Giardia intestinalis is a protozoan causing diarrhea worldwide. Beside its medical importance, it is evolutionary distant protist with two nuclei within a cell adapted for parasitic life in the environment poor of oxygen. Its genome is small and compact in term of gene content and size. It is therefore an attractive model organism for studies of minimal requirements for cellular processes. Present work brings new partial information on different levels of chromosome integrity maintenance of this parasite. Our study presents characteristics of chromosome termini and their protection. We localized telomeres during all stages of the trophozoite cell cycle and determined the length of Giardia telomeres ranging from 0.5 to 2.5 kb, we proved an existence of an active telomerase enzyme synthesizing telomeric repeats in in this parasite, despite the fact that giardial telomerase is structurally divergent. Present data support the view that the chromosomal termini in Giardia are maintained in a conservative manner that is common to other eukaryotes. We described effects of commonly used drug for treatment of anaerobic infections, metronidazole, on DNA and cell cycle progression in susceptible and resistant cell lines. Incubation of cells with this drug causes phosphorylation of histone H2A in cell nuclei...

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-12-03T16:13:10Z No. of bitstreams: 1 IVAN DA SILVA KULMANN.pdf: 1348006 bytes, checksum: 0a65b00daaed554380496e8ada86e7d2 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-12-03T16:13:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IVAN DA SILVA KULMANN.pdf: 1348006 bytes, checksum: 0a65b00daaed554380496e8ada86e7d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-12-03T16:13:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IVAN DA SILVA KULMANN.pdf: 1348006 bytes, checksum: 0a65b00daaed554380496e8ada86e7d2 (MD5) Previous issue date: 2018 / O metronidazol, denominado quimicamente por 1-(β-hidroxietil)-2-metil-5-nitroimidazol é um fármaco derivado sintético do 5-initromidazol, pertencente à classe dos imidazóis, subgrupo dos nitroimidazóis. Confere atividade antiprotozoária, antimicrobiana, sendo clinicamente eficaz na giardíase, tricomoníase e amebíase. Levando em consideração que a terapêutica destas parasitoses possui um tempo de tratamento geralmente longo, nanosistemas carreadores de fármacos tornam-se uma alternativa eficaz de auxiliar no controle de liberação do fármaco, adequar sua especificidade e melhorar a seletividade no local de ação. Dentre os componentes que podem ser utilizados como núcleo oleoso de nanocápsulas, está o óleo de melaleuca (Melaleuca Alternifolia Cheel). Este apresenta atividade antibacteriana, antifúngica e antiprotozoária bastante promissora. Desta forma o presente trabalho teve por objetivo estudar, desenvolver e caracterizar nanocápsulas poliméricas contendo metronidazol e óleo de melaleuca coencapsulados, como alternativa moderna ao tratamento de infecções envolvendo giardíase e trichomoníase. As nanocápsulas apresentaram pH ácido, diâmetro de partícula inferior a 300 nm, distribuição granulométrica estreita, potencial zeta negativo (-15,68 a -39,58 mV) e eficiência de encapsulação (EE) superior a 84%. O estudo da liberação in vitro, realizado em sacos de diálise, demonstrou que as formulações foram eficientes em controlar a liberação da metronidazol. Assim, estas nanopartículas apresentam-se como sistemas promissores para administração de metronidazol, com potencial para constituir-se em um tratamento eficaz para giardíase e tricomoníase. / Metronidazole, termed chemically by 1- (β-hydroxyethyl) -2-methyl-5-nitroimidazole is a synthetic derivative of 5-initromidazole, belonging to the class of imidazoles, subgroup of nitroimidazoles. It shows antiprotozoal activity, antimicrobial, being clinically effective in giardiasis, trichomoniasis and amebiasis. Taking into consideration that the therapy of these parasites has a generally long treatment time, drug carrier nanosystems have become an effective alternative to assist in drug release control, to tailor its specificity and to improve site selectivity of action. Among the components that can be used as an oily nucleus of nanocapsules is melaleuca oil (Melaleuca Alternifolia Cheel), due to its antibacterial, antifungal and antiprotozoal activity, it is promising. In this way the present work had the objective to study, develop and characterize polymeric nanocapsules containing metronidazole and coencapsulated melaleuca oil, as a modern alternative to the treatment of infections involving giardiasis and trichomoniasis. The nanocapsules presented acid pH, particle diameter less than 300 nm, narrow particle size distribution, negative zeta potential (-15.68 to -39.58 mV) and encapsulation efficiency of over 84%. The study of the in vitro release, carried out in dialysis bags, demonstrated that the formulations were efficient in controlling the release of metronidazole. Thus, these formulations present themselves as promising systems for administration of metronidazole, with potential to constitute an effective treatment for giardiasis and trichomoniasis.

