CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / No trabalho descrito a seguir, serÃo apresentados e discutidos os resultados das sÃnteses e caracterizaÃÃes de quatro compostos inÃditos, a citar: trans-[Ru(NH3)4(4-Apy)(pyS)]Cl2 (1), trans-[Ru(NH3)4(pyS)(iTna)]Cl2 (2), trans-{[Ru(NH3)4(pyS)]2-Â-4-Apy}(PF6)4 (3) e trans-{[Ru(NH3)4(pyS)]2-Â-iTna}(PF6)4 (4), onde pyS = 4-mercaptopiridina, 4-Apy = 4-aminopiridina e iTna = isotionicotinamida. O grau de comunicaÃÃo eletrÃnica entre os centros metÃlicos nos complexos binucleares foi avaliado por eletroquÃmica e apresentaram valores de constante de comproporcionamento (KC) de 2,058 x 104 e 4,848 x 104 quando 4-Apy e iTna foram usados, respectivamente, como ligantes pontes. Considerando que os ligantes 4-Apy (4,33 Ã) e iTna (5,17 Ã) apresentam dimensÃes similares, o maior grau de deslocalizaÃÃo eletrÃnica entre os centros metÃlicos observado para o ligante iTNA Ã atribuÃdo a maior rigidez desta espÃcie. Os complexos de valÃncia mista (RuII-RuIII), gerados a partir da oxidaÃÃo estequiomÃtrica dos complexos binucleares com K2S2O8, apresentaram bandas de intervalÃncia na regiÃo do infravermelho prÃximo (~ 1670 nm). A partir desta transiÃÃo, foi possÃvel calcular os parÃmetros de deslocalizaÃÃo eletrÃnica sendo observado valores de acoplamento entre os centros metÃlicos (Hab) da ordem de 210 cm-1. Este resultado, em conjunto com os dados eletroquÃmicos, permitiram classificar os sistemas isolados como sendo de Classe II, de acordo com a classificaÃÃo de Robin e Day. Os compostos binucleares isolados, por apresentarem comunicaÃÃo eletrÃnica moderada, sÃo considerados, portanto, potenciais precursores para a formaÃÃo de fios moleculares. Os resultados obtidos durante o desenvolvimento deste projeto foram apresentados no XVII Brazilian Meeting on Inorganic Chemistry (Anexo) e estÃo em fase final de compilaÃÃo para publicaÃÃo em periÃdico indexado. / The following work will deal on the results and discussions obtained from the syntheses and characterizations of four new compounds, to mention: trans-[Ru(NH3)4(4-Apy)(pyS)]Cl2 (1), trans-[Ru(NH3)4(pyS)(iTna)]Cl2 (2),trans-{[Ru(NH3)4(pyS)]2-μ-4-Apy}(PF6)4 (3) and trans-{[Ru(NH3)4(pyS)]2-μ-iTna}(PF6)4 (4), where pyS = 4-mercaptopyridine, 4-Apy = 4-aminopyridine and iTna = isothionicotinamide. The level of electronic communication between the metal centers in the binuclear compelxes was evaluated by means of electrochemistry and showed values of 2.058 x 104 and 4.848 x 104 when 4-Apy (4,33 Ã) and iTna (5,17 Ã) were used, respectively, as bridging ligands. Assuming that these species are of similar dimensions, the higher level of electronic communication between the metal centers observed for the iTna bridging ligand is assigned to the greater rigidity of this species. The mixed valence complexes (RuII-RuIII), produced from the stoichiometric oxidation by K2S2O8, showed intervalence transitions in the near infrared region (~ 1670 nm). The electron deslocalization parameters were calculated from these transitions and it was observed values of electron coupling between the metal centers (Hab) of about 210 cm1. This result, in conjunction with the electrochemical data, allowed the classification of the isolated systems as Class II according to the ranking of Robin and Day. The synthesized binuclear complexes, by presenting moderate electron communication, are considered,therefore, potential precursors for the assembling of molecular wires. The results obtained during the developing of this proposal were presented at the XVII Brazilian Meeting on Inorganic Chemistry (Annex) and are in the final compilation stage for publication in peer-reviewed journal.