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Orientador: Fausto Viterbo / Banca: Fausto Viterbo de Oliveira Neto / Banca: Antonio de Castro Rodrigues / Banca: Jesus Carlos Andreo / Banca: Antonio João Tedesco-Marchese / Banca: Gerson Chadi / Resumo: As lesões nervosas periféricas sempre ocasionam comprometimento da sensibilidade ou da motricidade, de partes ou segmentos do organismo. Algumas lesões leves podem evoluir para a cura completa em poucas semanas, se a integridade morfológica do axônio estiver preservada. Entretanto, as lesões com perda tecidual, se não foram tratadas adequadamente, podem evoluir com prejuízos na função muscular ou na sensibilidade cutânea. Assim sendo, este trabalho teve por objetivo estudar a possível regeneração axonal do nervo ciático de rato albino (Rattus norvegicus albinus) lesado experimentalmente, através do uso de enxerto venoso ao avesso e de enxerto venoso preenchido com plasma rico em plaquetas, sob o ponto de vista histomorfológico. Os animais foram divididos em quatro grupos experimentais (G2, G3, G4 e G5) contendo 15 animais em cada grupo e um grupo com dez animais serviu como controle (G1). Em todos os grupos o nervo ciático direito foi utilizado para estudo experimental. Os Grupos G 2, G 3, G 4 e G 5 receberam enxerto venoso da veia jugular externa, do lado esquerdo, do mesmo animal. Em todas as técnicas utilizadas, os valores médios de morfometria foram maiores no enxerto do que no coto distal. As técnicas com veias preenchidas apresentaram melhores médias aritméticas quando comparadas com as veias não preenchidas. / Abstract: Peripheral nerve lesions ever produce sensorial or motor consequences. Some lesions could have good evolution if the neural morphology integrity is preserved. Nevertheless, peripheral nerve gaps could have dramatic evolution. In the present study we tested neural regeneration of the sciatic nerve in albino laboratory rats submitted to experimental neural lesion and treatment with entubulization using venous jugular autologus grafts. Four experimental groups were used, with the vein graft replacing a sciatic gap. In two of them the veins were inverted. In a normal and inverted vein group, the veins were filled with blood plasma enriched by a pool of platelets. A "sham" group was used as control. The nerve fibers counting showed higher average in the graft stump compared to the vein graft. Both blood plasma enriched with platelets filled groups presented better results than non filled groups. / Doutor

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T06:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-09T01:12:03Z : No. of bitstreams: 1 153199.pdf: 10779797 bytes, checksum: 31292e35fb10fe5c2d29200e72075892 (MD5) / Pesquisa etnográfica sobre o polimórfico conjunto de sintomas que caracteriza o sofrimento dos nervos, entre mulheres nativas da localidade de Campeche, ao sul da Ilha de Santa Catarina. A partir de seus relatos propôs-se um tripé interpretativo do mesmo: a) nervos , naquela comunidade é um problema das mulheres; b) constitui uma forma de linguagem social; c) pode representar uma forma dissimulada de exercer violência sobre os circunstantes. Aborda ainda a Biomedicina e a vantagem da abordagem antropológica para doenças e sintomas culturalmente interpretados.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-11-14T03:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348743.pdf: 4711943 bytes, checksum: 2e1d0c81e25c50e4748910ac8f45346a (MD5) Previous issue date: 2017 / A eletrofiação é uma promissora técnica à geração de sistemas de liberação de fármacos e engenharia de tecidos. Este trabalho descreve o desenvolvimento de matrizes nanoestruturadas permissivas à diferenciação de células neuronais. Inicialmente, o efeito dos parâmetros processuais da eletrofiação e da configuração do coletor na arquitetura das fibras foi estudado. O processo foi otimizado para obtenção de nanofibras randomizadas e alinhadas. Nanofibras de policaprolactona (PCL) foram produzidas usando três configurações de coletor: um cilindro metálico rotatório, fios de cobre e um mandril rotatório. O coletor cilíndrico gerou uma nanomatriz com estrutura típica tridimensional, na qual a velocidade de rotação mecanicamente promoveu a redução do diâmetro e alinhamento das fibras. Um padrão de fibras randomizadas com um diâmetro médio de 1142 ± 391 nm foi observado a 0 rpm, enquanto nanofibras alinhadas com um diâmetro médio de 663 ± 334 nm foram produzidas a 2000 rpm. Os cabos de cobre originaram um novo padrão de matriz, cujo grau de orientação das fibras relacionou-se à distribuição