Orientador: Sonia Maria Oliani / Coorientador: Cristiane Damas Gil / Banca: Janetti Nogueira de Francischi / Banca: José Roberto Mineo / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Ana Elizabete Silva / Resumo: A proteína anexina A1 (AnxA1) apresenta importantes propriedades anti-inflamatórias e estudos sugerem que suas ações podem ser mediadas por receptores para peptídeos formilados (FPR). Embora os efeitos anti-inflamatórios da AnxA1 e de seus peptídeos miméticos, especialmente o Ac2-26, tenham sido explorados em diversas investigações, são raros os estudos da AnxA1 nas inflamações oculares. Em razão dos graves efeitos colaterais dos tratamentos atuais para a uveíte, uma importante causa de cegueira, investigamos, in vivo, os efeitos e o mecanismo de ação da AnxA1 nos tecidos oculares de roedores na uveíte induzida por endotoxina (EIU). Ratos machos (Rattus novergicus) foram anestesiados e inoculados, por via subcutânea, na pata direita com lipopolissacarídeo (LPS) (100µg) para o desenvolvimento da uveíte. Após, foram divididos em grupos experimentais (n=10/grupo): EIU por 24 e 48h; EIU por 24h e tratados farmacologicamente por administrações tópica e sistêmica do peptídeo Ac2-26 (100µg) e EIU 24h tratado sistemicamente com peptídeo e Boc2, antagonista do FPR (50µg/animal). Para confirmar a importância da AnxA1 endógena na resolução da inflamação ocular, camundongos selvagens e deficientes para AnxA1 (AnxA1-/-) foram induzidos à uveíte por 24h sem tratamento. Nesses animais AnxA1-/- a resposta inflamatória foi exacerbada em comparação com os selvagens. Enquanto, nos olhos dos ratos, as análises quantitativas dos leucócitos, dosagens de interleucina (IL)-1β, IL-6, fator de necrose tumoral (TNF)-α, óxido nítrico (NO) e expressão da ciclo-oxigenase (COX)-2 nos tecidos e/ou no humor aquoso indicaram os efeitos anti-inflamatórios do peptídeo. Efeitos que foram revertidos na presença do Boc2. As análises imuno-histoquímicas das proteínas AnxA1, AnxA1 fosforilada em... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Annexin A1 (AnxA1) is a protein that displays anti-inflammatory properties and some studies suggest that its effects may be mediated by formyl peptide receptors (FPR). Although the anti-inflammatory activities of AnxA1 and its mimetic peptides, including Ac2-26, have been explored in several investigations, the role of AnxA1 in ocular inflammatory processes has not yet been elucidated. Given the common side effects of the current therapies used to treat uveitis, an important cause of blindness worldwide, we investigated, in vivo, the AnxA1 effects and mechanism of action in endotoxin-induced uveitis (EIU). Rattus norvegicus were induced to uveitis (lipopolysaccharide - 100 µg) and divided into experimental groups (n=10/group): EIU untreated for 24 and 48h, EIU treated with topical applications (4/4h) or a single intravenous injection of Ac2-26 (100µg) and EIU systemically treated with the peptide and Boc2, the FPR antagonist (50µg/animal). To confirm the importance of endogenous AnxA1 in the resolution of ocular inflammation, wild-type and AnxA1 deficient (AnxA1-/-) mice were also induced to uveitis without treatment for 24h. AnxA1-/- mice showed exacerbated inflammation compared to wild-type animals. As, quantitative analyses of leukocytes, interleukin (IL)-1β, IL-6, tumor necrosis factor (TNF)-α, nitric oxide (NO) levels and cyclooxigenase (COX)-2 expression in ocular tissues and/or in aqueous humor of rats eyes revealed the anti-inflammatory effects of the peptide, which were abrogated in the Boc2 presence. Immunohistochemical analysis of AnxA1, serine-or-tyrosine-phosphorylated AnxA1 (AnxA-S27-PO4 - AnxA-Y21-PO4) in the ocular tissues showed AnxA1 and AnxA1-S27-PO4 expression in epithelial (cornea, iris and ciliary processes) and nervous cells. These expressions were increased in... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: José Luiz Laus / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Alexandre Pinto Ribeiro / Resumo: Avaliou-se o efeito da instilação local de morfina 1% sobre a expressão do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), da interleucina-1 beta (IL-1beta), da prostaglandina E2 (PGE2) e da mieloperoxidase (MPO) e a turbidez do humor aquoso (flaremetria a laser) em olhos de coelhos com uveíte induzida por injeção intravítrea de endotoxina. Empregou-se 30 leporinos da raça Nova Zelândia Branco, separados em 5 grupos (n=6), a saber : basal, grupo controle (GC), grupo morfina (GM), grupo naloxona (GN), grupo morfina-naloxona (GMN). Sob anestesia dissociativa, injetou-se 0,1 mL, contendo 0,2 μg de endotoxina (parede celular de