Made available in DSpace on 2016-08-10T10:53:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FLAVIA RODRIGUES GOMES FIGUEIREDO.pdf: 6674066 bytes, checksum: d05bac26a9bf315338d0abbf618eaf34 (MD5) Previous issue date: 2012-03-13 / Cochlospermum regium is a typical Cerrado medicinal plant, known as Cotton-docerrado, much used by local people as an analgesic, antiinflammatory, and antibacterial antiedematogenic. However, many chemical constituents of medicinal plants can be toxic and harmful to human health. Therefore, it is necessary to evaluate the potential cytotoxic, mutagenic and genotoxic potential of aqueous extract of this species. With this goal in vivo tests were performed in Poecilia reticulata and in vitro human peripheral blood lymphocytes. Was estimated for both the lethal concentration (CL50/96h) of decoction of C. regium also performed a Micronucleus Test (MN) and comet assay (EC). Tests with P. reticulata were conducted in aquaria with standard acute exposure for 96 hours. The CL50/96h was estimated at 0.25 gL -1. For testing the MN and EC concentrations used were 0.25 gL-1, 0.19 gL-1, 0.13 gL -1 and 0.06 gL-1 in addition to the negative control. As the experimental conditions of the decoction C. 2.2) of± 1.5) and micronuclei (5.6 ±regium showed difference (p = 0.0046 and p = 0.0007) between the concentration of 0.25 gL-1 with an average of (5.5 1.6) respectively, thus showing cytotoxic and mutagenic by micronucleus test.± 1.3) and (2.7 ±erythrocytic nuclear changes with the negative control (2.8 Correlation was observed and linear regression between the positive damage observed in erythrocytes of P. reticulata and the concentrations of the decoction evaluated. However, no genotoxic activity was identified by the comet assay (p = 0.6289 and p = 0.7677) concentrations in any of the parameters for the length of DNA in the comet's tail and quantity of DNA in the comet's tail, also showing no correlation, or simple linear regression between the results obtained and the concentrations tested. For the tests in vitro CL50/96h in human lymphocytes was estimated at 1.73 gL-1. The micronucleus test was performed in whole cultures for 72 hours and comet assay for 3 hours at concentrations of 1.73 gL-1, 1.29 gL-1, 0.86 and 0.43 gL-1 gL -1 of the decoction, CN and CP to methyl methane sulfonate at a 12 concentration of 80ìM and 70 mM respectively. The decoction these concentrations did not differ (p = 0.6235) with the negative control, showing no mutagenic activity in binucleated human lymphocytes, however, correlated and significant linear regression between the concentrations of the decoction and the number of micronuclei observed. For the comet assay, considering the parameters of the comet tail length (p <0.0001) and amount of DNA in the comet's tail (p = 0.0037) difference was observed between the means obtained in human lymphocytes at concentrations of 1, 0.013 0.003) decoction C.± ±73g.L-one (0.46 and 3.98 0.0008), thus demonstrating the potential genotoxicity.± 0.003 ±regium with the average negative control (0.13 and 0.69 It was found that there was strong correlation and linear regression between the measured concentrations and the observed damage. In short, the decoction of C. regium concentrations evaluated in P. reticulata and human lymphocytes showed cytotoxic, genotoxic and mutagenic including concentrationdependent. In this context, due to damage DNA, the decoct this species and its products in the customary conditions is contraindicated for use by the general population. / Cochlospermum regium é uma planta medicinal típica do Cerrado, conhecida como algodãozinho-do-cerrado, muito utilizada pela população como analgésico, antiinflamatório, antiedematogênico e antibacteriano. Porém, muitos constituintes químicos de plantas medicinais podem ser tóxicos e nocivos para a saúde humana. Portanto, faz-se necessário avaliar o potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico do extrato aquoso desta espécie. Com este objetivo foram realizados testes in vivo em Poecilia reticulata e in vitro com linfócitos humanos do sangue periférico. Para ambos foi estimada a concentração letal (CL50/96h) do decocto de C. regium, além disso, foram realizados o Teste do Micronúcleo (MN) e o Ensaio Cometa (EC). Os testes com P. reticulata foram realizados em aquários padronizados com exposição aguda por 96h. A CL50/96h foi estimada em 0,25g.L-1. Para os testes do MN e EC foram utilizadas as concentrações de 0,25g.L-1, 0,19g.L-1, 0,13g.L-1 e 0,06g.L-1 além do controle negativo. Conforme as condições experimentais o decocto de C. regium apresentou diferença (p=0,0046 e p=0,0007) entre a concentração de 0,25g.L-1 com média de (5,5±1,5) micronúcleos e (5,6±2,2) de alterações eritrocíticas nucleares com o controle negativo (2,8±1,3) e (2,7±1,6) respectivamente, portanto exibindo ação citotóxica e mutagênica pelo teste do micronúcleo. Foram observadas correlação e regressão linear simples positiva entre os danos observados em eritrócitos de P. reticulata e as concentrações do decocto avaliadas. Porém, não foi identificada atividade genotóxica pelo ensaio cometa (p=0,6289 e p=0,7677) em nenhuma das concentrações para os parâmetros comprimento de DNA na cauda do cometa e quantidade de DNA na cauda do cometa, não apresentando também correlação, nem