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Análise da contribuição da PCR (Reação em cadeia da polimerase) no cultivo precoce do Mycobacterium tuberculosis para um rápido diagnóstico laboratorial da tuberculoseChagas, Mariana January 2008 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-23T20:16:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1
262213.pdf: 396387 bytes, checksum: 9262dc7cd74658952de90570f7f5a3e4 (MD5) / Este trabalho teve como objetivo avaliar a contribuição da PCR em cultivos precoces de micobactérias em meio sólido, possibilitando um diagnóstico laboratorial rápido, principalmente nos casos em que a baciloscopia é negativa. E para isso foram coletadas 40 amostras de escarro de pacientes TB+ recém-internados e sem tratamento. Em cada amostra, foi realizado o teste de baciloscopia, PCR do DNA extraído do escarro, cultura em meio Löwenstein-Jensen e PCR do DNA extraído do cultivo precoce diariamente. A baciloscopia apresentou sensibilidade de 68,57%, especificidade de 80% tendo a cultura como padrão-ouro, valor preditivo positivo de 96% e valor preditivo negativo de 26,67%. A cultura em meio sólido de 28 dias foi o que apresentou melhor resultado de sensibilidade (74,29%) e especificidade (100%) e foi o ponto de corte para cultura. Em DNA extraídos de amostras de escarro a PCR com iniciadores MYC, para amplificação do fragmento de 1027 pb do gene 16s RNA, apresentou sensibilidade de 22,86% e especificidade de 60% quando utilizada a cultura como padrão-ouro. E a PCR realizada em DNA extraídos dos cultivos precoces mostrou que a partir do 17º. dia, os valores de sensibilidade (85,71%) e especificidade (60%) se mantém constantes até o 40º. dia. O cultivo precoce de 17 dias se mostrou uma boa alternativa de teste para tuberculose na tentativa de se abreviar o tempo de diagnóstico laboratorial, possibilitando assim intervenção na cadeia de transmissão da doença.
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Epidemiologia molecular da tuberculose resistente a múltiplos fármacos no Rio Grande do SulValim, Andréia Rosane de Moura January 2006 (has links)
A tuberculose resistente a múltiplos fármacos (TB MDR) é definida como uma forma de tuberculose (TB) causada por Mycobacterium tuberculosis resistente a pelo menos isoniazida e rifampicina. A TB MDR é um problema mundial crescente resultante da não adesão dos pacientes ao tratamento e pelo gerenciamento ineficaz da doença pelos sistemas de saúde. Este estudo foi realizado com o objetivo de identificar os fatores de risco e os padrões de transmissão da TB MDR no Estado do Rio Grande do Sul, comparando os resultados obtidos com aqueles casos de TB suscetíveis aos fármacos. Durante os anos de 1999 e 2000 foram identificados 60 isolados MDR no Laboratório Central do RS (LACEN) e 202 isolados suscetíveis aos fármacos anti-TB. Estes isolados foram analisados utilizando a técnica de Polimorfismo do Tamanho dos Fragmentos de Restrição (RFLP) baseado no IS6110. Os dados clínicos e demográficos dos pacientes portadores destas linhagens também foram analisados. Nos isolados que apresentaram seis ou menos cópias de IS6110 foi realizada uma segunda técnica de genotipagem, o Spoligotyping. Os pacientes portadores de linhagens de M. tuberculosis com padrões idênticos foram considerados clusters. Foi observado que entre os 262 isolados, 94 (36%) pertenciam a 20 distintos clusters, e após a análise por Spoligotyping, 89 destes isolados (34%) permaneceram em cluster. Os isolados MDR não diferiram estatisticamente dos isolados suscetíveis na proporção de formação de cluster. Foi observada associação significante entre a ocorrência de TB MDR e tratamento prévio (p < 0,001) e falência no tratamento (p < 0,001). No entanto, os pacientes HIV positivos foram associados com TB suscetível (p = 0,024). Também foi identificado que pacientes não casados desenvolveram mais TB devida à transmissão recente (p < 0,005). A introdução da terapia supervisionada de curta duração (DOTS) no RS será importante, pois auxiliará na diminuição das taxas de falência e abandono de tratamento, evitando o desenvolvimento de novas linhagens MDR. / Multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) is defined as a form of tuberculosis (TB) caused by Mycobacterium tuberculosis resistant at least to isoniazida and rifampicina, the two most powerful anti-TB drugs. MDR-TB is an increasing global problem arising from a patient non-compliance and bad management of the disease by health care systems. This study was conducted to identify risk factors and transmission patterns of MDR-TB in Rio Grande do Sul State, comparing results with data obtained for susceptible TB cases. Sixty isolates of M. tuberculosis identified as MDR at a reference laboratory in Rio Grande do Sul State during years 1999 and 2000 were analyzed using IS6110-restriction fragment length polymorphism (RFLP) technique. The RFLP patterns of 202 susceptible strains were also analysed and genotyping results compared, as well as the clinical and demographic data. Spoligotyping analysis was performed for isolates presenting low IS6110 copy number. Patients with identical DNA pattern strains were considered clustered. From 262 isolates, ninety-four (36%) belonged to 20 distinct RFLP clusters, and after spoligotyping analysis, 89 of the isolates (34%) remained in cluster. MDR isolates did not differ statistically in clustering proportion from susceptible strains. A significant association between the occurrence of MDR and previous TB treatment was observed (p < 0.001), as well as failure on TB treatment (p < 0.001). HIV positive patients were associated to susceptible tuberculosis (p = 0.024). We also identified that unmarried patients were more likely to develop TB due to recent transmission than married patients (p < 0.005). The introduction of directly observed short-course therapy strategy (DOTS) will be important to decrease default and failure rates, avoiding the development of new MDR strains.
