD increased the proliferation rate of PDL but did not improve cellular attachment and migration. IGF-I did not raise neither the proliferation rate no r the cellular attachment and migration and did not have any additional effect on the EMD alone / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Laurecir Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T14:02:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MessiasJunior_NazariodeSouza_D.pdf: 3988734 bytes, checksum: 964710420a6406a33699732b0d263199 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Este trabalho teve por objetivo caracterizar alguns aspectos dos componentes da matriz extracelular de duas cartilagens do nariz suíno, as alares e a septal, além disso caracterizar a organização histológica e alguns aspectos histoquímicos. Para extração de componentes da matriz foi utilizado o agente caotrópico Gu-HCl. O glicosaminoglicano predominante para as duas cartilagens é o condroitim sulfato. Após ultracentrifugação dos extratos a tração D4 das duas cartilagens foi tracionada em DEAE-Sephacel usando gradiente de NaCl. A análise em SDS-P AGE, para as duas cartilagens mostrou semelhanças com a presença de fibromodulim, decorim e proteínas de ligação. Somente a cartilagem septal apresentou o componente de 115 kDa que possivelmente aparece como subunidades de 30 kDa após a ação de agente redutor. Para a determinação das populações de glicosaminoglicanos foi utilizado tracionamento com Sephadex G-75, seguida de análise em P AGE-Barbital. As duas cartilagens apresentaram uma população fortemente polidispersa. As populações de proteoglicanos foram analisadas após tracionamento em Sepharose CL-6B seguida de análise das amostras em gel agarose­poliacrilamida. As duas cartilagens apresentam uma população fortemente polidispersa, sendo que a septal é menos uniformemente poli dispersa que a alar. O tracionamento de AD2 em DEAE-Sephacel, e a análise em SDS-P AGE e agarose-poliacrilamida, mostraram a presença dos pequenos proteoglicanos biglicam e decorim provavelmente associados aos grandes proteoglicanos. A cartilagem septal apresenta os condrócitos grosseiramente entileirados acompanhando o eixo maior da cartilagem, enquanto em alar os condrocitos estão dispostos caracteristicamente em grupos isógenos. Para a histoquímica utilizou-se Xylidine Ponceau para proteínas totais, Picrosirius-Hematoxilina para colágeno, Azul de Toluidina para glicosaminoglicanos totais e Azul de Alcian em pH 2,5 e 1,0 para glicosaminoglicanos sulfatados e carboxilados. Os glicosaminoglicanos totais estão mais evidenciados na matriz territorial ao passo que as proteínas totais são mais evidenciadas na matriz interterritorial. O colágeno em cartilagem septal está grosseiramente organizado acompanhando o eixo longitudinal da peça entre as fileiras de condrócitos / Abstract: The objective of the present study was to characterize some aspects of the extracellular matrix components of the alar and septal cartilage of the nose of swine and to examine the histological and histochemical aspects of the two types of cartilage. The kaotropic agent Ou-HCI was used to extract the matrix components. The predominant glycosaminoglycan in the two cartilages was chondroitin sulfate. After ultracentrifugation, the D4 iTaction of the septal and alar cartilages was iTactioned on DEAE-Sephacel using na NaCI gradient. SDS-P AGE analysiys showed similarities between the two cartilages, with the presence of fibromodulin, decorin and binding proteins. Only the septal cartilage presented the 115 kDa component, which possibly appears as 30 kDa subunits after the action of the reducing agent. The glycosaminoglycan populations were determined by iTactionation on Sepharose CL-6B followed by analysis of the samples on the agarose­polyacrilamide gel. The two cartilages presented a strongly polydispersed population, which was less uniformly polydispersed in the septal than in the alar cartilage. AD2 iTactionation on DEAE-Sephacel and sample analysis by SDS-P AGE and agarose­polyacrylamide electrophoresis showed the presence of the small proteog1ycans biglycan and decorin, possible associated with the large proteoglycans. The septal cartilage presents chondrocytes rough1y arranged in rows accompanyng the widest axis of the cartilage, whereas the alar cartilage presents chondrocytes characteristically arranged in isogenic groups. Histhochemistry was performed usisng Xylidine Ponceau for total proteins, Picrosirius-Hematoxylin for collagen, Toluidine Blue for total glycosaminoglycans. And alcian blues, pH 2.5 and pH 1.0, for sulfated and carboxylated glycosaminoglycans. Total glycosaminoglycans are more c1eary visible in the territorial matrix, whereas total proteins are more cleary visible in the interterritorial matrix. The collagen of the septal cartilage is rough1y organized along the longitudinal axis of the specimens between the chondrocytes rows / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Ciências

