FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / O mamoeiro à uma planta de rÃpido crescimento e produÃÃo contÃnua e por isso, necessita de uma nutriÃÃo balanceada. Nesta pesquisa foram feitos trÃs experimentos em condiÃÃes de campo, em AcaraÃ, CE, com o objetivo de avaliar o crescimento, a produtividade e a composiÃÃo mineral do mamoeiro, decorrentes de doses de B, P e Zn. No primeiro experimento, os tratamentos foram constituÃdos em esquema fatorial 4 x 4 + 1, sendo quatro doses de B (0,5; 1,0; 2,0 e 4,0 kg ha-1) e quatro parcelamentos (P1 = 100% da adubaÃÃo com B aos 30 dias apÃs o plantio (DAP); P2 = 50% aos 30 DAP e 50% aos 180 DAP; P3 = 50% aos 30 DAP, 25% aos 90 DAP e 25% aos 180 DAP; e P4 = 100% aos 180 DAP), mais um controle (0 kg ha-1 de B), em delineamento experimental de blocos ao acaso, com quatro repetiÃÃes. No segundo experimento, os tratamentos foram constituÃdos em esquema fatorial 3 x 3 + 1, sendo trÃs doses de P2O5 (100; 200 e 300 kg ha-1) e trÃs parcelamentos (P1 = 100% da adubaÃÃo com P no plantio; P2 = 50% no plantio e 50% aos 180 DAP e P3 = 50% no plantio, 25% aos 90 DAP e 25% aos 180 DAP), mais um controle (0 kg ha-1 de P2O5), em delineamento experimental de blocos ao acaso, com trÃs repetiÃÃes. Jà no terceiro experimento, os tratamentos foram constituÃdos de seis doses de Zn (7,8; 9,8; 11,8; 13,8; 15,8 e 19,8 kg ha-1), em delineamento experimental de blocos ao acaso, com trÃs repetiÃÃes. Foram avaliadas a altura da planta e a circunferÃncia do caule aos 180 DAP; os teores de B, P e Zn no pecÃolo foliar aos 210 e 360 DAP e no fruto aos 240 DAP e o rendimento dos mamoeiros entre 210 e 360 DAP. Os dados experimentais foram submetidos à anÃlise de variÃncia pelo teste F. Para as doses de B, P e Zn foram ajustadas as equaÃÃes de regressÃes e para os parcelamentos de B e P foram aplicados os testes de Tukey. O crescimento, os teores de B, P e Zn no pecÃolo foliar e o rendimento foram afetados pelas doses B, P e Zn. Os mÃximos rendimentos foram alcanÃados nas doses de 2 kg ha-1 de B, 160 kg ha-1 de P2O5 e 10 kg ha-1 de Zn. Jà os teores no pecÃolo foliar relacionados à mÃxima produtividade foram de 22 mg kg-1 de B, 1,9 g kg-1 de P e 12 mg kg-1 de Zn aos 210 DAP. / Papaya is a plant of rapid growth and continuous production and therefore requires a balanced nutrition. In this research three experiments were made under field conditions in AcaraÃ, CE, aiming to evaluate the growth, yield and mineral composition of the papaya plant stemming doses of B, P and Zn. In the first experiment, the treatments were arranged in factorial 4 x 4 + 1, being four B doses (0.5, 1.0, 2.0 and 4.0 kg ha-1) and four installments (P1 = 100 % of B fertilization at 30 days after planting (DAP), P2 = 50% at 30 DAP and 50% at 180 DAP; P3 = 50% at 30 DAP, 25% at 90 DAP and 25% at 180 DAP, and P4 = 100% to 180 DAP), plus a control (0 kg ha-1 B), in experimental design of randomized blocks with four replications. In the second experiment, the treatments were in a factorial 3 x 3 + 1, three P2O5 doses (100, 200 and 300 kg ha-1) and three installments (P1 = 100% of P fertilization at planting; P2 = 50% at planting and 50% at 180 DAP and P3 = 50% at planting, 25% at 90% DAP and 25% at 180 DAP), plus a control (0 kg ha-1 P2O5) in experimental design of randomized blocks with three replications. In the third experiment, treatments consisted of six Zn doses (7.8, 9.8, 11.8, 13.8, 15.8 and 19.8 kg ha-1) in experimental design of randomized blocks with three replications. Were evaluated plant height and girth stem at 180 DAP; B, P and Zn concentrations in the petiole leaf at 210 and 360 DAP and in the fruit at 240 DAP and the yield of papaya trees between 210 and 360 DAP. The experimental data were subjected to analysis of variance by F-test. To the B, P and Zn doses were adjusted regression equations and the B and P installments were applied Tukey test. The growth, the B, P and Zn concentration in the petiole leaf and the yield were affected by B, P and Zn doses. The maximum yields were achieved at doses 2 kg ha-1 of B, 160 kg ha-1 of P2O5 and 10 kg ha-1 of Zn. Already the B, P and Zn concentration in the petioles related maximum yield was 22 mg kg-1, 1.9 g kg-1 and 12 mg kg-1 at 210 DAP, respectively.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-10-23T14:18:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Rodolfo Pessoa de Melo Moura.pdf: 758178 bytes, checksum: 7ecee6051a931e3223b29e95962aa66c (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-10-26T19:17:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Rodolfo Pessoa de Melo Moura.pdf: 758178 bytes, checksum: 7ecee6051a931e3223b29e95962aa66c (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-10-26T19:21:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Rodolfo Pessoa de Melo Moura.pdf: 758178 bytes, checksum: 7ecee6051a931e3223b29e95962aa66c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T19:21:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Rodolfo Pessoa de Melo Moura.pdf: 758178 bytes, checksum: 7ecee6051a931e3223b29e95962aa66c (MD5) Previous issue date: 2013-01-31 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Amazon also expresses deficiency related to meet the nutritional requirements of papaya in its various production stages, where the quality of seedlings is a major hurdle in the production chain of papaya studies. This study investigated the effect of two phosphate sources with increasing doses of fertilizers in the formation of papaya seedlings. The experimental design was completely randomized with three replications, with analysis in 2x2x5 factorial arrangement. The factors were two levels in soils (Red Yellow Ultisoil dystrophic medium texture and Yellow Oxisoil dystrophic clayey texture), source at two levels (TFY - magnesium thermophosphate Yoorin, 18,1% P2O5 and FNRA - Arad phosphate reactive, 33,1 % P2O5) and doses at five levels (50, 75, 150, 300, 600 mg P dm-3). Each experimental plot consisted of a plant. The initial growth of papaya is affected by different phosphorus sources. In the production of seedlings for each dm3 substrate the recommendation is 331,90 mg P using thermophosphate yoorin is 451,64 mg of P using the reactive phosphate Arad in Ultisoil. In Oxisoil the recommendation is 374,75 mg of P using thermophosphate Yoorin is 205,41 mg of P using the reactive phosphate Arad. The species showed potential responsive to phosphorus fertilization. / A Amazônia ainda manifesta deficiência em estudos relacionados a atender as exigências nutricionais do mamoeiro nas suas diversas fases produtivas, onde a qualidade das mudas é um dos grandes entraves da cadeia produtiva do mamão. Este trabalho objetivou estudar o efeito de duas fontes fosfatadas com doses crescentes dos fertilizantes na formação de mudas de mamoeiro. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com três repetições, com análise em arranjo fatorial 2x2x5. Os fatores foram solos em dois níveis (Argissolo Vermelho Amarelo distrófico textura média e Latossolo Amarelo distrófico textura argilosa), fonte em dois níveis (TFY - termofosfato magnesiano Yoorin, 18,1% de P2O5 e FNRA - fosfato reativo de Arad, 33,1% de P2O5) e dose em cinco níveis (50, 75, 150, 300, 600 mg dm-3 de P). Cada parcela experimental foi composta por uma planta. O crescimento inicial do mamoeiro é afetado pelas diferentes fontes fosfatadas. Na produção de mudas para cada dm3 de substrato a recomendação é 331,90 mg de P utilizando o termofosfato yoorin e 451,64 mg de P utilizando o fosfato natural reativo de Arad em Argissolo. Em Latossolo a recomendação é 374,75 mg de P utilizando o termofosfato yoorin e 205,41 mg de P utilizando o fosfato natural reativo de Arad. A espécie mostrou potencial responsivo a adubação fosfatada.

