Padronizou-se a PCR-Multiplex para a detecção do DNA de Neisseria meningitidis. Para tanto os primers escolhidos foram: RW01, DG74 e COR28 baseados na subunidade menor do ribossomo (16S rRNA) que apresenta regiões de seqüências conservadas encontradas em todas as bactérias conhecidas. Os primers RW01 e DG74 amplificaram o fragmento universal bacteriano de 370 bp e, os primers RW01 e COR28, o fragmento específico de N. meningitidis de 279 bp em uma única etapa. Os resultados obtidos nas amostras de LCR de 168 pacientes pelos métodos de cultura e PCR-Multiplex quando comparados à bacterioscopia mostraram que tal técnica apresentou alta sensibilidade (91,3%) no estudo de amostras de LCR de bacterioscopia positiva, enquanto que a cultura apresentou resultados menores (19,7%). Nas amostras de LCR com bacterioscopia negativa a sensibilidade da PCR-Multiplex (57,8%) também foi mais elevada do que da cultura (10%). Estes dados sugerem que a técnica aqui padronizada é altamente promissora para ser utilizada como método diagnóstico da meningite meningocócica, especialmente nos casos de pacientes submetidos à terapia antibiótica prévia. / The PCR-multiplex technique was standardized to detect N.meningitidis DNA. It was used universal primer for all bacteria showing sequence of minor subunit of 16S ribossome regions (RW01, DG74) by amplification of 370bp fragment and another (COR28) for specific sequence of N. meningitidis, amplifying 279bp fragment in one step. The results obtained in CSF samples of 168 patients by culture and PCR-Multiplex technique when compared with microscopy showed high sensitivity (91,3%) in samples with positive microscopy (81) to Gram negative diplococcus, however the culture presented only 19, 7% of positivity in the same samples. In other hand the CSF samples with negative bacterioscopy (67) the PCR-Multiplex sensitivity (57,8%) was higher to culture (10,0%) too. These data indicate a high sensitivity and specificity of PCR as a tool for a rapid diagnosis of meningococcal meningitis, mainly in that patient submitted to previous antibiotic therapy as in case of this work (90% of patients) besides the possibility of a rational practice of specific treatment.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2004. / Härtill 4 uppsatser.

Objetivos: Analisar a tendência, descrever mudanças no comportamento da doença meningocócica invasiva (DMI) e estimar o impacto da vacina conjugada do meningococo C (VCMC) nas capitais da região Sul do Brasil, no período de 1991 a 2015, assim como, investigar as características sociodemográficas, econômicas e de intervenções tecnológicas associadas aos casos pertencentes a cluster da doença no município de Curitiba (PR), no período de 2001 a 2014. Métodos: As áreas de estudo englobaram as capitais da Região Sul do Brasil: Curitiba (PR), Florianópolis (SC) e Porto Alegre (RS), a população de estudo abrangeu os casos de DMI notificados entre 1991 a 2015 à vigilância da doença e residentes nessas capitais. A definição de caso adotada foi a padronizada pelo Ministério da Saúde. As fontes de dados foram: vigilância da DMI, o Instituto Adolfo Lutz, o Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística e o Instituto de Pesquisa e Planejamento Urbano de Curitiba. A tendência da incidência e mortalidade da DMI foi determinada pelo modelo de regressão polinomial. A intensidade e a direção da relação linear entre a taxa de incidência e os indicadores socioeconômicos, de saúde e sorogrupo foram analisadas pelo coeficiente de correlação de Pearson. O impacto da VCMC foi estimado pela Fração Prevenida na População, comparando as taxas de incidência de 2012 e 2015 com as de 2009. Investigou-se os potenciais fatores associados a casos pertencentes a cluster no período de 2001 a 2014 por meio das estimativas de odds ratio não ajustada e ajustadas pela regressão logística múltipla não condicional, com os respectivos intervalos de confiança de 95%. Resultados: No período de estudo, a DMI apresentou três comportamentos distintos nas capitais da região sul: i) epidêmico na década de 1990, ii) declínio das taxas na década de 2000, antes da introdução da VCMC na rotina de imunização e, iii) estacionário com taxas baixas entre 2011 e 2015, sob a influência da VCMC. Observamos nesses períodos