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Detecção da mutação mais freqüente no códon 315 do gene katG relacionada com a resistência à isoniazida em isolados de Mycobacterium tuberculosisVerza, Mirela January 2008 (has links)
A caracterização das mutações nos genes katG, ahpC e inhA e sua correlação com a resistência à isoniazida em isolados de Mycobacterium tuberculosis tem sido descrita. A mutação S315T no gene katG é a mais freqüentemente encontrada e pode fornecer rápida informação para a seleção do tratamento anti-tuberculose, para a vigilância epidemiológica da resistência e, possivelmente rastrear a transmissão de linhagens resistentes. Dessa forma, o objetivo do trabalho foi o desenvolvimento de um Ensaio de Hibridização Reversa (EHR) para a rápida identificação da mutação no códon 315 do gene katG em M. tuberculosis. Após a padronização da metodologia com 180 DNAs de M. tuberculosis isolados de cultura, o teste foi aplicado a 46 DNAs isolados de amostras clínicas e foram testados para a detecção de mutantes katG315 resistentes à isoniazida. Quando aplicado em DNA de cultura o teste pôde detectar com sucesso a mutação mais comum no katG315 (AGC ACC) em todas as linhagens estudadas em comparação com o seqüenciamento de DNA. Em relação às amostras clínicas, o EHR apresentou concordância com o seqüenciamento em todas as amostras com baciloscopia positiva. O teste desenvolvido apresenta um bom potencial para a rápida identificação da resistência à isoniazida em regiões com uma elevada prevalência de mutantes katG315 entre isolados de M. tuberculosis resistentes à isoniazida. / Mutations in katG, ahpC and inhA genes were identified and have been correlated with isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates, mutation in katG S315T being the most frequent. Rapid detection of this mutation could therefore improve the choice of an adequate anti-TB regimen, epidemiological monitoring of isoniazid resistance and, possibly to track transmission of resistant strains. Reverse Hybridization Assay (RHA) is a simple technique for the rapid identification of katG315 mutation in M. tuberculosis. The assay was standardized with 180 DNAs isolated from cultures of M. tuberculosis and was applied to 46 clinical specimens and tested for the detection of isoniazid-resistant katG315 mutants. When the test was applied to the DNA from cultured M. tuberculosis it was possible to successfully detect the most common mutation at katG315 (AGC ACC) in all isolates studied in comparison with DNA sequencing. For clinical samples, the RHA presented agreement with the sequencing in all samples with smear positive. The developed test presents a good potential for the rapid identification of isoniazid resistance in regions with a high prevalence of katG315 mutants among isoniazid-resistant M. tuberculosis isolates.