do campo elétrico no coletor. Por sua vez, o coletor de mandril deu origem a uma matriz tubular constituída de fibras com diâmetro médio de 606 ± 329 nm. Em seguida, avaliou-se a influência do efeito do polietilenoglicol (PEG) em nanofibras compostas por blendas de PEG e PCL. Três tipos de PEG consoante à massa molecular (400, 1500, e 35000 Da) e três concentrações (1, 5, e 10% em relação à PCL) foram estudados. As matrizes foram caracterizadas quanto a sua arquitetura por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e propriedades mecânicas por teste de tração uniaxial, utilizando um analisador de textura. Em presença de PEG houve uma redução do diâmetro e da resistência mecânica das fibras. Estudos de cultura celular demonstraram a ausência de citotoxicidade destes biomateriais. A adequação do uso do PEG para prolongar a liberação de NGF foi demonstrada. A bioatividade do NFG incorporado nas matrizes foi avaliada através da diferenciação de células PC12. As matrizes constituídas de nanofibras alinhadas promoveram o alinhamento de neuritos e a presença de PEG influenciou positivamente o perfil de liberação do NGF e a degradabilidade das matrizes. Por fim, foi produzido um sistema de liberação prolongado de NGF constituído por uma matriz tubular de nanofibras randomizadas na camada externa e alinhadas no lúmen. Os resultados obtidos indicam que as matrizes desenvolvidas, constituídas de nanofibras de PCL e PEG, apresentam potencial de aplicação como sistema de liberação de NGF e no estudo da regeneração nervosa periférica. / Abstract : Electrospinning is a promising technique to generate scaffolds for delivery systems and nerve tissue engineering. This study describes the development of a nanostructured matrix permissive to neural cell differentiation. Firstly, the effect of setting up parameters and collector design on the alignment and architecture of electrospinning fibers was studied. The process was optimized to obtain randomized and aligned nanofibers. Polycaprolactone (PCL) fibers were produced using three collectors: metallic rotating drum, copper wires, and a rotating mandrel. The drum collector produced a typical tridimensional structure whereby the rotational speed mechanically stretches fibers and affects their diameter and alignment. Randomly oriented fibers with an average diameter of 1142 ± 391 nm were obtained at 0 rpm, while aligned fibers with an average diameter of 663 ± 334 nm were produced at 2000 rpm. Static copper wires produced a novel fiber pattern in which the degree of orientation of the fibers was related to the electrical field distribution along the collector. Mandrel collector produced a tubular mat composed by nanofibers with an average diameter of 606 ± 329 nm. In a second series of experiments, the influence of polyethyleneglycol (PEG) on nanofibers composed of PCL and PEG blends was evaluated. Three types of PEG with t molecular weights (400, 1500, and 35000 Da) and concentrations (1, 5, and 10% ratio to PCL) were studied. Mats were characterized in terms of architecture by Scanning Electron Microscopy (SEM) and mechanical properties by uniaxial tensile tests using a texture analyser. The presence of PEG decreased the diameter and mechanical resistance of fibers. Cell culture studies have demonstrated the absence of cytotoxicity of these biomaterials. The suitability of using polyethylene glycol (PEG) to prolong the delivery of NGF incorporated into PCL electrospinning nanofibers was demonstrated. The effect of released nerve growth factor (NGF) from the mats was evaluated by neuronal differentiation using PC12 cells. Electrospun scaffolds composed by aligned nanofibers promoted alignment and neurite outgrowth of PC12 cells along the axis of the aligned nanofibers. PEG influenced positively the release profile of NGF and mats degradability. Finally, a sustained NGF deliver system composed by a tubular matrix of randomized nanofiber in the outer layer and aligned nanofibers in the lumen was produced. Therefore, the results obtained indicate that the developed matrix, composed by PCL and PEG nanofibers, present potential application as a NGF delivery system and in the study of the peripheral nervous regeneration.