A Diabetes mellitus do tipo I (IDDM), doença metabólica caracterizada pela deficiência na produção de insulina, causa profundas alterações sistêmicas, incluindo a cavidade bucal. A doença periodontal, que se apresenta mais agressiva em pacientes diabéticos, até mesmo na infância, tem como agentes etiológicos microrganismos denominados periodontopatógenos, dentre eles o Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans), anteriormente chamado Actinobacillus actinomycetemcomitans, que em associação às alterações na resposta imune e inflamatória decorrentes da diabetes, poderá causar maior reabsorção do osso alveolar precocemente em crianças. A identificação precoce destes agressores poderá ser extremamente útil para a instituição de medidas preventivas e terapêuticas que possam inibir ou minimizar os efeitos nocivos da IDDM e suas conseqüências para a cavidade bucal. Para este fim, métodos moleculares de investigação estão sendo cada vez mais utilizados, destacando-se a Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (Real-Time PCR) com alta especificidade e sensibilidade para detectar e quantificar microrganismos, mesmo em pequeno número e em meios, até então, pouco explorados como a saliva. Por fim, a utilização de um antimicrobiano seguro, que possa ser aplicado topicamente por meio da escovação dentária, como o metronidazol 25% na forma de gel, poderia reduzir ou eliminar o A. actinomycetemcomitans evitando a progressão da doença periodontal. Assim, este estudo foi realizado para observar a presença do A. actinomycetemcomitans antes e após o uso do gel de metronidazol 25% uma vez ao dia, em substituição a uma das escovações diárias. Avaliou também a influência deste protocolo de tratamento nos índices de placa, gengival e profundidade de sondagem em 32 crianças, na faixa etária de 3 a 12 anos de idade, divididas em dois grupos: diabéticos tipo I (D) e não diabéticos (ND). Para avaliação da presença do A. actinomycetemcomitans foi utilizado o método da Real-Time PCR. Os resultados obtidos sugerem que o gel de metronidazol 25%, aplicado segundo o protocolo estabelecido neste trabalho foi efetivo para a redução dos índices de placa, gengival e do A. actinomycetemcomitans, no entanto, pareceu não atuar sobre a profundidade de sondagem. Os dados obtidos sugerem que, ainda que a ocorrência da bactéria nos indivíduos avaliados tenha sido baixa e a diferença entre o grupo diabéticos e não diabéticos tenha restringido-se apenas à profundidade de sondagem, o gel estudado demonstrou ser promissor na prevenção da doença periodontal em crianças diabéticas, havendo necessidade da realização de mais estudos clínicos randomizados. / Type I Diabetes mellitus (IDDM) is a metabolic disease characterized by deficiency on the insulin production, causing great systemic alterations, including at the oral cavity. Periodontal disease is more aggressive in diabetic patients, even during the childhood, and presents as etiological microorganisms the Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans), formerly Actinobacillus actinomycetemcomitans. This microorganisms in association to alterations in the immune and inflammatory answers caused by diabetes, can promote a larger and early alveolar bone resorption even in children. So, the early identification of these aggressors could be extremely useful for the institution of preventive and therapeutic measures in order to inhibit or minimize the noxious effects of IDDM and their consequences in the oral cavity. Aiming this early identification, molecular biology methods of investigation are being used more frequently, pointing out the Real Time Polymerase Chain Reaction (Real-Time PCR), which presents high specificity and sensibility to detect and to quantify microorganisms, even in small number and in different media little explored like saliva. The use of a safe topical antibiotic, such as metronidazole 25% gel, which used in association with dental brushing, could reduce or eliminate A. actinomycetemcomitans, avoiding the progression of the periodontal disease. This study evaluated the presence of A. actinomycetemcomitans before and after the use of metronidazole 25% gel once a day, in substitution to one of the daily teeth brushing. It also evaluated the influence of this treatment protocol on the plaque, gingival and probing depth indexes. Thirty-two children, aging from 3 to 12 years were included in this study and they were divided into two groups: type I diabetic (D) and no diabetic (ND). Real-Time PCR methods were used to evaluate the presence of A. actinomycetemcomitans. The obtained data suggest that metronidazole 25% gel, applied according to the established protocol in this study, effectively reduced plaque and gingival indexes and the number of A. actinomycetemcomitans. However, no influence was observed regarding the probing depth. The obtained data suggest that, although the number of bacteria has been small and the difference between the D and ND groups was not observed only regarding probing depth, the studied antibiotic gel demonstrated to be promising in preventing periodontal disease in diabetic children. More randomized clinical trials are necessary for a final conclusion.