a influência de fatores biológicos, socioeconômicos e de saúde na incidência dessas capitais. No estudo mais detalhado em Curitiba, apresentou-se associado aos casos pertencentes a cluster, ajustados no tempo e pela idade, residir em bairros de baixa renda (OR: 2,3, IC95%:1,1-4,5). O sorogrupo predominante foi o B com 65,4%, seguida pelo C com 24,5% e 8,3% pelo W. Possivelmente, em virtude da baixa incidência do sorogrupo C, não se verificou a redução na incidência total da DMI, nestas capitais. Entretanto, no período posterior a VCMC, os casos pelo sorogrupo C foram raros ou zerados na faixa etária destinada a vacinação em Curitiba e Florianópolis. Em Porto Alegre foram registrados casos pelo sorogrupo C na faixa etária vacinada e o sorogrupo W se destacou. Conclusão: A partir do início desse século houve declínio expressivo da incidência da DMI nas capitais da região Sul do país, antes mesmo da introdução da vacina, aproximando-se das taxas de DMI encontradas em países de elevada renda. Tais resultados são consistentes, com trabalhos que mostram uma associação da DMI com as condições de vida e grau de desenvolvimento das populações. / Objectives: To analyze the trend and describe changes in the epidemiology of invasive meningococcal disease (IMD) and to estimate the impact of the meningococcal conjugate C vaccine (MCCV) in the capitals of the southern region of Brazil, from 1991 to 2015, as well as to investigate the sociodemographic, economic and technological interventions associated to the cases belonging in cluster of the disease in the city of Curitiba (PR), from 2001 to 2014. Methods: The study areas included the capitals of the States of Southern Brazil: Curitiba (PR), Florianópolis (SC) and Porto Alegre (RS), the study population considered cases of IMD reported between 1991 and 2015 to surveillance and residents in these capitals. The IMD case definition adopted was that standardized by the Ministry of Health. The data sources were the surveillance of the IMD, the Adolfo Lutz Institute, the Brazilian Institute of Geography and Statistics and the Institute of Research and Urban Planning of Curitiba. The trend of IMD incidence and mortality was determined by the polynomial regression model. The intensity and direction of the linear relationship between the incidence rate and socioeconomic indicators, health and serogroup were analyzed by the Pearson correlation coefficient. The impact of the MCCV was estimated by the Prevented Fraction for the Population comparing the incidence rates of 2012 and 2015 with those of 2009. We investigated the potential factors associated with cases belonging in cluster between 2001 and 2014 by the unadjusted and adjusted odds ratio estimates by the multiple unconditional logistic regression, with the respectives confidence intervals of 95%. Results: Between 1991 and 2015, IMD presented three distinct periods in the capitals of the southern region: i) epidemic in the 1990s, ii) decline in rates from 2000 to 2010, before the introduction of MCCV in immunization routine and (iii) stationary at low rates in 2011 to 2015, under the influence of MCCV. In this period, we observed the influence of biological, socioeconomic and health factors on the incidence of these capitals. In more detailed study in Curitiba, it was associated with cases belonging in cluster, adjusted in time and by age, to live in low-income neighborhoods (OR: 2.3, 95% CI: 1.1-4.5). Serogroup B was predominant with 65,4%, followed by C with 24,5% and 8,3% by W. Possibly, due to the low incidence of serogroup C, there was no reduction in the total incidence of IMD in these capitals. However, *in the period after MCCV, serogroup C cases were rare or zero in the age group destinedfor vaccination in Curitiba and Florianópolis. In Porto Alegre, cases were registered by serogroup C in the vaccinated age group and serogroup W was relevant. Conclusion: From the beginning of this century there was a significant decline in the incidence of IMD in the capitals of the southern region of the country, even before the introduction of the vaccine, approaching IMD rates found in high income countries. These results are consistent, with studies showing an association of IMD with living conditions and the degree of population development.

