Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:12:21Z : No. of bitstreams: 1 martins_a_me_botfm.pdf: 634920 bytes, checksum: 7df863ce968556a78e7af6c51b134a5e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A oxacilina é a principal droga de escolha no tratamento das infecções causadas por S. aureus. Contudo, a resistência a esta droga tem se tornado um grande problema nas últimas décadas. O objetivo deste estudo foi verificar as taxas de resistência à oxacilina em amostras de S. aureus provenientes do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP e a comparação de métodos fenotípicos com o método padrão ouro (detecção do gene mecA) na detecção de amostras MRSA. Um total de 102 amostras previamente isoladas no período de 2002 a 2006 e estocadas na Coleção de Culturas do Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, UNESP, foram analisadas quanto a resistência à oxacilina por meio da técnica de difusão da droga em ágar com disco de oxacilina e cefoxitina, teste de triagem em Ágar Mueller-Hinton com 6 μg/mL de oxacilina e 4% de NaCl, E-test e detecção do gene mecA. Das amostras estudadas, 46 (45,1%) foram positivas para o gene mecA. A sensibilidade obtida para o disco de oxacilina foi de 86,9%, com 91,1% de especificidade. O disco de cefoxitina apresentou sensibilidade de 91,3% e especificidade de 91,1%. O método de triagem apresentou os mesmos valores de sensibilidade (91,3%) e especificidade (91,1%) verificados no método do disco de cefoxitina. A fita de E-test mostrou melhor taxa de sensibilidade, com 97,8% e a mesma especificidade encontrada nos outros métodos (91,1%). Das amostras estudadas, 93% foram produtoras de - lactamase, sendo 05 destas negativas na detecção do gene mecA. Verificou-se um aumento gradativo no número de amostras resistentes à oxacilina no período de 2002 a 2004, entretanto, de 2004 a 2006 os resultados revelaram uma redução no número de amostras resistentes, de 55% de MRSA em 2004 para 45% em 2005 e 34,6% em 2006. Os dados revelaram que o E-test obteve melhores resultados, com alta sensibilidade comparada aos outros métodos. / Oxacillin is the main drug of choice for the treatment of S. aureus infections. However, S. aureus resistance to oxacillin has become a major problem in the past decades. To assess the rates of oxacillin resistance in S. aureus samples obtained at the Botucatu Medical School Hospital - Sao Paulo State University/UNESP, Brazil, and to compare phenotypic techniques for the detection of MRSA against the gold standard method (mecA gene detection) in these samples. A total of 102 samples, previously isolated between 2002 and 2006, and kept at the Culture Collection of the Department of Microbiology and Immunology, Botucatu Institute of Biosciences, São Paulo State University/UNESP, Brazil were included. Oxacillin resistance was assessed by oxacillin and cefoxitin disk diffusion and agar dilution tests, screening tests using Mueller-Hinton agar with 6 μg/mL of oxacillin and 4% of NaCl, E-test, and mecA gene detection. Of the samples analyzed, 46 (45.1%) were mecA-positive. Oxacillin disk sensitivity and specificity were 86.9% and 91.1%, respectively. Cefoxitin disk sensitivity and specificity were 91.3% and 91.1%, respectively. The screening test showed same level of sensitivity (91.3%) e specificity (91.1%) found with the cefoxitin disk. With E-test strips, sensitivity was higher (97.8%) and specificity was comparable to that found with the other methods (91.1%). Ninety-three percent of the samples produced - lactamase, and 05 of them were mecA-negative. There was a gradual increase in the number of oxacillin-resistant S. aureus samples between 2002 and 2004. However, from 2004 to 2006, the number of resistant samples dropped from 55% of MRSA in 2004, to 45% in 2005 and 34.6% in 2006. The data obtained reveal that, among phenotypic methods, E-test yielded the best results, with higher sensitivity levels when compared to the other methods.