regressão linear simples entre os resultados obtidos e as concentrações avaliadas. Para os ensaios in vitro a CL50/96h em linfócitos humanos foi estimada em 1,73g.L-1. O teste do micronúcleo foi realizado em culturas 10 completas por 72 horas e ensaio cometa por 3 horas nas concentrações de 1,73g.L- 1, 1,29g.L-1, 0,86g.L-1 e 0,43g.L-1 do decocto, CN e CP com Metil Metano Sulfonato na concentração de 80µM e 70 µM respectivamente. O decocto nestas concentrações não apresentou diferença (p=0,6235) com o controle negativo, não exibindo atividade mutagênica em linfócitos humanos binucleados, entretanto, apresentou correlação e regressão linear simples significativas entre as concentrações do decocto e a quantidade de micronúcleos observados. Para o ensaio cometa, considerando os parâmetros comprimento da cauda do cometa (p<0,0001) e quantidade de DNA na cauda do cometa (p=0,0037) foi observada diferença entre as médias obtidas em linfócitos humanos na concentração de 1,73g.L-1(3,98±0,46 e 0,013±0,003) do decocto de C. regium com as médias do controle negativo (0,69±0,13 e 0,003±0,0008), desta forma demonstrando potencial ação genotóxica. Também foi constatado que houve forte correlação e regressão linear simples entre as concentrações avaliadas e os danos observados. Em suma, o decocto de C. regium nas concentrações avaliadas em P. reticulata e linfócitos humanos apresentou atividades citotóxica, genótoxica e mutagênicas inclusive com relação concentração-dependente. Neste contexto, devido aos danos causados no DNA, o decoto desta espécie e seus produtos nas condições costumeiras é contraindicado para uso geral pela população.

Câncer de mama é considerado uma das malignidades mais comuns que acometem as mulheres, representando cerca de uma em cada três de todas as neoplasias femininas. Aproximadamente, 90% dos casos de câncer de mama são esporádicos, atribuíveis aos eventos somáticos e cerca de 10% estão associados com a história familial e destes somente 4-5% são decorrentes de fatores hereditários. Em clínica, a radiação ionizante é a principal ferramenta utilizada no controle do crescimento tumoral, além da intervenção cirúrgica e quimioterapia. Há, no entanto, poucas infomnações no que diz respeito a resposta celular frente à ação da radiação ionizante em células-alvo, isto é, em linhagens celulares originárias de câncer de mama. O presente estudo foi proposto para analisar a radiossensibilidade de células humanas tumorals (T-47D e MCF-7) e não tumorals (MCF-10), originárias de mama, submetidas a várias doses (0,5 a 30 Gy) de radiação y de 60Co (0,72 - 1,50 Gy/min). Para tanto, foram utilizados como parâmetros de radiossensibilidade, dano radioinduzido ao DNA, capacidade de reparo e morte celular, por meio das técnicas do micronúcleo, eletroforese de microgel (teste do cometa) e viabilidade celular. Os dados obtidos mostraram que as linhagens tumorais (T-47D e MCF-7) foram mais radiossensíveis que a linhagem não tumoral (MCF-10) para todos os testes utilizados. A linhagem T-47D foi a que apresentou uma maior quantidade de dano radioinduzido, um ciclo celular mais acelerado e uma maior taxa de morte celular. As três linhagens celulares apresentaram uma capacidade de reparo relativamente eficiente, tendo em vista que uma hora após a irradiação, todas elas exibiram uma redução considerável de dano radioinduzido quando comparadas logo após as exposições. Os testes empregados mostraram ser seguros, sensíveis e reprodutíveis e permitiram quantificar e avaliar danos induzidos ao DNA, capacidade de reparo e morte celular, nas três linhagens originárias de mama humana. / Breast cancer is one of the most common malignancies that account women, representing about one in three of all female neoplasm. Approximately, 90% of cases are considered sporadic, attributed to somatic events and about 10% have a family history and this only 4 - 5 % is decurrent of hereditary factors. In the clinic, ionizing radiation is a major tool utilized in the control of tumour growth, besides surgery and chemotherapy. There is, however, little information concerning cellular response to the action of ionizing radiation in the target cells, i.e., cell lines originating from breast cancer. The present study proposed to analyze the radiosensitivity of the human tumorigenic (T-47D and MCF-7) and nontumorigenic (MCF-10) cell lines, originating from breast and submitted to various doses (0.5 to 30 Gy) of 60Co rays (0.72 - 1.50 Gy/min). For this purpose, DNA radioinduced damage, repair capacity and cell death were utilized as parameters of radiosensitivity by micronucleus, single cell gel electrophoresis (Comet assay) and cell viability techniques. The data obtained showed that tumorigenic cell lines were more radiosensitive than nontumorigenic breast cells in all assays here utilized. The T-47D cell line was presenting the highest amount of radioinduced damage, a more accelerated proliferation rate and a higher rate of cell death. The three cell lines presented a relatively efficient repair capacity, since one hour after the irradiation all of them showed a considerable reduction of radioinduced damage. The techniques employed showed to be secure, sensitive and reproducible, allowing to quantify and evaluate DNA damage, repair capacity and cell death in the three human breast cell lines.

Muitos países possuem estações de pesquisa instaladas na Antártica. Hidrocarbonetos de petróleo e os esgotos lançados no mar pelas estações são as fontes potenciais de poluição na Antártica. Peixes da espécie Trematomus newnesi foram utilizados para investigar o potencial genotóxico e os efeitos sobre a morfologia de fígado e brânquias da água diante dos tanques de combustível e da saída de esgoto da Estação Antártica Brasileira ?Comandante Ferraz?, em experimentos in situ e no laboratório. No Ensaio de Mn e ANE, observou-se que a freqüência de R foi, em geral, menor nos controles do que nos grupos expostos, tanto nos bioensaios como nos experimentos in situ, porém não houve diferenças estatisticamente significativas em nenhum dos experimentos. As lesões branquiais mais observadas, nos grupos expostos, foram hipertrofia do epitélio e telangiectasia lamelar. No fígado, as lesões predominantes foram a vacuolização lipídica e a presença de macrófagos, principalmente nos peixes dos experimentos in situ. Não foram verificadas diferenças significativas nos índices de lesões histopatológicas entre os grupos expostos e os controles em nenhum dos experimentos. Contudo, os resultados obtidos sugerem que dos dois locais analisados nas proximidades da Estação Brasileira, a saída de esgoto apresenta maior potencial de risco para T. newnesi. / Many countries have installed research stations in Antarctica. Petroleum hydrocarbons and the sewage disposed into the sea by the stations are potential sources of pollution in Antarctica. Trematomus newnesi specimens were used to assess genotoxic potential and histopathology of the liver and gills of the water surrounding the Brazilian Antarctic Station ?Comandante Ferraz?. Fish were exposed to seawater at the sewage outfall and in front of the fuel tanks, in both in situ and laboratory assays. The Mn and ENA assay showed that the frequency of R was, in general, lower in the control groups than in the exposed ones in both in situ and laboratory assays, however there were no statistically significative differences in any of the experiments. The most frequent branchial lesions observed in the exposed groups were epithelium hipertrophy and lamelar telangiectasis. In the liver, predominant microscopic findings included lipid vacuolization and macrophages, specially in fish from the in situ experiments. Exposed groups did not show significative differences in the histopathological indexes from those of the controls in any of the experiments. Nevertheless, our results suggest that of the places studied the sewage outlet may present a greater potential of risk to T. newnesi nearby the Brazilian Station.

The objective of this study was to evaluate the influence of biofortification with selenium in the bioactive compounds of broccoli; to test their toxicity and mutagenicity in vivo to prove their safety for consumption; to develop microparticles by the spray dryer technique and to evaluate its physicochemical properties. The broccoli seedlings were biofortified through the addition of 2 mL of 50 &mu;M sodium selenate solution 15 days after sowing (DAS), and collected 30 DAS. The samples were analyzed by different methods for the quantification of selenium (ICP-MS, benchtop and handheld EDXRF). The energy-dispersive X-ray fluorescence spectrometry made either in bench or in a portable equipment presented a good performance for the quantification of selenium, together with low cost and less analysis time. The selenium biofortification technique increased the concentration of this micronutrient in broccoli seedlings. In addition, it also allowed a significant increase in bioactive compounds, such as chlorophyll (12%), phenolic (26%) and flavonoid (19%) compounds, vitamin C (32%) and sulforaphane (12%), the main bioactive compound with anticarcinogenic potential. The efficiency of biofortification with selenium in the culture was verified, and toxicity and mutagenicity studies were conducted in female and male mice treated with different doses of selenium-biofortified broccoli seedlings. After 40 consecutive days of treatment, broccoli seedlings with selenium at doses of 45 and 70 &mu;g Se/kg body weight resulted in significant changes in the relative weights of vital (liver, spleen and kidneys) and reproductive organs (ovary/testis), with the presence of histological alterations in the kidneys and spleen in mice of both sexes. In male mice, the dose of 70 &mu;g Se/kg body weight increased the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes. In females this increase was not observed, demonstrating greater sensitivity of males to the treatment. Finally, microparticles of ethanolic extracts of broccoli seedlings with and without selenium were developed through the spray drying microencapsulation technique. The samples presented low moisture (4-5%) and hygroscopicity (11-12 g of water absorbed 100/g of microparticle) and high solubility (99%). However, there was a significant reduction in the content of phenolic compounds and antioxidant activity after the microencapsulation process. The results of this study demonstrate the importance of biofortification of selenium as a strategy to increase the content of bioactive compounds in broccoli and that the dose of 15 &mu;g Se/kg body weight had no significant toxic or mutagenic effects. In addition, microencapsulation has been shown to allow the elaboration of samples with good technological characteristics however, optimization studies should be conducted to increase the retention power of bioactive compounds and their antioxidant activity. / Os objetivos desse estudo foram avaliar a influência da biofortificação com selênio nos compostos bioativos de brócolis; testar sua toxicidade e mutagenicidade in vivo como forma de comprovar sua segurança para consumo; desenvolver micropartículas pela técnica de spray dryer e avaliar suas propriedades físico-químicas. As mudas de brócolis foram biofortificadas pela adição de 2 mL de solução de 50 &mu;M de selenato de sódio 15 dias de após a semeadura (DAS) e coletadas aos 30 DAS. As amostras foram analisadas por diferentes métodos para a quantificação de selênio (ICP-MS, XRF portátio e EDXRF de bancada). O método de fluorescência de Raios X por dispersão em energia feito em equipamentos de bancada ou portátil apresentou desempenho adequado para quantificação de selênio aliado à baixo custo e menor tempo de análise. A técnica de biofortificação com selênio aumentou a concentração desse micronutriente nas mudas de brócolis. Além disso, também proporcionou aumento significativo nos compostos bioativos, tais como, clorofila (12%), compostos fenólicos (26%) e flavonoides (19%), vitamina C (32%) e sulforafano (12%), principal composto bioativo com potencial anticarcinogênico do brócolis. Verificada a eficiência da biofortificação com selênio, conduziu-se estudos de toxicidade e mutagenicidade em camundongos fêmeas e machos tratados com diferentes doses de mudas de brócolis biofortificadas com selênio (15, 45 e 70 &mu;g Se/kg peso corporal). Após 40 dias consecutivos de tratamento, observou-se que os animais tratados com mudas de brócolis com selênio nas doses de 45 e 70 &mu;g Se/kg peso corporal provocaram significativas alterações nos pesos relativos dos órgãos vitais (fígado, baço e rins) e reprodutivos (ovário/testículos), com presença de alterações histológicas nos rins e no baço, em camundongos de ambos os sexos. Nos camundongos machos, a dose de 70 &mu;g Se/kg peso corporal provocou aumento da frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados. Nas fêmeas este aumento não foi observado, demonstrando maior sensibilidade dos machos ao tratamento. Por fim, através da técnica de microencapsulação por spray dryer desenvolveu-se micropartículas a base de extratos etanólicos de mudas de brócolis com e sem selênio. As amostras apresentaram baixa umidade (4-5%) e higroscopicidade (11-12 g de água absorvida 100-1 g de micropartícula) e alta solubilidade (99%). No entanto, houve uma redução significativa no teor de compostos fenólicos e atividade antioxidante após o processo. Os resultados desse estudo demonstram a importância da biofortificação do selênio como uma estratégia para aumentar o teor de compostos bioativos no brócolis. Com relação à toxicidade, a dose de 15 &mu;g Se/kg peso corporal não apresentou efeitos tóxicos significativos em machos e fêmeas, porém apresentou pontencial mutagênico em machos. Além disso, comprovou-se que a microencapsulação possibilitou a elaboração de amostras com boas características tecnológicas, porém, estudos de otimização devem ser conduzidos a fim de aumentar o poder de retenção dos compostos bioativos e atividade antioxidante.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A doença de Chagas é uma doença tropical infecciosa e negligenciada responsável por um grande número de pessoas infectadas e em risco de infecção, principalmente nas regiões pobres da América Latina. No momento, apenas duas drogas, Benzonidazol e Nifurtimox, estão disponíveis para o tratamento da doença de Chagas, mas são ineficazes por apresentarem baixa taxa de cura. O Megazol é um importante representante da classe dos nitroimidazóis e é uma alternativa promissora devido ao seu potencial tripanocida com um perfil superior de ação quando comparado ao tratamento disponível. No entanto, o Megazol não é utilizado clinicamente uma vez que possui atividade mutagênica e carcinogênica relatada. O Instituto de Tecnologia em Fármacos (Farmanguinhos) desenvolveu três análogos do Megazol: PTAL 05-02 (3-amino-5-(1-metil-5-nitro-1H-imidazol-2-il)-1H-1,2,4-triazol), PAMT 09 (2-amino-N-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-5-(trifluorometil)-1H-1,2,4-triazol) e PTAL 04-09 (1-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-1H-pirazol). O objetivo deste trabalho é apresentar novas moléculas análogas do Megazol com atividade tripanocida, desenvolvidas a partir de estratégias racionais de desenvolvimento de substâncias bioativas ao manter o perfil farmacodinâmico do Megazol enquanto tenta diminuir ou remover o efeito genotóxico. Testes genotóxicos na avaliação segura de novas substâncias bioativas foram utilizados, de acordo com as diretrizes da OECD. O teste da Salmonella/microssoma foi utilizado na avaliação mutagênica e citotóxica, utilizando linhagens de Salmonella enterica sorovar Typhimurium, deficientes e supercompetentes na síntese de enzimas nitroredutase e