Salmonella typhimurium), na câmara vítrea do olho direito de cada animal para a indução da uveíte experimental. Para a avaliação, realizou-se a flaremetria a "laser" antes da injeção intravítrea de endotoxina (basal), e às 10 e 20 horas da indução da uveítes, ocasião em que os olhos tratados foram enucleados para a quantificação do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), da interleucina-1 beta (IL-1beta), da mieloperoxidase (MPO) e da prostaglandina E2 (PGE2) por ELISA. Os dados foram analisados estatisticamente, quanto contagem de fótons no humor aquoso (flaremetria a "laser"), aplicando-se análise de variância não paramétrica de Friedman, seguida do "post hoc test" de Dunn, ao nível mínimo de significância de p>0,05 e quanto à quantificação das citocinas, utilizando-se Análise de Variância de via única, seguida pelo teste de Tukey, nas avaliações entre grupos. Considerou-se o nível mínimo de significância p<0,05. Observou-se, após a indução da uveíte, elevação significativa no nível TNF-alfa e IL-1beta, comparativamente aos olhos basais (p<0,05) em todos os tratamentos estudados (GC, GM, GN, GMN). A atividade da MPO apresentou uma elevação não significativa após a indução da uveíte. Os níveis dessas citocinas ... / Abstract: To evaluate the effects of instillation of morphine 1% on the expression of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), interleukin-1 beta (IL-1beta), prostaglandin E2 (PGE2) and myeloperoxidase (MPO) and the turbidity of aqueous humor (laser flaremetry) in the eyes of rabbits with uveitis induced by intravitreal injection of endotoxin. Were used 30 New Zealand White rabbits, separated into 5 groups (n = 6), as follows: healthy control group (CG), morphine group (GM), naloxone group (GN), morphine-naloxone group (GMN). Under dissociative anesthesia it was injected 0.1 mL containing 0.2 mg of endotoxin (cell wall of Salmonella typhimurium) in the vitreous of the right eye of each animal to induce experimental uveitis. For the evaluation, it was used laser flarimetry before intravitreal injection of endotoxin (baseline) and at 10 and 20 hours after the induction of uveitis, at which time the treated eyes were enucleated for the quantification of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), interleukin-1 beta (IL-1beta), mieloperoxidase (MPO) and prostaglandin E2 (PGE2) by ELISA. The data were treated statistically, the photon count in the aqueous humor (laser flarimetry), applying Friedman's nonparametric two-way analyses of variance test, then the Dunn's "post hoc test", the minimum level of significance was p> 0.05 and for quantification of cytokines using ANOVA one-way followed by Tukey test in ratings between groups. Considered the minimum level of significance p <0.05. It was observed after induction of uveitis, significant increase in the level of TNF-alpha and IL-1beta compared to baseline eyes (p <0.05) in all treatments (GC, GM, GN, GMN). The MPO activity showed a nonsignificant increase after induction of uveitis. The levels of these cytokines between groups presented similar except in the quantification of PGE2, which showed significant variation between groups GM and GNM (p <0,05). Based ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-01Bitstream added on 2014-06-13T19:02:42Z : No. of bitstreams: 1 girol_ap_dr_sjrp.pdf: 2767675 bytes, checksum: affebf6e5d0ac59da5e241e14d9b3745 (MD5) / A proteína anexina A1 (AnxA1) apresenta importantes propriedades anti-inflamatórias e estudos sugerem que suas ações podem ser mediadas por receptores para peptídeos formilados (FPR). Embora os efeitos anti-inflamatórios da AnxA1 e de seus peptídeos miméticos, especialmente o Ac2-26, tenham sido explorados em diversas investigações, são raros os estudos da AnxA1 nas inflamações oculares. Em razão dos graves efeitos colaterais dos tratamentos atuais para a uveíte, uma importante causa de cegueira, investigamos, in vivo, os efeitos e o mecanismo de ação da AnxA1 nos tecidos oculares de roedores na uveíte induzida por endotoxina (EIU). Ratos machos (Rattus novergicus) foram anestesiados e inoculados, por via subcutânea, na pata direita com lipopolissacarídeo (LPS) (100µg) para o desenvolvimento da uveíte. Após, foram divididos em grupos experimentais (n=10/grupo): EIU por 24 e 48h; EIU por 24h e tratados farmacologicamente por administrações tópica e sistêmica do peptídeo Ac2-26 (100µg) e EIU 24h tratado sistemicamente com peptídeo e Boc2, antagonista do FPR (50µg/animal). Para confirmar a importância da AnxA1 endógena na resolução da inflamação ocular, camundongos selvagens e deficientes para AnxA1 (AnxA1-/-) foram induzidos à uveíte por 24h sem tratamento. Nesses animais AnxA1-/- a resposta inflamatória foi exacerbada em comparação com os selvagens. Enquanto, nos olhos dos ratos, as análises quantitativas dos leucócitos, dosagens de interleucina (IL)-1β, IL-6, fator de necrose tumoral (TNF)-α, óxido nítrico (NO) e expressão da ciclo-oxigenase (COX)-2 nos tecidos e/ou no humor aquoso indicaram os efeitos anti-inflamatórios do peptídeo. Efeitos que foram revertidos na presença do Boc2. As análises imuno-histoquímicas das proteínas AnxA1, AnxA1 fosforilada em... / Annexin A1 (AnxA1) is a protein that displays anti-inflammatory properties and some studies suggest that its effects may be mediated by formyl peptide receptors (FPR). Although the anti-inflammatory activities of AnxA1 and its mimetic peptides, including Ac2-26, have been explored in several investigations, the role of AnxA1 in ocular inflammatory processes has not yet been elucidated. Given the common side effects of the current therapies used to treat uveitis, an important cause of blindness worldwide, we investigated, in vivo, the AnxA1 effects and mechanism of action in endotoxin-induced uveitis (EIU). Rattus norvegicus were induced to uveitis (lipopolysaccharide - 100 µg) and divided into experimental groups (n=10/group): EIU untreated for 24 and 48h, EIU treated with topical applications (4/4h) or a single intravenous injection of Ac2-26 (100µg) and EIU systemically treated with the peptide and Boc2, the FPR antagonist (50µg/animal). To confirm the importance of endogenous AnxA1 in the resolution of ocular inflammation, wild-type and AnxA1 deficient (AnxA1-/-) mice were also induced to uveitis without treatment for 24h. AnxA1-/- mice showed exacerbated inflammation compared to wild-type animals. As, quantitative analyses of leukocytes, interleukin (IL)-1β, IL-6, tumor necrosis factor (TNF)-α, nitric oxide (NO) levels and cyclooxigenase (COX)-2 expression in ocular tissues and/or in aqueous humor of rats eyes revealed the anti-inflammatory effects of the peptide, which were abrogated in the Boc2 presence. Immunohistochemical analysis of AnxA1, serine-or-tyrosine-phosphorylated AnxA1 (AnxA-S27-PO4 - AnxA-Y21-PO4) in the ocular tissues showed AnxA1 and AnxA1-S27-PO4 expression in epithelial (cornea, iris and ciliary processes) and nervous cells. These expressions were increased in... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-13Bitstream added on 2014-06-13T21:05:44Z : No. of bitstreams: 1 silva_ml_dr_jabo.pdf: 397030 bytes, checksum: 98dc077422299b6eb713fd4f7ddd0cac (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Estudaram-se os efeitos da nalbufina à 1% sobre a reparação e o limiar de sensibilidade ao toque córneal (LSC), em coelhos submetidos à ceratectomia lamelar. Compuseram-se dois grupos (n=6). O grupo nalbufina (GN) recebeu 30μL de nalbufina à 1%, a cada 4 horas, totalizando 4 aplicações diárias, às (7, 11, 15 e 19 horas), o controle (GC) recebeu solução fisiológica nas mesmas condições adotadas para o GN. Decorridas as ceratectomias, procedeu-se a avaliação clínica das córneas com lâmpada em fenda e estesiômetro durante 9 dias. As córneas foram colhidas para estudo histológico, imunoistoquímico (metaloprotease-1, metaloprotease-9 e Fator de Crescimento Opióide). O tempo médio de reepitelização das córneas foi de 7 ± 1,79 dias no GN e, no GC de 8,83 ± 1,17 días, sem diferença estatística entre os grupos (p=0,12). O diâmetro da área ulcerada não diferiu entre os grupos em nenhum dos períodos (p>0,05). 24 horas previas a realização da ceratectomia (valores basais) e, após a realização desta até a completa reparação corneal, o LSC não diferiu entre GC e GN (p>0,05). À histologia, não foram observadas alterações quanto a reparação tecidual. Ao décimo dia, todas as córneas mostraram estratificação do epitélio corneal e edema corneal em ambos os grupos. À imunoistoquimica, as MMP-1 e MMP-9 apresentaram um aumento quanto sua expressão nos 5 primeiros dias apos a realização da ceratectomia em ambos os grupos sem diferenças significativas (p>0,05). Os dias 7 e 9, elas sofrem uma diminuição significativa comparativamente com os dias mas continua sem apresentar diferença entre os grupos. O fator de crescimento opióide (OGF) apresentou imunomarcação constantes em todos os períodos e sempre restrito as células epiteliais mas não foram encontradas diferenças entre os grupos nem entre os... / This study aimed to evaluate the effects of 1% nalbuphine on corneal analgesia in rabbits submitted to lamellar keratectomy until completion of the corneal wound healing and to assess the expression of matrix metalloproteinases (MMPs)-1,-9, and opioid growth factor (OGF) during the treatment. Two groups were formed (n=6). The nalbuphine-treated group (NG) received 30 μl of topical 1% nalbuphine every 4 hours while the other group received 0.9% NaCl instead (CG). After keratectomies, corneal heling were evaluated with slit lamp and the corneal touch threshold (CTT) with esthesiometer during 9 days. Corneal samples were processed for histology and immunohistochemistry (MMP-1, -9 and OGF). Mean corneal reepithelization rate was of 7 ± 1.79 days in NG and of 8.83 ± 1.17 days in the CG (P=0.12). The ulcerated area did not differed between groups at any time point (P>0.05). CTT did change from baseline, until complete healing of the corneas in both groups (P>0.05). At histology, corneal healing was uneventful. At day 10, all corneas showed corneal edema and stratification of the corneal epithelium in both groups. In both groups, MMP-1 and -9 expression increased during the first 5 days following keratectomy (P>0.05). At day 7 and 9 expression of both enzymes decreased significantly in comparison to previous time points, without changing significantly between groups (P>0.05). OGF positive labeling was observed in all time points and was restricted to the corneal epithelium of both groups (P>0.05). It was concluded that topical 1% nalbuphine did not change corneal healing rate... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-04Bitstream added on 2014-06-13T20:50:55Z : No. of bitstreams: 1 000735507.pdf: 1411225 bytes, checksum: 8fbfb73fa3d61839b1f7a315321a5d4b (MD5) / Avaliou-se o efeito da instilação local de morfina 1% sobre a expressão do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), da interleucina-1 beta (IL-1beta), da prostaglandina E2 (PGE2) e da mieloperoxidase (MPO) e a turbidez do humor aquoso (flaremetria a laser) em olhos de coelhos com uveíte induzida por injeção intravítrea de endotoxina. Empregou-se 30 leporinos da raça Nova Zelândia Branco, separados em 5 grupos (n=6), a saber : basal, grupo controle (GC), grupo morfina (GM), grupo naloxona (GN), grupo morfina-naloxona (GMN). Sob anestesia dissociativa, injetou-se 0,1 mL, contendo 0,2 μg de endotoxina (parede celular de Salmonella typhimurium), na câmara vítrea do olho direito de cada animal para a indução da uveíte experimental. Para a avaliação, realizou-se a flaremetria a “laser” antes da injeção intravítrea de endotoxina (basal), e às 10 e 20 horas da indução da uveítes, ocasião em que os olhos tratados foram enucleados para a quantificação do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), da interleucina-1 beta (IL-1beta), da mieloperoxidase (MPO) e da prostaglandina E2 (PGE2) por ELISA. Os dados foram analisados estatisticamente, quanto contagem de fótons no humor aquoso (flaremetria a “laser”), aplicando-se análise de variância não paramétrica de Friedman, seguida do “post hoc test” de Dunn, ao nível mínimo de significância de p>0,05 e quanto à quantificação das citocinas, utilizando-se Análise de Variância de via única, seguida pelo teste de Tukey, nas avaliações entre grupos. Considerou-se o nível mínimo de significância p<0,05. Observou-se, após a indução da uveíte, elevação significativa no nível TNF-alfa e IL-1beta, comparativamente aos olhos basais (p<0,05) em todos os tratamentos estudados (GC, GM, GN, GMN). A atividade da MPO apresentou uma elevação não significativa após a indução da uveíte. Os níveis dessas citocinas... / To evaluate the effects of instillation of morphine 1% on the expression of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), interleukin-1 beta (IL-1beta), prostaglandin E2 (PGE2) and myeloperoxidase (MPO) and the turbidity of aqueous humor (laser flaremetry) in the eyes of rabbits with uveitis induced by intravitreal injection of endotoxin. Were used 30 New Zealand White rabbits, separated into 5 groups (n = 6), as follows: healthy control group (CG), morphine group (GM), naloxone group (GN), morphine-naloxone group (GMN). Under dissociative anesthesia it was injected 0.1 mL containing 0.2 mg of endotoxin (cell wall of Salmonella typhimurium) in the vitreous of the right eye of each animal to induce experimental uveitis. For the evaluation, it was used laser flarimetry before intravitreal injection of endotoxin (baseline) and at 10 and 20 hours after the induction of uveitis, at which time the treated eyes were enucleated for the quantification of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), interleukin-1 beta (IL-1beta), mieloperoxidase (MPO) and prostaglandin E2 (PGE2) by ELISA. The data were treated statistically, the photon count in the aqueous humor (laser flarimetry), applying Friedman’s nonparametric two-way analyses of variance test, then the Dunn’s post hoc test, the minimum level of significance was p> 0.05 and for quantification of cytokines using ANOVA one-way followed by Tukey test in ratings between groups. Considered the minimum level of significance p <0.05. It was observed after induction of uveitis, significant increase in the level of TNF-alpha and IL-1beta compared to baseline eyes (p <0.05) in all treatments (GC, GM, GN, GMN). The MPO activity showed a nonsignificant increase after induction of uveitis. The levels of these cytokines between groups presented similar except in the quantification of PGE2, which showed significant variation between groups GM and GNM (p <0,05). Based ...

Orientador: José Luiz Laus / Banca: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Andrigo Barboza de Nardi / Banca: Alexandre Pinto Ribeiro / Banca: Andréia Vitor Couto do Amaral / Resumo: Estudaram-se os efeitos da nalbufina à 1% sobre a reparação e o limiar de sensibilidade ao toque córneal (LSC), em coelhos submetidos à ceratectomia lamelar. Compuseram-se dois grupos (n=6). O grupo nalbufina (GN) recebeu 30μL de nalbufina à 1%, a cada 4 horas, totalizando 4 aplicações diárias, às (7, 11, 15 e 19 horas), o controle (GC) recebeu solução fisiológica nas mesmas condições adotadas para o GN. Decorridas as ceratectomias, procedeu-se a avaliação clínica das córneas com lâmpada em fenda e estesiômetro durante 9 dias. As córneas foram colhidas para estudo histológico, imunoistoquímico (metaloprotease-1, metaloprotease-9 e Fator de Crescimento Opióide). O tempo médio de reepitelização das córneas foi de 7 ± 1,79 dias no GN e, no GC de 8,83 ± 1,17 días, sem diferença estatística entre os grupos (p=0,12). O diâmetro da área ulcerada não diferiu entre os grupos em nenhum dos períodos (p>0,05). 24 horas previas a realização da ceratectomia (valores basais) e, após a realização desta até a completa reparação corneal, o LSC não diferiu entre GC e GN (p>0,05). À histologia, não foram observadas alterações quanto a reparação tecidual. Ao décimo dia, todas as córneas mostraram estratificação do epitélio corneal e edema corneal em ambos os grupos. À imunoistoquimica, as MMP-1 e MMP-9 apresentaram um aumento quanto sua expressão nos 5 primeiros dias apos a realização da ceratectomia em ambos os grupos sem diferenças significativas (p>0,05). Os dias 7 e 9, elas sofrem uma diminuição significativa comparativamente com os dias mas continua sem apresentar diferença entre os grupos. O fator de crescimento opióide (OGF) apresentou imunomarcação constantes em todos os períodos e sempre restrito as células epiteliais mas não foram encontradas diferenças entre os grupos nem entre os... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate the effects of 1% nalbuphine on corneal analgesia in rabbits submitted to lamellar keratectomy until completion of the corneal wound healing and to assess the expression of matrix metalloproteinases (MMPs)-1,-9, and opioid growth factor (OGF) during the treatment. Two groups were formed (n=6). The nalbuphine-treated group (NG) received 30 μl of topical 1% nalbuphine every 4 hours while the other group received 0.9% NaCl instead (CG). After keratectomies, corneal heling were evaluated with slit lamp and the corneal touch threshold (CTT) with esthesiometer during 9 days. Corneal samples were processed for histology and immunohistochemistry (MMP-1, -9 and OGF). Mean corneal reepithelization rate was of 7 ± 1.79 days in NG and of 8.83 ± 1.17 days in the CG (P=0.12). The ulcerated area did not differed between groups at any time point (P>0.05). CTT did change from baseline, until complete healing of the corneas in both groups (P>0.05). At histology, corneal healing was uneventful. At day 10, all corneas showed corneal edema and stratification of the corneal epithelium in both groups. In both groups, MMP-1 and -9 expression increased during the first 5 days following keratectomy (P>0.05). At day 7 and 9 expression of both enzymes decreased significantly in comparison to previous time points, without changing significantly between groups (P>0.05). OGF positive labeling was observed in all time points and was restricted to the corneal epithelium of both groups (P>0.05). It was concluded that topical 1% nalbuphine did not change corneal healing rate... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:33:16Z : No. of bitstreams: 1 cardin_lt_me_sjrp_parcial.pdf: 176602 bytes, checksum: ff28363703d8dd3bbc92fef1981922c5 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-01T12:51:15Z: cardin_lt_me_sjrp_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-04-01T12:51:49Z : No. of bitstreams: 1 000714251.pdf: 1224592 bytes, checksum: b3e0c7d1422ace17fba65af406dd3879 (MD5) / INTRODUÇÃO: A inflamação é caracterizada pelo acúmulo de leucócitos nos tecidos oculares, podendo afetar qualquer parte do olho, sendo um processo doloroso, associado à fotofobia e podendo resultar em complicações secundárias. Em geral, no tratamento dessas inflamações intra-oculares, os glicocorticóides são os medicamentos freqüentemente administrados. Porém, devido aos efeitos adversos, existe uma demanda óbvia para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Entre elas, a proteína anexina A1 (ANXA1) tem mostrado a sua participação ativa nos processos inflamatórios. OBJETIVO: Em função desses dados, foi realizado o presente trabalho que teve como objetivo geral avaliar a influência desse tratamento anti-inflamatório nas células epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19), sobre a morfologia, proliferação, migração e na expressão gênica e proteica. MATERIAL E MÉTODOS: As células ARPE-19 foram cultivadas em meio completo e estimuladas pelo Lipopolissacarideo bacteriano (LPS), e em outro experimento foi acrescentado o tratamento com o peptídeo ANXA1 Ac2-26 , para avaliar o possível efeito anti-inflamatório dessa proteína, nos tempos de 1, 2, 4, 24, 48 e 72 horas sobre a morfologia, proliferação e migração celular. Após análises estatísticas, que evidenciaram o tempo de 72 horas, foi realizado um novo cultivo celular para a extração do RNA e conduzida a técnica de Hibridização Subtrativa Rápida (RaSH). A validação de cinco genes encontrados como diferencialmente expressos foi realizada por RT-qPCR. Além dessas técnicas, também foi analisada a expressão das citocinas anti e pró-inflamatórias pelo ensaio Multiplex. RESULTADOS: O ANXA1Ac2-26 não modificou a morfologia das células ARPE-19, entretanto diminui a proliferação e aumenta a migração celular. Pela tecnologia de... / INTRODUCTION: The inflammation is characterized by the accumulation of leukocytes in ocular tissues, and it can affect any part of the eye, been a painful process, associated with photophobia and may result in secondary complications. In general, for the treatment of these intraocular inflammations, the glucocorticoids are the drugs frequently administered. However, due to its side effects, there is an obvious demand for developing new therapeutic strategies. Among them, the protein annexin A1 (ANXA1) has shown its active participation in inflammatory processes. AIM: In the present study we investigated the influence of anti-inflammatory treatment in human retinal pigment epithelial cells (ARPE-19), on the morphology, proliferation, migration and gene and protein expression. MATERIALS AND METHODS: The ARPE-19 cells were cultured in complete medium and stimulated by bacterial lipopolysaccharide (LPS), and in another experiment was added treatment with ANXA1Ac2-26 peptide, to evaluate the possible anti- inflammatory effects of this protein, in 1, 2, 4, 24, 48 and 72 hours on the morphology, cell proliferation and migration. After statistical analyzes, which demonstrated that the time 72 hours is the best, was performed a new culture bottles for RNA extraction technique and conducted the Rapid Subtractive Hybridization (RaSH). The validation of five genes founded differentially expressed was done by RT-qPCR. In addition to these techniques was also analyzed the expression of anti and pro-inflammatory cytokines by Multiplex assay. RESULTS: The ANXA1Ac2-26 did not alter the morphology of the ARPE- 19 cells, however decreased proliferation and increased cell migration. After statistical analysis, it was evident that the time of 72 hours was the best to proceed with the methodology. By RaSH technology... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-24Bitstream added on 2015-05-14T16:58:55Z : No. of bitstreams: 1 000828044_20200101.pdf: 74188 bytes, checksum: 70cfaebb828d250a5522ad34603d8b17 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do plasma rico (PRP) e pobre (PPP) em plaquetas na proliferação celular e expressão de matriz metaloproteinases (MMPs), durante a reparação de úlceras corneais profundas. Foram utilizadas 45 coelhas, distribuídas em 3 grupos (G) experimentais (n=15), designados como grupos PRP (GR), PPP (GP) e Controle (GC), de acordo com o tratamento. Todos os animais foram submetidos à indução cirúrgica unilateral de úlcera corneal. No GR e GP, o sangue autólogo foi centrifugado, utilizando protocolo padronizado, e foram confeccionados os colírios de PRP e PPP, instilados cinco vezes ao dia. No GC, foi utilizado colírio lubrificante. Cada grupo foi subdividido (n=5), segundo o momento final de avaliação, sendo 4(M4), 7(M7) e 30 dias (M30). As córneas dos animais foram processadas para avaliação morfológica e imuno-histoquímica para PCNA, MMP1, MMP2, MMP9, MT1-MMP e TIMP1. No M4, os níveis de MMP2 foram maiores no GP e GR, sendo que no M7, esse comportamento foi observado apenas no GP. No M30, no GR verificou-se maior número de células epiteliais e marcação para MMP1 que o GP. No GR, a proliferação celular foi maior no M4 que nos demais momentos e a marcação para MMP2 foi maior no M4 que no M30. O PRP estimula a proliferação celular na fase inicial (M4) do tratamento quando comparado aos demais momentos, diferente dos demais tratamentos. O uso de colírios de plasma rico e pobre em plaquetas influencia a expressão de matriz metaloproteinases envolvidas no processo de reparação corneal / The aim of this study was to evaluate the influence of platelet-rich (PRP) and poor (PPP) plasma in cell proliferation and matrix metalloproteinases (MMPs) expression during the repair of deep corneal ulcers. Forty-five female rabbits were distributed in 3 experimental groups (G) (n = 15), referred as PRP (GR), PPP (GP) and Control groups (GC), in accordance with the treatment. All animals underwent surgical induction of unilateral corneal ulcer. PRP and PPP eyedrops were made by using centrifuged blood through standardized protocol, and instilled five times a day. In GC, lubricant eyedrops was used. Each group was subdivided (n = 5), according to the final time point, 4 (M4), 7 (M7) and 30 days (M30). The animals corneas were processed for morphological and immunohistochemical analysis for PCNA, MMP1, MMP2, MMP9, MT1-MMP and TIMP1. In M4, the levels of MMP2 were higher in GP and GR, and in M7, this behavior was only observed in the GP. In M30, more epithelial cells and MMP1 expression were found in GR than GP. In the GR, cell proliferation was higher in M4 than at others time points and MMP2 expression was higher in M4 than in M30. The PRP stimulates cell proliferation in the early phase (M4) of treatment when compared to other time points, different from other treatments. The use of platelet-rich and poor plasma eyedrops influences the expression of matrix metalloproteinases involved in the corneal repair process

Orientador: Flávia Cristina Rodrigues Lisoni / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Érika Cristina Pavarino / Banca: Claúdia Marcia Aparecida Carareto / Resumo: INTRODUÇÃO: A inflamação é caracterizada pelo acúmulo de leucócitos nos tecidos oculares, podendo afetar qualquer parte do olho, sendo um processo doloroso, associado à fotofobia e podendo resultar em complicações secundárias. Em geral, no tratamento dessas inflamações intra-oculares, os glicocorticóides são os medicamentos freqüentemente administrados. Porém, devido aos efeitos adversos, existe uma demanda óbvia para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Entre elas, a proteína anexina A1 (ANXA1) tem mostrado a sua participação ativa nos processos inflamatórios. OBJETIVO: Em função desses dados, foi realizado o presente trabalho que teve como objetivo geral avaliar a influência desse tratamento anti-inflamatório nas células epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19), sobre a morfologia, proliferação, migração e na expressão gênica e proteica. MATERIAL E MÉTODOS: As células ARPE-19 foram cultivadas em meio completo e estimuladas pelo Lipopolissacarideo bacteriano (LPS), e em outro experimento foi acrescentado o tratamento com o peptídeo ANXA1 Ac2-26 , para avaliar o possível efeito anti-inflamatório dessa proteína, nos tempos de 1, 2, 4, 24, 48 e 72 horas sobre a morfologia, proliferação e migração celular. Após análises estatísticas, que evidenciaram o tempo de 72 horas, foi realizado um novo cultivo celular para a extração do RNA e conduzida a técnica de Hibridização Subtrativa Rápida (RaSH). A validação de cinco genes encontrados como diferencialmente expressos foi realizada por RT-qPCR. Além dessas técnicas, também foi analisada a expressão das citocinas anti e pró-inflamatórias pelo ensaio Multiplex. RESULTADOS: O ANXA1Ac2-26 não modificou a morfologia das células ARPE-19, entretanto diminui a proliferação e aumenta a migração celular. Pela tecnologia de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: INTRODUCTION: The inflammation is characterized by the accumulation of leukocytes in ocular tissues, and it can affect any part of the eye, been a painful process, associated with photophobia and may result in secondary complications. In general, for the treatment of these intraocular inflammations, the glucocorticoids are the drugs frequently administered. However, due to its side effects, there is an obvious demand for developing new therapeutic strategies. Among them, the protein annexin A1 (ANXA1) has shown its active participation in inflammatory processes. AIM: In the present study we investigated the influence of anti-inflammatory treatment in human retinal pigment epithelial cells (ARPE-19), on the morphology, proliferation, migration and gene and protein expression. MATERIALS AND METHODS: The ARPE-19 cells were cultured in complete medium and stimulated by bacterial lipopolysaccharide (LPS), and in another experiment was added treatment with ANXA1Ac2-26 peptide, to evaluate the possible anti- inflammatory effects of this protein, in 1, 2, 4, 24, 48 and 72 hours on the morphology, cell proliferation and migration. After statistical analyzes, which demonstrated that the time 72 hours is the best, was performed a new culture bottles for RNA extraction technique and conducted the Rapid Subtractive Hybridization (RaSH). The validation of five genes founded differentially expressed was done by RT-qPCR. In addition to these techniques was also analyzed the expression of anti and pro-inflammatory cytokines by Multiplex assay. RESULTS: The ANXA1Ac2-26 did not alter the morphology of the ARPE- 19 cells, however decreased proliferation and increased cell migration. After statistical analysis, it was evident that the time of 72 hours was the best to proceed with the methodology. By RaSH technology... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Cláudia Valéria Seullner Brandão / Banca: José Joaquim Titton Ranzani / Banca: Cláudia Helena Pellizon / Banca: Geórgia Nadalini Rodrigues / Banca: Antônio Carlos Lottelli Rodrigues / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do plasma rico (PRP) e pobre (PPP) em plaquetas na proliferação celular e expressão de matriz metaloproteinases (MMPs), durante a reparação de úlceras corneais profundas. Foram utilizadas 45 coelhas, distribuídas em 3 grupos (G) experimentais (n=15), designados como grupos PRP (GR), PPP (GP) e Controle (GC), de acordo com o tratamento. Todos os animais foram submetidos à indução cirúrgica unilateral de úlcera corneal. No GR e GP, o sangue autólogo foi centrifugado, utilizando protocolo padronizado, e foram confeccionados os colírios de PRP e PPP, instilados cinco vezes ao dia. No GC, foi utilizado colírio lubrificante. Cada grupo foi subdividido (n=5), segundo o momento final de avaliação, sendo 4(M4), 7(M7) e 30 dias (M30). As córneas dos animais foram processadas para avaliação morfológica e imuno-histoquímica para PCNA, MMP1, MMP2, MMP9, MT1-MMP e TIMP1. No M4, os níveis de MMP2 foram maiores no GP e GR, sendo que no M7, esse comportamento foi observado apenas no GP. No M30, no GR verificou-se maior número de células epiteliais e marcação para MMP1 que o GP. No GR, a proliferação celular foi maior no M4 que nos demais momentos e a marcação para MMP2 foi maior no M4 que no M30. O PRP estimula a proliferação celular na fase inicial (M4) do tratamento quando comparado aos demais momentos, diferente dos demais tratamentos. O uso de colírios de plasma rico e pobre em plaquetas influencia a expressão de matriz metaloproteinases envolvidas no processo de reparação corneal / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of platelet-rich (PRP) and poor (PPP) plasma in cell proliferation and matrix metalloproteinases (MMPs) expression during the repair of deep corneal ulcers. Forty-five female rabbits were distributed in 3 experimental groups (G) (n = 15), referred as PRP (GR), PPP (GP) and Control groups (GC), in accordance with the treatment. All animals underwent surgical induction of unilateral corneal ulcer. PRP and PPP eyedrops were made by using centrifuged blood through standardized protocol, and instilled five times a day. In GC, lubricant eyedrops was used. Each group was subdivided (n = 5), according to the final time point, 4 (M4), 7 (M7) and 30 days (M30). The animals corneas were processed for morphological and immunohistochemical analysis for PCNA, MMP1, MMP2, MMP9, MT1-MMP and TIMP1. In M4, the levels of MMP2 were higher in GP and GR, and in M7, this behavior was only observed in the GP. In M30, more epithelial cells and MMP1 expression were found in GR than GP. In the GR, cell proliferation was higher in M4 than at others time points and MMP2 expression was higher in M4 than in M30. The PRP stimulates cell proliferation in the early phase (M4) of treatment when compared to other time points, different from other treatments. The use of platelet-rich and poor plasma eyedrops influences the expression of matrix metalloproteinases involved in the corneal repair process / Doutor