Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-18Bitstream added on 2014-06-13T20:17:12Z : No. of bitstreams: 1 tagliani_mm_me_arafo.pdf: 1416082 bytes, checksum: 174957378ca932650c1583b4139e4afe (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Na biofotônica, lasers e LEDs (light-emitting diodes) têm sido empregados na bioestimulação de células e tecidos. LED é um diodo semicondutor que, quando energizado, produz luz de espectro estreito, em forma de eletroluminescência. Experimentos in vitro utilizando LEDs com diferentes comprimentos de onda demonstraram a ocorrência de significativo estímulo no crescimento celular, efeito antiinflamatório e antimicrobiano, além do metabolismo celular aumentado. Na odontologia, a aplicação clínica de lasers e LEDs em terapias objetivando a redução da hipersensibilidade dentinária tem se mostrado efetiva, através de aparente síntese e deposição de dentina reacional. Entretanto, não há trabalhos na literatura que demonstrem o efeito do LED sobre a cultura de odontoblastos, tampouco dados científicos caracterizando a relação entre LED e redução da hipersensibilidade dentinária. Assim, o objetivo desta pesquisa foi investigar a ação do LED em 630 nm sobre o metabolismo de células de linhagem odontoblástica MDPC-23. Para isto, as células foram descongeladas, cultivadas e plaqueadas. Então, o LED foi aplicado diretamente sobre estas células, em diferentes tempos (20, 40, 80 e 240”) e condições de estresse (2 ou 10% de SFB), de acordo com cada grupo experimental, por três dias consecutivos, através de um dispositivo de irradiação denominado “LEDTable”. Posteriormente, foram avaliados a viabilidade celular, através do teste MTT, e a morfologia celular, por microscopia eletrônica de varredura. Os dados obtidos nos testes de MTT foram submetidos ao teste de Mann-Whitney para a comparação das concentrações de soro fetal bovino em cada dose de energia individualmente. Foi utilizado também o teste de Kruskal-Wallis para comparar as diferentes doses de energia em cada concentração de soro fetal bovino. Os dados foram analisados estatisticamente... / Lasers and LEDs (light-emitting diodes) have been used for biostimulation of cells and tissues. LED is a semiconductor diode which produces limited spectrum visible light. In vitro experiments using LEDs at different wavelengths have shown an enhancement of cell growth, anti-inflammatory and antibacterial effects and increased cell metabolism. In dentistry, the use of lasers and LEDs in therapies to reduce dental hypersensitivity has been proved to be clinically effective, through the synthesis and deposition of reactionary dentin. However, there are no studies that demonstrate the effect of LED therapy on odontoblast-like cells and there is no scientific data linking LED irradiation to dental hypersensitivity reduction. For this reason, the aim of this study was to investigate the effect of LED 630 nm irradiation on MDPC-23 (odontoblast-like) cells metabolism. Cells were seeded on 24-wells plates and cultured. Then the LED light was directly applied to these cells under different experimental conditions (time and % of BFS), according to each experimental group, for three following days. A device named LEDTable provided red LED irradiation. Then, cell viability (MTT Assay) and cell morphology (SEM) were evaluated. The cell viability results were first submitted to Mann-Whitney tests in order to compare the fetal bovine serum concentrations and energy dose, and then Kruskal-Wallis test was performed to compare different energy doses in every serum concentration. Data were statistically analyzed (p=0,05). Results show a biostimulation of cells kept under normal culture conditions and submitted to low LED irradiation dose (1 J/cm2). However, under nutritional stress, cells required higher energy dose to be stimulated, such as 4 J/cm2. On the other hand, a 8 J/cm2 dose did not affect the metabolism of this immortalized cell line. The SEM analysis showed a higher number of cells attached... (Complete abstract click electronic acess below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:12:00Z : No. of bitstreams: 1 mendonca_aam_me_arafo.pdf: 391168 bytes, checksum: 5b48b4c877101be48a53fececa7c6066 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A presente pesquisa avaliou o efeito citotóxico de diferentes materiais dentários sobre células de linhagem odontoblástica MDPC-23 em cultura. Para isto, corpos-de-prova com dimensões de 4mm de diâmetro e 2 mm de profundidade foram confeccionados com os seguintes materiais: hidróxido de cálcio (Hydro C - Grupo HCa); RelyX Luting (Grupo RL); Vitrebond (Grupo VB); e RelyX Unicem (Grupo RU). Cada espécime foi imerso em meio de cultura não suplementado com soro fetal bovino (MC-SFB) e incubado pelos períodos de 24 horas ou 7 dias. Células odontoblastóides MDPC-23 foram semeadas (3x104 células/cm2) em pratos de acrílico com 24 compartimentos e incubados por 72 horas, sendo que após este período, o meio de cultura completo (DMEM) foi substituído pelos extratos obtidos de cada material experimental. Após incubação adicional de 24 horas, a atividade da enzima desidrogenase succíninca das células foi avaliada através do teste de MTT. No grupo controle, o meio de cultura foi substituído pelo MC-SFB fresco (sem tratamento). Para os períodos de 24 horas, os grupos HCa, RL, VB e RU apresentaram valores de redução no metabolismo celular de 91,52%; 78,17%; 89,14%; e 2,64%, respectivamente, quando comparados com o grupo controle (DMEM), o qual não reduziu o metabolismo celular. Com relação ao período experimental de 7 dias, os valores de redução na atividade metabólica para os grupos HCa, RL, VB e RU foram de 91,13%, 79,04%, 87,27% e 10,51%, respectivamente. Segundo a análise estatística de Kruskall-Wallis complementada pelo teste de Mann-Whitney não houve diferença entre os grupos HCa e VB, os quais foram os materiais mais citotóxicos em ambos os períodos avaliados. RU foi o cimento menos tóxico, sendo que não houve diferença estatisticamente significante com o grupo controle no período de 24 horas... / The present in vitro study evaluated the cytotoxic effects of different dental materials on the odontoblast-like cells MDPC-23. For this purpose, round samples (2-mm thick and 4-mm in diameter) were prepared with the following experimental materials: calcium hydroxide (Hydro C - Group HCa); RelyXTM Luting Cement (Group RL); Vitrebond (Group VB); and RelyXTM Unicem (Group RU). The samples were placed in fresh culture medium with no fetal bovine serum (DMEM-FBS) and incubated for 24 hours or 7 days at 37°C with 5% CO2, and 95% air. The odontoblast cells were plated (3x104 cells/cm2) in wells of five 24-wells dishes and incubated for 72 hours. After this period, the complete culture medium (DMEM) was replaced by the extracts obtained from every sample. The cells in contact with the extracts were incubated for additional 24 hours. The MTT Assay was carried out to evaluate the cell metabolism. In control group (DMEM) the nontreated fresh culture medium (DMEM-FBS) was applied on the cultured cells. At 24 hours period, the experimental materials HCa, RL, VB and RU decreased the mitochondrial respiration by: 91,52%; 78,17%; 89,14%; and 2,64%, respectively. At 7 days, the reduction of the cell metabolism for groups HCa, RL, VB and RU was: 91,13%; 79,04%; 87,27%; and 10,51%, respectively. The statistical analysis of Kruskal-Wallis complemented by the Mann-Whitney test demonstrated there was no statistical difference between the groups HCa and VB which presented the highest cytotoxic effects on the MDPC-23 cells. On the other hand, no difference statistically significant was observed between RU and DMEM, at 24 hours period. The ranking of cytotoxicity observed at 24 hours and 7 days was: HCa=VB>RL>RU=DMEM and HCa=VB>RL>RU>DMEM, respectively. Based upon the scientific data presented in this in vitro study, it was concluded... (Complete abstract, click electronic address below).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-20Bitstream added on 2014-06-13T19:58:59Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_apd_me_arafo.pdf: 10016445 bytes, checksum: 54f364c1faa5066e22a82916fe0e1ac2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Para considerar a Terapia Fotodinâmica (PDT) como tratamento clínico da estomatite protética, é necessário conhecer tanto o potencial antifúngico, como efeito citotóxico desta terapia sobre células normais do indivíduo. Assim, o objetivo desse estudo in vitro foi avaliar a citotoxicidade da PDT antifúngica com o fotossensibilizador Photogem® associado ao LED azul e ao LED vermelho em cultura de fibroblastos L929 e células odontoblastóides MDPC-23. As células foram cultivadas (30.000 células/cm2) em placas de 24 compartimentos por 48 horas e ambos os tipos celulares foram incubados com Photogem® (0, 10, 25, 50, 100 ou 150 mg/L) e irradiados ou não pelo LED azul (460 ± 3 nm; 25,5 ou 37,5 J/cm2; 22 mW/cm2) ou LED vermelho (630 ± 3 nm; 70 ou 100 J/cm2; 25 mW/cm2) . O metabolismo celular foi determinado 0, 12 e 24 horas após a PDT utilizando o teste do metiltetrazolium (MTT), e a morfologia celular avaliada pela microscopia eletrônica de varredura (MEV). A técnica de citometria de fluxo foi utilizada para avaliar o tipo de morte celular (necrose ou apoptose) assim como estimar os níveis intracelulares das espécies reativas de oxigênio (EROs). Observou-se redução do metabolismo celular estatisticamente significante para todas as concentrações do Photogem® quando irradiadas em qualquer dose de luz, sendo essa redução de 90 a 97% tanto para as células L929 quanto MDPC-23 (ANOVA and Dunnet’s post hoc tests; p<0.05). Essa redução da atividade mitocondrial não foi dependente da concentração do fotossensibilizador e nem da dose de luz empregada. Também, foi demonstrado que a atividade mitocondrial das células submetidas a PDT não foi recuperada após 12 ou 24 horas, caracterizando um dano irreversível. A presença do Photogem® e da luz isoladamente não alterou estatisticamente a atividade mitocondrial de ambas as linhagens. As células submetidas... / In order to consider the photodynamic therapy (PDT) as a clinical treatment for candidosis, it is necessary to know its antifungal potential and its cytotoxicity effect on normal cells. Therefore, the purpose of this in vitro study was to evaluate the cytotoxicity of PDT with Photogem® associated to blue and red LED on L929 and MDPC-23 cell cultures. The cells (30.000 cells/cm2) were seeded in 24-well plates for 48 hours, incubated with Photogem® (10, 25, 50, 100 or 150 mg/L) and were irradiated or not with a blue LED source (460 ± 3 nm; 25.5 or 37.5 J/cm2; 22 mW/cm2) or with a red LED source (630 ± 3 nm; 75 or 100 J/cm2; 22 mW/cm2). Cell metabolism was evaluated by the MTT assay (ANOVA and Dunnet’s post hoc tests; p<0.05) and cell morphology was examined by scanning electron microscopy. Flow cytometry was employed to analyze the type of PDT-induced cell death (necrosis or apoptosis) as well as to estimate intracellular production of reactive oxygen species (ROS). There was a statistically significant decrease of mitochondrial activity for all Photogem® concentrations associated to blue or red LED regardless irradiation time; this reduction ranged from 90 to 97% for both cell lines. This reduction, however, was not dependent on the photosensitizer concentration. It was also demonstrated that the mitochondrial activity of the cells submitted to PDT was not recovered after 12 or 24 hours, characterizing irreversible cell damage. PDT-treated cells presented an altered morphology with ill-defined limits. In both cell lines, there was a predominance of necrotic cell death when in contact with the photosensitizer. The presence of Photogem® and exposure to blue and red LED increased the intracellular levels of ROS in both L929 and MDPC- 23 cells in a dose-dependent manner. The association of Photogem® and blue LED caused severe toxic effects on normal cell culture... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Carlos alberto de Souza Costa / Banca: Vanderlei Salvador Bagnato / Banca: Osmir Batista de Oliveira Junior / Resumo: Pesquisas recentes demonstraram que a irradiação transdentinária da polpa pode resultar em aumento na síntese de matriz de dentina e redução na resposta inflamatória local. Entretanto, os mecanismos que regem estes processos permanecem desconhecidos. Assim, o objetivo desta pesquisa foi investigar o efeito transdentinário do LED, em três comprimentos de onda (CO: 455nm, 630nm e 850nm) e duas doses de energia (DE: 4J/cm2 e 25 J/cm2), sobre células odontoblastóides MDPC-23 cultivadas em discos de dentina (molares humanos) com 0,2 mm de espessura. Foram realizadas análises do metabolismo celular (SDH), proteína total (PT) e fosfatase alcalina (ALP), através dos ensaios de MTT, Read Northcote e Ponto Final, respectivamente. O ensaio de RT-PCR foi aplicado para avaliação da expressão dos genes que codificam para colágeno tipo I (Col-1), fibronectina (FN) e fosfatase alcalina (ALP). Além disso, foi realizada a análise da morfologia celular em Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Para a produção de PT, os resultados não apontaram diferença estatisticamente significante entre os grupos irradiados e controle (Mann-Whitney, p>0,05). Entretanto, para o metabolismo celular, o grupo irradiado com LED no CO de 630 nm, na DE de 25 J/cm2, obteve melhores resultados (aumento de 21,8 %), com diferença significante quando comparado ao grupo controle (Mann-Whitney, p<0,05). Para a produção de fosfatase alcalina, houve aumento significante pra todos os parâmetros utilizados (Mann-Whitney, p<0,05), com exceção da luz azul na dose de 4 J/cm2 (Mann-Whitney, p>0,05). Na análise por RT-PCR, houve maior expressão de Col-1 para o LED infravermelho na dose de 4 J/cm2. Um maior número de células MDPC-23 com morfologia normal aderidas aos discos de dentina, semelhante ao grupo controle, foi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several studies have demonstrated that the transdentinal irradiation of dental pulp may increase the dentin matrix synthesis as well as decrease the local inflammatory reaction. However, the mechanisms that regulate these processes remain unknown. Therefore, the objective of this in vitro study was to investigate the transdentinal effect of LED irradiation at three different wavelengths (λ= 455, 630 and 850 nm) and two doses (4J/cm2 and 25 J/cm2) on odontoblast-like cells seeded on 0.2-mm-thick dentin disks obtained from sound human molars. Cell metabolism (MTT), alkaline phosphatase expression (ALP), total protein synthesis, and cell morphology (MEV) were evaluated. The expression of genes that encode for collagen type-1 (Col-1), fibronectin (FN) and alkaline phosphatase (ALP) was analyzed by RT-PCR. For total protein synthesis, the results showed no statistical difference among irradiated and control groups (Mann-Whitney test, p>0.05). However, for cellular metabolism, the group irradiated with 630 nm LED (dose of 25 J/cm2) showed better results (21,8% increase), with significant difference when compared to control group (Mann-Whitney test, p<0.05). For alkaline phosphatase activity, a significantly increase was observed for all parameters (Mann-Whitney test, p<0.05), except for the blue light at a dose of 4 J/cm2 (Mann-Whitney test, p>0.05). RT-PCR showed a higher expression of Col- 1 for the infrared LED at a dose of 4 J/cm2. A larger number of MDPC-23 cells with normal morphology adhered to the dentin discs was observed after irradiation with 25 J/cm2 when compared to 4 J/cm2, for all wavelengths evaluated. It may be concluded that LED irradiation was effective for transdentinal cell biostimulation and the cellular response was dose and wavelength-dependent. / Mestre

Orientadores: Giselle Maria Marchi, Carlos Alberto de Souza Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T00:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_AdrianoFonsecade_D.pdf: 9531567 bytes, checksum: fc2513cfde23700314d21174d7e5694a (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Os objetivos do presente trabalho foram: a) avaliar os efeitos citotóxicos de aplicações sucessivas do agente clareador a base de peroxido de carbamida (PC) 10% sobre células odontoblásticas; b) avaliar a toxicidade "in vivo" do tratamento clareador em dentes de ratos Wistar; c) verificar se o ácido ascórbico (AA) e capaz de reduzir os efeitos tóxicos do tratamento clareador na polpa de ratos Wistar; d) verificar a eficácia da laserterapia em diferentes parâmetros de aplicação na modulação da resposta de células odontoblastóides frente a agressão causada pelos agentes clareadores. Para isso, no Capitulo 1, foi avaliado a toxicidade de aplicações sucessivas de agentes clareadores a base de PC10% e do peróxido de hidrogênio (PH) 35% sobre células odontoblástóides MDPC--23. As células foram expostas ao subprodutos clareadores por 1h durante 1 ou 5 dias, e então foi avaliado o metabolismo celular, atividade da fosfatase alcalina (ALP) e os danos a membrana celular. Pôde--?se observar que uma aplicação de PC10% não causou danos as células odontoblastóides, no entanto, as aplicações sucessivas causaram severa toxicidade à estas células. Tanto PC10% como PH35% causaram redução na atividade da ALP. No Capitulo 2, o objetivo foi avaliar se o AA seria capaz de reduzir a inflamação causada pelo agentes clareadores na polpa de ratos Wistar. Grupos foram estabelecidos com e sem administração de AA, e as soluções aplicadas 1h e 30min antes da realização do procedimento clareador. Foi observado necrose do tecido pulpar dos ratos apos 6h e 24h o clareamento. O AA não foi capaz de impedir a necrose do tecido, no entanto, melhor capacidade de reparação foi verificada na polpa dental destes animais. No capitulo 3 e 4, foram analisados se 1 ou 3 sessões de laserterapia poderiam modular a resposta celular apos exposição aos agentes clareadores. As células foram expostas ao agente clareador, e apos isso, foram realizadas as sessões de laserterapia (InGaAsP --? 780nm --? doses de 4, 10 e 15J/cm²) com intervalo de 24 h entre cada uma delas. O clareamento causou redução do metabolismo celular e da atividade da FA; a laserterapia não foi capaz de modular positivamente o metabolismo celular. No entanto, a dose de 4 J/cm² aumentou a atividade da FA nas células com e sem exposição ao agente clareador. A laserterapia não foi capaz de modular o metabolismo celular, nem a atividade de FA, expressão gênica de FA e colágeno--?I (COL--?I). No entanto, a laserterapia causou redução da expressão gênica de fibronectina (FN), nas células sem exposição ao agente clareador. Diante dos resultados obtidos, pode--?se concluir que aplicações consecutivas de PC10% podem causar extensos danos as células MDPC--?23; o PH 35% causou necrose da câmara pulpar de ratos Wistar, e que o AA não foi capaz de impedir os danos causados pelo tratamento clareador; uma aplicação do laser nas doses de energia avaliadas não foi capaz de modular a resposta celular apos o clareamento. Apenas três aplicações de laser na dose de 4 J/cm² foram capazes de aumentar a atividade da FA produzida pelas células odontoblastóides / Abstract: The objectives of the present study were: a) to evaluate the cytotoxic effects of consecutive applications of a bleaching agent based on 10% cabamide peroxide (CP) on odontoblastic cells; b) to evaluate the "in vivo" toxicity of the bleaching treatment on the pulp tissue of Wistar rats; c) to evaluate if the ascorbic acid (AA) is capable to reduce the toxic effects of the bleaching treatment to the dental pulp of the Wistar rats; d) to analyze the efficacy of the lasertherapy with different patterns on the odontoblastic cell response, in face of the deleterious effects caused by the bleaching agents. At the Chapter 1, the toxicity of consecutive applications of a 10%CP gel and 35% hydrogen peroxide (HP) on odontoblast--like cells was evaluated. The cells were exposed to the bleaching products for 1h during 1 or 5 days, and the cell metabolism, alkaline phosphatase (ALP) activity and cell membrane damage were evaluated. It could be observed that 1 application of 10%CP did not cause deleterious effect to the odontoblastic cells, however, consecutive applications caused severe toxicity to these cells. Both 10%CP and 35%HP promoted reduction on the ALP activity. At the Chapter 2, the aim was to evaluate if AA would be able to reduce the inflammation caused by the bleaching agents on the dental pulp of Wistar rats. Groups were formed with and without AA administration, and the solutions were applied 1h and 30min before the bleaching procedure. Pulp necrosis was observed 6h and 24h after bleaching. The AA was not capable to prevent the tissue necrosis, however, faster tissue repair was observed in the dental pulp of the animals treated with AA. At the Chapters 3 and 4, were evaluated if 3 or 1 lasertherapy sessions would modulate the cell response after exposition to bleaching agents. The cells were exposed to the bleaching agent, and the lasertherapy was performed after this (InGaAsP - 780nm-- doses 4, 10 e 15 J/cm²), with interval of 24h between each session. The bleaching reduced the cell metabolism and ALP activity, and the lasertherapy was not able to influence positively the cell metabolism. Nevertheless, the energy dose of 4 J/cm² increase the ALP activity on cell with or without exposition to bleaching agente when 3 session of laser were performed. The lasertherapy was not capable to modulate the cell metabolism, ALP activity and gene expression of ALP and colagen--I (COL--I). Nevertheless, one session of laser irradiation decreased the gene expression of fibronectin (FN), on the cells without exposition to bleaching agent. It can be concluded that consecutive applications of 10%CP can cause extensive damage to the MDPC--23 cells; HP35% caused pulp necrosis at the teeth of the Wistar rats, and AA was not capable to prevent the damages caused by the bleaching treatment; one application of the laser, in the energy doses evaluated, was not capable to modulate the cell response after bleaching. Three applications of laser with the energy dose of 4 J/cm² increased the ALP activity produced by the odontoblast--like cells / Doutorado / Dentística / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Alexandre Augusto Zaia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-27T23:03:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_CarolinaCarvalhodeOliveira_D.pdf: 6938585 bytes, checksum: 0b73617c9f542daafb6815d1e62fb4cb (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A polpa dentária contém uma heterogeneidade de células, dentre elas destacam-se os fibroblastos e odontoblastos. Quando este tecido é agredido por micro-organismos ou seus bioprodutos, fibroblastos e odontoblastos secretam diversas citocinas inflamatórias para ativação do sistema imune, dentre estas TNF-'alfa', IL-6 e MCP-1. Este estudo avaliou a expressão gênica e a produção de citocinas inflamatórias após o contato in vitro das espécies Sreptococcus mutans, Porphyromonas gingivalis, Enterococcus faecalis e seus bioprodutos com odontoblastos e fibroblastos. A expressão gênica foi avaliada por RT-qPCR e as proteínas foram quantificadas por meio de citometria de fluxo, tipo CBA, nos períodos de 4, 8 e 24 horas. As bactérias estudadas promoveram sensibilização das células para expressão e produção das citocinas IL-6, TNF-'alfa', e MCP-1 principalmente nas primeiras 8 horas de contato. Tanto o contato direto com as bactérias como o contato com seus bioprodutos resultaram em estímulo para as células, contudo, o contato direto com as bactérias S. mutans e E. faecalis se mostrou mais eficiente para a estimulação de expressão e produção de citocinas. Por outro lado, o contato indireto com P. gingivalis mostrou ser mais efetivo para estimular a produção das citocinas. Desta forma, pode-se concluir que odontoblastos e fibroblastos são capazes de expressar e produzir citocinas pró-inflamatórias a partir de diferentes contatos quando estimulados por tipos bacterianos distintos. / Abstract: Dental pulp contains a heterogeneity of cells in its composition, among them stand out from fibroblasts and odontoblasts. When this tissue is attacked by bacteria or their by-products, fibroblasts and odontoblasts can secrete several inflammatory cytokines in order to attract and activate immune system to contain infectious agents. TNF-'alfa', IL-6 and MCP-1 are proteins secreted by fibroblasts and odontoblasts mainly involved in the origin and activation of the inflammatory process. This study aimed to evaluate gene expression and secretion of inflammatory cytokines after in vitro contact of bacteria Sreptococcus mutans, Porphyromonas gingivalis, Enterococcus. faecalis and its by-products with odontoblasts and fibroblasts. The proteins were quantified by flow cytometry type CBA and gene expression by Real Time - PCR in periods of 4, 8 and 24 hours. The results showed that the studied bacteria promoted sensitizing cells for expression and production of the cytokines IL-6, TNF-'alfa', MCP-1, particularly during the first 8 hours of contact. Both direct contact with bacterias or their by-products resulting in stimulation to the cells, however, direct contact with the bacteria S. mutans and E. faecalis was more efficient for stimulating expression and cytokine production. On the other hand, the indirect contact with P. gingivalis shown to be more effective to stimulate the production of cytokines. Thus, we may conclude that fibroblasts and odontoblasts are able to express and produce proinflammatory cytokines from different contacts when stimulated by different bacterial types / Doutorado / Endodontia / Doutora em Clínica Odontológica

Apesar da capacidade regenerativa da dentina já ser bem estabelecida, este processo pode ser insuficiente no caso de injúrias decorrentes de traumas e/ou lesões cariosas extensas, podendo levar à exposição pulpar e perda de sua vitalidade. Assim, pesquisas recentes no campo da engenharia tecidual têm identificado materiais e substâncias que poderiam ser utilizadas como biomodificadores da dentina e auxiliares na regeneração do complexo dentina-polpa. Entre eles estão os extratos ricos em proantocianidina, um composto fenólico bioativo presente no extrato de semente de uva (GSE). Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial estimulatório de quatro concentrações crescentes do GSE na atividade funcional de células odontoblastoides. Foram utilizadas células de camundongo da linhagem MDPC-23, cultivadas em garrafas de cultura até a subconfluência. Em seguida, as células foram cultivadas em placas de 24 poços em uma concentração de 104/poço e divididas em cinco grupos: células sem adição do GSE, células + 0.1 µg/mL de GSE; células + 1 µg/mL de GSE; células + 10 µg/mL de GSE; células + 20 µg/mL de GSE. Após 3, 7 e 10 dias, foram analisados os seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celular, detecção e atividade de fosfatase alcalina, quantidade de proteína total, detecção e quantificação de nódulos mineralizados, expressão quantitativa dos genes Alp, Col1a1 e Dmp1 por meio de PCR em tempo real e sua expressão proteica correspondente por meio de imunolocalização. Os dados obtidos foram analisados quanto à normalidade e submetidos aos testes estatísticos ANOVA e Kruskal-Wallis, com nível de significância estabelecido em 5%. Os resultados mostraram proliferação e viabilidade celular com as concentrações mais baixas de GSE (0,1 e 1 µg/mL), assim como a atividade de síntese de proteínas totais e da fosfatase alcalina. A deposição de nódulos mineralizados foi significativamente maior com a concentração de 1 µg/mL do extrato. Esta mesma concentração favoreceu a expressão quantitativa dos genes Alp, Col1a1 e Dmp1 e a secreção das proteínas correspondentes vistas por imunolocalização. Conclui-se que baixas concentrações do extrato de semente de uva podem influenciar e favorecer a atividade de células odontoblastoides, contribuindo para a regeneração dentinária, devido à suas características antioxidantes e biomineralizadoras / The process of dentinogenesis generally involves several steps of cell differentiation, culminating with an extracellular matrix very similar to bone tissue. Dentin regeneration may be necessary in cases of pulp exposure, root resorption and carious lesions. Studies on functional regeneration of lost tissues are being carried on recently, based on the presence of cells, scaffolds and/or substances that induce cell proliferation and differentiation. Among the several substances which can interact with cell metabolism are the extracts rich in proanthocyanidin, bioactive phenolic compounds present in fruits, vegetables and seeds. The purpose of this project is to evaluate the stimulatory potential of four different concentrations of grape seed extract (GSE) in the functional activity of odontoblast-like cells. MDPC-23 cell line was seeded in culture flasks until subconfluence followed by cell seeding in 24-well culture plates in the concentration of 104/well and divided in five groups: 1) cells without GSE, 2) cells + 0,1 µg/mL of GSE; 3) cells + 1 µg/mL of GSE; cells + 10 µg/mL of GSE and cells + 20 µg/mL of GSE. After 3, 7 and 10 days, there were evaluated the following parameters: cell proliferation and differentiation, ALP detection and activity, total protein content, mineralization detection and quantification, as well as the expression of genes Alp, Col1a1 and Dmp1 through Real Time PCR and their corresponding proteins by means of immunolocalization. Data were analyzed by ANOVA and Kruskal-Wallis statistical tests, with significance level set at 5%. The results demonstrated cell proliferation and viability with low GSE concentrations (0,1 and 1 µg/mL), as well as total protein content and ALP activity. Deposition of mineralized nodules was significantly increased with the GSE concentration of 1 µg/mL. The same concentration favoured the expression of genes Alp, Col1a1 and Dmp1 as well as the corresponding proteins. It is concluded that low concentrations of grape seed extract may influence functional activity of odontoblast- like cells, contributing to dentin regeneration by means of its antioxidant and biomineralizing properties

O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro, os efeitos de diferentes concentrações do fator de crescimento transformador beta 1 (TGF-&#x3B2;1) em células-tronco derivadas da polpa de dentes decíduos esfoliados humanos (SHED), com relação à viabilidade, proliferação, migração e diferenciação celular. As SHED foram mantidas em meio de cultura MEM&#x3B1; + soro fetal bovino (FBS) 10% + penicilina e estreptomicina 1% e tratadas com TGF-&#x3B2;1 na concentração de 1,0; 5,0 e 10,0 ng/mL. Após 1, 3, 5 e 7 dias, foram avaliadas a viabilidade celular pelo método MTT e a proliferação pelo método SRB. Após 24 h de tratamento com TGF-&#x3B2;1, foi realizado um ensaio de migração celular por meio de insertos com poros de 8 &#x3BC;m. Para a avaliação da diferenciação celular de SHED em odontoblastos foram analisados por meio da RT-PCR os marcadores DSPP e DMP-1, após tratamento com TGF-&#x3B2;1 nas diferentes concentrações por 14 dias. Os resultados foram submetidos à ANOVA seguido do teste de Tukey. Em relação à viabilidade celular, as diferentes concentrações de TGF-&#x3B2;1 não tiveram efeito citotóxico sobre SHED. As células tratadas com diferentes concentrações de TGF-&#x3B2;1 apresentaram maiores taxas de proliferação que as do controle negativo (MEM&#x3B1; + 10% de FBS) a partir do 3o dia (p=0,000). Observou-se maiores taxas de migração em direção aos meios contendo TGF-&#x3B2;1, mas sem diferença estatisticamente significativa entre as diferentes concentrações utilizadas, entretanto, houve diferença estatisticamente significativa entre as diferentes concentrações de TGF-&#x3B2;1 com o controle positivo (p=0,000), controle negativo (p=0,000) e entre o controle positivo e negativo (p=0,002). A expressão de DMP-1 foi observada de forma crescente nas doses de 1,0 e 5,0 ng/mL de TGF-&#x3B2;1 ao longo do período (1, 7 e 14 dias) e na dose de 10,0 ng/mL a marcação foi mais intensa desde o primeiro dia do estímulo. Em relação à expressão de DSPP, o grupo tratado com 10,0 ng/mL apresentou marcação após 14 dias de tratamento. Sendo assim, este estudo permite concluir que as diferentes concentrações de TGF-&#x3B2;1 estimularam a proliferação e migração celular, sem efeito citotóxico sobre as células ao longo do período do estudo. Em relação à diferenciação celular a concentração 10,0 ng/mL de TGF-&#x3B2;1 estimulou à expressão de DMP-1 e DSPP. / The aim of this study was to evaluate, in vitro, the effect of transforming growth factor beta 1 (TGF-&#x3B2;1) in stem cells derived from the pulp of human exfoliated deciduous teeth (SHED) regarding to cell viability, proliferation, migration and differentiation. SHED were maintained in MEM&#x3B1; culture medium + 10% fetal bovine serum (FBS) + 1% penicillin and streptomycin, and treated with TGF-&#x3B2;1 at the following concentrations of 1.0; 5.0 and 10.0 ng/mL. After 1, 3, 5 and 7 days, cell viability was assessed by MTT assay and proliferation by the SRB method. After 24h of TGF-&#x3B2;1 treatment, cell migration assay was carried out using inserts of 8 &#x3BC;m pore size. To evaluate SHED differentiation into odontoblasts, DMP-1 and DSPP markers were analyzed by RT-PCR, after treatment at different concentrations of TGF-&#x3B2;1 for 14 days. The results were submitted by ANOVA and Tukey test. With respect to cell viability, the different TGF-&#x3B2;1 concentrations did not have cytotoxic effect on SHED. The cells treated by different TGF-&#x3B2;1 concentrations showed higher proliferation rates than those of the negative control (MEM&#x3B1; + 10% FBS) after the third day (p = 0.000). Higher rates of migration towards the media containing TGF-&#x3B2;1 were observed, but there were no statistically significant differences among the concentrations. All different TGF-&#x3B2;1 concentrations showed statistically significant differences with the positive control (p=0.000) and negative control (p=0.000). Statistically significant differences were observed between positive and negative control (p=0.002). DMP-1 expression was observed incrementally at TGF-&#x3B2;1 concentrations of 1.0 and 5.0 ng/mL at 1, 7, and 14 days and the concentration of 10.0 ng/mL was more intense from day one of the stimulus. DSPP expression was more intense after 14 days of treatment with the concentration of 10.0 ng/mL. Thus, this study concluded that different TGF-&#x3B2;1 concentrations stimulated cell proliferation and migration, without cytotoxic effect on the cells throughout the study period. From the perspective of cell differentiation, TGF-&#x3B2;1 concentration of 10.0 ng/mL was capable of stimulating DMP-1 and DSPP expression.

O laser de baixa intensidade ou terapêutico promove a biomodulação das respostas reparadoras naturais de células pulpares como os odontoblastos, sendo uma estratégia de tratamento a ser utilizada na terapia pulpar. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o efeito da irradiação do laser terapêutico de arseniato de gálio e alumínio (GaAlAs) no comportamento da linhagem odontoblástica (MDPC-23) de camundongos. Células odontoblásticas foram plaqueadas na concentração de 104 células/poço (n=5) e submetidas às irradiações nos dias 0, 1, 2 e 3 após o plaqueamento. Foram avaliadas as doses de 0,2 e 1,0 J/cm2 e comparadas ao grupo controle não irradiado. Os parâmetros analisados foram proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total, atividade de fosfatase alcalina após 3, 7, 10 e 14 dias; detecção e quantificação de matriz mineralizada após 14 dias e quantificação do fator de crescimento VEGF no sobrenadante das culturas após 7 e 10 dias. Imunofluorescência para proteínas colágenas e não-colágenas após 3, 7 e 10 dias foi realizada para verificar sua expressão qualitativa nos grupos propostos. Os resultados mostraram que o laser não afetou a viabilidade celular que ficou acima dos 90% em todos os grupos e períodos experimentais. De modo geral, os grupos irradiados apresentaram redução na proliferação, maior conteúdo de proteína total e maior atividade de ALP em relação ao observado no grupo controle. A marcação com vermelho de alizarina mostrou maior quantidade de áreas nodulares de matriz calcificada no grupo irradiado com 0,2 J/cm2, dados comprovados pela análise quantitativa. Uma maior concentração de VEGF no sobrenadante da cultura foi observada no grupo irradiado com a menor dose. A imunofluorescência revelou que a menor dose favoreceu a secreção de proteínas colágenas e não colágenas Portanto, o laser de baixa potência, dentro dos parâmetros empregados, favoreceu a expressão do fenótipo odontoblástico. / Low-level laser therapy (LLLT) has been studied as a strategy to be used in pulp therapy through biomodulation of its cells, like odontoblasts. The purpose of this investigation was to evaluate the effect of biomodulation on odontoblastic cells using low-level GaAlAs laser. Odontoblastic cells were cultured in a concentration of 104 cells/well (n=5) and submitted to the energy fluencies of 0,2 and 1,0 J/cm2 and compared to control group. There were evaluated cell proliferation and viability, total protein content and alkaline phosphatase activity ( 3, 7, 10 and 14 days), as well as detection and quantification of mineralized nodules after 14 days and VEGF quantification after 7 and 10 days. Immunofluorescence for collagen and non-collagen proteins was performed to verify their qualitative expression in the proposed groups after 3, 7 and 10 days. The results showed that LLLT did not affect cell viability in all the experimental groups. The irradiated cultures presented reduction in the proliferation, higher total protein content and ALP activity compared to the control group. Staining with red alizarin showed greater amount of nodular areas of calcified matrix in the group irradiated with 0,2 J/cm2, data confirmed by quantitative analysis. It was also observed a higher concentration of VEGF in the culture of the cells irradiated with the lowest energy fluence as well as an enhancement of the secretion of collagen and non-collagen proteins revealed through immunofluorescence. It was concluded that therapy with LLLT favors the expression of odontoblastic phenotype.

O laser de baixa intensidade ou terapêutico promove a biomodulação das respostas reparadoras naturais de células pulpares como os odontoblastos, sendo uma estratégia de tratamento a ser utilizada na terapia pulpar. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o efeito da irradiação do laser terapêutico de arseniato de gálio e alumínio (GaAlAs) no comportamento da linhagem odontoblástica (MDPC-23) de camundongos. Células odontoblásticas foram plaqueadas na concentração de 104 células/poço (n=5) e submetidas às irradiações nos dias 0, 1, 2 e 3 após o plaqueamento. Foram avaliadas as doses de 0,2 e 1,0 J/cm2 e comparadas ao grupo controle não irradiado. Os parâmetros analisados foram proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total, atividade de fosfatase alcalina após 3, 7, 10 e 14 dias; detecção e quantificação de matriz mineralizada após 14 dias e quantificação do fator de crescimento VEGF no sobrenadante das culturas após 7 e 10 dias. Imunofluorescência para proteínas colágenas e não-colágenas após 3, 7 e 10 dias foi realizada para verificar sua expressão qualitativa nos grupos propostos. Os resultados mostraram que o laser não afetou a viabilidade celular que ficou acima dos 90% em todos os grupos e períodos experimentais. De modo geral, os grupos irradiados apresentaram redução na proliferação, maior conteúdo de proteína total e maior atividade de ALP em relação ao observado no grupo controle. A marcação com vermelho de alizarina mostrou maior quantidade de áreas nodulares de matriz calcificada no grupo irradiado com 0,2 J/cm2, dados comprovados pela análise quantitativa. Uma maior concentração de VEGF no sobrenadante da cultura foi observada no grupo irradiado com a menor dose. A imunofluorescência revelou que a menor dose favoreceu a secreção de proteínas colágenas e não colágenas Portanto, o laser de baixa potência, dentro dos parâmetros empregados, favoreceu a expressão do fenótipo odontoblástico. / Low-level laser therapy (LLLT) has been studied as a strategy to be used in pulp therapy through biomodulation of its cells, like odontoblasts. The purpose of this investigation was to evaluate the effect of biomodulation on odontoblastic cells using low-level GaAlAs laser. Odontoblastic cells were cultured in a concentration of 104 cells/well (n=5) and submitted to the energy fluencies of 0,2 and 1,0 J/cm2 and compared to control group. There were evaluated cell proliferation and viability, total protein content and alkaline phosphatase activity ( 3, 7, 10 and 14 days), as well as detection and quantification of mineralized nodules after 14 days and VEGF quantification after 7 and 10 days. Immunofluorescence for collagen and non-collagen proteins was performed to verify their qualitative expression in the proposed groups after 3, 7 and 10 days. The results showed that LLLT did not affect cell viability in all the experimental groups. The irradiated cultures presented reduction in the proliferation, higher total protein content and ALP activity compared to the control group. Staining with red alizarin showed greater amount of nodular areas of calcified matrix in the group irradiated with 0,2 J/cm2, data confirmed by quantitative analysis. It was also observed a higher concentration of VEGF in the culture of the cells irradiated with the lowest energy fluence as well as an enhancement of the secretion of collagen and non-collagen proteins revealed through immunofluorescence. It was concluded that therapy with LLLT favors the expression of odontoblastic phenotype.