Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-02-24T17:05:52Z No. of bitstreams: 1 2016_ThayanaFelipeLelisdosSantos.pdf: 2668252 bytes, checksum: f1e166c2adf8dcd7fcf7a86f9200ba33 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-03-28T18:59:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_ThayanaFelipeLelisdosSantos.pdf: 2668252 bytes, checksum: f1e166c2adf8dcd7fcf7a86f9200ba33 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T18:59:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_ThayanaFelipeLelisdosSantos.pdf: 2668252 bytes, checksum: f1e166c2adf8dcd7fcf7a86f9200ba33 (MD5) / O aumento da demanda energética vem provocando ao longo do tempo a ampliação da utilização de combustíveis de origem fóssil e, consequentemente, o incremento dos problemas de cunho ambiental. Neste sentido, nitratos orgânicos constituem uma alternativa interessante do ponto de vista econômico, social e ambiental. Tais insumos foram planejados a partir de fontes de origem renovável (biomassa), não comprometendo, portanto, o selo de combustível verde do biodiesel. São obtidos em geral, de maneira eficiente com baixos custos agregados, visando à aplicação como aditivos multifuncionais para biodieselcumprindo, inclusive as exigências físico-químicas estabelecidas pela Agência Nacional de Petróleo (ANP). No geral, os nitrocompostos mostraram-se excelentes melhoradores do índice de cetano, de modo que 60% dos produtos testados revelaram significativa melhora. Dispondo-se dos ensaios microbiológicos, frente a fungos e bactérias, alguns dos produtos alvo deste trabalho revelaram potencial fungicida, exibindo halos de inibição que variaram de 10 a 25 mm. / The increasing world energy demand has led to a massive use of fossil fuels and, consequently, bringing environmental problems and high energy prices. In this sense, organic nitrates products constitute an interesting economic, social and environmental alternative to this fuels. These inputs were planned from renewable sources (biomass), thus not compromising the biodiesel green fuel seal. They are generally obtained efficiently with low aggregate costs, aiming at the application as multifunctional additives for biodiesel fulfilling, including the physico-chemical requirements established by the National Petroleum Agency (ANP). In general, the nitrocomposites proved to be excellent cetane index improvers, so that 60% of the tested products showed significant improvement. In microbiological assays, against fungi and bacteria, some of the target products of this work revealed fungicidal potential, exhibiting inhibition halos on plate ranging from 10 to 25 mm.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1253693 bytes, checksum: 473208aa372beaf58b2dc01deecdc9be (MD5) Previous issue date: 2010-03-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Organic nitrates are nitric oxide (NO) donors used in the treatment of cardiovascular diseases mimicking the role of endogenous NO. This study evaluated organic nitrates newly synthesized from glycerin, which cardiovascular actions had not yet been investigated. Therefore, the cardiovascular effects produced by organic nitrates derived from glycerin: 2-nitrate-1,3-dimethoxypropan (NDMP), 2-nitrate-1,3-diethoxypropan (NDEP), 2-nitrate-1 ,3-dipropoxypropan (NDPP) and 2-nitrate-1,3-dibutoxypropan (NDBP) in rats were investigated using in vitro and in vivo approaches. For in vitro studies, animals were euthanized and the superior mesenteric artery was isolated. Artery rings were kept in tanks with Tyrode at 37 ° C aerated with carbogen, then were attached to a force transducer (Fort 10, WPI, Sarasota, USA) coupled to a data acquisition system data (Miobath-4, WPI, Sarasota, USA) under a tension of 0.75 g for 1 hour. After this period, preparations were pre-contracted with phenylephrine (FEN) 10 μM or KCl 80 mM and then increasing concentrations of organic nitrates were cumulatively added. The nitrate with the most promising effects was selected for further studies and concentration-response curves of the compound selected in the presence of HDX, a hijacker of NO; ODQ, inhibitor of soluble guanylyl cyclase, KCl 20 mM, a modulator of potassium efflux, and blockers for calcium-sensitive potassium channel (TEA, 1 mM), blockers for ATP-sensitive potassium channel (GLIB, 1 M) and blockers for voltage-operated potassium channel (4-AP, 1 mM) were obtained. All compounds showed vasorelaxant activity endothelium-independent in superior mesenteric artery rings, being the NDBP was the most potent agent with Emax = 105.4 ± 2.7% in rings pre-contracted with FEN and Emax = 82, 7 ± 7.9% in KCl 80 mM induced contraction. The vasorelaxation was significantly attenuated in the presence of HDX and ODQ with Emax = 62.8 ± 14.9% and Emax = 15.2 ± 9.2%, respectively. In the presence of KCl 20 mM the vasorelaxat response was also reduced [Emax = 70.6 ± 15.02%] as well as in the presence of TEA [Emax = 87.97 ± 5.78%]; GLIB [Emax = 78, 2 ± 6.5%] and 4-AP, a lesser extent [Emax = 94.65 ± 6.6%]. For in vivo studies, we investigated the changes in blood pressure (BP) and heart rate (HR) in conscious rats treated acutely with NDBP. Intravenous administration of NDBP (2, 5, 10, 15 and 20 mg/kg, randomly) produced hypotension (-6 ± 1.7, -22 ± 6.8, -58 ± 3.7, -70 ± 5.5, -77 ± 5.4 mmHg) and bradycardia (-12 ± 5, -40 ± 19.7, -133 ± 18.6, -179 ± 23.5, and -266 ± 12.4 bpm) in a dose-dependent manner. Thus, the vasorrelaxant response produced by NDBP possibly involves the NO release and subsequent activation of the CGs/GMPc/PKG pathway and BKCa, KATP and KV channels. These mechanism of action may be contributing to hypotension and bradycardia showed in non-anesthetized normotensive rats. / Os nitratos orgânicos são doadores de óxido nítrico (NO) utilizados no tratamento de doenças cardiovasculares mimetizando o papel do NO endógeno. Neste estudo foram avaliados nitratos orgânicos recém-sintetizados a partir da glicerina cujas ações cardiovasculares ainda não haviam sido investigadas. Portanto, os efeitos cardiovasculares do 2-nitrato-1,3-dimetoxipropano (NDMP), 2-nitrato-1,3-dietoxipropano (NDEP), 2-nitrato-1,3-dipropoxipropano (NDPP) e 2-nitrato-1,3-dibutoxipropano (NDBP) em ratos normotensos foram observados, utilizando técnicas in vitro e in vivo. Para os estudos in vitro, os animais foram eutanasiados e a artéria mesentérica superior foi isolada. Anéis de artéria mesentérica superior isolada de rato foram mantidos em cubas contendo Tyrode a 37 ºC gaseificado com carbogênio, em seguida foram fixados a um transdutor de força (FORT 10, WPI, Sarasota, EUA), acoplado a um sistema de aquisição de dados (Miobath-4, WPI, Sarasota, EUA) sob tensão de 0,75 g, durante 1 hora. Após este período, as preparações foram pré-contraídas com fenilefrina (FEN) 10 μM ou KCl 80 mM e, em seguida, concentrações crescentes dos nitratos orgânicos, foram adicionadas cumulativamente. O nitrato com efeito mais promissor foi selecionado para estudos subsequentes e foram obtidas curvas concentração-resposta do composto na presença de HDX, sequestrador de NO; ODQ, inibidor da ciclase de guanilil solúvel; KCl 20 mM, modulador do efluxo de potássio; e bloqueadores de canais para K+ sensíveis ao cálcio (TEA, 1 mM), ao ATP (GLIB, 1 M) e operados por voltagem (4-AP, 1 mM). Todos os compostos apresentaram atividade vasorrelaxante em anéis de artéria mesentérica superior isolada de rato independente do endotélio funcional, sendo o NDBP o mais potente com Emáx = 105,4 ± 2,7 % em anéis pré-contraídos com FEN e Emáx = 82,7 ± 7,9 % na contração induzida por KCL 80 mM. O vasorrelaxamento foi significativamente atenuado na presença de HDX e ODQ, com Emáx = 62,8 ± 14,9 % e Emáx = 15,2 ± 9,2 %, respectivamente. Na presença de KCl 20 mM a resposta vasorrelaxante também foi reduzida [Emáx = 70,6 ± 15,02 %], bem como na presença do TEA [Emáx = 87,97 ± 5,78 %]; GLIB [Emáx = 78,2 ± 6,5 %] e 4-AP, em menor proporção [Emáx = 94,65 ± 6,6 %]. Para os estudos in vivo, foram investigadas as alterações na pressão arterial (PA) e frequência cardíaca (FC) em ratos não-anestesiados tratados agudamente com o NDBP. A administração aleatória do NDBP (2, 5, 10, 15 e 20 mg/kg, i. v) produziu hipotensão (-6 ± 1,7; -22 ±6,8; -58 ± 3,7; -70 ± 5,5; -77 ± 5,4 mmHg) e bradicardia (-12 ± 5; -40 ± 19,7; -133 ± 18,6; -179 ± 23,5; e -266 ± 12,4 bpm) de maneira dose-dependente. Deste modo, a resposta vasorrelaxante promovida pelo NDBP possivelmente envolve a liberação de NO e posterior ativação da via CGs/GMPc/PKG e canais para K+ do tipo BKCa; KATP e KV. Este mecanismo de ação pode estar contribuindo para a hipotensão e bradicardia observadas em animais normotensos não-anestesiados.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-02-20T11:58:45Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1664038 bytes, checksum: 10c74036755f7796ffefc80faf342151 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T11:58:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1664038 bytes, checksum: 10c74036755f7796ffefc80faf342151 (MD5) Previous issue date: 2016-11-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Organic nitrates have been used in cardiovascular disorders therapy because they work as nitric oxide (NO) donors. The present study aimed to characterize the 2-nitrate-1,3-dioctanoxypropan (NDOP), an organic nitrate synthesized from glycerin as a NO donor. The ability of NO release elicited by NDOP was evaluated in vascular smooth muscles cells (VSMC) from aorta and in vascular reactivity essays in thoracic aorta rings from C57BL/6 mice pre-contracted with phenylephrine. In addition, in vitro tolerance for NDOP and the acute pre-clinical toxicity to its oral administration (v.o.) (300 and 2000 mg/kg) were evaluated. The treatment with NDOP increased NO levels in VSMC when compared to cells stimulated with DAF probe only (53,20 ± 1,61 vs. 10,74 ± 0,86 a.u., n = 13 and 13, respectively, p < 0.05). The NO increase in VSMC was not inhibited by endothelial nitric oxide synthase (eNOS) inhibitor, L-NG-Nitroarginine (L-NNA, 100 μM) (52,80 ± 2,89 vs. 53,75 ± 2,18 a.u., n = 13 each). NDOP (10-8 – 10-3 M) induced endothelium-independent vasorelaxant effect in aorta from mice (Emax = 102,6 ± 1,7% vs. 107,3 ± 7,5%, n = 8 and 6, respectively). Pre-incubation with NOS blocker, L-NAME (100 μM) did not change the vasorelaxant response in functional endothelium rings (Emax= 112,5 ± 7,4%, n = 7). However the vasorelaxant effect to NDOP in rings without functional endothelium was decreased by pre-treatment with NO scavenger, 2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl 3-oxide (PTIO, 300 μM) (Emax= 75,7 ± 5,6%, n = 7, p < 0.05) and by PTIO + hydroxocobalamin (Emáx= 38,8 ± 4,6%, n = 4, p < 0.05). The soluble guanylyl cyclase (sGC) selective inhibitor, 1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one (ODQ, 10 μM), reduced the NDOP vasorelaxant response (Emáx = 22,2 ± 6,7%, n = 6, p < 0.05). When rings were contracted with modified Krebs solution by KCl 60 mM, NDOP maximum relaxation efficiency was attenuated (Emax = 80,4 ± 5,2%; n = 6, p < 0,05). The unspecified inhibition of potassium channels (K+) using Krebs depolarizing solution in addition to KCl 20 mM reduced the efficiency of relaxation induced by NDOP (Emax= 72,8 ± 3,4%; n = 6, p < 0.05). Specific blocking of BKca by TEA (1 mM), Kv by 4-aminopyridine (4-AP; 1 mM) or KATP by glybenclamide (GLIB, 10 μM) did not change the standard relaxing curve for NDOP. However, the pre-incubation with barium chloride (BaCl2, 30 μM), an inward-rectifier potassium channels (KIR) blocker reduced the relaxation effect induced by NDOP (Emax= 73,7 ± 5,7%, n = 6, p <0.05). In aorta rings pre-incubation with NDOP (10-4 M), the vasorelaxation induced by NDOP was reduced in rings with endothelium (Emax= 49,4 ± 3,5% vs. 102,6 ± 1,7%; n = 7 and 8, respectively, p < 0.05) and without endothelium (Emax= 44,1 ± 5,9% vs. Emax= 107.3 ± 7.5%, n = 6 and 6, respectively, p < 0.05). Oral administration of NDOP (300 and 2000 mg/kg) in female mice demonstrated that the compound present low pre-clinical acute toxicity and the DL50 was about 5000 mg/kg. The results demonstrate that NDOP acts as a NO donor in VSMC and produce vasorelaxation via NO-cGMP-PKG pathway and activation of KIR channels. However, although the low pre-clinical acute toxicity, NDOP demonstrate to induce vascular tolerance in vitro. / Nitratos orgânicos têm sido utilizados na terapia de desordens cardiovasculares pois são doadores de óxido nítrico (NO) e podem mimetizar o papel do NO endógeno. O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de caracterizar o 2-nitrato-1,3-di(octanoxi)propano (NDOP), um nitrato orgânico sintetizado a partir da glicerina, como um doador de NO. A capacidade de liberação de NO eliciada pelo NDOP foi avaliada em células de músculo liso vascular (CMLV) de artéria aorta e em ensaios de reatividade vascular em anéis de aorta torácica de camundongos (Mus musculus) C57BL/6 pré-contraidos com fenilefrina. Em adição, foi também avaliada a tolerância in vitro para o NDOP e a toxicidade aguda pré-clinica frente sua administração via oral (v.o.) (300 e 2000 mg/kg) em camundongos fêmeas. O tratamento com NDOP aumentou os níveis de NO nas CMLV quando comparado às células estimuladas apenas com a sonda DAF (53,20 ± 1,61 vs.10,74 ± 0,86 a.u., n = 13 e 13, respectivamente, p < 0,05). O aumento de NO nas CMLV não foi inibido pelo bloqueio da enzima óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) utilizando L-NG-Nitroarginina (L-NNA, 100 μM) (52,80 ± 2,89 vs. 53,75 ± 2,18 a.u., n = 13 e 13, respectivamente). O NDOP (10-8 – 10-3 M) induziu efeito vasorrelaxante em aorta torácica de camundongo C57BL/6 com e sem endotélio funcional de forma semelhante (Emáx = 102,6 ± 1,7% vs. 107,3 ± 7,5%, n = 8 e 6, respectivamente). A pré-incubação com o bloqueador da NOS, L-NAME (100 μM) não alterou a resposta vasorrelaxante em anéis com endotélio funcional (Emáx= 112,5 ± 7,4%, n = 7). Por outro lado, o efeito vasorrelaxante do NDOP em anéis sem endotélio funcional foi diminuído pelo pré-tratamento com o sequestrador de NO, 2-(4-fenil)-4,4,5,5-tetrametilimidazolina-1-oxi-3-óxido (PTIO, 300 μM) (Emáx= 75,7 ± 5,6%, n = 7, p < 0,05) e pelo PTIO juntamente com a hidroxicobalamina (Emáx= 38,8 ± 4,6%, n = 4, p < 0,05). O uso do 1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-ona (ODQ, 10 μM), um inibidor seletivo da enzima ciclase de guanilil solúvel (CGs) reduziu a resposta vasorrelaxante do NDOP (Emáx = 22,2 ± 6.7%, n = 6, p < 0,05). Quando os anéis foram contraídos com a solução de Krebs modificada com KCl 60 mM, a eficiência máxima de relaxamento do NDOP foi atenuada (Emáx = 80,4 ± 5,2%; n = 6, p < 0,05). O bloqueio inespecífico dos canais para potássio (K+) com solução despolarizante de Krebs adicionada de KCl 20 mM reduziu a eficácia do relaxamento induzido pelo NDOP (Emáx = 72,8 ± 3,4%; n = 6, p < 0,05). O uso de TEA (1 mM), 4-aminopiridina (1 mM) e Glibenclamida (10 μM) para bloqueio dos canais BKCa, KV e KATP, respectivamente, não alterou o vasorrelaxamento induzido pelo NDOP. Entretanto, a pré-incubação dos anéis com cloreto de bário (BaCl2, 30 μM), inibidor dos canais para K+ retificadores de entrada (KIR) reduziu a eficiência de relaxamento induzido pelo NDOP (Emáx= 73,7 ± 5,7%, n = 6, p < 0,05). A pré-exposição dos anéis ao NDOP (10-4 M), durante 30 minutos, diminuiu o vasorrelaxamento induzido pelo composto em anéis com endotélio (Emáx= 49,4 ± 3,5% vs. 102,6 ± 1,7%; n = 7 e 8, respectivamente, p < 0,05) e sem endotélio vascular (Emáx= 44,1 ± 5,9% vs. Emáx= 107,3 ± 7,5%, n = 6 e 6, respectivamente, p < 0,05). A administração (v.o.) de 300 e 2000 mg/kg do NDOP em camundongos fêmeas demonstrou que o composto apresenta baixa toxicidade aguda pré-clínica e a DL50 foi aproximadamente 5000 mg/kg. Os resultados demonstram que NDOP atua como doador de NO em CMLV e que o vasorrelaxamento induzido pelo NDOP envolve a ativação dos canais para K+ do tipo KIR e a participação da CGs por meio da via NO-GMPc-PKG. Entretanto, apesar da baixa toxicidade aguda pré-clínica, o NDOP demostrou provocar tolerância vascular in vitro.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-02-24T14:06:25Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 3861832 bytes, checksum: 51f845d5047e9aaddd5d14c6395b40a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-24T14:06:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 3861832 bytes, checksum: 51f845d5047e9aaddd5d14c6395b40a2 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Human umbilical cord vessels (HUCV), often considered biological waste, are good models for evaluation of vasoactive substances. The effect of glyceryl trinitrate (GTN) has been characterized in several animal blood vessels, but this nitrate presents little effect on HUCV. The tetrahydrofurfuryl nitrate (NTHF) and 13-cis-9-octadecanoate acetate nitrate (NCOE) are nitric oxide (NO) donors, whose effect has been characterized in animal vessels. 1,2-bis (tetrahydrofuran-2-yl) ethane-1,2-diildinitrato (BIS-NTHF) is a novel compound (two molecules of NTHF) that has no pharmacological studies. The aim of this study was to implement and standardize the technique involving HUCV, and characterize the effect of these four organic nitrates both in artery (HUA) and vein (HUV) rings isolated from umbilical cord. The standardization of the technique showed that 3g and 3h are, respectively, the ideal voltage and time to experiment with the umbilical vessels, besides the fact that it presents a spontaneous decrease both basal tone as the contractile. The study of nitrates showed that these compounds have relaxed the basal tone of HUCV. All nitrate induced vasorelaxation in both umbilical vessels pre-contracted with serotonin (5-HT), with maximum effects than 90%, and more effectively in relaxing HUA than HUV. In this situation, GTN was the most potent nitrate in causing vasodilation, BIS NTHF presented an intermediate power value, while NCOE and NTHF were less potent in relaxing HUV and HUA, respectively. When HUA rings were pre-contracted with KCl 60 mM, there was an attenuation of vasodilation promoted by nitrates. GTN and the NTHF also showed decreased vasorelaxation in HUV rings contracted with KCl 60 mM, while NCOE and BIS-NTHF have effects similar to the rings pre-contracted with 5 HT. Preincubation of GTN, BIS-NTHF and NTHF attenuated contractions induced by 5-HT in HUA rings. Additionally, GTN and BIS-NTHF also inhibited contraction stimulated by 5-HT in HUV. In contrast, preincubation of NTHF in HUV, and NCOE both in HUV as HUA led to lower inhibition when compared with the other nitrates. GTN, NTHF and BIS-NTHF inhibited the phasic and tonic components of the contraction induced by 5-HT in the absence of extracellular Ca2+. NCOE was more effective to inhibit the tonic contraction. Pre-incubation of 10 μM of ODQ, inhibitor of soluble cyclase guanylyl, attenuated significantly the vasodilator response to GTN, NTHF, NCOE and BIS NTHF was. Preincubation of 10 mM TEA, a blocker of potassium channels, decreased the relaxant response of the four nitrates in HUA, while do not alter the effect in HUV. In view of what has been exposed here, it can be concluded that GTN, NTHF, NCOE and BIS-NTHF cause vasorelaxation of HUCV rings, both in basal tone as contractions induced by 5-HT or KCl. The mechanism of nitrates action in these human vessels involves activation of sCG and channels for potassium; and inhibition of calcium entry, release of stocks of this ion by sarcoplasmic reticulum and ROCK activity. / Vasos umbilicais humano (HUCV), muitas vezes considerado lixo biológico, são bons modelos para avaliação de substâncias vasoativas. O efeito do trinitrato de gliceril (GTN) já foi caracterizado em vários vasos sanguíneos animais, mas em HUCV foi apenas relatado que este nitrato apresenta pouco efeito. O nitrato de tetra-hidrofurfurilo (NTHF) e o 13-nitrato-cis-9-octadecanoato de etila (NCOE) são doadores de óxido nítrico (NO), cujo efeito foi caracterizado em vasos animais. O 1,2-bis(tetrahidrofuran-2-il)etano-1,2-diildinitrato (BIS-NTHF) é um composto inédito (duas moléculas de NTHF) que não possui estudos farmacológicos. O objetivo deste estudo foi implantar e padronizar a técnica envolvendo HUCV, e caracterizar o efeito desses quatro nitratos orgânicos tanto em anéis de artéria (HUA) como veia (HUV) isoladas de cordão. A padronização da técnica mostrou que 3 g e 3h são, respectivamente, a tensão e tempo ideais para experimentos com os vasos umbilicais, além do fato de que estes apresentam uma queda espontânea tanto do tônus basal como do contrátil. O estudo com os nitratos mostrou que esses compostos relaxaram o tônus basal de HUCV. Todos os nitratos induziram vasorrelaxamento, em ambos os vasos umbilicais pré-contraídos com serotonina (5-HT), com efeitos máximos superiores a 90%, e com maior eficácia em relaxar HUA do que HUV. Nesta situação, GTN foi o nitrato mais potente em causar vasodilatação, BIS-NTHF apresentou um valor de potência intermediário, enquanto que NCOE e NTHF foram os menos potentes em relaxar HUV e HUA, respectivamente. Quando os anéis de HUA foram pré-contraídos com KCl 60 mM, houve uma atenuação da vasodilatação promovida pelos nitratos. GTN e NTHF também apresentaram o vasorrelaxamento diminuído nos anéis de HUV pré-contraídos com KCl 60 mM, enquanto NCOE e BIS-NTHF tiveram seus efeitos de forma semelhante aos anéis pré-contraídos com 5-HT. A pré-incubação de GTN, NTHF e BIS-NTHF atenuou as contrações induzidas por 5-HT, em anéis de HUA. Adicionalmente, GTN e BIS-NTHF também inibiram a contração estimulada por 5-HT em HUV. Em contrapartida, a pré-incubação de NTHF, em HUV, e de NCOE, tanto em HUV como em HUA, levaram à inibição menor, quando comparados aos outros nitratos. GTN, NTHF e BIS-NTHF inibiram o componente fásico e tônico da contração induzida por 5-HT, na ausência do Ca2+ extracelular. NCOE, por sua vez, foi mais eficaz em inibir a contração tônica. A pré-incubação de 10 μM de ODQ, inibidor da ciclase de guanilil solúvel, fez com que a resposta vasodilatadora de GTN, NTHF, NCOE e BIS-NTHF fosse atenuada de maneira significativa. A pré-incubação de 10 mM de TEA, um bloqueador de canais para potássio, em HUA diminuiu a resposta relaxante dos quatro nitratos, não alterando o efeito em HUV. Diante do exposto, pode-se concluir que os nitratos orgânicos GTN, NTHF, NCOE e BIS-NTHF causam vasorrelaxamento de anéis de HUCV, tanto no tônus basal quanto de contrações induzidas por 5-HT ou KCl. O mecanismo de ação dos nitratos nestes vasos humanos envolve ativação da sGC e de canais para potássio; e inibição da entrada de cálcio, liberação dos estoques deste íon do retículo sarcoplasmático e da atividade da ROCK.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2088369 bytes, checksum: 2e3d2793391ca047954511fc5b3ad4ec (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The organic nitrates are the most commonly nitric oxide (NO) donors used in the treatment of cardiovascular diseases, mainly due the pronounced vasodilator effect. The purpose of this study was to evaluate the vascular effects of tetrahydrofurfuryl nitrate (NTHF), an organic nitrate derivated from the sugarcane s synthetic route. In rat mesenteric artery rings, pre-contracted with phenylephrine 10 &#956;M, NTHF induced concentration-dependent (1 pM-10 &#956;M) vasodilatation, with intact endothelium (Maximum Response = 84 ± 5.3%, pD2 = 7.86 ± 0.22) or endothelium removal, NTHF effects were no attenuated (MR = 100 ± 6.1%, pD2 = 7.39 ± 0.15), suggesting an independent mechanism of endothelium-derived vasoactive factors. The subsequent experiments were performed in rings without endothelium. After pre-incubation of 3 mM NAC, a reactive oxygen species (ROS) scavenger, the response was potentiated (pD2 = 8.32 ± 0.18), a common profile of compounds producing NO. However, when pre-incubated with L-NAME 100 &#956;M, a NOS inhibitor, there was a decrease in the potency (pD2 = 6.62 ± 0.15), suggesting an involvement of this enzyme in the NTHF vascular response. By using scavenger NO radical, hydroxocobalamin 30 &#956;M or carboxy-PTIO 300 &#956;M, the efficacy was attenuated (MR = 66 ± 9.2% and 32 ± 6.2%, respectively), suggesting an involvement of this NO form in the NTHF vasodilator response. In the presence of cyanamide 1 mM, an aldehyde dehydrogenase (ALDH) inhibitor, or ODQ 10 &#956;M, a soluble guanylate cyclase (sGC) inhibitor, there was a significative maximum response s reduction (MR = 29 ± 9.5% and 22 ± 4.6, respectively), indicating an involvement of these enzymes in the NTHF vasodilator mechanism. After exposure to high concentrations of extracellular K+, KCl 80 or 20 mM, the NTHF effect was significantly attenuated (MR = 49 ± 3.8%; 59 ± 9.5%, respectively), a characteristic of substances that act by activating K+ channels. This effect was confirmed after the use of tetraethylammonium (TEA) 3 mM (MR = 31 ± 5.0%), a non-selective K+ channel blocker. In the presence of TEA 1 mM, which at this concentration selectively blocks the BKCa, the vasodilatation was significantly attenuated (MR = 38 ± 8.3%), suggesting the involvement of these channels in the nitrate vasorelaxant effect. This hypothesis was reinforced following the use of 4-aminopyridine 1 mM (MR = 81 ± 8.5%), a KV blocker, glibenclamide 10 &#956;M (MR = 97 ± 9.0%), a KATP blocker, or BaCl2 30 &#956;M (MR = 94 ± 4.9%), a KIR blocker, which did not alter the NTHF vasodilator response. After NTHF (10 &#956;M) incubation for 60 min, the vasodilatation was not changed, indicating that in this concentration this nitrate does not induce vascular tolerance. In conclusion, the NTHF cause vasodilatation, probably by promoting the NO radical release, involving the activation of NOS, ALDH, sGC and BKCa. / Os nitratos orgânicos são compostos doadores de óxido nítrico (NO) mais utilizados no tratamento de distúrbios cardiovasculares, principalmente, devido ao pronunciado efeito vasorrelaxante. A finalidade deste estudo foi avaliar os efeitos vasculares do nitrato tetra-hidrofurfurílico (NTHF), um nitrato orgânico proveniente da rota sintética da cana-de-açúcar. Em anéis de artéria mesentérica superior de rato, pré-contraídos com fenilefrina 10 &#956;M, o NTHF promoveu vasodilatação de maneira dependente de concentração (1 pM-10 &#956;M), com o endotélio vascular intacto (Emáx = 84 ± 5,3%; pD2 = 7,86 ± 0,22) ou removido (Emáx = 100 ± 6,1%; pD2 = 7,39 ± 0,15), sugerindo um mecanismo independente dos fatores vasoativos derivados do endotélio. Todos os experimentos subsequentes foram realizados com remoção do endotélio. Após pré-incubação com N-acetilcisteína 3 mM, um sequestrador de espécies reativas do oxigênio, a resposta foi potencializada (pD2 = 8,32 ± 0,18), um perfil peculiar de substâncias que produzem NO. Entretanto, ao serem pré-incubados com L-NAME 100 &#956;M, um inibidor da NO sintase (NOS), houve uma diminuição da potência (pD2 = 6,62 ± 0,15), sugerindo a participação desta enzima no efeito vasodilatador do NTHF. Ao utilizar sequestradores de NO radicalar, hidroxocobalamina 30 &#956;M ou carboxi-PTIO 300 &#956;M, a eficácia do efeito vasorrelaxante do NTHF foi atenuada (Emáx = 66 ± 9,2% e 32 ± 6,2%, respectivamente), indicando o envolvimento desta forma do NO na vasodilatação do nitrato em estudo. Na presença de cianamida 1 mM, um inibidor da aldeído desidrogenase (ALDH), e do ODQ 10 &#956;M, um inibidor da ciclase de guanilil solúvel (sGC), a resposta máxima foi reduzida significativamente (Emáx = 29 ± 9,5% e 22 ± 4,6, respectivamente), indicando a participação destas enzimas no mecanismo vasorrelaxante do NTHF. Após a exposição a concentrações elevadas de K+ extracelular, KCl 80 ou 20 mM, o efeito do NTHF foi significantemente atenuado (Emáx = 49 ± 3,8% e 59 ± 9,5%, respectivamente), sendo esta uma característica de substâncias que agem por ativar canais para K+. Este efeito foi confirmado após utilização de tetraetilamônio (TEA) 3 mM (Emáx = 31 ± 5,0%), que nesta concentração bloqueia de modo não seletivo os canais para K+. Ao utilizar TEA 1 mM (Emáx = 38 ± 8,3%), que nesta concentração bloqueia seletivamente os BKCa, a vasodilatação foi atenuada de modo significante, sugerindo a participação destes canais neste efeito vasorrelaxante. Esta hipótese foi reforçada após a utilização de 4-aminopiridina 1 mM (Emáx = 81 ± 8,5%), um bloqueador dos KV, glibenclamida 10 &#956;M (Emáx = 97 ± 9,0%), um bloqueador dos KATP, ou BaCl2 30 &#956;M (Emáx = 94 ± 4,9%), um bloqueador dos KIR, que não alteraram a resposta vasodilatadora do NTHF. Após a incubação durante 60 min com o NTHF (10 &#956;M), o vasorrelaxamento não foi alterado, sugerindo que nesta concentração este nitrato não induz tolerância vascular. Em conclusão, o NTHF causa vasodilatação, provavelmente, por promover a liberação de NO radicalar, envolvendo a ativação da NOS, ALDH, sGC e de BKCa.

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