Radiossensibilizadores são definidos como agentes químicos que aumentam a sensibilidade das células hipóxicas à radiação, visando o aumento da eficácia da radioterapia no tratamento do câncer. Alguns Carboxilatos de Rh (II) e compostos nitroimidazólicos têm sido testados como radiossensibilizadores em doses elevadas de radiação, obtendo-se resultados significativos. Neste trabalho, foram sintetizados vários carboxilatos e um amidato de Rh (II): propionato, butirato, trifluoroacetato, citrato e trifluoroacetamidato, assim como os seus respectivos adutos com metronidazol, de fórmula geral: [Rh2(RCOO)4metro2] (R = CH3, C2H5, C3H7, C5 H7O5, e CF3) para o caso dos carboxilatos e [Rh2(CF3CONH) 4 metro2] para o aduto de trifluoroacetamidato. Os compostos foram caracterizados por análise elementar, espectroscopia eletrônica, infravermelho e de ressonância magnética nuclear de próton. O resultado desta caracterização permitiu estabelecer as rotas de síntese confirmando a formação dos carboxilatos tipo ponte e a presença do metronidazol nas posições axiais, numa relação 1:2. O efeito radiossensibilizador desses complexos de Rh (II) foi testado in vitro, irradiando-se, em atmosfera hipóxica, células de ovário de hamster chinês (CHO k1), na presença dos complexos, utilizando-se raios gama provenientes de uma fonte de 60Co, com doses de 2,7 e 4,3 Gy. Foi realizado teste de citotoxicidade para determinar as concentrações atóxicas de cada composto, eliminando a possibilidade de morte celular devido ao efeito tóxico dos mesmos. Na dose 2,7 Gy não houve nenhum efeito interessante; já com a dose de 4,3 Gy o [Rh2(CH3 COO)4] mostrou uma atividade radiossensibilizadora maior do que nos demais complexos. Os resultados foram semelhantes aos obtidos na literatura com doses de radiação até 10 vezes maiores. Devido à ausência de mudanças significativas no efeito radiossensibilizador entre os carboxilatos e amidato e seus respectivos adutos com metronidazol, foi determinada a constante de formação destes últimos, demonstrando que os mesmos sofrem decomposição quando em solução aquosa diluída. / Radiosensitizers are chemical agents that enhance the radiation sensitivity of hipoxic tumor cells aiming to better radiotherapy efficacy in the treatment of cancer. Some Rhodium (II) carboxylates and its adducts with nitroimidazole derivatives, have been tested as radiosensitizers in high doses of radiation, being obtained significant results. In this work, several Rhodium carboxylates and one Rhodium amidate previously described were synthesized: propionate, trifluoroacetate, citrate and , trifluoroacetamidate, as well as their respective adducts with nitroimidazole of general formula [Rh2(RCOO)4metro2] for the carboxylates and [Rh2(CF3CONH)4metro2] for the trifluoroacetamidate adduct. The compositions where characterized by elementary analysis, electronic and infrared spectroscopy and proton nuclear magnetic resonance. The results of that characterization allowed us to establish the synthesis routes and confirm the bridge type structure of the Rodhium compounds, beyond the presence of the metronidazole at the axial positions in the proportions of 1:2. The radiosensitizing effects of these Rh (II) complexes were tested in vitro by irradiation of Chinese hamster (CHO k1) cells under hipoxic atmosphere in the presence of the complexes, using gamma rays from a 60Co source and doses of 2,7 and 4,3 Gy. A cytotoxicity test has been performed to determinate the non-toxic concentrations of these compounds, in order to rule out the possibility of cellular death induced by the complexe´s cytotoxicity. A 2,7 Gy dose showed no interesting effects but under a 4,3 Gy dose, the complex Rh2(CH3 COO)4 showed a higher radiosensitizing effect than the order compounds and close to previously reported effects which required high radiation doses. As there was not a significant change in the radiosensitizing effect between the carboxylate and the amidate and their respective metronidazole adducts it was performed the measurement of the formation constant of that adducts. The results of that measurements gave evidence of adduct decomposition when in dilute aqueous solution.

Radiossensibilizadores são definidos como agentes químicos que aumentam a sensibilidade das células hipóxicas à radiação, visando o aumento da eficácia da radioterapia no tratamento do câncer. Alguns Carboxilatos de Rh (II) e compostos nitroimidazólicos têm sido testados como radiossensibilizadores em doses elevadas de radiação, obtendo-se resultados significativos. Neste trabalho, foram sintetizados vários carboxilatos e um amidato de Rh (II): propionato, butirato, trifluoroacetato, citrato e trifluoroacetamidato, assim como os seus respectivos adutos com metronidazol, de fórmula geral: [Rh2(RCOO)4metro2] (R = CH3, C2H5, C3H7, C5 H7O5, e CF3) para o caso dos carboxilatos e [Rh2(CF3CONH) 4 metro2] para o aduto de trifluoroacetamidato. Os compostos foram caracterizados por análise elementar, espectroscopia eletrônica, infravermelho e de ressonância magnética nuclear de próton. O resultado desta caracterização permitiu estabelecer as rotas de síntese confirmando a formação dos carboxilatos tipo ponte e a presença do metronidazol nas posições axiais, numa relação 1:2. O efeito radiossensibilizador desses complexos de Rh (II) foi testado in vitro, irradiando-se, em atmosfera hipóxica, células de ovário de hamster chinês (CHO k1), na presença dos complexos, utilizando-se raios gama provenientes de uma fonte de 60Co, com doses de 2,7 e 4,3 Gy. Foi realizado teste de citotoxicidade para determinar as concentrações atóxicas de cada composto, eliminando a possibilidade de morte celular devido ao efeito tóxico dos mesmos. Na dose 2,7 Gy não houve nenhum efeito interessante; já com a dose de 4,3 Gy o [Rh2(CH3 COO)4] mostrou uma atividade radiossensibilizadora maior do que nos demais complexos. Os resultados foram semelhantes aos obtidos na literatura com doses de radiação até 10 vezes maiores. Devido à ausência de mudanças significativas no efeito radiossensibilizador entre os carboxilatos e amidato e seus respectivos adutos com metronidazol, foi determinada a constante de formação destes últimos, demonstrando que os mesmos sofrem decomposição quando em solução aquosa diluída. / Radiosensitizers are chemical agents that enhance the radiation sensitivity of hipoxic tumor cells aiming to better radiotherapy efficacy in the treatment of cancer. Some Rhodium (II) carboxylates and its adducts with nitroimidazole derivatives, have been tested as radiosensitizers in high doses of radiation, being obtained significant results. In this work, several Rhodium carboxylates and one Rhodium amidate previously described were synthesized: propionate, trifluoroacetate, citrate and , trifluoroacetamidate, as well as their respective adducts with nitroimidazole of general formula [Rh2(RCOO)4metro2] for the carboxylates and [Rh2(CF3CONH)4metro2] for the trifluoroacetamidate adduct. The compositions where characterized by elementary analysis, electronic and infrared spectroscopy and proton nuclear magnetic resonance. The results of that characterization allowed us to establish the synthesis routes and confirm the bridge type structure of the Rodhium compounds, beyond the presence of the metronidazole at the axial positions in the proportions of 1:2. The radiosensitizing effects of these Rh (II) complexes were tested in vitro by irradiation of Chinese hamster (CHO k1) cells under hipoxic atmosphere in the presence of the complexes, using gamma rays from a 60Co source and doses of 2,7 and 4,3 Gy. A cytotoxicity test has been performed to determinate the non-toxic concentrations of these compounds, in order to rule out the possibility of cellular death induced by the complexe´s cytotoxicity. A 2,7 Gy dose showed no interesting effects but under a 4,3 Gy dose, the complex Rh2(CH3 COO)4 showed a higher radiosensitizing effect than the order compounds and close to previously reported effects which required high radiation doses. As there was not a significant change in the radiosensitizing effect between the carboxylate and the amidate and their respective metronidazole adducts it was performed the measurement of the formation constant of that adducts. The results of that measurements gave evidence of adduct decomposition when in dilute aqueous solution.