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Augusto Cezar Montelli / Banca: Izabel Yoko Ito / Resumo: A oxacilina é a principal droga de escolha no tratamento das infecções causadas por S. aureus. Contudo, a resistência a esta droga tem se tornado um grande problema nas últimas décadas. O objetivo deste estudo foi verificar as taxas de resistência à oxacilina em amostras de S. aureus provenientes do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP e a comparação de métodos fenotípicos com o método padrão ouro (detecção do gene mecA) na detecção de amostras MRSA. Um total de 102 amostras previamente isoladas no período de 2002 a 2006 e estocadas na Coleção de Culturas do Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, UNESP, foram analisadas quanto a resistência à oxacilina por meio da técnica de difusão da droga em ágar com disco de oxacilina e cefoxitina, teste de triagem em Ágar Mueller-Hinton com 6 μg/mL de oxacilina e 4% de NaCl, E-test e detecção do gene mecA. Das amostras estudadas, 46 (45,1%) foram positivas para o gene mecA. A sensibilidade obtida para o disco de oxacilina foi de 86,9%, com 91,1% de especificidade. O disco de cefoxitina apresentou sensibilidade de 91,3% e especificidade de 91,1%. O método de triagem apresentou os mesmos valores de sensibilidade (91,3%) e especificidade (91,1%) verificados no método do disco de cefoxitina. A fita de E-test mostrou melhor taxa de sensibilidade, com 97,8% e a mesma especificidade encontrada nos outros métodos (91,1%). Das amostras estudadas, 93% foram produtoras de - lactamase, sendo 05 destas negativas na detecção do gene mecA. Verificou-se um aumento gradativo no número de amostras resistentes à oxacilina no período de 2002 a 2004, entretanto, de 2004 a 2006 os resultados revelaram uma redução no número de amostras resistentes, de 55% de MRSA em 2004 para 45% em 2005 e 34,6% em 2006. Os dados revelaram que o E-test obteve melhores resultados, com alta sensibilidade comparada aos outros métodos. / Abstract: Oxacillin is the main drug of choice for the treatment of S. aureus infections. However, S. aureus resistance to oxacillin has become a major problem in the past decades. To assess the rates of oxacillin resistance in S. aureus samples obtained at the Botucatu Medical School Hospital - Sao Paulo State University/UNESP, Brazil, and to compare phenotypic techniques for the detection of MRSA against the gold standard method (mecA gene detection) in these samples. A total of 102 samples, previously isolated between 2002 and 2006, and kept at the Culture Collection of the Department of Microbiology and Immunology, Botucatu Institute of Biosciences, São Paulo State University/UNESP, Brazil were included. Oxacillin resistance was assessed by oxacillin and cefoxitin disk diffusion and agar dilution tests, screening tests using Mueller-Hinton agar with 6 μg/mL of oxacillin and 4% of NaCl, E-test, and mecA gene detection. Of the samples analyzed, 46 (45.1%) were mecA-positive. Oxacillin disk sensitivity and specificity were 86.9% and 91.1%, respectively. Cefoxitin disk sensitivity and specificity were 91.3% and 91.1%, respectively. The screening test showed same level of sensitivity (91.3%) e specificity (91.1%) found with the cefoxitin disk. With E-test strips, sensitivity was higher (97.8%) and specificity was comparable to that found with the other methods (91.1%). Ninety-three percent of the samples produced - lactamase, and 05 of them were mecA-negative. There was a gradual increase in the number of oxacillin-resistant S. aureus samples between 2002 and 2004. However, from 2004 to 2006, the number of resistant samples dropped from 55% of MRSA in 2004, to 45% in 2005 and 34.6% in 2006. The data obtained reveal that, among phenotypic methods, E-test yielded the best results, with higher sensitivity levels when compared to the other methods. / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2009. / Submitted by Luanna Maia (luanna@bce.unb.br) on 2011-06-02T12:19:03Z No. of bitstreams: 1 2009_RobertoCarlosReyesLacca.pdf: 1629195 bytes, checksum: ba1cf4d6e690e9fe8e02f1df4df88cd4 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-06-02T12:20:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_RobertoCarlosReyesLacca.pdf: 1629195 bytes, checksum: ba1cf4d6e690e9fe8e02f1df4df88cd4 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-02T12:20:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_RobertoCarlosReyesLacca.pdf: 1629195 bytes, checksum: ba1cf4d6e690e9fe8e02f1df4df88cd4 (MD5) / Embora a infecção por P. falciparum associa-se à forma grave da doença, a infecção assintomática por esta espécie traz vital importância tanto no aspecto imunológico quanto no epidemiológico. No entanto, os critérios utilizados na definição de infecção plasmodial assintomática na literatura têm variado quanto à metodologia empregada, sintomas avaliados e exames diagnósticos utilizados, dificultando o seu entendimento. O objetivo desta pesquisa foi caracterizar a infecção subpatente assintomática por P. falciparum em residentes de área endêmica da Amazônia Brasileira, utilizando uma definição recentemente padronizada pela comunidade científica brasileira. A pesquisa foi realizada em 773 residentes de duas localidades agrícolas do Município do Careiro, Estado do Amazonas, durante época de alta transmissão de malária. Em primeiro lugar, foi realizado um corte transversal para detecção de plasmódio em 642 (83,1%) participantes; 47 (7,4%) tiveram exame de gota espessa (GE) positiva (40 P. vivax e 7 P. falciparum). O exame de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real detectou P. falciparum em 152 (28,5%) de 533 resultados disponíveis; 11 deles também tiveram a PCR positiva para P. vivax. Em segundo lugar, constituiu-se uma