Filmes de Langmuir são usados como modelos simplificados de membranas celulares, cujas propriedades podem ser correlacionadas com efeitos fisiológicos de moléculas de interesse biológico, como os peptídeos antimicrobianos (PAMs). Nesta dissertação investigamos a interação do peptídeo Aureína 1.2, na forma de monômero (AU), dímero ((AU)2K) e com variações na porção N-terminal (KAU e DAU), com filmes de Langmuir obtidos do extrato lipídico da bactéria Escherichia coli. Todos os peptídeos injetados em concentrações de 20 a 200nM se incorporaram ao filme de Langmuir, causando expansão nas isotermas de pressão superficial, que foi significativamente maior para o dímero. O módulo de compressibilidade do filme de E. coli à pressão superficial correspondente à de uma membrana real praticamente dobrou, de cerca de 40mN/m para 80nM/m para o dímero, ao passo que para os outros peptídeos a alteração não foi significativa. Dos espectros de reflexão e absorção no infravermelho com modulação de polarização (PM-IRRAS), observou-se que todos os peptídeos interagiram tanto com as caudas quanto com as cabeças polares das moléculas do extrato de E. coli no filme de Langmuir. Diferentemente dos resultados de pressão e compressibilidade, não há tendência de um peptídeo ter interação mais relevante do que os outros. O maior efeito do dímero na expansão e compressibilidade do filme de Langmuir não se refletiu numa maior atividade bactericida contra E. coli, pois sabe-se da literatura que a atividade é maior para a Aureína 1.2 (AU). Provavelmente porque essa atividade deve depender da camada externa de lipopolissacarídeos de uma bactéria Gram-negativa. / Langmuir films are used as simplified cell membrane models whose properties can be correlated with physiological effects of molecules of biological interest, such as antimicrobial peptides (AMPs). In this dissertation we report on the interaction of Aurein 1.2 peptide as monomer (AU), dimer ((AU)2K) and modified peptide in the N-terminal portion (KAU and SAD), with Langmuir films obtained from a lipid extract of Escherichia coli. All peptides injected at concentrations from 20 to 200nM were incorporated into the Langmuir film, causing the surface pressure isotherm to expand, particularly for the dimer. The compressibility modulus of the E. coli Langmuir film at the surface pressure corresponding to an actual membrane nearly doubled, from about 40mN/m to 80nM/m for the dimer, whereas for the other peptides the change was not significant. From the polarization-modulated infrared reflection - absorption spectra (PM-IRRAS), we observed that all peptides interacted with both tails and polar heads of the molecules of E. coli extract in the Langmuir film. Unlike the results of pressure and compressibility, there was no tendency of a peptide having more relevant interaction than the others. The larger effect of the dimer in the expansion and compressibility of the Langmuir film was not reflected in a higher bactericidal activity against E. coli, since it is known from literature that the activity is higher for Aurein 1.2 (AU). Probably because this activity should depend on the outer layer of lipopolysaccharides of Gram-negative bacteria.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451784.pdf: 974193 bytes, checksum: b53f42e8acb1653e7c655d1d1345a38b (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / Annexin V is an endogenous human protein Ca+2 dependent, with a molecular weight of 35.8 kDa, widely distributed intracellularly, with very high concentrations in the placenta and lower concentrations in endothelial cells, kidneys, myocardium, skeletal muscle, skin, red cells, platelets and monocytes. Annexin V binds preferably to phosphatidylserine, a phospholipid commonly present on inner leaflet of lipid bilayer, which during cell apoptosis is translocated to outer leaflet of cell membrane. Despite of Annexin V is a relatively large protein, it was shown early on that the protein can be internalized at sites of ischemic injury both in the heart and in the brain and cross the intact blood-brain barrier, being increasingly used as a tool to detect apoptosis in several diseases such as Alzheimer and Ischemia and in drug. Therefore, production of recombinant human Annexin V using recombinant DNA technique along with High Cell Density Culture and protein purification becomes applicable to commercialize it in Brazil, increasing and facilitating the access of pharmaceutical industries and research laboratories in purchase product. We developed a protocol to produce recombinant human annexin V in large scale, in which approximately 20 mg of recombinant protein was yielded from 3 g of E. coliBL21(DE3) wet cells. N-terminal amino acid sequencing and massspectrometry analysis provided evidence for the identity and purity of therecombinant protein, as well as an apoptosis/necrosis in vitro detectionkit produced performed similarities with an imported commercialized kit in Brazil. / A Anexina V ? uma prote?na humana end?gena dependente de Ca+2, com peso molecular de 35,8 kDa, amplamente distribu?da