O mamão está entre as frutas mais exportadas e consumidas no Brasil, no entanto, sua comercialização é dificultada devido ao seu curto período de vida útil pós-colheita. O 1- metilciclopropeno (1-MCP) tem sido utilizado para retardar o amadurecimento de frutos climatéricos e como ferramenta para estudos de processos relacionados ao etileno. Entretanto, a aplicação de 1-MCP em mamões parcialmente verdes, estádio utilizado para comercialização, leva às respostas variáveis, o que tem inviabilizado seu uso comercial nesta fruta. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi estudar as relações entre etileno e 1-MCP e investigar os fatores que inviabilizam o uso comercial do 1-MCP em mamões \'Golden\'. Para tal propósito a pesquisa foi desenvolvida em três etapas. Na primeira, foi feita a avaliação fisiológica, bioquímica e de qualidade em mamões submetidos à aplicação de etileno e 1- MCP. Na segunda, foram identificados os compostos voláteis responsáveis pelo aromaem mamões submetidos às mesmas condições da primeira etapa, assim como as possíveis interferências do etileno e 1-MCP sobre a produção desses compostos.A terceira etapa consistiu em determinar a influência da concentração endógena de etileno (CEE) de mamões \'Golden\' na sensibilidade ao 1-MCP. Para a primeira e segunda etapa, mamões provenientes do sul da Bahia foram submetidos aos seguintes tratamentos: controle, etileno, 1-MCP, etileno + 1-MCP (simultâneo), etileno + 12h +1-MCP e etileno + 1-MCP (sem intervalo) e, em seguida, armazenados em câmara de refrigeração a 22 ±1°C até o completo amadurecimento para as avaliações. Na primeira etapa foi possível observar que o uso do 1-MCP isoladamente, bem como quando aplicado 12 horas ou imediatamente após a aplicação de etileno prejudicou o amolecimento da polpa de mamões \'Golden\', no entanto, a coloração finalda casca não foi prejudicada pelo uso do inibidor. O 1-MCP, associado ou não ao etileno alterou a o mecanismo de retroalimentação normal de produção de etileno e, provavelmente, a enzima ACC sintase foi afetada. A aplicação de etileno + 1-MCP, simultaneamente, aumentou a vida de prateleira de mamões \'Golden\' sem comprometer a qualidade final do fruto. Na segunda etapa, vinte compostos voláteis em mamões \'Golden\' foram identificados. O 1-MCP afetou o aroma dos frutos e estes não recuperaram o aroma no mesmo teor dos frutos sem tratamento até o oitavo dia de armazenamento. Os tratamentos com 1-MCP, com ou sem etileno, afetaram mais os compostos responsáveis por nuances de aroma, mas não afetaram prejudicialmente os compostos de impacto do aroma. Na terceira etapa, mamões \'Golden\' provenientes de Linhares, foram submetidos a tratamentos que visaram reduzir ou aumentar a CEE e relacionar com a sensibilidade do fruto ao 1-MCP. Para isso, um grupo de frutos foi submetido a 2% de O2 para reduzir a CEE, outro grupo foi exposto à atmosfera de 2,5 μL L-1 de etileno visando aumentar a CEE. O terceiro grupo de frutos foi submetido à atmosfera ambiente. Ao final dos tratamentos, metade dos frutos de cada grupo foi submetida à aplicação de 1-MCP e a outra metade imersa em água deionizada. Os resultados confirmam que a