coorte de 141 pessoas com infecção subpatente (detectada somente pela PCR) e exclusiva por P. falciparum, sendo incluídas para o seguimento 92 que cumpriam os seguintes critérios: idade maior a 5 anos, assintomática, sem antecedentes de malária no último mês, sem febre nas últimas 48 horas e sem doença clinica ou gravidez concomitante. O seguimento consistiu em avaliações clínica e laboratorial (GE e PCR) a cada 15 dias. A identificação de parasitos na GE foi indicação de tratamento antimalárico e fim do seguimento. Quinze indivíduos não tiveram uma avaliação antes do dia 30 e foram excluídos da análise. Nos dias 30, 60 e 90 do seguimento, 28/77 (36,4%), 24/76 (31,6%) e 20/73 (27,4%) pessoas mantiveram-se assintomáticas. Até o dia 90, somente 2 pessoas assintomáticas tiveram nova PCR positiva para P. falciparum, sendo a GE sempre negativa para essa espécie. No grupo sintomático, 25 de 38 pessoas tiveram exames negativos no primeiro episódio sintomático até o dia 30. 7 Embora a acuidade na identificação de pessoas assintomáticas melhorasse com a ampliação do seguimento dos participantes com infecção subpatente por P. falciparum, a confirmação desta infecção, avaliada por meio da periodicidade de exames diagnósticos, foi rara. A ocorrência de infecção por P. vivax foi mais freqüente, independente do desenvolvimento de sintomatologia malárica. O desenvolvimento de sintomas não foi associado à presença do parasito. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Even if P. falciparum infection associates with severe clinical illness, asymptomatic infection by this specie has vital importance, both in immunologic and epidemiologic aspects. Moreover, criteria used regarding the definition of asymptomatic Plasmodium infection have varied in meaning of methodology, evaluated symptoms and diagnostic tests, making its comprehension difficult. The objective of this study was characterizing the sub-patent asymptomatic P. falciparum infection in inhabitants of an endemic area from Brazilian Amazon, using a definition recently standardized by the Brazilian scientific community. The study was made in 773 inhabitants from two agricultural settlements, not riversides, in the Municipality of Careiro of Amazonas State, during high malaria transmission season. Firstly, a cross-sectional investigation for Plasmodium detection was carried out in 642 (83,1%) participants; 47 (7,4%) had blood thick smear positive (40 P. vivax and 7 P. falciparum). The real-time polymerase chain reaction (PCR) detected P. falciparum in 152 (28,5%) of 533 available results; 11 of these were also PCR positive for P. vivax. Secondly, a cohort of 141 people with subpatent infection (detected only by PCR) and exclusive for P. falciparum was formed; 92 were included to the follow-up, according to these criteria: more than 5 years-old, asymptomatic, without history of malaria in the last month, without fever in the last 48 hours, and without simultaneous another active illness or pregnancy. The follow-up consisted in clinical and laboratorial (blood thick smear and PCR) evaluations in 15 day-intervals. Detection of parasites by the blood thick smear was indication for malaria treatment and end of the follow-up. Fifteen people had not any evaluation before the day 30 and were excluded from the analysis. In the days 30, 60 and 90 of the follow-up, 28/77 (36,4%), 24/76 (31,6%) and 20/73 (27,4%) people remained asymptomatic. Until the day 90, only 2 asymptomatic individuals had new positive PCR for P. falciparum, while microscopy was always negative for this species. In the symptomatic group, 25 of 38 people had both exams negative in the first symptomatic event until the day 30. 9 Even though the accuracy in recognize asymptomatic people improved with the extension of the follow-up time, the confirmation of the P. falciparum sub-patent infection, evaluated by the periodicity of diagnostic exams, was infrequent. Occurrence of P. vivax infection was more frequent, independently of the development of malaria symptoms. Emergence of symptoms was not associated with the parasite presence.

Orientador: João Manuel Grisi Candeias / Banca: Adriana P. do Vale / Banca: Nancy Cristina J. Bellei / Não disponível / Not available / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30Bitstream added on 2014-06-13T20:35:42Z : No. of bitstreams: 1 medeiros_jar_me_botfm.pdf: 769404 bytes, checksum: f2905508191b9ec700953a0b625dfb66 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Not available

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-04T22:57:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Felipe Rocha da Costa.pdf: 741317 bytes, checksum: 923dc646ea34ede74f15dfc2ce5f31b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-17T22:59:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Felipe Rocha da Costa.pdf: 741317 bytes, checksum: 923dc646ea34ede74f15dfc2ce5f31b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T22:59:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Felipe Rocha da Costa.pdf: 741317 bytes, checksum: 923dc646ea34ede74f15dfc2ce5f31b1 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / CAPES / Ulomoides dermestoides é um besouro cosmopolita, praga de produtos armazenados, nativo da Ásia. Popularmente conhecido como besouro do amendoim, e considerado um “remédio” na medicina popular sendo indicada sua utilização em casos como asma e artrite. Alguns trabalhos têm demonstrado que metabólitos obtidos a partir do U. dermestoides apresentam atividade biológica como, por exemplo, ação anti-inflamatória e citotóxica. Este trabalho teve como objetivo purificar proteases de U. dermestoides e caracterizar frente a substratos específicos, variação de temperatura e diferentes faixas de pH. Para tanto, uma criação de