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Desenvolvimento de um teste colorimétrico para detecção de resistência à rifampicina em isolados de Mycobacterium tuberculosisMaschmann, Raquel de Abreu January 2008 (has links)
Nesse trabalho foi desenvolvido um Teste Colorimétrico de Hibridização Reversa (TCHR-TB) que verifica a presença de mutações em uma região específica do gene rpoB, que confere resistência à rifampicina. Foram analisados 156 DNAs de M. tuberculosis obtidos de cultura. Quando comparado com teste convencional de susceptibilidade às drogas, a sensibilidade e a especificidade do TCHR-TB foi 92.3% e 98.0% respectivamente. Comparando com o seqüenciamento, o qual é considerado padrão ouro, a sensibilidade e a especificidade do TCHR-TB foram 90% e 100%, respectivamente. Mutações no códon 531 seguido de mutações no códon 526 são as mutações mais comuns mundialmente, sendo responsáveis por aproximadamente 75% das amostras resistentes à RIF. O TCHR-TB detectou corretamente 100% destas mutações. O método desenvolvido pôde também detectar mutações no gene rpoB de DNA de M. tuberculosis extraídos diretamente de amostras clínicas. Trinta e três amostras clinicas foram testadas e os resultados do TCHR-TB foram 100% concordantes quando comparados com método das proporções. Os resultados do nosso estudo demonstraram uma alta taxa de concordância do TCHR-TB quando comparado com os testes de sensibilidade convencionais e com o seqüenciamento. O teste pode ser aplicado com sucesso quando se faz necessária uma rápida e sensível detecção de resistência à rifampicina e conseqüentemente um correto gerenciamento dos pacientes. / In this work a Reverse-Line Blot Hybridization (RLBH) assay was developed which allows the detection of mutation in a specific region of rpoB gene, that confer rifampicin resistance, in a panel of 156 DNAs of M. tuberculosis obtained from cultures. When compared to the conventional drug susceptibility testing (DST), sensitivity and specificity of the RLBH were 92.3% and 98.0%, respectively. Comparing to sequencing, which is considered a “gold standard” reference, sensitivity and specificity of the RLBH were 90% and 100%, respectively. Mutations at codon 531, followed by mutation at codon 526 are the most common mutations worldwide accounting for approximately 75% of RIF resistance. The RLBH assay correctly detected 100% of these mutations. The method developed could also detect rpoB mutations of M. tuberculosis in clinical specimens. Thirty-three clinical specimens were tested and the results of RLBH were 100% concordant when compared to DST. The results of our study demonstrate a high concordance rate when the RLBH results were compared to conventional methods and sequencing data. The test can be successfully applied when a rapid sensitivity testing is required for the correct management of patients.
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Suscetibilidade genética à infecção pelo Mycobacterium tuberculosis em indígenas da etnia Xavante (Mato Grosso - Brasil)Zembrzuski, Verônica Marques January 2009 (has links)
A tuberculose, doença infecto-contagiosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), constitui, em escala mundial, um sério problema de saúde pública, com altos índices de morbidade e mortalidade. Alguns grupos são mais suscetíveis à doença, como é o caso das populações indígenas brasileiras. Estudos prévios indicam um risco dez vezes maior de contrair a tuberculose, e morrer devido a ela, nessas populações do que na população brasileira como um todo. Exemplos disso são as altas incidências de tuberculose em indivíduos da etnia Xavante. Evidências sugerem um forte componente genético na suscetibilidade à tuberculose e aos fenótipos relacionados à doença. Um desses fenótipos é a anergia ao PPD, isto é, a ausência de reatividade ao teste que utiliza derivados de proteína purificada da bactéria para verificar resposta imune celular e diagnosticar infecção pelo Mtb. Vários são os genes associados à suscetibilidade à tuberculose ou à infecção pelo bacilo em diferentes populações. Com o objetivo de investigar essa suscetibilidade genética em ameríndios brasileiros, neste estudo foram analisados 19 polimorfismos em 15 genes envolvidos com a resposta imune já identificados com resistência/suscetibilidade à tuberculose (SLC11A1, VDR, SP110, P2X7, PTPN22, IL1B, IL12RB1, IFNGR1, TNFR1, IFNG, IL2, IL10, IL6, IL4 e IL4R). A amostra foi composta por 492 indivíduos de uma população da etnia Xavante, da aldeia Etéñitépa, localizada no Estado de Mato Grosso, região central do Brasil. Os seguintes resultados foram obtidos: a) redução ou ausência de variabilidade em seis variantes (SP110 éxon 11 C>T e íntron 6 C>T, PTPN22 1858 C>T, IL12RB1 641 A>G e 1094 T>C e IL6 -174 G>C); b) associação entre os polimorfismos IFNG +874 A>T e IL4 -590 T>C e reatividade ao PPD (P=0,018 e 