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-14Bitstream added on 2014-06-13T18:39:01Z : No. of bitstreams: 1 maciel_fo_me_botfm.pdf: 1183780 bytes, checksum: 6f62b4cfe4e45ac05c3c37008f29d9a5 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / No tratamento de lesões de nervos periféricos por neurorrafia, ainda não se obtém total recuperação motora ou sensitiva. Por esse motivo, muitas pesquisas buscam propor técnicas para melhorar a funcionalidade de um músculo reinervado. Neste contexto, a neurorrafia látero-terminal (NLT) sem lesão no nervo doador trouxe grande contribuição, pois, a partir desta descoberta, qualquer nervo pode ser utilizado como nervo doador sem prejuízos para este ou para as estruturas por ele inervadas. Este achado despertou grande interesse na comunidade científica, demonstrando resultados bem-sucedidos em tratamentos como paralisia facial, avulsão de plexo braquial, e outras situações de lesões de nervo periférico. Porém, após uma neurorrafia, o tempo necessário para a regeneração axonial determinará atrofia das fibras musculares. A estimulação elétrica preveniria este fator negativo. Esta pesquisa teve como objetivo estudar a eficiência da estimulação elétrica na recuperação do músculo tibial cranial (MTC) e nervo fibular após secção e neurorrafia látero-terminal do coto distal do nervo fibular à face lateral do nervo tibial. Foram utilizados 60 ratos da raça Wistar, machos, com massa média de, 261,87 g (+/- 28,39)g, fornecidos pelo Biotério Central da Universidade Estadual Paulista (UNESP) – Campus de Botucatu. Os animais foram divididos, aleatoriamente, em quatro grupos experimentais. Grupo Controle, controle de normalidade; Grupo Desnervado, controle de desnervação; Grupo NLT, neurorrafia látero-terminal do coto distal do nervo fibular à face lateral do nervo tibial; e Grupo NLT+EE, neurorrafia látero-terminal do coto distal do nervo fibular à face lateral do nervo tibial e tratamento com eletroestimulação. Os resultados da análise da marcha e da análise morfométrica demonstraram superioridade do... / Treatment of peripheral nerve injuries by neurorrhaphy, still not achieved full motor or sensorial recovery. For this reason many studies seek to propose techniques to improve the functionality of a reinnervated muscle. In this context the end-to-side neurorrhaphy (ESN) without donor nerve injury brought great contribution for peripheral nerve injuries. Using ESN any nerve can be used as a donor nerve without harming themselves or the structures innervated by them. This finding aroused great interest in the scientific community, demonstrating successful results in treatments such as facial palsy, brachial plexus avulsion, and other situations of peripheral nerve injuries. But after a neurorrhaphy the time needed for nerve regeneration can determine muscle fibers atrophy and electrical stimulation could prevent this negative factor. This research aimes to study the efficiency of electrical stimulation in cranial tibial muscle and peroneal nerve recovery after section and end-to-side neurorrhaphy of the distal stump of the peroneal nerve to the lateral surface of the tibial nerve. Sixty Wistar rats, male, weighing an average of 261.87 g (+ / - 28.39) g, provided by Central Vivarium of the Universidade Estadual Paulista – UNESP (Paulista State University) – Botucatu Campus, were used. The animals were divided randomly into four experimental groups: Control Group, normal group; Denervated Group; ; ESN Group, end-to-side neurorrhaphy of the distal stump of the peroneal nerve to the lateral surface of the tibial nerve; ESN+ES Group, end-to-side neurorrhaphy of the distal stump of the peroneal nerve to the lateral surface of the tibial nerve and treatment with electrical stimulation. The results of walking trak analisys (WTA) and morphometric analysis demonstrated superiority of ESN+ES group over ESN group. Based on the used... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Fausto Viterbo de Oliveira Neto / Banca: Amilton Barreira Antunes / Banca: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Resumo: No tratamento de lesões de nervos periféricos por neurorrafia, ainda não se obtém total recuperação motora ou sensitiva. Por esse motivo, muitas pesquisas buscam propor técnicas para melhorar a funcionalidade de um músculo reinervado. Neste contexto, a neurorrafia látero-terminal (NLT) sem lesão no nervo doador trouxe grande contribuição, pois, a partir desta descoberta, qualquer nervo pode ser utilizado como nervo doador sem prejuízos para este ou para as estruturas por ele inervadas. Este achado despertou grande interesse na comunidade científica, demonstrando resultados bem-sucedidos em tratamentos como paralisia facial, avulsão de plexo braquial, e outras situações de lesões de nervo periférico. Porém, após uma neurorrafia, o tempo necessário para a regeneração axonial determinará atrofia das fibras musculares. A estimulação elétrica preveniria este fator negativo. Esta pesquisa teve como