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2018-01-17T14:43:51Z No. of bitstreams: 1 PATRÍCIA PEREIRA FARIAS.PDF: 3725473 bytes, checksum: 27a790c0c992ee9cf80615ba7199bc05 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-17T14:43:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PATRÍCIA PEREIRA FARIAS.PDF: 3725473 bytes, checksum: 27a790c0c992ee9cf80615ba7199bc05 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As doenças parasitárias são um grave problema de saúde pública em diversos países e estão distribuídas, principalmente, em áreas endêmicas em países da África, Ásia, América Central e do Sul. Entre estas doenças estão a doença de Chagas e a doença do Sono, reconhecidas como negligenciadas. Há uma necessidade de tratamentos mais eficientes para essas doenças devido a toxicidade, baixa eficácia e segurança dos fármacos existentes, além da dificuldade de administração e evolução de resistência. O grupo de pesquisa da Dra. Núbia Boechat (Farmanguinhos/FIOCRUZ), vem realizando estudos com análogos nitroimidazólicos sintetizados considerando o megazol como protótipo, molécula ativa contra Trypanosoma cruzi, porém com efeitos mutagênicos e genotóxicos. Estes derivados apresentaram atividade contra o T. cruzi, com menor efeito genotóxico quando comparados com o megazol. Através deste trabalho, a relação estrutura-atividade dos derivados nitroimidazólicos (40a, 40b e 41a-41h) foi realizada e através dos descritores eletrônicos HOMO e LUMO, observou-se que grupos volumosos e com caráter retirador de elétrons do anel nitroimidazólico apresentam relação direta com a atividade. A avaliação do perfil toxicológico in silico confirmou que o composto 41a, mais ativo da série, não apresentou citotoxicidade em células sanguíneas humanas in vitro. O modelo da enzima nitrorredutase de T. cruzi, construído por modelagem comparativa, pode ser utilizado nos estudos de docagem molecular, os quais sugeriram que o tamanho da molécula, a possibilidade de interação com os resíduos His503 e Tyr545 e interações hidrofóbicas do tipo π-π com o cofator FMN podem contribuir para a atividade de derivados nitroimidazólicos no sítio ativo da enzima nitrorredutase. Através dos estudos de docagem molecular, sete novos derivados otimizados foram propostos (PR01 a PR07), dentre os quais o PR03, considerado como melhor ligante planejado, apresentou interações no sítio ativo similares às observadas para o protótipo 41a. Desta forma, os resultados obtidos neste trabalho podem ser úteis a novas pesquisas e podem contribuir para o desenvolvimento de novos protótipos contra o T. cruzi / Parasitic diseases are a major public health problem in many countries, and they are distributed primarily in endemic areas in Africa, Asia, Central and South America. Among them, there are Chagas disease and African trypanosomiasis, known as neglected. There is a need for better treatments for these diseases due to toxicity, low efficacy and safety of the existing drugs, besides the difficulty of administration and evolution of resistance. The research group of Dr. Núbia Boechat (Farmanguinhos/FIOCRUZ), has been conducting studies with nitroimidazole analogs synthesized through the prototype megazol (active molecule against trypanosoma, but with mutagenic and genotoxic effects). In this work, the structure activity relationship of the nitroimidazole derivatives (40a, 40b and 41a-41h) was performed and it was observed through the electronic descriptors HOMO and LUMO that groups with electron withdrawing character display relation with activity. In silico toxicological studies confirmed that the most active compound 41a did not show cytotoxicity in human blood cells in vitro. T. cruzi type I nitroreductase constructed by comparative modeling, can be used in molecular docking studies, which suggested that the size of the molecule, the possibility of interaction with the residues His503 and Tyr545, and hydrophobic interactions of the π- Π with the FMN cofactor may contribute to the activity of nitroimidazole derivatives in the active site of the nitroreductase. From molecular docking studies, seven new optimized derivatives were proposed (PR01 to PR07), among them PR03 was considered as the best planned molecule, it displayed similar active site interactions to those observed for prototype 41a. Thus, the results obtained in this work may be useful to new research and may contribute to the development of new prototypes against T. cruzi

A Diabetes mellitus do tipo I (IDDM), doença metabólica caracterizada pela deficiência na produção de insulina, causa profundas alterações sistêmicas, incluindo a cavidade bucal. A doença periodontal, que se apresenta mais agressiva em pacientes diabéticos, até mesmo na infância, tem como agentes etiológicos microrganismos denominados periodontopatógenos, dentre eles o Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans), anteriormente chamado Actinobacillus actinomycetemcomitans, que em associação às alterações na resposta imune e inflamatória decorrentes da diabetes, poderá causar maior reabsorção do osso alveolar precocemente em crianças. A identificação precoce destes agressores poderá ser extremamente útil para a instituição de medidas preventivas e terapêuticas que possam inibir ou minimizar os efeitos nocivos da IDDM e suas conseqüências para a cavidade bucal. Para este fim, métodos moleculares de investigação estão sendo cada vez mais utilizados, destacando-se a Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (Real-Time PCR) com alta especificidade e sensibilidade para detectar e quantificar microrganismos, mesmo em pequeno número e em meios, até então, pouco explorados como a saliva. Por fim, a utilização de um antimicrobiano seguro, que possa ser aplicado topicamente por meio da escovação dentária, como o metronidazol 25% na forma de gel, poderia reduzir ou eliminar o A. actinomycetemcomitans evitando a progressão da doença periodontal. Assim, este estudo foi realizado para observar a presença do A. actinomycetemcomitans antes e após o uso do gel de metronidazol 25% uma vez ao dia, em substituição a uma das escovações diárias. Avaliou também a influência deste protocolo de tratamento nos índices de placa, gengival e profundidade de sondagem em 32 crianças, na faixa etária de 3 a 12 anos de idade, divididas em dois grupos: diabéticos tipo I (D) e não diabéticos (ND). Para avaliação da presença do A. actinomycetemcomitans foi utilizado o método da Real-Time PCR. Os resultados obtidos sugerem que o gel de metronidazol 25%, aplicado segundo o protocolo estabelecido neste trabalho foi efetivo para a redução dos índices de placa, gengival e do A. actinomycetemcomitans, no entanto, pareceu não atuar sobre a profundidade de sondagem. Os dados obtidos sugerem que, ainda que a ocorrência da bactéria nos indivíduos avaliados tenha sido baixa e a diferença entre o grupo diabéticos e não diabéticos tenha restringido-se apenas à profundidade de sondagem, o gel estudado demonstrou ser promissor na prevenção da doença periodontal em crianças diabéticas, havendo necessidade da realização de mais estudos clínicos randomizados. / Type I Diabetes mellitus (IDDM) is a metabolic disease characterized by deficiency on the insulin production, causing great systemic alterations, including at the oral cavity. Periodontal disease is more aggressive in diabetic patients, even during the childhood, and presents as etiological microorganisms the Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans), formerly Actinobacillus actinomycetemcomitans. This microorganisms in association to alterations in the immune and inflammatory answers caused by diabetes, can promote a larger and early alveolar bone resorption even in children. So, the early identification of these aggressors could be extremely useful for the institution of preventive and therapeutic measures in order to inhibit or minimize the noxious effects of IDDM and their consequences in the oral cavity. Aiming this early identification, molecular biology methods of investigation are being used more frequently, pointing out the Real Time Polymerase Chain Reaction (Real-Time PCR), which presents high specificity and sensibility to detect and to quantify microorganisms, even in small number and in different media little explored like saliva. The use of a safe topical antibiotic, such as metronidazole 25% gel, which used in association with dental brushing, could reduce or eliminate A. actinomycetemcomitans, avoiding the progression of the periodontal disease. This study evaluated the presence of A. actinomycetemcomitans before and after the use of metronidazole 25% gel once a day, in substitution to one of the daily teeth brushing. It also evaluated the influence of this treatment protocol on the plaque, gingival and probing depth indexes. Thirty-two children, aging from 3 to 12 years were included in this study and they were divided into two groups: type I diabetic (D) and no diabetic (ND). Real-Time PCR methods were used to evaluate the presence of A. actinomycetemcomitans. The obtained data suggest that metronidazole 25% gel, applied according to the established protocol in this study, effectively reduced plaque and gingival indexes and the number of A. actinomycetemcomitans. However, no influence was observed regarding the probing depth. The obtained data suggest that, although the number of bacteria has been small and the difference between the D and ND groups was not observed only regarding probing depth, the studied antibiotic gel demonstrated to be promising in preventing periodontal disease in diabetic children. More randomized clinical trials are necessary for a final conclusion.

Obligat anaerob wachsende Bakterien sind an einer Vielzahl von Infektionen beteiligt. Dabei ist Bacteroides fragilis einer der wichtigsten opportunistischen Erreger unter den Anaerobiern. Bei Verdacht auf eine Infektion durch obligate Anaerobier muss nach Materialentnahme für die mikrobiologische Diagnostik unverzüglich eine kalkulierte Therapie eingeleitet werden. Oft ist eine chirurgische Therapie notwendig, die ebenso wie eine adäquate Antibiotikatherapie entscheidend für den Verlauf der Erkrankung ist. Wichtige Substanzen für eine Therapie bei Infektionen mit Beteiligung von B. fragilis sind Clindamycin, Imipenem, Metronidazol und Piperacillin/Tazobactam. Um Aussagen zur in vitro Wirksamkeit dieser Antibiotika gegenüber obligaten Anaerobiern treffen zu können, wurden in der vorliegenden Arbeit die Aktivitäten von verschiedenen Konzentrationen des jeweiligen Antibiotikums auf das Wachstum von sensiblen und resistenten B. fragilis Stämmen mittels Absterbekinetik untersucht. In Abhängigkeit von der zuvor ermittelten minimalen Hemmkonzentration des jeweiligen Antibiotikums wurden die Stämme in 2 Gruppen eingeteilt. Die erste Gruppe umfasst alle Stämme mit einer MHK ≤ 8 µg/ml. In der zweiten Gruppe sind die Stämme mit einer MHK > 8 µg/ml zusammengefasst. Die einzelnen Stämme wurden mit einem Vielfachen der minimalen Hemmkonzentration (MHK) beziehungsweise einem Vielfachen der im menschlichen Blutplasma maximal erreichbaren Konzentration (Cmax) des jeweiligen Antibiotikums inkubiert und die Bakterienkonzentration zu definierten Zeitpunkten ermittelt. Dadurch können sowohl die Wirksamkeit unterschiedlicher Antibiotikakonzentrationen als auch verschiedene Antibiotikaklassen miteinander verglichen und Aussagen zu Empfehlungen für kalkulierte Therapien getroffen werden.

Hintergrund: Zahlreiche Studien haben den therapeutischen Nutzen von systemischem Antibiotika in der Behandlung schwerer Parodontitis gezeigt. Bisher ist allerdings noch nicht geklärt, welches antibiotische Behandlungkonzept das Geeignetste ist. Daher sollen in einer randomisierten, klinischen Blindstudie zwei verschiedene, systemische Antibiotika adjuvant zur konventionellen, instrumentellen Behandlung von Patienten mit rapid progressiver Parodontitis (RPP) miteinander verglichen werden. Material und Methode: 33 Patienten mit klinisch und radiologisch gesicherter RPP-Diagnose wurden auf 2 Gruppen verteilt: (1) AM-Gruppe (n=17): 500 mg Amoxicillin und 250 mg Metronidazol (3*/ Tag - 10 Tage), (2) D-Gruppe (=16) 200mg Doxycyclin am 1.Tag und 100mg Doxycyclin 13 Tage. Zu Beginn erhielten alle Patienten 3* eine professionelle Zahnreinigung, und anschlie§end Scaling und Wurzelglättung unter Lokalanästhesie in 2 Sitzungen. 3 Monate später wurde ein Recall und die Antibiose durchgeführt. Im Abstand von jeweils 3 Monaten erfolgten 2 weitere Recallsitzungen. Nach erfolgreicher Mundhygieneinstruktion und zu allen Recallsitzungen wurden alle klinischen Parameter wie Taschentiefe, relatives Attachmentlevel und das Bluten bzw. Pus nach Sondieren mit der Florida probe eruiert. Die Bestimmung 8 verschiedener Parodontalpathogene wurde mit dem DNS-Sondentest von Meridol durchgeführt. Die mikrobiologischen Proben wurden mit sterilen Papierspitzen an den vier tiefsten Taschen vor der Antibiose und zu den anschlie§enden Recalls entnommen und mit der Gensondentechnik im Labor der Wybert GmbH elmex Forschung, Lörrach, analysiert. Zur Bestimmung des IL-1-Genpolymorphismus wurde venöses Blut in der 1. Sitzung abgenommen. Die Auswertung erfolgte mit dem GenoType(R) PRTest (Hain Diagnostika GmbH). Ergebnisse: Die klinischen Parameter zeigen sowohl durch die konservative als auch durch die antibiotisch adjuvante Therapie eine signifikante klinische Verbesserung (p / Background: Several studies have shown a therapeutical benefit from systemic antibiotics in the treatment of severe periodontitis. However, it has not yet been layed down which concept of antibiotic treatment is the best. Therefore the purpose of this study is to compare two different systemic antibiotics adjunctive to a conventional, mechanical treatment of patients with rapidly progressive periodontitis (RPP) in a randomised, blinded, clinical trial. Material and methods: 33 patients with a clinically and radiographically confirmed diagnosis of RPP were distributed in two groups: (1) AM-group (n=17): 500 mg amoxicillin and 250 mg metronidazole (3*/ d - 10days), (2) D-group (=16) 200mg doxycyclin on the 1st day and 100mg doxycyclin for 13days. In the beginning the patients received 3* professional tooth cleaning, and subsequently scaling and root planning under local anaesthesia in two sessions. 3 months later a recall visit and the antibiotic regimen were carried out. In 3 months-intervals another 2 recall visits were performed. After successfull oral hygiene instructions and during all recall visits all clinical parameters like pocket depths, relative attachment level, and bleeding and pus on probing were evaluated with the Florida probe. The determination of 8 different periodontal pathogens was performed with the DNS-Sondentest of Meridol. Before the antibiotic treatment and during the following recall visits the microbiological samples were taken from the 4 deepest pockets with sterile paper points and analysed by PCR-technique in the laboratory of Wybert GmbH elmex Forschung, Lörrach. To determine the IL-1 genetic polymorphism venous blood samples were taken in the first session. The analysis was done by GenoType(R), PRTest (Hain Diagnostika GmbH). Results: The clinical parameters show a significant clinical improve by the conservative as well as by the adjunctive antibiotic treatment (p