concentração endógena de etileno modula a sensibilidade de mamões \'Golden\' ao 1- MCP. / The papaya is one of the most exported and consumedfruit in Brazil, however, due the short shelf life the commercialization have some obstacles. The 1-methylcyclopropene (1- MCP) has been used for delaying the climacteric fruit ripening and as a tool for studies of ethylene processes. Nevertheless, the application of 1-MCP in partially green papayas, which is the commercialization stage, leads to uncertainty results, which has made impossible the commercial use in this fruit. Thus, the aim of this work was to study the relationship between ethylene and 1-MCP to understand the factors that do not allow commercial use of 1-MCP in Golden\' papayas. For this purpose the research was conducted in three steps. The first was composed by physiological, biochemistry and quality measurements in papayas submitted to ethylene and 1-MCP treatments. In the second, the volatile aromas compounds were identifiedin papayas subjected to the same conditions of the first step, as well as, the possible interferences of ethylene and 1-MCP on the production of those compounds. The third step was to determine the influence of endogenous ethylene concentration (EEC) in the sensitivity of \'Golden\' papaya to 1-MCP. In the first and second steps, papayas from the south of Bahia were submitted to the following treatments: control, ethylene, 1-MCP, ethylene + 1-MCP (simultaneously), ethylene + 12h + 1-MCP and ethylene + 1-MCP (no interval) and then stored in refrigerator at 22 ± 1 ° C until to complete ripening, condition that they were evaluated. In the first step it was observed that the use of 1-MCP alone and applied 12 hours or immediately after ethylene impaired softening of papaya pulp \'Golden\', however, the final skin color was not impairment by the use of the inhibitor. The 1-MCP, with or without ethylene, altered normal feedback ethylene production and probably the ACC synthase was affected. The application of ethylene + 1-MCP, simultaneously, increased shelf life of papayas \'Golden\' without affect the final fruit quality. According to the second step, twenty volatiles in \'Golden\' papaya were identified. The 1-MCP affect the aroma of fruits and these did not recover the same aroma content of the fruits untreated until the eighth day of storage. Treatments with 1-MCP, with or without ethylene, affected more compounds responsible for flavor nuances, but not detrimentally affect the aroma impact compounds. In the third and last study part, \'Golden\' papayas from Linhares were submitted to treatments aimed at reducing or increasing the EEC and relate to the sensitivity of fruit to 1-MCP. For this, a group of fruits was subjected to 2% O2 to reduce the EEC, other group was exposed to the atmosphere of 2.5 μL L-1of ethylene to increase the EEC. The third group was subjected fruits ambient atmosphere. At the end of treatment, half part of each fruit group was subjected to the application of 1-MCP and the other half part immersed in deionized water. The results confirm that the endogenous ethylene concentration modulates the sensitivity of papayas \'Golden\' to 1-MCP.