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Lasiodiplodia theobromae à um fungo fitopatogÃnico responsÃvel por inÃmeras doenÃas em variadas plantas, sendo um fungo tipicamente de regiÃes tropicais e subtropicais. O fungo atacadiversas plantas tropicais, dentre elas destacam-se a mangueira, as Spondiassp., o coqueiro, o cajueiro, entre tantas outras. Seu controle à basicamente genÃtico realizado com o plantio de clones resistentes, entretanto, para sua obtenÃÃo torna-se necessÃrio o conhecimento das caracterÃsticas do patÃgeno. As informaÃÃes disponÃveissobre a variabilidade genÃtica de L. theobromaesÃo insuficientes para assegurar o sucesso em qualquer programa de melhoramento genÃtico visando à resistÃncia a este patÃgeno. Levando-se em conta que as proteÃnas sÃo produtos funcionais dos genes, torna-se importante conhecÃ-las, visando um melhor entendimento do modo de aÃÃo dos patÃgenos, sendo este entendimento, Ãtil como estratÃgia a ser utilizada no melhoramento vegetal buscando a resistÃncia genÃtica. Assim, o objetivo desse estudo foi realizar um estudo genÃtico molecular em uma populaÃÃo de L. theobromae e uma anÃlise proteÃmica diferencial do fungo entre isolados, mais e menos agressivos, visando identificar proteÃnas responsÃveis por essa agressividade.Uma populaÃÃo composta de 105 isolados foi usada na caracterizaÃÃo molecular, extraindo-se o DNA a partir do micÃlio do fungo crescido em meio lÃquido. Cada amostra foi submetida à reaÃÃo em cadeia da polimerase (PCR) com 15 pares de primers especÃficos para essa espÃcie, alÃm de um par de primer da regiÃo ITS e outro da regiÃo EF-1α. Os produtos amplificados foram visualisados em gel de agarose, corados com brometo de etÃdio e os dados tabulados em planilha binÃria e foram analisados pelo mÃtodo de agrupamento nÃo balanceado baseado na mÃdia aritmÃtica (UPGMA) utilizando o programa MVSP. As similaridades genÃticas foram estimadas pelo coeficiente de Jaccard. Os resultados indicaram uma grande variabilidade genÃtica da populaÃÃo avaliada. Jà o estudo proteÃmico foi realizado visando avaliar diferenÃas qualitativas, ou seja, a presenÃa/ausÃncia de uma determinada proteÃna, em relaÃÃo ao grupo antagÃnico. Para tal, utilizaram-se dois isolados do mesmo fungo, diferenciando-se quanto a sua agressividade, em que um era altamente agressivo, enquanto o outro apresentava uma baixa agressividade quando inoculados em mudas de cajueiro. Quando o perfil eletroforÃtico foi analisado, foram evidenciados 96 spots diferencialmente expressos. AtravÃs da LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 84 proteÃnasapresentando diversas funÃÃes celulares.Com essa abordagem foi possÃvel a caracterizaÃÃo preliminar do perfil proteico deste fungo, obtendo-se alguns indÃcios dos mecanismos envolvidos na sua agressividade. Este à o primeiro estudo buscando conhecer as proteÃnas responsÃveis pela agressividade de L. theobromae. / Lasiodiplodia theobromae is a plant pathogenic fungus responsible for many diseases in various plants, is a fungus typically tropical and subtropical regions. The fungus attacks many tropical plants, among them, including mango, Spondias sp., coconut, cashew, and many others. His control is basically genetic performed by planting resistant clones, however to obtain it becomes necessary to know the pathogen characteristics. The information available on the genetic variability of L. theobromae is restricted to ensure success in any breeding program for resistance to this pathogen. Taking into account that proteins are functional products of genes, it is important to know them, to improve the understanding of the mode of action of pathogens, with this understanding, useful as a strategy to be used in plant breeding seeking genetic resistance. The objective of this study were to conduct a genetic study molecular in a population of L. theobromae and a differential proteomic analysis of the fungus among isolates, more and less aggressive, to identify proteins responsible for this aggressivity. A population consisting of 105 strains was used for molecular characterization, extracting the DNA from mycelia grown in liquid medium. Each sample was subjected to polymerase chain reaction (PCR) with 15 pairs of primers specific for the species, and a primer pair of the ITS region and other EF-1α region. The amplified products were visualisados agarose gel, stained with ethidium bromide and spreadsheet data in binary tabulated and analyzed by unbalanced grouping method based on the arithmetic mean (UPGMA) using the MVSP program. Genetic similarities were estimated by Jaccardâs coefficient. The results indicated a high genetic variability of the studied population. Since the proteomic study was conducted to assess qualitative differences, that is, the presence/absence of a specific protein in relation to the opposite group. To this end, we used two isolates of the same fungus, differing as their aggressiveness, in which one was highly aggressive, whereas the other had a low aggressiveness when inoculated seedlings of cashew. When the electrophoretic profile was analyzed, 96 were detected differentially expressed spots. By LC-ESI-Q-TOF MS / MS, 84 proteins were identified having the most diverse cellular functions. With this approach it was possible preliminary characterization of the protein profile of this fungus to give some evidence of the mechanisms involved in their aggressiveness. This is the first study seeking to know the proteins responsible for the aggressiveness L. theobromae.

Até recentemente, o povoamento das Américas era visto como um produto de uma expansão em linhas paralelas do norte para o sul do continente. Sob este cenário, os sítios arqueológicos dos primeiros americanos deveria obedecer um gradiente cronológico seguindo a mesma lógica, independente de sua longitude. Recentemente, no entanto, especialistas começaram a reconhecer que certas características dos diferentes biomas poderiam favorecer diferentes taxas de expansão populacional. Beaton (1991), por exemplo, sugeriu que as expansões humanas em escala continental seriam mais condicionadas às características do ambiente (biomas) de que a distâncias geográficas lineares, ideia esta, também suportada por Dixon (2001). Neste estudo foi testada a hipótese de Beaton e Dixon, aplicada às Américas, investigando se a estrutura genética dos nativos americanos atuais é influenciada pelos biomas que elas ocupam. Para fazer isso, três diferentes tipo de matrizes foram construídas baseadas em dados de DNA mitocondrial e microssatélites de grupos de nativos americanos: uma, formada por distâncias genéticas (Fst) entre as populações, outra formada pelas distâncias geográficas entre as mesmas populações em quilômetros, e uma última formada pelas distâncias fisiográficas. Essas matrizes foram comparadas pela correlação de Pearson seguida de testes de Mantel e parciais de Mantel. Os resultados obtidos mostraram que em geral os diferentes biomas não tiveram um papel significativo na estruturação genética das populações nativas americanas, ao menos como estão distribuídas hoje. / Until recently, the settlement of the Americas was seen as the product of a \"bow wave\" human expansion from north do south. Under this scenario, the archaeological sites of the first americans should obey a chronological gradient following the same logic, independent of their longitude. Recently, however, specialists began to recognize that certain characteristics of different biomes could have favored different rates of demic expansion. Beaton (1991), for instance, suggested that human expansions in continental scales are much more conditioned by the ecological attributes of the macro environmental zones (biomes) involved than by linear geographic distances, an idea also spoused by Dixon (2001). In this study we test Beaton´s and Dixon´s ideas, as applied to the Americas, by investigating if the genetic structure of recent native american populations is influenced by the biomes they occupy. In order to do this, three different kinds of matrices were constructed based on the frequency of mtDNA and microsatelites from native american groups: one formed by the genetic distances (Fst) among the populations, a second one formed by the geographic distances among the same populations in kilometers, and a last one formed by their \"physiographic\" distances. These matrices were compared by Pearson´s correlation followed by Mantel and partial Mantel tests. The results obtained showed that in general the different biomes did not play a significant role in the native american genetic structuring, at least as they are distributed today.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T13:54:06Z No. of bitstreams: 2 Tese Amorim Lidiane.pdf: 2912606 bytes, checksum: 8b1da6453bb7abfc598b124aecb89609 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T13:54:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Amorim Lidiane.pdf: 2912606 bytes, checksum: 8b1da6453bb7abfc598b124aecb89609 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / MCT RENORBIO FINEP BNB FACEPE e CNPq / O feijão-caupi é uma das principais culturas alimentares de subsistência no planeta tendo, no Brasil, maior importância nas regiões Norte e Nordeste, pela sua adaptabilidade a condições edafoclimáticas estressantes. Apresenta destacada importância social na agricultura familiar destas regiões, sendo notadamente a principal fonte de proteína para as populações de áreas semiáridas do Brasil e do norte da África. Apesar de sua rusticidade e capacidade de crescer onde outras leguminosas não se adaptam, a produtividade desta cultura pode ser afetada por fatores abióticos (como seca e salinidade) e bióticos, com ênfase para as viroses no caso do Brasil. Neste país, o melhoramento do feijão-caupi baseia-se até o momento em técnicas convencionais, havendo poucos estudos efetivamente associados às técnicas moleculares modernas, supondo-se que ferramentas moleculares possam ajudar na superação dessas adversidades. Neste contexto, o projeto Brasileiro do Transcriptoma do Feijão-Caupi (rede NordEST) gerou um número significativo de transcritos, os quais começam a ser aplicados no sentido de reverter este cenário. Adicionalmente, neste trabalho foi desenvolvido um mapa genético do genoma do feijão-caupi, onde a versão atual inclui 237 loci mapeados em doze grupos de ligação (GL), correspondentes ao número haploide do feijão-caupi. Além disso, foram realizadas análises bioinformáticas envolvendo elementos transponíveis (TEs) de forma comparativa entre soja e feijão-caupi, revelando uma diversidade significativa desses elementos em cada táxon ou entre as citadas espécies. Tais polimorfismos figuram muitas vezes associados a genes, mostrando um potencial para o desenvolvimento de marcadores moleculares. No conjunto, os dados gerados servirão como base para o desenvolvimento de estratégias visando ao conhecimento da diversidade genética e de seu potencial para o melhoramento na cultura do feijão-caupi pela associação com características fenotípicas de interesse agronômico. Novos marcadores estão sendo obtidos para cobrir melhor o genoma, devendo ser úteis em experimentos in vitro e in vivo visando ao melhoramento genético de leguminosas de interesse econômico.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:07:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9612_1.pdf: 1527054 bytes, checksum: 4ba0c12b939f08ce345a8f4969714c40 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A cultura do feijão (Phaseolus vulgaris L.) apresenta grande importância econômica e social no Brasil, constituindo a principal fonte de proteína vegetal e ferro na alimentação humana. no entanto, as doenças que incidem sobre a cultura causam grandes perdas na produção, estando a murcha de Fusarium, causada por Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli, entre as mais importantes. Considerando que os marcadores moleculares vêm sendo utilizados para caracterizar diversidade genética em populações de fungos, e que a demanda por novas tecnologias que respeitem o ecossistema e não ofereçam riscos de contaminação estão se tornando cada vez mais importantes para o controle de doenças, este trabalho teve o objetivo de determinar a