intracelularmente em altas concentra??es na placenta e em concentra??es mais baixas nas c?lulas endoteliais, renais, mioc?rdicas, epiteliais, esquel?ticas musculares, eritr?citos, plaquetas e mon?citos. Apresenta como principal caracter?stica a capacidade de se ligar ? fosfatidilserina, um fosfolip?deo presente na camada interna da bicamada lip?dica, que durante a apoptose celular ? translocada para a camada externa da membrana celular. Apesar de ser uma prote?na de tamanho relativamente grande, a Anexina V apresentou a capacidade de penetrar em s?tios de inj?ria isqu?mica tanto mioc?rdica quanto cerebral, atravessando a Barreira Hemato-Encef?lica, sendo cada vez mais utilizada para dete??o de apoptose em diversas doen?as como Alzheimer e Isquemia e em monitoramento de drogas antic?ncer. Por esses motivos, se torna relevante a produ??o da prote?na Anexina V humana atrav?s da t?cnica do DNA recombinante em larga escala para que possa ser comercializada no Brasil, aumentando e facilitando o acesso de laborat?rios de pesquisa e ind?strias farmac?uticas na aquisi??o deste produto. Desenvolvemos um protocolo para cultivoem biorreator de grandes quantidades de Anexina V recombinante, no qual aproximadamente 20 mg de prote?na recombinante podem ser obtidos a partir de 3 g de c?lula ?mida de E. coli BL21(DE3). As an?lises porsequenciamento N-terminal de amino?cidos e espectrometria de massas proveram evid?ncias para a identidade e pureza da prote?na recombinante, assim como um desenvolvimento de um kit para marca??o de apoptose in vitro apresentou muita semelhan?a com outro kit importado j? comercializado no Brasil.

Orientador: Pedro Luis da Costa Aguiar Alves / Coorientador: Silvano Bianco / Coorientador: Wendy Ann Peer / Banca: Edivaldo Domingues Velini / Banca: Rinaldo Cesar de Paula / Banca: Priscila Lupino Gratão / Banca: Tiago Pereira Salgado / Resumo: A cultura do eucalipto apresenta uma grande importância no cenário econômico nacional e mundial, oferecendo uma vasta gama de produtos florestais. No entanto, a disponibilidade de fósforo nos solos raramente é adequada para o crescimento, desenvolvimento e produtividade das plantas de eucalipto, bem como para diversas outras culturas. A presença de plantas daninhas em eucaliptais é outro fator limitante, e para o manejo da comunidade infestante, glyphosate é o herbicida mais utilizado. As plantas de eucalipto, quando cultivadas em diferentes concentrações de fósforo, podem alterar a expressão gênica de transportadores de fosfato. Em algumas condições, a síntese de transportadores de fosfato de alta afinidade pode ser incrementada. Esses transportadores podem ter afinidade pelo grupo fosfonato do glyphosate, transportando esse herbicida via membrana plasmática. Assim, podem ocorrer alterações no comportamento do glyphosate em função das concentrações de fósforo. Estudos do efeito diferencial de glyphosate em função de concentrações de fósforo e do transporte de glyphosate mediado por transportadores de fosfato ainda são escassos, principalmente em uma espécie perene, como o eucalipto. Com essa pesquisa objetivou-se (1) avaliar, em clones de Eucalyptus urophylla (GG100 e I144) a cinética de absorção de fósforo, as eficiências nutricionais de macronutrientes e seus reflexos no crescimento das plantas; (2) verificar as alterações fotossintéticas, metabólicas e nutricionais de clo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Eucalypt plantation have great importance in the national and global economic environment, offering a wide range of forest products. However, the phosphorus availability in soils is rarely appropriate for growth, development and yield of eucalypt plants, as well as several other crops. The presence of weeds in eucalypt plantations is another limiting factor, and for weed management glyphosate is the most used herbicide. Eucalypt plants grown under different phosphorus concentrations can change phosphate transporters gene expression. Under specific conditions, high-affinity phosphate transporter synthesis can be increased. Such transporters can have affinity for glyphosate phosphonate group, transporting this herbicide through plasma membrane. So, changes may occur in glyphosate behavior depending on phosphorus concentrations. Studies of glyphosate effect as a function of phosphorus concentrations and glyphosate transport mediated by phosphate transporters are still scarce, especially in a perennial species, such as eucalypt. This study aimed (1) to evaluate, in Eucalyptus urophylla clones (GG100 and I144), the phosphorus absorption kinetics, the nutritional efficiency of macronutrients and their effects on plant growth; (2) verify the photosynthetic, nutritional and metabolic changes in E. urophylla clones (GG100 and I144) grown under phosphorus concentrations and submitted to glyphosate application; and (3) study in E. grandis the phosphate transporters gene expression coord... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000321939-Texto+Completo-0.pdf: 629614 bytes, checksum: 3a028aa2639bbe16eabae0603dd5e3f1 (MD5) Previous issue date: 2004 / Loss of renal function is a recognized complication following the intravascular use of radiocontrast agents. The cell membrane transport systems are possible targets for radiocontrast toxicity. The aim of the present study was to examine the effects of diatrizoate sodium (DS), diatrizoate meglumine (DM), a diatrizoate compound (DC), and Hypaque-M 76® upon membrane transport functions, using the erythrocyte as model. Na+/K+ pump activity was determined, the number of Na+/K+ pumps was estimated, and the cell membrane transports of L-arginine and choline were evaluated in erythrocytes obtained from normal individuals and from patients undergoing cardiac catheterization. Potassium influx was 1. 50±0. 35, 1. 32±0. 37, 1. 28±0. 30, and 1. 01±0. 25 mmol/L cell/h in control, DS, DM and DC groups, respectively (P=0. 004; DC against control group). Exposure to Hypaque-M 76® during cardiac catheterization diminished the activity of Na+/K+ pump (1. 40±0. 36 vs. 1. 27±0. 40 mmol/L cell/h; P=0. 039). The number of Na+/K+ pumps in presence of DS was decreased (156±36 vs. 143±34 pumps/erythrocyte; P=0. 015). L-arginine and choline membrane transports were unchanged, except at very high extracellular radiocontrast concentrations. Results suggest that a selective effect on erythrocytes membrane transport function seems to partake of the cytotoxic picture accompanying radiocontrast-induced acute renal failure. / Perda de função renal é reconhecidamente uma das complicações secundárias ao uso intravascular de radiocontrastes. A membrana celular e os sistemas de transporte são possíveis alvos para a toxicidade destas substâncias. O objetivo do presente estudo foi examinar os efeitos de diatrizoato de sódio (DS), diatrizoato meglumina (DM), um composto de diatrizoatos (CD), e Hypaque- M 76® sobre sistemas específicos de transporte de membrana celular, usando o eritrócito como modelo. A atividade da bomba de Na+/K+ foi determinada, o número de bombas de Na+/K+ foi verificado, e o transporte celular de L-arginina e colina avaliado em eritrócitos obtidos de indivíduos saudáveis e de pacientes que sofreram cateterismo cardíaco. O influxo de potássio foi 1,50±0,35, 1,32±0,37, 1,28±0,30, e 1,01±0,25 mmol/L cel/h nos grupos controle, DS, DM e CD, respectivamente (P=0,004; CD versus grupo controle). Exposição ao radiocontraste composto Hypaque-M 76® durante cateterismo cardíaco diminuiu a atividade de bomba de Na+/K+ (1,40±0,36 vs. 1,27±0,40 mmol/L cel/h; P=0,039). O número de bombas de Na+/K+ ativas em presença de DS foi diminuído (156±36 vs. 143±34 bombas/eritrócito; P=0,015). O transporte de membrana de L-arginina e colina permaneceu inalterado, exceto em concentrações extracelulares de radiocontrastes muito altas. Estes resultados sugerem que efeitos seletivos sobre a função dos sistemas de transporte de membrana analisados parecem participar do quadro de citotoxicidade que acompanha a insuficiência renal aguda induzida pelos radiocontrastes.

Filmes de Langmuir são usados como modelos simplificados de membranas celulares, cujas propriedades podem ser correlacionadas com efeitos fisiológicos de moléculas de interesse biológico, como os peptídeos antimicrobianos (PAMs). Nesta dissertação investigamos a interação do peptídeo Aureína 1.2, na forma de monômero (AU), dímero ((AU)2K) e com variações na porção N-terminal (KAU e DAU), com filmes de Langmuir obtidos do extrato lipídico da bactéria Escherichia coli. Todos os peptídeos injetados em concentrações de 20 a 200nM se incorporaram ao filme de Langmuir, causando expansão nas isotermas de pressão superficial, que foi significativamente maior para o dímero. O módulo de compressibilidade do filme de E. coli à pressão superficial correspondente à de uma membrana real praticamente dobrou, de cerca de 40mN/m para 80nM/m para o dímero, ao passo que para os outros peptídeos a alteração não foi significativa. Dos espectros de reflexão e absorção no infravermelho com modulação de polarização (PM-IRRAS), observou-se que todos os peptídeos interagiram tanto com as caudas quanto com as cabeças polares das moléculas do extrato de E. coli no filme de Langmuir. Diferentemente dos resultados de pressão e compressibilidade, não há tendência de um peptídeo ter interação mais relevante do que os outros. O maior efeito do dímero na expansão e compressibilidade do filme de Langmuir não se refletiu numa maior atividade bactericida contra E. coli, pois sabe-se da literatura que a atividade é maior para a Aureína 1.2 (AU). Provavelmente porque essa atividade deve depender da camada externa de lipopolissacarídeos de uma bactéria Gram-negativa. / Langmuir films are used as simplified cell membrane models whose properties can be correlated with physiological effects of molecules of biological interest, such as antimicrobial peptides (AMPs). In this dissertation we report on the interaction of Aurein 1.2 peptide as monomer (AU), dimer ((AU)2K) and modified peptide in the N-terminal portion (KAU and SAD), with Langmuir films obtained from a lipid extract of Escherichia coli. All peptides injected at concentrations from 20 to 200nM were incorporated into the Langmuir film, causing the surface pressure isotherm to expand, particularly for the dimer. The compressibility modulus of the E. coli Langmuir film at the surface pressure corresponding to an actual membrane nearly doubled, from about 40mN/m to 80nM/m for the dimer, whereas for the other peptides the change was not significant. From the polarization-modulated infrared reflection - absorption spectra (PM-IRRAS), we observed that all peptides interacted with both tails and polar heads of the molecules of E. coli extract in the Langmuir film. Unlike the results of pressure and compressibility, there was no tendency of a peptide having more relevant interaction than the others. The larger effect of the dimer in the expansion and compressibility of the Langmuir film was not reflected in a higher bactericidal activity against E. coli, since it is known from literature that the activity is higher for Aurein 1.2 (AU). Probably because this activity should depend on the outer layer of lipopolysaccharides of Gram-negative bacteria.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-05-31T13:56:21Z No. of bitstreams: 1 Gesilda Florenco das Neves.pdf: 2022052 bytes, checksum: e2220594572e3c9f6aec15369bc323d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-31T13:56:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gesilda Florenco das Neves.pdf: 2022052 bytes, checksum: e2220594572e3c9f6aec15369bc323d5 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / From the 50s, researchers have raised interest in discovering the structure and function of the cell membranes, the flow of ionic currents along those membranes, its mechanisms of transport and voltage variations. These studies allowed the construction of a model for description of the action potential in membranes of neurons, enabling simulations of nerve impulses. The increasing search for theoretically studying the electrical activity of other cells, proposed creating other modeling, including that can represent the activity of pancreatic β cells. Knowing the growth indicated by the World Health Organization (WHO) on diabetes in the coming years, to seek possible means of therapy for patients who suffer from this metabolic disorder. An interesting fact is that the introduction of numerous processes electrification of cities and the use of electronic devices emitting electric fields, have been shown to alter cellular mechanisms. So if the electric field stimulate or inhibit the synthesis and secretion of insulin by pancreatic β cells, this agent could be used in future as a potential therapy for diabetes. Therefore, this study aimed through mathematical models simulate the electrical potential and ionic currents in the membrane of pancreatic β-cells in the presence of electric fields, in order to investigate possible changes in the electrical behavior of the membrane of these cells. The search for new theoretical and experimental models, such as exposure to an electric field, consists of an innovative idea and could pave the way for alternative therapies for diseases such as type II diabetes mellitus when treatment with drugs is not effective, in addition to understanding whether no deleterious effects from exposure to the electric field. / A partir da década de 50, pesquisadores despertaram o interesse em descobrir qual a estrutura e funcionamento das membranas celulares, o fluxo das correntes iônicas ao longo dessas membranas, seus mecanismos de transportes e suas variações de condutâncias. Esses estudos permitiram a construção de um modelo para descrição do potencial de ação em membranas de neurônios, possibilitando simulações dos impulsos nervosos. A crescente busca para se estudar teoricamente a atividade elétrica de outras células, propôs a criação de outras modelagens, inclusive as que podem representar a atividade das células β-pancreáticas. Sabendo-se do crescimento apontado pela Organização Mundial de Saúde (OMS) sobre o diabetes nos próximos anos, buscam-se possíveis meios de terapia para pacientes que sofrem desse distúrbio metabólico. Por outro lado, os processos de eletrificação de cidades e o uso de equipamentos eletrônicos emissores de campos elétricos, têm-se mostrado capaz de alterar mecanismos celulares. Portanto, se o campo elétrico é capaz de estimular ou inibir a síntese e secreção de insulina pelas células β pancreáticas, poderá vir a ser utilizado como uma potencial terapia para o diabetes. Diante disso, este estudo visou simular através de modelos matemáticos o potencial elétrico e as correntes iônicas na membrana das células-β pancreáticas na presença de campos elétricos, no intuito de investigar possíveis alterações no comportamento elétrico da membrana dessas células. A busca por novos modelos teórico-experimentais, como a exposição a um campo elétrico, consiste em uma ideia inovadora e que poderá abrir caminhos para terapias alternativas para doenças como Diabetes Mellitus tipo II quando o tratamento por drogas não é eficiente; além de compreender se há efeitos deletérios da exposição ao campo elétrico.

Orientador: Claudia Regina Baptista Haddad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T00:53:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MariaCristinadaCosta_M.pdf: 561166 bytes, checksum: 57a597ae699902d2f7063c9a77a30325 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O excesso de sais no solo afetao metabolismo geral da planta, causando alterações fisiológicas e morfológicas. Visando avaliar os efeitos do sal no crescimento e metabolismo sob estresse salino, foram comparadas as respostas de Vigna luteola (halófita) e Vigna unguiculata (sensível). As plantas foram cultivadas na presença de NaCl nas concentrações de: 100mM, 250mM e 500mM. V. unguiculata apresentou reduções significativas de massas fresca e seca, área foliar e número de folhas sob salinidade. Estes parâmetros não foram afetados em V. luteola. Há dados na literatura que mostram que plantas adaptadas à salinidade apresentam a razão raiz/parte aérea maior que plantas sensíveis. Contudo, este aumento foi evidenciado na espécie mais sensível ao sal, sob salinidade, mantendo-se constante em V. luteola. O aumento de suculência, que é considerado uma adaptação ao estresse salino, não foi verificado em nenhuma das espécies estudadas. A resistência ao estresse salino tem sido relacionada com a atividade de enzimas antioxidantes, que removem espécies ativas de oxigênio. O aumento da atividade de peroxidases totais foi observado apenas em V. luteola, associado ao estresse salino. Sob estresse salino, ocorreu o aumento da atividade de siringaldazina oxidase somente em V. unguiculata. Não foi observada relação entre crescimento de raízes e atividade desta enzima, pois nesta espécie a salinidade provocou maior crescimento da raiz. A atividade de peroxidases totais em Vigna luteola está localizada na epiderme, córtex e cilindro central e, em V. unguiculata na epiderme e cilindro central. Sob estresse salino, a atividade foi mais intensa nas duas espécies. Em V. luteola foi observada em toda raiz, em V. unguiculata, além da epiderme e do cilindro central, foi possível observa-la em porções do córtex. A respeito da localização da enzima siringaldazina oxidase, em V. unguiculata restringiu-se à epiderme, expandindo - se para o córtex e cilindro central sob estresse salino. Já em V. luteola estava presente em todas as regiões da raiz, intensificando - se com a aplicação de NaCl no meio de cultivo. A alteração da permeabilidade das membranas é um dos resultados da salinidade, que está relacionado ao aumento do teor de espécies ativas de oxigênio. Foi observado aumento de liberação de eletrólitos em ambas as espécies de Vigna. Entretanto, em V. unguiculata, o acréscimo neste parâmetro foi altamente significativo na presença de NaCl e com resultados sempre maiores aos mesmos tratamentos de V. luteola. A manutenção da razão Na+/K+ nas células é um fator relevante para a tolerância à salinidade. O acúmulo de Na+ foi observado em raízes e folhas das duas espécies de Vigna. Em raízes, obteve-se valores maiores em V. luteola, em decorrência a alta concentração de Na+ neste órgão. Em folhas, a maior razão Na+/K+ foi obtida em V. unguiculata. As análises de parâmetros bioquímicos sob estresse salino, indicaram que não houve variação no teor de proteínas (folhas), sacarose (folhas) e açúcares solúveis totais (raiz e folhas) em Vigna luteola. Sob salinidade, o teor de proteínas foi reduzido em folhas de V. unguiculata. Já as concentrações de açúcares solúveis totais (raízes e folhas), sacarose (folhas) e malondialdeído (raiz) ficaram inalterados. Mediante salinidade, não ocorreram alterações significativas nos parâmetros bioquímicos em V. luteola, o que permitiu seu crescimento e desenvolvimento normal. As mudanças de indicadores bioquímicos e ausência de resposta antioxidante em V. unguiculata sob salinidade, podem estar relacionadas com o comprometimento do seu crescimento sob estresse salino / Abstract: The excess of salt in the soil affects all the general metabolism of the plant causing physiologic and morphologic alterations. With the objective of evaluating the effects of salt in the growth and metabolism under saline stress, this study compares the responses of two Vigna species, with distinct sensitivity to salt, cultivated with the presence of NaCl in the following concentrations: 100mM, 250mM e 500mM. V. unguiculata presented significant reductions in fresh and dry mass, leaf area and number of leaves when subjected to salinity. However, these parameters were not affected in V. luteola. There is data in the literature which shows that plants that have adapted to salinity present the root/shoot ratio higher than sensitive plants. On the other hand, this increase was evidenced in the species which is most sensitive to salt, under salinity, keeping itself constant in V. luteola. The increase in juiciness, which is considered an adaptation to saline stress, was not present in either of the species studied. The resistance to saline stress has been associated to the activity of antioxidant enzymes, which remove reactive oxygen species. The increase in activity of total peroxidases was observed only in V. luteola. Under saline stress, only V. unguiculata presented an increase in siringaldazine oxidase activity. There was no evidence of relation between the growth of roots and the presence of this enzyme, since this species presented larger root growth due to salinity. The histochemical location of total peroxidases activity indicated that the distribution of the activity of these enzymes is similar in both species of Vigna (epidermis, cortex and central cylinder), however, there is stronger activity in V. luteola, especially under stress. In relation to the location of the seringaldazine oxidase enzyme, in V. unguiculatat was restricted to the epidermis, expanding to the cortex and central cylinder under saline stress. In V. luteola it was present in all parts of the root, intensifying when NaCl was applied during cultivation. The change in the membrane permeability is one of the results of salinity which is connected to the increase of reactive oxygen species concentration. An increase in eletrolites release was noticed in both Vigna species. Meanwhile, in V. unguiculata, the rise in this parameter was highly significative in the presence of NaCl and with results constantly higher than the results of the same treatments in V. luteola. The maintenance of the Na+/K+ ratio in the cells is a relevant factor to the tolerance of salinity. Na+ accumulation was observed in both Vigna species¿ roots and leaves. In roots, higher values were obtained in V. luteola, due to the higher Na+ concentration in this organ. In leaves, the highest Na+/K+ ratio change was obtained in V. unguiculata. The analysis of biochemical parameters under saline stress, show that there was no change in protein content (leaves), sucrose (leaves) and total soluble sugars (root and leaves) in Vigna luteola. Protein content was reduced in V. unguiculata leaves, while concentrations of total soluble sugars (root and leaves), sucrose (leaves) e malondialdeid (root) remained the same. Under salinity, there were no significant changes in the biochemical parameters of V. luteola, which allowed for its normal growth and development. The changes in biochemical indicators and lack of antioxidant response in V. unguiculata under salinity may be connected to its growth and development compromise under saline stress / Mestrado / Mestre em Biologia Vegetal

O quelóide é um processo cicatricial, com freqüência aumentada em regiões com maior tensão na pele ou onde a pele é mais espessa, caracterizado por exceder-se além dos limites da lesão que o originou e pela tendência à recidiva após sua ressecção. Ambos os sexos são acometidos, com maior incidência entre a primeira e a terceira década de vida e em indivíduos de etnia negra. A relação familial é sugerida como herança autossômica dominante. O quelóide apresenta características moleculares distintas da pele normal envolvendo uma variedade de sinalizações ainda pouco compreendidas e um aumento da expressão de componentes da matriz extracelular, como o colágeno, os glicosaminoglicanos e os proteoglicanos. Este estudo analisou a expressão gênica dos proteoglicanos de superfície celular sindecam-2 e sindecam-4 e dos de matriz extracelular decorim e versicam no tecido derivado de quelóide de indivíduos não tratados em comparação com a pele clinicamente normal. Participaram desse estudo 10 indivíduos portadores de quelóides (grupo Q) e 10 indivíduos não portadores dessa cicatriz (grupo N). A expressão gênica dos proteoglicanos foi amplificada pela reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa e analisada através de eletroforese em gel de agarose. Foi realizada a localização dos proteoglicanos nos tecidos através de reação imunohistoquímica com anticorpos para os sindecans-2 e 4. Os grupos foram comparados pelo teste t de Student. Os proteoglicanos de superfície celular mostraram-se aumentados no grupo Q (93% para o sindecam-2 e 152,5% para o sindecam-4) em comparação com o grupo N (P<0,01). Não foram observadas diferenças significativas para os proteoglicanos de matriz extracelular entre os dois grupos. A análise imunohistoquímica mostrou uma distribuição marcante dos sindecans-2 e 4 no componente epitelial, conectivo, vascular e nervoso de toda a casuística. Concluímos que o quelóide apresenta aumento significativo da expressão gênica de sindecam- 2 e sindecam-4, mas não apresenta aumento significativo da expressão gênica de decorim e versicam, em relação à pele normal. / Keloid is a cicatricial process, with frequency increased in regions with bigger tension in the skin or where the skin is thicker, characterized for exceeding beyond the limits of the injury that originated it and for the tendency to relapse after its ressection. Its occurs in both genders, with bigger incidence between the first and the third decade of life and in individuals of black ethnia. The familial relation is consistent with an autosomal dominant inheritance. The keloid presents distinct molecular characteristics of the normal skin involving a variety of still little understood signallings and an increase of the expression of components of the extracellular matrix, as the collagen, the glicosaminoglycans and the proteoglycans. This study analyzed the gene expression of the proteoglycans of cell surface syndecan-2 and syndecan-4 and the ones of extracellular matrix decorin and versican in the keloid tissue from not treated individuals in comparison with the normal skin. Tissue samples was obtained from 10 individuals with keloid (Q group) and 10 individuals with normal skin (N group). The gene expression of the proteoglycans was amplified by reverse transcription polymerase chain reaction and analyzed through agarose gel electrophoresis. The localization of the proteoglycans in the tissues was performed through immunohistochemical reaction using panels of antibodies for syndecans-2 and 4. The groups was compared by the Student?s t test. The proteoglycans of cell surface revealed increased in Q group (93% for sydecan-2 and 152,5% for syndecan-4) in comparison with N group (P<0,01). Significant differences for the proteoglycans of extracellular matrix between the two groups was not observed. The immunohistochemical analysis showed a major distribution of syndecans-2 and 4 in epithelial, connective, vascular and neural components in both groups. We conclude that keloid reveal significant increase of the gene expression of syndecan-2 and syndecan-4, but does not present significant increase of the gene expression of decorin and versican, in relation to the normal skin.

INTRODUÇÃO: As malformações do desenvolvimento cortical (MDC) resultam de distúrbios no dinâmico processo de corticogênese cerebral e são importante causa de epilepsia grave, atraso do desenvolvimento, déficits motores e cognitivos. O papel do metabolismo na epilepsia humana tem sido extensamente debatido, e há inúmeras evidências que apontam para disfunções bioenergéticas como fatores-chave na ictogênese. Distúrbios metabólicos foram identificados nas malformações corticais com outras modalidades de neuroimagem, tais como a espectroscopia de prótons por ressonância magnética. Para o nosso conhecimento, entretanto, o metabolismo de fósforo em pacientes com epilepsia secundária a MDC não foi extensamente investigado até o momento. OBJETIVOS: O objetivo deste estudo foi avaliar o metabolismo de fosfolipídios in vivo em uma série de pacientes com epilepsia e MDC. MÉTODO: Trinta e sete pacientes com MDC e 31 voluntários foram estudados usando espectroscopia de fósforo por ressonância magnética (31P-ERM) tridimensional em aparelho de 3,0 Tesla. Os voxels nas lesões foram comparados ao córtex frontoparietal dos controles (volumes efetivos de 12,5 cm3). O parênquima aparentemente normal foi avaliado em voxels homólogos de pacientes e controles, abrangendo cinco regiões cerebrais: regiões nucleocapsulares direita e esquerda, córtex frontoparietal parassagital, e centros semiovais direito e esquerdo. Foram utilizados métodos de quantificação para ajustar os dados no domínio do tempo para as seguintes ressonâncias: fosfoetanolamina (PE), fosfocolina (PC), glicerofosfoetanolamina (GPE), glicerofosfocolina (GPC), fosfato inorgânico (Pi), fosfocreatina (PCr), e a-, b- e g-adenosina trifosfato (ATP). Também foram calculados o ATP total (ATPt=a-+b-+g-ATP), fosfodiésteres (PDE=GPC+GPE), fosfomonoésteres (PME=PE+PC), e as razões PME/PDE, PCr/ATPt, e PCr/Pi. O magnésio (Mg2+) e os níveis de pH foram calculados com base nos desvios químicos da PCr, Pi, e -ATP. RESULTADOS: Comparativamente aos controles, e assumindo um valor de p < 0,05 estatisticamente significativo, as lesões apresentaram redução dos valores de pH e aumento de Mg2+. Também foram encontrados redução significativa de GPC e PDE, e aumento da relação PME/PDE nas MDC. O parênquima aparentemente normal também demonstrou redução dos valores de pH no córtex frontoparietal e no centro semioval bilateral. As diferenças nos valores de pH, tanto nas lesões como no parênquima aparentemente normal, permaneceram estatisticamente significativas nos subgrupos individuais de MDC (displasia cortical ou hemimegalencefalia; heterotopia; polimicrogiria e/ou esquizencefalia). Não houve correlação entre o tempo da última convulsão e as alterações do pH. CONCLUSÕES: O Mg2+ e o pH são parâmetros muito importantes na regulação bioenergética e estão envolvidos em múltiplas vias da atividade elétrica cerebral. Nossos dados corroboram a ideia de que distúrbios metabólicos ocorrem nas lesões focais de MDC, com propagação para áreas remotas aparentemente normais. As anormalidades de GPC, PDE, e da razão PME/PDE sugerem que há deficiências na renovação das membranas celulares nas lesões dos pacientes com epilepsia e MDC. / INTRODUCTION: Malformations of cortical development (MCD) result from disruptions in the dynamic process of cerebral corticogenesis and are important causes of severe epilepsy, neurodevelopmental delay, motor deficits and cognitive impairment. Metabolism in human epilepsy has been intensely debated, and there are several evidences pointing to brain bioenergetic disturbances as key factors in ictogenesis. Metabolic impairments in cortical malformations have been identified with other neuroimaging tools, such as proton magnetic resonance spectroscopy. To our knowledge, however, phosphorus metabolism in epilepsy caused by MCD has not been thoroughly investigated hitherto. OBJECTIVES: The aim of this study was to evaluate phospholipids metabolism in vivo in a series of patients with epilepsy and MCD. METHODS: Thirty-seven patients with MCD and 31 control subjects were studied using three-dimensional phosphorus magnetic resonance spectroscopy (31P-MRS) at a 3.0 T scanner. The voxels in the lesions were compared to the frontoparietal cortex of the control subjects (the effective volumes were 12.5 cm3). Normal appearing parenchyma was evaluated in homologous voxels of patients and controls encompassing five cerebral regions: right and left nucleocapsular regions, midline frontoparietal cortex and right and left semioval centers. Quantification methods were applied to fit the time-domain data to the following resonances: phosphoethanolamine (PE), phosphocholine (PC), glycerophosphoethanolamine (GPE), glycerophosphocholine (GPC), inorganic phosphate (Pi), phosphocreatine (PCr), and a-, b-, and g-adenosine triphosphate (ATP). We also estimated the total ATP (ATPt=a-+b-+g-ATP), phosphodiesters (PDE=GPC+ GPE), phosphomonoesters (PME=PE+PC), and the PME/PDE, PCr/ATPt, and PCr/Pi ratios. The magnesium (Mg2+) levels and pH were calculated based on PCr, Pi, and -ATP chemical shifts. RESULTS: Compared to controls and assuming that a p-value < 0.05 indicates significance, the MCD lesions exhibited lower pH values and higher Mg2+ levels. The lesions also presented significant reduction of GPC and PDE, and an increased PME/PDE ratio. The otherwise normal appearing parenchyma also demonstrated lower pH values in the frontoparietal cortex and bilateral centrum semiovale. The differences in pH values, both in the lesions and in the normal appearing parenchyma, remained statistically significant in individual subgroups of MCD (hemimegalencephaly or cortical dysplasia; heterotopia; polymicrogyria and/or schizencephaly). There was no correlation between the time of the last seizure and the pH abnormalities. CONCLUSIONS: Mg2+ and pH are very important in the regulation of bioenergetics and are involved in many electrical activity pathways in the brain. Our data support the idea that metabolic impairments occur in the lesions of MCD, with propagation to remote normal appearing parenchyma. The GPC, PDE, and PME/PDE abnormalities suggest that there are membrane turnover disturbances in MCD lesions.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:36:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 321939.pdf: 629614 bytes, checksum: 3a028aa2639bbe16eabae0603dd5e3f1 (MD5) Previous issue date: 2004-06-21 / Perda de fun??o renal ? reconhecidamente uma das complica??es secund?rias ao uso intravascular de radiocontrastes. A membrana celular e os sistemas de transporte s?o poss?veis alvos para a toxicidade destas subst?ncias. O objetivo do presente estudo foi examinar os efeitos de diatrizoato de s?dio (DS), diatrizoato meglumina (DM), um composto de diatrizoatos (CD), e Hypaque-M 76? sobre sistemas espec?ficos de transporte de membrana celular, usando o eritr?cito como modelo. A atividade da bomba de Na+/K+ foi determinada, o n?mero de bombas de Na+/K+ foi verificado, e o transporte celular de L-arginina e colina avaliado em eritr?citos obtidos de indiv?duos saud?veis e de pacientes que sofreram cateterismo card?aco. O influxo de pot?ssio foi 1,50?0,35, 1,32?0,37, 1,28?0,30, e 1,01?0,25 mmol/L cel/h nos grupos controle, DS, DM e CD, respectivamente (P=0,004; CD versus grupo controle). Exposi??o ao radiocontraste composto Hypaque-M 76? durante cateterismo card?aco diminuiu a atividade de bomba de Na+/K+ (1,40?0,36 vs. 1,27?0,40 mmol/L cel/h; P=0,039). O n?mero de bombas de Na+/K+ ativas em presen?a de DS foi diminu?do (156?36 vs. 143?34 bombas/eritr?cito; P=0,015). O transporte de membrana de L-arginina e colina permaneceu inalterado, exceto em concentra??es extracelulares de radiocontrastes muito altas. Estes resultados sugerem que efeitos seletivos sobre a fun??o dos sistemas de transporte de membrana analisados parecem participar do quadro de citotoxicidade que acompanha a insufici?ncia renal aguda induzida pelos radiocontrastes.