Orientador: Marcelo Lancellotti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T02:03:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Esteves_CibeleZanardi_M.pdf: 1299023 bytes, checksum: 2283eee394500580d71ec2ba77e1856f (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Neisseria meningitidis, bactéria aeróbica Gram negativa, causa infecções meningocócicas que podem resultar em doenças severas incluindo meningite meningocócica, sepsis e morte. Uma vez que a administração precoce de antibióticos está relacionada às baixas taxas de morbidade e mortalidade, é de crucial importância iniciar o tratamento o mais rápido possível. A administração de antibióticos aos pacientes com suspeita de infecções meningocócicas antes da coleta de material biológico tem sido uma prática comum que pode prejudicar o diagnóstico microbiológico por cultura bacteriana. A abordagem nos últimos anos tem sido o desenvolvimento de técnicas alternativas que possam ser utilizadas para se obter o diagnóstico etiológico. Técnicas de biologia molecular, como a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) tem sido desenvolvidas para melhorar a sensibilidade e especificidade da detecção de microorganismo e aliadas a Nanotecnologia podem ser úteis para desenvolvimento de métodos alternativos de diagnóstico. Foi padronizada PCR para N. meningitidis ATCC 23247 Sorogrupo B com a utilização de primers do gene synD, através de gradiente de MgCl2. Também foi determinado o Limite de Detecção (LD) de DNA da PCR. Então a reação foi adjuvada com nanopartículas de sílica mesoposa SAB-15 e SBA-16. Não houve aumento do LD de DNA nas concentrações de nanopartículas testadas. Também foi realizado estudo entre a interação do DNA e SBA-15 e SBA-16 através de Gel Retardo e Dicroísmo Circular. Resultados sugerem interação fraca entre DNA e estas nanopartículas. Desta forma conclui-se que nanopartículas SBA-15 e SBA-16 não possuem interação com DNA a ponto de melhorar seu LD, não sendo úteis, nas concentrações testadas, para o desenvolvimento de métodos diagnósticos mais sensíveis / Abstract: Neisseria meningitidis , Gram-negative aerobic bacteria , which cause meningococcal disease can result in severe diseases including meningococcal meningitis , sepsis and death. Since the early administration of antibiotics is related to lower rates of morbidity and mortality, it is crucial to start treatment as soon as possible . The administration of antibiotics to patients with suspected meningococcal disease before the collection of biological material has been a common practice that can harm the microbiological diagnosis of bacterial culture . The approach in recent years has been the development of alternative techniques that might be used to obtain the etiologic diagnosis. Molecular biology techniques such as the Polymerase Chain Reaction (PCR ) has been developed to improve the sensitivity and specificity of detection of a microorganism and allied Nanotechnology may be useful for development of alternative methods of diagnosis. PCR was standardized for N. ATCC 23247 meningitidis Serogroup B using primers gene SynD, through MgCl2 gradient . Also determined was the limit of detection (LD) of PCR DNA . Then the reaction was adjuvanted with silica nanoparticles mesoposa SAB- 15 and SBA - 16 . There was no increase in LD DNA concentrations of nanoparticles tested. Also it was studied the interaction between DNA and SBA - 15 and SBA - 16 by Gel Retardation and Circular Dichroism . Results suggest weak interaction between DNA and these nanoparticles . Thus it is concluded that nanoparticles SBA-15 and SBA-16 does not have interaction with DNA improve their point of LD and is not useful in concentrations, for the development of more sensitive diagnostic methods / Mestrado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Mestra em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientador: Marcelo Lancellotti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T12:32:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cury_GiseleCristianeGentile_D.pdf: 5956781 bytes, checksum: b28217e4d95beb4734f0357ed4181696 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital quando for liberada / Abstract: The abstract is available with the full electronic document when