objetivo estudar a eficiência da estimulação elétrica na recuperação do músculo tibial cranial (MTC) e nervo fibular após secção e neurorrafia látero-terminal do coto distal do nervo fibular à face lateral do nervo tibial. Foram utilizados 60 ratos da raça Wistar, machos, com massa média de, 261,87 g (+/- 28,39)g, fornecidos pelo Biotério Central da Universidade Estadual Paulista (UNESP) - Campus de Botucatu. Os animais foram divididos, aleatoriamente, em quatro grupos experimentais. Grupo Controle, controle de normalidade; Grupo Desnervado, controle de desnervação; Grupo NLT, neurorrafia látero-terminal do coto distal do nervo fibular à face lateral do nervo tibial; e Grupo NLT+EE, neurorrafia látero-terminal do coto distal do nervo fibular à face lateral do nervo tibial e tratamento com eletroestimulação. Os resultados da análise da marcha e da análise morfométrica demonstraram superioridade do... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Treatment of peripheral nerve injuries by neurorrhaphy, still not achieved full motor or sensorial recovery. For this reason many studies seek to propose techniques to improve the functionality of a reinnervated muscle. In this context the end-to-side neurorrhaphy (ESN) without donor nerve injury brought great contribution for peripheral nerve injuries. Using ESN any nerve can be used as a donor nerve without harming themselves or the structures innervated by them. This finding aroused great interest in the scientific community, demonstrating successful results in treatments such as facial palsy, brachial plexus avulsion, and other situations of peripheral nerve injuries. But after a neurorrhaphy the time needed for nerve regeneration can determine muscle fibers atrophy and electrical stimulation could prevent this negative factor. This research aimes to study the efficiency of electrical stimulation in cranial tibial muscle and peroneal nerve recovery after section and end-to-side neurorrhaphy of the distal stump of the peroneal nerve to the lateral surface of the tibial nerve. Sixty Wistar rats, male, weighing an average of 261.87 g (+ / - 28.39) g, provided by Central Vivarium of the Universidade Estadual Paulista - UNESP (Paulista State University) - Botucatu Campus, were used. The animals were divided randomly into four experimental groups: Control Group, normal group; Denervated Group; ; ESN Group, end-to-side neurorrhaphy of the distal stump of the peroneal nerve to the lateral surface of the tibial nerve; ESN+ES Group, end-to-side neurorrhaphy of the distal stump of the peroneal nerve to the lateral surface of the tibial nerve and treatment with electrical stimulation. The results of walking trak analisys (WTA) and morphometric analysis demonstrated superiority of ESN+ES group over ESN group. Based on the used... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador : Prof. Dr. Maria A. B. F. Vital / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 30/09/2016 / Inclui referências : f. 44-47 / Área de concentração / Resumo: A Doença de Parkinson (DP) é a segunda doença neurodegenerativa mais frequente afetando cerca de 1% da população com mais de 60 anos. É caracterizada pela perda lenta e progressiva dos neurônios dopaminérgicos na substância negra pars compacta (SNpc), com redução dos terminais dopaminérgicos no estriado promovendo o surgimento dos sintomas motores. A neuroinflamação é um fator conhecido por favorecer a morte neuronal dopaminérgica, sendo observada uma intensa reativação microglial e astroglial, com aumento da produção de citocinas pró-inflamatórias e ativação da via do NF-?B na SNpc de pacientes em estágio avançado da DP. O receptor ativado por proliferadores de peroxissomas tipo gama (PPAR-?) está envolvido na homeostase da glicose e no metabolismo lipídico, sendo que a sua ativação também promove efeitos anti-inflamatórios. A pioglitazona, um agonista desse receptor é uma droga utilizada no tratamento do diabetes tipo II, capaz de exercer efeitos neuroprotetores, protegendo contra a morte neuronal e reduzindo o processo inflamatório gerado na SN. O presente estudo investigou os efeitos do tratamento com pioglitazona em ratos submetidos à infusão intranigral da 6-hidroxidopamina (6-OHDA). Os ratos foram submetidos à cirurgia estereotáxica, sendo iniciado o tratamento com a pioglitazona (pio, 30 mg/kg) ou veículo (veh) por gavagem aproximadamente 24 h após a cirurgia e realizado durante 5 dias. Os ratos, antes da primeira dose foram submetidos ao teste do campo aberto e foram reexpostos ao teste nos dias 7, 14 e 21 após a infusão da toxina. A 6-OHDA causou