[pt] Os Hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (HPAs) são contaminantes carcinogênicos e mutagênicos, freqüentemente encontrados no ambiente. Muitos organismos são capazes de metabolizá-los rapidamente, tornando de fundamental importância o desenvolvimento de técnicas analíticas para a determinação de seus metabólitos. A determinação do 1- hidroxipireno é considerada com uma das primeiras etapas para a avaliação do risco ambiental por exposição dos HPAs. O pireno é um dos compostos predominantes desta classe de xenobióticos e o 1-hidroxipireno é o seu principal metabólito. Neste estudo é apresentado uma método para análise qualitativa do 1-hidroxipireno. Testes foram realizados afim de viabilizar a aplicação de uma metodologia para análises de rotina em amostras biológicas. O método escolhido envolve uma etapa de hidrólise ácida com subsequente extração líquido-líquido para obtenção do 1- hidroxipireno. A cromatografia de permeação em gel (CPG) foi empregada como um método de separação de lipídios, seguida de uma etapa de cromatografia líquida de coluna aberta. Uma vez que o 1-hidroxipireno é um composto de baixa volatilidade, foi incluída uma etapa de derivação com BSTFA e seguida de análise por CG/EM. / [en] Polycyclic Aromatic Hydrocarbons are ubiquitous pollutants that usually present carinogenic and mutagenic effects. Several organisms are able to metabolize them quickly, and therefore becoming very important the development of analytical techniques for their metabolites determination. The chemical analyses of 1-hydroxipyrene is one of the first steps for evaluation of environmental assessment by PAH exposure. Pyrene is one of the principal compounds of this xenobiotic class and 1-hydroxipyrene is yours major metabolite. This study presents a method for qualitative analysis of 1-hydroxipirene. Tests were performed due to allow the use of a methodology for routine analysis in biological samples. The chosen method included acid hydrolysis followed of liquid-liquid extraction to obtain 1- hydroxipyrene. Gel permeation chromatography (GPC) was applied as a lipid separation method, and then liquid chromatography of opened column. As long as the 1- hydroxipyrene is a low volatile compound, it was included one step of derivatization with BSTFA followed by gas chromatography/mass spectrometer (GC/MS) analysis.

Doctor en Ciencias de la Ingeniería, Mención Ingeniería Química y Biotecnología / Streptomyces leeuwenhoekii C34 es una nueva cepa que fue aislada desde la laguna Chaxa ubicada en el Desierto de Atacama, Chile. Esta cepa produce metabolitos especializados con actividad contra Staph. aureus resistente a meticilina (MRSA): chaxamicinas y chaxalactinas. La secuencia genómica de S. leeuwenhoekii C34 se obtuvo mediante las tecnologías de Illumina Miseq y PACbio RS II SMRT. El genoma se utilizó para identificar clústers de genes biosintéticos (BGCs) que codifican para metabolitos especializados a través de minería de genomas, y para desarrollar un modelo a escala genómica (GSM) para estudiar las rutas de biosíntesis de producción de metabolitos especializados. Se encontraron 34 BGCs en el genoma de S. leeuwenhoekii C34, más un BGC ubicado en el plásmido pSLE2. Se encontró tres BGCs para lazo-péptidos. Específicamente, se identificó el producto del BGC del lazo-péptido 3 en el sobrenadante de S. leeuwenhoekii C34 cultivado en medio TSB/YEME y se expresó exitosamente en el huésped heterólogo S. coelicolor M1152. Se confirmó que este lazo-péptido era el mismo que la chaxapeptina, recientemente descrita para S. leeuwenhoekii C58. Por otra parte, se identificó un BGC de 64 kb (locus 1083651 a 1147687) que codifica para un híbrido trans-AT PKS/NRPS. Es probable que el producto de este BGC sea un compuesto halogenado debido a la presencia de un gen, sle09470, que codifica para una enzima cloradora. Para estudiar este clúster de genes, se desarrollaron diferentes cepas derivadas de S. leeuwenhoekii. También, el BGC se clonó en huéspedes heterólogos: S. coelicolor M1152, M1154 and S. albus. A través de análisis de HPLC MS/MS y comparación de perfiles de metabolitos, se identificó un grupo de compuestos con patrón clorado, sin embargo se descartaron como posibles productos del BGC ya que además de encontrarse en las cepas de S. leeuwenhoekii también se encontraron en muestras de S. coelicolor M1152. Por otra parte, se detecto un metabolito con una señal de m/z 611.53 [M + H]+ solamente en las muestras de S. leeuwenhoekii M1614 ( chaxamycin BGC) y M1619 ( chaxamycin BGC; sle09560). Se requieren msá estudios para confirmar si los metabolitos expresados diferencialmente corresponden a un producto del híbrido transAT-PKS/NRPS BGC. Para construir el GSM de S. leeuwenhoekii C34 se desarrolló una interfaz basada en python, que permite: buscar genes de Streptomyces asociados a reacciones en la base de datos KEGG, realizar BLAST local contra S. leeuwenhoekii C34, comparar los dominios de proteínas, descargar información de los metabolitos, construir el GSM y realizar simulaciones usando COBRApy. Las rutas biosintéticas de chaxamicinas, chaxalactinas, desferrioxaminas, ectoina y el producto del híbrido transAT-PKS/NRPS BGC (híbrido PK-NP) se incluyeron en el modelo. El modelo, iVR1007, consiste de 1722 reacciones, 1463 metabolitos y 1007 genes, y se validó usando información experimental de crecimiento en diferentes fuentes de carbono, nitrógeno y fósforo, mostrando un 83.7 % de precisión. El modelo se usó para encontrar deleción y sobre-expresión de genes no intuitivas que predicen un aumento en la producción de precursores de chaxamicinas, chaxalactinas e híbrido PK-NP. Las modificaciones predichas podrán ser usadas para realizar ingeniería metabólica de S. leeuwenhoekii C34 para incrementar la producción de metabolitos especializados.

La interacción entre la actividad humana y los diferentes biosistemas no siempre se ha llevado a cabo en un modo sostenible, por un lado debido a un uso indiscriminado de los recursos naturales y por otro producto de una postura egocéntrica en detrimento de los ecosistemas, generando una contaminación ambiental de manera sistemática. En este sentido, en el presente trabajo de tesis se han desarrollado un conjunto de metodologías analíticas basadas en técnicas separativas para el estudio de diferentes tipos de biosistemas donde la acción del hombre ha jugado un papel central, y que servirán en un futuro para profundizar en el conocimiento de esta interacción. Estas metodologías analíticas se implementaron para el estudio de dos biosistemas fundamentales: el reino vegetal como fuente natural de principios activos tanto en el campo terapéutico como nutricional, y por otro lado, en las implicaciones de la contaminación en la salud humana. En un primer estudio se seleccionaron especies de plantas del género Erythroxylum, avaladas por la práctica etnomédica, para el establecimiento de metodologías que permitieron la identificación y aislamiento de sus principales agentes antioxidantes y antivirales. En un segundo término se estudió el comportamiento de la quercetina bajo un método de microextracción en fase líquida y su determinación en alimentos vegetales para una posible caracterización como agente antinutricional. En tercer y cuarto lugar se desarrollaron metodologías de microextracción en fase sólida y líquida para el estudio de compuestos orgánicos volátiles de importante toxicidad y sus metabolitos en dientes humanos con vistas a establecer una herramienta analítica futura que permita correlacionar la exposición a estas sustancias y la salud bucal. A continuación se describen los diferentes estudios realizados. / The interaction between the human activity and different ecosystems has not always been carried out in a sustainable way: on the one hand, due to an indiscriminate use of the natural resources and on the other hand as a product of a self-centred position in the detriment of the ecosystems, generating an environmental contamination in a systematic way. In this sense, in the present work we have developed a set of analytical methodologies based on separation techniques for the study of different types of bio-systems where the action of the man has played a central role; these methodologies will serve also in the future to study these bio-systems more in depth. These analytical methodologies were implemented for the study of two main bio-systems: the vegetal kingdom like natural source of active principles as much in the therapeutic field as the nutritional one, and contaminated ecosystems and their implications in the human health. In a first study species of Erythroxylum genus were selected, used in ethnomedical practice, for the establishment of methodologies in the search of antiviral and antioxidant agents. In the second part, an analytical method was established for the characterization of quercetin: this method could allow future studies of this compound as an antinutritional agent of vegetal origin. In the third and fourth parts we have developed a series of methodologies for the study of volatile organic compounds of important toxicity and its metabolites to establish a future analytical tool to correlate the exposure to these substances and the oral health.

El género Vanilla pertenece a la familia Orchidaceae y es la mayor fuente de esencia natural de vainilla. Esta esencia es base en productos de consumo diario como bebidas, comestibles, suplementos y perfumes. Su agradable y refinado aroma se encuentra constituido por más de 200 sustancias químicas; de todas ellas la más importante es la vainillina. Las especies de importancia comercial son tres, Vanilla planifolia (Madagascar, México), Vanilla tahitensis (Tahiti) y Vanilla pompona (Guadalupe y Martinico). En el Perú, si bien se conocen siete especies de Vanilla repartidas en los humedales de Madre de Dios, estas carecen de frutos en la naturaleza debido a la ausencia de polinizadores naturales. Estudios anteriores han señalado la presencia de los glucósidos A y B, tanto en los frutos como en las hojas y tallos, y su posible relación con los metabolitos asociados al particular sabor y aroma de la vainilla. Dado el limitado acceso a los frutos, se han estudiado las hojas de tres de estas especies de Vanilla nativas. Este trabajo consiste en el estudio metabolómico, mediante la espectroscopía de resonancia magnética nuclear (RMN), de la V. pompona, V. riberoi y V. palmarum en búsqueda de los mencionados posibles precursores. Se hará uso también de la espectrometría de masas (MS) y análisis multivariable (MVA) como técnicas complementarias. Se identificaron 22 metabolitos, entre primarios y secundarios, mediante RMN, para las tres Vanilla sp. estudiadas, en comparación con la literatura. Entre los metabolitos determinados están el glucósido A, el glucósido B y el alcohol 4-hidroxibencílico, como glucósido y aglicona. Se observaron los pesos moleculares de los metabolitos identificados mediante MS. A través del PCA se logró una marcada distinción basada en los perfiles metabolómicos de cada Vanilla sp. estudiada. Asimismo, mediante OPLS-DA se identificaron los posibles biomarcadores y su correlación con cada especie de Vanilla. III Por lo tanto, los resultados preliminares sugieren que la metodología desarrollada en este trabajo de investigación puede ser implementada para el estudio de productos naturales. Al final de este trabajo se incluyen ciertas recomendaciones para futuras investigaciones. / Tesis

La presente investigación tiene como objetivo el estudio fitoquímico de la especie Capparis ovalifolia, buscando identificar algunos metabolitos presentes en sus hojas, las cuales son utilizadas en la medicina tradicional y como insecticida natural. Se colectó la muestra de Capparis ovalifolia en la localidad Batán Grande (1000 msnm), provincia de Ferreñafe, departamento de Lambayeque. El material vegetal colectado, fue estudiado taxonómicamente en el Museo de Historia Natural de la UNMSM, para luego ser analizado químicamente en nuestros laboratorios. El análisis de este material vegetal consistió en la obtención de aceites esenciales por el método de destilación por arrastre de vapor. Posteriormente se prepararon extractos crudos en diversos solventes, a partir de ellos se aislaron metabolitos secundarios usando diversas técnicas cromatográficas para la separación y purificación de fracciones y metabolitos. Finalmente en base a métodos espectroscópicos IR, UV-V, RMN mono y bidimensional y espectrometría de masas, se procedió a la elucidación estructural de algunos de los metabolitos presentes en esta especie. Mediante GC-FID se reconoció la composición estructural del aceite esencial de esta planta. A partir del extracto de acetato de etilo se aisló un compuesto cristalino, incoloro, de punto de fusión 210-212 °C, sus datos espectroscópicos confirman que se trata del triterpeno C30H50O llamado lupeol. Se ha demostrado la potencialidad antioxidante de esta especie en función a su contenido de lupeol. El estudio de RMN mono y bidimensional permitió determinar su estereoquímica. Se aisló un metabolito sólido, amorfo, de color blanco, que corresponde a un hidrocarburo ácido de cadena larga y un compuesto sólido de color amarillo, amorfo, de tipo terpeno. El aceite esencial de las hojas de Capparis ovalifolia contiene como productos mayoritarios al mentol, acetato de metilo, 3-octenona, viridiflorol, neo-mentol, piperitona, mentona e isomentona. Cabe destacar que el contenido de mentol en esta especie es de 51,7 % convirtiéndolo en una fuente natural de esa sustancia de probada actividad antiespasmódica. / Tesis

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Objetivou-se com o presente estudo avaliar o efeito de diferentes nÃveis de volumoso:concentrado sobre: a) O desenvolvimento biomÃtrico corporal, testicular e epididimÃrio. b)O perfil metabÃlico em cordeiros Santa InÃs.Foram utilizados 29 cordeiros, nÃo castrados, com peso vivo mÃdio inicial de 14,77  1,26 kg e, aproximadamente, 60 dias de idade. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema de parcelas subdivididas. Os tratamentos experimentais consistiam em nÃveis crescentes de relaÃÃo volumoso: concentrado (100:0; 80:20; 60:40; 40:60 e 20:80). O feno de capim Tifton 85 foi utilizado como volumoso Ãnico e as raÃÃes foram formuladas segundo recomendaÃÃes do NRC (2007)para categoria de animais em crescimento (acima de 4 meses) e ganho de 250 g/dia. Semanalmente, mensurou-se o escore de condiÃÃo corporal (ECC), peso corporal (PC), comprimento corporal (CC), altura de cernelha (AC), altura de garupa (AG), largura de garupa (LG), largura de peito (LP), perÃmetro torÃcico (PT), perÃmetro escrotal (PE), comprimento testicular (CT), largura testicular (LT), espessura testicular (ET), comprimento da cauda do epidÃdimo (CCE), largura da cauda do epidÃdimo (LCE), espessura da cauda do epidÃdimo (ECE) e espessura da bolsa escrotal (EBE). O volume testicular foi calculado pela fÃrmula do cilindro (V=2[(r2) x Π x h]). A forma testicular foi calculada pela razÃo da largura/comprimento e classificada em longo se a razÃo fosse menor ou igual a 0,5, longo-moderado se 0,510 e 0,625, moderado-oval se 0,626 e 0,750, oval-esfÃrico se 0,751 e 0,875 e esfÃrico quando a razÃo fosse maior que 0,875. Em relaÃÃo ao perfil metabÃlico, foram colhidas amostras de sangue, quinzenalmente, as quais foram analisadas e quantificadas os teores de albumina, proteÃnas totais, globulinas, colesterol total, glicose, ureia, fosfato inorgÃnico e magnÃsio. Com relaÃÃo as mensuraÃÃes biomÃtricas, foi constatado um efeito linear para todas as variÃveis com o aumento da relaÃÃo volumoso:concentrado. Com relaÃÃo a forma testicular, houve uma predominÃncia do formato longo/esfÃrico, no entanto, a partir da coleta 5 houve uma homogeneidade nas formas longo/esfÃrico e longo/oval. No presente trabalho, as medidas biomÃtricas apresentaram correlaÃÃes que variaram de 0,527 a 0,983, sendo as mais significativas, ECC x PT, r=0,94; ECC x PC, r=0,92; PT x PC, r= 0,94; CC x ECC, r= 0,90; PT x CC, r=0,89. No tocante ao estudo do perfil metabÃlico, observou-se interaÃÃo da inclusÃo de diferentes nÃveis de concentrado e o tempo de coleta para as concentraÃÃes de proteÃnas totais, albumina, ureia, colesterol, fÃsforo e magnÃsio, no entanto, globulinas e glicose nÃo sofreram influencia da dieta e nem do tempo de coleta. A inclusÃo de nÃveis diferentes de concentrado afeta positivamente o crescimento dos cordeiros. As medidas corporais podem ser utilizadas para estimar o desenvolvimento reprodutivo. As dietas elaboradas segundo o NRC nÃo atenderam completamente as necessidades metabÃlicas dos cordeiros. O perfil metabÃlico à um excelente ferramenta para adequaÃÃo do manejo nutricional. / The aim of the present study was to evaluate the effect of different levels of bulk food: focused on biometric development (body, testicular and epididymal) and metabolic profile in Santa Ines lambs. 29 uncastrated lambs were used with average weight of 14.77  1.26 kg and approximately 60 days of age. The experimental design was the randomized blocks with five treatments and six replications. The treatments consisted of increasing levels of roughage:concentrate ratio (100:0, 80:20, 60:40, 40:60 and 20:80). The Tifton 85 hay was used as unique roughage and the diets were formulated according to the NRC (2007) recommendations for the animal category growth (over 4 months) and gain 250 g / day. Weekly the body condition score (BCS), body weight (BW), body length (BL), withers height (WH), hip height (HH), rump width (RW), Chest width (CW), chest girth (CG), scrotal circumference (SC), testicular length (TL), width of testis (WT), testicular thickness (TT), length of the tail of the epididymis (LTE), width of the tail of the epididymis (LTE), thickness of the tail of the epididymis (TTE) and thickness of the scrotum (TS) were measured. Testicular volume was calculated from the cylinder formula (V = 2 [(r2) Π x h]). Testicular shape was calculated as the ratio of the width/length and classified as long if the ratio is less than or equal to 0.5, long-moderate if is between 0.510 and 0.625, moderate-oval if is between 0.626 and 0.750, oval-spherical if is between 0.751 and 0.875, and spherical when the ratio is greater than 0.875. Regarding the metabolic profile, blood samples were collected fortnightly, and in the laboratory were analyzed and quantified the levels of albumin, total protein, globulin, total cholesterol, glucose, urea, inorganic phosphate and magnesium. Regarding biometric measurements, linear effect was found for all variables with increasing forage:concentrate ratio. Regarding testicular shape, there was a predominance of long/spherical form, however, from the collection 5 there was a homogeneity in long/spherical and long/oval forms. In this paper, biometric measurements showed correlations ranging from 0.527 to 0.983, being the most significant, ECC x PT, r = 0.94; ECC x PC, r = 0.92; PT x PC, r = 0.94;ECC x CC, r = 0.90; EN x CC, r = 0.89. Concerning the study of the metabolic profile was observed interaction of different inclusion levels of concentrate and collection time for concentrations of total protein, albumin, urea, cholesterol, phosphorus and magnesium, however, globulin and glucose did not suffer influence of diet nor the collection time. The inclusion of different levels of concentrate positively affects the growth of lambs. The body measurements can be used to estimate the reproductive development. The diets prepared according to the NRC did not meet completely the metabolic needs of the lambs. The metabolic profile is an excellent tool to adjust the nutritional management.

[ES] Ecología de los terpenos volátiles de la piel de la naranja: comunicación planta-frugívoro Desde hace décadas muchos autores han investigado cómo a lo largo de la evolución, los frugívoros han configurado la forma, el tamaño, el contenido nutricional, color, etc. de los frutos carnosos. Más recientemente se ha intensificado el interés de la comunidad científica por establecer el papel de determinados compuestos químicos en la interacción entre frugívoros y frutos carnosos. Los metabolitos secundarios de las plantas se sintetizan en pequeñas cantidades y pueden realizar diferentes funciones especializadas en las interacciones bióticas y abióticas de las plantas con su entorno, como defensa frente a herbívoros, atracción de insectos polinizadores, comunicación entre diferentes órganos de una planta, etc. Los cítricos producen principalmente terpenos como metabolitos secundarios característicos, que se almacenan en las glándulas de aceites esenciales de todos sus órganos excepto raíces. En el flavedo de los frutos se producen sobretodo monoterpenos, siendo el más abundante el D-limoneno. El objetivo general de la tesis es investigar los mecanismos de comunicación cítricos-frugívoros mediados por el compuesto volátil D-limoneno del flavedo. Para ello realizamos diversos ofrecimientos de frutos cítricos en campos de cultivo de ambientes tropicales (Sâo Paulo, Brasil) y Mediterráneo (Valencia, España) y mediante el uso de cámaras de fototrampeo y huellas, estudiamos la influencia que este compuesto ejerce en el comportamiento de los frugívoros. Gracias al uso de naranjas con reducido contenido de D-limoneno en su flavedo obtenidas mediante técnicas de ingeniería genética junto a naranjas convencionales con alto contenido de D-limoneno, investigamos el papel específico (atracción/repelencia) de este compuesto en las relaciones de los frutos con los frugívoros vertebrados e invertebrados. El zumo de estos frutos, modificados o no, se somete a paneles de catadores humanos que, aunque detectan diferencias en el olor de los mismos, no son clasificadas como depreciables. La infección de los frutos cítricos por el hongo especialista P. digitatum modifica las características fisicoquímicas de los frutos haciéndolos más atrayentes para los frugívoros vertebrados. El estudio del contenido y emisión de los compuestos orgánicos volátiles de los frutos sanos e infectados revela los cambios químicos en el perfil de los compuestos volátiles como consecuencia de la infección fúngica que resultan atrayentes a los frugívoros vertebrados. La detección de picos importantes de emisión del volátil D-limoneno en frutos con reducido contenido en este compuesto infectados por P. digitatum nos conduce a investigar si el hongo es capaz de emitir este monoterpeno hidrocarbonado. Finalmente se estudia el sistema cítricos-frugívoros desde el punto de vista de su efecto en los ecosistemas. En concreto, evaluamos la posibilidad de que la interacción entre cítricos cultivados y jabalíes introducidos fuera de su distribución nativa pudiera contribuir al asilvestramiento de los cítricos en el continente americano. / [CAT] Ecologia dels terpens volàtils de la pell de la taronja: comunicació planta-frugívor Molts autors proposen que al llarg de l'evolució, els animals frugívors han configurat la forma, la grandària, el contingut nutricional, la textura, etc. dels fruits carnosos. L'estudi de la composició de les característiques específiques dels fruits i la seua interacció amb els animals frugívors en el seu ambient natural està despertant molt interés en la comunitat científica, per a intentar establir el paper de determinats compostos químics en la interacció entre frugívors i fruits carnosos. Els metabòlits secundaris de les plantes se sintetitzen en xicotetes quantitats i poden realitzar diferents funcions especialitzades en les interaccions biòtiques i abiòtiques de les plantes, com a defensa enfront d'herbívora, atracció d'insectes pol¿linitzadors, comunicació entre diferents òrgans d'una planta, etc. En els cítrics s'emmagatzemen principalment en les glàndules d'olis essencials del flavedo dels fruits i són principalment monoterpens, sent el més abundant el D-limonè. L'objectiu general de la tesi és investigar els mecanismes de comunicació cítrics-frugívors mediats pel compost volàtil D-limonè. Per a això realitzem diversos oferiments de fruits cítrics en camps de cultiu d'ambients tropicals (Sâo Paulo, Brasil) i Mediterrànies (València, Espanya) i mitjançant l'ús de cambres de fototrampeig i petjades, estudiem la influència que aquest compost exerceix en el comportament dels frugívors. Gràcies a l'ús de taronges amb reduït contingut de D-limonè al seu flavedo obtingudes mitjançant tècniques d'enginyeria genètica, investiguem el paper específic (atracció/repel.lència) d'aquest compost determinat en les relacions amb els frugívors vertebrats i invertebrats. El suc d'aquests fruits se sotmet a un panell de tastadors humans que, encara que detecten diferències en l'olfacte del suc, aquestes no són classificades com nocives. La infecció dels fruits cítrics pel fong especialista P. digitatum modifica les característiques fisicoquímiques dels fruits fent-los més atraients per als frugívors vertebrats. L'estudi del contingut i emissió dels compostos orgànics volàtils dels fruits sans i infectats revela els canvis químics en el perfil dels compostos volàtils com a conseqüència de la infecció que resulten atraients als frugívors vertebrats. La detecció de pics importants d'emissió del volàtil D-limonè en fruits amb reduït contingut en aquest compost infectats per P. digitatum ens condueix a investigar si el fong és capaç d'emetre aquest terpé hidrocarbonat. Finalment s'estudia la interacció de dues espècies natives del continent asiàtic (porcs senglar i cítrics) interactuant fora de la seua distribució nativa en el continent americà baix noves condicions ecològiques. / [EN] Ecology of volatile terpenes from the orange peel: animal-fruit communication For decades many authors have investigated how frugivores have configured the shape, size, nutritional content, color, etc. of the fleshy fruits along their evolution. More recently, the interest of the scientific community has increased in establishing the role of certain fruit chemical compounds in the interactions between frugivores and fleshy fruits. Secondary metabolites of plants are synthesized in small quantities and perform different specialized functions in the biotic and abiotic interactions of plants with their environment, such as defense against herbivores, attraction of pollinating insects, communication between different organs within a plant, etc. Citrus fruits mainly produce terpenes as characteristic secondary metabolites, which are stored in essential oil glands in all their organs except roots. In the fruit flavedo, monoterpenes are produced predominantly, being D-limonene the most abundant one. The general objective of this thesis is to investigate the mechanisms of citrus fruit/frugivore communication mediated by the volatile compound D-limonene abundantly accumulated in the fruit favedo. For this, we make various citrus fruit offerings in orchards in both tropical (Sâo Paulo, Brazil) and Mediterranean (Valencia, Spain) environments and follow frugivores behavior through the use of photo-trapping and fingerprint cameras. By using genetically-modified oranges with reduced content of D-limonene in their flavedo compared to conventional oranges with high D-limonene content, we investigate the specific role (attraction / repellence) of this compound in fruit interactions with vertebrate and invertebrate frugivores. The juice of these fruits, modified or not, is subjected to human panels that, though detecting differences in their smell, do not find any of them as depreciable or better than the other. The infection of citrus fruits by the specialized fungus P. digitatum modifies the physicochemical characteristics of the fruits making them more attractive to vertebrate frugivores. The study of the content and emission of volatile organic compounds of healthy and infected fruits reveals the chemical changes in the profile of volatile compounds resulting from fungal infection that are attractive to vertebrate frugivores. The detection of pronounced emission peaks of D-limonene in genetically-modified fruits with reduced content in this compound infected by P. digitatum leads us to investigate whether the fungus is capable of producing this hydrocarbonated monoterpene. Finally, the citrus-frugivores system is studied from the point of view of its effect on the ecosystem. Specifically, we evaluate the possibility that the interaction between cultivated citrus and wild boar introduced from outside its native area may contribute to the naturalization of citrus in the American continent. / Peris Rodrigo, JE. (2010). ECOLOGÍA DE LOS TERPENOS VOLÁTILES DE LA PIEL DE NARANJA: COMUNICACIÓN PLANTA-FRUGÍVORO [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/135827 / TESIS

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El objetivo del presente estudio fue evaluar la actividad captadora de radicales y el efecto antioxidante del bulbo de Allium sativum variedad Huaralino mediante técnicas químicas y bioquímicas in vitro. El extracto del bulbo se preparó en agua bidestilada en concentraciones de 20 – 40 mg/mL. Los ensayos para estudiar metabolitos secundarios azufrados y sus propiedades fueron la cuantificación de alicina y compuestos orgánicos con grupo tiol; y la formación de nitrosotioles. Para los metabolitos oxigenados se evaluaron polifenoles y flavonoides. La capacidad de captar radicales libres se determinó por las técnicas de ABTS.+, DPPH, captación de radical superóxido, descomposición de peróxido de hidrógeno y FRAP; todos los ensayos fueron espectrofotométricos. También se cuantificó minerales por absorción atómica. Los ensayos para estudiar capacidad antioxidante in vitro se hicieron por formación de carbonilos en albúmina tratada con peróxido de hidrógeno y niveles de TBARS en glóbulos rojos tratados también con peróxido de hidrógeno. Se realizó la determinación de V3, V4 e ICR, en mitocondria aislada de hígado de rata, por polarografía. Los principales resultados sobre metabolitos azufrados y oxigenados fueron: a) alicina 2,8 mg/g de bulbo fresco pelado, b) tioles de bajo peso molecular 0,95 mol Cis/g masa seca, c) polifenoles 2,52 mg EAG/g masa seca y d) 1,71 mg EQ/g masa seca. La captación de radicales libres lo realizó mediante la donación de hidrógenos, la donación y captación de electrones, la captación de superóxido, la descomposición de peróxido de hidrógeno y la reducción del hierro férrico. El extracto ejerce protección antioxidante disminuyendo significativamente (p< 0,05) la formación de carbonilos y los niveles de TBARS. También disminuye el ICR dependiendo de la concentración del extracto. En conclusión, el extracto acuoso del bulbo de Allium sativum variedad Huaralino tiene metabolitos antioxidantes azufrados y oxigenados con capacidad de captar radicales libres que ejercen efecto antioxidante in vitro, comparables con la literatura internacional. / Tesis

A presença de resíduos de medicamentos antibacterianos em alimentos é um importante problema de saúde pública. Estas substâncias podem estar presentes nos alimentos em níveis inaceitáveis como resultados de práticas produtivas inadequadas. Devido a estas preocupações, são estabelecidos limites máximos de resíduos para estas substâncias (LMRs). No caso das sulfonamidas, este valor de LMR refere-se à soma do princípio ativo e de todos seus metabólitos. Neste trabalho, identificam-se e caracterizam-se metabólitos de sulfaquinoxalina (SQX) em diversas espécies animais. Dentro do processo investigativo, foram realizados estudos comparativos de métodos de extração, processos de validação e determinação de efeito de matriz. Foi elaborado e proposto um modelo para a priorização de fármacos baseado em análise de risco e discutiu-se o panorama atual da presença de resíduos de sulfonamidas em amostras ambientais. A investigação da formação de metabólitos de SQX in vitro e in vivo levaram à identificação de três compostos, dois deles ainda não descritos na literatura: N4-acetil-SQX, SQX-OH e N4-acetil-SQX-OH. O perfil de formação destes compostos em diversas espécies animais foi analisado e discutido. / The presence of antibacterial drugs residues in food is an important public health issue. These substances can be present in food at unacceptable levels due to inappropriate veterinary practices. Because of that, maximum residue levels (MRL) are established for these compounds. In the sulfonamide drugs case, this value corresponds to the sum of parent drug and their metabolites. In the present work, sulfaquinoxaline (SQX) metabolites were identified and characterized in several animal species. Inside that investigation process, several studies were developed about extraction methods, validation processes and matrix effects determination. A model for drugs residues prioritization based on risk analysis was proposed. Also, the state-of-art of sulfonamides residues analysis in environmental samples was discussed. The in vivo and in vitro investigation of SQX metabolites formation lead us to the identification of 3 compounds, 2 of them previously unreported: N4-acetyl-SQX, SQX-OH and N4-acetyl-SQX-OH. The formation profile of these compounds in several animal species was analyzed and discussed.