El objetivo del presente estudio fue determinar si la inmunización con bacterina de dosis única contra Mycoplasma hyopneumoniae influye en los títulos de anticuerpos, ganancia de peso, y lesiones pulmonares en porcinos de crianza intensiva. Se emplearon 60 porcinos provenientes de madres vacunadas, los cuales fueron divididos en 2 grupos de 30 lechones cada uno (15 hembras y 15 machos), un grupo fue inmunizado a los 42 días de edad y el otro fue utilizado como control. Se tomaron muestras de sangre a los 21, 42, 70, 84, 112, 145 días de edad, midiéndose el título de anticuerpos con la prueba de ELISA indirecta. Los pesos se tomaron a los 21 y 145 días de edad y las lesiones pulmonares se evaluaron al beneficio. Alrededor del 60%(18/30) de porcinos en ambos grupos presentaron altos títulos de anticuerpos a los 21 días de edad; disminuyendo hacia los 70 días. El grupo inmunizado elevó sus títulos entre los 84 y 145 días de edad y el grupo control elevó sus títulos hacia los 112 días de edad. No existió diferencia estadística significativa en la ganancia de peso de ambos grupos. El 79.31%(23/29) y 20.69%(6/29) del grupo control e inmunizado respectivamente presentaron lesiones pulmonares al beneficio. Se puede concluir, que la inmunización con bacterina de dosis única contra M. hyopneumoniae elevó los títulos de anticuerpos de los porcinos inmunizados, aunque no en toda la población, disminuye el porcentaje de lesiones pulmonares al beneficio, pero no influyó en la ganancia de peso. / The aim of the present study was done to determinate if the immunization with single dose commercial bacterin against Mycoplasma hyopneumoniae will influence in the antibody titles, weight gain, and pulmonary lesions in a swine intensive rearing system. Sixty piglets which proceeded from vaccinated sows were used. One group of 30 piglets (15 males and 15 females) were vaccinated at 42 days of age and the other group of 30 piglets remain unvaccinated, and they were used as a control group. Blood samples were obtained at 21, 42, 70, 84, 112 and 145 days of age. The antibodies titles were measured with an indirect assay of ELISA. The weight was measured at the 21 and 145 days of age. The pulmonary lesions were evaluated at slaughter. Around the 60%(18/30) of pigs from both groups revealed high antibody titles at 21 days of age, but these titles diminished at 70 days. The vaccinated group elevated their titles between the 84 and 145 days of age while the unvaccinated group elevated their antibodies titles at 112 days of age. There were no significant differences in the weight gain between both groups. The 79,31%(23/29) and 20,69%(6/29) from the control group and the vaccinated group, respectively, presented pulmonary lesions at the slaughter. The results demonstrate that the vaccination with single dose bacterin against Mycoplasma hyopneumoniae increase the antibody titles, although not in all population, diminish the percentage of pulmonary lesions, but no influence in the weight gain.

Se muestrearon noventa lechones provenientes de marranas no vacunadas de crianza intensiva de la provincia de Lima de junio a noviembre del 2003 para evaluar dos programas de vacunación contra Mycoplasma hyopneumoniae utilizando tres tratamientos experimentales de igual número de animales (n = 30); en el tratamiento 1 los cerdos fueron vacunados a los 35 y 56 días de edad, el tratamiento 2 a la edad de 42 y 56 días y el tratamiento 3 era el grupo de control de la misma edad. El efecto fue medido sobre suero sanguíneo para detectar los títulos de anticuerpos usando la prueba de ELISA (HerdChek*M hyo) a las 3, 6, 10, 12, 16 y 21 semanas de edad. La toma de muestras de sangre a los 21 y 35 días en los tratamientos fue antes de la vacunación, en donde los títulos de anticuerpos para el tratamiento 2 fueron inferiores (p es menor que 0.005) a los tratamiento 1 y el control; sin embargo, después de la vacunación los títulos de anticuerpos aumentaron de modo similar durante el día 70 en ambos tratamientos 1 y 2, pero estos dos tratamientos fueron considerablemente diferentes (p es menor que 0.001) que el control. Posteriormente, los niveles de títulos permanecieron estables hasta el final del experimento, pero ambos eran todavía considerablemente diferentes (p es menor que 0.005) que el control. No hubo ningún efecto de los tratamientos sobre la ganancia de peso durante el experimento. Se concluye que ambos tratamientos tuvieron una mejor respuesta sobre los títulos de anticuerpos después de la vacunación. / --- Ninety piglets non-vaccinated saws of intensive breeding at the province of Lima were used from June to November of 2003 to evaluate two programs of vaccination against Mycoplasma hyopneumoniae using three experimental treatments of equal numbers of animals (n = 30); in treatment 1 the pigs were vaccinated when they were 35 at 56 days of age, treatment 2 was at age 42 and 56 days and treatment 3 was the control group of the same age. The effect was measured on blood serum to detect antibody titers using the ELISA test (HerdChek*M hyo) at 3, 6, 10, 12, 16 and 21 weeks of age. The blood samples taking at 21 and 35 days were before the vaccination treatments, the antibody titers for treatment 2 was lower (p is less than 0.005) than these of treatment 1 and control; however, after vaccination the antibody titers increased similarly on day 70 in both treatments 1 and 2, but these two treatments were significantly (p is less than 0.001) different that the control. Afterwards the titers levels remained steady until the end of the experiment, but both were still significantly (p is less than 0.005) different that the control. There was no effect of treatments on body weight gain during the experiment. It was concluded that these were a better response on the antibody titers after vaccination.

Se muestrearon noventa lechones provenientes de marranas no vacunadas de crianza intensiva de la provincia de Lima de junio a noviembre del 2003 para evaluar dos programas de vacunación contra Mycoplasma hyopneumoniae utilizando tres tratamientos experimentales de igual número de animales (n = 30); en el tratamiento 1 los cerdos fueron vacunados a los 35 y 56 días de edad, el tratamiento 2 a la edad de 42 y 56 días y el tratamiento 3 era el grupo de control de la misma edad. El efecto fue medido sobre suero sanguíneo para detectar los títulos de anticuerpos usando la prueba de ELISA (HerdChek*M hyo) a las 3, 6, 10, 12, 16 y 21 semanas de edad. La toma de muestras de sangre a los 21 y 35 días en los tratamientos fue antes de la vacunación, en donde los títulos de anticuerpos para el tratamiento 2 fueron inferiores (p es menor que 0.005) a los tratamiento 1 y el control; sin embargo, después de la vacunación los títulos de anticuerpos aumentaron de modo similar durante el día 70 en ambos tratamientos 1 y 2, pero estos dos tratamientos fueron considerablemente diferentes (p es menor que 0.001) que el control. Posteriormente, los niveles de títulos permanecieron estables hasta el final del experimento, pero ambos eran todavía considerablemente diferentes (p es menor que 0.005) que el control. No hubo ningún efecto de los tratamientos sobre la ganancia de peso durante el experimento. Se concluye que ambos tratamientos tuvieron una mejor respuesta sobre los títulos de anticuerpos después de la vacunación. / Ninety piglets non-vaccinated saws of intensive breeding at the province of Lima were used from June to November of 2003 to evaluate two programs of vaccination against Mycoplasma hyopneumoniae using three experimental treatments of equal numbers of animals (n = 30); in treatment 1 the pigs were vaccinated when they were 35 at 56 days of age, treatment 2 was at age 42 and 56 days and treatment 3 was the control group of the same age. The effect was measured on blood serum to detect antibody titers using the ELISA test (HerdChek*M hyo) at 3, 6, 10, 12, 16 and 21 weeks of age. The blood samples taking at 21 and 35 days were before the vaccination treatments, the antibody titers for treatment 2 was lower (p is less than 0.005) than these of treatment 1 and control; however, after vaccination the antibody titers increased similarly on day 70 in both treatments 1 and 2, but these two treatments were significantly (p is less than 0.001) different that the control. Afterwards the titers levels remained steady until the end of the experiment, but both were still significantly (p is less than 0.005) different that the control. There was no effect of treatments on body weight gain during the experiment. It was concluded that these were a better response on the antibody titers after vaccination.

A contaminação por micoplasma em culturas celulares pode causar consideráveis interferências no metabolismo celular, acarretando em um sério problema para os laboratórios de cultura de células. Com o objetivo de avaliar o efeito da contaminação por micoplasma e do tratamento com o antibiótico removedor de micoplasma (MRA), sobre a medida da atividade de hidrolases lisossômicas, foram cultivadas culturas de fibroblastos de indivíduos normais para realização destas medidas. Para tanto, foram selecionadas enzimas de referência do Laboratório de Erros Inatos do Metabolismo do Serviço de Genética Médica do HCPA sendo elas: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ß-glicuronidase e hexosaminidase (Total e A). Mediu-se a atividade em fibroblastos contaminados com micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados foram comparados com a atividade enzimática em fibroblastos controles (sem contaminação) e fibroblastos controles tratados com MRA. Somente a enzima ß-glicosidade não alterou significativamente sua atividade na presença do micoplasma e nem do MRA. A hexosaminidase Total e a ß-galactosidase sofreram interferência significativa na presença do micoplasma e do MRA. A hexosaminidase A e a arilsulfatase A sofreram interferência significativa somente na presença do MRA. A ß-glicuronidase sofreu alteração de sua atividade somente na presença do micoplasma. Estes resultados mostraram que as enzimas testadas comportaramse de maneira diferente frente à pre sença do MRA e/ou do micoplasma, levandonos a avaliar, em um segundo momento, se estes agentes (micoplasma e antibiótico), poderiam alterar a medida da atividade enzimática em cultura de fibroblastos de pacientes com doenças lisossômicas (DL). Para tanto foi realizada a medida da atividade das enzimas: ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A e a-glicosidase. A atividade destas foram medidas em culturas de fibroblastos contaminadas por micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados destas atividades foram comparados com as atividades enzimáticas em culturas cultivadas na ausência de contaminação. Somente a ASB alterou significativamente sua atividade tanto na presença do micoplasma quanto do MRA. As demais enzimas não sofreram interferência significativa na presença de ambos. Os resultados obtidos nos permitem concluir que em cultura de fibroblastos, tanto a contaminação por micoplasma quanto o uso de um tipo de antibiótico (MRA), podem ser fator de interferência para medida da atividade de algumas hidrolases lisossômicas. Sendo assim, sugerimos que haja a prevenção da contaminação através da detecção do micoplasma bem como o uso de técnicas assépticas e, para aquelas culturas que não podem ser descartadas, faça-se o uso criterioso de antibióticos capazes de remover o micoplasma, como o analisado neste estudo. Dessa maneira, trabalharíamos com um grau de confiabilidade maior nos resultados laboratoriais. / Contamination of cellular cultures by mycoplasma can cause considerable interference with the cellular metabolism and result in serious problems for cell culture laboratories. To evaluate the effects of mycoplasma contamination and treatment with the mycoplasma removal antibiotic agent (MRA) on the measurement of the activity of lysosomal hydrolyses; fibroblast cultures from normal individuals were cultivated specifically to realize these measurements. To do this, we selected reference enzymes from the Laboratory of Inborn Errors of Metabolism maintained by the Service of Genetic Medicine at the HCPA in Porto Alegre, Brazil as follows: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ßglicuronidase and hexosaminidase (Total and A). The activity of the fibroblasts contaminated by mycoplasma was measured before and after the addition of the MRA. The results were compared with the enzymatic activity in controls both of non-contaminated fibroblasts and others treated with MRA. The ß-glycosidase enzyme was the only enzyme that demonstrated no significant activity alterations in the presence of either the mycoplasma or the MRA. All the others showed significant changes - the total hexosaminidase and the ß-galactosidase from the presence of the both the mycoplasma and the MRA ; the hexosaminidase A and the arilsulfatase A from the presence of the MRA only; while the presence of the mycoplasma on its own significantly altered the ß-glicuronidase activity. These results prove that the enzymes we tested behave differently when exposed to MRA and/or the mycoplasma. This raises the question as to whether these agents (mycoplasma and antibiotic) could alter the measurement of enzymatic activity in fibroblast cultures from patients with lysosomatic diseases (DL). To resolve this question, the activities of the ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A and a-glicosidase enzymes were measured in cultures of fibroblasts contaminated with mycoplasma, before and after the addition of MRA. The results obtained were compared with the enzymatic activities of uncontaminated cultures. Significant alteration of activity in the presence of MRA and the mycoplasma was observed only in the ABS. The other enzymes demonstrated no significant alteration in the presence of either. The results obtained permit us to conclude that, in a fibroblast culture, both contamination by mycoplasma and the effects of the use of a type of antibiotic (MRA) can interfere in the results of the measurement of the activity of some lysosomatic hydrolyses. Therefore, we suggest that measures be taken to prevent contamination by the detection of the mycoplasma and the employment of aseptic techniques, and, in those cases where the cultures cannot be disposed of, antibiotics capable of removing the mycoplasma should be utilized as analyzed in this study. In this way, greater confidence in the respective laboratory results can be assured.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T20:02:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 190851.pdf: 801148 bytes, checksum: 3b00a66a247ac4291692ae323036e069 (MD5) / Várias evidências sugerem que existe ligação entre infecções e doenças coronarianas. Estudos histopatológicos detectaram antígenos e material genético de vários microorganismos em lesões ateroscleróticas. Outros autores demonstraram associação entre anticorpos contra agentes infecciosos e doença arterial coronariana. Entretanto, o envolvimento de agentes infecciosos com aterosclerose precisa ser melhor esclarecido. O objetivo do presente estudo, foi avaliar títulos e presença de anticorpos (IgG, IgM) específicos contra vírus Herpes-1 (HSV-1), Citomegalovirus (CMV), Helicobacter pylori (H. pylori), Chlamydia pneumoniae (C. pneumoniae) e Mycoplasma pneumoniae (M. pneumoniae), no soro de 60 pacientes [40 com doença arterial coronariana (DAC) e 20 controles(C)], através de ELISA. Pacientes soropositivos (IgG) para Mycoplasma pneumoniae e aqueles com títulos mais elevados tiveram risco maior para ter DAC (odds ratio=20,4 IC 95% 1,97-507,47 e 13,0 IC 95% 1,65-131,6; respectivamente). Entre as diferentes síndromes de DAC, observamos que pacientes com angina instável apresentaram maior soropositividade de IgM contra H. pylori, que pacientes com angina estável (P=0,03), sugerindo um envolvimento entre infecção aguda por esse agente e a manifestação aguda da DAC. Os pacientes com angina estável apresentaram maior soropositividade de IgG contra M. pneumoniae que os controles (P=0,001). Esse fato sugere um envolvimento de infecção crônica por M. pneumoniae e início da DAC. Nenhuma associação foi observada entre anticorpos (IgM ou IgG) contra HSV-1, CMV e C. pneumoniae, e DAC. Quando avaliou-se a associação entre o número de patógenos aos quais o indivíduo tinha sido exposto (carga de patógenos) e DAC, não foi encontrado resultados significativos (odds ratio=3,05 IC 95% 0,67-15,73). Em resumo, esse estudo demonstrou associação entre infecção aguda por H. pylori (indicada pela presença de IgM) e angina instável e aumento do risco para ocorrer DAC nos pacientes com infecção crônica, ou passada por M. pneumoniae (indicada pela presença de IgG).

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2014-12-02T11:21:19Z : No. of bitstreams: 1 000783735.pdf: 592510 bytes, checksum: 4c75607716aba43fa9491069b97e3bb6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Micoplasmas são micro-organismos altamente contagiosos em bovinos, podendo causar mastite, além de pneumonias, artrite, otite e menos frequentemente abortamentos e meningites. São resistentes a maioria dos antimicrobianos utilizados e a mastite causada por este agente pode se tornar crônica e com alta contagem de células somáticas (CCS). Na maioria dos estudos sobre mastite, relata-se a alta prevalência de Streptococcus agalactiae e Staphylococcus aureus, já que estes patógenos podem ser isolados e identificados utilizando métodos microbiológicos convencionais. Em contraste, Mycoplasma bovis necessita de meios de cultura e condições especiais para isolamento. Dessa forma, acredita-se que a real prevalência de Mycoplasma bovis é, provavelmente, subestimada. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar a prevalência de Mycoplasma bovis em rebanhos leiteiros do estado de São Paulo. Para tanto, o estudo foi dividido em fase de triagem, com coleta de leite de tanques e fase de coleta individual de leite dos animais. Utilizou-se cultivo em meio seletivo (SP4) e PCR para detecção do agente. O cultivo foi negativo para todas as amostras e a PCR revelou uma prevalência de 1,4% de M.bovis em tanques. Pode-se concluir com o presente estudo pela baixa prevalência de M.bovis nos rebanhos do estado de São Paulo, mostrando assim uma discreta importância deste agente como causa de mastites / FAPESP: 11/16055-3 / FAPESP: 11/21009-0

Orientador : Prof. Dr. Antonio F. P. de F. Wouk / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 24/03/2009 / Inclui referências ao final de cada capítulo / Área de concentração : Patologia veterinária / Resumo: Os micoplasmas hemotrópicos são bactérias gram negativas, em forma de cocos, anéis ou bacilos, que parasitam eritrócitos de uma grande variedade de mamíferos, entre eles os cães. A hemoplasmose nos cães é geralmente um achado laboratorial. Raramente cães sem comprometimento imunológico ou não esplenectomizados desenvolvem a infecção. Os sinais da doença incluem febre, anorexia, mucosas pálidas e a anemia, quando presente, é discreta a moderada. A hemoplasmose nos cães é causada pelas bactérias Mycoplasma haemocanis (Mhc) e "Candidatus Mycoplasma haematoparvum" (CMhp). A transmissão ocorre pelo repasto do carrapato Rhipicephalus sanguineus, transfusão sanguínea, transmissão vertical de cadela para filhotes foi reportada, porém não há certeza se é transmitido por via placentária ou no momento do parto. O diagnóstico é feito pela visualização do agente infeccioso sobre a membrana eritrocitária ao exame do esfregaço sanguíneo, sem identificação da espécie de micoplasma. O diagnóstico pela reação em cadeia da polimerase (PCR) é considerado padrão ouro por ter maior sensibilidade e especificidade que a citologia. O PCR para hemoplasmas é feito com a amplificação dos genes 16SrRNA e rnpB. O sequenciamento destes genes permite a identificação entre as espécies de hemoplasmas caninos e felinos. Foram realizados testes em 99 amostras de sangue de cães provenientes de um laboratório comercial da cidade de Curitiba. Foi realizada a extração do DNA e PCR para os genes GAPDH, gene constitutivos que garantem a qualidade de extração, 16SrRNA para Mycoplasma haemofelis (Mhf) "Candidatus Mycoplasma haemominutum" (CMhm) e "Candidatus Mycoplasma turicensis" (CMtc). Das 94 amostras positivas para o GAPDH, 16 (17,02%) geraram amplicons para pelo menos uma das três espécies testadas, nenhuma amostra apresentou co-infecção com mais de uma espécie. Do total de amostras, 9/94 (9,57%) foram positivos para Mhc, 4/94 (4,26%) para CMhp e 3/94 (3,19%) para CMTC, num total de 16 amostras positivas. Destas, 13 pertenciam ao grupo de 64 anêmicos (20,31%) e as outras 3 ao grupo de 30 não anêmicos (10,0%), com o dobro de risco de animais anêmicos possuírem a infecção. Um total de 10/46 (21,74%) machos foram positivos e 6/48 (12,5%) fêmeas foram positivas para hemoplasmas, indicando maior probabilidade de machos serem positivos. Um total de 2/18 animais com até 12 meses (11,12%) foram positivos, e 14/76 com mais de 12 meses (18,42%) foram positivos, mostrando maiores chances de cães com mais de 12 meses serem positivos. Não houve diferença significativa entre as idades dos animais positivos e negativos, e entre os hematócritos dos cães anêmicos e cães não anêmicos. Porém houve diferença significativa entre a presença de hemoplasmas e anemia, indicando que os hemoplasmas podem causar anemia em cães. Relata-se pela primeira vez a presença de "Candidatus Mycoplasma turicensis" em cães em Curitiba, Brasil. Palavras-chave: Cão, micoplasmas hemotrópicos, PCR, anemia / Abstract: Hemotropic mycoplasmas are gram negative, coccoid, ring or rod shaped bacteria,which parasite erythrocytes of a wide variety of mammals, including dogs. Hemoplasmosis in dogs is often a laboratory finding. Dogs without immunological restrain or non-splenectomized rarely develop the infection. Signs of disease include fever, anorexia, pale mucous membranes and anemia, when present, is mild to moderate. Hemoplasmosis in dogs is caused by bacteria Mycoplasma haemocanis (Mhc) and "Candidatus Mycoplasma haematoparvum" (CMhp). Transmission occurs by Rhipicephalus sanguineus tick feeding, blood transfusion, vertical transmission from bitch to offspring has been reported, however transplacental or at birth transmission has not been elucidated yet. Diagnosis is made by visualization of infectious agent on the erythrocyte membrane over blood smear examination, with no species identification. Diagnosis of polymerase chain reaction (PCR) is considered the gold standard due to higher sensitivity and specificity than cytology. Hemoplasma PCR is performed by 16SrRNA and rnpB gene amplification. Sequencing of these genes may allow to species identification between canine and feline hemoplasmas. A total of 99 samples were tested in dogs from a commercial laboratory in Curitiba, Brazil. DNA extraction and PCR for GAPDH housekeeping gene, which insures quality control of extraction, 16SrRNA for Mycoplasma haemofelis (Mhf) "Candidatus Mycoplasma haemominutum" (CMhm) and "Candidatus Mycoplasma turicensis" (CMtc). Out of 94 positive samples for GAPDH, 16/94 (17.02%) produced amplicons of at least one of three tested species, and no sample presented co-infection with more than one species. A total of 9/94 (9.57%) were positive for Mhc, 4/94 (4.26%) for CMhp and 3/94 (3.19%) for CMtc. Out of 16 positive samples, 13 were from the 64 anemic group (20.31%) and other 3 were from the 30 non-anemic group (10.0%), showing a double likelihood of anemic dogs to have the infection. A total of 10/46 dogs (21.74%) were positive, and 6/48 (12.5%) were positive for hemoplasmas, showing higher chances of males to be positive. According to age, 2/18 animals younger than 12 months of age (11.12%) were positives and 14/76 older than 12 months (18.42%) were positive, showing higher chances of older dogs to be positive. No significant differences were found between ages and positive/negative animals, and between packed cell volume of anemic and non-anemic dogs. However a significant difference was found between presence of hemoplasma and anemia, showing that hemoplasmas may cause anemia in dogs. "Candidatus Mycoplasma turicensis" has been reported for the first time infecting dogs in Curitiba, Brazil. Palavras-chave: dog, hemotropic hemoplasma, PCR, anemia

Orientador: Helio Langoni / Banca: José Carlos Figueiredo Pantoja / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Vera Mores Rall / Resumo: Micoplasmas são micro-organismos altamente contagiosos em bovinos, podendo causar mastite, além de pneumonias, artrite, otite e menos frequentemente abortamentos e meningites. São resistentes a maioria dos antimicrobianos utilizados e a mastite causada por este agente pode se tornar crônica e com alta contagem de células somáticas (CCS). Na maioria dos estudos sobre mastite, relata-se a alta prevalência de Streptococcus agalactiae e Staphylococcus aureus, já que estes patógenos podem ser isolados e identificados utilizando métodos microbiológicos convencionais. Em contraste, Mycoplasma bovis necessita de meios de cultura e condições especiais para isolamento. Dessa forma, acredita-se que a real prevalência de Mycoplasma bovis é, provavelmente, subestimada. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar a prevalência de Mycoplasma bovis em rebanhos leiteiros do estado de São Paulo. Para tanto, o estudo foi dividido em fase de triagem, com coleta de leite de tanques e fase de coleta individual de leite dos animais. Utilizou-se cultivo em meio seletivo (SP4) e PCR para detecção do agente. O cultivo foi negativo para todas as amostras e a PCR revelou uma prevalência de 1,4% de M.bovis em tanques. Pode-se concluir com o presente estudo pela baixa prevalência de M.bovis nos rebanhos do estado de São Paulo, mostrando assim uma discreta importância deste agente como causa de mastites / Abstract: Not available / Mestre

A contaminação por micoplasma em culturas celulares pode causar consideráveis interferências no metabolismo celular, acarretando em um sério problema para os laboratórios de cultura de células. Com o objetivo de avaliar o efeito da contaminação por micoplasma e do tratamento com o antibiótico removedor de micoplasma (MRA), sobre a medida da atividade de hidrolases lisossômicas, foram cultivadas culturas de fibroblastos de indivíduos normais para realização destas medidas. Para tanto, foram selecionadas enzimas de referência do Laboratório de Erros Inatos do Metabolismo do Serviço de Genética Médica do HCPA sendo elas: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ß-glicuronidase e hexosaminidase (Total e A). Mediu-se a atividade em fibroblastos contaminados com micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados foram comparados com a atividade enzimática em fibroblastos controles (sem contaminação) e fibroblastos controles tratados com MRA. Somente a enzima ß-glicosidade não alterou significativamente sua atividade na presença do micoplasma e nem do MRA. A hexosaminidase Total e a ß-galactosidase sofreram interferência significativa na presença do micoplasma e do MRA. A hexosaminidase A e a arilsulfatase A sofreram interferência significativa somente na presença do MRA. A ß-glicuronidase sofreu alteração de sua atividade somente na presença do micoplasma. Estes resultados mostraram que as enzimas testadas comportaramse de maneira diferente frente à pre sença do MRA e/ou do micoplasma, levandonos a avaliar, em um segundo momento, se estes agentes (micoplasma e antibiótico), poderiam alterar a medida da atividade enzimática em cultura de fibroblastos de pacientes com doenças lisossômicas (DL). Para tanto foi realizada a medida da atividade das enzimas: ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A e a-glicosidase. A atividade destas foram medidas em culturas de fibroblastos contaminadas por micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados destas atividades foram comparados com as atividades enzimáticas em culturas cultivadas na ausência de contaminação. Somente a ASB alterou significativamente sua atividade tanto na presença do micoplasma quanto do MRA. As demais enzimas não sofreram interferência significativa na presença de ambos. Os resultados obtidos nos permitem concluir que em cultura de fibroblastos, tanto a contaminação por micoplasma quanto o uso de um tipo de antibiótico (MRA), podem ser fator de interferência para medida da atividade de algumas hidrolases lisossômicas. Sendo assim, sugerimos que haja a prevenção da contaminação através da detecção do micoplasma bem como o uso de técnicas assépticas e, para aquelas culturas que não podem ser descartadas, faça-se o uso criterioso de antibióticos capazes de remover o micoplasma, como o analisado neste estudo. Dessa maneira, trabalharíamos com um grau de confiabilidade maior nos resultados laboratoriais. / Contamination of cellular cultures by mycoplasma can cause considerable interference with the cellular metabolism and result in serious problems for cell culture laboratories. To evaluate the effects of mycoplasma contamination and treatment with the mycoplasma removal antibiotic agent (MRA) on the measurement of the activity of lysosomal hydrolyses; fibroblast cultures from normal individuals were cultivated specifically to realize these measurements. To do this, we selected reference enzymes from the Laboratory of Inborn Errors of Metabolism maintained by the Service of Genetic Medicine at the HCPA in Porto Alegre, Brazil as follows: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ßglicuronidase and hexosaminidase (Total and A). The activity of the fibroblasts contaminated by mycoplasma was measured before and after the addition of the MRA. The results were compared with the enzymatic activity in controls both of non-contaminated fibroblasts and others treated with MRA. The ß-glycosidase enzyme was the only enzyme that demonstrated no significant activity alterations in the presence of either the mycoplasma or the MRA. All the others showed significant changes - the total hexosaminidase and the ß-galactosidase from the presence of the both the mycoplasma and the MRA ; the hexosaminidase A and the arilsulfatase A from the presence of the MRA only; while the presence of the mycoplasma on its own significantly altered the ß-glicuronidase activity. These results prove that the enzymes we tested behave differently when exposed to MRA and/or the mycoplasma. This raises the question as to whether these agents (mycoplasma and antibiotic) could alter the measurement of enzymatic activity in fibroblast cultures from patients with lysosomatic diseases (DL). To resolve this question, the activities of the ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A and a-glicosidase enzymes were measured in cultures of fibroblasts contaminated with mycoplasma, before and after the addition of MRA. The results obtained were compared with the enzymatic activities of uncontaminated cultures. Significant alteration of activity in the presence of MRA and the mycoplasma was observed only in the ABS. The other enzymes demonstrated no significant alteration in the presence of either. The results obtained permit us to conclude that, in a fibroblast culture, both contamination by mycoplasma and the effects of the use of a type of antibiotic (MRA) can interfere in the results of the measurement of the activity of some lysosomatic hydrolyses. Therefore, we suggest that measures be taken to prevent contamination by the detection of the mycoplasma and the employment of aseptic techniques, and, in those cases where the cultures cannot be disposed of, antibiotics capable of removing the mycoplasma should be utilized as analyzed in this study. In this way, greater confidence in the respective laboratory results can be assured.