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:25:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vilamaior_PatriciaSimoneLeite_D.pdf: 4838973 bytes, checksum: 3b9fa7ca6417df27631c8aa6cd14dc4f (MD5) Previous issue date: 2003 / Doutorado

Orientadores: Maria Luiza Silveira Mello, Benedicto de Campos Vidal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:44:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moraes_AlbertodaSilva_M.pdf: 627420 bytes, checksum: c7ae5072d55029daa401be8461a2a684 (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Orientador: Elza Cotrim Soares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T15:25:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wyszomirska_RozangelaMariadeAlmeidaFernandes_M.pdf: 9740608 bytes, checksum: c7d63b37dc6179ec869f7b0fcc536dc1 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Com o objetivo de avaliar a fibrose hepática na esquistossomose mansoni foram medidos os níveis séricos de colágeno tipo IV e de laminina, principais componentes da membrana basal. Foram estudados 82 indivíduos, sendo 64 pacientes portadores de esquistossomose mansoni e 18 indivíduos normais, como controle. As diferentes formas clínicas de esquistossomose encontradas foram 18 pacientes com forma intestinal, 17 com forma hepatointestinal, 12 com forma hepatoesplênica compensada e 17 com forma hepatoesplênica descompensada. Em todos os pacientes foram realizados testes de função hepática, sorologia para vírus de hepatite B e C, endoscopia digestiva e ultra-sonografia de abdome, além de determinação sérica de colágeno tipo IV e laminina. A ultra-sonografia foi realizada segundo o protocolo da Organização Mundial de Saúde proposto para este fim. As determinações de colágeno tipo IV e de laminina foram realizadas através do método imunoenzimático (EIA), tipo sanduíche, usando dois anticorpos monoc1onais com os kits Panassay IV - C e hLM, respectivamente. Os valores médios de colágeno tipo IV na esquistossomose foram de 92,34 'mais OU menos' 54,37ng/ml, havendo um aumento do mesmo em todas as formas clínicas, sendo esta elevação significante nas formas hepatointestinal e hepatoesplênica descompensada em relação aos controles (p<0,05). O valor médio de laminina foi de 367,30 'mais OU menos' 112,64 ng/ml, havendo um aumento em todas as formas clínicas, sendo este aumento significante nas formas hepatointestinal, hepatoesplênica compensada e descompensada em relação aos controles (p<0,05). Comparando-se os valores obtidos nas diversas formas clínicas entre si, houve um aumento significante entre as formas hepatoesplênica descompensada e intestinal, tanto para a determinação de colágeno tipo IV, como para a laminina (p<0,05). Na forma hepatoesplênica descompensada não houve diferença significante quando comparados os níveis médios de colágeno tipo IV e laminina entre pacientes esplenectomizados e não esplenectomizados (p>0,05). Não foi encontrada correlação (p>0,05) entre os valores médios de colágeno tipo IV e laminina com o grau de espessamento periportal, detectado por ultra-sonografia. Os resultados mostram que existe um aumento de produção de colágeno tipo IV e laminina na esquistossomose, surgindo altos níveis desde as fases iniciais do envolvimento hepático da doença, sugerindo que a fibrose perissinusoidal e inclusive a capilarização de sinusóide podem ocorrer precocemente nesta doença. Os resultados também sugerem que os altos níveis de colágeno tipo IV e laminina encontrados estão relacionados a alterações do figado, sem que haja interferência do baço / Abstract: The aim of this study was to evaluate liver fibrosis in schistosomiasis mansoni, measunng serum levels of type IV collagen and laminin, components of the basal membrane. Eighty-two individuals were studied, 64 of them presenting schistosomiasis and 18 as normal controls. In schistosomiasis, 18 patients the presented intestinal form, 17 hepatointestinal, 12 compensated hepatosplenic and 17 uncompensated hepatosplenic form. All patients carried out liver function tests, hepatitis B and hepatitis C serum markers, endoscopy and ultrasonography. The ultrasonography method was performed according to the World Health Organization protocol. Type IV collagen and laminin serum concentrations were determined by a sandwich enzyme immunoassay, using panassay IV C and hLM kits respectively, with two monoclonal antibodies. The mean serum type IV collagen in schistosomiasis patients was 92.34+/-54.37ng/ml, being high in all clinical forms. There was a significant increase in hepatointestinal and uncompensated hepatosplenic forms, compared to controls (p<0.05). The mean serum laminin was 367.30+/-112.64ng/ml again being high in all clinical forms. A significant increase in hepatointestinal, compensated and uncompensated hepatosplenic forms compared to controls took place (p<0.05). A significant difference was obseryed in type IV collagen as well as in laminin values when intestinal and uncompensated hepatosplenic forms were compared (p<0.05). There was no difference in type IV collagen and laminin serum levels between splenectomized and non - splenectomized patients in uncompensated hepatosplenic form (p>0.05). No correlation was found between type IV collagen and laminin levels and the periportal thickness, assessed by ultrasonography (p>0.05). These results show that there is an increase in the production of type IV collagen and laminin in schistosomiasis, during the initial stages of this liver disease. These findings indicate that perisinusoidal fibrosis as well as sinusoidal capilarization may occur in early illness, and also suggest that the high levels of type IV collagen and laminin are related to liver alterations without any interference from the spleen / Mestrado / Medicina Interna / Mestre em Ciências Médicas

Orientador : Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T21:20:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daltro_DulceMaria_M.pdf: 16766186 bytes, checksum: 0cec58433347baf2ce2f5c5ebeffb473 (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: O objetivo do presente trabalho reside no estudo das respostas da matriz extracelular às injeções intradérmicas de colágeno heterologo e avaliação do efeito de pré-tratamentos físicos e químicos dispensados ao material injetável nessas respostas. Para tanto, injetou-se colágeno I bovino em forma de gel, gel formolizado e ainda solução de colágeno liofilizado em camundongos que foram sacrificados após decorridos diversos intervalos de tempo desde a aplicação das injeções, sendo os cortes histológicos submetidos a uma série de técnicas gerais e citoquímicas. A observação microscopica desses cortes permitiu observar que quaisquer que tenham sido os tratamentos prévios, as reações aos implantes se caracterizam inicialmente por invasão de neutrofilos, seguida por macrofagose fibroblastos, apos o que se inicia uma fase de síntese de gllcosaminoglicanas e colágeno, seguida por processos de vascularização dos implantes e remodelação tecidual. Não foram evidenciados quasquer sinais de toxicidade ou reação imunológlica aos implantes dérmicos de colágeno heterólogo. Verificou-se ainda que o colágeno sujeito à radiação e agitação mecânica vigorosa apresenta maior susceptibilidade à degradação, enquanto a ligação com formaldeído confere resistência ao ataque enzimático, embora cause perda de elasticidade do implante. Constatou-se ainda uma elevação do numero de mastócitos nas proximidades dos implantea por volta do 30. dia, sugerindo sua participação no processo de remodelação do tecido neo formado. A nível de organização molecular, foi constatado um aumento de birrefringência com o decorrer do tempo pos-implante, provavelmente devido ao realinhamento das fibras e conjugação de colágeno com glico- saminoglicanas no interior do material implantado / Abstract: In the present work the extracellular matrix responses to intradermic heterologous collagen injections and the evaluation of the effects of the injected material physically and chemically treated were studied. Mice were injected with type 1 bovine collagen (gel, gel formolized and lyophyllized collagen solutions) and sacrificed at different intervals of time thereafter. The histologic preparations were processed and a series of routine and citochemical techniques and microscope observations were performed. The tissue reaction to the implanted material in all treatment cases was outlined by neutrophil lnvasion, followed by the macrophage and fibroblasts, and afterwards by glycosamlnoglycans and collagen synthesis phase, wlth further vascularization process of the implant and tissue remodeling. No toxicity signs or immune reaction to the heterologous collagen dermic implants was verified. The radiation and the vigorous mechanical shaking treatments in the case of lyophyllized collagen resulted in a higher susceptibllity to degradation of collagen. The formaldehyde treatment resulted in enzimatic attack resistent collagen, although the implant elasticity was lost. The increase of mast cells number in the implant surroundings was detected by the 30th. day, suggesting their participation in the remodeling process of the neonate tissue. Regarding the molecular organization, the increase of the implant birefringence was noted, probably due to the fibers realignment and to the collagen glycosaminoglycans hinding in the interior of the implanted material / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas