Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-07Bitstream added on 2014-06-13T21:02:16Z : No. of bitstreams: 1 souza_alg_dr_jabo.pdf: 506979 bytes, checksum: 5a430e51363e4d4ee82edd075b0a69ce (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A doença endógena inflamatória uveal em equinos constitui resposta imunopatogênica complexa, onde se admite a participação de uma variedade de antígenos. A uveíte recorrente dos equinos (URE), também denominada ophthalmia periódica ou moon blindness, é uma panuveíte e constitui-se na causa mais comum de diminuição da percepção visual, cuja patogênese permanece, ainda, sob investigação. Inúmeras pesquisas apontam para a hipótese de hipersensibilidade a antígenos bacterianos. A maioria dos estudos mostra evidências de infecção por Leptospira sp.. Examinaram-se, ao acaso, os olhos de 29 animais e coletaram-se o soro, o humor aquoso e o corpo vítreo para proteinograma e aglutinação microscópica para Leptospira sp.. Outrossim, fragmentos de córnea, íris, retina e coróide para histopatologia e imunoistoquímica. A prova de aglutinação microscópica identificou 14 animais positivos, seis animais com titulação igual a 40 e nove indivíduos negativos para as amostras de soro. Houve um animal positivo na amostra de humor aquoso e na de corpo vítreo e outro negativo na de soro (titulação 40), mas positivo na de corpo vítreo. Foram encontrados os sorovares icterohaemorrhagiae, autumalis, patoc, sentot, habdomadis. Foram identificadas, à eletroforese do soro, as proteínas: imunoglobulina A; ceruloplasmina; trasnferrina; hemopexina; albumina; anti-tripsina; imunoglobulina G de cadeia pesada; haptoglobina; glicoproteína ácida; imunoglobulina G de cadeia leve e proteína de 25kda. A única proteína que mostrou resultado estatístico significativo foi a ceruplasmina (p=0,05) com animais soropositivos para leptospirose. À histopatologia a espessura da córnea foi significativamente maior nos animais soropositivos (p=0,0347). O exame imunistoquímico para pesquisa da bactéria Leptospira sp. mostrou maior... / Endogenous uveal inflammatory disease in the horse represent a complex immunopathological response to a range of presumed antigens. Equine recurrent uveitis (ERU) is a panuveitis and the most commmon cause of blindness in horses. Many researchers favour the hypothesis that ERU is delayed type hypersensitivity response to bacterial antigens. New findings show evidence of leptospiral infection in ERU eyes. Fifity eight eyeballs from twenty nine horses randomly selected were studied using histopathology and immunohistochemistry. The serum from 29 animals, aqueous humor an vitreous body from 58 eyes were collected for proteinogram and microscopic agglutination test (MAT) for Leptospira sp.. The microscopic agluttination test was identified 14 positive animals, six with titer 40 and nine negative in serum samples. One seropositive animal was positive in aquaeous humor and vitreous body and another seronegative horse was positive in vitreous body. Were found five serovars from 26 studied from Leptospira interrogans: icterohaemorrhagiae, autumalis, patoc, sentot, habdomadis. Were identified by serum electrophoresis, the following proteins: immunoglobulin A; ceruloplasmin; trasnferrina; hemopexina; albumin, anti-trypsin, the heavy chain of immunoglobulin G; haptoglobin; glycoprotein, immunoglobulin G and the light chain protein, 25kda. The only protein that showed significant results with seropositive horses was ceruplasmin (p = 0.05). The pathomorphologic changes on HE-stained sections showed that seropositive animals for leptospirosis had corneal thickness significantly higher than the seronegative (p = 0.0347). The immunohistochemistry test for Leptospira sp. showed higher positivity in samples of cornea, and some animals were seronegative but positive for this test. At immunohistochemistry was observed that the anti-metalloproteinase... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-01Bitstream added on 2014-06-13T19:02:42Z : No. of bitstreams: 1 girol_ap_dr_sjrp.pdf: 2767675 bytes, checksum: affebf6e5d0ac59da5e241e14d9b3745 (MD5) / A proteína anexina A1 (AnxA1) apresenta importantes propriedades anti-inflamatórias e estudos sugerem que suas ações podem ser mediadas por receptores para peptídeos formilados (FPR). Embora os efeitos anti-inflamatórios da AnxA1 e de seus peptídeos miméticos, especialmente o Ac2-26, tenham sido explorados em diversas investigações, são raros os estudos da AnxA1 nas inflamações oculares. Em razão dos graves efeitos colaterais dos tratamentos atuais para a uveíte, uma importante causa de cegueira, investigamos, in vivo, os efeitos e o mecanismo de ação da AnxA1 nos tecidos oculares de roedores na uveíte induzida por endotoxina (EIU). Ratos machos (Rattus novergicus) foram anestesiados e inoculados, por via subcutânea, na pata direita com lipopolissacarídeo (LPS) (100µg) para o desenvolvimento da uveíte. Após, foram divididos em grupos experimentais (n=10/grupo): EIU por 24 e 48h; EIU por 24h e tratados farmacologicamente por administrações tópica e sistêmica do peptídeo Ac2-26 (100µg) e EIU 24h tratado sistemicamente com peptídeo e Boc2, antagonista do FPR (50µg/animal). Para confirmar a importância da AnxA1 endógena na resolução da inflamação ocular, camundongos selvagens e deficientes para AnxA1 (AnxA1-/-) foram induzidos à uveíte por 24h sem tratamento. Nesses animais AnxA1-/- a resposta inflamatória foi exacerbada em comparação com os selvagens. Enquanto, nos olhos dos ratos, as análises quantitativas dos leucócitos, dosagens de interleucina (IL)-1β, IL-6, fator de necrose tumoral (TNF)-α, óxido nítrico (NO) e expressão da ciclo-oxigenase (COX)-2 nos tecidos e/ou no humor aquoso indicaram os efeitos anti-inflamatórios do peptídeo. Efeitos que foram revertidos na presença do Boc2. As análises imuno-histoquímicas das proteínas AnxA1, AnxA1 fosforilada em... / Annexin A1 (AnxA1) is a protein that displays anti-inflammatory properties and some studies suggest that its effects may be mediated by formyl peptide receptors (FPR). Although the anti-inflammatory activities of AnxA1 and its mimetic peptides, including Ac2-26, have been explored in several investigations, the role of AnxA1 in ocular inflammatory processes has not yet been elucidated. Given the common side effects of the current therapies used to treat uveitis, an important cause of blindness worldwide, we investigated, in vivo, the AnxA1 effects and mechanism of action in endotoxin-induced uveitis (EIU). Rattus norvegicus were induced to uveitis (lipopolysaccharide - 100 µg) and divided into experimental groups (n=10/group): EIU untreated for 24 and 48h, EIU treated with topical applications (4/4h) or a single intravenous injection of Ac2-26 (100µg) and EIU systemically treated with the peptide and Boc2, the FPR antagonist (50µg/animal). To confirm the importance of endogenous AnxA1 in the resolution of ocular inflammation, wild-type and AnxA1 deficient (AnxA1-/-) mice were also induced to uveitis without treatment for 24h. AnxA1-/- mice showed exacerbated inflammation compared to wild-type animals. As, quantitative analyses of leukocytes, interleukin (IL)-1β, IL-6, tumor necrosis factor (TNF)-α, nitric oxide (NO) levels and cyclooxigenase (COX)-2 expression in ocular tissues and/or in aqueous humor of rats eyes revealed the anti-inflammatory effects of the peptide, which were abrogated in the Boc2 presence. Immunohistochemical analysis of AnxA1, serine-or-tyrosine-phosphorylated AnxA1 (AnxA-S27-PO4 - AnxA-Y21-PO4) in the ocular tissues showed AnxA1 and AnxA1-S27-PO4 expression in epithelial (cornea, iris and ciliary processes) and nervous cells. These expressions were increased in... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-03Bitstream added on 2015-04-09T12:47:47Z : No. of bitstreams: 1 000814932.pdf: 369481 bytes, checksum: 60ce623075afbb501a81052b336fe8f6 (MD5) / Estudaram-se os efeitos da lidocaína 1%, sem conservantes, sobre parâmetros da uveíte. Trinta coelhos compuseram a pesquisa, sendo dez constituindo um grupo controle (GC). Os demais, submetidos à uveíte experimental por paracentese, foram subdivididos em grupo uveíte tratado (GUT) e grupo uveíte não tratado (GUNT). O grupo GC recebeu 0,2 mL de lidocaína 1%, sem conservantes, por via intracameral. Animais do GUT e do GUNT receberam 0,2 mL de lidocaína 1%, sem conservantes, e de solução fisiológica (NaCl 0,9%), respectivamente, doze horas após a indução da uveíte, pela mesma via e com iguais critérios. Realizou-se a avaliação do diâmetro pupilar (DP), por paquimetria, nos seguintes momentos: basal (DP0’), até o 10° minuto; a cada minuto, até o 30° minuto; a cada 5 minutos; e até o 60° minuto, a cada 10 minutos. Procedeu-se à análise clínica, que compreendeu a avaliação da hiperemia conjuntival, da quemose e do edema da córnea. A pressão intraocular (PIO) foi avaliada empregando-se tonômetro de aplanação. Procederam-se análises quantitativas do “flare” do aquoso à flaremetria a “laser”. A hexagonalidade, a densidade celular, a área celular, o coeficiente de variação e a espessura da córnea foram avaliados à microscopia especular de não contato. As avaliações ocorreram no momento basal (M0) em todos os grupos, 12 horas após a indução da uveíte nos grupos GUT e GUNT (M1), 1 hora (M2), 12 horas (M3) e 24 horas (M4) após a injeção intracameral, em todos os grupos. Alíquotas de humor aquoso foram avaliadas quanto ao pH e quantitativo de proteínas. Diferenças foram consideradas significativas quando p≤0,05. Quanto ao diâmetro pupilar, houve diferença (p≤0,05) em todos os momentos, entre o GC e os demais grupos (GUT e GUNT), sendo maior no GC, seguido pelo GUT e pelo GUNT. Quanto a PIO, todos os grupos apresentaram diferenças entre o M0 e os demais momentos (p≤0,05), sendo maior em M0 / We studied the effects of preservative-free 1% lidocaine on parameters of uveitis. Thirty rabbits comprised the study, ten forming a control group (CG). The others, with experimental uveitis, were divided into uveitis treated group (UTG) and uveitis non-treated group (UNTG). CG group received 0.2 mL of preservative-free 1% lidocaine, via intracameral route. UTG and UNTG animals received 0.2 mL of preservative-free 1% lidocaine and 0.2 mL of saline (NaCl 0.9%), respectively, twelve hours after the induction of uveitis, via the same route and with the same criteria. The assessment of pupil diameter (PD) was made by pachymetry, at the following times: baseline (PD0') until the 10th minute; every minute, until the 30th minute; every 5 minutes, and up to 60 minutes, every 10 minutes. We conducted a clinical examination, which included the evaluation of the conjunctival hyperemia, chemosis and edema of the cornea. Intraocular pressure (IOP) was measured by applanation tonometry. We conducted quantitative analyses of the flare of the aqueous with a laser flarimetry. The hexagonality, cell density, cell area, coefficient of variation and corneal thickness were evaluated in a non-contact specular microscope. Assessments occurred at baseline (M0) in all groups, 12 hours after induction of uveitis in groups UTG and UNTG (M1), 1 hour (M2), 12 hours (M3) and 24 hours (M4) after intracameral injection in all groups. Aliquots of aqueous humor were evaluated for pH and for the quantification of proteins. Differences were considered significant when p ≤ 0.05. As for the pupillary diameter, there was a significant difference (p <0.05) at all times between the CG and the other groups (UTG and UNTG), being higher in CG, followed by UTG and the UNTG. As for the PIO, all groups showed differences between M0 and the other times (p <0.05), being higher in M0. Regarding corneal thickness there was a significant difference between M3 and the other times ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-06Bitstream added on 2014-06-13T20:35:30Z : No. of bitstreams: 1 brich_m_me_jabo.pdf: 460245 bytes, checksum: 3dd3a22b2996a7679b355cb0da04c9d3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A uveíte em mamíferos tem sido relacionada à infecção por Leptospira spp., e, embora ocorra com maior frequência na espécie equina, já foi observada e relatada em outras espécies mamíferas, inclusive na humana. O objetivo deste trabalho foi investigar a relação entre a infecção por leptospiras e a ocorrência de alterações oculares em cães. Para a obtenção dos dados foram utilizados 32 cães, em idade reprodutiva, recolhidos pelo Centro de Controle de Zoonoses do Município de São José do Rio Preto, que apresentaram reação negativa, em duas provas de soroaglutinação microscópica (SAM) no intervalo de sete dias. Dos 32 cães, 20 foram inoculados com uma cepa patogênica de Leptospira interrogans sorovariedade Canicola e 12 formaram o grupo controle. Com a finalidade de avaliar as possíveis alterações do globo ocular post mortem, oito cães (cinco inoculados e três controles) foram sacrificados nos dias: sete, 15, 30 e 45 após o dia da inoculação. Amostras de humor aquoso, de um dos olhos de cada animal, foram retiradas para realização de PCR e SAM; o outro globo ocular foi retirado para realização de exame histopatológico e para a técnica de coloração de Levaditi. Nos dias zero, três, cinco, sete, 10 e após, a cada cinco dias, inclusive no dia do sacrifício, foram realizadas avaliações do estado físico do animal, do globo ocular e realizadas colheitas de sangue. O soro sanguíneo foi submetido à SAM para estabelecer os títulos obtidos em cada fase da infecção. Embora todos os animais tenham apresentado títulos sorológicos, indicando o sucesso da infecção, nenhum dos testes de detecção resultou positivo em até 45 dias de observação; no exame clínico apenas três animais apresentaram alterações perceptíveis: dois apresentavam irritação ocular, com hiperemia da esclera e um animal apresentava lacrimejamento... / Uveitis in mammals has been related to Leptospira spp. And although it occurs more frequently in the horse has already been observed and reported in other mammalian species, including the human. The aim of this study was to investigate the relationship between leptospira infection and the occurrence of ocular changes in dogs. To obtain the data were used 32 dogs in the reproductive age, collected by the Center for Zoonosis Control in São José do Rio Preto, which showed negative reaction in both tests of microscopic agglutination test (MAT) within seven days. Of the 32 dogs, 20 were inoculated with a pathogenic strain of Leptospira interrogans sorovar Canicola and 12 formed the control group. With the aim of assessing possible changes of the eye post mortem, eight dogs (five inoculated and three controls) were sacrificed on days: seven, 15, 30 and 45 days after inoculation. Samples of aqueous humor of one eye of each animal were removed for PCR, and MAT, and the other eye was removed for histological examination and the staining technique Levaditi. On days zero, three, five, seven, 10 and, thereafter, every five days, including the day of sacrifice, were assessed the physical condition of the animal, the eyeball and blood samples. The serum was subjected to SAM to establish the qualifications obtained at each stage of infection. Although all animals have serologic evidence indicating the success of infection, no detection tests resulted positive in up to 45 days of observation and by clinical examination only three animals showed noticeable changes: two had eye irritation with redness of the sclera and one animal showed tearing. We conclude that 45 days of infection with Leptospira interrogans sorovar Canicola are not enough to cause serious damage to the ocular system of dogs

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-04Bitstream added on 2014-06-13T20:50:55Z : No. of bitstreams: 1 000735507.pdf: 1411225 bytes, checksum: 8fbfb73fa3d61839b1f7a315321a5d4b (MD5) / Avaliou-se o efeito da instilação local de morfina 1% sobre a expressão do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), da interleucina-1 beta (IL-1beta), da prostaglandina E2 (PGE2) e da mieloperoxidase (MPO) e a turbidez do humor aquoso (flaremetria a laser) em olhos de coelhos com uveíte induzida por injeção intravítrea de endotoxina. Empregou-se 30 leporinos da raça Nova Zelândia Branco, separados em 5 grupos (n=6), a saber : basal, grupo controle (GC), grupo morfina (GM), grupo naloxona (GN), grupo morfina-naloxona (GMN). Sob anestesia dissociativa, injetou-se 0,1 mL, contendo 0,2 μg de endotoxina (parede celular de Salmonella typhimurium), na câmara vítrea do olho direito de cada animal para a indução da uveíte experimental. Para a avaliação, realizou-se a flaremetria a “laser” antes da injeção intravítrea de endotoxina (basal), e às 10 e 20 horas da indução da uveítes, ocasião em que os olhos tratados foram enucleados para a quantificação do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), da interleucina-1 beta (IL-1beta), da mieloperoxidase (MPO) e da prostaglandina E2 (PGE2) por ELISA. Os dados foram analisados estatisticamente, quanto contagem de fótons no humor aquoso (flaremetria a “laser”), aplicando-se análise de variância não paramétrica de Friedman, seguida do “post hoc test” de Dunn, ao nível mínimo de significância de p>0,05 e quanto à quantificação das citocinas, utilizando-se Análise de Variância de via única, seguida pelo teste de Tukey, nas avaliações entre grupos. Considerou-se o nível mínimo de significância p<0,05. Observou-se, após a indução da uveíte, elevação significativa no nível TNF-alfa e IL-1beta, comparativamente aos olhos basais (p<0,05) em todos os tratamentos estudados (GC, GM, GN, GMN). A atividade da MPO apresentou uma elevação não significativa após a indução da uveíte. Os níveis dessas citocinas... / To evaluate the effects of instillation of morphine 1% on the expression of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), interleukin-1 beta (IL-1beta), prostaglandin E2 (PGE2) and myeloperoxidase (MPO) and the turbidity of aqueous humor (laser flaremetry) in the eyes of rabbits with uveitis induced by intravitreal injection of endotoxin. Were used 30 New Zealand White rabbits, separated into 5 groups (n = 6), as follows: healthy control group (CG), morphine group (GM), naloxone group (GN), morphine-naloxone group (GMN). Under dissociative anesthesia it was injected 0.1 mL containing 0.2 mg of endotoxin (cell wall of Salmonella typhimurium) in the vitreous of the right eye of each animal to induce experimental uveitis. For the evaluation, it was used laser flarimetry before intravitreal injection of endotoxin (baseline) and at 10 and 20 hours after the induction of uveitis, at which time the treated eyes were enucleated for the quantification of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), interleukin-1 beta (IL-1beta), mieloperoxidase (MPO) and prostaglandin E2 (PGE2) by ELISA. The data were treated statistically, the photon count in the aqueous humor (laser flarimetry), applying Friedman’s nonparametric two-way analyses of variance test, then the Dunn’s post hoc test, the minimum level of significance was p> 0.05 and for quantification of cytokines using ANOVA one-way followed by Tukey test in ratings between groups. Considered the minimum level of significance p <0.05. It was observed after induction of uveitis, significant increase in the level of TNF-alpha and IL-1beta compared to baseline eyes (p <0.05) in all treatments (GC, GM, GN, GMN). The MPO activity showed a nonsignificant increase after induction of uveitis. The levels of these cytokines between groups presented similar except in the quantification of PGE2, which showed significant variation between groups GM and GNM (p <0,05). Based ...

Orientadores: Manoel Barros Bértolo, Lilian Tereza Lavras Costallat / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T20:20:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sachetto_Zoraida_D.pdf: 1287056 bytes, checksum: 4d011e5c6f0abde49d8ded578bf64042 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Objetivo: Descrever os dados demográficos e as manifestações clinicas de pacientes com diagnostico de Doença de Behcet acompanhados no ambulatório de vasculites do Hospital das Clinicas da cidade de Campinas, São Paulo, Brasil. Métodos: O estudo foi realizado através da revisão dos prontuários de todos os pacientes com diagnostico de Doença de Behcet atendidos e/ou acompanhados no ambulatório de vasculites da Disciplina de Reumatologia do Hospital das Clinicas da Universidade Estadual de Campinas, São Paulo, Brasil, no período de 1988 a 2010. Resultados: Foram incluídos no estudo oitenta e sete pacientes. A proporção entre os sexos foi de M/F = 0,84 e a media de idade do inicio da doença foi de 28,03 + ou - 7,57 anos. Lesão aftosa oral foi a manifestação clinica mais comum (100%). Ulceras genitais também foram comuns (77%), seguidas pela pseudofoliculite (47,67%). Envolvimento ocular esteve presente em 80% e envolvimento neurológico em 31,03% dos pacientes. Artralgia foi relatada em 31,03% e artrite em 13,79% dos casos. O envolvimento vascular foi encontrado em 13,95% dos pacientes. Somente 1,14% apresentaram envolvimento gastrointestinal. Conclusão: Nesta serie de casos, realizada em um pais da America do Sul, foram encontrados resultados semelhantes aos previamente descritos em diferentes áreas endêmicas da doença, com uma maior frequência das manifestações oculares e neurológicas / Abstract: Objective: To analyze demographic and clinical features in patients diagnosed with Behcet's disease (BD) in Brazil. Methods: We performed a retrospective review of all the patients' records with BD diagnosed from 1988 to 2010 in the Rheumatology Department at the State University of Campinas (UNICAMP). All patients had to fulfill the International Study Group for Behcet's disease diagnostic criteria. Results: Eighty-seven patients were included in the study. The male/female rate was 0,84 and the mean age at the onset of the disease was 28.03 + or - 7.57 years. Oral aphtosis was the most frequent manifestation (100%). Genital aphtosis was also frequent (77%), followed by pseudofolliculitis (47.67%). Ocular symptoms were present in 80% and neurologic manifestations in 31.03% of the patients. Arthralgia was reported in 31.03% and arthritis in 13.79% of the cases. Vascular involvement was seen in 13.95% of the patients. Only 1.14% had gastrointestinal involvement. Conclusion: This series, from a South American country, showed a similar general pattern of the BD to those found in different endemic areas in the world, with a high frequency of ocular and neurological manifestations / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-27Bitstream added on 2014-06-13T18:53:59Z : No. of bitstreams: 1 sonehara_nm_me_sjrp.pdf: 893050 bytes, checksum: 36bd329123662bdbb3b28cb8936b43fd (MD5) / Introdução: A inflamação ocular é geralmente tratada com glicocorticoides, cujos efeitos colaterais estimulam novas estratégias terapêuticas. Nesse aspecto, destacamos a Galectina-1 (Gal-1), proteína com potencial anti- inflamatório, cuja ação em tecidos oculares foi pouco investigada. Objetivo: No presente estudo avaliamos a expressão da Gal-1 nas células epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19), após ativação pelo inflamógeno lipopolissacarídeo (LPS) e tratamentos com a Gal-1 recombinante humana (hrGal-1). Métodos: Para avaliar o efeito anti-inflamatório da Gal-1, as células ARPE-19 foram cultivadas em meio DMEM:F-12 completo (controle), ativadas pelo LPS (10 µg/mL) e tratadas com hrGal-1 (0,04; 0,4 e 4 µg/mL) ou glicocorticoide dexametasona (Dex: 1µM), nos períodos de 2, 8, 24 e 48 horas. Nessas condições, avaliamos a citotoxicidade dos tratamentos farmacológicos por ensaios de viabilidade celular e, a expressão da Gal-1 endógena nas células ativadas pelo LPS e tratadas com Dex, por meio da imunocitoquímica ultraestrutural. Nos sobrenadantes, em todos os tempos experimentais, analisamos os níveis das citocinas IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IL-1β e MCP-1 pelo método de ELISA. Com a finalidade de determinar a especificidade do efeito da hrGal-1, via domínio reconhecedor de carboidrato (CRD) sobre as células ARPE-19, adicionamos nas culturas os açúcares com ou sem afinidade pelo CRD (respectivamente β-galactose ou sucrose - 100mM) e, após 8 horas, os sobrenadantes foram coletados para análise das citocinas pró-inflamatórias IL- 6 e IL-8. Ainda, investigamos a expressão da enzima ciclo-oxigenase 2 (COX- 2), um importante mediador do processo inflamatório, nos períodos de 8 e 24 horas, por imunofluorescência. Resultados: Os ensaios de viabilidade celular mostram que os diferentes tratamentos... / Introduction: Ocular inflammation has often been treated with glucocorticoids, however, collateral side effects stimulate the search for new therapeutic strategies. In view of this, we emphasis on Galectin-1 (Gal-1), a protein with anti-inflammatory potential that has been poorly investigated in ocular tissues. Aim: The aim of this paper is to evaluate the expression and mechanism of action of Gal-1 in human retinal pigment epithelial cells (ARPE-19 cells) activated by lipopolysaccharide (LPS) and treated with recombinant human Gal- 1 (hrGal-1). Methods: To assess the anti-inflammatory effect of Gal-1, ARPE- 19 cells were cultured in DMEM: complete F-12 (control), activated by LPS and treated with hrGal-1 (0,04; 0,4 e 4 µg/mL)or glucocorticoid dexamethasone (Dex: 1μM) at 2, 8, 24 and 48 hours. Under these conditions, we evaluated the cytotoxicity of pharmacological treatments by cell viability assays, and the expression of the endogenous Gal-1 in cells activated by LPS and treated with Dex by ultrastructural immunocytochemistry. In the supernatants of these cells, in all experimental periods, we analyzed the levels of IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IL-1β and MCP-1 by ELISA. In order to determine the specificity of the effect of hrGal-1 via carbohydrate recognizer domain (CRD) on ARPE-19 cells, we added sugars to the culture with or without their affinity for the CRD (respectively β-galactose or sucrose - 100 mM), and these supernatants were collected after 8 hours for analysis of pro-inflammatory cytokines IL-6 and IL-8. We also analyzed the expression of the cyclooxygenase-2 (COX-2) enzyme, an important inflammatory process mediator, at 8 and 24 hours by immunofluorescence. Results: The assays of cell viability show that the different drug treatments have low cytotoxicity. The cells activated with... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-24Bitstream added on 2015-04-09T12:47:34Z : No. of bitstreams: 1 000811235.pdf: 1201122 bytes, checksum: 960bb25216fc143f12cb2f974cbd4170 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A inflamação é o principal fator contribuinte para inúmeras desordens oculares, podendo levar à cegueira e, em geral, são os glicocorticoides os medicamentos frequentemente administrados. No entanto, os efeitos adversos desses fármacos, limitam os seus usos. A proteína endógena galectina-1 (Gal-1) é capaz de controlar o processo de transmigração e apoptose dos leucócitos, contribuindo para a homeostase da reação inflamatória. No entanto, a expressão da Gal-1 em tecidos oculares normais e inflamados tem sido pouco estudada. Investigar a expressão e o mecanismo de ação da proteína endógena Gal-1 nos tecidos oculares de ratos na uveíte induzida por endotoxina (EIU) e o efeito anti-inflamatório da administração da galectina-1 recombinante (rGal-1). Ratos machos (Rattus norvegicus) foram anestesiados e inoculados na pata direita com lipopolissacarídeo (LPS) (1mg/Kg) para o desenvolvimento da uveíte e, após, divididos nos seguintes grupos experimentais (n=12/grupo): EIU 24 e 48h; EIU 24h e tratamento intraperitoneal com rGal-1 (3μg/animal), 15 minutos após o LPS. O sangue foi coletado para detecção da porcentagem de leucócitos polimorfonucleares positivos para as moléculas de adesão L-selectina (CD62L) e β2-integrina (CD11b), por citometria de fluxo. No humor aquoso (HA) foram quantificadas as células inflamatórias pela câmara de Neubauer. Os olhos, após enucleação, foram processados para análises histopatológicas, dosagens dos níveis das citocinas MCP-1, IL-1β, TNF-α, IL-6 e IL-10 por painéis Milliplex MAP e análises da expressão da Gal-1 endógena por imuno-histoquímica e Western blotting. A EIU 24h provocou sinais esperados de inflamação, incluindo intenso recrutamento de neutrófilos (Nɸs) nos tecidos oculares, HA e sangue, e liberação de citocinas pró-inflamatórias. O tratamento com rGal-1 atenuou os efeitos ocorridos na EIU por meio da inibição do infiltrado de Nɸs nos tecidos oculares ... / Inflammation is the main contributing factor for many eye disorders, and may lead to blindness and, in general, glucocorticoids are the drugs frequently administered. However, the side effects of these drugs limit their use. Endogenous protein galectin-1 (Gal-1) is able to control the process of apoptosis and transmigration of leukocytes, contributing to the homeostasis of inflammation. However, the expression of Gal-1 in normal and inflamed ocular tissues has been little studied. Investigate, in vivo, the expression and mechanism of action of endogenous protein Gal-1 in ocular tissues of rats in endotoxin-induced uveitis (EIU), and anti-inflammatory effect of administration of recombinant