Orientadores: Felipe Rodrigues da Silva, Francisco Pereira Lobo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T12:42:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_GiovanniMarquesde_M.pdf: 8706589 bytes, checksum: bd5b5d6428a549bafa82854367f811b9 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A planta Fevillea cordifolia L. possui um grande potencial para produção de biodiesel. Buscando entender o metabolismo foi realizado um experimento exploratório de RNA-seq com sementes inteiras. No entanto, as análises da qualidade na biblioteca indicaram grande quantidade de sequências virais. Após a reconstrução do transcriptoma usando o programa TRINITY, também foi reconstruído o genoma completo do vírus. O vírus reconstruído possui identidade de 96% com o Papaya ringspot virus (PRSV) em um alinhamento global de nucleotídeos dos genomas completos. Avaliando a abundância dos contigs, o PRSV encontrado representa quase 60% das 24,6 milhões de leituras da biblioteca. Para identificar qual a origem do vírus encontrado, este foi comparado com 29 PRSVs existentes no Genbank através de análise filogenética usando do Algerian watermelon mosaic virus (AWMV) para enraizar a árvore. O vírus encontrado agrupa-se com os dois PRSVs do Brasil, dentro do grupo das Américas estando mais próximo do PRSV-W-C (DQ374152). A existência de recombinações entre os PRSVs foi analisada, porém não foi detectada recombinação recente. Devido à profundidade de sequenciamento maior que 10.000x, foi possível analisar as variações existentes do genoma viral reconstruído. Uma análise das variações dos códons virais foi realizada, mostrando uma tendência para ocorrência de indels para a região do genoma no fim do cístron NIb e início do cístron CP. Essas variações ocorrem devido à existência de haplótipos virais na amostra sequenciada. Para se estimar a diversidade de haplótipos virais da amostra, foi realizada uma reconstrução local da região de 500 nt com mais alta entropia. Foram reconstruídos 58 haplótipos, dos quais dois eram predominantes com frequências de 64,84% e 24,34%. Os haplótipos reconstruídos podem ser usados para o desenvolvimento de resistência mediada por RNAi, evitando que uma variante conhecida e preexistente na população possa quebrar a resistência / Abstract: The plant Fevillea cordifolia L. has a great potential for producing biodiesel. In order to understand its metabolic pathways an exploratory RNA-seq experiment was conducted with its whole-seeds. However the quality analysis of the library revealed a substantial amount of virus sequences. After the reconstruction of the transcriptome using the software TRINITY, the complete viral genome was obtained as well. The reconstructed viral genome had an identity of 96% with Papaya ringspot virus (PRSV) in a global nucleotide alignment using whole genomes. When estimating the abundance of the reconstructed sequences, this PRSV had almost 60% of the 24,6 million reads mapping to it. Aiming to elucidate the origin of this virus, its sequence was compared to 29 PRSVs from Genbank using phylogenetic analysis and the Algerian Watermelon Mosaic Virus (AWMV) as an outgroup. This PRSV clustered with the Brazilian isolates, being closer to PRSV-W-C (DQ374152). A recombination analysis was performed within the PRSVs but no recent recombination was detected. Due to the depth of the coverage sequencing being higher than 10.000x, it was possible to analyze the variations existing in the reconstructed genome. An analysis of the codons variations was performed, revealing a tendency for the occurrence of indels in a region at the end of NIb cistron and at the start of the CP cistron. These variations occur due to the existence of viral haplotypes sequenced in this sample. A local reconstruction of the 500nt region with the highest entropy was performed to estimate the diversity of viral haplotypes in this sample. 58 haplotypes were reconstructed, of which 2 were dominant with frequencies of 64,84% and 24,34%. The reconstructed haplotypes may be used for the development of RNAi-mediated resistance, avoiding the breaking of the resistance by variants that are known to exist in the population / Mestrado / Bioinformatica / Mestre em Genética e Biologia Molecular

The proteolytic actjvity of papain was investigated with respect to its action on both natural substrates (native papaya protein and bovine serum albumin) and artificial synthetic substrate (benzoyl~l-arginine ethyl ester). Following removal of 30 percent and 40 percent of the amino acid residues from the amine terminus, the activity of the degraded papain was determined with respect to the above substrates, and compared to the activity of the intact papain molecule. Native papaya protein showed resistance to digestion by both intact papain and 30 percent 'degraded papain. This resistance to digestion persisted for time periods ranging from three to six hours and was not found with the other substrates. Papaya protein did not show this resistance to digestion by 40 percent degraded papain. Digestion began immediately upon addition of 40 percent degraded papain to papaya protein. In contrast to this, papaya protein showed no resistance to digestion by other proteolytic enzymes, both of plant and animal origin. These investigations clearly showed an interaction between native papaya protein and papain, which serves to prevent digestion of the native papaya protein by papain. This interaction was shown to be with a region of the papain between amtno acid residue 62 (30 percent degraded papain) and amino acid residue 84 (40 percent degraded papain). It is suggested that this type of interaction may be a general mechanism for the prevention of digestion of native proteins by the enzymes of the host. If this is the case, then the papain-papaya protein system could serve as an easily controlled model system for the investigation of other such enzyme systems.