acetiltransferase. O análogo PAMT 09 não foi mutagênico em nenhuma concentração e linhagem utilizada. Os análogos PTAL 05-02 e PTAL 04-09 foram mutagênicos, na ausência de S9 mix, para a linhagem TA98/1,8-DNP6. Na avaliação de citotoxicidade, os três análogos foram citotóxicos, independente de metabolização exógena S9 mix. O teste do micronúcleo, utilizando células de macrófago de rato, foi realizado para a avaliação genotóxica dos análogos do Megazol. Os três análogos foram capazes de induzir a formação de micronúcleos e apresentaram efeito citotóxico. / Chagas disease is an infectious neglected tropical disease responsible for a large number of infected people and at risk for infection, mainly in poor areas of Latin America. At the moment, there are just two drugs, Benzonidazol and Nifurtimox, available for the Chagas disease treatment, but they are ineffective since they have low cure rates. Megazol is an important representative of nitroimidazole class and it is a promising alternative because of its trypanocidal activity with a superior profile of action compared to the available treatment for Chagas disease. However, Megazol is not used clinically since its mutagenic and carcinogenic activity was reported. The Institute of Pharmaceutical Technology (Farmanguinhos) has designed 3 analogues from Megazol: PTAL 05-02 (2-amine-5-(1-methyl-5-nitro-1H-imidazole-2-yl)-1H-1,2,4-triazole), PAMT 09 (2-amine-N-(1-methyl-4-nitro-1H-imidazole-5-yl)-5-(trifluoromethyl)-1H-1,2,4-triazole) and PTAL 04-09 (1-(1-methyl-4-nitro-1H-imidazole-5-yl)-1H-pirazole). The aim of this work is to present new Megazol analogous molecules with trypanocidal activity, similar pharmacodynamic profile and less or none genotoxic effect developed using strategies of rational drug design. Genotoxic Tests for the safe evaluation of new bioactive substances were used, according to OECD guidelines. The Salmonella/microssoma test was used in the mutagenic and citotoxic evaluation using Salmonella enterica serovar Typhimurium strains lacking and overproducing nitroreductases and acetyltransferases enzymes. The PAMT 09 analogue was not mutagenic in any concentration and strain used. The PTAL 05-02 and PTAL 04-09 analogues was mutagenic, in the absence of S9 mix, to the TA98/1,8-DNP6 strain. In the citotoxic evaluation, the three analogues were citotoxic, with and without S9 mix. The micronucleus test using rat macrophage cells was used in the genotoxic evaluation of Megazol analogous. The three analogues were capable of induce the micronuclei formation and showed citotoxic effect.

Muitos países possuem estações de pesquisa instaladas na Antártica. Hidrocarbonetos de petróleo e os esgotos lançados no mar pelas estações são as fontes potenciais de poluição na Antártica. Peixes da espécie Trematomus newnesi foram utilizados para investigar o potencial genotóxico e os efeitos sobre a morfologia de fígado e brânquias da água diante dos tanques de combustível e da saída de esgoto da Estação Antártica Brasileira ?Comandante Ferraz?, em experimentos in situ e no laboratório. No Ensaio de Mn e ANE, observou-se que a freqüência de R foi, em geral, menor nos controles do que nos grupos expostos, tanto nos bioensaios como nos experimentos in situ, porém não houve diferenças estatisticamente significativas em nenhum dos experimentos. As lesões branquiais mais observadas, nos grupos expostos, foram hipertrofia do epitélio e telangiectasia lamelar. No fígado, as lesões predominantes foram a vacuolização lipídica e a presença de macrófagos, principalmente nos peixes dos experimentos in situ. Não foram verificadas diferenças significativas nos índices de lesões histopatológicas entre os grupos expostos e os controles em nenhum dos experimentos. Contudo, os resultados obtidos sugerem que dos dois locais analisados nas proximidades da Estação Brasileira, a saída de esgoto apresenta maior potencial de risco para T. newnesi. / Many countries have installed research stations in Antarctica. Petroleum hydrocarbons and the sewage disposed into the sea by the stations are potential sources of pollution in Antarctica. Trematomus newnesi specimens were used to assess genotoxic potential and histopathology of the liver and gills of the water surrounding the Brazilian Antarctic Station ?Comandante Ferraz?. Fish were exposed to seawater at the sewage outfall and in front of the fuel tanks, in both in situ and laboratory assays. The Mn and ENA assay showed that the frequency of R was, in general, lower in the control groups than in the exposed ones in both in situ and laboratory assays, however there were no statistically significative differences in any of the experiments. The most frequent branchial lesions observed in the exposed groups were epithelium hipertrophy and lamelar telangiectasis. In the liver, predominant microscopic findings included lipid vacuolization and macrophages, specially in fish from the in situ experiments. Exposed groups did not show significative differences in the histopathological indexes from those of the controls in any of the experiments. Nevertheless, our results suggest that of the places studied the sewage outlet may present a greater potential of risk to T. newnesi nearby the Brazilian Station.

Nanopartículas possuem características físico-químicas úteis para o uso humano, com aplicação na ciência, tecnologia, medicina e produtos de uso diário. A fabricação e a variedade destes produtos vêm crescendo rapidamente, gerando uma preocupação quanto ao risco de exposição aos efeitos tóxicos da contaminação por nanopartículas. Vários efeitos adversos, derivados da exposição de nanopartículas foram descritos tanto para organismos terrestres como aquáticos, porém efeitos genotóxicos ainda são pouco conhecidos para organismos marinhos. Para avaliar a citogenotoxicidade da nanopartícula de dióxido de titânio no peixe marinho T. carolinus, foram administradas injeções intraperitoneais com dosagens de 1,5 e 3,0 ?g-nano-TiO2/grama-de-peixe. Amostras de sangue foram coletadas para realização do teste de micronúcleo (MN) e outras anormalidades nucleares eritrocitárias (ANE) e ensaio cometa (pH>13), 24, 48 e 72 horas após a injeção. Foram investigadas a viabilidade de eritrócitos e a possibilidade de acumulação da nano-TiO2 nos tecidos dos peixes injetados com a maior dosagem, após 72 horas, pelo teste de exclusão do azul de tripano e por microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que a nano-TiO2 é uma substância possivelmente capaz de entrar nas células e induzir efeito genotóxico e citotóxico para esta espécie, por provocar uma diminuição na viabilidade de eritrócitos, um aumento no dano ao DNA e formação de MN e outras ANE. De acordo com nosso conhecimento, este é o único trabalho sobre a genotoxicidade de nano-TiO2 em um peixe marinho. / Nanoparticles have physicochemical characteristics useful for human use, with applications in science, technology, medicine and everyday products. The manufacture and variety of these products have been growing rapidly, creating a concern about the risk of exposure to the toxic effects of contamination by nanoparticles. Several adverse effects of exposure to nanoparticles have been reported for both terrestrial and aquatic organisms, but genotoxic effects are still poorly known for marine organisms. To evaluate the citogenotoxicity of titanium dioxide nanoparticles (nano-TiO2) in marine fish T. carolinus, the substance was administered with intraperitoneal injections at dosages of 1,5 and 3,0 ?g-nano-TiO2/gram-of-fish. Blood samples were collected for the tests of micronucleus (MN) and other erythrocytes nuclear abnormalities (ENA) and comet assay (pH> 13), 24, 48 and 72 hours after injection. We also investigated the viability of erythrocytes and the possibility of accumulation of nano-TiO2 in the tissues of fish injected with the highest dose after 72 hours using trypan blue exclusion test and transmission electron microscopy. The results showed that the nano-TiO2 is a substance that can possibly be able to enter cells and induce cytotoxic and genotoxic effect for this species, by causing a decrease in the viability of erythrocytes, an increase in DNA damage and formation of MN and other ANE. As far as we know, this is the only work done on the genotoxicity of nano-TiO2 in a marine fish

O câncer diferenciado da tireoide (CDT) representa cerca de 90% das malignidades tireoidianas com incidência crescente nas últimas décadas. As modalidades de tratamento incluem tireoidectomia, terapia com 131I (com e sem r-hTSH), radio e quimioterapias. Pouco se sabe sobre os efeitos desses tratamentos em nível celular. O presente trabalho foi proposto com o intuito de avaliar em que extensão a terapia com radioiodo pode causar danos em linfócitos periféricos de pacientes com CDT precedidos ou não com r-hTSH, levando-se em consideração, efeitos agudos, tardios e dosimétricos do 131I (estudo in vivo). Um estudo in vitro também foi realizado em células-alvo de tumores tireoidianos (WRO) por meio de análise de citotoxicidade, genotoxicidade e captação do radioiodo. Para tanto, amostras sanguíneas de pacientes, divididos em 2 grupos (grupo A com r-hTSH + 131I e grupo B somente com 131I) foram coletadas antes, 24h, 1 semana, 1 mês e 1 ano após administração do 131I para análise de aberrações cromossômicas (AC). Curva dose-resposta para 131I in vitro foi elaborada para a estimativa de dose absorvida nos pacientes, comparando as frequências de dicêntricos obtidas in vitro com dados in vivo pelo programa Monte Carlo. A iodoterapia induziu um aumento no número de AC em linfócitos de pacientes com valor máximo 24h após o tratamento, com declínio gradativo ao longo do tempo, com mais danos cromossômicos no grupo B em relação ao grupo A, atingindo níveis similares aos basais 1 anos após a administração do radioido. A frequência de dicêntricos encontrada nos linfócitos de pacientes 24h após o tratamento foi equivalente àquela induzida in vitro (0,354 ± 0,153 MBq/mL para o grupo A e 0,309 ± 0,154 MBq/mL para o grupo B), que corresponde a dose absorvida de 0,8 ± 0,3 Gy e 0,7 ± 0,3 Gy para os grupos A e B, respectivamente, sem significância estatística entre os grupos. As células WRO mostraram um ciclo celular relativamente lento de 96,3h com um cariótipo instável. O ensaio genotóxico mostrou uma radiorresistência relativamente alta (0,07 a 3,70 MBq/mL), sem significância estatística com e sem r-hTSH. No entanto, o ensaio citotóxico, mostrou uma tendência à queda nas concentrações mais altas de 1,85 (p<0,05) e 3,70 MBq/mL (p<0,01) somente na presença de r-hTSH, coincidindo com nível mais alto de captação. Células WRO foram relativamente radiorresitentes também à irradiação externa de 60Co na faixa de dose de 0,2 a 8,3 Gy, com queda gradativa em função do tempo para doses mais altas (10, 20 e 40Gy). Dados obtidos mostraram pouco dano citogenético nos pacientes após a exposição terapêutica com radioiodo, o que sugere um tratamento seguro e eficaz para os pacientes dos dois grupos. Pacientes do grupo A, no entanto, obtiveram uma melhor qualidade de vida com o uso do r-hTSH. Estudos in vitro com irradiação interna (131I) e externa (60Co) com ou sem r-hTSH, apontam a necessidade de uma estratégia terapêutica alternativa para contornar a perda da habilidade das células tireoidianas (WRO) em concentrar o radioiodo, responsável pelo relativo insucesso da iodoterapia em pacientes com CDT. / Differentiated thyroid cancer (DTC) represents about 90% of thyroid malignancies with increasing incidence in the recent decades. Treatment modalities include thyroidectomy, 131I therapy (with or without r-hTSH), radio and chemiotherapy. Little is known about the effects of these treatments at the cellular level. This work was proposed in order to assess to what extent radioiodine therapy can cause damage in peripheral lymphocytes of patients with DTC, preceded or not by r-hTSH, taking into account acute, slow and dosimetric effectsof 131I (in vivo study). An in vitro study was also carried out on thyroid tumor target cells (WRO) by cytotoxicity and genotoxicity analysis and radioiodine uptake. For this, blood samples from patients divided into two groups (group A, r-hTSH + 131I and group B,131I only) were collected before, 24 hours, 1 week, 1 month and 1 year after 131I administration for aberration chromosome analysis (CA). A dose-response curve for 131I in vitro was developed for estmating the absorbed dose in patients, comparing the dicentric frequencies obtained in vitro with in vivo data by Monte Carlo program. Radioiodine therapy induced an increase in the number of CA in lymphocytes of patients peaking 24 hours after treatment, with gradual decline over time and with more chromosomal damage in group B than in group A, reaching baseline levels one year afterradioidine administration. The frequency of dicentric found inpatient lymphocytes, 24h after treatment, was equivalent to that induced in vitro (0.354 ± 0.153 MBq / mL for group A and 0.309 ± 0.154 MBq / mL for group B), which corresponds to absorbed doses of 0.8 ± 0.3 Gy and 0.7 ± 0.3 Gy for groups A and B, respectively, with no significant difference between the groups. WRO cells showed a cell cycle relatively slow: 96,3h with an unstable karyotype. The genotoxic test showed a relatively high radioresistance (0.07 to 3.70 MBq/mL), with no statistical significance, with or without r-hTSH. However, the cytotoxic assay, showed a tendency to decrease at higher concentrations of 1.85 (p <0.05) and 3.70 MBq/ml (p <0.01) only in the presence of r-hTSH, coincident with the highest level of uptake. WRO cells were also relatively radioresistant toexternal irradiation of 60Co in the range of 0.2-8.3 Gy, with a gradual decrease in function of time for higher doses (10,20 and 40Gy).The data obtained showed little cytogenetic damage in patients upon therapeutic exposure, suggesting a safe and effective treatment forboth groups of patients. Patients in group A, however, had a better quality of life by using r-hTSH. In vitro studies with internal (131I) and external (60Co)irradiation, with or without r-hTSH, point to the need for an alternative therapeutic strategy to overcome the loss of ability of thyroid cells (WRO) to concentrate radioiodine, wich is responsible for the failure of radioiodine therapy in patients with DTC.

Nanopartículas possuem características físico-químicas úteis para o uso humano, com aplicação na ciência, tecnologia, medicina e produtos de uso diário. A fabricação e a variedade destes produtos vêm crescendo rapidamente, gerando uma preocupação quanto ao risco de exposição aos efeitos tóxicos da contaminação por nanopartículas. Vários efeitos adversos, derivados da exposição de nanopartículas foram descritos tanto para organismos terrestres como aquáticos, porém efeitos genotóxicos ainda são pouco conhecidos para organismos marinhos. Para avaliar a citogenotoxicidade da nanopartícula de dióxido de titânio no peixe marinho T. carolinus, foram administradas injeções intraperitoneais com dosagens de 1,5 e 3,0 ?g-nano-TiO2/grama-de-peixe. Amostras de sangue foram coletadas para realização do teste de micronúcleo (MN) e outras anormalidades nucleares eritrocitárias (ANE) e ensaio cometa (pH>13), 24, 48 e 72 horas após a injeção. Foram investigadas a viabilidade de eritrócitos e a possibilidade de acumulação da nano-TiO2 nos tecidos dos peixes injetados com a maior dosagem, após 72 horas, pelo teste de exclusão do azul de tripano e por microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que a nano-TiO2 é uma substância possivelmente capaz de entrar nas células e induzir efeito genotóxico e citotóxico para esta espécie, por provocar uma diminuição na viabilidade de eritrócitos, um aumento no dano ao DNA e formação de MN e outras ANE. De acordo com nosso conhecimento, este é o único trabalho sobre a genotoxicidade de nano-TiO2 em um peixe marinho. / Nanoparticles have physicochemical characteristics useful for human use, with applications in science, technology, medicine and everyday products. The manufacture and variety of these products have been growing rapidly, creating a concern about the risk of exposure to the toxic effects of contamination by nanoparticles. Several adverse effects of exposure to nanoparticles have been reported