0,009, respectivamente). Após ajustes na regressão de Poisson com variância robusta, os genótipos IFNG +874 T/A e IL4 -590 C/C foram duas vezes mais prevalentes do que seus genótipos complementares (1,9; CI: 1,1-3,1 e 2,0; CI: 1,2-3,3, respectivamente); c) o polimorfismo IL10 -1082 A>G foi associado com anergia ao PPD (P<0,001); o risco de anergia foi de 1,5 (CI: 1,2-1,7) em indivíduos homozigotos para o alelo G, comparados com portadores do alelo A; d) em relação à reatividade ao PPD, nenhum dos outros polimorfismos mostrou alguma associação; e) não foram observadas associações significativas entre os genes estudados e tuberculose. Os resultados obtidos sugerem que o componente genético tem uma grande influência nos mecanismos imunes relacionados à anergia ao PPD e, conseqüentemente, à infecção pelo Mtb nos Xavante.Apesar da ausência de associações em relação à tuberculose, há uma complexidade dos fatores genéticos nas doenças infecciosas e o envolvimento de muitos genes na etiologia da doença. Portanto, a replicação deste estudo em outros grupos indígenas e a pesquisa de outros genes, que poderiam estar envolvidos com a suscetibilidade à tuberculose e aos fenótipos a ela relacionados, são essenciais para se ter um melhor entendimento do sistema imune humano e seus complexos mecanismos de resposta, podendo fornecer, futuramente, novos alvos para tratamentos preventivos e profiláticos diferenciados para grupos étnicos específicos. / Tuberculosis is an infectious disease which is caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb). It constitutes a serious problem in public health, causing high standards of morbidity and mortality all over the world. Some groups are more susceptible to the disease such as, for example, the Brazilian indigenous populations. According to previous studies, the risk of getting this disease and consequently die from it is ten times higher for indigenous populations than for the Brazilian population in general. As an example of this phenomenon, there is the Xavante group. These individuals suffer from a high incidence of tuberculosis among them. Evidences suggest a strong genetic component related to this susceptibility to tuberculosis, and to the phenotypes related to the disease as well. One of these phenotypes is anergy to PPD, i.e., the absence of reactivity to the test in which derivatives of the purified protein from the bacteria are employed, in order to check an immune cellular response and to diagnose infection by Mtb. There are many genes associated with the susceptibility to tuberculosis or to the infection through the bacillus in different populations. The aim of this study was to investigate TB genetic susceptibility in Brazilian Amerindians, considering 19 polymorphisms in 15 genes involved in the immune response, previously identified with resistance/susceptibility to tuberculosis (SLC11A1, VDR, SP110, P2X7, PTPN22, IL1B, IL12RB1, IFNGR1, TNFR1, IFNG, IL2, IL10, IL6, IL4, and IL4R). The sample was composed by 492 individuals from a Xavante population, at the Etéñitépa village, Mato Grosso State, Central Brazil. The following results were obtained: a) reduction or absence of variability in six variants (SP110 exon 11 C>T and intron 6 C>T, PTPN22 1858 C>T, IL12RB1 641 A>G and 1094 T>C and IL6 -174 G>C); b) association between the polymorphisms IFNG +874 A>T and IL4 -590 T>C and reactivity to PPD (P=0.018 and 0.009, respectively); after adjustments by Poisson regression with robust variance the IFNG +874 T/A and IL4 -590 C/C genotypes were two times more prevalent than their complementary genotypes (1.9; CI: 1.1-3.1 e 2.0; CI: 1.2- 3.3, respectively); c) IL10 -1082 A>G polymorphism was associated with anergy to PDD (P<0.001); the risk of anergy was 1.5 (CI: 1.2-1.7) in G/G homozygous individuals when compared with carriers for the A allele; d) in relation to reactivity to PPD, no associations were observed for the other polymorphisms; e) no associations were observed between the genes studied and tuberculosis. The results suggest that the genetic component has a important influence in immune mechanisms related to PPD anergy, and therefore to the infection by Mtb in the Xavante group. In spite of the absence of association related to tuberculosis, there is also a great complexity of genetic factors in infectious diseases, and the involvement of many genes in the disease etiology. Consequently, the replication of this study in other indigenous groups and also the investigation of other genes that could be involved with susceptibility to tuberculosis and to phenotypes related to it as well are essential. In this way, we would have a better understanding of the human immune system and its complex mechanisms of response. This research could provide, in the future, new targets for preventive and prophylactic treatments that would be different, according to specific ethnic groups.
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Avaliação de um teste in house de PCR-colorimétrico em placa para o diagnóstico de Tuberculose Pulmonar / Evaluation of microwell Colorimetric PCR in house for pulmonar tuberculosis diagnosisRivero, Martha Gabriela Celle [UNIFESP] 28 May 2008 (has links) (PDF)
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Publico-10760.pdf: 1064252 bytes, checksum: 004a25425d1ff48cb7008d70c5c93c7e (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / As técnicas mais utilizadas no diagnóstico laboratorial de rotina para tuberculose pulmonar (TBP) apresentam sensibilidade variável. Diversos testes de amplificação de ácidos nucléicos têm sido propostos para o diagnóstico rápido da tuberculose pulmonar em associação com a pesquisa de BAAR, cultura e o diagnóstico clínico. Neste estudo avaliamos o desempenho de um teste in house de PCR colorimétrico utilizando a seqüência IS6110 em amostras de escarro, lavado brônquio alveolar e aspirado traqueal de 150 pacientes internados com suspeita clínica de TBP em um Hospital Geral Universitário no período de março a dezembro de 2005. Foi realizada a PCR colorimétrica em amostras não processadas (ANP) e em sedimentos. A validade do teste foi estimada em comparação com a baciloscopia, cultura e diagnóstico clínico de TBP. A sensibilidade do teste in house PCR colorimétrico foi de 41,93% (ANP) e 48,38% (sedimento) e a especificidade de 98,21% (ANP) e 97,67% (sedimento) em comparação com a cultura. O teste in house PCR colorimétrico teve uma boa concordância, kappa = 0,6, em comparação com a baciloscopia e kappa = 0,5 quando comparado à cultura. Com respeito ao diagnóstico clínico a sensibilidade foi de 28,6% (ANP e sedimento) e a especificidade de 98,2% (ANP) e 97,3% (sedimento) Os valores preditivos positivo e negativo obtidos foram de 83,3% e 81,1% para ANP e de 76,9% e 81,2% para sedimento, respectivamente. O teste in house de PCR colorimétrico apresentou baixa sensibilidade, mas demonstrou ser altamente específico para o diagnóstico de TBP, além de apresentar boa concordância com os demais métodos utilizados na rotina laboratorial em um Hospital Geral Universitário para o diagnóstico de TBP. Em relação ao diagnóstico clínico observamos alto valor preditivo (positivo e negativo) e alta probabilidade positiva pós-teste. / The techniques most widely used in the routine laboratory diagnosis of pulmonary tuberculosis (PTB) show variable sensitivities. Various nucleic acids amplification tests have been proposed for the rapid diagnosis of PTB in association with the acid-fast bacillus staining, culture and clinical diagnosis. We evaluated the performance of an in-house colorimetric PCR test using the IS6110 sequence in samples of sputum, broncho-alveolar lavage and tracheal aspirate from 150 patients with clinical suspicion of PTB admitted to a General University Hospital in the period from March to December 2005. The colorimetric PCR test was applied to non-processed samples (NPS) and to the sediment. The validity of the test was estimated in comparison with culture and clinical diagnosis of PTB. The sensitivity of the in house colorimetric PCR test was 41.93% (NPS) and 48.38% (sediment) and specificity 98.21% (NPS) and 97.67% (sediment). The in house colorimetric PCR test had a good agreement, kappa = 0.6, in comparison to the acid-fast staining and kappa = 0.5 when compared to culture. Considering the clinical diagnosis, sensitivity was 28.6% (NPS and sediment) and specificity 98.2% (NPS) and 97.3% (sediment). The positive and negative predictive values were 83.3% and 81.1% for NPS and 76.9% and 81.2% for sediment, respectively. The in house colorimetric PCR test showed low sensitivity, high specificity and good agreement compared with acid-fast bacillus staining and culture used for diagnosis of PTB in a routine microbiology laboratory at a General University Hospital The test also showed high predictive values (positive and negative) and high positive post-test probability when the clinical diagnosis was considered. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Níveis séricos de interleucina-6 e polimorfismo - 174G>C em infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis / Serun levels of interleukin-6 and -174G>C polymorphism at the IL-6 gene in latent infection with Mycobacterium tuberculosisLopes, Fernando Henrique Azevedo January 2012 (has links)
Fernando Henrique Azevedo Lopes. Níveis séricos de interleucina-6 e polimorfismo - 174G>C em infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis. 2012. 70 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T13:15:49Z
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Previous issue date: 2012 / Interleukin-6 (IL-6) is an important cytokine involved in the pathogenesis of multiple infectious diseases. The aim of this study was to investigate the levels of IL-6 production and to correlate to the -174G>C polymorphism at the IL-6 gene in latent infection with M. tuberculosis (ILTB). As controls, two groups were used. One of them with active pulmonary tuberculosis (TB) patients and the other with healthy blood donors. ILTB group was composed by 15 individuals, selected among active pulmonary TB contacts seen at the Hospital São José de Doenças Infecciosas and the Centro de Saúde da Família Anastácio Magalhães. TB group had 38 patients with active pulmonary disease seen at the Hospital de Messejana, Hospital de Maracanaú and the Hospital Geral Dr. César Cals. The third group was composed by 63 healthy blood donors from the Centro de Hematologia e Hemoterapia do Ceará. Serum levels of IL-6 were measured by an ELISA using specific kits from Invitrogen Corporation. For DNA purification a GFX Genomic Blood DNA Purification kit (GE Healthcare) was used. The -174GC polymorphism was analyzed by a SSP-PCR method using One-Lambda kits. Median values of serum levels of IL-6 from ILTB, TB and healthy groups were, respectively, 1.7 pg/mL, 4.3 pg/mL and 0.5 pg/mL (p < 0.0001). For the three studied group, the most frequent genotype found was the G/G (ILTB = 80%; TB = 58.9%; saudáveis = 62.8%). In conclusion, it is possible to consider that IL-6 should play an important role in the maintenance of latent infection state as its concentrations were 3.4 fold higher in ILTB group than that of healthy controls. Moreover, the -174GC polymorpism was not functional in the ILTB group. / A interleucina-6 (IL-6) é uma importante citocina que exerce papel fundamental na imunopatogênese de diversas doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi investigar o nível de produção sistêmica de IL-6 e aferir o papel funcional do polimorfismo -174 G>C do gene dessa citocina em indivíduos diagnosticados como portadores de infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis (ILTB). Para controle, foram utilizados dois grupos de comparação: um deles composto por portadores de tuberculose pulmonar ativa (TB) e o outro formado por indivíduos saudáveis, doadores de sangue. O grupo ILTB foi composto por 15 indivíduos, selecionados dentre os contactantes de portadores de TB pulmonar ativa, atendidos no Hospital São José de Doenças Infecciosas e no Centro de Saúde da Família Anastácio Magalhães. O grupo TB foi formado por 38 pacientes com TB pulmonar ativa, procedentes do Hospital de Messejana, Hospital de Maracanaú e Hospital Geral Dr. César Cals. O grupo de indivíduos saudáveis contava com 63 doadores voluntários de sangue do Centro de Hematologia e Hemoterapia do Ceará. A dosagem sérica de IL-6 foi realizada por meio de um ensaio imunoenzimático (ELISA), com kit específico fornecido pela Invitrogen Corporation. Para purificação do DNA, foi utilizado o kit GFX Genomic Blood DNA Purification, da GE Healthcare. O polimorfismo -174GC do gene da IL – 6 foi tipificado pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), utilizando-se iniciadores de sequência específica (PCR-SSP) (One-Lambda). As medianas de concentrações séricas de IL-6 para os grupos ILTB, TB e saudáveis foram de, respectivamente, 1,7 pg/mL, 4,3 pg/mL e 0,5 pg/mL (p < 0,0001). Nos três grupos estudados, o genótipo encontrado com maior frequência foi o G/G [ILTB = (80%); TB = (58,9%); saudáveis = (62,8%)]. Em conclusão, podemos inferir que a IL-6 deve desempenhar um papel importante na manutenção do estado de latência, haja vista que sua concentração, nos indivíduos com ILTB, foi 3,4 vezes maior que no grupo saudável. Ademais, constatamos que, na população estudada, o polimorfismo -174GC não se mostrou funcional no âmbito da infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis.
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Caracterização molecular de estirpes de Mycobacterium tuberculosis resistentes à isoniazida e/ou rifampicina isoladas de amostras clínicas do estado de Santa CatarinaPrim, Rodrigo Ivan January 2014 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:58:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1
327209.pdf: 2094888 bytes, checksum: 5ecd17f5ebc432534f756b63cd384754 (MD5)
Previous issue date: 2014 / Apesar dos avanços no desenvolvimento de antimicrobianos no século XX e início do século XXI, estima-se em 8,6 milhões o número de novos casos e 1,3 milhões de mortes causadas pelo bacilo da tuberculose em 2012 em todo o mundo. No Estado de Santa Catarina são notificados 1700 novos casos de tuberculose por ano (27 casos/100 mil habitantes), uma das menores incidências do Brasil. Porém, algumas cidades têm altos índices, próximos a 80 casos/100 mil habitantes. O estado de SC não possui dados moleculares das estirpes resistentes circulantes e a caracterização molecular desses isolados pode auxiliar no diagnóstico e controle da tuberculose no estado. O estudo incluiu 92 isolados de Mycobacterium tuberculosis resistentes à isoniazida e/ou rifampicina. Os isolados foram caracterizados pelo spoligotyping e MIRU e a detecção da resistência molecular foi avaliada pelo sequenciamento parcial dos genes associados à resistência para isoniazida (katG, inhA e ahpC) e à rifampicina (rpoB). Entre os 91 isolados resistentes à isoniazida, a mutação mais frequente foi a S315T no gene katG (64,8%). Apenas uma mutação foi encontrada no gene inhA (S94A) e 8 isolados resistentes continham mutações no gene ahpC. Em 23 isolados resistentes à isoniazida não foram encontradas mutações nos três genes relacionados. A mutação S531L do gene rpoB foi a mais prevalente entre os isolados resistentes à rifampicina (56,5%). Entre os 54 isolados resistentes à rifampicina apenas três não tinham mutações na região sequenciada. Nenhuma mutação foi encontrada nos isolados sensíveis e na estirpe H37Rv. Houve uma correlação positiva entre a mutação katG S315T e as estirpes da família LAM e do SIT 106. Por outro lado, foi encontrada uma correlação negativa entre essa mutação e a família T, indicando que nessa família algum outro mecanismo pode estar presente. Para a segunda mutação mais prevalente no gene rpoB (S531W), foi encontrada uma correlação positiva com a família LAM. O sequenciamento de outras regiões dos genes estudados e outros genes envolvidos com a resistência e a determinação da concentração inibitória mínima poderão contribuir para o entendimento dos mecanismos de resistência nos isolados onde não foram encontradas mutações. Estes achados são importantes para o desenvolvimento e aplicação de novos métodos de detecção de resistência de M. tuberculosis.
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Importância da citometria de fluxo na avaliação da resposta imune celular em indivíduos portadores de tuberculose pulmonar soronegativos ou soropositivos ao HIVGaspar, Pâmela Cristina January 2014 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:39:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2014 / A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis (MTB) transmitida diretamente de pessoa para pessoa, através da inalação de partículas infectadas pelo MTB. A TB é considerada um problema de saúde pública mundial. A cada ano, são registrados mundialmente, aproximadamente, 9 milhões de novos casos de TB e 1,4 milhões de mortes decorrentes da doença. Indivíduos infectados pelo MTB podem desenvolver tanto uma doença progressiva quanto uma infecção latente, dependendo do seu estado imunológico. Com o advento da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS), caracterizada como uma disfunção grave do sistema imunológico de pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), houve um profundo impacto sobre o aumento do número de novos casos de TB. Apesar da forte correlação entre o desenvolvimento da TB e a diminuição de células T CD4+ no sangue periférico de indivíduos coinfectados pelo MTB/HIV estar bem estabelecida, a resposta imune celular pulmonar permanece incerta. Informações relacionadas à citologia do escarro de pacientes com TB são escassas e não se sabe exatamente se há diferenças na resposta imune celular pulmonar entre os pacientes HIV soropositivos e HIV soronegativos. Estas observações reforçam a importância da pesquisa para o desenvolvimento e avaliação de métodos que permitam o estudo das células que envolvem a resposta imune pulmonar no combate à infecção pelo MTB, principalmente nos casos de coinfecção pelo HIV/MTB. A análise das células de escarro por microscopia óptica é um método bem estabelecido para a determinação das subpopulações leucocitárias. No entanto, essa metodologia possui algumas limitações, como a impossibilidade de diferenciação de subtipos celulares morfologicamente idênticos e a necessidade de uma amostra de boa qualidade. Diante do exposto, o objetivo desse trabalho foi a investigação da importância da citometria de fluxo na avaliação da resposta imune celular em indivíduos portadores de tuberculose pulmonar ativa e bacilíferos soro negativos ou soro positivos ao HIV. Inicialmente, realizou-se a padronização da citometria de fluxo para avaliação dos fenótipos leucocitários do escarro. Após a padronização, avaliou-se a celularidade de 30 amostras de escarro de pacientes portadores de TB pulmonar ativa e bacilíferos. Os resultados demonstraram que os neutrófilos (95,68%) compunham maior percentual do que os monócitos/macrófagos (2,62%) e os linfócitos (1,64%) na celularidade total das amostras de escarro analisadas. Além disso, com relação ao total de linfócitos T (100%),foram observados em média 12,31% de linfócitos T auxiliares, 24,13% de linfócitos T citotóxicos, 62,85% de linfócitos T gama/delta (?d) e 0,02% de linfócitos T com fenótipo CD4+ e CD8+. Após a determinação da celularidade, os resultados das amostras de escarro foram subdividos em dois grupos, soropositivos e soronegativos ao HIV. Na associação desses subgrupos leucocitários acima descritos, foram observadas diferenças estatisticamente significativas somente para os percentuais de monócitos/macrófagos. Os resultados encontrados mostram que a citometria de fluxo é um método eficaz para avaliar os diferentes subtipos de linfócitos presentes nas amostras de escarro, mesmo daquelas consideradas inviáveis para análise por microscopia óptica. Sendo assim, é de grande importância para o enriquecimento das informações associadas à imunologia da coinfecção pelo MTB/HIV.<br> / Abstract : Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis (MTB) that is transmitted directly from person to person through inhalation of infected particles MTB. TB is considered a worldwide public health problem. Each year, an estimated 9 million people developed TB and 1.4 million died from the disease. MTB-infectious individuals may develop either a progressive disease as well as a latent infection, and it is imune-dependent status. With the advent of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) that is characterized as a severe dysfunction of the immune system of patients infected with human immunodeficiency virus (HIV), there was a profound impact on increasing number of new TB cases. Despite the strong relationship between the TB development and the decrease of CD4 + cells in peripheral blood of co-infected MTB/HIV individuals be well established, the lung cellular immune response remains unclear. Information regarding the sputum of TB patients is scarce and it is not known exactly if there are cellular differences in lung immune response among HIV-positive and HIV-negative individuals. These observations emphasize the importance of research for development and evaluation techniques to study cells that surround the pulmonary immune response against MTB infection, especially in cases of coinfection HIV/MTB. The analysis of sputum cells by optical microscopy is a well-established method for the determination of leukocyte subpopulations. However, this methodology has some limitations such as the inability to differentiate morphologically identical cell subtypes and the need for a good quality sputum sample. Given the above, the aim of this study was to investigate the importance of flow cytometry to assess the cellular immune response in individuals with active pulmonary TB and bacillary, in HIV-negative or HIV-positive. First, the standardization of flow cytometry was done for assessment of leukocyte phenotypes sputum. After standardization, there were evaluated the cellularity of 30 sputum samples from patients with active pulmonary TB. The results demonstrated that neutrophils (95.68%) comprised the greatest percentage of sputum cellularity cells comparing to monocytes/macrophages (2.62%) and lymphocytes (1.64%) populations in the analyzed samples. Besides that, regarding to total T-lymphocytes (100%) there were observed on average of 12.31% of T helper, 24.13% of T cytotoxic, 62.85% of T gamma/delta (?d) and 0.02% of T with the phenotype CD4+ and CD8+. After the sputum cellularity determination, the results of the sputum samples were subdivided into two groups,HIV-positive and HIV-negative. In the association of these leukocyte subsets described above, only statistically significant differences were observed for the percentage of monocytes/ macrophages. The results show that flow cytometry is a powerful method to evaluate the different subtypes of lymphocytes present in sputum samples, even those considered unviable for analysis by light microscopy. Therefore, flow cytometry is of great importance to enrich the informations about the co infection MTB/HIV immunology.
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A tuberculose entre o povo indígena Suruí de Rondônia, Amazônia, Brasil / Tuberculosis between the native people Suruí of Rondonia, Amazonia, BrazilBasta, Paulo Cesar January 2005 (has links)
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Previous issue date: 2005 / A tuberculose constitui problema prioritário de saúde pública no Brasil. As maiores taxas de incidência da doença concentram-se nas periferias das grandes cidades da região Sudeste e na região Amazônica, onde vive cerca de 60 por cento da população indígena no Brasil. Por causas ainda pouco esclarecidas, os povos indígenas são mais vulneráveis à tuberculose e experimentam cargas da doença muito superiores às observadas na população geral do país. Este estudo teve por objetivos investigar a freqüência, as formas clínicas e a associação de fatores clínico-biológicos com a infecção por M. tuberculosis entre o povo indígena Suruí. Utilizou-se das seguintes estratégias para abordagem do problema: a) identificação dos registros históricos disponíveis para a doença entre o grupo; b) busca ativa de sintomáticos respiratórios para determinar a prevalência de tuberculose ativa nas aldeias; c) análise dos padrões radiológicos dos doentes submetidos ao tratamento no período 2003-2004; d) estudo prospectivo, na forma de inquérito tuberculínico em duas fases e acompanhado de vacinação com BCG para estimar a prevalência de infecção por Mycobacterium tuberculosis e determinar o risco médio anual de infecção em 2005. (...) Por meio dos dados disponíveis ficou claramente demonstrada a maior vulnerabilidade dos Suruí à Tuberculose. Apesar da alta cobertura vacinal por BCG verificada entre o grupo, foi possível estimar a prevalência de infecção específica por M. tb com o método utilizado neste estudo. As evidências levantadas por esta investigação indicam a necessidade de se elaborar estratégias específicas para o controle da tuberculose entre os povos indígenas no Brasil, levando em consideração suas diferenças sociais, culturais e ambientais
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