Die systemische Verabreichung von Amoxizillin/Metronidazol (AM) als Zusatz zu Scaling/Root planing (SRP) in der Behandlung der generalisierten Aggressiven Parodontitis (gAP) führt zu guten klinischen und mikrobiologischen Ergebnissen. Die lokale antiseptische Zusatzmedikation mit Chlorhexidin in einem Controlled-Delivery-Device (PerioChip, PC) verbessert das Ergebnis von SRP in der Behandlung der Chronischen Parodontitis. Die Anwendung in der Behandlung der gAP ist bisher noch nicht untersucht worden. Ziele: Der Effekt von PC als Zusatz zu SRP in der Therapie der gAP wurde untersucht. Die Wirksamkeit wurde mit der Standardmedikation AM verglichen. Neben klinischen Parametern wurde die Konzentration des Entzündungsmarkers Calprotectin in der Sulkusflüssigkeit (SF) bestimmt. Material/Methode: 36 gAP-Patienten (18/Gruppe, 35+/-4 Jahre) wurden mit SRP und randomisiert entweder mit AM oder PC behandelt. Zur Baseline, 3 und 6 Monate nach SRP wurden die klinischen Parameter PD, CAL, BoP, Pus erhoben sowie SF-Proben tiefer und flacher Referenzstellen entnommen. Die Calprotectin-Konzentration in der SF wurde mittels ELISA bestimmt. Ergebnisse: 3 Monate nach SRP zeigten beide Gruppen signifikante Verbesserungen der klinischen Parameter, wobei noch keine Unterschiede zwischen den Gruppen bestanden. Während die AM-Gruppe stabil blieb, verschlechterten sich mehrwurzelige Zähne und tiefe Referenzstellen der PC-Gruppe wieder signifikant. Nach 6 Monaten wies die AM-Gruppe signifikant mehr CAL-Gewinn und PD-Reduktion auf. Pus war nur noch in der PC-Gruppe nachweisbar. Die Calprotectin-Konzentration war zwar in beiden Gruppen signifikant gesunken, Unterschiede zwischen den Gruppen bestanden jedoch aufgrund hoher Standardabweichungen nicht. Schlussfolgerung: AM zeigte eine bessere klinische Wirksamkeit und Langzeitstabilität als PC. Aufgrund großer interindividueller Variabilität spiegelte die SF-Konzentration von Calprotectin die klinischen Unterschiede nicht wider. / Adjunctive systemic administration of amoxicillin/metronidazole (AM) in generalized aggressive periodontitis (gAP) therapy results in good clinical and microbiological outcome. Adjunctive use of chlorhexidine within a controlled-delivery-device (PerioChip, PC) improves the outcome of scaling/root planing (SRP) in chronic periodontitis therapy. Its effect in the treatment of gAP has not been evaluated. Aims: The effect of adjunctive use of PC in the treatment of gAP was investigated. Efficacy of PC was compared to the standard treatment with AM. Clinical parameters and the concentration of the inflammation marker calprotectin within gingival crevice fluid (GCF) were measured. Material/methods: 36 gAP patients (18/group, 35+/-4 years) were treated by SRP either AM or PC. Clinical parameters PD, CAL, BoP and Pus were recorded at baseline, 3 and 6 months after therapy. GCF was sampled at deep and shallow reference sites and the concentration of calprotectin was measured by ELISA. Results: Both groups showed significant improvements of clinical parameters 3 months after SRP, however differences between groups were not significant. While the AM-group remained clinically stable, multirooted teeth and deep reference sites of the PC-group showed significant deterioration again. 6 months after SRP, the AM-group showed significant more CAL gain and PD reduction. Pus was detectable in the PC group only. The concentration of calprotectin in GCF had significantly decreased in both groups; however differences between groups were not significant due to high standard deviations. Conclusion: AM showed higher efficacy in terms of clinical treatment outcome and long-term stability than PC. Due to high interindividual variability, GCF-concentrations of calprotectin failed to reflect clinical differences.