A contaminação por micoplasma em culturas celulares pode causar consideráveis interferências no metabolismo celular, acarretando em um sério problema para os laboratórios de cultura de células. Com o objetivo de avaliar o efeito da contaminação por micoplasma e do tratamento com o antibiótico removedor de micoplasma (MRA), sobre a medida da atividade de hidrolases lisossômicas, foram cultivadas culturas de fibroblastos de indivíduos normais para realização destas medidas. Para tanto, foram selecionadas enzimas de referência do Laboratório de Erros Inatos do Metabolismo do Serviço de Genética Médica do HCPA sendo elas: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ß-glicuronidase e hexosaminidase (Total e A). Mediu-se a atividade em fibroblastos contaminados com micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados foram comparados com a atividade enzimática em fibroblastos controles (sem contaminação) e fibroblastos controles tratados com MRA. Somente a enzima ß-glicosidade não alterou significativamente sua atividade na presença do micoplasma e nem do MRA. A hexosaminidase Total e a ß-galactosidase sofreram interferência significativa na presença do micoplasma e do MRA. A hexosaminidase A e a arilsulfatase A sofreram interferência significativa somente na presença do MRA. A ß-glicuronidase sofreu alteração de sua atividade somente na presença do micoplasma. Estes resultados mostraram que as enzimas testadas comportaramse de maneira diferente frente à pre sença do MRA e/ou do micoplasma, levandonos a avaliar, em um segundo momento, se estes agentes (micoplasma e antibiótico), poderiam alterar a medida da atividade enzimática em cultura de fibroblastos de pacientes com doenças lisossômicas (DL). Para tanto foi realizada a medida da atividade das enzimas: ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A e a-glicosidase. A atividade destas foram medidas em culturas de fibroblastos contaminadas por micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados destas atividades foram comparados com as atividades enzimáticas em culturas cultivadas na ausência de contaminação. Somente a ASB alterou significativamente sua atividade tanto na presença do micoplasma quanto do MRA. As demais enzimas não sofreram interferência significativa na presença de ambos. Os resultados obtidos nos permitem concluir que em cultura de fibroblastos, tanto a contaminação por micoplasma quanto o uso de um tipo de antibiótico (MRA), podem ser fator de interferência para medida da atividade de algumas hidrolases lisossômicas. Sendo assim, sugerimos que haja a prevenção da contaminação através da detecção do micoplasma bem como o uso de técnicas assépticas e, para aquelas culturas que não podem ser descartadas, faça-se o uso criterioso de antibióticos capazes de remover o micoplasma, como o analisado neste estudo. Dessa maneira, trabalharíamos com um grau de confiabilidade maior nos resultados laboratoriais. / Contamination of cellular cultures by mycoplasma can cause considerable interference with the cellular metabolism and result in serious problems for cell culture laboratories. To evaluate the effects of mycoplasma contamination and treatment with the mycoplasma removal antibiotic agent (MRA) on the measurement of the activity of lysosomal hydrolyses; fibroblast cultures from normal individuals were cultivated specifically to realize these measurements. To do this, we selected reference enzymes from the Laboratory of Inborn Errors of Metabolism maintained by the Service of Genetic Medicine at the HCPA in Porto Alegre, Brazil as follows: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ßglicuronidase and hexosaminidase (Total and A). The activity of the fibroblasts contaminated by mycoplasma was measured before and after the addition of the MRA. The results were compared with the enzymatic activity in controls both of non-contaminated fibroblasts and others treated with MRA. The ß-glycosidase enzyme was the only enzyme that demonstrated no significant activity alterations in the presence of either the mycoplasma or the MRA. All the others showed significant changes - the total hexosaminidase and the ß-galactosidase from the presence of the both the mycoplasma and the MRA ; the hexosaminidase A and the arilsulfatase A from the presence of the MRA only; while the presence of the mycoplasma on its own significantly altered the ß-glicuronidase activity. These results prove that the enzymes we tested behave differently when exposed to MRA and/or the mycoplasma. This raises the question as to whether these agents (mycoplasma and antibiotic) could alter the measurement of enzymatic activity in fibroblast cultures from patients with lysosomatic diseases (DL). To resolve this question, the activities of the ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A and a-glicosidase enzymes were measured in cultures of fibroblasts contaminated with mycoplasma, before and after the addition of MRA. The results obtained were compared with the enzymatic activities of uncontaminated cultures. Significant alteration of activity in the presence of MRA and the mycoplasma was observed only in the ABS. The other enzymes demonstrated no significant alteration in the presence of either. The results obtained permit us to conclude that, in a fibroblast culture, both contamination by mycoplasma and the effects of the use of a type of antibiotic (MRA) can interfere in the results of the measurement of the activity of some lysosomatic hydrolyses. Therefore, we suggest that measures be taken to prevent contamination by the detection of the mycoplasma and the employment of aseptic techniques, and, in those cases where the cultures cannot be disposed of, antibiotics capable of removing the mycoplasma should be utilized as analyzed in this study. In this way, greater confidence in the respective laboratory results can be assured.