Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-31T17:28:06Z No. of bitstreams: 1 Thassila Nogueira Pitanga Efeito das micropartículas....pdf: 1105021 bytes, checksum: 9c6f0280b9ffe2b38105f8844c3a2b0f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-31T17:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thassila Nogueira Pitanga Efeito das micropartículas....pdf: 1105021 bytes, checksum: 9c6f0280b9ffe2b38105f8844c3a2b0f (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Micropartículas (MPs) são vesículas liberadas da membrana plasmática após ativação celular ou fases iniciais de apoptose. MPs de neutrófilos (NMPs) apresentam em suas membranas diferentes proteínas com diferentes funções e diretamente relacionadas com seus efeitos biológicos, tais como mediadores inflamatórios (integrinas e L-selectina) e mieloperoxidase (MPO). A MPO é uma enzima catiônica, presente nos grânulos azurófilos de neutrófilos e monócitos, responsável pela formação de espécies reativas de oxigênio (ROS). Na presença de peróxido de hidrogênio (H2O2), a enzima catalisa a oxidação de íons cloro com a formação de ácido hipocloroso (HOCl). MPs de diversas origens parecem afetar a função vascular por mecanismos dependentes do estresse oxidativo. No presente trabalho investigamos o possível papel de NMPs na lesão de células endoteliais vasculares in vitro. NMPs foram produzidas por ativação de polimorfonucleares (PMNs) humanos com ionóforo de cálcio e caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão e varredura como estruturas delimitadas por bicamada lipídica e com diâmetro menor do que 1 m. A presença da MPO foi confirmada por citometria de fluxo, utilizando o anticorpo anti-MPO, e pela atividade enzimática detectada por quimioluminescência de HOCl, uma ROS catalisada unicamente pela MPO. A adição de azida, inibidor de peroxidases, ou de taurina, “scavanger” de HOCl, inibiu ou reduziu a atividade enzimática, respectivamente. Identificamos moléculas expressas na superfície das NMPs (CD62L, CD66b, CD45, CD95 e fosfatidilserina). A atividade de MPO foi observada após incubação das células endoteliais vasculares in vitro com NMPs, sugerindo que estas apresentam um potencial de carrear a MPO para a superfície endotelial vascular. A exposição de células endoteliais a NMPs induziu alterações morfológicas e perda da integridade da membrana celular, analisadas, respectivamente, por microscópio de contraste de fase e microscopia de fluorescência. Nossos resultados sugerem que NMPs atuam como carreadoras de MPO para a superfície de células endoteliais vasculares e induzem lesão destas células em um mecanismo dependente de MPO, sugerindo sua participação no desenvolvimento das complicações cardiovasculares. / Microparticles (MPs) are vesicles released from the plasma membrane after cell activation or early stages of apoptosis. In its membranes, neutrophil MPs (NMPs) present different proteins with different functions, directly associated with the cell’s biological activities, such as inflammatory mediation via integrins, L-selectin and myeloperoxidase (MPO). MPO is a cationic enzyme found in the azurophilic granules of neutrophils and monocytes that produces reactive oxygen species (ROS). In the presence of hydrogen peroxide (H2O2) it catalyzes the oxidation of chlorine ions with the formation of hypochlorous acid (HOCl). MPs from different sources seem to affect vascular function through oxidative stress dependent mechanisms. In this study we investigated the possible role of NMP in vascular endothelial cell injury in vitro. NMPs were produced by activation of human polymorphonuclear (PMN) cells with calcium ionophore and characterized as structures bounded by lipid bilayer and with less than 1 m diameter by transmission and scanning electron microscopy. MPO presence was confirmed by flow cytometry using anti-MPO antibody, and the enzyme activity detected by chemiluminescence of HOCl, a ROS catalyzed solely by the MPO. The addition of azide, peroxidase inhibitor, or taurine, HOCl scavanger, inhibited and reduced enzymatic activity, respectively. We identified molecules expressed on the NMPs surface (CD62L, CD66b, CD45, CD95 and phosphatidylserine). MPO activity was observed after incubation of vascular endothelial cells in vitro with NMPs, suggesting that they have the potential to carry MPO to the vascular endothelial surface. Exposure of endothelial cells to NMPs induced morphological changes and loss of cell membrane integrity, which were evaluated, respectively, by phase contrast microscopy and fluorescence microscopy. Our findings suggest that NMPs act as carriers of MPO to the surface of vascular endothelial cells and induce damage to these cells with an MPO-dependent mechanism, suggesting its participation in the development of cardiovascular complications.

O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e avaliar a eficácia de micro e nanopartículas lipídicas sólidas contendo óleo de café verde, cera de abelha e alfa-tocoferol. O óleo de café verde (OCV) foi quantificado por cromatografia gasosa, apresentando em sua composição ácido palmítico (28,74%), ácido linoléico (42,77%), ácido oleico (12,51%), ácido esteárico (10,62%), ácido araquídico (3,57%) entre outros ácidos graxos (1,79%), estes valores foram próximos àqueles descrito na literatura. As micropartículas foram preparadas pelo método de spray congealing e as nanopartículas pela técnica da microemulsão a quente. Os rendimentos de micropartículas variaram de 42 a 58% com tamanhos entre 63,3 a 101,2 ?m. Os rendimentos das nanopartículas variaram entre 96 a 97% e com tamanhos entre 249 a 766 nm. Posteriormente foram definidas as condições para o processo de produção das micro e nanopartículas, bem como a concentração de OCV, alfa tocoferol e cera de abelha (CA). Um estudo mais detalhado das proporções de OCV, cera de abelha e alfatocoferol foi realizado com o auxílio de um planejamento de misturas, avaliando a estabilidade oxidativa por testes Rancimat e Termogravimétricos. Porém, nas condições do presente estudo, esses resultados não foram estatisticamente diferentes, por isso escolheu-se a maior concentração de OCV proposta (50%). Após estas etapas, as partículas foram adicionadas em gel aristoflex®, bem como o OCV em sua forma líquida, formando três géis de mesma concentração para comparar e avaliar a viabilidade do preparo de micro e nanopartículas frente a forma convencional já comercializada. Estudos em Artemia salina foram realizados como teste preliminar para avaliar a citotoxicidade dos três géis, sendo que em concentrações de 500?g/mL os géis contendo nanopartículas apresentaram maior letalidade do que aqueles compostos por micropartículas ou OCV líquido. Testes de FPS in vitro apresentaram baixos índices de proteção solar, entre 0,19 e 0,28, porém o OCV apresenta proteção contra os raios UVB podendo ser utilizado como potencializador na ação fotoprotetora de filtros químicos. As análises de viabilidade celular mostraram que mesmo na forma de micro ou nanopartículas, o OCV e a cera de abelhas se mantiveram seguros para a utilização em formulações tópicas. Nos testes de estabilidade química, transcorrido o tempo de armazenamento, os géis contendo OCV em sua forma líquida apresentaram teores de ácido palmítico de 56 e 38%, nas temperaturas de 25oC e 40oC respectivamente. Enquanto que as micropartículas apresentaram teores de 69 e 53% e as nanopartículas 73 e 69%, nas referidas temperaturas. Nos testes clínicos, as micropartículas apresentaram um melhor desempenho para a melhora do conteúdo aquoso do estrato córneo depois de 2 horas de aplicação do produto. Já as nanopartículas apresentaram os melhores resultados para a perda de água transepidérmica, conferindo à pele uma menor perda de água. Nos testes de permeação cutânea, não houve quantificação pelo método utilizado em nenhum tempo da fase receptora, porém o presente estudos apresentou maiores concentrações do ácido palmítico na derme dos ensaios feitos para as nanopartículas e no estrato córneo daqueles feitos para as micropartículas. Portanto, diante dos resultados obtidos, a micro e nanoencapsulação do OCV é uma alternativa interessante para aumentar a estabilidade deste óleo, além de promover melhoras em sua eficácia. / This study aimed to develop and assess the effectiveness of solid lipid micro and nanoparticles containing green coffee oil, beeswax and alpha-tocopherol. Green coffee oil was quantified by gas chromatography, showing the composition in their palmitic acid (28.74%), linoleic acid (42.77%), oleic acid (12.51%), stearic acid (10.62%), arachidic acid (3.57%) and other fatty acids (1.79%), these values were similar to those described in the literature. The microparticles were prepared by spray congealing method, and the nanoparticles by the technique of hot microemulsion. Microparticles yields ranged 42-58% in size from 63.3 to 101.2 micrometers. Yields of nanoparticles ranged from 96-97% and ranging in size from 249-766 nm. Thereafter the conditions were set for the process of production of micro and nanoparticles, as well as the concentration of green coffee oil, alpha tocopherol and beeswax. A more detailed study of the proportions of GCO, beeswax and alpha-tocopherol was performed with the aid of a planning mixtures evaluating the oxidative stability by Rancimat and thermogravimetric tests. However, under the conditions of this study, these results were not statistically different, so it was chosen the highest concentration of green coffee oil proposal (50%). After these steps, the particles were added in aristoflex® gel, and the green coffee oil in liquid form, forming three gels of the same concentration to compare and assess the viability of micro and nanoparticles prepared against conventionally already commercialized. Studies were conducted on Artemia salina as a preliminary test to evaluate the cytotoxicity of the three gels, whereas at concentrations of 500?g/ml nanoparticles containing gels had a higher mortality than those composed of microparticles or liquid GCO. SPF vitro tests showed low levels of sunscreen, between 0.19 and 0.28, but GCO shows protection against UVB rays can be used as potentiating the action of chemical sunscreen filters. The cell viability tests have shown that even in the form of microparticles or nanoparticles, the GCO and beeswax kept safe for use in topical formulations. In the chemical stability test, the elapsed storage time, the gels containing GCO presented in liquid form palmitic acid levels of 56 and 38% at temperatures of 25°C and 40°C respectively. While the microparticles showed levels of 69 and 53% and the nanoparticles 73 and 69% in those temperatures. In clinical tests, the microparticles showed a better performance for the improvement of the water content of the stratum corneum after 2 hours of application of the product. Already nanoparticles showed the best results for the transepidermal water loss, giving the skin a smaller loss water. The skin permeation tests, no quantification by the method used at any time from the receiving phase, but this study showed higher concentrations of palmitic acid in the dermis of the tests made to the nanoparticles and the stratum corneum of those made to the microparticles. Therefore, opposite the results obtained, the micro and nanoencapsulção of green coffee oil is an interesting alternative to increase the stability of this oil, and promote improvements in their effectiveness

Submitted by Rebeka Godeiro (rebeka_carvalho@hotmail.com) on 2018-05-09T17:32:18Z No. of bitstreams: 1 ANTONIO JOELSON NETTO - DISSERTAÇÃO ZOOTECNIA 2018.pdf: 913340 bytes, checksum: af0fe11a0d7288ce5e387a196c89df8d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-09T17:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANTONIO JOELSON NETTO - DISSERTAÇÃO ZOOTECNIA 2018.pdf: 913340 bytes, checksum: af0fe11a0d7288ce5e387a196c89df8d (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 / Capes / A ureia é amplamente utilizada na dieta de ruminantes como fonte de nitrogênio não proteico (NNP) em substituição parcial ás fontes de proteína verdadeira, devido seu baixo custo por unidade de nutriente e alta capacidade de disponibilizar amônia como fonte de nitrogênio para produção de proteína microbiana. No entanto, há uma preocupação quanto a sua utilização em níveis elevados na dieta animal, devido o baixo aproveitamento do nitrogênio amoniacal, e principalmente pela possibilidade de intoxicação do rebanho. O presente estudo propôs-se a obter e caracterizar microesferas de cera de carnaúba contendo ureia. Os sistemas microencapsulados foram investigados quanto a rendimento e eficiência de microencapsulação, além de caracterizados por técnicas de Termogravimetria, Calorimetria exploratória diferencial, Espectroscospia na região do Infravermelho, Microscopia eletrônica de varredura, determinação de umidade e atividade de água,. As formulações (2:1) e (4:1) apresentaram altos índices de retenção de ureia, além de bons rendimentos, atestando a adequação da escolha da cera de carnaúba e também da técnica de liofilização para obter os sistemas microencapsulados. A cera de carnaúba proporcionou a inibição da higroscopicidade da ureia, prevenindo sua petrificação durante armazenamento e, portanto, facilitando sua homogeneização com os demais ingredientes da dieta. Desta forma, a partir das constatações feitas, a cera de carnaúba apresenta-se como um encapsulante promissor para obtenção de micropartículas contendo ureia para possível liberação lenta, em que, de acordo com o presente estudo, entre as duas formulações desenvolvidas, recomenda-se a UM2 (2:1), visto que apresentou melhor rendimento e é o sistema com maior conteúdo de ureia, proporcionando maior aporte de nitrogênio não proteico (NNP) de liberação lenta para o animal. / Urea is widely used in the diet of ruminants as a source of non-protein nitrogen (NNP) in partial substitution to true protein sources, due to its low cost per unit of nutrient and high capacity to provide ammonia as a source of nitrogen for the production of microbial protein. However, there is a concern about its use at high levels to the animal diet, due to the low utilization of ammoniacal nitrogen, and mainly due to the possibility of intoxication of the herd. The present study aimed obtaining and characterizing urea-containing carnauba wax microspheres. The microencapsulated systems were investigated in terms of microencapsulation efficiency and yield, and also characterized by techniques of Thermogravimetry, Differential scanning calorimetry, Fourier transform infrared Spectroscopy, Scanning electron microscopy, moisture content, and water activity. The formulations presented high urea retention rates, as well as good yields, attesting the adequacy of carnauba wax and also the lyophilization technique to obtain the microencapsulated systems. Carnauba wax provided the inhibition of the hygroscopicity of urea, preventing its petrification during storage, facilitating its homogenization with other ingredients of the diet. Carnauba wax is a promising encapsulant for the production of urea microparticles for possible slow release, in which, according to the present study, between the two formulations developed, it is recommended the formulation UM2 (2:1), since it presented better yield and is the system with higher content of urea, providing a higher supply of slow release non-protein nitrogen (NNP) to the animal.

Diversos biomateriais podem ser aplicados na engenharia de tecidos, mas poucos são utilizados em contato direto com células-tronco na forma de suportes de micropartículas, devido à falta de adesão, espalhamento e toxicidade do material, de forma que os tornam inviáveis junto ao cultivo celular. Um biomaterial promissor para bioengenharia é a fibroína, proteína fibrosa presente no casulo do bicho da seda (Bombyx mori), devido à sua resistência mecânica, biocompatibilidade e mínima reação inflamatória, porém, suas caracteristicas são pouco conhecidas na literatura. O mesmo não ocorre com o colágeno que já é bastante estudado por pesquisadores e, assim como a fibroína, apresenta propriedades naturais que incluem baixa resposta imunológica, baixa toxicidade e habilidade de promover o crescimento celular, porém o uso do colágeno em sua maior parte é em forma de filmes, esponjas e membranas. Como existem poucos métodos relacionados para preparação e caracterização de micropartículas em formatos esféricos e porosos, este trabalho teve por objetivo desenvolver e caracterizar micropartículas à base de colágeno ou fibroína, tratadas ou não com glutaraldeído (GA), para ser utilizado como suporte para células-tronco mesenquimais e avaliar a citotoxicidade destes materiais em cultura celular.Nos resultados de Calorimetria Exploratória Diferencial para ambos os materiais, colágeno e fibroína quando submetidas a tratamento com GA, a temperatura de desnaturação e degradação aumenta, respectivamente. Na microscopia ótica, eletrônica de varredura e birrefringência, observa-se o aparecimento de rugosidade e poros e/ou bolhas de ar no interior das micropartículas em maior quantidade quando tratadas com GA, o que pode ser um fator positivo para aderência celular no suporte. A porcentagem de água absorvida é maior no colágeno devido às estruturas hidrofóbicas em maior quantidade na fibroína, porém, quando tratadas com GA, a absorção é estabilizada em um curto tempo em ambos os materiais. Os picos nos espectros de FTIR mostram as bandas amidas I, II e III dos materiais e as alterações sofridas quando em contato com GA e os testes de citotoxicidade que ambos materiais tratados ou não, são atóxicos, mas o desenvolvimento celular nas micropartículas de fibroína é mais lento e diminui quando tratados com GA, por possuir mais estruturas ordenadas na forma de -folha quando se necessita de um crescimento mais controlado das células nas micropartículas. / There are several biomaterials can that be used in tissue engineering, but few are used in direct contact with stem cells like scaffold in the microparticle form, because of the lack of adhesion, spreading and toxicity of the biomaterial, in order to make them nonviable in the cell culture. A promising biomaterial for bioengineering is fibroin, a fibrous protein present in the fibers of silkworm (Bombyx mori) cocoon, because of its mechanical strength, biocompatibility and minimal inflammatory reaction; however, little is still described in the literature. Not so with the collagen that is already well studied by researchers and as the fibroin, has natural properties that include low immune response, low toxicity and ability to promote cell growth, but the use of collagen is mostly in form of films, sponges and membranes. As there are few methods reported for preparation and characterization of microparticles in spherical shapes and porous, this study aimed to develop and characterize microparticles based on collagen or fibroin, treated or not with glutaraldehyde (GA), to be used as a support for cells mesenchymal stem cells and evaluating the cytotoxicity of these materials in cell culture.In the results of Differential Scanning Calorimetry (DSC) curves for both materials, collagen and fibroin when subjected to treatment with GA, the denaturation and degradation temperatures increases, respectively. In Optical Microscopy, MSCanning electronic Microscopy and Birefringence results, it is observed the onset of surface roughness and porosity and or air pockets within the microparticles in greater quantity when treated with GA, which may be a positive factor for cell attachment on the support. The percentage of water absorbed is greater in the collagen structures due to more hydrophobic structure than silk fibroin, but when in treated with GA, absorption is stabilized in a shorter time in both materials. The peaks in FTIR spectra show bands amide I, II and III of the materials and the changes suffered when in contact with GA and cytotoxicity tests are non-toxic to both biomaterials treated or not, however, in the growth of cells, the fibroin microparticles is slower and decreases when treated with GA, due to its more ordered structure in the form of -sheet and more spherical than collagen due to its more ordered -sheet structures, which may be very interesting when it needs a more controlled growth of cells on microspheres.

A Trombocitopenia imune (PTI) é uma doença imuno mediada adquirida de adultos e crianças caracterizada por plaquetopenia transitória ou persistente, onde o grau de plaquetopenia aumenta o risco de sangramento. Geralmente, os pacientes apresentam manifestações clínicas apenas em plaquetopenias abaixo de 50x103/mm3, e contagem de plaquetas entre 100 e 150 x103/mm3, se estável por mais de 6 meses, necessariamente não indica uma condição patológica. Tem sido sugerido diferentes processos fisiopatológicos relacionados às plaquetas de acordo com a intensidade da plaquetopenia, e que alterações na megacariocitopoiese e diminuição da sobrevida plaquetária são eventos determinantes na PTI. Contagem de plaquetas reticuladas em citometria de fluxo é um teste muito útil para avaliação da plaquetopenia, pois reflete a atividade megacariocitopoiética, destruição das plaquetas e a própria contagem de plaquetas. Tanto as plaquetas quanto os megacariócitos apresentam a via intrínseca da apoptose. A atividade dos principais mediadores da apoptose intrínseca, como Bax a Bak, é regulada por proteínas anti-apoptótica da família Bcl-2, tais como Bcl-xL. Um balanço entre Bcl-xL e Bax regula a sobrevivência plaquetária. Pacientes de PTI apresentam aumento da ativação plaquetária e da formação de micropartículas derivadas de plaquetas (MPP). Nosso objetivo foi avaliar a relação entre produção e apoptose plaquetária, e associá-la com a ativação plaquetária e a formação de MPP nos diferentes graus de intensidade da PTI. Os pacientes recrutados foram diagnosticados para trombocitopenia imune (PTI) primária, \"idiopática\", não esplenectomizados, acompanhados regularmente no ambulatório de Doenças Hemorrágicas e Trombóticas, do Serviço de Hematologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, e foram divididos grupos de acordo com contagem de plaquetas: < 50x103/mm3 (n=7); entre 50-100x103/mm3 (n=7); > 100x103/mm3 (n=7). Como grupo controle, foram avaliados 10 doadores de sangue da Fundação Pró-Sangue Hemocentro de São Paulo. A produção plaquetária foi estabelecida através da contagem de plaquetas reticuladas por citometria de fluxo com laranja de tiazol. Também por citometria de fluxo avaliamos a ativação plaquetária pela expressão de P-selectina (CD62P), e a formação de MPP através de beads de 1um e dupla positividade para CD41a (GPIIbIIIa) e CD31 (molécula de adesão PECAM-1). A apoptose foi avaliada pela relação entre as expressões das proteínas anti apoptótica, Bcl-xL, e pró apoptótica, Bax, (Bcl-xL/Bax) em Western Blotting. Evidenciamos que na PTI há um aumento do numero de plaquetas reticuladas, predomínio de Bax em relação à Bcl-xL, uma maior ativação plaquetária e formação de MPP, mas em níveis variados dependentes do grau de plaquetopenia instalado. Sugerimos que o nível de predomínio do sistema pró apoptose sobre o anti apoptótico estabelece a intensidade da plaquetopenia na PTI. E que os eventos ativação plaquetária e formação de MPP são regulados pelo balanço entre Bcl-xL/Bax / Immune thrombocytopenic (ITP) is an immune-mediated acquired disease of adults and children characterized by transient or persistent decrease of the platelet count and, depending upon the degree of thrombocytopenia, increased risk of bleeding. ITP usually presents with clinical manifestations only in platelet counts below 50x103/mm3, and counts between 100 and 150x103/mm3 if they have been stable for more than 6 months do not necessarily indicate a pathologic condition. It has been suggested the existence of different pathophysiological processes involving platelets according to the severity of thrombocytopenia, and that alterations in the megakaryopoiesis and reduced platelet lifespan play a key role in ITP. The flow cytometric analysis of reticulated platelets is useful for evaluating thrombocytopenia that reflect the activity megakaryopoiesis, platelets destruction, plataelet count, and age. Platelets and megakaryocytes contain intrinsic pathway of apoptosis. The activity of key mediators of intrinsic apoptosis, Bak and Bax, is tightly controlled by anti-apoptotic Bcl-2 family members, of which Bcl-xL, wich have been shown to coordinately regulate platelet survival. ITP patients have a larger amount of activated platelets that express P-selectin as well as an increase of platelets-derived microparticles (PMP). We suggest a relationship between platelet production and Bcl-xL and Bax expression in ITP patients from different degrees of thrombocytopenia, that has relate with platelet activation and PMP. Our aim was assessment of ratio between platelets production and apoptosis, and it associate with platelets activation and PMP in differents thrombocytopenia degree in ITP. Patients were considered eligible for the study if they were on regular follow-up at the clinic of haemorrhagic and thrombotic diseases of the Hematology Service of Clinics Hospital of University of São Paulo Medicine School diagnosed with primary immune thrombocytopenia, \"idiopathic\". Patients were divided into groups according to levels of thrombocytopenia: platelets count between 100 and 150x103/mm3 ( > 100x103/mm3); between 50 and 100x103/mm3 (50-100x103/mm3); and below 50x103/mm3 ( < 50x103/mm3). Healthy volunteers were blood donors in the Pró-Sangue Foundation of Blood Center of São Paulo, with platelets count between 150 and 450 x103/mm3. Platelets production was through reticulated platelets count by flow cytometry wiht thiazole orange. Also by flow cytometry evaluated platelet activation through expression of P-selectin, and PMP by beads of 1um and double positive for CD41a, and CD31. Apoptosis was evaluated by the relationship between anti apoptotic proteins Bcl- XL, and pro apoptotic, Bax (Bcl-XL / Bax) in Western blotting. We show that there higher reticulated platelets in ITP as well as Bax predominantly in relation to Bcl-xL, increased platelet activation and PMP, but at varying levels depending on the degree of thrombocytopenia. We suggest that the level of dominance of pro apoptotic system on the anti-apoptotic establishes the intensity of thrombocytopenia in ITP, and that platelet activation and formation of MPP events are regulated by the balance between Bcl-xL / Bax

