A produção in vitro de embriões em vacas Holandesas de alta produção (Bos taurus) ainda apresenta baixa eficiência quando comparada à de fêmeas Bos indicus. Nesse contexto, a utilização de novilhas de 8-10 meses de idade como doadoras de oócitos pode ser uma alternativa para melhorar a eficiência dessa biotecnologia e acelerar o ganho genético pela redução do intervalo de gerações dos rebanhos. Entretanto, as informações acerca da produção in vitro de embriões originados de doadoras pré-púberes são controversas na literatura. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar a aspiração folicular, seguida da produção in vitro (PIVE) de embriões de doadoras pré-púberes da raça Holandesa e posteriormente, a taxa de concepção após a transferência dos embriões. Um total de 120 doadoras de quatro categorias animais: novilhas pré-púberes (PP, n = 30), novilhas púberes (PU, n = 30), vacas lactantes (VL, n = 30) e vacas não lactantes (VNL, n = 30) foi submetido à aspiração folicular (OPU), sem sincronização prévia da onda de crescimento folicular. Realizaram-se seis sessões de OPU com cinco animais de cada categoria, ou seja, vinte doadoras por sessão. Imediatamente antes da OPU, os folículos ovarianos foram quantificados e classificados de acordo com o diâmetro [folículos pequenos (FP = < 6 mm), folículos médios (FM = 6 a 10 mm) e folículos grandes (FG = > 10 mm)]. Posteriormente, todos os folículos &ge; 2 mm foram puncionados e o total de estruturas recuperadas, quantidade e qualidade de oócitos viáveis foram registrados. Os oócitos viáveis foram submetidos à produção in vitro e o desenvolvimento embrionário (taxa de clivagem e de blastocisto) foi avaliado. Sêmen sexado do mesmo touro e partida foi utilizado para fertilização dos oócitos de todas as categorias de doadoras. Os embriões produzidos (n = 206) foram transferidos em receptoras cruzadas (Bos taurus x Bos indicus) de corte. Número de folículos no dia da OPU, proporção de folículos conforme o diâmetro, número de oócitos totais e viáveis recuperados, taxa de recuperação, taxa de clivagem, número de embriões produzidos por OPU e taxa de blastocisto foram variáveis analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS&reg; e a taxa de concepção pelo teste exato de Fisher. Não foi observada diferença entre os grupos experimentais quanto ao número total de folículos aspirados (PP: 18,3 ± 2,1; PU: 17,3 ± 1,2; VL: 14,0 ± 1,0; VNL: 17,7 ± 1,7; P = 0,08). Entretanto, verificou-se que as doadoras PP apresentaram maior proporção de folículos pequenos (PP: 58,4% a; PU: 45,7% b; VL: 41,7% b; VNL: 50,6% b; P < 0,0001) quando comparado às demais categorias. Apesar do semelhante número de oócitos totais recuperados (PP: 14,2 ± 2,2; PU: 13,1 ± 1,1; VL: 9,8 ± 1,1; VNL: 14,6 ± 1,7; P = 0,12), PP apresentaram quantidades intermediárias de oócitos viáveis (PP: 10,5 ± 1,8ab; PU: 8,3 ± 0,8 ab), sendo que VNL obtiveram maior número de oócitos viáveis (11,5 ± 1,4 a; P = 0,03) quando comparadas às VL (6,5 ± 0,9 b). Ainda, doadoras PP apresentaram menor taxa de clivagem (PP: 68,6% b; PU: 98,8% a; VL: 87,6% a; VNL: 90,1% a; P < 0,0001), menor número de embriões produzidos por sessão de OPU (PP: 0,5 ± 0,2 b; PU: 1,1 ± 0,2 b; VL: 1,2 ± 0,4 b; VNL: 4,2 ± 0,6 a; P < 0,0001) e menor taxa de blastocisto (PP: 4,8% c; PU: 12,7% b; VL: 18,0% b; VNL: 36,5% a; P < 0,0001) quando comparada às demais categorias. Por fim, observou-se diferença na taxa de concepção após transferência de embriões oriundos de doadoras novilhas e vacas [PP: 0,0% (0/15) b; PU: 9,7% (3/28) b; VL: 28,6% (10/25) a; VNL: 32,7% (36/74) a; P < 0,05]. Dessa forma, conclui-se que doadoras pré-púberes da raça Holandesa apresentam baixa competência para produção in vitro de embriões, sendo vacas não lactantes a categoria mais eficiente para programas de PIVE. Ainda, embriões de novilhas pré-púberes apresentam taxas de concepção inferiores a de embriões de vacas lactantes e não lactantes. Entretanto, taxas de concepção semelhantes foram verificadas entre embriões de novilhas pré-púbere e púberes. / The in vitro embryo production of high productive dairy cows (Bos taurus) presents low efficiency in comparison to Bos indicus females. In this context, the use of heifers of 8-10 months age as oocyte donors could be an alternative in order to improve results of this biotechnology and accelerate the genetic gain by the reduction of the interval between generations. However, informations about the in vitro production of embryos coming from prepubertal donors are controversial at literacture. Thus, the objective of the present study was to evaluate the in vivo ovum pick-up (OPU), followed by in vitro embryo production of prepubertal Holstein donors and the conception rate after embryo transfer. The study was performed at Santa Rita farm, with a completely randomized experimental design, performed in six consecutive replicates with distinct animals. A total of 120 donors of four animal categories: prepubertal heifers (PP, n = 30), pubertal heifers (PU, n = 30), lactating cows (LC, n = 30) and non-lactating cows (NLC, n = 30) were submitted to OPU without previous synchronization of follicular wave. Six OPU sessions ware performed with five animals of each category i.e., 20 donors per session. Immediately before the OPU, all follicles were quantified and classified according to their diameter [small (SF &le; 6 mm), medium (MF = 6 to 10 mm) and large (LF &ge; 10 mm) follicles]. Subsequently, all visible follicles (&ge; 2 mm) were punctured and the total recovered structures, quantity and quality of viable oocytes were registered. All viable oocytes were submitted to the in vitro embryo production and their development (cleavage and blastocyst rate) was evaluated. Sex-sorted sperm from the same bull and semen batch were used for the oocytes fertilization of all donor categories. The embryos produced (n = 206) were transferred in crossbred recipients (Bos taurus x Bos indicus). Number of follicles at OPU day, proportion of follicles according to its diameter, number of total and viable oocytes, recovery rate, clivage rate, number of embryos produced per OPU and blastocyst rate were the variables analyzed by the GLIMMIX procedure of SAS&reg; and conception rate by the Fishers exact test. No difference was observed between the experimental groups, regarding the total number of aspirated follicles (PP: 18.3 ± 2.1; PU: 17.3 ± 1.2; LC: 14.0 ± 1.0; NLC: 17.7 ± 1.7; P = 0.08). However, PP donors presented higher proportion of small follicles (PP: 58.4% a; PU: 45.7% b; LC: 41.7% b; NLC: 50.6% b; P < 0.0001) in comparison to other categories. Despite the similar number of total recovered oocytes (PP: 14.2 ± 2.2; PU: 13.1 ± 1.1; LC: 9.8 ± 1.1; NLC: 14.6 ± 1.7; P = 0.12), PP presented intermediate quantity of viable oocytes (PP: 10.5 ± 1.8 ab; PU: 8.3 ± 0.8 ab) and NLC produced more viable oocytes (11.5 ± 1.4 a; P = 0.03) in comparison to LC (6.5 ± 0.9 b). Still, PP donors presented lower clivage rate (PP: 68.6% b; PU: 98.8% a; LC: 87.6 a; NLC: 90.1 a; P < 0.0001), fewer embryos produced per OPU session (PP: 0.5 ± 0.2 b; PU: 1.1 ± 0.2 b; LC: 1.2 ± 0,4 b; NLC: 4.2 ± 0.6 a; P < 0.0001) and lower blastocyst rate (PP: 4.8% c; PU: 12.7% b; LC: 18.0% b; NLC: 36.5% a; P < 0.0001) in comparison to other categories. Lastly, it was observed a different conception rate among heifers and adult cows [PP: 0.0% (0/15)b; PU: 9.7% (3/28)b; LC: 28.6% (10/25)a; NLC: 32.7% (36/74)a; P < 0.05]. Thus, it is concluded that prepubertal Holstein donors present low competence for in vitro embryo production, being non-lactating cows the most efficient category for IVEP. Yet, PP embryos resulted in inferior conception rate in comparison to LC and NLC embryos. However, similar conception rate was verified between PP and PU embryos.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a produção in vitro de embriões (PIVE) em novilhas da raça Holandesa. Um total de 179 novilhas de três categorias [novilhas pré púberes (PP), n = 60; novilhas púberes (PU), n = 60 e novilhas prenhes (PR), n = 59)] foram submetidas à aspiração folicular (OPU) sem sincronização prévia da onda de crescimento folicular. Realizaram-se seis sessões de OPU com dez animais de cada categoria por réplica. O total de estruturas recuperadas e a quantidade e qualidade de oócitos foram registrados. Os oócitos viáveis foram submetidos à PIVE e foi avaliado o desenvolvimento embrionário (taxa de clivagem e de blastocisto). Foi utilizado sêmen de um único touro e de mesma partida para fertilização dos oócitos. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS&reg;. Novilhas PU apresentaram maior população folicular quando comparadas às novilhas PP e PR (PP = 13,7b&#177; 1,43; PU = 20,2 &#177; 1,64a; PR = 14,0 &#177; 1,74b; P = 0,0002). Não foi verificada diferença na taxa de recuperação de oócitos entre os grupos experimentais (PP = 66,6%; PU = 75,4%; PR = 62,9%; P = 0,26). No entanto, houve maior número de oócitos recuperados em novilhas PU quando comparado às demais categorias (PP = 9,75 &#177; 1,29b; PU = 15,6 &#177; 1,42a; PR = 9,85 &#177; 1,60b; P = 0,002). Não houve diferença na taxa de oócitos viáveis (PP = 48,5%; PU = 58,9% e PR = 58,3%; P = 0,41), entretanto, a taxa de clivagem foi inferior em novilhas PP (PP = 28,2%c; PU = 55,2%b; PR = 67,8%a; P &lt; 0,0001). Além disso, a taxa de blastocisto (PP = 2,3%c; PU = 11,9%b; PR = 20,3%a; P &lt; 0,0001) e o número de embriões produzidos por OPU (PP = 0,13 &#177; 0,05c; PU = 0,90 &#177; 0,17b; PR = 1,76 &#177; 0.32a; P &lt; 0,0001) foi inferior em novilhas PP. Os dados do presente estudo são indicativos de que novilhas PR apresentam maior eficiência na PIVE quando comparadas às novilhas PP e PU. Ainda, observa-se que os resultados da PIVE em novilhas PP são significativamente inferiores às novilhas PU. / O objetivo do presente estudo foi avaliar a produção in vitro de embriões (PIVE) em novilhas da raça Holandesa. Um total de 179 novilhas de três categorias [novilhas pré púberes (PP), n = 60; novilhas púberes (PU), n = 60 e novilhas prenhes (PR), n = 59)] foram submetidas à aspiração folicular (OPU) sem sincronização prévia da onda de crescimento folicular. Realizaram-se seis sessões de OPU com dez animais de cada categoria por réplica. O total de estruturas recuperadas e a quantidade e qualidade de oócitos foram registrados. Os oócitos viáveis foram submetidos à PIVE e foi avaliado o desenvolvimento embrionário (taxa de clivagem e de blastocisto). Foi utilizado sêmen de um único touro e de mesma partida para fertilização dos oócitos. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS&reg;. Novilhas PU apresentaram maior população folicular quando comparadas às novilhas PP e PR (PP = 13,7b&#177; 1,43; PU = 20,2 &#177; 1,64a; PR = 14,0 &#177; 1,74b; P = 0,0002). Não foi verificada diferença na taxa de recuperação de oócitos entre os grupos experimentais (PP = 66,6%; PU = 75,4%; PR = 62,9%; P = 0,26). No entanto, houve maior número de oócitos recuperados em novilhas PU quando comparado às demais categorias (PP = 9,75 &#177; 1,29b; PU = 15,6 &#177; 1,42a; PR = 9,85 &#177; 1,60b; P = 0,002). Não houve diferença na taxa de oócitos viáveis (PP = 48,5%; PU = 58,9% e PR = 58,3%; P = 0,41), entretanto, a taxa de clivagem foi inferior em novilhas PP (PP = 28,2%c; PU = 55,2%b; PR = 67,8%a; P &lt; 0,0001). Além disso, a taxa de blastocisto (PP = 2,3%c; PU = 11,9%b; PR = 20,3%a; P &lt; 0,0001) e o número de embriões produzidos por OPU (PP = 0,13 &#177; 0,05c; PU = 0,90 &#177; 0,17b; PR = 1,76 &#177; 0.32a; P &lt; 0,0001) foi inferior em novilhas PP. Os dados do presente estudo são indicativos de que novilhas PR apresentam maior eficiência na PIVE quando comparadas às novilhas PP e PU. Ainda, observa-se que os resultados da PIVE em novilhas PP são significativamente inferiores às novilhas PU. The objective of the present study was to evaluate the in vitro embryo production in Holstein heifers. A total of 179 heifers of three categories [prepubertal heifers (PP), n = 60; pubertal heifers (PU), n = 60 and; pregnant heifers (PR), n = 59)] were submitted to Ovum Pick-Up (OPU) without previous synchronization of follicular wave. Six OPU sessions were conducted with ten animals of each category per session. The total number of retrieved structures and the quantity and quality of the oocytes were registered. The viable oocytes were submitted to in vitro embryo production and the embryonic development (cleavage and blastocyst rates) was assessed. Semen from a single sire was used for oocytes fertilization. The variables were analyzed using the GLIMMIX procedure of SAS&reg;. PU heifers presented greater follicular population when compared to the PP and PR heifers (PP = 13.7b &#177; 1.43; PU = 20.2 &#177; 1.64a; PR = 14.0&#177; 1.74b; P = 0.0002). No difference was observed among the experimental groups regarding the oocyte recovery rate (PP = 66.6%; PU = 75.4%; PR = 62.9%; P = 0.26). However, PU heifers had more recovered oocytes when compared to the other categories (PP = 9.75 &#177; 1.29b; PU = 15.6 &#177; 1.42a; PR = 9.85 &#177; 1.60b; P = 0.002). There was no significant differences on the viable oocytes rate (PP = 48.5%; PU = 58.9% and PR = 58.3%; P = 0.41). Moreover, the cleavage rate was lower in PP heifers (PP = 28.2%c; PU = 55.2%b; PR = 67.8%a; P &lt; 0.0001). The blastocyst rate (PP = 2.3%c; PU = 11.9%b; PR = 20.3%a; P &lt; 0.0001) and the number of produced embryos per OPU (PP = 0.13 &#177; 0.05c; PU = 0.90 &#177; 0.17b; PR = 1.76 &#177; 0.32a; P &lt; 0.0001) was lower for PP heifers. The data of the present study indicate that PR heifers present higher efficacy on the in vitro embryo production when compared to PP and PU heifers. Furthermore, it is observed that the IVEP results in PP heifers is significantly inferior to PU heifers.

Dez vacas Gir foram adaptadas em tie-stall por 28 dias (Fase I/ pré-tratamento/ dias -28 a -1), sendo submetidas a duas sessões de OPU (dias -14 e -7). Na Fase II (tratamento/ dias 0 a 28) as mesmas foram divididas em Controle (GC/n=5) e Estresse (GE/n=5). O GC permaneceu em normotermia e o GE foi submetido a estresse calórico (EC) em câmara climática com temperatura e umidade controladas [38°C e 80% UR (DIA); 30°C e 80% UR (NOITE)], por 28 dias, procendendo-se, nesta fase, cinco OPU/fêmea. Na Fase III (pós-tratamento / dias 28 a 147) todas as fêmeas retornaram à normotermia (ambiente), sendo realizadas mais 17 OPU/fêmea. Diariamente foram registradas as temperaturas de bulbo seco (TBS) e úmido (TBU) e o índice de temperatura e umidade (ITU). As respostas fisiológicas avaliadas foram consumo de matéria seca (CMS), freqüência respiratória (FR), temperatura retal (TR), temperatura cutânea (TC), taxa de sudação (TS) e concentrações de cortisol e progesterona (P4). Fase luteínica foi definida como o período compreendido entre colheitas com P4 <1,0ng/mL. Semanalmente, com auxílio de um ultra-som (Scanner 200s) equipado com transdutor setorial intravaginal de 7,5MHz, foram aferidas a população folicular e o diâmetro dos dois maiores folículos. Em seguida, os folículos &ge;3mm foram puncionados e os oócitos recuperados foram avaliados morfologicamente, selecionados, maturados, fertilizados e cultivados in vitro. Os efeitos das variáveis classificatórias (animal, tratamento, fase e semana/sessão de OPU) sobre as variáveis resposta, e suas interações, foram analisadas por ANOVA para medidas repetidas no tempo (PROC MIXED do SAS®) e pelo teste de Qui-quadrado, com significância de 5%. Um animal foi excluído do GE após seis sessões, permanecendo somente quatro animais no GE e cinco no GC. O ITU durante o tratamento foi aumentado no GE em relação ao GC (93,1±0,15 vs. 73,6±0,5, respectivamente; P<0,05), acompanhado de uma elevação altamente significativa na FR, TR e TC (P<0,0001), caracterizando EC efetivo no grupo tratado. Na Fase II o GE apresentou CMS inferior ao GC (6,9±0,2 vs. 8,0±0,3, respectivamente; P<0,05). Nas fases pré e pós-estresse todas as variáveis climáticas e fisiológicas foram similares (P>0,05) entre tratamentos. Não houve efeito do EC na TS e nas concentrações de cortisol. O EC ocasionou longos períodos de aciclicidade (P4 <1ng/mL) e ciclos de curta duração (GE; 37,5% vs. GC; 8,6%; P<0,001). Houve efeito de sessão de OPU, mas não de tratamento no número de folículos visualizados e CCO\'s recuperados. Houve aumento no diâmetro folicular e codominância no GE. O percentual de CCO\'s selecionados para MIV e a taxa de clivagem não sofreram efeito do EC, contudo houve efeito imediato e tardio na taxa de produção de blastocistos, sendo de 35,5% no GE vs. 25,0% no CG (P=0,15) na fase II, e 27,2% vs. 13,3% (P<0,05) para os respectivos grupos, na fase III. De acordo com os dados aqui apresentados conclui-se que o EC em Bos indicus afetou negativamente a dinâmica ovariana, ocasionando falha no mecanismo de dominância folicular e diminuição na produção in vitro de embriões por um período superior a 105 dias. / Ten Gir (Bos indicus) cows were kept in tie-stalls for 28 days (Phase I/ before-trial/ days -28 to -1). Cows were submitted to two OPU sessions (days -14 and -7). In Phase II (trial/ days 0 to 28), cows were divided in Control (C/n=5) and Heat-stressed (HS/n=5). The CG remained in thermoneutral environment and the HS was kept under heat-stress in environmental chamber with controlled temperature and humidity [38°C and 80%UR (DAY), 30°C and 80%UR (NIGHT)], for 28 days. During this phase five OPU sessions were accomplished. In Phase III (post-trial/ days 28 to 147) all cows returned to thermoneutral environmental temperatures and 17 OPU sessions were performed. The dry (DBT) and humid (HBT) bulb temperatures were daily measured and obtained the temperature-humidity index (THI). Physiological responses as dry matter intake (DMI), respiratory frequency (RF), rectal temperature (RT), skin temperature (ST), sweating rate (SR), plasma cortisol and progesterone (P4) were assessed. Luteal phase was defined as the period between two samples with P4 below 1.0ng/mL. Once a week, prior to OPU procedure, the number of follicles in the ovary and the diameter of the two biggest follicles were evaluated using an ultrasound (Scanner 200s, 7.5MHz sectorial probe). Subsequently, all follicles &ge;3mm were aspirated and the oocytes morphologically evaluated, selected, maturated, fertilized and cultivated for embryo production in vitro. The effects of independent variables (cow, treatment, phase, and week/OPU session) on the dependent variables were analyzed by ANOVA for repeated measures (PROC MIXED of SAS®) and by Chi-square test, both with a significance level of 5%. One animal was excluded from HS after sixth session, having remained four vs. five cows for CG and HS groups respectively. The THI increased during heat-stress treatment (93.1 ± 0.15 vs. 73.6 ± 0.5 for HS and CG respectively, P<0.05), simultaneously to a significant increase in RF, RT and ST (P<0.0001). It was characterized as effective heat-stress on the treated cows. In phase II the HS showed lower DMI than CG (6.9±0.2 vs. 8.0±0.3 respectively, P<0.05). All environmental and physiologic variables were similar (P>0.05) between treatments in the periods before and post heat-stress. There was no effect of heat-stress on SR and cortisol levels. The HS treatment induced to longer periods of ovarian inactivity (P4 <1ng/mL) as well as short cycles (HS, 37.5% vs. CG, 8.6%, P<0.001). There was effect of OPU session but not of treatment on number of visualized follicles or recovered oocytes. The diameter of the biggest follicles and incidence of codominance increased in HS treatment (P<0.05). Moreover, there was no effect of heat-stress on percentage of COCs selected to IVF or cleaved. However, immediate and delayed effects were observed on blastocists yield (35.5% vs. 25.0%, P=0.15, for CG and HS groups on the phase II and 27.2% vs. 13.3%, P<0.05, for respective groups on the phase III). Our results suggest that the ovarian dynamics of Bos indicus cattle was affected by heat-stress exposure, showing failures on follicular dominance and on in vitro embryos yield for at least 105 days after the heat-stress subside.

Nos últimos anos, o emprego da aspiração folicular (OPU) e produção in vitro de embriões (PIVE) têm crescido mundialmente nos rebanhos bovinos. A OPU-PIVE viabiliza a rápida multiplicação do material genético, utilizando tanto a base genética da fêmea como do macho. No entanto, fêmeas de leite Bos taurus apresentam algumas peculiaridades, como menor população de folículos antrais e inferior qualidade oocitária, as quais foram apontadas como fatores responsáveis pela reduzida eficiência da técnica nesses rebanhos. Frente às dificuldades para o estabelecimento de programas de OPU-PIVE eficientes em vacas de leite Bos taurus, três experimentos foram conduzidos envolvendo diferentes tipos de tratamentos superestimulatórios em doadoras de oócitos lactantes e não lactantes. O primeiro estudo teve como objetivo aumentar a PIVE em doadoras da raça Holandesa lactantes e não lactantes submetidas ao tratamento tradicional de superstimulação com doses decrescentes de FSH porcino (FSHp) a cada 12 h, previamente à OPU. Nesse estudo, as doadoras (n = 15 vacas lactantes e n = 15 não lactantes da raça Holandesa) receberam protocolo para sincronização da emergência da onda folicular [protocolo a base de benzoato de estradiol (BE) e progesterona (P4)] e foram submetidas aos tratamentos de superestimulação em um delineamento experimental cross-over. Os outros dois estudos (n = 23 novilhas da raça Holandesa e n = 72 vacas não lactantes da raça Holandesa) foram desenvolvidos para avaliar diferentes diluentes para o FSHp com o objetivo de viabilizar a superestimulação com apenas uma aplicação de FSHp. No geral, os estudos avaliaram o efeito da superestimulação no perfil plasmático de FSH, na proporção de folículos classificados como pequenos (<6mm), médios (6-10mm) ou grandes (>10mm), conforme diâmetro folicular, na PIVE e no estabelecimento gestacional após transferência de embriões. A superestimulação aumentou a proporção de folículos médios, aumentou a competência oocitária e resultou em maior produção de blastocistos por sessão de OPU. A aplicação única de FSHp associado ao diluente de liberação lenta (ácido hialurônico), resultou em semelhante área sob a curva de FSH, semelhante proporção de folículos pequenos, médios e grandes e semelhante PIVE comparado ao tratamento superestimulatório tradicional com doses de FSHp administradas a cada 12h. Independentemente do diluente e da dose de FSHp utilizada, o tratamento superestimulatório resultou em maior produção de blastocistos por sessão de OPU comparado às vacas não tratadas com FSHp. Adicionalmente, semelhante taxa de estabelecimento gestacional foi observada, independentemente do tratamento utilizado na doadora. Portanto, os dados obtidos no presente estudo permitem concluir que independentemente do tipo de tratamento (diluente para FSHp ou dose utilizada de FSHp), a superestimulação previamente ao processo de OPU, aumentou o desenvolvimento de embriões in vitro, número de blastocistos por sessão de OPU e resultando em semelhante taxa de estabelecimento gestacional após transferência de embriões. / In the last years, the use of ovum pick-up (OPU) and in vitro produced embryo (IVEP) technology has worldwide increased in cattle herds. The OPU-IVEP enable a rapid individual multiplication based on the female and male donor genetic. However, Bos taurus dairy females present some peculiarities, as reduced antral follicle population and lower oocyte quality, and these factors have been awarded as responsible to the reduced technique efficiency among these herds. Given the difficulties of establishing OPU-IVEP programs with high efficiency in Bos taurus dairy cows, three studies were carried out, involving different types of superstimulation treatments in lactating and non-lactating Holstein donors. The first study aimed to increase IVEP in lactating and non-lactating Holstein dairy donors submitted to the traditional twice-daily porcine FSH (pFSH) superstimulation treatment prior to the OPU. For this purpose, donors (n = 15 lactating and n = 15 non-lactating Holstein cows) received the follicular wave synchronization protocol [estradiol benzoate (EB) and progesterone (P4) based protocol] and were submitted to superstimulation treatment in a cross-over design. Other two experiments were performed (n = 23 Holstein heifers and n = 72 non-lactating Holstein cows) to evaluate different pFSH diluents to enable superstimulation with a single injection. In general, these studies evaluated the effect of superstimulation on the plasmatic FSH profile, proportion of follicles sizes previous to OPU (small: <6mm; medium: 6-10mm; and large follicles: >10mm), on in vitro embryo production and pregnancy establishment after the produced embryo transfer. The superstimulation treatment improved the proportion of medium sized-follicles, improved oocyte competence and resulted in greater amount of blastocyst per OPU session. A single injection of pFSH combined with a slow release carrier (hyaluronan), resulted in similar FSH area under curve, proportion of follicles sizes previous to OPU and in vitro embryo production compared to the twice-daily superstimulating treatment. Regardless pFSH diluent and dose, superstimulating hormone resulted in greater number of blastocysts per OPU session compared to the non-pFSH treated donors. Additionally, similar pregnancy establishment was observed, regardless embryo donor treatment. Therefore, with the present data, we can conclude that regardless treatment type (pFSH diluent or dose), the superstimulation procedure prior to the OPU, enhanced in vitro embryo development, increased the number of blastocyst per OPU session and resulted in similar pregnancy establishment after embryo transfer.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-04-10T18:18:36Z No. of bitstreams: 1 2012 - Marcus Andr? Ferreira S?.pdf: 393876 bytes, checksum: 9d184a085854acf9828da371a7e2b732 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T18:18:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Marcus Andr? Ferreira S?.pdf: 393876 bytes, checksum: 9d184a085854acf9828da371a7e2b732 (MD5) Previous issue date: 2012-07-17 / CAPES / The present experiment aimed to verify if different vacuum pump negative pressures (150, 280 e 400 mmHg) can influence the oocyte recovery rate per preovulatory follicle aspirated. Hence, 21 estrous cycles from regularly cycling mares were subject to OPU. The estrous cycles were sorted in three groups (G150=150 mmHg; G280=280 mmHg; G400=400 mmHg) in the following sequence: G150= 150mmHg (n=6); G280= 280mmHg (n=7); G400= 400mmHg (n=6). During the estrus, the ovarian activity of the mares was daily monitored using the transrectal ultrasound technique until the largest follicle reached at least a diameter of 35mm and endometrial edema secore 2.5 was identified on ultrasonographic evaluation, when 1000UI of hCG administered intravenuous. Approximately 24 hours after the hCG administered, the mares were monitored by rectal palpation and ultrasonography every six hours to follicle evaluation. In the case of imminent indication of ovulation or formation of hemorrhagic follicle, the follicle would be immediately aspirate. The aspirations occurred in 32,45?1,92h after the hCG administration. The transvaginal aspirations were performed with ultrasound apparatus equipped with a convex transducer of 5,0mHz with polyethylene guide containing a double lumen needle of 12G. The follicular fluid collected from each follicle was frozen and the aspirated content was transferred to a Petri Dishes and thoroughly examined on the stereomicroscope to identify the oocytes presence. In order to statistically evaluate the influence of different pressures on the oocyte recovery, were used Chi-Squared test (a 5% significance) and Fisher Exact Test, when recommended. The recovery rate was 31,57% (6/19), being 16,66 % (1/6) in G150, 42,85 % (3/7) in G280 and 33,33 % (2/6) in G400. There was no difference among groups (p>0,05). From the results of the current study, it is possible to conclude that the negative pressure of the vacuum pump is not a determining factor to increase the oocyte recovery and other aspects would possibly have more significant influence . / O presente experimento visou investigar se diferentes press?es negativas da bomba de v?cuo (150, 280 e 400mmHg) podem influenciar a taxa de recupera??o oocit?ria por fol?culo preovulat?rio aspirado. Para tanto, foram submetidos a ovum pick up 21 ciclos estrais de ?guas ciclando regularmente, distribu?dos em tr?s grupos (G150= 150 mmHg; G280= 280 mmHg; G400= 400 mmHg), na seguinte ordem: G150= 150 mmHg (n=6); G280= 280 mmHg (n=7); G400= 400 mmHg (n=6), definida por meio de sorteio. Durante estro, a atividade ovariana das ?guas foi monitorada diariamente atrav?s da t?cnica ultrassonogr?fica transretal at? que o maior fol?culos atingisse pelo menos 35mm de di?metro e edema endometrial grau 2,5 durante a avalia??o ultrassonogr?fica, quando ent?o administrou-se 1000UI de hCG, por via endovenosa. Aproximadamente 24 horas ap?s a administra??o de hCG as ?guas foram submetidas a exame ultrassonogr?fico a cada seis horas para avalia??o folicular. Caso houvesse indica??o iminente de ovula??o ou forma??o de fol?culo hemorr?gico, o mesmo seria imediatamente aspirado. As aspira??es ocorreram em 32,45?1,92h ap?s a aplica??o do hCG fazendo uso de ultrassom equipado com um transdutor convexo de 5,0mHz com guia de polietileno contendo uma agulha de duplo l?men de 12G. O fluido folicular coletado de cada fol?culo foi congelado e o conte?do aspirado transferido para uma Placa de Petri e examinado minuciosamente ao estereomicrosc?pio para localiza??o dos o?citos. Para avaliar estatisticamente o efeito das diferentes press?es sobre a recupera??o oocit?ria, foi utilizado o teste Qui-Quadrado (a 5% de signific?ncia) e Fisher Exato, quando recomendado. A taxa de recupera??o foi de 31,57% (6/19), sendo 16,66 % (1/6) no G150, 42,85 % (3/7) no G280 e 33,33 % (2/6) no G400. N?o houve diferen?a entre os grupos (p>0,05). Atrav?s dos resultados obtidos no presente estudo ? poss?vel concluir que a press?o negativa da bomba de v?cuo utilizada n?o ? o determinante para elevar a recupera??o oocit?ria, possivelmente havendo outros fatores atuando de modo mais importante.

Biotecnologias como a Ovum Pick-Up e a Produção In vitro de embriões (OPU-PIVE) tem sido uma importante ferramenta para alcançar o melhoramento genético rápido nos rebanhos, diminuindo o intervalo entre gerações. No Brasil, a PIVE está em fase de crescimento e representa 70,7% de toda a produção in vitro mundial. Contudo a OPU-PIVE é ainda ineficiente em vacas de leite, especialmente devido à sua reduzida população folicular. Muitos estudos têm mostrado um efeito positivo do FSH em gado de leite e corte. Recentemente, a pré-estimulação com FSH mostrou ser capaz de aumentar o diâmetro dos folículos aspirados e a porcentagem de embriões transferíveis. O FSH estimula o recrutamento dos folículos na fase antral, fazendo com que eles possam se desenvolver até o momento em que ocorre a divergência e um ou mais folículos se torne dominante. A hipótese do presente estudo é que o uso de FSH (200 mg), fracionado em 4 ou 6 aplicações, em vacas holandesas não lactantes, com emergência de onda folicular sincronizada, aumenta o número de folículos ovarianos, o número de oócitos viáveis e a quantidade de embriões na produção in vitro. Trinta e seis vacas Holandesas não lactantes foram utilizadas como doadoras de oócitos e distribuídas em três tratamentos: Controle (C), 4 aplicações de FSH (F4) e 6 aplicações de FSH (F6). Todas as vacas foram submetidas ao mesmo protocolo de sincronização de emergência de onda folicular, diferindo apenas pela administração e número de 4 ou 6 doses de FSH, conforme descrito acima. Em dia aleatório do ciclo estral (D0), todas as vacas receberam um dispositivo de P4 (Primer&reg;, Tecnopec-Agener União, São Paulo, SP, Brasil) e 2 mg de benzoato de estradiol (Ric-BE&reg;, Tecnopec-Agener União, São Paulo, SP, Brasil). Três dias após (D3), foi administrado 0,530 mg de Cloprostenol Sódico (Cioprostinn&reg;, Innovare Biotecnologia e Saúde Animal Ltda, Monte Aprazível, SP, Brasil), induzindo a luteólise com a intenção de liberar espaço no estroma ovariano para o crescimento folicular e facilitar a visualização de folículos na OPU. Vacas do grupo C não receberam tratamentos adicionais. Vacas do grupo F4 receberam 200 mg de FSH (Folltropin - Bioniche Anim,al Health, Belleville, ON, Canadá) fracionados em 4 aplicações de equivalentes concentrações em intervalos de 12 h, iniciando no D4 pela manhã. Vacas do grupo F6 receberam 200 mg de FSH fracionados em 6 aplicações de equivalentes concentrações em intervalos aproximados de 12 h, tendo início no D3 pela manhã. No D7, o dispositivo foi removido e a OPU realizada concomitantemente à contagem dos folículos existentes nos ovários. Os oócitos considerados viáveis foram fertilizados in vitro com sêmen sexado de touros da raça Holandesa. Os dados foram analisados pelo PROC GLIMIX do SAS 9.3, utilizando contrastes ortogonais C1 (C x FSH) e C2 (F4 x F6). Não houve efeito de tratamento no número de folículos (C = 53,3 &plusmn; 4,9 vs FSH = 51,36 &plusmn; 3,1;P = 0,89), número total de oócitos (C = 19,46 &plusmn; 1,64 vs FSH = 18,47 &plusmn; 1,27; P = 0,55), número de oócitos viáveis (C = 12,57 &plusmn; 1,26 vs FSH = 12,70 &plusmn; 1,03; P= 0,606), taxa de recuperação de oócitos (C = 36,5% vs FSH = 36,0%; P = 0,48) e produção de embriões in vitro (C = 4,11 &plusmn; 0,52 vs FSH = 4,32 &plusmn; 0,46; P = 0,79). Apesar de não ter havido efeito no número de folículos, o tratamento com FSH alterou a distribuição dos mesmos, proporcionando o aumento no número de folículos médios (6 a 10 mm). No entanto, não houve efeito do tratamento com FSH no número de oócitos totais e viáveis recuperados, nem na produção de embriões. / Reproductive biotechnologies such as Ovum Pick-Up and in vitro Embryo production (OPU-IVEP) have been widely used as important tools to achieve faster genetic improvement in herds, diminishing the intervals between generations. In Brazil, in vitro Embryo Production (IVEP) is growing in popularity and accounts for 70.7% of all in vitro embryo production worldwide. However, the OPU-IVEP is still poorly efficient in high-producing dairy cattle, especially because of their reduced follicular population. Several studies have shown a positive effect of FSH on OPU-IVEP yeld. Recently, FSH pre-stimulation has shown to be able to increase the diameter of aspirated follicles and the percentage of transferable embryos. The hormone FSH stimulates follicle recruitment in the antral phase, in the way that they develop until the moment of divergence and one or more follicles becomes dominant. The hypothesis of this study is that the use of 200mg FSH split into 6 doses in non-lactating Holstein cows with a synchronized follicular wave emergence increases the number of follicles, the recovery rate and the number of embryos produced in vitro. Thirty six Holstein cows used as oocyte donors were homogenously allocated to one of three treatment groups in a 3x3 Latin square design: Control (C); 4 doses of FHS (FSH4); 6 doses of FSH (F6). All cows were synchronized using the same protocol for synchronization of follicular wave emergence, except for the administration and number of doses of FSH as previously described. At random days of the estrous cycle known as D0, all cows received an intravaginal P4 device (Primer&reg;, Tecnopec-Agener União, São Paulo, Brazil) and 2mg estradiol benzoate (Ric-BE&reg;, Tecnopec-Agener União). Three days after (D3), all cows received 0.530 mg D-Cloprostenol (Cioprostinn&reg;, Innovare Biotecnologia e Saúde Animal Ltda, Monte Aprazível, SP, Brasil). Cows from the Control group received no additional treatment. Cows from group FSH4 were treated with 200 mg of FSH split in 4 doses of similar concentration given approximately 12 h apart, starting on D4 AM. Cows form group FSH6 were treated with 200 mg of FSH split in 6 doses of similar concentration given approximately 12 h apart, starting on D3 AM. On D7, the device was removed and OPU was performed concomitant with antral follicle count in each ovary. The oocytes considered as viable were sent to IVEP. Data was analyzed using the Glimmix of SAS 9.3, with orthogonal contrasts C1 (C x Treatment with FSH) and C2 (FSH4 x F6). There was no effect on the number of antral follicle (C = 53.3 &plusmn; 4.9 vs FSH = 51.36 &plusmn; 3.1;P = 0.89), number of total oocytes (C = 19.46 &plusmn; 1.64 vs FSH = 18.47 &plusmn; 1.27; P = 0.55), number of viable oocytes (C = 12.57 &plusmn; 1.26 vs FSH = 12.70 &plusmn; 1.03; P= 0.61), oocyte recovery rate (C = 36.5% vs FSH = 36.0%; P = 0.48) and number of embryos produced in vitro (C = 4.11 &plusmn; 0.52 vs FSH = 4.32 &plusmn; 0.46; P = 0.79). Although FSH treatment did not affect the number of follicles, it affected the distribution of them, increasing the number of follicles from 6 to 10 mm. However, FSH treatment did not alter the total number of oocytes and number of viable oocytes or embryo production.

Nos últimos anos, o emprego da aspiração folicular (OPU) e produção in vitro de embriões (PIVE) têm crescido mundialmente nos rebanhos bovinos. A OPU-PIVE viabiliza a rápida multiplicação do material genético, utilizando tanto a base genética da fêmea como do macho. No entanto, fêmeas de leite Bos taurus apresentam algumas peculiaridades, como menor população de folículos antrais e inferior qualidade oocitária, as quais foram apontadas como fatores responsáveis pela reduzida eficiência da técnica nesses rebanhos. Frente às dificuldades para o estabelecimento de programas de OPU-PIVE eficientes em vacas de leite Bos taurus, três experimentos foram conduzidos envolvendo diferentes tipos de tratamentos superestimulatórios em doadoras de oócitos lactantes e não lactantes. O primeiro estudo teve como objetivo aumentar a PIVE em doadoras da raça Holandesa lactantes e não lactantes submetidas ao tratamento tradicional de superstimulação com doses decrescentes de FSH porcino (FSHp) a cada 12 h, previamente à OPU. Nesse estudo, as doadoras (n = 15 vacas lactantes e n = 15 não lactantes da raça Holandesa) receberam protocolo para sincronização da emergência da onda folicular [protocolo a base de benzoato de estradiol (BE) e progesterona (P4)] e foram submetidas aos tratamentos de superestimulação em um delineamento experimental cross-over. Os outros dois estudos (n = 23 novilhas da raça Holandesa e n = 72 vacas não lactantes da raça Holandesa) foram desenvolvidos para avaliar diferentes diluentes para o FSHp com o objetivo de viabilizar a superestimulação com apenas uma aplicação de FSHp. No geral, os estudos avaliaram o efeito da superestimulação no perfil plasmático de FSH, na proporção de folículos classificados como pequenos (<6mm), médios (6-10mm) ou grandes (>10mm), conforme diâmetro folicular, na PIVE e no estabelecimento gestacional após transferência de embriões. A superestimulação aumentou a proporção de folículos médios, aumentou a competência oocitária e resultou em maior produção de blastocistos por sessão de OPU. A aplicação única de FSHp associado ao diluente de liberação lenta (ácido hialurônico), resultou em semelhante área sob a curva de FSH, semelhante proporção de folículos pequenos, médios e grandes e semelhante PIVE comparado ao tratamento superestimulatório tradicional com doses de FSHp administradas a cada 12h. Independentemente do diluente e da dose de FSHp utilizada, o tratamento superestimulatório resultou em maior produção de blastocistos por sessão de OPU comparado às vacas não tratadas com FSHp. Adicionalmente, semelhante taxa de estabelecimento gestacional foi observada, independentemente do tratamento utilizado na doadora. Portanto, os dados obtidos no presente estudo permitem concluir que independentemente do tipo de tratamento (diluente para FSHp ou dose utilizada de FSHp), a superestimulação previamente ao processo de OPU, aumentou o desenvolvimento de embriões in vitro, número de blastocistos por sessão de OPU e resultando em semelhante taxa de estabelecimento gestacional após transferência de embriões. / In the last years, the use of ovum pick-up (OPU) and in vitro produced embryo (IVEP) technology has worldwide increased in cattle herds. The OPU-IVEP enable a rapid individual multiplication based on the female and male donor genetic. However, Bos taurus dairy females present some peculiarities, as reduced antral follicle population and lower oocyte quality, and these factors have been awarded as responsible to the reduced technique efficiency among these herds. Given the difficulties of establishing OPU-IVEP programs with high efficiency in Bos taurus dairy cows, three studies were carried out, involving different types of superstimulation treatments in lactating and non-lactating Holstein donors. The first study aimed to increase IVEP in lactating and non-lactating Holstein dairy donors submitted to the traditional twice-daily porcine FSH (pFSH) superstimulation treatment prior to the OPU. For this purpose, donors (n = 15 lactating and n = 15 non-lactating Holstein cows) received the follicular wave synchronization protocol [estradiol benzoate (EB) and progesterone (P4) based protocol] and were submitted to superstimulation treatment in a cross-over design. Other two experiments were performed (n = 23 Holstein heifers and n = 72 non-lactating Holstein cows) to evaluate different pFSH diluents to enable superstimulation with a single injection. In general, these studies evaluated the effect of superstimulation on the plasmatic FSH profile, proportion of follicles sizes previous to OPU (small: <6mm; medium: 6-10mm; and large follicles: >10mm), on in vitro embryo production and pregnancy establishment after the produced embryo transfer. The superstimulation treatment improved the proportion of medium sized-follicles, improved oocyte competence and resulted in greater amount of blastocyst per OPU session. A single injection of pFSH combined with a slow release carrier (hyaluronan), resulted in similar FSH area under curve, proportion of follicles sizes previous to OPU and in vitro embryo production compared to the twice-daily superstimulating treatment. Regardless pFSH diluent and dose, superstimulating hormone resulted in greater number of blastocysts per OPU session compared to the non-pFSH treated donors. Additionally, similar pregnancy establishment was observed, regardless embryo donor treatment. Therefore, with the present data, we can conclude that regardless treatment type (pFSH diluent or dose), the superstimulation procedure prior to the OPU, enhanced in vitro embryo development, increased the number of blastocyst per OPU session and resulted in similar pregnancy establishment after embryo transfer.

O presente estudo foi realizado no Laboratório de Reprodução Animal da Empresa Agropecuária Laffranchi Com. Ind. LTDA, localizada no município de Tamarana - Paraná. O experimento se refere aos resultados obtidos na produção in vitro de embriões através da aspiração folicular transvaginal em bovinos das raças Nelore (não CEIP, Bos indicus, n = 34), Nelore (CEIP, Bos indicus, n = 22). Brangus (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 64) e Girolando (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 52) totalizando 172 animais, no período de O 1 janeiro de 2010 a 31 de dezembro de 2012. Todos os animais foram submetidos à OPU (Ovum Pick Up) totalizando 397 procedimentos entre as doadoras, sendo 104 OPUs em Nelore (não CEIP), 52 OPUs em Nelore (CEIP). 133 OPUs em Brangus e 108 OPUs em Girolando. Com estes procedimentos foram aspirados 7335 oócitos, destes 3597 foram considerados viáveis (49%), produzindo 969 embriões (26.93%), destes foram transferidos 922 embriões em receptoras previamente selecionadas, resultando em 266 prenhes (taxa de prenhes 28.85%). Após a obtenção dos oócitos estes eram enviados para o laboratório acima citado para maturação, fecundação e cultivo in vitro, em um período de oito dias. Os embriões produzidos eram transferidos para receptoras de embrião previamente selecionadas e submetidas ao protocolo de TETF (transferência de embrião em tempo fixo), sendo o diagnóstico de gestação realizado aos 30 dias com auxílio de ultrassonografia transretal. Na raça Brangus recuperou-se um total de 2139 oócitos sendo 967 viáveis (45,2%), destes foram obtidos 272 embriões os quais foram transferidos 241 embriões resultando em 81 prenhezes (33.3%). Na raça Girolando, foram recuperados 1806 oócitos, destes 972 foram considerados viáveis (53.8%) e resultaram na produção de 251 embriões (25.8%), os quais foram transferidos 245, obtendo-se 61 prenhezes (24.9%). Com relação às doadoras da raça Nelore (CEIP). recuperou-se 1850 oócitos, destes 842 foram considerados viáveis (45.5%), resultando em 214 embriões (25.4%), obtendo-se 61 prenhezes (28.5%). Na raça Nelore (não CEIP) recuperou-se 1540 oócitos sendo 816 considerados viáveis (53.0%), os quais resultaram na produção de 232 embriões (28.4%), sendo transferidos 222 dos quais se obteve 63 prenhezes (28.4%). De acordo com a análise estatística observou-se que a raça Nelore (CEIP) teve resultados superiores de (P< 0.0001) em relação à média total de oócitos por OPU, total de oócitos viáveis por sessão de OPU (P< 0.0001), produção de embriões (P< 0.0001) e prenhes por OPU (P<O,0115). O presente trabalho forneceu dados inéditos de PIVE para discussão nas raças sintéticas Brangus e Girolando ( Bos taurus x Bos indicus), em larga escala, porém, o experimento também destaca a necessidade de mais estudos relacionados à produção in vitro de embriões nessas raças. Quanto ao comparativo entre as raças, observou que a quantidade total de oócitos não variou de acordo com as raças Brangus, Girolando e Nelore (não CEIP), no entanto podemos notar uma grande variação individual de animais da mesma raça, Nelore (CEIP) e Nelore (não CEIP), onde se obteve nas fêmeas da raça Nelore (CEIP, selecionadas) uma maior produção total de oócitos, oócitos viáveis e embriões por sessão de aspiração. / This study was developed at the Laboratory of Animal Reproduction from the \"Empresa Agropecuária Laffranchi Com. Ind. LTDA\", town of Tamarana, Paraná State, Brazil. Results from in vitro production of cattle embryos through follicular aspiration in the breeds Nelore (no CEIP, Bos indicus, n = 34), Nelore (CEIP, Bos indicus, n = 22), Brangus (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 64) e Girolando (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 52) from January 1st of 2010 to December 31th of 2012 were used totalizing 397 oocyte donors OPU. From those, 104 OPU were realized in Nelore (no CEIP), 52 OPUs in Nelore (CEIP), 133 OPUs in Brangus, and 108 OPUs in Girolando. The total of recovered oocytes was 7335. Then, the oocytes were sent to the Laboratory for in vitro maturation, fertilization and culture during a period of eight days. The number ofviable oocytes was 3597 (49%) and 969 embryos were in vitro produced (26.9%). A total of 922 were transferred to recipients previously selected and submitted to estrous synchronization using the farm routine FTET (fixed-time embryo transfer) protocol. The pregnancy rate was 28.9% (266 pregnancies). Pregnancy diagnosis was done at the embryo age of 30 days using B-mode transrectal ultrasonography. From Brangus cows, a total of 2139 oocytes were recovered and 967 were c1assified as viable (45.2%), 272 embryos were produced and 241 were transferred resulting in 81 pregnancies (33.3%). From Girolando cows, 1806 oocytes were recovered and 972 c1assified as viable (53.8%). A total of 251 embryos (25.8%) were produced, 245 transferred and the pregnancy rate was 24.9% (61 pregnancies).From the Nelore CEIP cows, a total of 1850 oocytes were recovered and 842 were c1assified as viable (45.5%), 214 embryos were produced and 214 were transferred resulting in 61 pregnancies (28.5%).From Nelore cows, 1540 oocytes were recovered and 816 c1assified as viable (53.0%). A total of 232 embryos (28.4%) were produced, 222 transferred and the pregnancy rate was 28.4% (63 pregnancies).The Nelore CEIP presented superior results for the number of oocytes recovered per OPU (P<0.0001), for the total of viable oocytes per OPU (P<0.0001), embryos produced (P<0.0001), and total of pregnancies per OPU procedures (P<0.0115). This work presents for the first time data from IVPE from Brangus and Girolando breeds (Bos taurosx Bos indicus). When the four studied breeds were compared, the results showed a considerable variation between animais in the same breed. Also, it was observed, in the same breed Nelore, a superiority ofthe Nelore CEIP for oocyte recovery rate, viable oocytes e total of embryos produced by OPU procedure.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EduardoRamosdeOliveira-dissertacao.pdf: 862332 bytes, checksum: f1f29e210f24e186303d9f28cb6d64f0 (MD5) Previous issue date: 2011-05-23 / Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The production of bovine embryos had a pronounced increase in the last decade. In Brazil, this increase was directly related to the improvement of the in vitro embryo production, particularly in dairy cattle. The present experiment used the transvaginal ultrasound-guide for ovarian follicle aspiration (TGFA) and in vitro embryo production in Gyr cattle (dairy zebu breed) to assess the potential of the donator for oocyte and embryo production. Data from a private company (Biotran Alfenas, MG - Brazil), recovered for the last three years were included in this study. Cows were supplemented with corn silage and a mixture of corn, soybean, vitamin and minerals, according to their nutritional requirements. The ovarian follicular wave was synchronized 5 days before TGFA. Briefly, auricular implant and intramuscular injections of 3 mg of estradiol benzoate and 0.530 mg of sodium cloprostenol. The TGFAs were performed according to the same basic procedures: using the ultrasound device (Pie-Medical Esaot Akila) and a vacuum system (pressure of 80 mmHg) with a disposable 20G needle in one extremity and a collector tube (50 ml) in the other. Only TGFAs with at least one oocyte recovered were considered, and a total of 178 TGFAs sessions from different Gyr cows (&#8805; 60 days after parturition) were used. The recovered oocytes were classified according to the cumulus cells layers and cytoplasm aspect. Sex-sorted (X) semen with proved fertility was used for in vitro fertilization and embryo production. According to the total recovered oocytes the cows were ordered in one of the 4 quartiles, with the top 25% (1st quartile), the median 50% (2nd and 3rd) and the bottom 25% (4th quartile). The average of recovered oocyte (total, viable and unviable), total embryo and the number of pregnancies produced in each TGFA session were compared between the first and the fourth quartiles. Conversion rates (%) of the total and viable oocytes to embryo, viable oocytes to pregnancy and embryo to pregnancy were also performed. Data were analyzed by one-way ANOVA (9.2 Version; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Differences between the first and fourth quartiles were accessed by Student s t-test and frequency data were evaluated by Fisher s Exact test. The production of oocytes and embryos, and the number of pregnancies (mean ± SD by session) were higher (P< 0.0001) in the animals of the first quartile (41.6 ± 10.6 vs 6.7 ± 3.1 oocytes; 29.1 ± 11.0 vs 4.5 ± 2.7 viable; 8.6 ± 5.7 vs 1.8 ± 1.8 embryos). The rate of pregnancy was 46.0%, 44.9%, 43.9% and 45.6% for the I; II; III and IV respective. The conversion rate of the viable oocytes to embryo was greater (P< 0.03) in animals from the fourth quartile (51.1 vs 31.9%). The interpretation was that for Gyr breed the animals with high donator potential produce in average 40 viable oocytes and 8 embryos in each session of the TGFA. The data suggest that the selection of the animals with high potential for oocyte production can improve the absolute but not relative number of the in vitro embryos produce. / A produção de embriões bovinos teve um aumento acentuado na última década. No Brasil, esse aumento foi diretamente relacionado à melhoria da produção de embriões in vitro, particularmente em rebanhos leiteiros. O presente experimento utilizou a ultrassonografia transvaginal para a aspiração de folículos ovarianos e produção in vitro de embriões em bovinos da raça Gir (raças zebuínas leiteiras) no intuito de avaliar o potencial de doadoras para a recuperação oocitária, produção de embriões e gestação. As vacas foram suplementadas com silagem de milho e concentrado à base de milho, soja, vitaminas e minerais, de acordo com as exigências nutricionais. Todos os procedimentos de aspiração foram precedidos de sincronização da onda de crescimento folicular 5 dias antes a aspiração, através de implante auricular de norgestomet, 3 mg de benzoato de estradiol e 0,530 mg de cloprostenol sódico. Dados da empresa privada (Biotran® - LTDA), recuperados dos últimos três anos foram incluídos. As aspirações foliculares foram realizadas de acordo com os procedimentos básicos: utilizou-se o dispositivo de ultrassom (Pie-Medical Esaot Akila) e um sistema de vácuo (pressão de 80 mmHg) com uma agulha descartável 20G em uma extremidade e um tubo coletor (50 ml) na outras. Somente punções com recuperação de pelo menos um oócito foram consideradas, um total de 626 sessões de aspiração de 251 animais (&#8805; 60 dias após o parto) foram utilizados. Os oócitos recuperados foram classificados de acordo com as camadas de células do cumulus e o aspecto do citoplasma. Utilizou-se sêmen sexado (X) da raça Gir com a fertilidade comprovada. De acordo com o total de oócitos recuperados as vacas foram ordenadas em quartis. O total de oócitos, bem como os viáveis e inviáveis, a conversão para embriões, e o número de gestações produzidas em cada sessão de punção foram comparados entre o primeiro e o quarto quartil. Os dados foram analisados por ANOVA one-way (versão 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA). Diferenças entre o primeiro e quarto quartis foram acessadas pelo teste t de Student e os dados de frequência foram avaliados pelo teste exato de Fisher. A recuperação de oócitos (Total e viáveis) e a produção de embriões, bem como o número de gestações (média ± DP por sessão) foram maiores (P <0,0001) nos animais do primeiro quartil (41,6 ± 10,6 vs 6,7 ± 3,1 oócitos; 29,1 ± 11,0 vs 4,5 ± 2,7 viáveis, 8,6 ± 5,7 vs 1,8 ± 1,8 embriões;) as taxas de gestação foram de 46,0% 44,9%, 43,9% e 45,6% para o I, II, III e IV quartil respectivamente. A taxa de conversão dos oócitos viáveis para embrião foi maior (P <0,03) em animais do quarto quartil quando comparado ao primeiro (51,1 vs 31,9%). A interpretação foi de que na raça Gir, os animais com maior potencial de recuperação oocitária produzem em média 40 oócitos viáveis e oito embriões em cada sessão do TGFa. Baseada no potencial de recuperação oocitária resulta em um aumento absoluto, mas não relativo, na produção de embriões.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EduardoRamosdeOliveira-dissertacao.pdf: 862332 bytes, checksum: f1f29e210f24e186303d9f28cb6d64f0 (MD5) Previous issue date: 2011-05-23 / Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The production of bovine embryos had a pronounced increase in the last decade. In Brazil, this increase was directly related to the improvement of the in vitro embryo production, particularly in dairy cattle. The present experiment used the transvaginal ultrasound-guide for ovarian follicle aspiration (TGFA) and in vitro embryo production in Gyr cattle (dairy zebu breed) to assess the potential of the donator for oocyte and embryo production. Data from a private company (Biotran Alfenas, MG - Brazil), recovered for the last three years were included in this study. Cows were supplemented with corn silage and a mixture of corn, soybean, vitamin and minerals, according to their nutritional requirements. The ovarian follicular wave was synchronized 5 days before TGFA. Briefly, auricular implant and intramuscular injections of 3 mg of estradiol benzoate and 0.530 mg of sodium cloprostenol. The TGFAs were performed according to the same basic procedures: using the ultrasound device (Pie-Medical Esaot Akila) and a vacuum system (pressure of 80 mmHg) with a disposable 20G needle in one extremity and a collector tube (50 ml) in the other. Only TGFAs with at least one oocyte recovered were considered, and a total of 178 TGFAs sessions from different Gyr cows (&#8805; 60 days after parturition) were used. The recovered oocytes were classified according to the cumulus cells layers and cytoplasm aspect. Sex-sorted (X) semen with proved fertility was used for in vitro fertilization and embryo production. According to the total recovered oocytes the cows were ordered in one of the 4 quartiles, with the top 25% (1st quartile), the median 50% (2nd and 3rd) and the bottom 25% (4th quartile). The average of recovered oocyte (total, viable and unviable), total embryo and the number of pregnancies produced in each TGFA session were compared between the first and the fourth quartiles. Conversion rates (%) of the total and viable oocytes to embryo, viable oocytes to pregnancy and embryo to pregnancy were also performed. Data were analyzed by one-way ANOVA (9.2 Version; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Differences between the first and fourth quartiles were accessed by Student s t-test and frequency data were evaluated by Fisher s Exact test. The production of oocytes and embryos, and the number of pregnancies (mean ± SD by session) were higher (P< 0.0001) in the animals of the first quartile (41.6 ± 10.6 vs 6.7 ± 3.1 oocytes; 29.1 ± 11.0 vs 4.5 ± 2.7 viable; 8.6 ± 5.7 vs 1.8 ± 1.8 embryos). The rate of pregnancy was 46.0%, 44.9%, 43.9% and 45.6% for the I; II; III and IV respective. The conversion rate of the viable oocytes to embryo was greater (P< 0.03) in animals from the fourth quartile (51.1 vs 31.9%). The interpretation was that for Gyr breed the animals with high donator potential produce in average 40 viable oocytes and 8 embryos in each session of the TGFA. The data suggest that the selection of the animals with high potential for oocyte production can improve the absolute but not relative number of the in vitro embryos produce. / A produção de embriões bovinos teve um aumento acentuado na última década. No Brasil, esse aumento foi diretamente relacionado à melhoria da produção de embriões in vitro, particularmente em rebanhos leiteiros. O presente experimento utilizou a ultrassonografia transvaginal para a aspiração de folículos ovarianos e produção in vitro de embriões em bovinos da raça Gir (raças zebuínas leiteiras) no intuito de avaliar o potencial de doadoras para a recuperação oocitária, produção de embriões e gestação. As vacas foram suplementadas com silagem de milho e concentrado à base de milho, soja, vitaminas e minerais, de acordo com as exigências nutricionais. Todos os procedimentos de aspiração foram precedidos de sincronização da onda de crescimento folicular 5 dias antes a aspiração, através de implante auricular de norgestomet, 3 mg de benzoato de estradiol e 0,530 mg de cloprostenol sódico. Dados da empresa privada (Biotran® - LTDA), recuperados dos últimos três anos foram incluídos. As aspirações foliculares foram realizadas de acordo com os procedimentos básicos: utilizou-se o dispositivo de ultrassom (Pie-Medical Esaot Akila) e um sistema de vácuo (pressão de 80 mmHg) com uma agulha descartável 20G em uma extremidade e um tubo coletor (50 ml) na outras. Somente punções com recuperação de pelo menos um oócito foram consideradas, um total de 626 sessões de aspiração de 251 animais (&#8805; 60 dias após o parto) foram utilizados. Os oócitos recuperados foram classificados de acordo com as camadas de células do cumulus e o aspecto do citoplasma. Utilizou-se sêmen sexado (X) da raça Gir com a fertilidade comprovada. De acordo com o total de oócitos recuperados as vacas foram ordenadas em quartis. O total de oócitos, bem como os viáveis e inviáveis, a conversão para embriões, e o número de gestações produzidas em cada sessão de punção foram comparados entre o primeiro e o quarto quartil. Os dados foram analisados por ANOVA one-way (versão 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA). Diferenças entre o primeiro e quarto quartis foram acessadas pelo teste t de Student e os dados de frequência foram avaliados pelo teste exato de Fisher. A recuperação de oócitos (Total e viáveis) e a produção de embriões, bem como o número de gestações (média ± DP por sessão) foram maiores (P <0,0001) nos animais do primeiro quartil (41,6 ± 10,6 vs 6,7 ± 3,1 oócitos; 29,1 ± 11,0 vs 4,5 ± 2,7 viáveis, 8,6 ± 5,7 vs 1,8 ± 1,8 embriões;) as taxas de gestação foram de 46,0% 44,9%, 43,9% e 45,6% para o I, II, III e IV quartil respectivamente. A taxa de conversão dos oócitos viáveis para embrião foi maior (P <0,03) em animais do quarto quartil quando comparado ao primeiro (51,1 vs 31,9%). A interpretação foi de que na raça Gir, os animais com maior potencial de recuperação oocitária produzem em média 40 oócitos viáveis e oito embriões em cada sessão do TGFa. Baseada no potencial de recuperação oocitária resulta em um aumento absoluto, mas não relativo, na produção de embriões.