galectin-1 (rGal-1). Male rats (Rattus norvegicus) were anesthetized and inoculated in the right footpad with lipopolysaccharide (LPS) (1mg/kg) for developing uveitis, and after it divided into the following experimental groups (n=12/group): EIU 24 and 48h; EIU for 24h and treated intraperitoneally with rGal-1 (3μg/animal), 15 minutes after LPS. Blood was collected for detecting the percentage of positive cells for the adhesion molecules L-selectin (CD62L) and β2-integrin (CD11b) in polymorphonuclear leukocytes (PMNs), by flow cytometry. Inflammatory cells was quantified in aqueous humor (AqH) in the Neubauer chamber. After enucleation, the eyes were processed for histopathological analysis, dosage levels of MCP-1, IL-1β, TNF-α, IL-6 and IL-10 cytokine by panels Milliplex MAP and analysis of the expression of endogenous Gal-1 by immunohistochemistry and Western blotting. EIU 24h provoked expected signals of inflammation, including intense recruitment of neutrophils (Nɸs) in ocular tissues, AqH and blood, and release of proinflammatory cytokines. Treatment with rGal-1 attenuated the effects occurring in the EIU by inhibiting the infiltration of Nɸs in eye tissues and the AqH, percentage decreased of CD62L+ cells and, also, suppressing the ... / FAPESP: 2012/02759-1

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-27Bitstream added on 2014-06-13T20:48:19Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_ap_me_jab.pdf: 821460 bytes, checksum: 9540c58da44188e3ae8a41593d305a9c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudou-se a eficácia do meloxicam e do carprofeno, aplicados por diferentes vias, em uveítes experimentais em cães. Realizou paracentese de câmara anterior em dois momentos (M0 e M1), com intervalo de cinco horas entre si. Em M0 e M1, colheram-se 0,2 ml de humor aquoso e determinou-se a concentração de proteína total e de prostaglandina E2 (PGE2). Em um primeiro período, constituíram-se quatro grupos (n = 5), que receberam meloxicam ao final de M0 pelas vias subcutânea (GIm), subconjuntival (GIIm) e tópica (GIIIm). Um quarto grupo não recebeu tratamento (Controle). Decorridos sete dias, os animais foram submetidos aos mesmos procedimentos adotados previamente e receberam carprofeno. Avaliação clínica foi também realizada, assim como histopatologia da conjuntiva dos animais dos grupos GIIm e GIIc. Os resultados foram avaliados estatisticamente (p LÜ 0,05). Em todos os grupos, encontrou-se aumento significativo dos níveis protéicos e de PGE2 em M1 (p < 0,001). Não se observou diferença significativa entre os grupos para os valores de proteína total e de PGE2 em M1 (p > 0,05). Observou-se correlação positiva entre proteína total e PGE2 (p < 0,05) apenas no GIm, GIc, GIIIm, GIIIc e GIIm. Exsudado inflamatório de caráter agudo e hemorragia discreta foram vistos à histopatologia após a aplicação de ambos os fármacos (p > 0,05). O meloxicam e o carprofeno foram ineficazes em inibir a síntese de PGE2 e o influxo de proteínas para a câmara anterior, por qualquer uma das vias testadas. A redução nos níveis de 44% proteínas, quando o carprofeno foi utilizado pela via tópica, sugere que por esta via, ele pode ser utilizado como adjuvante no controle da uveíte em cães. / Efficacy of meloxican and carprofen, administered by different routes, in experimental uveitis in dogs were studied. Anterior chamber paracenteses was accomplished at two different moments (M0 and M1), with a five hour interval among them. At M0 and M1, 0,2 ml of aqueous humor were collected and total protein and prostaglandin E2 (PGE2) concentration was determined. Four groups were formed in a first period (n = 5), which received meloxican at the end of M0, by the following routes: subcutaneous (GIm), subconjunctival (GIIm), and topical (GIIIm). A fourth group that received no treatment was instituted (Control). Seven days after, animals underwent the same procedures described previously and received carprofen. Clinical evaluation was also performed, as well as conjunctival histopathology of the conjunctiva of the animals of GIIm and GIIc. Results were evaluated statistically (p LÜ 0,05). In all groups, protein and PGE2 values enhanced significantly in M1 (p < 0,001). Protein and PGE2 values, did not change significantly between groups at M1 (p > 0,05). Positive correlation among total protein and PGE2 (p < 0,05) was only noted in GIm, GIc, GIIIm, GIIIc and GIIm. Inflammatory exudate of acute character and mild hemorrhage were seen at histopathology, after both agents were administered. Meloxican and carpofen were unable to inhibit PGE2 synthesis and the protein influx to the anterior chamber by any of the tested routes. The lowering of 44% in protein levels, when carprofen was used by the topical route, suggests that by this route, it can be used as an adjuvant to control uveitis in dogs.

Orientador: Manoel Barros Bertolo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T03:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pires_CatarinaFernandes_D.pdf: 2601322 bytes, checksum: 1acb7f604b763cb1fd45c71455e387bf (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O presente estudo de caso-controle avaliou 74 crianças piauienses com Artrite Idiopática Juvenil (AIJ) em suas diversas formas: Oligoarticular, Sistêmica, Poliarticular Fator Reumatoide Positivo (FR+), Poliarticular Fator Reumatoide Negativo (FR-), Artrite relacionada a Entesite (ERA), Artrite Psoriásica e Artrite indeterminada, classificadas de acordo com os Critérios da Liga Internacional de Associações de Reumatologia (ILAR) e cento e um controles saudáveis pareados de acordo com idade, sexo, procedência e etnia. Os objetivos foram identificar e determinar os alelos HLA-DR e HLA-DQ em uma amostra da população infanto-juvenil piauiense com AIJ nas formas oligoarticular, sistêmica, poliarticular FR+, poliarticular FR-, artrite psoriásica, artrite relacionada a entesite e artrite indeterminada e compará-las com as frequências observadas no grupo de controle saudáveis; conhecer os alelos HLA-DR e HLA-DQ que estão associados a maior susceptibilidade e os que conferem maior proteção na população de crianças com AIJ em suas diversas formas. As tipagens dos alelos HLA-DR e HLA-DQ foram realizadas por meio da técnica de amplificação pela Reação de Cadeia da Polimerase (PCR), utilizando cadeias específicas de primers DR e DQ. O resultado da análise demostrou que, entre todas as formas de apresentação da AIJ, houve associação estatística significativa para a susceptibilidade da doença com o HLA-DRB1*10 OR 8,8 (IC 1,1 a 74,9) e HLA-DRB1*16 OR 2,8 (IC 1,1 a 7.5). Na forma oligoarticular a associação estatística significativa para a susceptibilidade ocorreu com o alelo HLA-DRB1*08 OR 4,6 (IC 1,4 a 14,6). Na forma sistêmica, essa associação aconteceu com o alelo HLA-DRB1*10 OR 22,2 (IC 1,8 a 269,5).Na forma Poliarticular FR+ a associação estatística significativa para a susceptibilidade ocorreu com os alelos DRB1*09 OR 12,1 (IC 2,2 a 66,9) e DRB1*10 OR 28,5 (IC 2,3 a 355,0). Na forma Poliarticular FR-, a associação estatística significativa para a susceptibilidade foi com o alelo DRB1*16 OR 13,4 (IC 1,6 a 111,2). A Artrite Psoriásica não apresentou nenhuma associação estatística significativa com os HLA pesquisados. O resultado da análise demostrou que, entre todas as formas de apresentação da AIJ, houve associação estatística significativa para a proteção da doença com o HLA-DRB1*03 OR 0,7 (IC 0,5 a 0,9) e, na forma sistêmica, essa associação aconteceu igualmente com DRB1*03 OR 0,7 (IC 0,6 a 0,8). As outras formas de apresentação da doença não demonstraram associação estatística significativa para a proteção com nenhum tipo da HLA pesquisado. A população estudada não apresentou nenhum caso de ERA e de Artrite indeterminada. O estudo encontrou ainda, associação para o risco entre o HLA-DQB1*03 OR = 6,06 (IC 1,3 a 27,2) e uveíte em pacientes com a forma oligoarticular da AIJ. Desta forma, concluímos que os nossos resultados apresentam tanto semelhanças em relação a susceptibilidade, quanto diferenças, principalmente quanto a proteção, nas associações tipicamente encontradas na literatura / Abstract: This case-controle valuated 74 children from Piauí with Juvenile Idiopathic Arthritis (AIJ) in its various forms: Oligoarticular, Systemic, Polyarticular Rheumatoid Factor Positive (FR +), Polyarticular Rheumatoid Factor Negative (FR-), Enthesitis-related Arthritis (ERA), Arthritis Psoriatic and Arthritis indeterminate, classified according to the Criteria of the International League of Associations for Rheumatology(ILAR), and one hundred and one healthy control smatched according to age ,sex, origin and ethnicity. The objectives were to identify and determine the HLA-DR and HLA-DQ in a sample of Piauí juvenile population subtypes JIA in oligoarticular, systemic, polyarticular RF + polyarticular RF -, psoriatic arthritis, enthesitis-related arthritis and arthritis indeterminate and compares them with the observed frequencies in the group of healthy control; know the HLA-DR and HLA-DQ alleles are associated with increased susceptibility and conferring greater protection in the population with JIA in its various forms and identify a possible relationship between the alleles HLA-DR and HLA-DQ and the most frequent and most aggressive form of the disease in the population studied. Polymerase Chain Reaction (PCR) using primers specific chains of DR and DQ performed the typing of HLA-DR and HLA-DQ using the technique of amplification. The result of the analysis demonstrate damong all cases of JIA was statistically significant association for disease susceptibility with HLA-DRB1*10 OR 8.8 (CI 1.1 to 74.9) and HLA-DRB1*16 OR 2.8 (CI 1.1 to 7.5). In oligoarticular JIA significant statistical association to susceptibility occurred with HLA-DRB1*08 allele OR 4.6 (CI 1.4 to 14.6), association systemic form happened to HLA-DRB1*10 OR 22.2 (CI 1.8 to 269.5) allele in polyarticular RF + the statistically significant association to susceptibility occurred with the DRB1*09 alleles OR 12.1(CI 2.2 to 66.9) and DRB1*10 OR 28.5(CI 2.3 to 355.0) in polyarticular RF- significant statistical association to susceptibility was with DRB1*16 allele OR 13.4 (CI 1.6 to 111.2). The Psoriatic Arthritis showed no statistically significant association with HLA surveyed. The result of the analysis demonstrate damong all cases of JIA was statistically significant association for disease protection with HLA-DRB1*03 OR 0.7(CI 0.5 to 0.9) and the systemic form this association also happened DRB1*03 OR with 0.7 (CI 0.6 to 0.8). The other forms of the disease showed no statistically significant association for protection on any type of HLA searched. The study population did not show any cases of ERA and indeterminate Arthritis. The study also found, statistically significant difference between the HLA-DQB1*03 OR 6.0 (CI 1.3 to 27.2), and uveitis in patients with oligoarticular form of JIA. Thus, we conclude that our results show both similarities in terms of susceptibility, and differences, especially regarding the protection, associations typically found in the literature / Doutorado / Medicina Interna / Doutora em Ciências Médicas