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:37Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Flabio da Rosa Pons Junior.pdf: 1999620 bytes, checksum: e5045f0611ac73ef991604e04484fbb8 (MD5) Flabio da Rosa Pons Junior.pdf.txt: 174053 bytes, checksum: 8140591651031d4c7b893b3bc3ce8675 (MD5) Flabio da Rosa Pons Junior.pdf.jpg: 3814 bytes, checksum: 8bd8fcbd7817488781e11c3f2a9361f5 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The fungal infections in humans occur in several ways, can this is superficial and systemic mycoses mycoses. The use of new antifungal made important progress in the treatment of different types of fungal infections. Among the drugs used to treat, there is ketoconazole, azole derivative, a synthetic molecule that acts by inhibiting biosynthesis of ergosterol molecule, exerting fungicidal. Treatment with ketoconazole requires frequent applications of the product, which causes skin irritation, the adherence to treatment. Initial studies have shown that drugs have nanocarrier improvement in selectivity, reducing side effects by modifying the release and increasing the effectiveness of the asset. This study aimed to characterize, evaluate the physical and chemical stability and antimicrobial activity of systems composed of nanoparticles or microparticles incorporated into formulations containing ketoconazole shampoo. All studies were carried out comparing ketoconazole as nanostructured and microstructured with the free form. The samples were stored under conditions of 25 ± 2 ° C, 4 ± 2 ° C and 40 ± 2 ° C and 75 ± 5% RH and exposed to UV light for 90 days and analyzed at 0, 7, 15, 30, 60 and 90 days in relation to the determination of pH, particle diameter, polydispersity index, zeta potential, rate of association and the drug dosing, antimicrobial activity and viscosity for the samples of shampoo. The average particle size for the nanocapsules was less than 370 nm, for microparticles less than 52 micrometers. All samples consist of the nanocarrier showed negative zeta potential. The values for the rate of association were 92.10% for the nanocapsules and 97.69% for the microparticles. Regarding the content of the suspensions and tested for stability, the samples comprising nanocapsules showed the loss of a smaller amount of assets (17.9% and 19.7%) in conditions of 25 ± 2 ° C and ± 4 2 ° C respectively. For formulations of shampoo made by nanocarrier systems, the same place, but with losses (9.3% and 13.6%) for the same conditions of suspension. In the analysis of antimicrobial activity, suspensions of nanocapsules had power of 98.15% and 100.25% of microparticles. Samples of shampoo were analyzed by microbiological assay sensitivity, which analyzed both qualitatively and showed that the samples have antifungal activity. The validation of analytical methodologies for the suspensions showed satisfactory results for all parameters. The results obtained, it can be concluded that the suspensions have demonstrated good stability, even when incorporated into a topical pharmaceutical vehicle, thus representing a better technological feasibility for the pharmaceutical area. / As infecções fúngicas nos seres humanos ocorrem de formas variadas, podendo tratar-se de micoses superficiais ou micoses sistêmicas. O uso de novos antifúngicos permitiu importantes progressos na terapêutica dos diferentes tipos de infecções micóticas. Dentre os fármacos utilizados para o tratamento, destaca-se o cetoconazol, derivado dos azóis, uma molécula sintética que age inibindo na biossíntese da molécula do ergosterol, exercendo ação fungicida. O tratamento com cetoconazol exige aplicações freqüentes do produto, o que provoca irritação cutânea, dificultando a adesão ao tratamento. Estudos iniciais têm demonstrado que fármacos nanocarreados apresentam melhora na seletividade, reduzindo efeitos colaterais, modificando a liberação e aumentando a eficácia do ativo. Este trabalho teve como objetivo, caracterizar, avaliar a estabilidade físico química e a atividade antimicrobiana de sistemas compostos de nanopartículas ou micropartículas contendo cetoconazol incorporadas em formulações de xampu. Todos os estudos foram realizados comparando-se o cetoconazol na forma nanoestruturada e microestruturada com a forma livre. As amostras foram armazenadas nas condições de 25 ± 2 °C, 4 ± 2 °C e 40 ± 2 °C e 75 ± 5% UR e expostas à luz UV, durante 90 dias, sendo analisadas em períodos 0, 7, 15, 30, 60 e 90 dias, em relação à determinação do pH, diâmetro de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, taxa de associação e doseamento do fármaco, atividade antimicrobiana e viscosidade para as amostras de xampu. O tamanho médio das partículas para as nanocápsulas foi inferior a 370 nm, para as micropartículas inferior a 52 &#956;m. Todas as amostras compostas pelos nanocarreadores apresentaram potencial zeta negativo. Os valores para a taxa de associação foram de 92,10 % para as nanocápsulas e 97,69 % para as micropartículas. Em relação ao teor das suspensões submetidas aos testes de estabilidade, as amostras compostas por nanocápsulas foram as que apresentaram uma menor perda de quantidade do ativo (17,9 % e 19,7 %) nas condições de 25 ± 2 °C e 4 ± 2 °C respectivamente. Para as formulações de xampu compostas pelos sistemas de nanocarreadores, o mesmo ocorreu, porém com perdas de (9,3 % e 13,6 %) para as mesmas condições das suspensões. Na análise da atividade antimicrobiana, as suspensões de nanocapsulas apresentaram potência de 98,15 % e as de micropartículas 100,25 %. As amostras de xampu foram analisadas pelo ensaio microbiológico de sensibilidade, o qual analisado de forma qualitativa e demonstrou que as amostras possuem atividade antifúngica. As validações das metodologias analíticas para as suspensões apresentaram resultados satisfatórios para todos os parâmetros analisados. Através dos resultados obtidos, pode-se concluir que as suspensões demonstraram ter boa estabilidade, mesmo quando incorporadas em um veículo farmacêutico de uso tópico, representando assim, uma melhor viabilidade tecnológica para a área farmacêutica.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T14:17:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_FlabioDaRosaPonsJunior.pdf: 2017674 bytes, checksum: ce2baac29e6f32b9170ceef6e8aa57e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T14:17:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_FlabioDaRosaPonsJunior.pdf: 2017674 bytes, checksum: ce2baac29e6f32b9170ceef6e8aa57e7 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / The fungal infections in humans occur in several ways, can this is superficial and systemic mycoses mycoses. The use of new antifungal made important progress in the treatment of different types of fungal infections. Among the drugs used to treat, there is ketoconazole, azole derivative, a synthetic molecule that acts by inhibiting biosynthesis of ergosterol molecule, exerting fungicidal. Treatment with ketoconazole requires frequent applications of the product, which causes skin irritation, the adherence to treatment. Initial studies have shown that drugs have nanocarrier improvement in selectivity, reducing side effects by modifying the release and increasing the effectiveness of the asset. This study aimed to characterize, evaluate the physical and chemical stability and antimicrobial activity of systems composed of nanoparticles or microparticles incorporated into formulations containing ketoconazole shampoo. All studies were carried out comparing ketoconazole as nanostructured and microstructured with the free form. The samples were stored under conditions of 25 ± 2 ° C, 4 ± 2 ° C and 40 ± 2 ° C and 75 ± 5% RH and exposed to UV light for 90 days and analyzed at 0, 7, 15, 30, 60 and 90 days in relation to the determination of pH, particle diameter, polydispersity index, zeta potential, rate of association and the drug dosing, antimicrobial activity and viscosity for the samples of shampoo. The average particle size for the nanocapsules was less than 370 nm, for microparticles less than 52 micrometers. All samples consist of the nanocarrier showed negative zeta potential. The values for the rate of association were 92.10% for the nanocapsules and 97.69% for the microparticles. Regarding the content of the suspensions and tested for stability, the samples comprising nanocapsules showed the loss of a smaller amount of assets (17.9% and 19.7%) in conditions of 25 ± 2 ° C and ± 4 2 ° C respectively. For formulations of shampoo made by nanocarrier systems, the same place, but with losses (9.3% and 13.6%) for the same conditions of suspension. In the analysis of antimicrobial activity, suspensions of nanocapsules had power of 98.15% and 100.25% of microparticles. Samples of shampoo were analyzed by microbiological assay sensitivity, which analyzed both qualitatively and showed that the samples have antifungal activity. The validation of analytical methodologies for the suspensions showed satisfactory results for all parameters. The results obtained, it can be concluded that the suspensions have demonstrated good stability, even when incorporated into a topical pharmaceutical vehicle, thus representing a better technological feasibility for the pharmaceutical area. / As infecções fúngicas nos seres humanos ocorrem de formas variadas, podendo tratar-se de micoses superficiais ou micoses sistêmicas. O uso de novos antifúngicos permitiu importantes progressos na terapêutica dos diferentes tipos de infecções micóticas. Dentre os fármacos utilizados para o tratamento, destaca-se o cetoconazol, derivado dos azóis, uma molécula sintética que age inibindo na biossíntese da molécula do ergosterol, exercendo ação fungicida. O tratamento com cetoconazol exige aplicações freqüentes do produto, o que provoca irritação cutânea, dificultando a adesão ao tratamento. Estudos iniciais têm demonstrado que fármacos nanocarreados apresentam melhora na seletividade, reduzindo efeitos colaterais, modificando a liberação e aumentando a eficácia do ativo. Este trabalho teve como objetivo, caracterizar, avaliar a estabilidade físico–química e a atividade antimicrobiana de sistemas compostos de nanopartículas ou micropartículas contendo cetoconazol incorporadas em formulações de xampu. Todos os estudos foram realizados comparando-se o cetoconazol na forma nanoestruturada e microestruturada com a forma livre. As amostras foram armazenadas nas condições de 25 ± 2 °C, 4 ± 2 °C e 40 ± 2 °C e 75 ± 5% UR e expostas à luz UV, durante 90 dias, sendo analisadas em períodos 0, 7, 15, 30, 60 e 90 dias, em relação à determinação do pH, diâmetro de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, taxa de associação e doseamento do fármaco, atividade antimicrobiana e viscosidade para as amostras de xampu. O tamanho médio das partículas para as nanocápsulas foi inferior a 370 nm, para as micropartículas inferior a 52 μm. Todas as amostras compostas pelos nanocarreadores apresentaram potencial zeta negativo. Os valores para a taxa de associação foram de 92,10 % para as nanocápsulas e 97,69 % para as micropartículas. Em relação ao teor das suspensões submetidas aos testes de estabilidade, as amostras compostas por nanocápsulas foram as que apresentaram uma menor perda de quantidade do ativo (17,9 % e 19,7 %) nas condições de 25 ± 2 °C e 4 ± 2 °C respectivamente. Para as formulações de xampu compostas pelos sistemas de nanocarreadores, o mesmo ocorreu, porém com perdas de (9,3 % e 13,6 %) para as mesmas condições das suspensões. Na análise da atividade antimicrobiana, as suspensões de nanocapsulas apresentaram potência de 98,15 % e as de micropartículas 100,25 %. As amostras de xampu foram analisadas pelo ensaio microbiológico de sensibilidade, o qual analisado de forma qualitativa e demonstrou que as amostras possuem atividade antifúngica. As validações das metodologias analíticas para as suspensões apresentaram resultados satisfatórios para todos os parâmetros analisados. Através dos resultados obtidos, pode-se concluir que as suspensões demonstraram ter boa estabilidade, mesmo quando incorporadas em um veículo farmacêutico de uso tópico, representando assim, uma melhor viabilidade tecnológica para a área farmacêutica.

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-04T23:14:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kubo_TatianaMiyukiOgawa_M.pdf: 3390196 bytes, checksum: 90fbf573dfcb12a87da26f2fdcbfb4dd (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Neste trabalho foi feito o estudo da preparação de microesferas de hialuronato de sódio pelo método de emulsificação e evaporação de solvente, utilizando temperatura como agente de retificação física. O assunto foi abordado com ênfase na influência das condições operacionais do processo nas propriedades físico-químicas das microesferas e na sua capacidade de incorporação de proteínas, visando atender os requisitos da administração nasal. Inicialmente, a albumina de soro bovino foi usada como proteína modelo e, na segunda etapa, a ovoalbumina foi incorporada nas melhores condições do processo. Para conferir maior resistência mecânica às partículas e prolongar o tempo de liberação da proteína encapsulada, foi utilizado um segundo método de preparação, também por emulsificação, porem com reticulação química feita pela ligação cruzada (crosslinking), com dihidrazida adípica (ADH) em meio aquosos. As microesferas foram caracterizadas pelo seu diâmetro médio e distribuição de tamanhos, morfololgia, cristalinidade, mucoadesividade, intumescimento, eficiência de encapsulação e perfil de liberação das proteínas encapsuladas, eficiência de encapsulação e perfil de liberação das proteínas encapsuladas. Para as partículas reticuladas com ADH, o grau de reticulação foi correlacionado com a sua capacidade de intumescimento e com a cinética de liberação da proteína. Esses efeitos foram caracterizados através do coeficiente de difusão da ovoalbumina nas partículas com diferentes graus de reticulação... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: This work describes the study of sodium hyaluronate microspheres preparation through the emulsification and solvent evaporation technique, using temperature as the physical crosslinking agent. The subject was analyzed with emphasis on the influence of the process operations conditions on the physical and chemical properties of the microspheres and on its protein encapsulation capacity, willing to attend the nasal administration requirements. Initially, bovine serum albumin (BSA) was used as model protein, and in the second step, ovoalbumin (OVA) was incorporated using the best process conditions. In order to improve the mechanical resistance of the particles and extend the release time of the encapsulated protein, a second preparation method, also based on an emulsification but involving a chemical crosslinking reaction using adipic dihidrazide (ADH) in an aqueous solution, was evaluated. The microspheres were characterized by the mean diameter and size distribution, morphology, cristallinity, mucoadhesiveness, swelling capacity, encapsulation efficiency and release profile of the encapsulated proteins. For the particles crosslinked with ADH, the degree of crosslinking was correlated to the swelling capacity and with the protein release kinetics. These effects were characterized by the diffusion coefficient of ovoalbumin from the particles with different crosslinking degrees. The results showed the feasubillity of the sodium hyaluronate microspheres production, its protein encapsulation capability and the flexibility to modulate its properties according to the process conditions... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Eliana Aparecida de Rezende Duek / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-11T14:13:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bernatavicius_SergioTadeu_D.pdf: 9695068 bytes, checksum: b175be32480fc6743e11297c6d6f38fa (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Um dos pontos que deve ser considerado de difícil solução no Brasil é a perda dentinária. Vários materiais tem sido estudados para minimizar o problema, mas nenhum atende às necessidades de tal aplicação. Nesse sentido, o objetivo do presente avaliar a biocompatibilidade do Poli (L-ácido láctico), PLLA, contendo BMP-2 no tratamento de grandes perdas de dentina onqe pode ou não ocorrer a exposição da polpa dental, casos onde a exposição leva ao tratamento endodontico ou exodontia. Para tanto, foram realizados estudos in vivo em coelhos e humanos, ambos aprovados pelo Comitê de Ética ém Pesquisa da Universidade Estadual de Campinas parecer número 04512006. Os estudos em coelhos foram realizados utilizando-se 'çle um modelo experimental onde foi implantado as microesferas contendo BMP-2 nos incisivos centrais e após 7,20, 40, e 60 dias os dentes foram cortados e submetidos à análise histológica. Após 7 dias de implante, verificou-se regiões centrais de hipocalcificações em relação ao implante e formação de pontos de dentina. Não foi localizado processo inflamatório em função da utilização dos implantes. Após 20 dias verificou-se que a calcificação começa por áreas globulosas que crescem e se fundem, porém o processo muitas vezes é imperfeito, resultando áreas de matriz orgânica não calcificada; são as áreas interglobulares. Após 40 dias, verificou-se a formação de tecido de normalidade o que demonstra a eficácia das microesferas com BMP-2 como material reparador. A análise in vivo em humanos se fez necessária para avaliar a resposta frente à aplicação do material, seu efeito antiinflamatório e analgésico em casos de exposição pulpar e grande perda dentinária, além da avaliação do retomo da função ao elemento dental, ou seja, controle da dor e possibilidade de mastigação normal. Observou-se após 60 dias que todos os pacientes implantados não apresentaram dor a nenhum dos testes realizados e mantinham a vitalidade pulpar, as microesferas com BMP-2 aqui também se mostraram eficazes no controle antiinflamatório e infeccioso. O estudo in vivo indicou que as microesferas de PLLA contendo BMP-2 apresentam grande potencial para serem utilizadas para aplicação em questão, já que o material favorece a formação de uma neodentina e controla os processos inflamatório e infeccioso / Abstract: One of the points that it should be considered of difficult solution in Brazil, is the loss dentine. Several materiaIs have been studied to minimize the problem, but none assists to the needs of such application. In that sense, the objective of the present to evaluate the biocompatibility of the Poly (L-lactide acid), PLLA, contends BMP-2 in the treatment of great de~tin losses where cannot or not to happen the exhibition of the dental pulp, cases where the exhibition takes to the treatment endodontic or exodontia. For so much, studies in was accomplished In vivo in rabbits and hurnans, both approved by the Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Estadual de Campinas to seem number 045/2006. The studies in rabbits were accomplished being used of an experimental model where it was implanted the microesferas contends BMP-2 in the incisive central and after 7, 20, 40, and 60 days the teeth were cut and submitted to the analysis histological. After 7 days of it implants, it was verified central areas of hipocalcification in relation to the it implants and forrnation of dentin points. Inflammatory process was not located in function of the use of the implants. After 40 days the one was verified that the calcification begins for areas interglobules that grow and they are founded, even so the process a lot of times it is imperfect, not resulting areas of organic matrix not calcified; they are the areas interglobules. After 40 days, the forrnation of norrnality tissue was verified that demonstrates the effectiveness of the microspheres with BMP-2 as reparative material. The analysis in vivo in humans if made necessary to evaluate the answer front to the application of the material, its effect antiinflammatory and analgesic in cases of exhibition pulp and great loss dentine, besides the evaluation of the retum of the function to the dental element, that is to say, control of the pain and possibility of normal mastication. It was observed after 60 days that all the implanted patients didn't present pain to none of the accomplished tests and they maintained the vitality pulpar, the microspheres with BMP-2 here was shown also effective in the control antiinflammatory and infectious. The study in vivo it indicated that the microspheres of PLLA contends BMP-2 they present great potential for they be used for application in subject, since the material favors the formation of a neodentine and it controls the inflammatory and infectious processes / Doutorado / Materiais e Processos de Fabricação / Doutor em Engenharia Mecânica

De acordo com a literatura recente, a eletroquímica de partículas magnéticas e fenômenos de colisões em superfícies eletródicas resultam em curvas voltamétricas e amperométricas com perfis completamente destoados do convencional. Alguns modelos teóricos propõem explicações, no entanto, ainda se observa a necessidade de aquisição de mais dados experimentais. Visando contribuir com esta área, esta Dissertação de Mestrado aborda a manipulação de micropartículas e nanopartículas de magnetita modificadas com azul da Prússia (Fe3O4-PB), bem como o estudo das propriedades eletroquímicas das partículas na presença de um campo magnético externo. Filmes constituídos por micropartículas sobre eletrodos de carbono (grafite) foram obtidos por duas técnicas distintas, drop coating e magneto-deposição. Para ambos os métodos, os filmes apresentaram dois picos nos voltamogramas, um de oxidação (0,12 V) e outro de redução (-0,05 V), que estão associados ao par redox azul da Prússia/branco da Prússia. Para o filme obtido via drop coating, observaram-se correntes de pico mais elevadas. Também, micropartículas de Fe3O4-PB individuais foram isoladas (single particle) com auxílio de um microscópio óptico e analisadas por voltametria, onde se verificou o aparecimento de picos com os mesmos valores de potenciais. Utilizando os dois estados de comutação de campo (0,2 Tesla), ligado e desligado, foi possível controlar a presença e a ausência da partícula no eletrodo. Também, observaram-se diferenças nos valores de densidade de corrente nos cronoamperogramas para cada micropartícula de Fe3O4-PB e que a morfologia da micropartícula interfere significativamente na resposta eletroquímica. Por fim, e agora se tratando da eletroquímica de nanopartículas de Fe3O4-PB sobre um ultramicroeletrodo (UME) de ouro, controlaram-se as colisões das mesmas em diferentes condições experimentais, como na presença e na ausência de um campo magnético externo paralelo a superfície do eletrodo e com intensidades variadas (0,1 e 0,2 Tesla). Na ausência do campo, as nanopartículas que chegaram ao UME colidiram e se acumularam, gerando sinais eletroquímicos do tipo corrente staircase. Na presença de um campo de 0,1 T, observaram-se vários transientes de correntes (spikes) associados às colisões das nanopartículas, eventos esses não observados frequentemente na presença do campo de 0,2 T. Assim, esses resultados abrem a discussão da necessidade de se aperfeiçoarem os modelos que explicam os perfis das curvas voltamétricas e amperométricas para esses sistemas. / According to recent literature, the electrochemistry of magnetic particles and collision phenomena on surfaces result in unconventional voltammetric and amperometric responses. Some theoretical models has been proposed; however, experimental data are required for improve that. In order to contribute to this research area, this Master\'s Dissertation describes the manipulation of microparticles and nanoparticles of magnetite modified with Prussian blue (Fe3O4-PB), as well as the study of electrochemical properties of them in presence of an external magnetic field. Carbon (graphite) electrodes modified with microparticles were obtained by using two different techniques, (i) magneto-deposition and (ii) drop coating. For both, two peaks in the voltammograms were observed, related to oxidation (0.12 V) and reduction (-0.05 V), which are associated with redox couple Prussian blue / Prussian white. Higher peaks currents were observed for the film obtained via drop coating. Also, individual Fe3O4-PB microparticles (single particles) were isolated by using an optical microscope and analyzed by voltammetry, where there was the appearance of peaks with the same potential values. However, using two commutations magnetic states, \"switch on\" and \"switch off\", it was possible to monitor the presence and the absence of the particle on electrode. Also, there were differences in the values of current density in the chronoamperograms for each Fe3O4-PB microparticle, and the morphology of the microparticle significantly interfered in the electrochemical response. Finally, it was performed several electrochemical experiments regarding to collisions of Fe3O4-PB nanoparticles on a gold ultramicroelectrode. Controlled collisions in different experimental conditions were carried out, such as in the presence and absence of an external magnetic field parallel to the surface electrode, and also with intensities fields of 0.1 and 0.2 Tesla. In the absence of the field, the nanoparticles reached the UME and collided, resulting in electrochemical signals of this type staircase, due to accumulation of them. On the other hand, in the presence of a 0.1 T, we observed several transient currents (spikes) associated with the collisions of the nanoparticles. These events were not observed in the presence of the field of 0.2 T. Thus, these findings allow us to the discussion for improvements on the models for these systems, in order to explain the profiles of voltammetric and amperometric responses.