A interação envolvendo artrópodes e plantas é uma das mais antigas e importantes interações ecológicas da natureza. As estratégias adotadas pelos artrópodes para reconhecer a sua planta hospedeira são bastante variáveis e pistas químicas desempenham um papel importante nessa relação. Opiliões (Arachnida, Opiliones) são altamente dependentes de quimiorrecepção para encontrar recursos e são particularmente dependentes de umidade. O opilião Jussara sp. possui uma clara preferencia por repousar em Psychotria suterella (Rubiacea), uma planta com uma arquitetura foliar complexa com folhas sobrepostas. Nada se sabe sobre como o opilião chega a ela ou quais as vantagens que ela proporciona ao opilião. Neste trabalho verificamos quais pistas são utilizadas pelo opilião para encontrar P. suterella e ainda quais os possíveis benefícios para o opilião nessa interação. Para verificação de como o opilião encontra a planta, partimos de duas hipóteses não excludentes: 1 - pistas de co-específicos são utilizadas; 2 - pistas químicas provenientes da planta são utilizadas. Para a primeira hipótese, montamos um experimento em campo com um grupo de plantas de P. suterella contendo químicos de Jussara sp. e um grupo sem químicos de Jussara sp. no caule principal e comparamos como os tratamentos afetaram o número de opiliões nas plantas de cada grupo. Para a hipótese da utilização de químicos da planta, realizamos dois experimentos visando verificar a preferência do opilião pelos voláteis de P. suterella. No primeiro utilizamos extratos de químicos voláteis de P. suterella e de mais dois controles em uma arena triangular com os 3 estímulos oferecidos simultâneamente. No segundo experimento utilizamos a própria planta P. suterella, pareada com uma planta controle ou um controle branco em um olfatômetro em Y. Para verificar os benefícios da associação também partimos de duas hipóteses não exludentes relacionadas a possíveis diferenças microclimáticas geradas por P. suterella em relação às demais plantas do local: 1- as folhas de P. suterella oferecem maior umidade do que outras plantas; 2 - as folhas de P. suterella fornecem um microambiente mais sombreado do que o de outras plantas. Para primeira hipótese, quantificamos o fluxo de transpiração foliar de P. suterella e mais 3 espécies de plantas do habitat do opilião. Já para segunda hipótese, quantificamos o bloqueio à passagem de luz através das folhas em P. suterella e das mesmas 3 espécies do teste anterior. Não obtivemos evidências claras de que os opiliões Jussara sp. utilizem químicos de co-específicos para selecionar P. suterella. Pistas químicas olfativas não parecem ser utilizadas de forma isolada para atrair Jussara sp., mas nossos resultados sugerem que talvez em combinação com outras plantas o odor possa ser utilizado. Em relação aos benefícios fornecidos por P. suterella, nós não encontramos evidências de que a transpiração foliar seja importante na interação. Contudo, o maior bloqueio de passagem de luz através da folha em comparação às demais espécies aliado a arquitetura foliar de P. suterella pode gerar microclimas benéficos para os opiliões que geralmente são altamente sensíveis a umidade / Interactions between arthropods and plants are among the oldest and important ecological interactions in nature. Strategies adopted by arthropods to recognize its host plant are very variable and volatiles often mediate the encounter between both parts. Harvestmen (Arachnida, Opiliones) are arachnids highly dependent on chemicals to find resources and particularly dependent on high humidity. The harvestman Jussara sp. clearly prefers to rest on Psychotria suterella (Rubiacea), a plant with a complex architecture with overlapping leaves. We know nothing about how the harvestmen find the plant or the advantages that such plant offers to the harvestmen. In this paper we investigate the cues used to find P. suterella by these harvestmen and how the harvestman benefits from this interaction. To test how the harvestman finds the plant, we raised two non-excludent hypotheses: 1 - conspecific chemicals are used; 2 - plant chemicals are used. For the first hypothesis, we conducted a field experiment with a group of P. suterella with chemicals of Jussara sp. and another without chemicals of of Jussara sp. on the main stem and compared how that affected the number of harvestmen on them. To test the importance of plant chemicals, we conducted two experiments to test the use of volatiles of P. suterella. We first used volatile extracts of P. suterella and two other plants in a triangular arena with the three stimuli offered simultaneously. In the second experiment, we used actual individuals of P. suterella paired with either a control plant of a white control in a Y maze. To investigate how Jussara sp. benefits by choosing P. suterella, we raised two non-excludent hypotheses related to microclimatic conditions potentially offered by P. suterella in comparison to other plants of the area: 1 - The leaves of P. suterella offer higher humidity than those of other plants; 2 - The leaves of P. suterella provide a better shadow that that of other plants. For the first hypothesis, we quantified the transpiration rate of the leaves of four local species including P. suterella. For the second hypothesis, we quantified how much light passes through the leaves of these four species. We did not find clear evidences that Jussara sp. uses conspecific chemicals to select P. suterella. Plant volatiles do not seem to be used at least isolated to attract Jussara sp., but our results suggest that maybe in combination with other plants such volatiles may be used. As for the benefits provided by P. suterella, we did not find evidence that the transpiration rate is important. However, the leaves of P. suterella do provide better shadows in comparison with the other plants, which in combination with the complex architecture with overlapping leaves may provide better microclimatic conditions to these very humidity sensitive animals

Submitted by Giovanna Brasil (1154060@mackenzie.br) on 2017-06-26T21:10:33Z No. of bitstreams: 2 Fernanda Areias Pereira Dalhuisen.pdf: 5490374 bytes, checksum: afe577e8cdade34fc58ae3f56c9592e3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Paola Damato (repositorio@mackenzie.br) on 2017-06-27T14:41:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Fernanda Areias Pereira Dalhuisen.pdf: 5490374 bytes, checksum: afe577e8cdade34fc58ae3f56c9592e3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-27T14:41:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Fernanda Areias Pereira Dalhuisen.pdf: 5490374 bytes, checksum: afe577e8cdade34fc58ae3f56c9592e3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-05-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This project sought to investigate how the haptic and olfactory perceptions of blind young people could contribute to the design creation, specifically to the development of fragrance packaging, mainly related to glass bottles. The process of creation and development of a product demands from the designing engineer, besides specific knowledge of materials and techniques, a deep comprehension of an individual and it´s cultural background. The study was based on Marleau-Ponty´s phenomenology perception, Gestalt´s theory, and in specific researches related to blindness and production methods for product design. Based on a qualitative investigation, a semi-structured method of interviews with young blind people were taken; Immersive experiences were experimented by the researcher, expanding its vision for the complexity of the individual, their background experience and culture. It is considered that the result of this project could contribute with the packaging creation in the future, and innovates aiming possibilities of researches that establishes relations between form and olfactory perceptions. / O trabalho buscou investigar como as percepções háptica e olfativa de jovens com cegueira podem contribuir para a criação em design, especificamente ao desenvolvimento de embalagens de perfumes, especialmente os frascos de vidro. Considera-se que o processo de criação e desenvolvimento de um produto exige do designer, além de conhecimentos específicos como materiais e técnicas, a compreensão do outro e da cultura a qual pertence. O estudo apoiou-se na Fenomenologia da Percepção de Merleau-Ponty, na Teoria da Gestalt, na pesquisa de informações especializadas sobre a cegueira e também sobre os métodos de produção do design de produtos. Com base na metodologia de investigação qualitativa, foi utilizado o recurso de entrevistas semiestruturadas com jovens cegos; foram realizadas experiências imersivas pelo pesquisador, que ampliaram a visão para a complexidade do outro, suas vivências e cultura. Considera-se que o resultado poderá contribuir para futuras criações de embalagens, e inova ao apontar possibilidades de pesquisa que estabeleçam relações entre forma e percepção olfativa.

Orientador: Maria Regina Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:51:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Janzantti_NataliaSoares_D.pdf: 1754931 bytes, checksum: 291ece767f23e71a611ae83d11e7e59d (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado

A doença de Alzheimer (DA) é caracterizada por declínio cognitivo e funcional progressivo e constitui-se como a forma mais prevalente de demência. O diagnóstico da DA é realizado atualmente, exclusivamente por meio de critérios clínicos. No entanto, a manifestação clínica da DA é precedida por um longo período assintomático, com depósito silencioso das proteínas tau e -amiloide no tecido cerebral. Evidências recentes demonstram que a mucosa olfatória, estrutura periférica e facilmente acessível também está acometida na DA, podendo representar um bom método de diagnóstico preciso e precoce desta moléstia. Os objetivos desse estudo consistem em correlacionar a prevalência das proteínas tau e -amiloide no epitélio olfatório (EO) com os estágios clínicos e neuropatológicos da doença e determinar a sensibilidade e especificidade dos achados no EO para o diagnóstico da DA em seus diferentes estágios de evolução. Para tal fim, é proposto estudo post-mortem, com avaliação de 92 tecidos cerebrais de indivíduos com idade igual ou superior a 50 anos, provenientes do Banco de Encéfalos Humanos do Grupo de Estudos em Envelhecimento Cerebral da Universidade de São Paulo, com coleta dos blocos de mucosa olfatória no momento da autópsia. A avaliação cognitiva foi realizada por meio de entrevista com informante de convívio próximo com o falecido, aplicando as escalas CDR e IQCODE. A avaliação neuropatológica do encéfalo e do EO foi realizada por meio de técnicas de . Os casos foram classificados mediante critério neuropatológico do CERAD e do estadiamento de Braak e Braak para DA. A presença de proteína tau e -amiloide no EO foi correlacionada com os parâmetros clínicos e neuropatológicos obtidos. A análise do EO da concha superior permitiu identificar as proteínas tau e -amiloide com sensibilidade alta, quando comparada com o diagnóstico neuropatológico (>80%) e clínico ( > 90%). Desta forma, a análise para as proteínas tau e - amiloide do epitélio olfatório pode representar um possível biomarcador para diagnóstico da DA / Alzheimer\'s disease (AD) is characterized by a progressive functional and cognitive decline and is considered the most prevalent type of dementia. AD is diagnosed exclusively on the basis of clinical criteria. However, clinical symptoms of AD are preceded by a long asymptomatic period, with silent deposition of tau and amyloid proteins in brain tissue. Recent studies demonstrate the same findings in the olfactory epithelium, a ready accessible structure which could contribute to the precise and early diagnosis of AD. The objectives of the current study were to correlate the prevalence of tau and amyloid proteins distributed in several areas of the olfactory epithelium with clinical and neuropathological criteria used for the diagnosis of AD and to determine the sensitivity and specificity of the olfactory epithelium involvement for the diagnosis of AD. Ninety-two individuals, belonging to the Brazilian Brain Bank of the Aging Brain Study Group from University of São Paulo, whose blocks of olfactory mucosa were collected during autopsy, were tested. Cognitive data were gathered through an interview with a knowledgeable informant, using the CDR (Clinical Dementia Rating Scale) and the IQCODE (Informant Questionnaire on Cognitive Decline in the Elderly) scales. Neuropathological examination was carried out on the basis of accepted criteria, using immunohistochemistry. Neuropathological classification of AD was performed in accordance with the CERAD criteria and Braak & Braak staging. The presence of tau and amyloid protein deposits in the olfactory epithelium was compared with clinical and neuropathological parameters. Immunostaining of olfactory epithelium from the superior turbinate was able to identify tau protein and amyloid-? with high sensitivity when compared with neuropathological scales ( > 80%) and clinical classification of CDR ( > 90%). Thus, immunohistochemistry for tau and amyloid proteins of the olfactory epithelium may represent a potential biomarker for early diagnosis of AD

A doença de Alzheimer (DA) é caracterizada por declínio cognitivo e funcional progressivo e constitui-se como a forma mais prevalente de demência. O diagnóstico da DA é realizado atualmente, exclusivamente por meio de critérios clínicos. No entanto, a manifestação clínica da DA é precedida por um longo período assintomático, com depósito silencioso das proteínas tau e -amiloide no tecido cerebral. Evidências recentes demonstram que a mucosa olfatória, estrutura periférica e facilmente acessível também está acometida na DA, podendo representar um bom método de diagnóstico preciso e precoce desta moléstia. Os objetivos desse estudo consistem em correlacionar a prevalência das proteínas tau e -amiloide no epitélio olfatório (EO) com os estágios clínicos e neuropatológicos da doença e determinar a sensibilidade e especificidade dos achados no EO para o diagnóstico da DA em seus diferentes estágios de evolução. Para tal fim, é proposto estudo post-mortem, com avaliação de 92 tecidos cerebrais de indivíduos com idade igual ou superior a 50 anos, provenientes do Banco de Encéfalos Humanos do Grupo de Estudos em Envelhecimento Cerebral da Universidade de São Paulo, com coleta dos blocos de mucosa olfatória no momento da autópsia. A avaliação cognitiva foi realizada por meio de entrevista com informante de convívio próximo com o falecido, aplicando as escalas CDR e IQCODE. A avaliação neuropatológica do encéfalo e do EO foi realizada por meio de técnicas de . Os casos foram classificados mediante critério neuropatológico do CERAD e do estadiamento de Braak e Braak para DA. A presença de proteína tau e -amiloide no EO foi correlacionada com os parâmetros clínicos e neuropatológicos obtidos. A análise do EO da concha superior permitiu identificar as proteínas tau e -amiloide com sensibilidade alta, quando comparada com o diagnóstico neuropatológico (>80%) e clínico ( > 90%). Desta forma, a análise para as proteínas tau e - amiloide do epitélio olfatório pode representar um possível biomarcador para diagnóstico da DA / Alzheimer\'s disease (AD) is characterized by a progressive functional and cognitive decline and is considered the most prevalent type of dementia. AD is diagnosed exclusively on the basis of clinical criteria. However, clinical symptoms of AD are preceded by a long asymptomatic period, with silent deposition of tau and amyloid proteins in brain tissue. Recent studies demonstrate the same findings in the olfactory epithelium, a ready accessible structure which could contribute to the precise and early diagnosis of AD. The objectives of the current study were to correlate the prevalence of tau and amyloid proteins distributed in several areas of the olfactory epithelium with clinical and neuropathological criteria used for the diagnosis of AD and to determine the sensitivity and specificity of the olfactory epithelium involvement for the diagnosis of AD. Ninety-two individuals, belonging to the Brazilian Brain Bank of the Aging Brain Study Group from University of São Paulo, whose blocks of olfactory mucosa were collected during autopsy, were tested. Cognitive data were gathered through an interview with a knowledgeable informant, using the CDR (Clinical Dementia Rating Scale) and the IQCODE (Informant Questionnaire on Cognitive Decline in the Elderly) scales. Neuropathological examination was carried out on the basis of accepted criteria, using immunohistochemistry. Neuropathological classification of AD was performed in accordance with the CERAD criteria and Braak & Braak staging. The presence of tau and amyloid protein deposits in the olfactory epithelium was compared with clinical and neuropathological parameters. Immunostaining of olfactory epithelium from the superior turbinate was able to identify tau protein and amyloid-? with high sensitivity when compared with neuropathological scales ( > 80%) and clinical classification of CDR ( > 90%). Thus, immunohistochemistry for tau and amyloid proteins of the olfactory epithelium may represent a potential biomarker for early diagnosis of AD

INTRODUÇÃO: O diagnóstico da doença de Parkinson (DP) pode ser um desafio, principalmente nas fases precoces da doença. O diagnóstico acurado desta condição requer mais que a avaliação clínica isolada. A Tomografia computadorizada do crânio de fóton único (SPECT) e a ultrassonografia transcraniana (USTC) podem ser úteis na diferenciação entre a DP e as síndromes parkinsonianas atípicas ou entre a DP e o tremor essencial. O presente estudo objetivou investigar a acurácia da USTC combinada com o teste de olfação Sniffin\' Sticks (SST-16) para diferenciar pacientes com DP de controles saudáveis e comparar com a acurácia do SPECT com 99mTc- TRODAT-1 (TRODAT). MÉTODOS: Trata-se de um estudo transversal que incluiu pacientes com DP segundo critérios do United Kingdom Parkinson\'s disease Society e um grupo controle de indivíduos saudáveis pareados para idade e gênero. Os pacientes foram examinados por um especialista em distúrbios do movimento e submetidos a SPECT encefálico com TRODAT, USTC e SST-16. Curvas Receiver Operating Characteristic (ROC) foram obtidas para definir os pontos de corte dos métodos avaliados para detecção de DP. RESULTADOS: Vinte indivíduos com DP (13 homens e 7 mulheres) e 9 participantes saudáveis foram admitidos no estudo. A idade mediana de início dos sintomas foi de 56,5 anos e a mediana do tempo de duração da doença foi de 5 anos. Maior área de ecogênica da substância negra (SN) foi observada no grupo com DP (p=0,013). Área ecogênica da SN de 0,22 cm2 foi definida pela curva ROC para detecção de DP, com acurácia de 79%. O ponto de corte do potencial de ligação do TRODAT no striatum foi 0,90, com acurácia de 99% para o diagnóstico de DP. Escore do SST-16 maior ou igual a 10 pontos foi o ponto de corte para detecção de DP, com acurácia de 85,8%. A combinação da USTC com teste da olfação levou à acurácia de 95% para detecção de DP. CONCLUSÃO: A combinação da USTC com SST-16 eleva a capacidade de ! detecção da DP. A acurácia da USTC combinada ao SST-16 para identificar pacientes com DP idiopática aproximou-se da acurácia do SPECT com TRODAT / INTRODUCTION: Diagnosing Parkinson\'s disease (PD) can be challenging, especially in the early stages of the disease. An accurate diagnosis requires more than clinical findings alone. Brain single-photon emission computed tomography (SPECT) and transcranial sonography (TCS) are helpful for diagnosing PD and differentiating it from atypical parkinsonian syndromes as well as essential tremor. This study aimed to investigate the accuracy of TCS combined with the Sniffin\' sticks olfactory test (SST-16) for differentiation between idiopathic PD patients and healthy controls compared to that of 99mTc-TRODAT-1 SPECT (TRODAT). METHODS: A cross-sectional study included PD patients diagnosed in accordance with United Kingdom PD Society Brain Bank criteria and a control group of age and sex-matched healthy subjects. All patients were examined by a movement disorder specialist and underwent brain SPECT using TRODAT, TCS examination and SST-16 test. Receiver Operating Characteristic (ROC) curves were used to calculate cut-off points for TCS, Striatal TRODAT binding potentials and SST-16. The area under the ROC curve determined the accuracy of the method. RESULTS: Twenty patients with PD (13 males and 7 females) and nine healthy subjects were included. Median age of PD onset was 56.5 years with median disease duration of 5 years. A larger substantia nigra (SN) echogenic area was observed in the PD group (p=0.013). SN echogenic area cut-off point of 0.22 cm2 was obtained from a ROC curve for PD diagnosis. Considering this cut-off point, TCS accuracy was estimated at 79.2% for PD diagnosis. The cut-off value of 0.90 for striatal TRODAT binding was associated with 99% accuracy for the diagnosis of PD. SST-16 values equal or greater than 10 points showed a 85.8% accuracy for PD diagnosis. Combination of both SST-16 and TCS improved the accuracy to 95% for PD diagnosis. CONCLUSION: Combined assessment of SST-16 and TCS are reliable and highly accurate for distinguishing PD patients from healthy controls. The accuracy of TCS combined with SST-16 for differentiation between idiopathic PD patients and healthy controls is similar to that of SPECT TRODAT

INTRODUÇÃO: O diagnóstico da doença de Parkinson (DP) pode ser um desafio, principalmente nas fases precoces da doença. O diagnóstico acurado desta condição requer mais que a avaliação clínica isolada. A Tomografia computadorizada do crânio de fóton único (SPECT) e a ultrassonografia transcraniana (USTC) podem ser úteis na diferenciação entre a DP e as síndromes parkinsonianas atípicas ou entre a DP e o tremor essencial. O presente estudo objetivou investigar a acurácia da USTC combinada com o teste de olfação Sniffin\' Sticks (SST-16) para diferenciar pacientes com DP de controles saudáveis e comparar com a acurácia do SPECT com 99mTc- TRODAT-1 (TRODAT). MÉTODOS: Trata-se de um estudo transversal que incluiu pacientes com DP segundo critérios do United Kingdom Parkinson\'s disease Society e um grupo controle de indivíduos saudáveis pareados para idade e gênero. Os pacientes foram examinados por um especialista em distúrbios do movimento e submetidos a SPECT encefálico com TRODAT, USTC e SST-16. Curvas Receiver Operating Characteristic (ROC) foram obtidas para definir os pontos de corte dos métodos avaliados para detecção de DP. RESULTADOS: Vinte indivíduos com DP (13 homens e 7 mulheres) e 9 participantes saudáveis foram admitidos no estudo. A idade mediana de início dos sintomas foi de 56,5 anos e a mediana do tempo de duração da doença foi de 5 anos. Maior área de ecogênica da substância negra (SN) foi observada no grupo com DP (p=0,013). Área ecogênica da SN de 0,22 cm2 foi definida pela curva ROC para detecção de DP, com acurácia de 79%. O ponto de corte do potencial de ligação do TRODAT no striatum foi 0,90, com acurácia de 99% para o diagnóstico de DP. Escore do SST-16 maior ou igual a 10 pontos foi o ponto de corte para detecção de DP, com acurácia de 85,8%. A combinação da USTC com teste da olfação levou à acurácia de 95% para detecção de DP. CONCLUSÃO: A combinação da USTC com SST-16 eleva a capacidade de ! detecção da DP. A acurácia da USTC combinada ao SST-16 para identificar pacientes com DP idiopática aproximou-se da acurácia do SPECT com TRODAT / INTRODUCTION: Diagnosing Parkinson\'s disease (PD) can be challenging, especially in the early stages of the disease. An accurate diagnosis requires more than clinical findings alone. Brain single-photon emission computed tomography (SPECT) and transcranial sonography (TCS) are helpful for diagnosing PD and differentiating it from atypical parkinsonian syndromes as well as essential tremor. This study aimed to investigate the accuracy of TCS combined with the Sniffin\' sticks olfactory test (SST-16) for differentiation between idiopathic PD patients and healthy controls compared to that of 99mTc-TRODAT-1 SPECT (TRODAT). METHODS: A cross-sectional study included PD patients diagnosed in accordance with United Kingdom PD Society Brain Bank criteria and a control group of age and sex-matched healthy subjects. All patients were examined by a movement disorder specialist and underwent brain SPECT using TRODAT, TCS examination and SST-16 test. Receiver Operating Characteristic (ROC) curves were used to calculate cut-off points for TCS, Striatal TRODAT binding potentials and SST-16. The area under the ROC curve determined the accuracy of the method. RESULTS: Twenty patients with PD (13 males and 7 females) and nine healthy subjects were included. Median age of PD onset was 56.5 years with median disease duration of 5 years. A larger substantia nigra (SN) echogenic area was observed in the PD group (p=0.013). SN echogenic area cut-off point of 0.22 cm2 was obtained from a ROC curve for PD diagnosis. Considering this cut-off point, TCS accuracy was estimated at 79.2% for PD diagnosis. The cut-off value of 0.90 for striatal TRODAT binding was associated with 99% accuracy for the diagnosis of PD. SST-16 values equal or greater than 10 points showed a 85.8% accuracy for PD diagnosis. Combination of both SST-16 and TCS improved the accuracy to 95% for PD diagnosis. CONCLUSION: Combined assessment of SST-16 and TCS are reliable and highly accurate for distinguishing PD patients from healthy controls. The accuracy of TCS combined with SST-16 for differentiation between idiopathic PD patients and healthy controls is similar to that of SPECT TRODAT

Os odores são detectados por uma grande família de receptores olfatórios (ORs) que são expressos nos neurônios olfatórios localizados no nariz. Os ORs ativados por um determinado odor acoplam-se à proteína Galfaolf que irá promover a ativação da adenilil ciclase III, resultando na produção de AMPc. O aumento da concentração de AMPc irá ativar canais iônicos dependentes de AMPc, tendo como consequência a despolarização do neurônio olfatório. A informação desencadeada pela ativação de determinados ORs é então transmitida para regiões específicas do cérebro promovendo a percepção do odor. A determinação da especificidade dos ORs para diferentes odores irá contribuir para o entendimento de como os odores são discriminados pelo sistema olfatório, entretanto, poucos ORs tiveram seus ligantes definidos devido a dificuldade de expressão funcional de ORs em sistema heterólogo. Em nosso trabalho, utilizamos o sistema de duplo-híbrido em levedura a fim de determinar potenciais novos reguladores para Galfaolf. Deste experimento, identificamos que Ric-8B (Ric, abreviatura de Resistant to Inhibitors of Cholinesterase), um provável GEF (GTP Exchange Factor), é capaz de interagir com Gaolf. Assim como Gaolf, Ric-8B é predominantemente expresso nos neurônios olfatórios maduros e em regiões específicas do cérebro. A restrita co-localização de Gaolf e Ric-8B fortemente indica que Ric-8B é uma proteína que participa da via de transdução de sinal de Galfaolf. Através de nossos ensaios, utilizando células HEK-293, foi possível mostrar que Ric-8B é capaz de potencializar a atividade de Galfaolf, tendo como consequência o aumento da produção de AMPc em sistema heterólogo. Por fim, nós mostramos que Ric-8B é capaz de promover a expressão funcional de ORs em sistema heterólogo. Nossos resultados demonstram que a expressão de Ric-8B é capaz de aumentar o acúmulo de Galfaolf na periferia de células HEK-293T, indicando que Ric-8B promove a expressão funcional de ORs provavelmente através da melhora da eficiência do acoplamento dos ORs com Galfaolf. Nossos resultados demonstram que o uso de Ric-8B em um sistema em larga escala irá permitir a expressão funcional de diversos ORs, permitindo a identificação de seus respectivos ligantes. Tal análise irá contribuir para o melhor entendimento do mecanismo de percepção dos odores. / Odorants are detected by a large family of odorant receptors (ORs) expressed in the olfactory neurons in the nose. The activated receptors couple to an olfactory-specific G-protein (Galphaolf), which activates adenylyl cyclase III to produce cAMP. Increased cAMP levels activate cyclic nucleotide-gated channels, causing cell membrane depolarization. The information provided by the odorant receptors is transmitted to specific regions of the brain leading to odorant perception. The determination of the odorant specificities of the different ORs will contribute to the understanding of how odorants are discriminated by the olfactory system. However, only a few ORs have been linked to odorants they recognized to date because ORs are not efficiently expressed in heterologous cells since they are poorly expressed on the cell surface. Here we used yeast two-hybrid to search for potential regulators for Galphaolf. We found that Ric-8B (for Resistant to Inhibitors of Cholinesterase), a putative GTP exchange factor, is able to interact with Gaolf. Like Gaolf, Ric-8B is predominantly expressed in the mature olfactory sensory neurons and also in a few regions in the brain. The highly restricted and colocalized expression patterns of Ric-8B and Galphaolf strongly indicate that Ric-8B is a functional partner for Galphaolf. We show that Ric-8B is able to potentiate Galphaolf-dependent cAMP accumulation in human embryonic kidney 293 cells and therefore may be an important component for odorant signal transduction. Finally, we show that Ric-8B promotes efficient heterologous expression of ORs. Our results show that Ric-8B enhances accumulation of Galphaolf at the cell cortex, indicating that it promotes functional OR expression probably by improving the efficiency of OR coupling to Galphaolf. Our results demonstrate that the employment of Ric-8B in a high-throughput system will allow the functional screening of the OR family members and thereby provide further insight into the mechanisms of odor perception.

RIC-8B é uma proteína que apresenta, in vitro, atividade de fator de troca de nucleotídeos guanina (GEF). No entanto, seu papel in vivo não é conhecido. Dados anteriores do nosso laboratório demonstraram que essa proteína interage especificamente com Gαolf, que é uma proteína G exclusiva do sistema olfatório, presente nos cílios dos neurônios olfatórios, onde ocorre a transdução de sinal ativada pelos odorantes. No camundongo adulto verificou-se, por meio de ensaios de hibridização in situ, que RIC-8B está presente somente em regiões de expressão de Gαolf: no epitélio olfatório maduro e no núcleo estriado do sistema nervoso central. Para avaliar a função fisiológica de RIC-8B in vivo, resolvemos gerar uma linhagem de camundongo knockout para Ric-8B. Verificamos que a linhagem é inviável devido à letalidade dos embriões já em fases precoces do desenvolvimento (por volta de E8,5 e E9,0). A coloração de embriões com X-gal mostra que RIC-8B é especificamente expressa em regiões que darão origem ao sistema nervoso, como na região ventral do tubo neural, e em regiões cefálicas. Interessantemente, mostramos que RIC-8B é expressa na placa do assoalho do tubo neural, de uma maneira muito semelhante ao padrão de expressão de Sonic Hedgehog (SHH), que apresenta um papel fundamental para a organização do sistema nervoso, entre outras funções. Nossos resultados indicam, portanto, que RIC-8B desempenha um papel crucial durante a embriogênese, e que este papel pode estar relacionado com o papel exercido por SHH. Além disso, como a via de sinalização de SHH ocorre em cílios primários nas células alvo, nossos dados levantam a interessante possibilidade de que RIC-8B apresenta funções relacionadas a cílios, tanto no camundongo adulto (neste caso nos cílios dos neurônios olfatórios) como no embrião (neste caso nos cílios primários). / RIC-8B is a protein that, in vitro, acts as a guanine nucleotide exchange factor (GEF). However, its role in vivo remains unknown. Previous data from our laboratory demonstrated that this protein is able to interact specifically with Gαolf, a G protein found only in the olfactory system. This G protein is located in the cilia from olfactory neurons, where odorant signaling occurs. In situ hybridization experiments showed that RIC-8B, in adult mice, is expressed only in regions where Gαolf is expressed, such as the olfactory epithelium and the nucleus striatum in the central nervous system. In order to determine the function of RIC-8B in vivo, we decided to generate a knockout mouse strain for Ric-8B. We found that this strain is not viable due to the lethality of embryos in the early stages of development (around days E8.5 and E9.0). X-gal staining of embryos shows that RIC-8B is specifically expressed in regions that originate the nervous system, such as the ventral neural tube and also cephalic regions. Interestingly, we show that RIC-8B is restrictedly expressed in the floor plate of the neural tube, in a pattern that is very similar to the one shown by Sonic Hedgehog (SHH). The SHH protein plays a fundamental role in the organization of the nervous system, among other functions. Therefore, our results indicate that RIC-8B plays an essential role during the embryogenesis, and that this role can be related to the role played by SHH. Furthermore, because the SHH signaling pathway occurs in primary cilia in the target cells, our data raise the interesting possibility that the role played by RIC-8B is related to ciliary functions, both in adult mice (in this case, in olfactory cilia), and in the embryo (in this case, in primary cilia)

Pesquisas demonstram que estímulos olfatórios podem afetar a identificação expressões faciais, embora os resultados sejam inconsistentes. De acordo com estes estudos, odores podem aumentar a velocidade do processo, porém somente as expressões de nojo e felicidade foram estudadas. Este estudo teve como objetivo investigar a influência de odorantes no reconhecimento de cinco expressões faciais (medo, raiva, felicidade, nojo e tristeza). Em dois experimentos, foi realizada uma tarefa de tempo de reação (RT) enquanto os sujeitos foram expostos a estimulação olfatória. Os participantes avaliaram as propriedades de valência e ativação (arousal) dos odores após a realização da tarefa. No primeiro experimento a performance dos participantes não foi diferente entre as estimulações olfativas, e uma segunda análise foi realizada organizando-se os dados de acordo com a valência hedônica subjetiva dos odores. Os resultados demonstram que as expressões de tristeza foram reconhecidas significativamente mais devagar que felicidade e raiva na estimulação afetiva agradável, mas não para as condições neutra (sem odor) e desagradável. No experimento 2 foram encontradas diferenças significativas entre o limiar para percepção de tristeza e felicidade para o odorante agradável, mas não nas outras condições. Concluímos que a influência dos odorantes na percepção de expressões faciais provavelmente não se limita a efeitos de congruência e incongruência emocional, e possivelmente pode ser passível de influência ativação dos odores. Nossos resultados do experimento 1 foram mais coerentes quando consideramos a valência como uma dimensão de aproximação/afastamento. Estes resultados salientam a importância da seleção do grupo de estímulos e da análise da reação emocional dos participantes aos odores, em experimentos que utilizem estimulação olfativa / Research demonstrated that olfactory stimuli can influence the identification of facial expressions, although the results are inconsistent. According to these experiments, odors can enhance the speed of the process, but only disgust and happiness were tested. The objective of this study was to investigate the influence of odorants in recognition of five facial expressions (fear, anger, happiness, disgust ad sadness). In two experiments, a reaction time task (RT) was performed meanwhile subjects were exposed to olfactory stimulation. Participants rated the properties of valence and arousal of the odors after completing the task. In the first experiment the participants performance was not different between the odorants, and a second analysis was conducted with the data organized according to the subjective hedonic valence attributed to the odors. subjective hedonic valence attributed to the odors. Results show that the facial expressions of sadness were identified significantly slower than happiness and anger in the pleasant affective stimulation, but not for the neutral and unpleasant conditions. In experiment 2 significant differences were found between the perception thresholds of happiness and sadness for the pleasant odorant, but not in the other conditions. We conclude that the influences of the olfactory stimuli in the perception of facial expressions are probably not limited to emotional congruence and incongruence effects, and are possibly influenced by the arousal of the odors. Our results of experiment 1 were more coherent when we considered valence as a dimension of approach/withdrawal. This data reinforces the importance of odor stimuli selection and analysis of the emotional reactions elicited by the odorants in each participant