U. dermestoides foi mantida no laboratório de Engenharia Biomédica submetida a temperatura de 25ºC ±2 e umidade de 50-60%. O extrato foi preparado utilizando-se 10g de besouro triturados e homogeneizados em 20ml do tampão de extração (Tris-HCl 10mM, NaCl 130mM, KCl 5mM pH7,4) por 30min. Após centrifugação (8000 rpm, 20min) o sobrenadante foi coletado para realização dos testes propostos. A atividade proteolítica total foi avaliada utilizando-se o teste da hidrolise da azocaseína com leitura em comprimento de onda de 366nm. Os testes enzimáticos também foram realizados utilizando-se substratos específicos para serino protesases (Bapna/Tripsina e Sucphenan/Quimiotripsina) sendo a leitura realizada em comprimento de onda de 405nm. Para a caracterização térmica o extrato foi aquecido por 30mim nas temperaturas de 40ºC, 50ºC, 60ºC e 100ºC. O pH ótimo foi determinado aplicando o extrato bruto a uma faixa de pH variando do pH1 ao pH10. A purificação foi realizada usando cromatografia em coluna de exclusão molecular HiPrep 16/60 Sephacryl S-100HR e em uma coluna de troca iônica DEAE HiprepTM FF 16/10, ambos acoplados ao sistema AKTA-Prime. A leitura da atividade proteolítica mostra que o extrato de U. dermestoides apresentou elevada atividade (75,5U). A atividade proteolítica permaneceu mesmo após o material ser aquecido 100ºC (18,3U). A atividade enzimática demonstrou que o este inseto possui pelo menos uma enzima da classe serino protease do tipo tripsina, porem não apresentou proteases do tipo quimmiotripsina. A atividade enzimática revelou também que as serino proteases mantiveram sua atividade catalítica a 40ºC e na faixa de pH entre o pH3 e o pH8. A purificação mostrou que a enzima obtida é pequena apresentado peso molecular aproximado de 20,6KDa apos a exclusão molecular e 22,3 KDa após eletroforese. Por fim, a serino protease purificada apresentou Km =0,62 mM e Vmₐₓ =0,33 x 10⁻³ μmol BApNA/min. Os resultados obtidos apontam a necessidade de técnicas adicionais na purificação das enzimas de U. dermestoides visando a caracterização mais precisa da protease identificada e identificação e caracterização da protease termoestável. / Ulomoides dermestoides is a cosmopolitan beetle, pest of stored products and native from Asia. Popularly known as “besouro do amendoim” it is considered a medicine resource in folk medicine being indicated in cases such as asthma and arthritis. Some reports have demonstrated that metabolites obtained from the U. dermestoides exhibit biological activity eg. anti-inflammatory and cytotoxic activity. This paper aims to purify U. dermestoides proteases and characterize in relation to the specific substrates, variation of temperature and pH ranges and by eletrophoretic and zimography assays. For this purpose, Stock cultures of U. dermestoides were kept in the Laboratório de Engenharia Biomédica from Universidade Federal de Pernambuco at a relative humidity of 50-60% and temperature of 25 ±2ºC. Raw peanuts were offered as food source to beetles. Adult males and females were crushed for preparation of extracts and homogenized in 20 ml of extraction buffer (10mM Tris-HCl, 130 mm NaCl, 5mM KCl, pH 7, 4) for 30min. After centrifugation (8000 rpm, 20 min) the supernatant was saved for later use. The proteolytic activity was assessed using the azocaseinolitic assay for general proteases, read at a wavelength of 366nm and assessed by the specific substrates BApNA and SucPHenan, read at a wavelength of 405nm. Extract thermal an pH characterization were performed by heating crude extract for 30 minutes at temperatures of 40ºC, 50ºC, 60ºC and subjecting crude extract to a pH range from 1 to 10, respectively. Purification was carried out using gel filtration chromatography column HiPrep 16/60 Sephacryl S-100HR and an ion exchange Hiprepᵀᴹ 1D39 DEAE FF 16/10 column, both coupled to AKTA-Prime system. Proteolytic activity shows that the extract of U. dermestoides presents high proteolitic activity (75.5U). The proteolytic activity remains even when the material is heated to 100ºC (18.3U). The enzyme activity demonstrated that this insect has at least one enzyme of the serine protease class of the trypsin but does not presents chymotripsin type. The enzymatic activity also revealed that serine proteases maintained its catalytic activity at 40ºC and at pH values ranging from pH3 and pH8 with maximal activity at pH=7. Purification showed that the enzyme obtained is small and presents approximate molecular weight of 20.6 kDa on gel filtration and 22.3 kDa on electrophoresis. Zimography assay displays tow bands presenting caseinolitic activity weighting 49,5 and 43,9, respectivey. Finally, the purified serine protease showed Km = 0.62 mM Vmₐₓ = 0.33 x 10⁻³ μmol BApNA/min. The results indicate the need for additional techniques in order to completely purification of U. dermestoides proteases aiming to a more precisely characterization and identify and characterize the thermostable protease.