for both terrestrial and aquatic organisms, but genotoxic effects are still poorly known for marine organisms. To evaluate the citogenotoxicity of titanium dioxide nanoparticles (nano-TiO2) in marine fish T. carolinus, the substance was administered with intraperitoneal injections at dosages of 1,5 and 3,0 ?g-nano-TiO2/gram-of-fish. Blood samples were collected for the tests of micronucleus (MN) and other erythrocytes nuclear abnormalities (ENA) and comet assay (pH> 13), 24, 48 and 72 hours after injection. We also investigated the viability of erythrocytes and the possibility of accumulation of nano-TiO2 in the tissues of fish injected with the highest dose after 72 hours using trypan blue exclusion test and transmission electron microscopy. The results showed that the nano-TiO2 is a substance that can possibly be able to enter cells and induce cytotoxic and genotoxic effect for this species, by causing a decrease in the viability of erythrocytes, an increase in DNA damage and formation of MN and other ANE. As far as we know, this is the only work done on the genotoxicity of nano-TiO2 in a marine fish

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiane Lemos Perdigao.pdf: 4071467 bytes, checksum: 85c5c1063113c7af6b5b3131436fee6f (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O estudo da influência do alumínio (Al) em duas cultivares da espécie Passiflora edulis foi apresentado para melhor compreensão deste trabalho em dois capítulos, sendo abordado o experimento com a cultivar (cv.) FB 100 e FB 200 respectivamente. O estudo com a cv. FB100 em casa de vegetação teve como objetivo verificar alterações morfofisiológicas após 15 dias de tratamento com Al. Para as plantas da cv. FB 200 avaliou-se a relação entre a ação mutagênica e a concentração de flavonoides produzidos por estas, quando cultivadas em solos com diferentes concentrações de Al. Foram realizadas análises de massa fresca e seca dos órgãos, comprimento do caule, área foliar, análise nutricional e verificação de Al nas folhas e raízes da cv. FB100. Para a prospecção fitoquímica dos extratos das folhas das cv. FB100 e FB200 utilizaram-se reações de coloração e precipitação para identificação das principais classes químicas presentes. A concentração de flavonoides foi determinada através da quantificação espectrométrica. Para o teste de mutagenicidade verificou-se a frequência de micronúcleos em 2000 eritrócitos policromáticos utilizando o extrato das folhas da cv. FB200. Todos os parâmetros morfológicos analisados para a cv. FB100 não diferiram estatisticamente dos controles. Entretanto foi observada maior concentração de Al nas raízes no tratamento de 5,32 mM. Todos os tratamentos indicaram a presença de alcaloides, flavonoides e esteroides nas folhas das plantas. No extrato hexano/diclorometano a maior concentração de flavonoides, foi observada no tratamento 0,33 mM de Al. Os resultados observados para a cv. FB200 apresentou maior concentração de Al foliar no campo com 0,33mM de Al (T2), os grupos majoritários encontrados foram saponinas, esteroides e flavonoides. O tratamento T2 apresentou a maior concentração de flavonoides e maior potencial mutagênico. Esses resultados indicam que o Al não promoveu alterações significativas nos parâmetros morfofisiológicos da cv. FB 100. Em P. edulis cv. FB 200 saponinas, esteróides e flavonoides ocorrem independentemente da concentração de Al disponível e provavelmente a maior concentração de flavonoide pode ter induzido a mutagenicidade em células de medula óssea de camundongos / The influence of aluminum (Al) in two cultivars of Passiflora edulis is presented in two chapters: first a discussion on the experiment with the cultivar (cv.) FB 100 and second with the cultivar (cv.) FB 200. The study with cv. FB100 in greenhouse aimed to verify morphophysiological changes after 15 days of treatment with Al. For cv. FB 200 plants was evaluated the relationship between the mutagenic and the concentration flavonoids produced by them, when grown in soils with different concentrations aluminum. Analyses of fresh and dry weight organs, stem length, leaf area, nutritional analysis and verification of Al in leaves and roots were studied on cv.FB100. For the leaves of cv. FB100 and cv. FB200 phytochemical screening of extracts were used staining and precipitation reactions for identification of the main chemical classes present. The concentration of the flavonoids was determined by spectrometric measurement. To mutagenicity test was found the frequency of micronucleus in 2000 polychromatic erythrocytes using the cv. FB200 leaves extract. All cv. FB100 morphological parameters analyzed did not differ from controls. However a higher Al concentration was presented in the treatment of 5.32 mM roots. All treatments showed the presence of alkaloids, flavonoids and steroids in leaves. The extract hexane/dichloromethane at a higher flavonoid concentration, has been observed in treating 0.33 mM Al. The cv. FB200 results showed higher foliar Al concentration in the field with 0.33 mM Al (T2), and saponins, steroids and flavonoids were the major groups found. The T2 treatment had the highest flavonoids concentration and higher mutagenic potential. These results indicate that Al did not promote significant changes in cv. FB 100 morphophysiological parameters. In P.edulis cv. FB 200 saponins, flavonoids and steroids occur regardless of the Al available and possibly the largest concentration of flavonoid mutagenicity can be induced in cells of mouse bone marrow