variabilidade genética por marcadores moleculares ISSP, ISSR e RAPD e a inibição por dos extratos de alho, alecrim, arruda e gengibre de sobre isolados de F.oxysporum f. sp. phaseoli provenientes do feijão comum com sintomas de murcha do Fusarium, coletados em diversos campos de cultivo do Estado de Pernambuco. A análise de agrupamento baseada nas distâncias dos três marcadores moleculares mostrou pouca variabilidade genética intraespecífica em F. oxysporum f. sp. phaseoli. A utilização dos extratos aquosos de alho, alecrim, arruda e gengibre apresentou inibição sobre os isolados desse fungo tanto no crescimento micelial quanto na produção de conídios. A pouca variabilidade observada com as várias técnicas empregadas inviabilizou o reconhecimento de correlações entre grupos e localidade. Os extratos podem ter potencial para serem utilizados como alternativa de controle de F. oxysporum f. sp. phaseoli, principalmente integrados a práticas de campo, minimizando assim, a utilização de agrotóxicos

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1523_1.pdf: 1857150 bytes, checksum: a14e48a77fbb5925257d7f1d2ffb6e8c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O estudo da diversidade genética entre acessos de bancos de germoplasma fornece importantes subsídios aos programas de melhoramento vegetal. Com a finalidade de caracterizar a diversidade genética inter e intra-específica do gênero Vigna, as técnicas de DAF (DNA Amplification Fingerprinting), ISSR (Inter Simple Sequence Repeat) e SSR (Simple Sequence Repeat) foram aplicadas no presente estudo. Vinte e nove acessos de Vigna foram selecionados para a análise, incluindo um acesso de cada uma das quatro espécies V. aconitifolia, V. angularis, V. mungo e V. radiata, bem como 23 acessos cultivados de V. unguiculata (feijão-caupi) e duas subespécies nativas (V. unguiculata ssp. cylindrica e V. unguiculata ssp. sesquipedalis) usando-se como grupo externo duas cultivares de Phaseolus vulgaris ssp. vulgaris (cv. Neckarkönigin e cv. Delinel ). No total foram geradas 1065 bandas polimórficas para a montagem da matriz de dados a partir de 46 primers, sendo quatro DAF, 22 ISSR e 20 pares SSR. Os resultados obtidos foram analisados pelos métodos de neighbor-joining (programa MEGA) e de UPGMA (programa NTSYs 2.1). Nos dendrogramas gerados, o feijão-caupi mostrou-se mais proximamente relacionado com as duas subespécies silvestres de V. unguiculata. As espécies do subgênero Ceratotropis agruparam-se em um clado distinto no qual a espécie V. aconitifolia (considerada primitiva no grupo) aparece em uma posição basal da qual emergem dois subclados incluindo as espécies V. radiata e V. mungo no primeiro e a espécie V. angularis no segundo. Os genótipos de feijão-caupi permaneceram unidos com altos valores de bootstrap (99%), formando dois subclados principais e subgrupos, vários compreendendo acessos com características agronômicas similares. Cultivares com características fenotípicas contrastantes, tais como imunidade (BR14 Mulato e TVU 382) e suscetibilidade (IT 85F-2687) a viroses; resistência (BR17-Gurguéia) e suscetibilidade (CE31) ao nematóide de galhas (Meloidogyne incognita); resistência (IT81D-1053) e suscetibilidade (CNC 0434) ao caruncho (Callosobruchus malucatus); resistência (Pitiúba) e suscetibilidade (Canapu Amarelo) a seca/salinidade, foram agrupados em clusters distintos, demonstrando desta forma haver suficiente divergência genética para seu uso como parentais em cruzamentos de mapeamento. As implicações dos resultados obtidos, especialmente no que se refere ao melhoramento do feijão-caupi são discutidas no presente trabalho

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1568_1.pdf: 1842388 bytes, checksum: 3486a10adb1075594f5865c9e1058e59 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A cultura do feijão-caupi é de grande importância econômica no Brasil, sendo a região Nordeste a principal produtora. A baixa resistência aos principais patógenos é um dos fatores limitantes para a competitividade brasileira da cultura no mercado nacional e internacional. Uma das doenças mais importantes é a virose, causado pelo Cowpea severe mosaic virus - CPSMV. O controle de CPSMV pode ser obtido com o uso de inseticidas no combate aos insetos vetores. Contudo, é necessário aumentar o emprego de medidas mais econômicas e que não agridam o ambiente, com a utilização de cultivares resistentes. Atualmente, o melhoramento genético de plantas está utilizando ferramentas que possibilitam a obtenção de resultados mais rápidos e precisos. Dentre elas podem-se citar os mapas genéticos, obtidos por meio de marcadores moleculares do tipo ISSR, DAF e CAPS, os quais apresentam elevado polimorfismo. Este trabalho buscou a construção de um mapa genético, visando o mapeamento de genes de resistência a doenças em feijão-caupi. Pelo cruzamento dos parentais contrastantes BR 14-Mulato e IT85F-2687 obteve-se 92 linhas endogâmicas recombinantes F6-7 que foram mecanicamente inoculadas e avaliadas quanto à reação ao Cowpea severe mosaic virus CPSMV. O programa MapMarker 2.0 foi utilizado para a construção do mapa adotando-se LOD 2.0, freqüência de recombinação r<0.40 e função de mapeamento de Kosambi. Foi gerado o mapa com 6 marcadores DAF, 27 ISSR e 6 CAPS distribuídos em 11 grupos de ligação (GL), cobrindo 492,128 cM e uma distância média entre marcadores de 16,9 cM. A reação fenotípica ao CPSMV foi codificada como um marcador e mapeado como característica qualitativa, sendo localizado a uma distância genética estimada em 28,7 cM do marcador ISSR-878. Contudo, esta distância entre a marca e o gene não permite ainda o uso de seleção assistida. O desenvolvimento de mapas de ligação para o feijão-caupi é o primeiro passo na integração de biotecnologia nos programas de melhoramento genético visando a introgressão de genes de resistência

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo856_1.pdf: 2630783 bytes, checksum: 635e7962fb7efca73de9ab9a5311299b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho consiste em um estudo teórico sobre os efeitos de campo elétrico na estrutura eletrônica de sistema do tipo (doador - ponte conjugada aceitador), como parte de uma avaliação mais completa de moléculas que possam funcionar como chaveadores moleculares. O sistema estudado é formado por uma família de betaínas em que longas cadeias poliênicas são substituídas lateralmente por dois pares de grupos doadores e aceitadores de elétrons, (D1, A1) e (D2, A2). Inicialmente, para cada membro dessa família de moléculas, investigamos as possíveis alterações na localização espacial dos orbitais moleculares de fronteira HOMO e LUMO e na carga elétrica das diferentes regiões da molécula como função da separação entre os grupos A2 e D2. Confirmamos por método ab initio a existência de uma inversão na localização espacial do HOMO e do LUMO nos maiores membros dessa família de betaína. A compreensão, ainda que qualitativa, de tais alterações é uma condição necessária para o entendimento do processo de transferência intra-molecular. Em seguida, exploramos teoricamente o efeito que o campo elétrico externo aplicado sobre a molécula provoca sobre as posições dos níveis de energia e sobre a localização espacial dos orbitais moleculares de fronteira. Nossos resultados mostram que tanto a localização dos orbitais moleculares quanto a posição dos níveis de energia sofrem mudanças significativas, com o não-cruzamento de níveis levando a efeitos importantes como a mistura de simetria entre os orbitais moleculares envolvidos e mudanças na carga elétrica das diferentes partes da molécula. Concluímos que a transferência de elétrons entre os grupos doadores e aceitadores substituídos ao longo da cadeia conjugada depende, dentre outros fatores, da distância entre eles. Combinando este fato com a aplicação de campos elétricos ao longo da cadeia é possível controlar o fluxo de carga entre os grupos D e A. Portanto, o transporte global de carga é altamente dependente da interação entre os níveis moleculares induzida pelo campo elétrico, o que permite mudanças súbitas na localização espacial da densidade eletrônica localizada nas diferentes regiões da molécula

