A Pressão intracraniana (PIC) é um dos principais parâmetros fisiológicos em animais e humanos e sua morfologia é extremamente importante. Entretanto, todos os métodos de monitoramento existentes no mercado são invasivos, existindo uma ampla demanda por sistemas não invasivos, expandindo assim o campo de pesquisas acerca desse importante parâmetro neurológico, que só não é melhor estudado devido a forma invasiva de ser monitorado. A motivação é fazer com que o monitoramento da PIC seja tão comum e tão essencial quanto é hoje o monitoramento da pressão arterial, facilitando o diagnóstico e até prognóstico de diversas doenças. Este trabalho analisa e implementa melhorias de um sistema não invasivo de monitoramento da pressão intracraniana, baseado em extensometria. Um dos objetivos, no que tange o desenvolvimento do produto, é analisar o equipamento como um todo - Sensor, Hardware, Firmware e Software - e propor melhorias a partir dos testes realizados. Os testes realizados In vivo mostraram uma boa correlação do sinal com um sistema Gold Stardard, evidenciando o potencial promissor do método. / The intracranial pressure (ICP) is one of the main physiological parameters in animals and humans and its morphology is extremely important. However, all monitoring methods available in the market are invasive and there is a large demand for non-invasive systems, thus expanding the scope of research on this important neurological parameter, that just is not further studied because of the invasive method of monitoring. The motivation is to make monitoring the ICP as common and as essential, as monitoring the blood pressure is nowadays, facilitating diagnosis and even prognosis of various diseases. This work analyzes and implements improvements in a non-invasive intracranial pressure monitoring system based on extensometer. One of the goals, regarding product development, is to analyze the unit as a whole- Sensor, Hardware, Firmware and Software- and propose improvements from the tests. The in vivo tests showed a good correlation with a Gold Stardard system signal showing the promising potential of the method.

Devido as atuais mudanças globais é esperado que um grande número de espécies necessitem de uma integração de ações dentro e fora do seu ambiente natural para a conservação. O bioma cerrado é um dos ecossistemas mais ricos em biodiversidade, mas devido a ação antrópica, resta menos de 20% de sua cobertura vegetal original. A Raposinha do Campo (Lycalopex vetulus) é um canídeo de pequeno porte (2,5-4kg) endêmico do cerrado do Brasil central e está presente na lista dos animais ameaçados de extinção do Estado de São Paulo. Não existe em literatura uma descrição detalhada do ciclo estral desta espécie. O presente estudo teve como objetivo caracterizar a ciclicidade ovariana de Lycalopex vetulus com o uso de método não-invasivo: Extração e mensuração de metabólitos fecais de progesterona e estradiol, com o uso da técnica de enzimaimunoensaio, verificando também a possível existência de diferenças mensais entre as médias das concentrações dos referidos metabólitos em um período de 12 meses. Foram utilizadas 8 fêmeas, adultas, presentes em cinco instituições no estado de São Paulo, onde foram coletadas fezes 3 vezes por semana de cada indivíduo, durante 12 meses, para a extração e mensuração dos metabólitos de progesterona, estradiol e corticosterona. Os perfis das excreções dos metabólitos fecais dos hormônios sexuais de 6 das 8 fêmeas, foram muito semelhantes, sendo período de maior atividade reprodutiva entre os messes de julho, agosto e setembro, ocorrendo mais de um ciclo ovulatório dentro desse período. Nos outros meses do ano, apesar de algumas variações acima da linha basal, não foram encontrados indícios de atividade reprodutiva. De acordo com essas características, semelhante entre a maioria das fêmeas do estudo, podemos sugerir que a raposa-do-campo seja poliestrica sazonal, com atividade reprodutiva ocorrendo nos meses de julho, agosto e setembro. Esses achados são muito próximos do visualizado em populações de vida livre, onde acasalamentos são observados entre junho e julho. O perfil de excreção dos metabólitos fecais de glicocorticóides segue o mesmo padrão observado para os metabólitos de progesterona e estradiol, com um aumento mais significativo da excreção nos meses de julho, agosto e setembro. Esses resultados indicam que além da grande quantidade de estressores que podem alterar a excreção de glicocorticóides, também deve-se considerar a flutuação sazonal e o status reprodutivo do indivíduo ao avaliar as concentrações de metabólitos de glicocorticóides. Duas fêmeas, que dividem o mesmo recinto, não apresentaram um padrão de ciclicidade reprodutiva. Os resultados obtidos nesse estudo indicam que a dosagem de metabólitos fecais de progesterona e estradiol podem ser usadas para diferenciar o período reprodutivo do período não reprodutivo em fêmeas de Lycalopex vetulus, fornecendo informações importantes sobre a biologia reprodutiva da espécie, o que pode contribuir no desenvolvimento de estratégias para a conservação desta espécie, como por exemplo aumentar o sucesso reprodutivo ex situ. / Due to the current global changes is expected that a large number of species require an integration of actions inside and outside their natural environment for them conservation. The cerrado is one of the richest ecosystems in biodiversity, but due to human action, there remains less than 20% of its original vegetation cover. The Hoary fox (Lycalopex vetulus) is a small canid (2,5-4kg) endemic of the cerrado from the central Brazil and is present in the list of endangered species in the state of São Paulo. It was not found in literature any detailed description of the estrous cycle of this species. The present study aimed to characterize ovarian cyclicity in Lycalopex vetulus using a noninvasive method: Extraction and measurement of fecal metabolites of estradiol and progesterone, using the technique of enzymeimmunoassay, It was also verified the possible differences between the monthly mean concentrations of these metabolites in a period of 12 months. 8 captive adult females, were studied in five different institutions in the state of São Paulo, where feces were collected three times per week for each individual for 12 months for extraction and measurement of metabolites of progesterone, estradiol and glucocorticoids. The profile of the concentration of fecal metabolites of sexual hormones from 6 of 8 females was very similar, being the period of major reproductive activity between the months of July, August and September, with the occurrence of more than one ovulatory cycle within that period. In the others months of the year, despite some variations above the baseline, no evidence of reproductive activity were found. According to these characteristics, similar in most females of the study, we can suggest that the hoary fox is seasonal polyestrous with reproductive activity occurring in the months of July, August and September. These findings are very close to the observed in wild populations, where mating is observed between June and July. The profile of excretion of fecal glucocorticoid metabolites follows the same pattern observed for the metabolites of progesterone and estradiol, with a more significant increase in excretion in the months of July, August and September. These results indicate that besides the large amount of stressors that can alter the excretion of glucocorticoids also it must be considered the seasonal fluctuation and the reproductive status of the individual to evaluate the levels of glucocorticoids. Two females, who share the same captivity, did not show a pattern of reproductive cyclicity. The results of this study indicate that the dosage of fecal metabolites of estradiol and progesterone can be used to differentiate the reproductive period of non-reproductive period in females of Lycalopex vetulus, providing important information about the reproductive biology, which may contribute to the development of the species conservation strategies, such as increasing the reproductive ex situ success.

O estudo endócrino-reprodutivo com o uso da extração e dosagem de metabólitos de esteroides em excretas tem sido proposta como uma ferramenta extremamente útil por não ser invasiva e permitir estudos longitudinais com grande número de coletas de amostras sem produzir estresse, além de ser viável em psitacídeos. Assim, este estudo objetivou descrever e comparar as concentrações de metabólitos de glicocorticoides, testosterona, estrógeno e progesterona em excretas de ararajubas em diferentes categorias reprodutivas, com o uso de técnicas não invasivas, além de validar fisiologicamente os ensaios para dosagens desses metabólitos em excretas da espécie. Para isso, foram utilizadas 24 (vinte e quatro) ararajubas, das quais foram coletados excretas durante diferentes fases reprodutivas, sendo: sem atividade reprodutiva, em atividade de incubação de ovos e em atividade de postura de ovos. Além disso, foram feitos desafios com aplicação de ACTH e GnRH, para validação dos ensaios. Como resultados, obtivemos picos de concentração de metabólitos de glicocorticoides após aplicação de ACTH e picos de concentração de metabólitos de testosterona nos machos após aplicação do GnRH, validando fisiologicamente os ensaios para mensurar estes metabólitos hormonais; os ensaios para mensurar metabólitos de estrógeno e progesterona foram validados biologicamente. Foram observados valores semelhantes de metabólitos de glicocorticoides entre as diferentes categorias reprodutivas, porém diferentes nos metabólitos de testosterona, estrógeno e progesterona, com valores maiores durante postura (testosterona e estrógeno), e maiores na postura com relação aos animais sem atividade reprodutiva (progesterona). / The endocrine and reproductive study using the extraction and quantification of metabolites of steroids in excreta has been proposed as an extremely useful tool for being non-invasive and allow longitudinal studies with large numbers of samples collected without producing stress, and is feasible in parrots. Thus, this study aimed to describe and compare the concentrations of metabolites of glucocorticoids, testosterone, estrogen and progesterone in the excretes golden conures in different reproductive categories, with the use of non-invasive techniques, and validate physiologically assays for determination of these metabolites in the excreta species. For this, we used 24 (twenty four) golden conures, which excreta were collected during different reproductive phases, as follows: no reproductive activity, activity in the incubation of eggs and egg-laying activity. Additionally, challenges were performed with application of ACTH and GnRH for validation tests. We observed peak concentrations of glucocorticoid metabolites after administration of ACTH and peak concentrations of metabolites of testosterone in males after application of GnRH, physiologically validating assays to measure these hormone metabolites; tests to measure metabolites of estrogen and progesterone were biologically validated. Values of glucocorticoid metabolites were similar between different reproductive categories, but between metabolites of testosterone, estrogen and progesterone were different, with higher values during posture (testosterone and estrogen), and higher in posture toward animals without reproductive activity (progesterone) .

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:59:06Z : No. of bitstreams: 1 christofoletti_md_me_jabo.pdf: 728449 bytes, checksum: c3e0031c932c62484c010871b451c29b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A constante ameaça às populações de veado-campeiro (Ozotoceros bezoarticus) faz deste cervídeo uma espécie ameaçada de extinção, trazendo à tona uma necessidade eminente de mais estudos, principalmente relacionado à biologia e fisiologia reprodutiva. Sendo assim, os objetivos deste trabalho foram: definir o padrão de excreção de progestágenos fecais durante a gestação do veado-campeiro e validar possível método não-invasivo para diagnóstico de gestação da espécie, com uso de análises endócrinas. Para isso, onze fêmeas da espécie foram capturadas, marcadas e receberam colares radiotransmissores no Pantanal, região da Nhecolândia. Elas foram acompanhadas mensalmente e tiveram sua fezes colhidas para caracterização hormonal da gestação, entre o período de agosto de 2008 a novembro de 2009. Foi observada a ocorrência de parto em apenas sete fêmeas, as quais foram utilizadas na caracterização endócrina da gestação. As dosagens das progestinas fecais foram feitas por ensaio imunoenzimático. Os nascimentos observados ocorreram entre agosto e outubro, com pico entre agosto e setembro. Os níveis das progestinas fecais durante o início da gestação foram semelhantes aos períodos não-gestantes, com aumento progressivo a partir do segundo terço da gestação até o momento do parto, decaindo após esse período aos níveis não-gestantes. Os níveis de progestinas fecais acima de 6000 ng/g de fezes são sugestivos de gestação. / The constant risk of pampas deer populations (Ozotoceros bezoarticus) makes these threatened specie, bringing an eminent necessity of more studies, mainly related to biology and reproductive physiology. Being thus, the objectives of this work were: obtain the profile of fecal progestins excretion during the pampas deer gestation and to validate a possible noninvasive diagnosis method of gestation for the species, using endocrine analysis. For this, eleven females had been captured, marked and received necklaces radiotransmitters in Pantanal, region of Nhecolândia. They had been followed and their excrements were collected monthly for hormonal characterization between August, 2008 - November, 2009. Was observed the occurrence of birth in only seven females, which had been used in the endocrine characterization of gestation. The levels of fecal progestins during the beginning of gestation had been similar to those at nogestational periods, with gradual increase from the second part of gestation until the moment of birth, decaying after this period to no-gestation levels. The levels of fecal progestins above 6000 ng/g of excrements are suggestive of gestation.

A dissertação se situa no campo de pesquisa de métodos não invasivos de análise clínica, mais especificamente, de prognóstico da gravidade de insuficiência cardíaca, IC, com base em bioindicador presente no ar exalado por pacientes, em estudo no IncorHCFMUSP. O bioindicador mais relevante encontrado por GC-MS foi a acetona (propanona). Para a coleta do ar exalado desenvolveu-se dispositivo que compreende frasco borbulhador (impinger) com difusor, contendo 5 mL de água, imerso em banho de gelo e acoplado a saco plástico para definição de volume amostrado (7,6 L). A preservação de amostras deu-se por congelamento a -80ºC. Para a determinação do analito, escolheu-se método espectrofotométrico (474 nm) baseado na reação da acetona com salicilaldeído em meio básico, apresentando limite de detecção de 0,3 mg/L em fase líquida e 0,3 µg/L em ar exalado. Foram realizados estudos de eficiência de coleta por geração de atmosfera controlada. Resultados iniciais obtidos com amostras coletadas de pacientes portadores de IC pelos colaboradores do Incor indicam a potencialidade do bioindicador e dos equipamentos e métodos desenvolvidos para acetona nesta dissertação. / The dissertation fits in the research field of noninvasive clinical analysis, more specifically, the prognosis of the severity of heart failure, HF, based on a biomarker found in the air exhaled by patients, in a study at InCor-HCFMUSP. The most relevant biomarker found by GC-MS was acetone (propanone). For the breath collection a device was developed which comprises a scrubber flask (impinger) with diffuser, containing 5 mL of water, immersed in an ice bath and attached to a plastic bag for delimitation of the sample volume (7,6 L). For the determination of acetone a spectrometric method (474 nm) was chosen based on a reaction of acetone with salicylaldehyde in alkaline medium, with detection limits of 0,3 mg/L in liquid phase and 0,3 µg/L in breath. Preliminary studies made with samples collected from HF patients by the co-workers from InCor indicate the potential of the identified biomarker and the suitability of the equipment and methods developed in this dissertation for its analysis.

Testes de paternidade geralmente são feitos analisando amostras de DNA do suposto pai, mãe e criança. Para realizar esse exame antes de a criança nascer era preciso recorrer à métodos invasivos, tais como amniocentese e biópsia de vilo corial. Com a descoberta de DNA fetal livre (fcfDNA) no soro e plasma materno, hoje é possível utilizar técnicas que usem esse fcfDNA diminuindo assim os riscos à saúde do feto e da mãe. Testes de pa- ternidade que analisam Short Tandem Repeats (STRs) do fcfDNA, embora possíveis, não são confiáveis, pois muitas vezes há degradação do DNA. Por sua vez, Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) têm sido demonstrados como bons candidatos para identificação humana e podem ser obtidos de fragmentos pequenos de DNA (ou seja, mesmo com o DNA degradado). No entanto, SNPs possuem um número limitado de alelos diferentes (entre dois e quatro). Micro-haplótipos são segmentos cromossomais menores do que 200 pb (pares de bases), contendo dois ou mais SNPs que formam pelo menos três haplótipos distintos. Ao utilizá-los como marcadores genéticos, aumentamos o número de possíveis alelos formados a partir dos SNPs. Como o fcfDNA possui um tamanho de aproximada- mente 145 pb, isso é suficiente para conter micro-haplótipos que podem ser sequenciados usando tecnologia de Sequenciamento de Nova Geração (NGS). O objetivo desse projeto é determinar a probabilidade de paternidade usando SNPs dentro de micro-haplótipos. Os micro-haplótipos foram escolhidos com base em literatura prévia e as frequências relativas destes foram calculadas com base nos grupos étnicos dos dados do 1000 Genomes. Dados brutos de sequenciamento de três amostras de DNA são analisados: o suposto pai, a mãe e o plasma materno (mistura de DNA livre da mãe e do feto). Em seguida, desenvolvemos scripts para obter e analisar os genótipos do suposto pai e da mãe, para cada um dos micro-haplótipos escolhidos. Combinando informação genotípica, frequências populacio- nais e frações fetais (plasma), desenvolvemos um método para calcular a probabilidade de paternidade em casos de não exclusão da mesma. / Paternity tests are usually done by analyzing DNA samples from the alleged father, the mother, and the child. To perform this exam before the birth, invasive methods such as am- niocentesis and chorionic villus sampling are usually necessary. Fortunately, the discovery of fetal cell-free DNA (fcfDNA) in maternal plasma and serum, and the development of te- chniques to analyze this fcfDNA have allowed researchers to reduce the health risk for both fetus and mother. Although paternity tests that analyze Short Tandem Repeats (STRs) from fcfDNA are possible, they are not reliable because DNA degradation often occurs. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) have been demonstrated as good candidates for human identification and they can be obtained from small DNA fragments (even from de- graded DNA). However, SNPs have a limited number of different alleles (between two and four). Microhaplotypes are chromosomal segments smaller than 200 bp (base pairs) con- taining two or more SNPs that form at least three distinct haplotypes. By using them as genetic markers, we increased the number of possible alleles formed from the SNPs. Since fcfDNA has approximately 145 bp, this is sufficient to contain microhaplotypes that can be sequenced using Next Generation Sequencing (NGS) technology. The aim of this project is to determine the probability of paternity using SNPs within microhaplotypes. Microha- plotypes were chosen based on previous literature review. The haplotype frequencies were calculated based on the ethnic groups from 1000 Genomes database. Raw DNA sequence data from three DNA samples were analyzed: the alleged father, the mother, and the maternal plasma (mixture of mother and fcfDNA). Then, we developed scripts to analyse and obtain the genotypes of the alleged father and mother, for each microhaplotype. By combining genotypic information, population frequencies, and fetal fractions (plasma), we developed a method to calculate the probability of paternity in cases of non-exclusion.

A dissertação se situa no campo de pesquisa de métodos não invasivos de análise clínica, mais especificamente, de prognóstico da gravidade de insuficiência cardíaca, IC, com base em bioindicador presente no ar exalado por pacientes, em estudo no IncorHCFMUSP. O bioindicador mais relevante encontrado por GC-MS foi a acetona (propanona). Para a coleta do ar exalado desenvolveu-se dispositivo que compreende frasco borbulhador (impinger) com difusor, contendo 5 mL de água, imerso em banho de gelo e acoplado a saco plástico para definição de volume amostrado (7,6 L). A preservação de amostras deu-se por congelamento a -80ºC. Para a determinação do analito, escolheu-se método espectrofotométrico (474 nm) baseado na reação da acetona com salicilaldeído em meio básico, apresentando limite de detecção de 0,3 mg/L em fase líquida e 0,3 µg/L em ar exalado. Foram realizados estudos de eficiência de coleta por geração de atmosfera controlada. Resultados iniciais obtidos com amostras coletadas de pacientes portadores de IC pelos colaboradores do Incor indicam a potencialidade do bioindicador e dos equipamentos e métodos desenvolvidos para acetona nesta dissertação. / The dissertation fits in the research field of noninvasive clinical analysis, more specifically, the prognosis of the severity of heart failure, HF, based on a biomarker found in the air exhaled by patients, in a study at InCor-HCFMUSP. The most relevant biomarker found by GC-MS was acetone (propanone). For the breath collection a device was developed which comprises a scrubber flask (impinger) with diffuser, containing 5 mL of water, immersed in an ice bath and attached to a plastic bag for delimitation of the sample volume (7,6 L). For the determination of acetone a spectrometric method (474 nm) was chosen based on a reaction of acetone with salicylaldehyde in alkaline medium, with detection limits of 0,3 mg/L in liquid phase and 0,3 µg/L in breath. Preliminary studies made with samples collected from HF patients by the co-workers from InCor indicate the potential of the identified biomarker and the suitability of the equipment and methods developed in this dissertation for its analysis.

Orientadores: Fabio Husemann Menezes, João Poterio Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T12:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FecuriJunior_Rubens_M.pdf: 5719185 bytes, checksum: e083a35f4647757fb28a54278b9718c6 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Introdução- A gestação é considerada como fator de desenvolvimento de varizes nas pernas e um dos fatores supostamente responsável por isso, seria o aumento de pressão nas veias das pernas devido ao aumento do útero e compressão das veias ilíacas. Para avaliar a pressão nas veias das pernas em posição ortostática nos ambulatórios, o método considerado como padrão ouro, é a punção da veia diretamente, mas isso é inconveniente. Objetivos- O propósito desse estudo foi o de utilizar um método não invasivo para medir a pressão nas veias das pernas em posição ortostática; o estudo foi aplicado em um grupo controle, em um grupo de varicosos e em um grupo de gestantes no 3º trimestre da gestação e comparar os valores obtidos entre os grupos. Método- Foram selecionadas para o estudo, 24 mulheres gestantes (média das gestações de 29,7 semanas) que foram avaliadas e comparadas com um grupo de 20 pacientes com varizes e 20 pessoas de um grupo controle. Os três grupos foram submetidos a medida da pressão venosa nas pernas em posição ortostática por meio de um pletismógrafico a ar, usando transdutor diferencial de pressão; a medida da pressão encontrada foi comparada com o valor da pressão hidrostática calculada a partir do segundo espaço intercostal até o local de aplicação do manguito. Resultados- Não houve diferença estatística entre a pressão calculada nos três grupos. A média da pressão no grupo de gestantes foi de 63,5 mmHg ± 5,4 SD, e foi comparada com a pressão encontrada no grupo controle 66,1 mmHg ± 8,0 SD, (p=0.1851). A pressão medida no grupo de gestantes foi estatisticamente diferente da pressão medida no grupo das varicosas (71,0 mmHg ± 6,6 SD) ? p<0,0003). Conclusão- Não foi verificado no estudo atual aumento dos valores de pressão hidrostática nas veias das pernas no 3º trimestre da gestação / Abstract: Introduction- Pregnancy is a predisposing factor to the development of varicose veins of the lower legs. One of the possible explanations is the compression of the iliac veins by the enlarged uterus, leading to a raise in the venous pressure (VP) and consequently to the enlargement of the venous system at the legs. To evaluate the VP the gold standard is Ambulatory Venous Pressure measured b+y the venipuncture, but it is inappropriate. The purpose of this study is to measure the VP at the legs, in the standing position, in a control group, varicose women and in a group of women in the third trimester of pregnancy, using a new non-invasive technique. Method- Twenty-four pregnant women (mean pregnancy age 29.7 weeks) were evaluated and compared to a group of 20 patients presenting with varicose veins and a group of 20 control volunteers. The three groups were submitted to VP measurement in the standing position by means of air-plethysmography using a pressure differential transducer; the measured pressures (MP) were compared to the hydrostatic pressures calculated (CP) from the second intercostal space to the level of the leg cuff. Results- There was no statistic difference between the mean CP of the three groups. The mean MP in the pregnancy group was 63.5 mmHg ± 5.4 SD, and it was comparable to the MP of the normal volunteers, 66.1 mmHg ± 8.0 SD, (p = 0.1851). The MP of the pregnancy group was statistically different from the mean MP of the varicose veins group (71.0 mmHg ± 6.6 SD, -p<0.0003). Conclusion- There is no increase in the hydrostatic pressure in the leg veins at the end of pregnancy / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia

Testes de paternidade geralmente são feitos analisando amostras de DNA do suposto pai, mãe e criança. Para realizar esse exame antes de a criança nascer era preciso recorrer à métodos invasivos, tais como amniocentese e biópsia de vilo corial. Com a descoberta de DNA fetal livre (fcfDNA) no soro e plasma materno, hoje é possível utilizar técnicas que usem esse fcfDNA diminuindo assim os riscos à saúde do feto e da mãe. Testes de pa- ternidade que analisam Short Tandem Repeats (STRs) do fcfDNA, embora possíveis, não são confiáveis, pois muitas vezes há degradação do DNA. Por sua vez, Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) têm sido demonstrados como bons candidatos para identificação humana e podem ser obtidos de fragmentos pequenos de DNA (ou seja, mesmo com o DNA degradado). No entanto, SNPs possuem um número limitado de alelos diferentes (entre dois e quatro). Micro-haplótipos são segmentos cromossomais menores do que 200 pb (pares de bases), contendo dois ou mais SNPs que formam pelo menos três haplótipos distintos. Ao utilizá-los como marcadores genéticos, aumentamos o número de possíveis alelos formados a partir dos SNPs. Como o fcfDNA possui um tamanho de aproximada- mente 145 pb, isso é suficiente para conter micro-haplótipos que podem ser sequenciados usando tecnologia de Sequenciamento de Nova Geração (NGS). O objetivo desse projeto é determinar a probabilidade de paternidade usando SNPs dentro de micro-haplótipos. Os micro-haplótipos foram escolhidos com base em literatura prévia e as frequências relativas destes foram calculadas com base nos grupos étnicos dos dados do 1000 Genomes. Dados brutos de sequenciamento de três amostras de DNA são analisados: o suposto pai, a mãe e o plasma materno (mistura de DNA livre da mãe e do feto). Em seguida, desenvolvemos scripts para obter e analisar os genótipos do suposto pai e da mãe, para cada um dos micro-haplótipos escolhidos. Combinando informação genotípica, frequências populacio- nais e frações fetais (plasma), desenvolvemos um método para calcular a probabilidade de paternidade em casos de não exclusão da mesma. / Paternity tests are usually done by analyzing DNA samples from the alleged father, the mother, and the child. To perform this exam before the birth, invasive methods such as am- niocentesis and chorionic villus sampling are usually necessary. Fortunately, the discovery of fetal cell-free DNA (fcfDNA) in maternal plasma and serum, and the development of te- chniques to analyze this fcfDNA have allowed researchers to reduce the health risk for both fetus and mother. Although paternity tests that analyze Short Tandem Repeats (STRs) from fcfDNA are possible, they are not reliable because DNA degradation often occurs. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) have been demonstrated as good candidates for human identification and they can be obtained from small DNA fragments (even from de- graded DNA). However, SNPs have a limited number of different alleles (between two and four). Microhaplotypes are chromosomal segments smaller than 200 bp (base pairs) con- taining two or more SNPs that form at least three distinct haplotypes. By using them as genetic markers, we increased the number of possible alleles formed from the SNPs. Since fcfDNA has approximately 145 bp, this is sufficient to contain microhaplotypes that can be sequenced using Next Generation Sequencing (NGS) technology. The aim of this project is to determine the probability of paternity using SNPs within microhaplotypes. Microha- plotypes were chosen based on previous literature review. The haplotype frequencies were calculated based on the ethnic groups from 1000 Genomes database. Raw DNA sequence data from three DNA samples were analyzed: the alleged father, the mother, and the maternal plasma (mixture of mother and fcfDNA). Then, we developed scripts to analyse and obtain the genotypes of the alleged father and mother, for each microhaplotype. By combining genotypic information, population frequencies, and fetal fractions (plasma), we developed a method to calculate the probability of paternity in cases of non-exclusion.

Os perfis longitudinais dos metabólitos dos esteróides sexuais, progesterona e estrógenos, e dos glicocorticóides foram analisados para 22 eventos (gestação, parto e lactação) de 8 jaguatiricas mantidas em cativeiro. Três eventos foram oriundos da Transferência de Embrião (TE) e foram comparados àquelas que gestaram por fertilização natural. As análises estatísticas demonstraram haver diferenças altamente significativas para metabólitos de progesterona na fase inicial (P<0001) e média (P< 0,007) da gestação, bem como, no período da lactação (P<0,0015). As análises descritivas sugeriram uma atividade ovariana para a espécie no período de lactação, uma vez detectado picos de metabólitos de estrógenos para alguns eventos. Foi realizado ainda, um estudo do comportamento materno de 3 fêmeas através do sistema de vídeo-monitoramento dos primeiros meses da lactação (n=3989,5 horas observadas). A espécie em cativeiro despendeu mais tempo cuidando do seu filhote e descansando durante o dia, entrando na caixa de abrigo entre 5:00h e 8:00h (61,3%) e nela permanecendo por um tempo médio de 8 horas seguidas. Outras análises comportamentais sugerem que o estresse é um fator preponderante na determinação do sucesso da criação do filhote. A variável comportamental executada pela fêmea de entrar e sair da caixa por repetidas vezes foi associada ao estresse, sendo possível avaliar a resposta da adrenal pela secreção dos glicocorticóides e realizar sua validação fisiologicamente. Espera-se desta forma, contribuir para uma mudança no quadro bastante crítico da população em cativeiro, considerando a baixa taxa de natalidade e a alta taxa de mortalidade dos filhotes, principalmente, no seu primeiro mês de vida. / The longitudinal profiles of the sexual steroid\'s metabolites, progesterone and estrogen, and glucocorticoids were analyzed for 22 events (pregnancy, birth and breastfeeding) of 8 ocelots kept in captivity. Three events came from the Embryo Transfer (TE) and were compared against the ones that were gestated by natural fertilization. The statistical analysis demonstrated that the differences were highly significative during the initial (P<0001) and middle stages (P< 0,007) of pregnancy and lactation (P<0,0015) periods for the progesterone metabolites. The descriptive analysis suggests a ovarian activity for the species during the lactation period, once detected the estrogen metabolites peaks during some events. A study was also performed, concerning the maternal behavior of 3 female through video-monitoring of the first months of lactation (n=3989,5 hours observed). The species that were kept in captivity spent more time resting and caring the puppy, entering it\'s shelter between 5:00h and 8:00h (61,3%) and there staying during 8 hours average. Other behavior analysis suggests that the stress level is a predominant fact in the success of the establishment of the puppy. A behavior variable performed by the female, by entering the shelter for a repeated number of times was linked to the stress level, being possible to assess the adrenal response by the secretion of glucorticoids and perform it\'s phisiological validation. It is expected by this means, a contribution for a change in the critical scene of the population that is kept in captivity, considering the puppies\' low birth rate and high mortality rate, specially during it\'s first months.