hipolocomoção nos animais 24 h após a infusão que foi mantida no grupo 6-OHDA+veh após 7 dias. Por outro lado, o grupo 6-OHDA+pio mostrou uma recuperação da atividade motora avaliada no 7º dia após a cirurgia. A 6-OHDA também causou redução da imunorreatividade à tirosina hidroxilas (TH-ir) na SNpc (37%), enquanto o grupo lesado tratado com a pioglitazona não mostrou alteração. Na SNpc dos ratos do grupo 6-OHDA+veh foi observado aumento na ativação (50%) e proliferação (79%) das células microgliais, com aumento da expressão e da ativação do NF-?B (114%). Entretanto, no grupo 6-OHDA+pio houve um leve aumento na proliferação microglial (29%), com redução da ativação microglial e diminuição da expressão e ativação do NF-?B. Com isso, esses resultados indicam que a pioglitazona exerceu um efeito neuroprotetore no modelo da 6-OHDA de DP. Palavras-chave: Doença de Parkinson, PPAR-?, pioglitazona, neuroinflamação, NF-?B / Abstract: Parkinson's disease (PD) is the second neurodegenerative disease most frequent affecting 1% of population over 60 years. It is characterized by slow and progressive loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra pars compacta (SNpc) with reduction of dopaminergic terminals in the striatum and promotes the onset of motor symptoms. The neuroinflammation is a known factor for favor the dopaminergic neuronal death, being observed an intense microglial and astroglial reactivation with increase of the proinflammatory cytokines production and NF-?B pathway activation in SNpc of patients in advanced stages of PD. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR-?) is involved in glucose homeostasis and lipid metabolism that also promotes anti-inflammatory effects when it is activated. Pioglitazone, an agonist of this receptor is a drug used in the treatment of type II diabetes able to exert neuroprotective effects, protecting against the neuronal death and reducing the inflammatory process generated in the SN in PD. This study investigated the effects of pioglitazone therapy in rats submitted to intranigral infusion of 6-OHDA. Rats were submitted to stereotaxic surgery with infusion of 6-OHDA (6 ?g in 1 ?l LCR) directly in the SNpc, being started the pioglitazone treatment (pio, 30 mg/kg) or vehicle (veh) by gavage, approximately 24 hr after the surgery and performed for 5 days. The rats before of first treatment were submitted to the open field test 24 hr after the surgery and they were re-exposed to the test on days 7, 14 and 21 after the toxin infusion. The 6-OHDA caused a hypolocomotion in the rats 24 hr after the surgery that was maintained in the 6-OHDA+veh group after 7 days. On the other hand, 6-OHDA+pio group showed a recovery of motor activity on 7 days after surgery. The 6-OHDA also caused a reduction of immunoreactivity to tyrosine hydroxylase (TH-ir) in the SNpc (37%), while the injured group treated with pioglitazone did not showed difference. In the SNpc of rats pertaining to the 6-OHDA+veh group there was an increase in the microglial activation (50%) and proliferation (79%) with increase of NF-?B expression and activation (114%). However, in the 6-OHDA+pio group there was a slight increase in the microglial proliferation (29%) with reduction of microglial activation and decrease of NF-?B activation and expression. Thus, these results indicate that pioglitazone exerts a neuroprotective effect in the 6-OHDA model of PD. Key-words: Parkinson's disease, PPAR-?, pioglitazone, neuroinflammation, NF-?B

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T00:40:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T20:00:16Z : No. of bitstreams: 1 243741.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / O objetivo do presente estudo foi avaliar e caracterizar as respostas hipernociceptivas em ratos submetidos à ligação dos nervos espinhais L5 e L6 (LNE L5L6), bem como analisar a participação dos receptores B1 e B2 para as cininas neste modelo de dor neuropática. A LNE L5L6 induziu hipernocicepção ao frio, ao calor e mecânica. A hipernocicepção ao frio e mecânica foram reduzidas pelo tratamento sistêmico com morfina, indometacina e anticonvulsivantes, enquanto que a hipernocicepção ao calor foi totalmente resistente aos anticonvulsivantes. Nos animais neuropáticos, a injeção intraplantar do agonista de receptores B1 (DABK) induziu respostas nociceptivas, as quais são mediadas pela ativação de receptores B1, enquanto que a nocicepção induzida pela injeção intraplantar de agonista de receptores B2 (Bradicinina, BK) foi potencializada nesses animais, e envolveu a ativação de receptores B2 e B1. Este estudo também demonstrou que nos animais neuropáticos, a expressão dos receptores B1 e B2 estava aumentada na pele da pata e nos segmentos L4-L6 dos nervos espinhais, 12 dias após a indução da neuropatia. Neste mesmo período, em gânglios da raiz dorsal (GRD) L4 e L5L6 de animais falso-operados e L4 de animais neuropáticos, os receptores B1, B2 e TRPV1 foram expressos em corpos celulares de fibras C não-peptidérgicas positivas para isolectina B4 (IB4). Nesses mesmos tecidos, os receptores B1 e B2 também foram expressos em corpos celulares de fibras A. Entretanto, nos GRDs lesados L5L6, ocorreu uma redução da imunorreatividade para IB4 e conseqüente redução da expressão de receptores B1, B2 e TRPV1. Contudo, os receptores B1 e B2 foram expressos em corpos celulares de fibras A. Com base nos experimentos envolvendo a mobilização de cálcio intracelular induzida pela BK, podemos sugerir que a potencialização dessa resposta, em neurônios insensíveis a capsaicina, nos GRDs L5L6 de animais neuropáticos é dependente da ativação de receptores B2 e da formação de prostaglandinas, mas não envolve a ativação de receptores B1, TRPV1 e TRPA1. A hipernocicepção térmica (tanto ao frio quanto ao calor) e mecânica foram reduzidas pelo tratamento com antagonistas de receptores B1 (DALBK) e B2 (HOE 140). Conclui-se portanto que receptores B1 e B2 para cininas, presentes na pata, nos nervos espinhais e nos GRDs intactos e lesados parecem ser importantes na mediação das respostas hipernociceptivas induzidas pela LNE L5L6, podendo representar alvos terapêuticos valiosos para o tratamento da dor neuropática.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-03-08T19:25:00Z No. of bitstreams: 1 2017_VítorYamashiroRochaSoares.pdf: 15000041 bytes, checksum: edeff738495916aac284e7f7815f27cf (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-04T22:23:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_VítorYamashiroRochaSoares.pdf: 15000041 bytes, checksum: edeff738495916aac284e7f7815f27cf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T22:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_VítorYamashiroRochaSoares.pdf: 15000041 bytes, checksum: edeff738495916aac284e7f7815f27cf (MD5) / Introdução: Apesar do schwannoma vestibular (SV) ser um tumor do nervo vestibular, a perda auditiva (PA) é o sintoma mais comum, presente em 95% dos pacientes. Entretanto, a fisiopatologia dessa PA ainda é desconhecida. A compressão do nervo coclear pelo tumor não é capaz de elucidar completamente sua fisiopatologia e levanta a hipótese que a PA provocada pelo SV pode estar relacionada às substâncias secretadas pelo tumor presentes no líquido que banha a cóclea. Objetivo: Este trabalho identifica se as vesículas extracelulares (VE) derivadas do SV são mediadores no dano de células cocleares. Métodos: VEs foram isoladas de cultura de linhagem celular (células HEI-193) e de cultura de células primárias de SV de pacientes com boa audição (BA) e de pacientes com PA. As VEs foram caracterizadas usando o Nanosight e microscopia eletrônica de transmissão. O conteúdo de RNA das VEs foi extraído. O efeito das VEs sobre cultura de neurônios do gânglio espiral e sobre cultura ex-vivo de cócleas de camundongos foi estudado usando um sistema de cultura duplo e pela marcação das VEs com PKH-67. Mudanças provocadas pelas VEs nas células cocleares foram quantificadas utilizando imunohistoquímica e microscopia confocal. Transfecção da linhagem celular de SV com plasmídeo contendo GFP (proteína fluorescente verde) foi confirmada com reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR). Resultados: Células tumorais humanas de pacientes com PA produzem VEs que podem causar danos em neurônios do gânglio espiral. Em contraste, VEs de células tumorais associados com BA não foram capazes de provocar danos as células cocleares. Conclusão: Este é o primeiro relato de VEs derivadas de SV. Essas VEs quando originadas de SV associados a PA eram capazes de causar danos seletivos nas células cocleares, identificando assim um novo e potencial mecanismo de perda auditiva neurossensorial em pacientes com SV. / Introduction: Although vestibular schwannoma (VS) is a tumor of the vestibular nerve, hearing loss (HL) is the most frequent symptom, presenting in 95% of the patients. However, the pathophysiology of HL is not well understood. The compression of coclear nerve by the tumor is not able to explain the cause of hearing loss perfectly and raise the hypothesis that HL may be related to tumor secretome that reach the cochlea. Objective: This research explores the role of VS-secreted extracellular vesicles (EVs) as a major contributing factor in cochlear cells damage. Methods: EVs were isolated from VS cell line HEI-193 and primary cultured human VS cells from patients with good hearing or poor hearing. The EVs were characterized using a Nanosight device and transmission electron microscopy and by extracting their RNA content. The EVs’ effects on cultured murine spiral ganglion cells and organotypic cochlear cultures were studied using a transwell dual-culture system and by direct labeling of EVs with PKH-67 dye. EV-induced changes in cochlear cells were quantified using confocal immunohistochemistry. Transfection of VS cells with a green fluorescent protein–containing plasmid was confirmed with reverse transcription PCR. Results: Human VS cells, from patients with poor hearing, produced EVs that could damage spiral ganglion neurons. In contrast, EVs derived from VS cells from patients with good hearing did not damage the cultured cochlear cells. Conclusion: This is the first report on EVs derived from VSs and on the capacity of EVs from VSs from patients with hearing loss to selectively damage cochlear cells, thereby identifying a potential novel mechanism of VS-associated sensorineural hearing loss.

Orientador: Francesco Langone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:39:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morais_AnibaldeAraujo_M.pdf: 6678513 bytes, checksum: de99d3b7d31fbe9cd0b670e0bbcf0e14 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O reparo de nervos periféricos usando próteses tubulares é uma técnica alternativa que pode produzir resultados similares ou melhores que outras técnicas cirúrgicas utilizadas. Entretanto, sua eficiência depende essencialmente da biocompatibilidade e das propriedades estruturais do material do tubo. Nesse trabalho foi avaliado a degradação in vivo de tubos (lOmm) de poli(ácido lático) PLLA adicionado 10% de plastificante tri-etil-citrato. Dezesseis ratos machos da linhagem Wistar, foram submetidos a tubulização e divididos em quatro grupos experimentais (n=4) segundo tempos de sobrevida de 30, 90, 180 e 430 dias após a intervenção cirúrgica. Todas as cirurgias foram precedidas de anestesia profunda com pentobarbital sódico (60mg/kg). O nervo ciático esquerdo foi exposto e seccionado na porção média da coxa. Os cotos proximal e distal foram introduzidos no tubo, deixando-se uma distância de 5mm entre eles, sendo ancorados à parede deste através de um ponto de sutura epineural. Após os tempos de sobrevida de 30, 90, 180 e 430 dias, os animais foram novamente anestesiados e o nervos tubulizado e contralateral foram fixados in situ, por um período de 20 minutos, com uma solução de glutaraldeído 5% (tampão fosfato 0,1M; pH 7,4), e removidos. A seguir foram deixados imersos na mesma solução fixadora por 24 horas, à temperatura de 4°C. Após esse período, os nervos processados foram então pós-fixados por um período de 2 horas em uma solução de tetróxido de ósmio 2% (tampão fosfato 0,1M; pH 7,4), lavados e mantidos em acetato de uranila 2% (tampão fosfato 0,1 M; pH 7,4) por um período de 12 horas. Ao final os espécimes foram lavados, desidratados em gradiente de álcool etílico (30, 50, 70, 90 e 100%) e posteriormente incluídos em resina araldite. A partir dos fragmentos contendo a porção central do nervo regenerado e da porção anatomicamente correspondente dos nervos normais, foram obtidos cortes transversais semi-finos (1,0mm) que, após coloração com azul de toluidina (0,5%, tampão fosfato 0,1M; pH 7,4), foram analisados à microscopia de luz. Após esta análise, as regiões de interesse de cada espécime foram selecionadas para a obtenção de cortes ultrafinos (500 Â). Estes foram recolhidos em telas de cobre (200 mesh), contrastados com citrato de chumbo (1%) e acetato de uranila (2%), observados e documentados ao microscópio eletrônico. Nossos resultados mostraram que 30 dias após a tubulização a regeneração do nervo ciático havia ocorrido. Na estrutura destes podiam se observar axônios mielínicos e amielínicos organizados em minifascículos. No espaço endoneural estavam presentes fibras colágenas bem como células semelhantes a fibroblastos e macrófagos. Externamente, havia se organizado uma bainha de tecido conjuntivo com uma organização típica de epineuro. Após os períodos de 90, 180 e 430 dias esses elementos do nervo foram amadurecendo, assumindo gradualmente uma ultra-estrutura similar à dos nervos normais. Após 30 dias, o implante apresentava sinais de degradação, mantendo, contudo sua estrutura tubular. A análise microscópica e ultra-estutural após 90, 180 e 430 dias mostrou que