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:05:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4548_1.pdf: 2041335 bytes, checksum: 6afe35486289b0c1f985f873d76b7857 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A antracnose, causada pelo fungo Glomerella cingulata (anamorfo Colletotrichum gloeosporioides), é a doença mais importante da cultura do cajueiro. Com objetivo de estudar a variabilidade genética (por RAPD e ITS do rDNA) e a patogenicidade de isolados de C. gloeosporioides obtidos de cajueiros de v´arias regi oes do Estado de Pernambuco, utilizou-se dezoito isolados de cajueiro provenientes dos municípios de Igarassu, Goiana, São João, Brejão, Garanhuns e Itambé, Estado de Pernambuco. Para o estudo do RAPD utilizou-se os primers OPA-02, OPA-11, OPW-07, OPW-20 e OPX-07 e para o estudo da região ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA utilizou-se os primers universais ITS1 e ITS4. Os produtos das amplificações foram digeridos separadamente com cada uma das enzimas de restrição DraI, HaeIII e MspI. O teste de patogenicidade foi realizado com folhas destacadas de cajueiro cv. EMBRAPA C.P. 09. Pelo método de UPGMA do RAPD, agrupou-se os isolados em dois principais grupos com 15% de similaridade, sendo o Grupo I subdividido em cinco grupos e o Grupo II em quatro. A amplificação da região ITS resultou num fragmento de 590 pb para todos os isolados e o isolado Cg15, obtido de inflorescência, apresentou um segundo fragmento de 620-630 pb. Os produtos de amplificação da região ITS do rDNA não apresentaram sítio de restrição para a enzima DraI, e entre as enzima HaeIII e MspI, esta ´ultima evidenciou um maior polimorfismo entre os isolados. A análise de agrupamento para o RFLP do ITS evidenciou a formação de dois grupos distintos com 50% de similaridade, com o Grupo I dividindo-se em dois grupos com cerca de 65% de similaridade e o Grupo II subdividiu-se em dois grupos, um com 60% e o outro formado pelo isolado Cg17, obtido de caule. De acordo com o teste de patogenicidade todos os isolados são patogênicos à cv. EMBRAPA C.P. 09, sendo Cg02 e Cg03 os mais agressivos

Orientador: Carlos Henrique Inacio Ramos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T21:47:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Seraphim_ThiagoVargas_M.pdf: 4293116 bytes, checksum: bd401fff62b6ce29029ac35de3bc753a (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O enovelamento protéico é essencial para a correta função biológica das proteínas. A existência de um ambiente com alta concentração dos mais diferentes tipos de moléculas, dentro da célula, e de diversos tipos de situações de estresse, podem agir induzindo a formação de espécies improdutivas na via de enovelamento, como proteínas mal enoveladas e/ou até mesmo agregados protéicos. Para controlar estes eventos, há a maquinaria de chaperonas moleculares, que tem por objetivo garantir a homeostase protéica celular. As chaperonas moleculares são capazes de ligar e estabilizar um polipeptídio, mas sem contribuir com informações para a sua conformação final. Dentro desta maquinaria, o sistema Hsp70 tem um papel central, sendo responsável por receber proteínas desenoveladas ou mal enoveladas de outras chaperonas, podendo auxiliar no reenovelamento e direcionamento para outras chaperonas moleculares ou para degradação. A Hsp70 é regulada por co-chaperonas, como a Hsp40, que é responsável pela entrega de proteínas clientes à Hsp70 e pelo estímulo da atividade ATPase, essencial para a funcionalidade da Hsp70. Este trabalho apresenta a caracterização de uma Hsp40 tipo I de cana-de-açúcar, nomeada SHsp40, e o estudo de uma Hsp40 tipo II de levedura e seus mutantes, a fim de entender a relação estrutura-função destas proteínas. A SHsp40 foi expressa em E. coli, purificada e obtida enovelada, como verificado por dicroísmo circular. Além disso, a SHsp40 apresentou atividade chaperona em experimentos de proteção ao substrato desenovelado e se comportou como um dímero alongado em solução, como mostrado por SEC-MALS e pela determinação do fator de Perrin. Experimentos de desenovelamento térmico monitorado pelo sinal de CD a 222 nm revelaram que a SHsp40 possui pelo menos um intermediário, e a fluorescência de tioflavina T e bis-ANS mostraram que este intermediário é rico em folhas ? e parcialmente desenovelado, características de espécies na via de formação de fibrilas. A SHsp40 agregada foi examinada por microscopia eletrônica de varredura, que comprovou sua capacidade de formar de fibrilas. Este trabalho também contribuiu para o estudo de uma Hsp40 tipo II de levedura, Sis1, e seus mutantes de deleção, Sis1?124-174 e Sis1?121-257. Ensaios de fluorescência estática do triptofano, fotoapagamento e anisotropia mostraram que a deleção do domínio G/M não afetou a estrutura e hidrodinâmica de Sis1?124-174 em relação à proteína selvagem. Estudos de estabilidade destas proteínas, realizado anteriormente em nosso grupo de pesquisa e complementado neste trabalho pelo uso da técnica de SEC-MALS, mostrou que Sis1 e Sis1?124-174 foram mais estáveis que Sis1?121-257, mutante que o domínio G/M e subdomínio CTDI estão ausentes / Abstract: Correct protein folding is essential for proper protein biological function. There is a crowded environment and many types of molecules inside the cell and a variety of external stresses can act inducing unproductive species, as unfolded and/or misfolded proteins and even protein aggregates. To control these undesired events and ensures the protein homeostasis there is a molecular chaperone machinery. Molecular chaperones are able to bind and stabilize polypeptides but with no contributions for their final conformations. Inside this machinery, the Hsp70 system has a central role and is responsible to receive unfolded or misfolded proteins from other chaperones, helping in protein refolding and delivering the clients to other chaperones and even protein targeting for degradation. Hsp70 is regulated by its co-chaperones, such as Hsp40, which is responsible to client proteins deliver to Hsp70 and stimulation of its ATPase activity, essential processes for Hsp70 function. This work presents a sugarcane type I Hsp40 characterization, named SHsp40, and studies of an yeast type II Hsp40 and its mutants in order to understand the structure-function relationship of these proteins. The SHsp40 was expressed in E. coli, purified and obtained folded, as verified by circular dichroism. Furthermore, SHsp40 presented chaperone activity in unfolded substrate protection experiments and behaved as an elongated dimer in solution, as shown by SEC-MALS and estimated by Perrin factor. Thermal-induced unfolding experiments monitored by CD signal at 222 nm revealed that SHsp40 has at least one intermediate which is populated and tioflavin T and bis-ANS fluorescence showed that this intermediate is ? sheet-rich and partially folded, such as intermediate species in the fibril formation pathway. The aggregated SHsp40 was examined by scanning electron microscopy, wich proved its ability to fibril formation. This work also contributed for the study of an yeast type II Hsp40, Sis1, and its deletion mutants, Sis1?124-174 and Sis1?121-257. Steady-state tryptophan fluorescence, quenching and anisotropy assays showed that the G/M domain deletion did not affect the structure and hydrodynamic properties of Sis1?124-174 in relation to the wild type protein. Stability studies of these proteins, previously performed in our research group and complemented in this work by using the SEC-MALS technique, showed that Sis1 and Sis1?124-174 were more stable than Sis1?121-257, a mutant with the G/M domain and CTDI subdomain absents / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular