Devido às características especiais as nanopartículas (10-9m) estão sendo utilizadas em uma ampla gama de produtos, porém é conhecido que a utilização dessas partículas podem causar efeitos biológicos adversos, aumentando a preocupação em relação à saúde e ao meio ambiente. Recentemente, as nanopartículas de prata (AgNPs) têm sido alvo de estudos genotóxicos e citotóxicos, sendo que ainda não existe um consenso acerca da relação entre tamanho e toxicidade dessas partículas. Assim, este trabalho avaliou a citotoxicidade e a genotoxicidade das AgNPs de 10 e 100 nm nas linhagens celulares CHO-K1 e CHO-XRS5, por meio do Ensaios de Viabilidade Celular, Sobrevivência Clonogênica, Teste do Micronúcleo, o Ensaio Cometa e Cinética do Ciclo Celular por Citometria de Fluxo. Em todos os ensaios, as células foram expostas por 24 h à diferentes concentrações de AgNPs (0,025 a 5,0 g/ml) e, as células não tratadas foram utilizadas como controle negativo. A concentração de 5,0 g/ml foi citotóxica nos ensaios de Viabilidade Celular e Sobrevivência Clonogênica, sendo excluída dos ensaios de genotoxicidade. De maneira geral, as células CHO-XRS5 apresentaram menor viabilidade e maior quantidade de danos no DNA do que as células CHO-K1. As AgNPs de 10 nm causaram maiores níveis de danos no DNA em ambas as linhagens e um aumento de células em subG1 logo após o tratamento na linhagem CHO-K1. Entretanto, no tempos 24 e 72 h após o tratamento foi verificada a maior toxicidade (células em subG1) das AgNPs de 100 nm quando comparadas com suas homólogas menores (10 nm). Assim, foi observado que as AgNPs de 10 nm apresentam efeito tóxico a curto prazo similar ou maior do que a mesma concentração de partículas de 100 nm. No entanto, os efeitos genotóxicos e citotóxicos de longo prazo das AgNPs de 100 nm foram maiores do que os da partículas de 10 nm para ambas as linhagens celulares, comprovando que a exposição às AgNPs maiores (100 nm) pode causar mais efeitos biológicos adversos do que suas homólogas menores (10 nm). / Due to their particular characteristics, nanoparticles (10-9m) are being used in a range of products. However, these particles can cause adverse biological effects and because of that, there is a great concern about the health and environmental risks related to the use of these particles. Recently, silver nanoparticles (AgNPs) have been used in a variety of cytotoxicity and genotoxicity studies, but there are still controversies regarding the association between the size and the toxicity of these particles. Thus, in this study, we aimed to evaluate the cytotoxicity and genotoxicity of AgNPS (10 and 100 nm) in two different cell lines, CHO-K1 and CHO-XRS5, by performing Cell Viability assay (XTT), Clonogenic assay, Micronucleus test, Comet assay, as well as by investigating the Cell Cycle kinetics using the flow cytometry. For all the different assays, the cell cultures were exposed for 24 hours to different concentrations of AgNPs (0.025 to 5.0 g/ml) and the untreated cells were used as the negative controls. Since results from the Viability and Clonogenic assays indicated that the concentration of 5.0 g/ml was cytotoxic for both cell lines, this concentration was not included in the genotoxic assays. Our results indicated that the CHO-XRS5 cells presented a lower viability and higher levels of DNA damage compared to the CHO-K1 cells. The 10 nm-AgNPs induced greater levels of DNA damage than the 100 nm-particles in both cell lines and the former also led to a subG1 arrest soon after the treatment only in the CHO-K1 cell line. In contrast, results from all the other assays indicated that greater levels of toxicity were induced by the 100 nm-AgNPs when compared to the 10 nm-particles, both 24 and 72 h after the treatment. Thus, at the same concentration, the short-term effects of the 10 nm-AgNPs were equal to or more toxic than those of the 100 nm-particles. Nevertheless, both long-term genotoxicity and cytotoxicity induced by the 100 nm-AgNPs were greater than those induced by the 10 nm-particles for both cell lines, which suggests that the exposure to greater size particles (100 nm) can cause more adverse biological effects than the exposure to the smaller particles(10 nm).

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jose Luiz Parizi.pdf: 1222714 bytes, checksum: 854c90d0c15e3aa2b272185565785d0e (MD5) Previous issue date: 2012-09-17 / Tilapia is the common name of a large number of species of cichlid fish. In aquaculture, this is one of the most profitable fish, since it presents lower feed conversion than other fish. The chromium oxide has been used as a marker for digestibility because it is inert and not alter the biological process of dietary intake. The use of radioactive form of chromium as a marker of digestibility saves time and labor. The aim of this study was to evaluate the genotoxic potential of 51Cr2O3, used as a biological marker in studies of nutrition and physiology, through the frequency of nuclear abnormalities. We used 40 adult, male Nile tilapia (Oreochromis niloticus L.) (01 animal / tank) in a randomized design. The experimental period lasted 21 days, with 14 days to adapt to the installations and receiving encapsulated feed, free of the marker, with 30% crude protein (CP) and 2,800 Kg-1Kcal of digestible energy (DE)/kg. After this period, two capsules containing chromium oxide, 51Cr2O3 (radioactive form), were provided daily (experimental group) and to satiety were administered capsules containing the diet without the marker. We evaluated seven times sampling. The marker was not significantly absorbed by the digestive tract, but the micronucleus test and the frequency of nuclear abnormalities demonstrated that there was significant genotoxic effect on the erythrocytes of juvenile Nile tilapia, exposed to concentrations of 66mCi.g-1 of 51Cr in the form of chromium oxide, for the seven sampling times. / Tilápia é a denominação comum de um grande número de espécies de peixes ciclídeos. Dentro da aquicultura, este é um dos peixes mais rentáveis, pois apresenta conversão alimentar menor que os demais peixes. O óxido de crômio tem sido usado como marcador de digestibilidade por ser inerte e não alterar o processo biológico de absorção alimentar. O uso da forma radioativa do crômio como marcador de digestibilidade economiza tempo e trabalho. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial genotóxico do 51Cr2O3, utilizado como marcador biológico em estudos de nutrição e fisiologia, por meio da frequência de anormalidades nucleares. Foram utilizadas 40 tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus L.) adultas, machos (01 animal/aquário), em um delineamento experimental casualizado. O período experimental foi de 21 dias, sendo 14 dias para adaptação às instalações e recebendo ração encapsulada, isenta do marcador, com 30% de proteína bruta (PB) e 2.800 Kg-1Kcal de energia digestível (ED)/kg de ração. Após este período, foram fornecidas diariamente duas cápsulas contendo óxido de crômio, 51Cr2O3 (forma radioativa) (grupo experimental) e cápsulas contendo a ração sem o marcador até a saciedade. Foram avaliados sete tempos amostrais. O marcador não foi absorvido significativamente pelo trato digestório, porém o teste do micronúcleo e a frequência de anormalidades nucleares demonstraram que houve efeito genotóxico significante sobre os eritrócitos de juvenis de tilápias do Nilo, expostos à concentração de 66 mCi.g-1 de 51Cr, na forma de óxido de crômio, para os sete tempos amostrais.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:54:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao completa Adriana Pereira Freire Junqueira.pdf: 220979 bytes, checksum: 17532e7ed387e5a189086db336b604ca (MD5) Previous issue date: 2006-06-09 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nïvel Superior / Piper cubeba widely distributed in the tropical and subtropical regions of the world is used medicinally in various manners without genetic toxicity evaluation In this study we investigated the clastogenic and genotoxic potential of the crude extract of the fruits of P cubeba in rodents cells using the micronucleus and single cell gel electrophoresis (SCGE) test systems The animals were treated by gavage with 3 concentrations of the extract 25 50 and 75 per cent of the LD50 (2 g/kg) From Swiss mice peripheral blood was collected at 24 h after the treatment for SCGE assay and at 48 and 72 h for micronucleus test when the animals were sacrificed From Wistar rats peripheral blood and hepatic cells were collected for SCGE assay and bone marrow cells for micronucleus test 24 h after the treatment and then the animals were submitted to euthanasia At the 75% of the LD50 extract concentration a statistically significant increase in the mean number of cells with micronuclei and with DNA damage was observed in all rodents cell types analyzed and on three of the analyzed animal groups genetic toxicity was observed also at the 50% of the LD50 concentration Under our experimental conditions P cubeba extract showed moderate clastogenic and genotoxic effect in the rodents cells / A Piper cubeba é distribuída nas regiões tropicais e subtropicais do mundo e é usada de várias maneiras na medicina como nos ensaios de genética toxicológica Neste estudo foi investigado o potencial clastogênico e genotóxico do extrato cru dos frutos da P cubeba em células de roedores usando o teste do micronúcleo e o ensaio single cell gel electrophoresis SCGE (ensaio cometa) Os animais foram tratados por gavage com 3 concentrações do extrato 25 50 e 75% da LD50 (2 g/Kg). Dos ratos Swiss foi coletado sangue periférico 24h após o tratamento para o ensaio SCGE e 48 e 72h para o teste do micronúcleo, quando os animais foram sacrificados Para os camundongos Wistar coletou-se sangue periférico e células hepáticas para o ensaio SCGE e células de medula óssea para o teste do micronúcleo 24h após o tratamento quando os animais foram submetidos à eutanásia No extrato na concentração de 75% da LD50 foi observado um aumento estatisticamente significativo no número de células com micronúcleos e danos no DNA nas células de roedores analisadas e no terceiro grupo de animais analisados foi observada também toxicidade genética na concentração de 50% da DL50 Conforme nossa condição experimental o extrato de P cubeba mostrou efeito clastogênico e genotóxico moderado em células de roedores

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francijane Ferreira Paixao.pdf: 342552 bytes, checksum: 6c3ba89009e18cc2c819a6a07ee738d6 (MD5) Previous issue date: 2014-03-27 / This study aimed to evaluate the possible genotoxic effects of supplementation with capsiate extracted Pepper Capsicum annuum (sweet pepper), and the phenolic compound resveratrol extracted from grapes in Wistar rats by the micronucleus test in bone marrow. Sixty-four male rats, adult Wistar were divided into four groups (n = 16) and supplemented with: negative control group (GCN) - 0.5 ml of sodium chloride 0.9%; positive control group (GCP) - 50mg/kg cyclophosphamide; capsiate group (CG) - capsiate 10mg/kg diluted in 0.5 mL of 0.9% sodium chloride; resveratrol group (GR) - resveratrol 30mg/kg diluted in 0.5 mL of 0.9% sodium chloride. Only the PCM received intraperitoneal administration. The other groups were supplemented by gavage once a day for six weeks. At the end of six weeks the animals were anesthetized, sacrificed and the micronucleus test performed in bone marrow. The frequency of micronuclei in polychromatic erythrocytes of the BCM, PCM, GC and GR were 2.5, respectively, ± 0.53, 5.7 ± 1.03, 2.5 ± 0.73 and 2 ± 0.73 in a thousand cells. When comparing both groups there was statistically significant difference only GCP compared to other groups. It is concluded that supplementation at a dose of 10mg/kg capsiate and resveratrol at a dose of 30mg/Kg in daily frequency for 06 weeks did not produce genotoxicity in Wistar rats. / Este estudo teve como objetivo avaliar os possíveis efeitos genotóxicos da suplementação com o capsiate, extraído da pimenta Capsicum annuum (pimenta doce), e do composto fenólico resveratrol, extraído de uvas, em ratos Wistar através do teste de micronúcleo em medula óssea. Sessenta e quatro ratos machos, adultos de linhagem Wistar, foram distribuídos em quatro grupos (n=16) e suplementados com: grupo controle negativo (GCN)- 0,5ml de solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo controle positivo (GCP)- 50mg/kg de ciclofosfamida; grupo capsiate (GC)- 10mg/kg de capsiate diluído em 0,5 mL de solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo resveratrol (GR)- 30mg/kg de resveratrol diluído em 0,5 mL de solução de cloreto de sódio 0,9%. Somente o GCP recebeu a administração por via intraperitoneal. Os demais grupos foram suplementados por gavagem uma vez ao dia, durante seis semanas. Ao final das seis semanas os animais foram anestesiados, sacrificados e realizado o teste de micronúcleo em medula óssea. A frequência de micronúcleos em eritrócitos policromáticos do GCN, GCP, GC e GR foram, respectivamente, 2,5±0,53, 5,7±1,03, 2,5±0,73 e 2±0,73 em mil células. Na comparação entre os grupos observou-se diferença estatística significativa somente do GCP em relação aos demais grupos. Conclui-se que a suplementação de capsiate na dose de 10mg/Kg e resveratrol na dose de 30mg/Kg, em frequência diária, durante 06 semana, não produziu genotoxicidade em ratos Wistar.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jose Luiz Parizi.pdf: 1222714 bytes, checksum: 854c90d0c15e3aa2b272185565785d0e (MD5) Previous issue date: 2012-09-17 / Tilapia is the common name of a large number of species of cichlid fish. In aquaculture, this is one of the most profitable fish, since it presents lower feed conversion than other fish. The chromium oxide has been used as a marker for digestibility because it is inert and not alter the biological process of dietary intake. The use of radioactive form of chromium as a marker of digestibility saves time and labor. The aim of this study was to evaluate the genotoxic potential of 51Cr2O3, used as a biological marker in studies of nutrition and physiology, through the frequency of nuclear abnormalities. We used 40 adult, male Nile tilapia (Oreochromis niloticus L.) (01 animal / tank) in a randomized design. The experimental period lasted 21 days, with 14 days to adapt to the installations and receiving encapsulated feed, free of the marker, with 30% crude protein (CP) and 2,800 Kg-1Kcal of digestible energy (DE)/kg. After this period, two capsules containing chromium oxide, 51Cr2O3 (radioactive form), were provided daily (experimental group) and to satiety were administered capsules containing the diet without the marker. We evaluated seven times sampling. The marker was not significantly absorbed by the digestive tract, but the micronucleus test and the frequency of nuclear abnormalities demonstrated that there was significant genotoxic effect on the erythrocytes of juvenile Nile tilapia, exposed to concentrations of 66mCi.g-1 of 51Cr in the form of chromium oxide, for the seven sampling times. / Tilápia é a denominação comum de um grande número de espécies de peixes ciclídeos. Dentro da aquicultura, este é um dos peixes mais rentáveis, pois apresenta conversão alimentar menor que os demais peixes. O óxido de crômio tem sido usado como marcador de digestibilidade por ser inerte e não alterar o processo biológico de absorção alimentar. O uso da forma radioativa do crômio como marcador de digestibilidade economiza tempo e trabalho. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial genotóxico do 51Cr2O3, utilizado como marcador biológico em estudos de nutrição e fisiologia, por meio da frequência de anormalidades nucleares. Foram utilizadas 40 tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus L.) adultas, machos (01 animal/aquário), em um delineamento experimental casualizado. O período experimental foi de 21 dias, sendo 14 dias para adaptação às instalações e recebendo ração encapsulada, isenta do marcador, com 30% de proteína bruta (PB) e 2.800 Kg-1Kcal de energia digestível (ED)/kg de ração. Após este período, foram fornecidas diariamente duas cápsulas contendo óxido de crômio, 51Cr2O3 (forma radioativa) (grupo experimental) e cápsulas contendo a ração sem o marcador até a saciedade. Foram avaliados sete tempos amostrais. O marcador não foi absorvido significativamente pelo trato digestório, porém o teste do micronúcleo e a frequência de anormalidades nucleares demonstraram que houve efeito genotóxico significante sobre os eritrócitos de juvenis de tilápias do Nilo, expostos à concentração de 66 mCi.g-1 de 51Cr, na forma de óxido de crômio, para os sete tempos amostrais.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francijane Ferreira Paixao.pdf: 342552 bytes, checksum: 6c3ba89009e18cc2c819a6a07ee738d6 (MD5) Previous issue date: 2014-03-27 / This study aimed to evaluate the possible genotoxic effects of supplementation with capsiate extracted Pepper Capsicum annuum (sweet pepper), and the phenolic compound resveratrol extracted from grapes in Wistar rats by the micronucleus test in bone marrow. Sixty-four male rats, adult Wistar were divided into four groups (n = 16) and supplemented with: negative control group (GCN) - 0.5 ml of sodium chloride 0.9%; positive control group (GCP) - 50mg/kg cyclophosphamide; capsiate group (CG) - capsiate 10mg/kg diluted in 0.5 mL of 0.9% sodium chloride; resveratrol group (GR) - resveratrol 30mg/kg diluted in 0.5 mL of 0.9% sodium chloride. Only the PCM received intraperitoneal administration. The other groups were supplemented by gavage once a day for six weeks. At the end of six weeks the animals were anesthetized, sacrificed and the micronucleus test performed in bone marrow. The frequency of micronuclei in polychromatic erythrocytes of the BCM, PCM, GC and GR were 2.5, respectively, ± 0.53, 5.7 ± 1.03, 2.5 ± 0.73 and 2 ± 0.73 in a thousand cells. When comparing both groups there was statistically significant difference only GCP compared to other groups. It is concluded that supplementation at a dose of 10mg/kg capsiate and resveratrol at a dose of 30mg/Kg in daily frequency for 06 weeks did not produce genotoxicity in Wistar rats. / Este estudo teve como objetivo avaliar os possíveis efeitos genotóxicos da suplementação com o capsiate, extraído da pimenta Capsicum annuum (pimenta doce), e do composto fenólico resveratrol, extraído de uvas, em ratos Wistar através do teste de micronúcleo em medula óssea. Sessenta e quatro ratos machos, adultos de linhagem Wistar, foram distribuídos em quatro grupos (n=16) e suplementados com: grupo controle negativo (GCN)- 0,5ml de solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo controle positivo (GCP)- 50mg/kg de ciclofosfamida; grupo capsiate (GC)- 10mg/kg de capsiate diluído em 0,5 mL de solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo resveratrol (GR)- 30mg/kg de resveratrol diluído em 0,5 mL de solução de cloreto de sódio 0,9%. Somente o GCP recebeu a administração por via intraperitoneal. Os demais grupos foram suplementados por gavagem uma vez ao dia, durante seis semanas. Ao final das seis semanas os animais foram anestesiados, sacrificados e realizado o teste de micronúcleo em medula óssea. A frequência de micronúcleos em eritrócitos policromáticos do GCN, GCP, GC e GR foram, respectivamente, 2,5±0,53, 5,7±1,03, 2,5±0,73 e 2±0,73 em mil células. Na comparação entre os grupos observou-se diferença estatística significativa somente do GCP em relação aos demais grupos. Conclui-se que a suplementação de capsiate na dose de 10mg/Kg e resveratrol na dose de 30mg/Kg, em frequência diária, durante 06 semana, não produziu genotoxicidade em ratos Wistar.

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2017-08-15T19:37:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Eloisa.pdf: 351801 bytes, checksum: 5d8bb006aa699c1f75f27ffc6a85479b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-15T19:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Eloisa.pdf: 351801 bytes, checksum: 5d8bb006aa699c1f75f27ffc6a85479b (MD5) Previous issue date: 2017-05-23 / L-arginine has been used as a dietary supplement to minimize the side effects of chemotherapy, but it is not fully elucidated its actions and nor the ideal dose that can minimize the side effects. The objective of this study was to evaluate the effect of L-arginine supplementation on the formation of micronuclei in 70 Wistar rats after chemotherapy with 5-FU divided into 7 batches (10 male rats weighing 200 g/batch): LC water ad libitum; LArg2% and LArg4% mice fed commercial feed and 2% and 4% of L-arginine in water ad libitum, respectively; LC rats fed commercial feed, water ad libitum and a dose of 50 mg cyclophosphamide/kg; L5-FU rats fed commercial feed, water ad libitum and a dose of 200 mg of 5-FU/kg was applied; LArg2%+5-FU and LArg4%+5-FU rats fed commercial feed, 2% and 4% L-arginine were added in water ad libitum, respectively, and a dose of 200 mg of 5-FU/Kg. The mice were sacrificed 72 hours after the application of the chemotherapeutics to evaluate the formation of micronuclei. In the data analysis, one-way ANOVA was applied and followed by the Tukey test at 5%. Mice supplemented ad libitum with 2% and 4% L-arginine showed a reduction (P < 0.05) in the formation of micronuclei in bone marrow cells after chemotherapy, indicating that these supplements minimize the mutagenic effect of 5-FU. / A suplementação com L-arginina tem sido utilizada para minimizar os efeitos colaterais da quimioterapia, no entanto, ainda não está totalmente elucidado seus benefícios e nem determinado uma dose ideal de suplementação que pode minimizar esses efeitos. Objetivou avaliar o efeito da suplementação com L-arginina na formação de micronúcleos em 70 ratos Wistar após a aplicação da 5-FU. Estes ratos foram divididos em sete lotes (10 ratos/lote): Lc ratos alimentados com ração comercial e água ad libitum; LArg2% e LArg4% ratos alimentados com ração comercial e adicionou-se 2% e 4% de L-arginina na água ad libitum, respectivamente; Lciclo ratos alimentados com ração comercial, água ad libitum e aplicou-se uma dose de 50 mg de ciclofosfamida/Kg; L5-FU ratos alimentados com ração comercial, água ad libitum e aplicou-se uma dose de 200 mg de 5-FU/Kg; LArg2%+5-FU e LArg4%+5-FU ratos alimentados com ração comercial, adicionou-se 2% e 4% de L-arginina na água ad libitum, respectivamente, e aplicou-se uma dose de 200 mg de 5-FU/Kg. A contagem de micronúcleos nos eritrócitos policromáticos dos ratos foi realizada 72 horas após a aplicação dos quimioterápicos. Os resultados obtidos foram analisados pela ANOVA one-way seguido do teste de Tukey a 5%. Os ratos dos lotes LArg2%+5-FU e LArg4%+5-FU apresentaram redução (P < 0,05) na formação de micronúcleos nos eritrócitos policromáticos após a quimioterapia, indicando que estas suplementações com L-arginina minimizou o efeito mutagênico da 5-FU.

O câncer diferenciado da tireoide (CDT) representa cerca de 90% das malignidades tireoidianas com incidência crescente nas últimas décadas. As modalidades de tratamento incluem tireoidectomia, terapia com 131I (com e sem r-hTSH), radio e quimioterapias. Pouco se sabe sobre os efeitos desses tratamentos em nível celular. O presente trabalho foi proposto com o intuito de avaliar em que extensão a terapia com radioiodo pode causar danos em linfócitos periféricos de pacientes com CDT precedidos ou não com r-hTSH, levando-se em consideração, efeitos agudos, tardios e dosimétricos do 131I (estudo in vivo). Um estudo in vitro também foi realizado em células-alvo de tumores tireoidianos (WRO) por meio de análise de citotoxicidade, genotoxicidade e captação do radioiodo. Para tanto, amostras sanguíneas de pacientes, divididos em 2 grupos (grupo A com r-hTSH + 131I e grupo B somente com 131I) foram coletadas antes, 24h, 1 semana, 1 mês e 1 ano após administração do 131I para análise de aberrações cromossômicas (AC). Curva dose-resposta para 131I in vitro foi elaborada para a estimativa de dose absorvida nos pacientes, comparando as frequências de dicêntricos obtidas in vitro com dados in vivo pelo programa Monte Carlo. A iodoterapia induziu um aumento no número de AC em linfócitos de pacientes com valor máximo 24h após o tratamento, com declínio gradativo ao longo do tempo, com mais danos cromossômicos no grupo B em relação ao grupo A, atingindo níveis similares aos basais 1 anos após a administração do radioido. A frequência de dicêntricos encontrada nos linfócitos de pacientes 24h após o tratamento foi equivalente àquela induzida in vitro (0,354 ± 0,153 MBq/mL para o grupo A e 0,309 ± 0,154 MBq/mL para o grupo B), que corresponde a dose absorvida de 0,8 ± 0,3 Gy e 0,7 ± 0,3 Gy para os grupos A e B, respectivamente, sem significância estatística entre os grupos. As células WRO mostraram um ciclo celular relativamente lento de 96,3h com um cariótipo instável. O ensaio genotóxico mostrou uma radiorresistência relativamente alta (0,07 a 3,70 MBq/mL), sem significância estatística com e sem r-hTSH. No entanto, o ensaio citotóxico, mostrou uma tendência à queda nas concentrações mais altas de 1,85 (p<0,05) e 3,70 MBq/mL (p<0,01) somente na presença de r-hTSH, coincidindo com nível mais alto de captação. Células WRO foram relativamente radiorresitentes também à irradiação externa de 60Co na faixa de dose de 0,2 a 8,3 Gy, com queda gradativa em função do tempo para doses mais altas (10, 20 e 40Gy). Dados obtidos mostraram pouco dano citogenético nos pacientes após a exposição terapêutica com radioiodo, o que sugere um tratamento seguro e eficaz para os pacientes dos dois grupos. Pacientes do grupo A, no entanto, obtiveram uma melhor qualidade de vida com o uso do r-hTSH. Estudos in vitro com irradiação interna (131I) e externa (60Co) com ou sem r-hTSH, apontam a necessidade de uma estratégia terapêutica alternativa para contornar a perda da habilidade das células tireoidianas (WRO) em concentrar o radioiodo, responsável pelo relativo insucesso da iodoterapia em pacientes com CDT. / Differentiated thyroid cancer (DTC) represents about 90% of thyroid malignancies with increasing incidence in the recent decades. Treatment modalities include thyroidectomy, 131I therapy (with or without r-hTSH), radio and chemiotherapy. Little is known about the effects of these treatments at the cellular level. This work was proposed in order to assess to what extent radioiodine therapy can cause damage in peripheral lymphocytes of patients with DTC, preceded or not by r-hTSH, taking into account acute, slow and dosimetric effectsof 131I (in vivo study). An in vitro study was also carried out on thyroid tumor target cells (WRO) by cytotoxicity and genotoxicity analysis and radioiodine uptake. For this, blood samples from patients divided into two groups (group A, r-hTSH + 131I and group B,131I only) were collected before, 24 hours, 1 week, 1 month and 1 year after 131I administration for aberration chromosome analysis (CA). A dose-response curve for 131I in vitro was developed for estmating the absorbed dose in patients, comparing the dicentric frequencies obtained in vitro with in vivo data by Monte Carlo program. Radioiodine therapy induced an increase in the number of CA in lymphocytes of patients peaking 24 hours after treatment, with gradual decline over time and with more chromosomal damage in group B than in group A, reaching baseline levels one year afterradioidine administration. The frequency of dicentric found inpatient lymphocytes, 24h after treatment, was equivalent to that induced in vitro (0.354 ± 0.153 MBq / mL for group A and 0.309 ± 0.154 MBq / mL for group B), which corresponds to absorbed doses of 0.8 ± 0.3 Gy and 0.7 ± 0.3 Gy for groups A and B, respectively, with no significant difference between the groups. WRO cells showed a cell cycle relatively slow: 96,3h with an unstable karyotype. The genotoxic test showed a relatively high radioresistance (0.07 to 3.70 MBq/mL), with no statistical significance, with or without r-hTSH. However, the cytotoxic assay, showed a tendency to decrease at higher concentrations of 1.85 (p <0.05) and 3.70 MBq/ml (p <0.01) only in the presence of r-hTSH, coincident with the highest level of uptake. WRO cells were also relatively radioresistant toexternal irradiation of 60Co in the range of 0.2-8.3 Gy, with a gradual decrease in function of time for higher doses (10,20 and 40Gy).The data obtained showed little cytogenetic damage in patients upon therapeutic exposure, suggesting a safe and effective treatment forboth groups of patients. Patients in group A, however, had a better quality of life by using r-hTSH. In vitro studies with internal (131I) and external (60Co)irradiation, with or without r-hTSH, point to the need for an alternative therapeutic strategy to overcome the loss of ability of thyroid cells (WRO) to concentrate radioiodine, wich is responsible for the failure of radioiodine therapy in patients with DTC.

O mecanismo de formação e origem das alterações nucleares ainda é pouco conhecido, sendo o micronúcleo a mais estudada. As células tumorais geralmente apresentam vários tipos de alterações nucleares que estariam associadas à instabilidade genética. O objetivo deste trabalho foi analisar as possíveis associações entre alterações nucleares e citoesqueleto em células HK2 e A549, derivadas de carcinoma de pulmão humano. Otimizamos a metodologia de uso do MCVL para redefinir as alterações nucleares e caracterizar os principais filamentos do citoesqueleto em preparações coradas por Feulgen ou imunofluorescência. As células da linhagem HK2 apresentaram fibras de actina dispostas concentricamente e em "clusters" e os filamentos de tubulina apareceram de forma radial, enquanto que o padrão de distribuição em A549 foi mais semelhante ao das células normais (BRL3A). Os filamentos de lamina B foram os mais importantes para evidenciar as alterações nucleares, porém essas alterações não puderam ser relacionadas com alterações do citoesqueleto. / The origin and mechanism of formation of the nuclear alterations is largely unknown, with the micronucleus being the most well studied alteration. Tumor cells generally present various types of nuclear alterations witch can be associated with genetic instability. The propose of this study was to analyze the possible association between nuclear alterations and the cytoskeleton in the human lung carcinoma cells HK2 and 549. The method of LSM was optimized to redefine the nuclear alterations and to characterize the principal cytoskeletal filaments in preparations stained with Feulgen’s reagent or submitted to imunofluorescent methods. The HK2 cells presented actin fibres arranged either concentrically or in clusters and tubulin filaments arranged radially, while in the A549 cells the distribution pattern was similar to that of normal cells (BRL3A). The lamin B filaments were the most important to identify nuclear alterations, as these alterations could not be related to cytoskeletal alterations.

Câncer de mama é considerado uma das malignidades mais comuns que acometem as mulheres, representando cerca de uma em cada três de todas as neoplasias femininas. Aproximadamente, 90% dos casos de câncer de mama são esporádicos, atribuíveis aos eventos somáticos e cerca de 10% estão associados com a história familial e destes somente 4-5% são decorrentes de fatores hereditários. Em clínica, a radiação ionizante é a principal ferramenta utilizada no controle do crescimento tumoral, além da intervenção cirúrgica e quimioterapia. Há, no entanto, poucas infomnações no que diz respeito a resposta celular frente à ação da radiação ionizante em células-alvo, isto é, em linhagens celulares originárias de câncer de mama. O presente estudo foi proposto para analisar a radiossensibilidade de células humanas tumorals (T-47D e MCF-7) e não tumorals (MCF-10), originárias de mama, submetidas a várias doses (0,5 a 30 Gy) de radiação y de 60Co (0,72 - 1,50 Gy/min). Para tanto, foram utilizados como parâmetros de radiossensibilidade, dano radioinduzido ao DNA, capacidade de reparo e morte celular, por meio das técnicas do micronúcleo, eletroforese de microgel (teste do cometa) e viabilidade celular. Os dados obtidos mostraram que as linhagens tumorais (T-47D e MCF-7) foram mais radiossensíveis que a linhagem não tumoral (MCF-10) para todos os testes utilizados. A linhagem T-47D foi a que apresentou uma maior quantidade de dano radioinduzido, um ciclo celular mais acelerado e uma maior taxa de morte celular. As três linhagens celulares apresentaram uma capacidade de reparo relativamente eficiente, tendo em vista que uma hora após a irradiação, todas elas exibiram uma redução considerável de dano radioinduzido quando comparadas logo após as exposições. Os testes empregados mostraram ser seguros, sensíveis e reprodutíveis e permitiram quantificar e avaliar danos induzidos ao DNA, capacidade de reparo e morte celular, nas três linhagens originárias de mama humana. / Breast cancer is one of the most common malignancies that account women, representing about one in three of all female neoplasm. Approximately, 90% of cases are considered sporadic, attributed to somatic events and about 10% have a family history and this only 4 - 5 % is decurrent of hereditary factors. In the clinic, ionizing radiation is a major tool utilized in the control of tumour growth, besides surgery and chemotherapy. There is, however, little information concerning cellular response to the action of ionizing radiation in the target cells, i.e., cell lines originating from breast cancer. The present study proposed to analyze the radiosensitivity of the human tumorigenic (T-47D and MCF-7) and nontumorigenic (MCF-10) cell lines, originating from breast and submitted to various doses (0.5 to 30 Gy) of 60Co rays (0.72 - 1.50 Gy/min). For this purpose, DNA radioinduced damage, repair capacity and cell death were utilized as parameters of radiosensitivity by micronucleus, single cell gel electrophoresis (Comet assay) and cell viability techniques. The data obtained showed that tumorigenic cell lines were more radiosensitive than nontumorigenic breast cells in all assays here utilized. The T-47D cell line was presenting the highest amount of radioinduced damage, a more accelerated proliferation rate and a higher rate of cell death. The three cell lines presented a relatively efficient repair capacity, since one hour after the irradiation all of them showed a considerable reduction of radioinduced damage. The techniques employed showed to be secure, sensitive and reproducible, allowing to quantify and evaluate DNA damage, repair capacity and cell death in the three human breast cell lines.