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Examina el impacto de la bacteriemia nosocomial en la evolución clínica de los pacientes internados en el Hospital Nacional Hipólito Unanue. Estudio observacional, prospectivo, de cohortes, analítico que se llevó a cabo en el Hospital Nacional Hipólito Unanue en población adulta con más de 48 horas de hospitalización, entre enero y setiembre de 2013. Se recolectaron los datos de 35 pacientes con resultados de hemocultivo positivo y 35 pacientes con resultado de hemocultivo negativo. Los resultados obtenidos en el estudio demuestran que ambos grupos son muy similares, las variables en las que se encontró una diferencia significativa fueron: muerte, presencia de catéter venoso central, presencia de tubo endotraqueal, hipotensión, y el POFi. Hay un predominio de pacientes procedentes de las áreas de cuidados críticos en el grupo que presentó resultado de hemocultivo positivo. El germen más comúnmente aislado es el Estafilococo coagulasa negativo. El grupo con hemocultivo negativo tiene una sobrevida acumulada mayor que el grupo con hemocultivo positivo. La estancia hospitalaria fue similar en ambos grupos. El grupo de individuos con resultado de hemocultivo positivo tuvo una mayor mortalidad que el grupo con resultado de hemocultivo negativo. La sobrevida acumulada del grupo con resultado de hemocultivo positivo fue menor que la del grupo con resultados de hemocultivo negativo. La estancia hospitalaria de ambos grupos fue similar. El tratamiento de los casos de hemocultivos positivos debe ser según el cuadro clínico del paciente.se requiere nuevos estudios para evaluar las causas de estancia hospitalaria prolongada, las causas de muerte por infección intrahospitalaria y en los que se controle las limitaciones del presente estudio. Además de establecer protocolos para indicación de toma de muestras de hemocultivo e implementar un comité de vigilancia para el uso racional de antibióticos. / Trabajo de investigación

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-09-03T16:01:21Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Marcus.pdf: 4994142 bytes, checksum: b25f311dc2b967f1d606e9486703e4e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-09-04T12:49:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Marcus.pdf: 4994142 bytes, checksum: b25f311dc2b967f1d606e9486703e4e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-04T12:49:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Marcus.pdf: 4994142 bytes, checksum: b25f311dc2b967f1d606e9486703e4e4 (MD5) Previous issue date: 2007-03-08 / A plaquetopenia é uma reconhecida complicação hematológica da infecção malárica, porém, sua patogênese ainda é incerta. Os objetivos deste trabalho foram estimar a freqüência e as manifestações clínicas da plaquetopenia na malária, e avaliar o papel dos imunocomplexos circulantes (ICC) e da agregação plaquetária in vitro. O estudo foi realizado em Manaus (Amazonas), entre 2004 e 2006, com seleção aleatória de pacientes com diagnóstico microscópico e molecular de malária vivax (n=142) e malária falciparum (n=26), após exclusão de pacientes com outras doenças. Foram analisadas as características dos pacientes, além da parasitemia, hemograma, exames bioquímicos do sangue e testes de coagulação. Os ICC foram dosados (n=48) e após a eluição da IgG dos ICC, em pacientes com plaquetopenia grave, verificou-se sua capacidade de ligação in vitro a plaquetas normais (n=2), e sua capacidade de destruição plaquetária in vivo, após injeção intraperitoneal em camundongo C57BL/6 sadio (n=1). Plaquetas incubadas com ICC de pacientes com malária e plaquetopenia foram submetidas à fagocitose por células THP-1 (n=3). Avaliou-se também a agregação de plaquetas normais, na presença de lisado de hemácias parasitadas por P. vivax e por P. falciparum, e de esporozoítos lisados de P. vivax. Nos pacientes com malária vivax complicada, realizou-se o seqüenciamento das subfamílias dos genes vir. Observou-se plaquetopenia (plaquetas<150.000/μL) em 70,8% dos pacientes (IC95% 66,7-74,9%). A plaquetopenia grave (plaquetas<50.000/μL) foi encontrada em 8,9% (IC95% 4,6-13,2%), sendo que em 26,6% desses pacientes se observaram sangramentos leves. Todos os pacientes com formas complicadas de malária falciparum (n=3) ou malária vivax (n=2) apresentavam plaquetopenia grave. Não se detectou diferença entre média ou freqüência de plaquetopenia entre os pacientes com malária vivax (119,8 x 1000/μL; 71,8%) ou com malária falciparum (122,6 x 1000/μL; 65,4%). As variáveis que estiveram associadas à plaquetopenia, de forma independente, foram o gênero masculino, a primoinfecção e a alta parasitemia. O sangramento esteve associado à malária grave. Identificou-se correlação inversa entre plaquetimetria e o volume plaquetário médio, na malária vivax (r=-0,527; p<0,01), entretanto, não houve associação entre plaquetimetria e ICC (r=-0,148; p=0,355). Não se detectou a ligação in vitro de IgG (ICC) a plaquetas normais, e não houve queda na contagem de plaquetas do camundongo, após injeção de IgG (ICC). A incubação de plaquetas normais com ICC inibiu sua fagocitose in vitro. Verificou-se intensa agregação de plaquetas normais, na presença de lisado de P. vivax e de P. falciparum . Não se identificou qualquer polimorfismo dos genes vir nos parasitos isolados das formas complicadas de malária vivax. Conclui-se que a plaquetopenia é uma complicação freqüente na malária, com pouca repercussão clínica, mesmo entre pacientes com plaquetopenia grave, o que pode ser explicado pela liberação de megaplaquetas compensatórias, pelos megacariócitos, e pela maior ativação das plaquetas por formas sangüíneas de Plasmodium spp. A associação de alta parasitemia e de primoinfecção com a plaquetopenia sugere que a patogênese desta complicação é multifatorial. Os ICC parecem não contribuir para a queda da contagem de plaquetas na malária, e não se demonstrou a presença de auto-anticorpos plaquetários nos casos estudados. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Thrombocytopenia is a well-known hematological complication of malaria, although its pathogenesis is still unclear. The objectives of the present work were to estimate the frequency and the clinical manifestations of thrombocytopenia in malaria, and to investigate a possible role for the circulating immune complexes (CIC) and of platelet aggregation in vitro in the generation of thrombocytopenia. The work was carried out in Manaus (Amazonas) from 2004 to 2006, by randomly selecting patients with a microscopic and molecular diagnosis of P. vivax malaria (n=142) and P. falciparum malaria (n=26), after excluding patients with other diseases. Individual and clinical features of the patients were studied, including the degree of parasitemia, blood cell counts, biochemical parameters, and coagulation indices. The CIC were quantified (n=48), and after IgG was eluted from the CIC of patients with severe thrombocytopenia. The in vitro effects of IgG binding to normal platelets in vitro (n=2), as well as in vivo, following intraperitoneal injection in a C57BL/6 healthy mouse (n=1) were assessed. Platelets incubated with CIC from patients with malaria and thrombocytopenia were examined for phagocytosis by THP-1 cells (n=3). Aggregation of normal platelets in the presence of lysates of blood stages of P. vivax and P. falciparum , and P. vivax sporozoite lysates was also noted. In the patients with complicated vivax malaria, subfamilies of vir genes were sequenced. Thrombocytopenia (platelets<150,000/μL) was found in 70.8% of the patients (IC95% 66.7-74.9%). Severe thrombocytopenia (platelets<50,000/μL) was found in 8.9% (IC95% 4.6-13.2%), and in 26.6% of these patients mild bleeding was seen. All of the patients with complicated falciparum malaria (n=3) or vivax malaria (n=2) presented severe thrombocytopenia. There was no difference between the median platelet count or frequency of thrombocytopenia in the patients with vivax (119.8 x 1000/μL; 71.8%) or falciparum malaria (122.6 x 1000/μL; 65.4%). Independent variables which were associated with thrombocytopenia included male gender, primary infection, and high parasitemia. The bleeding was associated with severe malaria. An inverse relationship between platelet count and median platelet volume for vivax malaria was identified (r= -0.527, p<0.01). Overall, there was no association between platelet count and CIC (r= -0.148; p=0.355). In vitro binding of IgG (CIC) to normal platelets was not detected, and there was no platelet destruction in the mouse after injection of IgG (CIC). Incubation of normal platelets with CIC inhibited their phagocytosis. Intense aggregation of normal platelets in the presence of lysates of P. vivax and P. falciparum was seen. No polymorphisms of the vir genes were identified in the parasites isolated from patients with severe vivax malaria. Taken together, data reported here show that thrombocytopenia is a frequent complication of malaria, with few clinical consequences, even in patients with severe thrombocytopenia. This could be explained by the release of large platelets from megakaryocytes, and the prominent activation of platelets by blood forms of Plasmodium spp. The association of high parasitemia and primary infection with thrombocytopenia suggests a multifactorial pathogenesis for this complication. The CIC do not appear to contribute to the decreased platelet counts seen in malaria, and auto-antibodies against platelets were not detected in the cases studied. __________________________________________________________________________________ RESUMEN / La plaquetopenia es una complicación hematológica reconocida en malaria aunque su patogénesis es todavía incierta. Los objetivos de este trabajo fueron estimar la frecuencia y las manifestaciones clínicas de la plaquetopenia en malaria, así como el de evaluar el papel de los inmunocomplejos circulantes (ICC) y de La agregación plaquetária in vitro. El estudio fue realizado en Manaus (Amazonas), entre 2004 y 2006, a través de la selección aleatoria de pacientes diagnosticados por microscopia y PCR de malaria vivax (n=142), malaria falciparum (n=26), y excluyendo los pacientes con otras enfermedades. Fueron analizados los aspectos individuales y clínicos de los pacientes además de la parasitemia, hemograma, examen bioquímico de sangre y pruebas de coagulación. Los ICC fueron dosificados (n=48) y después de la elución de IgG de los ICC de pacientes con plaquetopenia grave se verificó su capacidad de ligación in vitro a plaquetas normales (n=2), y de su capacidad de destrucción plaquetária in vivo después de la inyección intraperitoneal en ratón C57BL/6 sano (n=1). Las plaquetas incubadas con ICC de pacientes con malaria y plaquetopenia fueron sometidas a fagocitosis por células THP-1 (n=3). Se evaluó también la agregación de plaquetas normales en La presencia de un lisado de glóbulos rojos parasitados por P. vivax y P. falciparum , así como de esporozoitos lisados de P. vivax. En los pacientes con malaria vivax complicada, se realizó el secuenciamiento de las subfamilias de los genes variantes, vir. Se observó plaquetopenia (plaquetas<150.000/μL) en 70,8% de los pacientes (IC95% 66,7-74,9%). La plaquetopenia grave (plaquetas<50.000/μL) fue detectada em 8.9% (IC95% 4,6-13,2%), siendo que en 26.6% de esos pacientes se observaron sangramientos leves. Todos los pacientes con formas complicadas de malaria falciparum (n=3) o malaria vivax (n=2) presentaron plaquetopenia grave. No se detectó diferencia entre media o frecuencia de plaquetopenia en los pacientes com malaria vivax (119,8 x 1000/μL; 71,8%) y malaria falciparum (122,6 x 1000/μL; 65,4%). Las variables que estuvieron asociadas a plaquetopenia, de forma independiente, fueron el género masculino, la primo-infección y la alta parasitemia. El sangrado estuvo asociado a malaria severa. Se identificó correlación inversa entre plaquetimetria y el volumen plaquetário medio, en la malaria vivax (r=-0,527; p<0,01); sin embargo, no hubo asociación entre plaquetimetria y ICC (r=-0,148; p=0,355). No se detectó la ligación in vitro de IgG (ICC) a plaquetas normales y no hubo queda en el conteo de plaquetas del ratón después de la inyección de IgG (ICC). La incubación de plaquetas normales con ICC inhibió su fagocitosis in vitro . Se verificó intensa agregación de plaquetas normales en la presencia de lisados de P. vivax y P. falciparum. No se identificaron secuencias vir subfamilia-especifica de parásitos obtenidos de pacientes con malaria vivax complicada. Se concluye que La plaquetopenia es una complicación frecuente en malaria, con poca repercusión clínica, incluso entre pacientes con plaquetopenia grave, lo que puede ser explicado por la liberación de megaplaquetas, por los megacariocitos y por la mayor activación de plaquetas por formas sanguíneas de Plasmodium spp. La asociación de la alta parasitemia y de la primo-infección con la plaquetopenia sugiere que la patogénesis de esta complicación es multifactorial. No parece que los ICC contribuyan para La disminución de plaquetas en malaria y no se demostró la presencia de autoanticuerpos plaquetários en los casos estudiados.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Comunicação e Expressão, Programa de Pós-Graduação em Estudos da Tradução, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-12-13T03:12:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 342721.pdf: 8019902 bytes, checksum: 078d76e96e875fe434d77968fa826fa8 (MD5) Previous issue date: 2016 / Abstract : The Oswaldo Cruz Institute, founded in 1900 as a public health initiative, represents the institutionalisation of empirical science in Brazil. In 1909 it launched a journal called Memórias doInstituto Oswaldo Cruz that now publishes only in English, but was multilingual when it began and continued to be so for much of its history, although the trajectories of the languages of publication differed greatly. If changes in language represent changes in network structure, these shifts in language policy reflect repositioning with regard to partnerships, colonialism/politics and the nature of the scientific community and the organisational development of the Institute. To better understand these changes, a diachronic analysis of the full corpus (1909-2013) of this journal was conducted. This corpus was analysed for foreign language frequency,origin and content as well as paratextual clues regarding Memórias? editorial policy. Based on the results, distinct language-based editorial periods were identified and the trajectories of individual foreign languages were traced. Foreign language quality was evaluated in an effort to clarify the agency and purpose of translation. Pursuant to these questions, an ancillary corpus, consisting of biographical editorials in Memórias, parallel Institute publications and correspondence, the language data and policies of national and international cohort journals, as well as extra-institutional publications, was examined. These sources revealed priorities in consumption, production and networking that clarified the previously-established editorial periods, as well as those of the general milieu of Tropical Medicine literature. A final dimension to the investigation was an explanatory analysis of these phenomena through norms specific to Anderson?s conception of imagined communities and Bourdieu?s conception of the institutionalized, objectified and embodied state, and, moreover, as a function of the post-Gutenberg paradigm shift due to the onset of digital publishing, which was predicted in the work of McLuhan and Ong.Though the journal was originally intended to promote the Institute?s research, a complex changing dialogue with international partners was revealed in a pattern that seems to defy colonial models prevalent in the field of Tropical medicine. The Institute seemed to thread a delicate balance between science as a form of nationalismand science as an independent metanational community, the fragility of which was tested by war, alliances, economic downturns and dictatorship. The onset of English as14the journal?s only language of expression occurred quite late, at roughly the same time its electronic version appeared. This could have been an inevitable result of a new open editorial policy set in 1980, but it also seems due to a new level of interconnectivity in the scientific community precipitated by advancing communication technology, which would tend to confirm Anderson, McLuhan and Ong?s theories about communication technology as a fundamental driver of society.<br> / O Instituto Oswaldo Cruz, fundado em 1900 como uma iniciativa de saúde pública, representa a institucionalização da ciência empírica no Brasil. Em 1909 ele lançou uma revista chamada Memórias doInstituto Oswaldo Cruz, a qual hoje publica artigos somente em inglês, mas era multilíngue em seu início e continuou a sê-lo durante grande parte de sua história, apesar de as trajetórias das línguas de publicação haverem diferido imensamente. Se mudanças na língua representam mudanças na rede de trabalho, essas mudanças na política linguística refletem um reposicionamento com relação a parcerias, colonialismo/políticas e natureza da comunidade científica e do desenvolvimento organizacional do Instituto. Para melhor compreender essas mudanças, foi conduzida uma análise diacrônica do corpus completo dessa revista (1909-2013). Esse corpus foi analisado considerando a frequência, a origem e o conteúdo em língua estrangeira, bem como indícios paratextuais relativos à política editorial das Memórias. Com base nos resultados, identificaram-se períodos editoriais distintos com relação às línguas, e foram traçadas as trajetórias de línguas estrangeiras individuais. A qualidade da língua estrangeira foi avaliada em um esforço para esclarecer a agência e o propósito da tradução. Em conformidade com essas questões, foi examinado um corpus auxiliar, composto por editoriais biográficos das Memórias, publicações e correspondências paralelas do Instituto, dados linguísticos e políticas editoriais de revistas nacionais e internacionais com características semelhantes, e ainda publicações extra-institucionais. Essas fontes revelaram prioridades de consumo, produção e trabalho em rede que esclareceram os períodos editoriais previamente estabelecidos, bem como aqueles da área de literatura voltada à Medicina Tropical. Uma dimensão final da investigação foi a análise explanatória desses fenômenos através de normas específicas da concepção de comunidades imaginadas de Anderson e da concepção de estado institucionalizado, objetificado e incorporado de Bordieu, e, ainda, como uma função da mudança de paradigma pós-Gutenberg, devido ao advento da publicação digital, a qual foi prevista nas obras de McLuhan e de Ong. Apesar de a intenção original da revista ter sido promover as pesquisas do Instituto, um complexo e dinâmico diálogo com parceiros internacionais se revelou em um padrão que parece desafiar os modelos coloniais prevalentes na área de Medicina Tropical. O Instituto pareceu traçar um delicado balanço entre a ciência como forma de nacionalismo e a ciência como 16 uma comunidade metanacional independente, cuja fragilidade foi testada por guerras, alianças, crises econômicas e ditaduras. O começo do inglês como única língua de expressão da revista se deu já tarde, praticamente no mesmo momento do surgimento de sua versão eletrônica. Isso pode ter sido um resultado inevitável da nova política editorial aberta estabelecida em 1980, mas também parece ter se dado graças a um novo nível de interconectividade na comunidade científica impulsionado pelos avanços da tecnologia de comunicação, o que tenderia a confirmar as teorias de Anderson, McLuhan e Ong acerca da tecnologia de comunicação como um propulsor fundamental da sociedade.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-18Bitstream added on 2014-06-13T20:31:20Z : No. of bitstreams: 1 saad_e_me_botfm.pdf: 33538599 bytes, checksum: 7da3936c04f4568697b6251d1fd6b720 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O veneno de Bothrops jararaca é constituído de misturas complexas de toxinas e entre os principais componentes estão as lectinas, metaloproteinases, serinoproteinases, desintegrinas, fosfolipases e os peptídeos. Esta composição pode variar de acordo com a idade, o sexo e a região da serpente. Este trabalho avaliou a variação individual do veneno de Bothrops jararaca da região de Botucatu – São Paulo, por meio da sua caracterização enzimática, bioquímica e farmacológica. Foram utilizados testes in vitro e ensaios biológicos. As atividades dos venenos foram comparadas ao Veneno Referência Nacional. A dosagem protéica apresentou variações entre os grupos de serpentes adultas (80% proteínas) e filhotes (40% proteínas). O perfil eletroforético apresentou perfis similares, geralmente com massas moleculares de 50 a 25 kDa, porém com variações intraespecíficas. O RP-HPLC revelou variações na concentração das proteínas. Na atividade coagulante não houve variação entre os grupos formados por adultos, no entanto, houve uma grande variação entre os grupos de filhotes e Veneno Referência Nacional, sendo estes mais coagulantes. A atividade hemorrágica mostrou maior atividade nos venenos de animais adultos, principalmente em machos recém chegados da natureza. Entretanto, os filhotes mantidos em regime de cativeiro apresentaram valores elevados, ficando muito próximos aos valores obtidos de machos adultos. Na atividade edematogênica, verificou-se um aumento do edema em todos os grupos de estudo não sendo possível avaliar se houve uma variação ontogenética entre os grupos estudados. Na dose letal média (DL50) houve uma grande variação de toxicidade em relação aos venenos, sendo as fêmeas cativas, três vezes mais tóxicas comparadas aos filhotes. Os resultados deste estudo ilustram a complexidade intra e interespecífica presentes em venenos de serpentes... / Bothrops jararaca venom comprises a complex mixture of toxins. Among its main components are: lectins, metalloproteinases, serine proteinases, disintegrins, phospholipases, and peptides. The venom composition can be present age, sex and region variation. This present study evaluated the individual variation of Bothrops jararaca venom in Botucatu region, São Paulo state, through enzymatic, biochemical and pharmacological characterizations of snake venoms which employed in vitro techniques and in vivo analysis. Venoms actions were compared with those of the National Venom Reference. Protein dosage varied between adult (80% proteins) and newborn (40% proteins). The electrophoretic profiles were similar, usually presenting molecular masses from 25 to 50 kDa; however, intraspecies variations were present. Due to the complexity of the technique, it was not possible to detect the individual chromatographic variations by means of RP-HPLC revealed individual protein variations on venom composition. There was no variation in the coagulant activity among adult groups; however, a great variation was observed between newborn groups and the National Venom Reference, the latter showing higher coagulant activity. Venoms from adult animals revealed greater hemorrhagic activity, mainly in newly captured males. Nevertheless, newborn kept in captivity also presented elevated hemorrhagic activity, close to that of adult males. Regarding the edematous activity, there was edema increase in all studied groups, therefore, it was not possible to evaluate if ontogenetic variations were present among studied animals. Concerning the median lethal dose (LD50), a great variation in venom toxicity was observed and captive females were three times more toxic when compared to newborn. Our findings showed the intraand interspecies complexity of snake venoms possibly represented by ontogenetic, sexual and environmental... (Complete abstract click electronic access below)