available / Doutorado / Bioquimica / Doutora em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Marcelo Lancellotti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T23:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IzidoroJunior_MarioServulo_M.pdf: 2227378 bytes, checksum: fe650bf0745300591928bae4fac67e46 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Embora comensal da nasofaringe humana, algumas linhagens de Neisseria meningitidis ocasionalmente ultrapassam a mucosa respiratória e a barreira hematoencefálica causando doenças como meningite e septicemia. Sabe-se também que bactérias em geral possuem taxia por células cancerígenas, isto é, possuem uma predileção por infectar células tumorais. Desta forma, neste trabalho produzimos OMV de diversas linhagens de Neisseria meningitidis e analisamos as principais características físico-químicas destas vesículas e, além disso, também verificamos as principais interações desta micropartícula com a linhagem celular NG97, uma linhagem de glioblastoma, tecido pelo qual tal bactéria é conhecida por infectar em casos patológicos, por testes morfológicos in vitro e também analisamos as citocinas inflamatórias através de quantificação relativa por Real time PCR. O grande achado deste trabalho é que a utilização de ultrafiltração substituindo a ultracentrifugação na produção de OMVs é viável, menos trabalhosa e mais rápida que os métodos descritos na literatura. Além disso, as vesículas extraídas por tal processo apresentam tamanhas e cargas superficiais como os encontrados na literatura sendo que cada cepa produz diferentes quantidades de OMVs para um mesmo tempo. Ainda, observou-se que as OMVs obtidas de linhagens atenuadas para os fatores de virulência causaram menores alterações morfológicas na linhagem NG97 do que as OMVs obtidas a partir de linhagens selvagens. A influência de tais fatores de virulência, que auxiliam na interação das células do parasita com as células do hospedeiro, também foi observada na análise das citocinas inflamatórias produzidas, onde foram constatados que na ausência da pilina (proteína responsável pela aderência da bactéria com células epiteliais e endoteliais) a produção de citocinas foi praticamente nula quando comparada com suas diferentes linhagens onde este fator de virulência é presente. Para um possível uso destas vesículas como sistemas lipossomais de entrega de drogas, acredita-se que quanto mais inócua a vesícula for maior seria a biodisponibilidade da molécula antitumoral a ser entregue, como é o caso da OMV produzida pela cepa C2135 ?pilE que, além disso, possui um tamanho menor de 200nm sendo capaz de penetrar nas junções celulares da massa tumoral / Abstract: Neisseria meningitidis is a human nasopharyngeal commensal, however, some strains occasionally exceed the respiratory mucosa and the blood brain barrier causing diseases such as meningitis and septicemia. It is well established that bacteria has a natural predilection to infect cancer cells. Thus, this study produced OMVs from different strains of Neisseria meningitidis and analyzed physicochemical characteristics of these vesicles such as size and surface charge, and also, the main interactions between this nanoparticle and NG97 cell line by in vitro morphological tests and the analyze of the production of inflammatory cytokines by relative quantification Real time PCR. The major finding of this study is that the use of ultrafiltration substituting ultracentrifugation on OMVs production makes the extraction viable, less laborous and faster than previous methods. Furthermore, the vesicles extracted by this process exhibited similar sizes and surface charges when compared to the literature and each strain produces different amounts of OMVs when comparing the same production time. In this work, we also observed that the OMVs generated by attenuated strains for virulence factors induced less morphological changes in the NG97 cells than OMVs generated from wild type strains. This trend where virulence factors which assist the parasite-host cells interaction was also observed in the analysis of cytokines produced. It was observed in the absence of pilin (protein responsible for adherence of the bacteria to epithelial and endothelial cells) the production of cytokines was much lower when compared with the different strains where this virulence factor is present. For a possible use of these lipossomal vesicles as delivery systems for drugs, it is believed that the more innocuous the greater the bioavailability of the antitumor molecule to be delivered, as in the case of OMV produced by the strain C2135 ?pilE, moreover, having a size around 200 nm fits perfectly between the cell junctions allowing the nanoparticle to reach the tumor mass, but further studies are required to confirm this hypothesis / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Padronizou-se a PCR-Multiplex para a detecção do DNA de Neisseria meningitidis. Para tanto os primers escolhidos foram: RW01, DG74 e COR28 baseados na subunidade menor do ribossomo (16S rRNA) que apresenta regiões de seqüências conservadas encontradas em todas as bactérias conhecidas. Os primers RW01 e DG74 amplificaram o fragmento universal bacteriano de 370 bp e, os primers RW01 e COR28, o fragmento específico de N. meningitidis de 279 bp em uma única etapa. Os resultados obtidos nas amostras de LCR de 168 pacientes pelos métodos de cultura e PCR-Multiplex quando comparados à bacterioscopia mostraram que tal técnica apresentou alta sensibilidade (91,3%) no estudo de amostras de LCR de bacterioscopia positiva, enquanto que a cultura apresentou resultados menores (19,7%). Nas amostras de LCR com bacterioscopia negativa a sensibilidade da PCR-Multiplex (57,8%) também foi mais elevada do que da cultura (10%). Estes dados sugerem que a técnica aqui padronizada é altamente promissora para ser utilizada como método diagnóstico da meningite meningocócica, especialmente nos casos de pacientes submetidos à terapia antibiótica prévia. / The PCR-multiplex technique was standardized to detect N.meningitidis DNA. It was used universal primer for all bacteria showing sequence of minor subunit of 16S ribossome regions (RW01, DG74) by amplification of 370bp fragment and another (COR28) for specific sequence of N. meningitidis, amplifying 279bp fragment in one step. The results obtained in CSF samples of 168 patients by culture and PCR-Multiplex technique when compared with microscopy showed high sensitivity (91,3%) in samples with positive microscopy (81) to Gram negative diplococcus, however the culture presented only 19, 7% of positivity in the same samples. In other hand the CSF samples with negative bacterioscopy (67) the PCR-Multiplex sensitivity (57,8%) was higher to culture (10,0%) too. These data indicate a high sensitivity and specificity of PCR as a tool for a rapid diagnosis of meningococcal meningitis, mainly in that patient submitted to previous antibiotic therapy as in case of this work (90% of patients) besides the possibility of a rational practice of specific treatment.

Comparamos os resultados obtidos por meio de sorotipagem com o painel de mAbs acrescido dos mAbs para os sorotipos 7 e 10 , produzidos pelo Instituto Adolfo Lutz com os resultados obtidos pela ribotipagem. O estudo incluiu 95 cepas pertencentes ao sorogrupo B que expressaram o sorotipo 4, representados pelos fenótipos B:4; B;4,1; B:4,7; B:4,10 e B:4,21. A ribotipagem utilizando a endonuclease de restrição C/a\\ dividiu as cepas em dez ribotipos e a endonuclease EcoRV em outros cinco padrões. Quando os padrões de bandas foram combinados, formaram-se 12 ribotipos (Rb A-L). Ribotipos com 85% de similaridade entre as bandas foram combinados em grupos, Rb-1, incluindo os ribotipos C e D (sorotipo B:4,10) e Rb-2, incluindo os ribotipos A, B, E, F e I (sorotipo B:4,7). O Rb-H (sorotipo B:4,1) e Rb-G (sorotipo B:4,21) representaram distintos ribotipos diferindo dos dois primeiros grupos por mais de 25% de diferença entre as bandas. Nossos resultados sugerem que a caracterização de múltiplos epítopos de sorotipo podem melhorar a correlação entre o método fenotípico e genotípico para cepas de meningococo sorogrupo B. / The purpose of this study was to assess the correlation between phenotypic- and genotypic- methods for typing Neisseria meningitidis. We compare the results obtained by serotyping of PorB epitopes using an expanded panel of monoclonal antibodies (MAb) including MAb 7 and MAb 10, with results obtained by RFLP of rRNA genes (ribotyping). The study included a total of 95 serogroup B strains that express epitope 4 representing the phenotypes B:4; B:4,1; B:4,7; B:4, 10, and B:4,21. The ribotypes obtained using C/ai or EcoRV endonucleases divided the strains into ten and five different patterns, respectively. When banding patterns for the two enzymes were combined, twelve unique ribotypes were obtained (Rb A-L). Particular ribotypes with ≥ 85% identical bands were combined into groups, RbGroup1, including Rbs C and D (B:4,10 strains), and RbGroup-2 including Rbs A, B, E, F, and I (B:4,7 strains). The Rb-H (B:4,1 strains) and Rb-G (B:4,21 strains) represent distinct ribotypes differing from the first two groups by more than 25% of band mismatches. The phenotypic characterization of more than one PorB VR epitope on the same PorB protein was able to divide our collection of B:4 strains in groups of strains genetic related. This additional characterization of PorB epitopes improved the correlation between these two methods of typing N.meningitidis.

Meningite é um grupo de doenças infecciosas que constituem um problema global sério à saúde, tendo uma grande relevância social pelas altas taxas de mortalidade que esta doença pode causar. A descrição da progressão da doença, do agente causador e dos sintomas está bem estabelecida, no entanto, as fases iniciais da doença e todo o processo de infecção ainda não é compreendido. O desenvolvimento de diagnósticos laboratoriais mais rápidos e efetivos têm sido promissores. Este trabalho aborda a utilização de anticorpos monoclonais para o diagnóstico por meio da técnica de imunohistoquímica. Os anticorpos monoclonais foram obtidos durante fusões utilizando-se células esplênicas, linfócitos B contra antígenos de N.meningitidis. Os anticorpos foram utilizados em estudo imuno-histoquímico (IHQ) utilizando amostras de tecidos fixados em formol de pacientes com suspeita de meningite ou meningococcemia, no período de 2009 a 2015. Nosso intuito com este projeto é incrementar o diagnóstico histopatológico da meningite meningocócica, sobretudo em situações em que não houve confirmação por técnicas biomoleculares, como o PCR, da presença do agente causador desta doença. Estabelecemos um protocolo para a pesquisa de antígenos de N.meningitidis, conforme padronizado para a reação de IHQ. Nosso trabalho obteve bons resultados, os dois anticorpos monoclonais quando aplicados na reação de IHQ, não apresentaram reatividade cruzada com meningite bacteriana e viral, causadas por outros agentes etiológicos quando utilizamos DAB ou Fast Red como cromógenos. Portanto o uso dos anticorpos em conjunto com a técnica de IHQ se mostrou uma ferramenta de saúde pública auxiliando a vigilância epidemiológica. / Meningitis is a group of infectious diseases that compose a serious global health problem, having a great social relevance by high mortality rates that this disease can cause. The description of the disease progression, the causative agent and the symptoms is well established, however, the early stages of the disease and the infection is not yet understood. The development of faster and effective laboratory diagnoses have been promising. This paper discusses the use of monoclonal antibodies for diagnosis by means of the technique of Immunohistochemistry. Monoclonal antibodies were obtained during mergers using splenic cells, B lymphocytes against antigens of N. meningitidis. The antibodies were used in studies immunohistochemical (IHC) using formalin-fixed tissue samples from patients with suspected meningitis or meningococcemia, during the period from 2009 to 2015. Our aim with this project was to increase the histopathological diagnosis of meningococcal meningitis, especially in situations where there has been no confirmation by biomolecular techniques, such as PCR, of the presence of the causative agent of this disease. We have established a protocol for detecting antigens of N. meningitidis, as standardized to the IHC. The result obtained was very promising, the two monoclonal antibodies obtained good results. There was no cross-reactivity with bacterial and viral meningitis, caused by other etiological agents when using DAB or Fast Red as chromogens. Therefore the use of antibodies in conjunction with IHQ technique proved to be a public health tool aiding the epidemiological surveillance.

Os adjuvantes são moléculas, compostos ou complexos macromoleculares que aumentam a potência e a longevidade da resposta imune específica aos antígenos. A sua adição na preparação vacinal aumenta, sustenta e dirige a imunogenicidade de antígenos, modulando de forma eficaz respostas imunes apropriadas, reduzindo a quantidade de antígeno ou número de imunizações necessárias e melhorando a eficácia de vacinas em recém-nascidos, idosos ou indivíduos imunocomprometidos. O objetivo desse estudo foi avaliar a imunogenicidade das preparações antigênicas baseadas em OMVs de Neisseria meningitidis B complexados com dois diferentes adjuvantes, o lípide catiônico brometo de dioctadecildimetilamônio (DODAB-BF) e hidróxido de alumínio (HA) utilizando a via intranasal e a via subcutânea em camundongos neonatos Swiss aplicando o sistema heterólogo prime-booster. Como métodos de estudo foram utilizadas as técnicas universais imunológicas como: Immunoblot, DOT-ELISA, ELISA e ELISpot visando à avaliação da resposta imunológica humoral e celular de camundongos machos e fêmeas. Na análise por Immunoblot avaliou-se a especificidade dos anticorpos com a cepa homóloga e com as bactérias íntegras de N. meningitidis da cepa B:4:P1.19,15. Por DOT-ELISA verificou-se a reatividade cruzada com DODAB-BF para diferentes sorogrupos (B, C, W e Y) e o mesmo não foi observado com HA. Por ELISA foram quantificados e comparados os títulos de anticorpos nos soros pool dos camundongos imunizados com DODAB-BF+OMVs e HA+OMVs para IgG, IgG1 e IgG2a as vias de imunização utilizadas exibiram títulos de IgG. E ambos adjuvantes promoveram a produção de IgG1 e IgG2a variando de acordo com a via de imunização utilizada. Por ELISpot foram analisadas as citocinas IFN-γ e IL-4 e os resultados demonstraram uma resposta direcionada para o perfil Th1 e Th2. / Adjuvants are molecules, compounds or macromolecular complexes that increase the power and longevity of the specific immune response to antigens.Their addition in the vaccine preparation increases, sustains and directs immunogenicity of antigens, effectively modulating appropriate immune responses, reducing the amount of antigen or number of immunizations required, and improving the efficacy of vaccines in infants, the elderly, or immunocompromised patients.The aim of this study was to evaluate the immunogenicity of antigenic from OMVs of N. meningitidis B complexed with two different adjuvants: DODAB-BF and aluminium hydroxide (HA) comparing the evaluation of subcutaneous and intranasal route of immunization for the first time using the prime-boost system in outbred neonatal mice. As universal methods of antibody detection were used: Immunoblot, DOT-ELISA, ELISA and ELISpot aiming for the humoral and cellular immune response and of male and female mice. By Immunoblot analysis the specificity of antibodies with the homologous strain N. meningitidis B:4:P1.19.15. By DOT-ELISA was verified the cross-reactivity with DODAB-BF to different sorogroups (B, C, W and Y) that was not observed with HA. By ELISA the antibodies titers were quantified and compared in the sera of mice immunized with DODAB-BF+OMVs and HA+OMVs for IgG, IgG1 and IgG2a. The immunization routes used exhibited IgG titers, and both adjuvants promoted the production of IgG1 and IgG2a varying according to the route of immunization used. By ELISpot was analyze IFN-γ- and IL-4 and the results showed the response directly to Th1 and Th2 profile.