esta foi sendo gradativamente modificada pela invasão de células. A parede dos tubos foi sendo alterada pela formação de sulcos, que evoluíram para verdadeiros túneis, provocando assim a microfragmentação desta. Em nenhum dos tempos analisados foi constatada a ocorrência de processos inflamatórios intensos ou necrose nos tecidos circundantes que acusassem rejeição do material. Considerando que os tubos empregados permitiram o início e a evolução regular da regeneração do nervo à medida que estes foram sendo absorvidos, nossos achados mostram que o PLLA adicionado de 10% de tri-etil-citrato possui propriedades adequadas para a construção próteses tubulares destinados ao reparo cirúrgico de nervos periféricos / Abstract: The peripheral nerves repair, by using tubular prosthesis, is an alternative technique which can produce similar results to or better than the other surgical techniques in use. Meanwhile, its efficiency depends essentialIy on the biocompatibility and the structural proprieties of the tube material. In the present work, the degradation of poly (L-lactic acid) PPLA tubes (10 mm) with the addition of 10% triethyl citrate plasticizer in vivo, has been appraised. Sixteen male mice of the Wistar lineage were submitted to tubulization and were divided into four experimental groups (n=4) according to overliving times of 30, 90, 180 and 430 days after the surgical intervention. All surgeries were preceded of deep anesthesia with sodium pentobarbital (60 mg/Kg). The left sciatic nerve was exposed and transected at the midthigh. The proximal and distal stumps were introduced into the tube, with 5mm distance left between them, and were sutured to its walI through an epineural suture stitch. After the overliving times of 30, 90, 180 and 430 days, the animals were anesthetized again and the tubulized and countralateral nerves were fixed in situ during 20 minutes with a 5% glutaraldehyde buffer solution and removed. Following, they were left immerged in the same solution for 24 hours, at 4°C temperature. After that period, the nerves were processed and then post fixed during 2 hours in a solution of osmium tetroxide 2% (phosphate buffer 0,1M; pH 7,4), washed and kept in uranyl acetate 2% (phosphate buffer 0,1 M; pH 7,4) for a period of 12 hours. Finally, the specimens were washed and dehydrated in ethyl alcohol gradient (30, 50, 70, 90 and 100%) and afterwards were included in araldite resin. From the fragments containing the central portion of the regenerated nerve and the portion of the normal nerves anatomicalIy corresponding to it, transverse semithin sections were obtained (1,0 mm), which after being stained with toluidine blue (0.5%, phosphate buffer 0,1M; pH 7.4), were analyzed at light microscopy. After that analysis, those regions of each specimen, for which there was interest, were selected for obtaining ultrathin sections (500 Â). They were colIected in copper web (200 mesh), and contrasted with lead citrate (1 %) and uranyl acetate (2%); they were observed and documented at the electronic microscope. Our results showed that 30 days after the tubulization, the sciatic nerves regeneration had occurred. In their structure, one could see axons myelin and anmyelin organized in mini-fascicles. The colIagen fibers were present in the endoneural space, as well as fibers similar to fibroblasts and macrophages. ExtemalIy, there had been organized a connective tissue sheath with an epineurium typical organization. After those periods o 90, 180 and 430 days, those nerve elements were ripening and assuming gradualIy an ultra-structure similar to the normal nerves. Thirty days after, the implantation showed degradation signals but it stilI maintained its tubular structure. The ultra-structural and microscopic analysis after 90, 180 and 430 days showed that the latter was under a gradual modification process by celIs invasion. The tube walIs were being changed by the formation of grooves, which developed into real tunnels, causing consequently its microfragmentation. In neither of the times which were analyzed, was it possible to verify either the occurrence of intense inflammatory processes or necrosis on the surrounding tissues which could reveal the material rejection. On considering that the tubes used alIowed the beginning and the regular evolution of the nerve regeneration while they were absorbed, our findings show that the PPLA with 10% of triethyl citrate addition holds the adequate properties for building tubular prostheses for the application of peripheral nerve surgical repair / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular