O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro, os efeitos de diferentes concentrações do fator de crescimento transformador beta 1 (TGF-β1) em células-tronco derivadas da polpa de dentes decíduos esfoliados humanos (SHED), com relação à viabilidade, proliferação, migração e diferenciação celular. As SHED foram mantidas em meio de cultura MEMα + soro fetal bovino (FBS) 10% + penicilina e estreptomicina 1% e tratadas com TGF-β1 na concentração de 1,0; 5,0 e 10,0 ng/mL. Após 1, 3, 5 e 7 dias, foram avaliadas a viabilidade celular pelo método MTT e a proliferação pelo método SRB. Após 24 h de tratamento com TGF-β1, foi realizado um ensaio de migração celular por meio de insertos com poros de 8 μm. Para a avaliação da diferenciação celular de SHED em odontoblastos foram analisados por meio da RT-PCR os marcadores DSPP e DMP-1, após tratamento com TGF-β1 nas diferentes concentrações por 14 dias. Os resultados foram submetidos à ANOVA seguido do teste de Tukey. Em relação à viabilidade celular, as diferentes concentrações de TGF-β1 não tiveram efeito citotóxico sobre SHED. As células tratadas com diferentes concentrações de TGF-β1 apresentaram maiores taxas de proliferação que as do controle negativo (MEMα + 10% de FBS) a partir do 3o dia (p=0,000). Observou-se maiores taxas de migração em direção aos meios contendo TGF-β1, mas sem diferença estatisticamente significativa entre as diferentes concentrações utilizadas, entretanto, houve diferença estatisticamente significativa entre as diferentes concentrações de TGF-β1 com o controle positivo (p=0,000), controle negativo (p=0,000) e entre o controle positivo e negativo (p=0,002). A expressão de DMP-1 foi observada de forma crescente nas doses de 1,0 e 5,0 ng/mL de TGF-β1 ao longo do período (1, 7 e 14 dias) e na dose de 10,0 ng/mL a marcação foi mais intensa desde o primeiro dia do estímulo. Em relação à expressão de DSPP, o grupo tratado com 10,0 ng/mL apresentou marcação após 14 dias de tratamento. Sendo assim, este estudo permite concluir que as diferentes concentrações de TGF-β1 estimularam a proliferação e migração celular, sem efeito citotóxico sobre as células ao longo do período do estudo. Em relação à diferenciação celular a concentração 10,0 ng/mL de TGF-β1 estimulou à expressão de DMP-1 e DSPP. / The aim of this study was to evaluate, in vitro, the effect of transforming growth factor beta 1 (TGF-β1) in stem cells derived from the pulp of human exfoliated deciduous teeth (SHED) regarding to cell viability, proliferation, migration and differentiation. SHED were maintained in MEMα culture medium + 10% fetal bovine serum (FBS) + 1% penicillin and streptomycin, and treated with TGF-β1 at the following concentrations of 1.0; 5.0 and 10.0 ng/mL. After 1, 3, 5 and 7 days, cell viability was assessed by MTT assay and proliferation by the SRB method. After 24h of TGF-β1 treatment, cell migration assay was carried out using inserts of 8 μm pore size. To evaluate SHED differentiation into odontoblasts, DMP-1 and DSPP markers were analyzed by RT-PCR, after treatment at different concentrations of TGF-β1 for 14 days. The results were submitted by ANOVA and Tukey test. With respect to cell viability, the different TGF-β1 concentrations did not have cytotoxic effect on SHED. The cells treated by different TGF-β1 concentrations showed higher proliferation rates than those of the negative control (MEMα + 10% FBS) after the third day (p = 0.000). Higher rates of migration towards the media containing TGF-β1 were observed, but there were no statistically significant differences among the concentrations. All different TGF-β1 concentrations showed statistically significant differences with the positive control (p=0.000) and negative control (p=0.000). Statistically significant differences were observed between positive and negative control (p=0.002). DMP-1 expression was observed incrementally at TGF-β1 concentrations of 1.0 and 5.0 ng/mL at 1, 7, and 14 days and the concentration of 10.0 ng/mL was more intense from day one of the stimulus. DSPP expression was more intense after 14 days of treatment with the concentration of 10.0 ng/mL. Thus, this study concluded that different TGF-β1 concentrations stimulated cell proliferation and migration, without cytotoxic effect on the cells throughout the study period. From the perspective of cell differentiation, TGF-β1 concentration of 10.0 ng/mL was capable of stimulating DMP-1 and DSPP expression.

Made available in DSpace on 2017-03-14T14:10:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-04. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-14T14:42:46Z : No. of bitstreams: 1 000874678_20181204.pdf: 199887 bytes, checksum: 7fcbda625640b77a88d2ddde7778f477 (MD5) / Objetivou-­‐se  avaliar  os  efeitos  da  fototerapia  de  baixa  intensidade  realizada  com   diodos  emissores  de  luz  (LEDs)  nos  comprimentos  de  onda  azul  (455  nm)  e  vermelho   (630  nm)  sobre    o  metabolismo  de  células  pulpares.   Quatro  estudos  foram   desenvolvidos.  No  estudo  1  foi  avaliado  o  efeito  do  LED  vermelho  sobre  células   MDPC-­‐23,  utilizando-­‐se  dose  de  energia  fixa  (DE)  de  2J/cm2,  com  variação  da   densidade  de  potência  (DP)  em  20  e  40mW/cm2  e  frequência  de  exposição.  Vinte  e   quatro  horas  após  a  irradiação  foram  avaliadas  a  viabilidade  celular,  o  número  de   células  viáveis  e  a  dosagem  de  proteína  total.  No  estudo  2  investigou-­‐se  o  efeito  da   luz  azul  sobre  células  MDPC-­‐23.  Foram  utilizadas  DE  de  2J/cm2  e  4J/cm2  e  DP  de  20   mW/cm2    e  foram  avaliadas  a  viabilidade,  número  de  células  viáveis,  morfologia   celular  em  MEV  e  expressão  gênica  de  fosfatase  alcalina  (Alp),  colágeno  (Col-­‐I)  e   proteína  da  matriz  dentinária  (Dmp-­‐1).  O  estudo  3  deterrminou  os  efeitos   transdentinários  da  luz  azul  e   vermelha  sobre  células  MDPC-­‐23.  As  DPs  foram   ajustadas  em  40  e  80mW/cm2  para  luz  vermelha  e  azul,  respectivamente.  Após   irradiação  foram  avaliadas  a  viabilidade  celular,  atividade  de  fosfatase  alcalina,   produção  de  proteína  total  e  colágeno.  No  estudo  4  foram  investigados  os  efeitos   bioestimuladores  da  luz  azul  sobre  cultura  primária  de  polpa  humana.  Foram   utilizadas  DE  de  2  e  4J/cm2  com  DP  de  20mW/cm2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / The  overall  aim  of  this  work  was  to  evaluate  the  effects  of  the  low  level   phototherapy  using  light  emitting  diodes  (LEDs)  at  the  blue  (455nm)  and  red   (630nm)  wavelengths  on  the  metabolism  of  pulp  cells  in  culture.  Four  studies  were   performed.  In  the  first  study,  the  effect  of  red  LEDs  on  MDPC-­‐23  cells  was   investigated,  using  a  fixed  energy  dose  of  2J/cm2  and  varying  the  density  of  potency   in  20  and  40mW/cm2  and  the  frequency  of  irradiation.  Cell  viability,  number  of  viable   cells  and  production  of  total  protein  were  analyzed  after  24h  from  the  irradiation.  In   the  second  study  it  was  evaluated  the  effect  of  the  blue  light  on  MDPC-­‐23  cells.  The   energy  doses  of  2  or  4J/cm2  with  a  dose  of  potency  of  20mW/cm2  were  delivered  to   the  cells.  Cell  viability,  number  of  viable  cells,  cell  morphology  in  SEM  and  gene   expression  for  alkaline  phosphatase  (Alp),  collagen  (Col-­‐I)  and  dentin  matrix  protein   (Dmp-­‐1)  were  analyzed.  The  third  study  investigated  the  transdentinal  effects  of  a   blue  and  red  light  on  MDPC-­‐23  cells.  The  densities  of  potencies  were  adjusted  in  40   and  80mW/cm2  for  the  blue  and  red  lights,  respectively.  After  irradiation  of  the  cell   culture,  cell  viability,  alkaline  phosphatase  activity,  production  of  total  protein  and   collagen  were  determined.  Lastly,  the  biostimulatory  effect  of  the  blue  light  on  a   primary  culture  of  human  pulp  was  investigated  in  the  fourth  study. .. (Complete abstract electronic access below)

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Banca: Marcelo Ferrarezi de Andrade / Banca: José Carlos Pereira / Resumo: O objetivo da presente pesquisa foi avaliar in vitro os efeitos citotóxicos de diferentes concentrações de um agente clareador de ativação dual à base de peróxido de hidrogênio, sobre células de linhagem odontoblástica MDPC-23. Para isso, 50 discos de dentina com 0,5mm de espessura, obtidos de dentes terceiros molares humanos íntegros, foram tratados com EDTA 0,5 M, pH 7,4 por 1 minuto, sendo a condutância hidráulica (Lp; æL/mm2/min/cm H2O) determinada para cada um deles. Estes discos foram distribuídos em 5 grupos de acordo com os valores de permeabilidade. Os discos de dentina adaptados a um dispositivo metálico foram autoclavados, posicionados de maneira invertida (superfície pulpar dos discos voltados para cima) em recipientes plásticos de 24 compartimentos ("wells"). Então, 5 x 104 células MDPC-23/cm2 foram semeadas em cada compartimento. Após 72 horas de incubação na temperatura de 37º C, 5% de CO2 e 95% de ar, os dispositivos com os discos foram invertidos nos compartimentos, de tal maneira que os materiais experimentais pudessem ser aplicados (2 trocas de 15 minutos cada) sobre a superfície oclusal dos discos, caracterizando os 164 seguintes grupos experimentais: G1: H2O2 7,5%; G2: H2O2 20%; G3: H2O2 35%; e G4: gel base (sem o H2O2). No grupo controle (G5) os discos não foram tratados. Após esta etapa do experimento, o metabolismo das células MDPC-23 que permaneceram aderidas à superfície pulpar dos discos de dentina foi avaliado pela técnica de MTT. A morfologia das células e dentina tratada com os agentes experimentais foram avaliadas em microscopia eletrônica de varredura. A análise estatística de Kruskal-Wallis demonstrou que as três concentrações do agente clareador à base de H2O2 causaram intenso efeito citotóxico sobre as células MDPC-23. As concentrações de 7,5%, 20% e 35% de H2O2 aplicadas sobre os discos de dentina com 0,5mm... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The aim of this in vitro study was evaluate the transdentinal effects of an experimental bleaching agent with different concentration of hydrogen peroxide on the immortalized odontoblast-cell line MDPC-23. Fifty dentin disks, 0.5mm thick, cut from extracted non-carious permanent third human molar were conditioned for 1 minute with 0.5M EDTA, pH 7.4 and the hydraulic conductance (Lp; æL/mm2/min/cm H2O) was determined. The dentin discs were adapted to a metallic device which were sterilized and placed in wells of 24-well dishes (the pulpal surface of the discs remained in up position). Then, the cells were plated (5 x 104 cells/cm2) on the pulpal surface of the discs and incubated for 72 hours at 37oC, with 5% CO2 and 95% air. The metallic devices with the adapted dentin discs were inverted into the wells in such way that the experimental bleaching agents were applied on the oclusal surface of the discs for 30 minutes (2 changes of 15 minutes). The different concentration of H2O2 present in the bleaching agent gave rise to the following experimental groups: G1: 7.5% H2O2; G2: 20% H2O2; G3: 35% H2O2; and G4: 0% H2O2. In control group the dentin discs were not 167 submitted to treatment. The metabolism of MDPC-23 cells which remained attached to the pulpal surface of the discs was evaluated by the methyltetrazolium assay (MTT) and the cell and dentin morphology was assessed under scanning electron microscope (SEM). The statistical analysis of Kruskal-Wallis determined that the experimental bleaching agent caused an intense cytotoxic effects on the MDPC-23 cells. This experimental agent containing H2O2 at 7.5%; 20%; and 35% concentration decreased the cell metabolism by 62.65%; 62.28%; and 65.69%, respectively. The complementary statistical test of Mann-Withney demonstrated no difference between groups 1 and 2. The bleaching agent with... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Banca: José Mauro Granjeiro / Banca: Welington Dinelli / Resumo: A presente pesquisa avaliou o efeito citotóxico de diferentes materiais dentários sobre células de linhagem odontoblástica MDPC-23 em cultura. Para isto, corpos-de-prova com dimensões de 4mm de diâmetro e 2 mm de profundidade foram confeccionados com os seguintes materiais: hidróxido de cálcio (Hydro C - Grupo HCa); RelyX Luting (Grupo RL); Vitrebond (Grupo VB); e RelyX Unicem (Grupo RU). Cada espécime foi imerso em meio de cultura não suplementado com soro fetal bovino (MC-SFB) e incubado pelos períodos de 24 horas ou 7 dias. Células odontoblastóides MDPC-23 foram semeadas (3x104 células/cm2) em pratos de acrílico com 24 compartimentos e incubados por 72 horas, sendo que após este período, o meio de cultura completo (DMEM) foi substituído pelos extratos obtidos de cada material experimental. Após incubação adicional de 24 horas, a atividade da enzima desidrogenase succíninca das células foi avaliada através do teste de MTT. No grupo controle, o meio de cultura foi substituído pelo MC-SFB fresco (sem tratamento). Para os períodos de 24 horas, os grupos HCa, RL, VB e RU apresentaram valores de redução no metabolismo celular de 91,52%; 78,17%; 89,14%; e 2,64%, respectivamente, quando comparados com o grupo controle (DMEM), o qual não reduziu o metabolismo celular. Com relação ao período experimental de 7 dias, os valores de redução na atividade metabólica para os grupos HCa, RL, VB e RU foram de 91,13%, 79,04%, 87,27% e 10,51%, respectivamente. Segundo a análise estatística de Kruskall-Wallis complementada pelo teste de Mann-Whitney não houve diferença entre os grupos HCa e VB, os quais foram os materiais mais citotóxicos em ambos os períodos avaliados. RU foi o cimento menos tóxico, sendo que não houve diferença estatisticamente significante com o grupo controle no período de 24 horas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present in vitro study evaluated the cytotoxic effects of different dental materials on the odontoblast-like cells MDPC-23. For this purpose, round samples (2-mm thick and 4-mm in diameter) were prepared with the following experimental materials: calcium hydroxide (Hydro C - Group HCa); RelyXTM Luting Cement (Group RL); Vitrebond (Group VB); and RelyXTM Unicem (Group RU). The samples were placed in fresh culture medium with no fetal bovine serum (DMEM-FBS) and incubated for 24 hours or 7 days at 37°C with 5% CO2, and 95% air. The odontoblast cells were plated (3x104 cells/cm2) in wells of five 24-wells dishes and incubated for 72 hours. After this period, the complete culture medium (DMEM) was replaced by the extracts obtained from every sample. The cells in contact with the extracts were incubated for additional 24 hours. The MTT Assay was carried out to evaluate the cell metabolism. In control group (DMEM) the nontreated fresh culture medium (DMEM-FBS) was applied on the cultured cells. At 24 hours period, the experimental materials HCa, RL, VB and RU decreased the mitochondrial respiration by: 91,52%; 78,17%; 89,14%; and 2,64%, respectively. At 7 days, the reduction of the cell metabolism for groups HCa, RL, VB and RU was: 91,13%; 79,04%; 87,27%; and 10,51%, respectively. The statistical analysis of Kruskal-Wallis complemented by the Mann-Whitney test demonstrated there was no statistical difference between the groups HCa and VB which presented the highest cytotoxic effects on the MDPC-23 cells. On the other hand, no difference statistically significant was observed between RU and DMEM, at 24 hours period. The ranking of cytotoxicity observed at 24 hours and 7 days was: HCa=VB>RL>RU=DMEM and HCa=VB>RL>RU>DMEM, respectively. Based upon the scientific data presented in this in vitro study, it was concluded... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Resumo: Este estudo teve como objetivo geral utilizar células da linhagem MDPC-23 em testes de citotoxicidade de materiais e na investigação dos efeitos de proteínas bioativas no estímulo da síntese de componentes da matriz dentinária. Os objetivos específicos foram avaliar o efeito citotóxico de soluções utilizadas na lavagem de paredes cavitárias e de materiais dentários recomendados para aplicação em dentina sobre células de linhagem odontoblástica MDPC-23. Também foi intuito avaliar o efeito do concentrado de proteínas extraídas da dentina de coelho sobre a expressão de genes específicos. Este trabalho, apresentado na forma de três artigos científicos, utilizou a técnica de MTT para avaliar o efeito citotóxico de soluções de CLX em variadas concentrações sobre as células MDPC-23. Esta técnica foi utilizada também para a investigação do efeito citotóxico de três diferentes cimentos de ionômero de vidro modificados por resina: Vitrebond (VB); Vitremer (VM); e RelyX Luting Cement (RX), associada ao teste de implantação destes materiais resinosos no tecido conjuntivo subcutâneo de ratos. A expressão dos genes que codificam para colágeno tipo-1 e fibronectina nas células expostas ao concentrado de proteínas extraídas da dentina de coelhos foi avaliada por RT-PCR. Os resultados demonstraram que a CLX é citotóxica às células da linhagem MDPC-23 de maneira dose-dependente. Também foi demonstrado que os cimentos de ionômero de vidro são biocompatíveis ao tecido conjuntivo subcutâneo de ratos, apesar de apresentarem diferentes graus de citotoxicidade sobre as células odontoblastóides. As proteínas bioativas extraídas da dentina de coelhos apresentaram efeito estimulatório na expressão de genes que codificam para colágeno tipo-1 e fibronectina. Pode-se concluir que as células MDPC-23 são um modelo que pode ser utilizado nos testes de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The general aim of this in vitro and in vivo study was to evaluate the cytotoxicity of rinsing solutions and dental materials as well as to determine the expression of genes related with the dentinogenesis. The specific objectives were to evaluate the cytotoxicity effects of rinsing solutions used to clean cavity walls and dental materials used to restore dental cavities. The effects of EDTA soluble dentin proteins (members of TGF-â superfamily) on specific gene espression was also evaluated. For this porpose three scientific papers were prepared: 1) MTT assay was employed to investigate the cytotoxic effects of different concentrations of chlorhexidine to MDPC-23 cells as well as to; 2) to determine the cytotoxicity of three different resin-modified glass-ionomer cements (RMGIC): Vitrebond (VB); Vitremer (VM); and RelyX Luting Cement (VM). The results of this in vitro study was compared to the in vivo study in which RMGICs were implanted into the connective tissue of rats; 3) Type-1 collagen and fibronectin gene expression on cells exposed to EDTAsoluble dentin proteins was assessed by means of semi-quantitative RT-PCR. The results demonstrated that chlorhexidine is cytotoxic to MDPC-23 cells in a dose-dependent way. It was also demonstrated that RMGICs are biocompatible following implantation into surgical pockets prepared in the dorsal connective tissue of rats in spite of the different degrees of in vitro cytotoxicity presented by these materials to MDPC-23 cells. The stimulatory effects of the bioactive molecules on the expression of the genes that encodes to type-1 collagen and fibronectin was clearly demonstrated. Based on the experimental conditions, it was concluded that MDPC-23 cells are suitable model to be used on cytotoxicity tests of dental materials and rinsing solutions as well as to evaluate the dentinogenesis mechanisms. / Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Coorientador: Claudio Miguel da Costa Neto / Banca: Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado / Banca: Elisa Maria Aparecida Giro / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-16Bitstream added on 2014-06-13T18:35:08Z : No. of bitstreams: 1 soares_dgs_me_arafo.pdf: 914456 bytes, checksum: bc6bc4ecf7a6e87d8ae452a6cd844754 (MD5) / No clareamento dental caseiro são utilizados géis clareadores contendo baixas concentrações de peróxido de carbamida (PC). Entretanto, o componente ativo responsável pelo clareamento é o peróxido de hidrogênio (H2O2), o qual pode se difundir através do esmalte e dentina e causar efeitos tóxicos sobre células pulpares. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade trans-amelodentinária de géis clareadores à base de PC sobre células odontoblastóides MDPC- 23 após diferentes tempos de contato dos produtos com o esmalte, bem como o efeito do clareamento na estrutura dental. Para avaliação da citotoxicidade, discos de esmalte/dentina obtidos de incisivos bovinos foram adaptados em câmaras pulpares artificiais. Géis clareadores com 10% ou 16% de PC foram aplicados por 8 horas diárias sobre a superfície de esmalte pelos períodos de 1, 7 ou 14 dias. Os extratos (meio de cultura + produtos do gel clareador que se difundiram através do esmalte/dentina) foram aplicados por 1 hora sobre as células em cultura, sendo realizada avaliação do metabolismo celular pelo teste do MTT (α=5%; Anova um critério e teste de Tukey), e da morfologia celular por MEV. Para avaliação das alterações estruturais do esmalte, foi realizada mensuração da microdureza Knoop (α=5%; Anova dois critérios e teste de Tukey) em blocos de esmalte (50g/15s) antes do clareamento e nos períodos de 1, 7 e 14 dias, bem como avaliação da morfologia superficial por MEV. Os resultados não demonstraram diferença significante para o metabolismo celular entre o grupo controle e nos grupos onde foi aplicado o gel com PC a 10% (p>0.05). Já para os grupos clareados com 16% de PC, foi observado diferença significante nos períodos de 1, 7 e 14 dias quando comparados ao grupo controle (p<0.05). Não houve diferença significante quando se comparou os grupos 10% e 16% de PC em todos... / The home bleaching technique uses gels with low concentrations of carbamide peroxide (CP). However, the hydrogen peroxide is the active component and can difuse by enamel and dentine to cause toxic effects on pulp cells. The purpose of this study was to evaluate the trans-enamel and transdentinal cytotoxicity of bleaching gels based on carbamide peroxide (CP) on odontoblast-like cells after different contact times of the products with enamel, and the effects of bleaching on the tooth structure. To analyze the citotoxicity, enamel/dentine discs were obtained from bovine incisors and placed in artificial pulp chambers. Bleaching gels containing 10% or 16% CP were applied for 8 hours/day on the enamel side of the discs during periods of 1, 7 or 14 days. The extracts (culture medium plus bleaching gel products that diffused through the discs) were collected and applied on previously cultured MDPC-23 cells for 1 hour. Cell metabolism was evaluated by the MTT assay (α=0.05; one-way ANOVA and Tukey’s test), and the cell morphology was analysed by SEM. To evaluate the structural changes on the enamel, the Knoop microhardness was analized (α=0.05; two-way ANOVA and Tukey’s test) on enamel blocks (50g/15s) before and after 1, 7 and 14 applications of bleaching agent, and the morphological surface was analized by SEM. There were no significant difference (p>0.05) for cell metabolism between the controls and the groups bleached with 10% CP gel. In the groups bleached with 16% CP gel, however, cell metabolism decreased significantly (p<0.05) at 1, 7 and 14 days. There was no significant difference (p>0.05) among 1, 7 or 14 applications of the gels for either of the CP concentrations. The microhardness for the groups bleached with 10% CP gel have difference with the control group after 7 and 14 applications. For the groups bleached with 16% of CP, significant difference was observed in all periods... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Banca: André Luiz Fraga Briso / Banca: Marcelo Giannini / Banca: Edson Alves de Campos / Banca: Marcelo Ferrarezi de Andrade / Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar a citotoxicidade trans-amelodentinária de um gel clareador com 35% de H2O2 aplicado sobre dentes com ou sem restauração de resina composta e submetidos ou não a procedimento de envelhecimento. Cavidades preparadas em discos de esmalte/dentina obtidos de dentes bovinos íntegros foram restauradas com sistema adesivo autocondicionante e resina composta. Os discos foram armazenados em solução aquosa por 24 horas ou 6 meses e o procedimento de termociclagem foi realizado somente nos grupos armazenados por 6 meses. Os discos foram posicionados em câmaras pulpares artificiais e distribuídos em grupos: Íntegros 24 horas; Íntegros 24 horas clareados; Íntegros 6 meses; Íntegros 6 meses clareados; Restaurados 24 horas; Restaurados 24 horas clareados; Restaurados 6 meses; e Restaurados 6 meses clareados. O gel clareador foi aplicado sobre os discos por 15 minutos (1 aplicação) ou por 45 minutos (3 aplicações consecutivas de 15 minutos cada), sendo que os extratos (meio de cultura em contato com a dentina + componentes dos gel clareador que se difundiram através dos discos) foram recolhidos e aplicados por 1 hora sobre células odontoblastóides MDPC-23 em cultura (12.500 células/cm2). Para o experimento no qual o gel clareador foi aplicado somente uma vez, observouse redução significativa do metabolismo celular apenas para o grupo de dentes restaurados quando comparado ao controle (íntegros 24 horas não clareados) e ao grupo restaurado não clareado, independente do tempo de armazenamento (Tukey, p<0,05). Quando o gel clareador foi aplicado por três vezes consecutivas, houve diminuição do metabolismo celular estatisticamente significante em todos os grupos clareados (Mann-Whitney, p<0,05), sendo observadas intensas alterações morfológicas das células MDPC-23. Entretanto, não houve diferença com relação a presença de restauração e o tempo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this in vitro study was to evaluate the trans-enamel and transdentinal cytotoxic effects of a 35% hydrogen peroxide (H2O2) bleaching gel applied on non-restored or restored teeth, submitted or not to aging by water storage and thermocycling. Enamel/dentin discs were obtained from bovine central incisors and restored or not with self-etching adhesive system and composite resin. These discs were storage in water for 24 hours or 6 months (aging). Thus, the discs were adapted individually in artificial pulp chambers and distributed according to the following treatments: non-restored teeth stored for 24 hours submitted or not to bleaching procedures; non-restored teeth stored for 6 months submitted or not to bleaching procedures; restored teeth stored for 24 hours submitted or not to bleaching procedures; and restored teeth stored for 6 months submitted or not to bleaching procedures. The bleaching gel was left in contact with the enamel surface for 15 minutes (1 application) or for 45 minutes (3 applications of 15 minutes each). The extracts (culture medium in contact to the dentin surface of the discs + bleaching agents components that diffused across the discs) were collected and applied on previously cultured MDPC-23 cells (12.500 cells/cm2) for 1 hour. Cell metabolism was evaluated by the MTT assay and cell morphology by scanning electron microscopy. One application of bleaching gel in the enamel surface of the discs caused a significant decrease in cell metabolism only in the restored discs in comparison with control discs (unbleached and non-restored discs stored for 24 hours) and unbleached restored discs, regardlles of the storage time (Tukey, p<0.05). On the other hand, bleaching agent applied for three consecutive times on enamel caused a significant decreased in cell metabolism in all bleached discs (Mann- Whitney, p<0.05). However, there were no differences between... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Banca: Nivaldo Antonio Parizotto / Banca: Cristina Kurachi / Banca: Edson Alves de Campos / Banca: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Resumo: O laser de baixa intensidade (LBI) tem sido amplamente utilizado no tratamento da hipersensibilidade dentinária. Pesquisas in vivo demonstraram que o LBI pode promover um aumento na síntese de matriz de dentina e menor grau de inflamação pulpar. Entretanto, o mecanismo que rege este processo permanece desconhecido. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar o metabolismo de células odontoblastóides em cultura quando submetidas à irradiação direta ou transdentinária (indireta) com LBI e seus efeitos sobre o complexo dentino-pulpar. Células odontoblastóides MDPC-23 foram cultivadas em placas de acrílico de 24 compartimentos ou sobre a superfície pulpar de discos de dentina, com 0,4 mm de espessura e obtidos de terceiros molares, adaptados em câmaras pulpares artificiais. As células foram irradiadas diretamente por 3 vezes (a cada 24 horas) com 2, 4, 10, 15 ou 25 J/cm2 e submetidas a avaliação de metabolismo (MTT), síntese de proteína total e de fosfatase alcalina. Os dois melhores parâmetros de irradiação direta foram utilizados para o ensaio de irradiação transdentinária (indireta) das células. Como resultado da etapa direta de irradiação, foi demonstrado que tanto os valores do MTT quanto os níveis de proteína total e fosfatase alcalina apresentaram valores estatisticamente superiores nas doses de 15 e 25 J/cm2 (Mann-Whitney p<0.05). Assim, estas doses foram usadas no teste de irradiação indireta, obtendo-se aumento do metabolismo, síntese de proteína e fosfatase alcalina estatisticamente superior apenas para a dose de 25 J/cm2 (Mann-Whitney p<0.05). Desta maneira, foi possível concluir, dentro das condições experimentais, que os maiores valores de bio-estimulação das células MDPC-23 ocorreram quando estas foram irradiadas com 25 J/cm2. Para avaliação dos efeitos do LBI sobre o complexo dentinopulpar, foram confeccionadas cavidades... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Low level laser (LLL) has been widely used for treatment of dentin hypersensitivity. In vivo studies have shown increased synthesis of dentin matrix and less severe pulpal inflammation in teeth irradiated with LLL. However, the mechanisms that guide this process remain unknown. This study evaluated the metabolism of cultured odontoblastlike cells submitted to direct or transdentinal LLL irradiation as well as its effects on pulp tissue of first molars of rats. The odontoblast-like cells MDPC-23 were cultured (12,500 cells/cm2) on either 24-well acrylic plates or the pulpal surface of dentin discs adapted to artificial pulp chambers. In the first experiment, the cells received direct irradiation for 3 times (every 24 hours) with the following energy doses: 2 J/cm2, 4 J/cm2, 10 J/cm2, 15 J/cm2, and 25J/cm2. Then, the irradiated cells were evaluated concerning their metabolism, synthesis of total protein (TP) and alkaline phosphatase (ALP). The two best direct irradiation parameters obtained in this first protocol were selected to be used in the second experiment, in which the MDPC-23 cells were irradiated through 0.4mm dentin discs obtained from human teeth (indirect irradiation). For the direct assay, the MTT values as well as the TP and ALP levels were significantly higher at the doses of 15 and 25 J/cm2 (Mann-Whitney; p<0.05). When both of these energy doses were used for the indirect irradiation assay, it was observed a statistically significant increase in cell metabolism and synthesis of TP and ALP only for 25 J/cm2 (Mann-Whitney; p <0.05). Under the experimental conditions, it may be concluded that the highest biostimulation values were obtained when the MDPC-23 cells were irradiated with 25 J/cm2. For evaluation of the effects of LLL on the pulp dentin complex, class I cavities were prepared in the first superior molars of rats. After this, the cavities were immediately irradiated... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Diana Gabriela de Sousa Soares / Resumo: No presente estudo, a enzima horseradish peroxidase (HRP) foi empregada como agente catalizador de um gel contendo 35% de peróxido de hidrogênio (H2O2), objetivando a aceleração da sua taxa de decomposição em radicais livres, aumento sobre a eficácia clareadora e minimização da citotoxicidade indireta sobre células pulpares. Três grupos experimentais foram estabelecidos: CN: sem tratamento; PH35%: 35% de H2O2 e PH35%+HRP: 35% de H2O2 com adição de HRP (10 mg/mL). A cinética de degradação do H2O2 e liberação de radicais livres foram avaliados nos períodos de 0, 5, 10 e 15 min, por meio de sondas fluorescentes específicas. A eficácia clareadora foi avaliada em espectrofotômetro UV-vis (E) durante 6 sessões (3x15 min), em discos de esmalte e dentina simulando incisivos inferiores (2,3 mm de espessura). Para análise biológica, o clareamento foi realizado sobre discos adaptados em câmaras pulpares artificiais, sendo o meio de cultura em contato com a dentina (extrato) coletado e aplicado por 1 h sobre células MDPC-23 previamente semeadas (80% confluência). A viabilidade celular (teste de MTT), morfologia (MEV), lesão à membrana citoplasmática (ensaio de live/dead) e estresse oxidativo (carboxy-H2DCFDA) foram avaliados. Discos não submetidos ao clareamento foram empregados como controle negativo. Observou-se que na presença de HRP houve aceleração da degradação do H2O2 com concomitante aumento na formação de radicais livres em comparação ao gel sem adição da enzima. Estes resultad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the present study, the horseradish peroxidase (HRP) enzyme was used as a catalytic agent of a 35% hydrogen peroxide (H2O2) bleaching gel aiming to accelerate its degradation, increase the bleaching effectiveness and reduce the toxic effects on pulp cells. Three experimental groups were stablished: CN: no treatment; PH35%: 35% H2O2 and PH35%+HRP: 35% H2O2 in contact with HRP (10 mg/mL). H2O2 degradation rate and free radicals release was assessed after 0, 5, 10 and 15 min, with specific fluorescence probes. Bleaching effectiveness in the presence or absence of HRP was assessed with a UV-vis spectrophotometer (E) on enamel/dentin discs simulating mandibular incisors (2.3 mm thickness) throughout 6 bleaching sessions (3x15 min). For the biological assays, bleaching protocol was performed onto discs adapted to artificial pulp chambers, and the culture medium in contact with dentin surface (extract) was collected and applied for 1 h on odontoblast-like MDPC-23 cells previously seeded (80% confluence). The cell viability (MTT assay), morphology (SEM) cell membrane damage (live/dead assay) and oxidative stress (carboxyH2DCFDA) were evaluated. The amount of residual H2O2 and free radicals capable to diffuse through the discs was quantified. Discs not subjected to bleaching were used as negative control. According to the results, in the presence of HRP there was acceleration of H2O2 degradation associated with increased generation of free radicals in comparison to plain H2O2 solut... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Josemeri Hebling / Banca: / Co-orientador: Fernanda Gonçalves Basso / Banca: Carla Raquel Fernanda mendonça / Banca: Francisco Wanderley Garcia de Paula e Silva / Banca: Andréa Abi Rached Dantas / Banca: Patrícia Petromilli Nordi Sasso Garcia / Resumo: Objetivou-­‐se  avaliar  os  efeitos  da  fototerapia  de  baixa  intensidade  realizada  com   diodos  emissores  de  luz  (LEDs)  nos  comprimentos  de  onda  azul  (455  nm)  e  vermelho   (630  nm)  sobre    o  metabolismo  de  células  pulpares.   Quatro  estudos  foram   desenvolvidos.  No  estudo  1  foi  avaliado  o  efeito  do  LED  vermelho  sobre  células   MDPC-­‐23,  utilizando-­‐se  dose  de  energia  fixa  (DE)  de  2J/cm2,  com  variação  da   densidade  de  potência  (DP)  em  20  e  40mW/cm2  e  frequência  de  exposição.  Vinte  e   quatro  horas  após  a  irradiação  foram  avaliadas  a  viabilidade  celular,  o  número  de   células  viáveis  e  a  dosagem  de  proteína  total.  No  estudo  2  investigou-­‐se  o  efeito  da   luz  azul  sobre  células  MDPC-­‐23.  Foram  utilizadas  DE  de  2J/cm2  e  4J/cm2  e  DP  de  20   mW/cm2    e  foram  avaliadas  a  viabilidade,  número  de  células  viáveis,  morfologia   celular  em  MEV  e  expressão  gênica  de  fosfatase  alcalina  (Alp),  colágeno  (Col-­‐I)  e   proteína  da  matriz  dentinária  (Dmp-­‐1).  O  estudo  3  deterrminou  os  efeitos   transdentinários  da  luz  azul  e   vermelha  sobre  células  MDPC-­‐23.  As  DPs  foram   ajustadas  em  40  e  80mW/cm2  para  luz  vermelha  e  azul,  respectivamente.  Após   irradiação  foram  avaliadas  a  viabilidade  celular,  atividade  de  fosfatase  alcalina,   produção  de  proteína  total  e  colágeno.  No  estudo  4  foram  investigados  os  efeitos   bioestimuladores  da  luz  azul  sobre  cultura  primária  de  polpa  humana.  Foram   utilizadas  DE  de  2  e  4J/cm2  com  DP  de  20mW/cm2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The  overall  aim  of  this  work  was  to  evaluate  the  effects  of  the  low  level   phototherapy  using  light  emitting  diodes  (LEDs)  at  the  blue  (455nm)  and  red   (630nm)  wavelengths  on  the  metabolism  of  pulp  cells  in  culture.  Four  studies  were   performed.  In  the  first  study,  the  effect  of  red  LEDs  on  MDPC-­‐23  cells  was   investigated,  using  a  fixed  energy  dose  of  2J/cm2  and  varying  the  density  of  potency   in  20  and  40mW/cm2  and  the  frequency  of  irradiation.  Cell  viability,  number  of  viable   cells  and  production  of  total  protein  were  analyzed  after  24h  from  the  irradiation.  In   the  second  study  it  was  evaluated  the  effect  of  the  blue  light  on  MDPC-­‐23  cells.  The   energy  doses  of  2  or  4J/cm2  with  a  dose  of  potency  of  20mW/cm2  were  delivered  to   the  cells.  Cell  viability,  number  of  viable  cells,  cell  morphology  in  SEM  and  gene   expression  for  alkaline  phosphatase  (Alp),  collagen  (Col-­‐I)  and  dentin  matrix  protein   (Dmp-­‐1)  were  analyzed.  The  third  study  investigated  the  transdentinal  effects  of  a   blue  and  red  light  on  MDPC-­‐23  cells.  The  densities  of  potencies  were  adjusted  in  40   and  80mW/cm2  for  the  blue  and  red  lights,  respectively.  After  irradiation  of  the  cell   culture,  cell  viability,  alkaline  phosphatase  activity,  production  of  total  protein  and   collagen  were  determined.  Lastly,  the  biostimulatory  effect  of  the  blue  light  on  a   primary  culture  of  human  pulp  was  investigated  in  the  fourth  study. .. (Complete abstract electronic access below) / Doutor