Parmi les activités catalytiques les plus intéressantes présentes dans le latex de Carica papaya on trouve l'activité lipolytique (EC 3.1.1.X). En effet les enzymes lipolytiques peuvent catalyser des réactions d’hydrolyse sur divers substrats mais également, dans des conditions thermodynamiques favorables, des réactions de synthèse. De plus, elles sont actives en présence de solvants organiques, ce qui fait de ce type d’enzymes des biocatalyseurs spécialement attractifs pour des applications industrielles. Enfin, cette activité lipolytique est associée à la matrice insoluble du latex, et constitue donc une activité immobilisée. Cependant et pour cette même raison, il n'a pas été possible jusqu'à présent d'élucider la ou les séquences protéiques dans le latex responsables de cette activité lipolytique. En conséquence, cette thèse est dédiée à l'étude de l'activité lipolytique du latex de C. papaya. Pour cela, la purification partielle du latex de C. papaya a été réalisée. Ainsi, les propriétés catalytiques des fractions partiellement purifiées ont pu être déterminées pour l'hydrolyse de triglycérides, la résolution de mélanges racémique d'octyl ester de l'acide 2-bromo-phenylacétique, la synthèse de biopolymères et des lipides structurés. Parallèlement à cela, une recherche dans le génome de C. papaya des séquences codant les motifs conservés dans les protéines lipolytiques, ainsi que des essais d'expression in vivo dans les feuilles de la plante en conditions de stress a été effectuée, ce qui a permis d’isoler pour la première fois une lipase, CpLip2, exprimée in vivo chez C. papaya. Cette protéine, ainsi que 2 autres protéines déjà identifiées dans le latex de C. papaya, CpEst et CpLip1, ont été produites sous forme fonctionnelle en employant respectivement Nicothiana sp., Yarrowia lipolytica et Pichia pastoris comme systèmes d'expression. Finalement, certaines des propriétés biochimiques et catalytiques de ces protéines recombinantes ont pu être déterminées / Lipolytic activity (EC 3.1.1.X) is one of the most interesting catalytic activities from Carica papaya latex. Indeed lipolytic enzymes can catalyze not only hydrolysis but also various synthesis reactions due to their activity in organic solvents, which make them especially attractive for industrial applications. Nevertheless, most of the lipolytic activity present in latex is tightly associated to the insoluble fraction of the latex and up to now it has not been possible to determine which enzymes are responsible for the lipolytic activity of C. papaya latex. This PhD work is dedicated to the study of the lipolytic activity present in Carica papaya. Partial purification of lipolytic activity from C. papaya latex was carried out to evaluate the catalytic properties of the partially purified fractions in the hydrolysis of triglycerides, the resolution of racemic mixtures of 2-bromo-phenylacetic octyl ester, biopolymers and structured lipids synthesis. Bioinformatic analysis was also realized on C. papaya genome by searching conserved motifs for lipolytic proteins. Finally, assays of in vivo transcriptomic in the leaves of stressed C. papaya allowed the isolation of a new lipase produced in vivo (CpLip2, gene 1973.2). This protein, as well as two previously identified lipolytic enzymes from C. papaya, CpEst (gen 25.180) and CpLip1 (gen 55.143) were functionally expressed using Nicotiana sp.,Yarrowia lipolytica and Pichia pastoris as expression hosts, respectively. Finally, some of the biochemical and catalytic properties of these produced recombinant proteins were evaluated / Una de las actividades catalíticas más interesantes presentes en el látex de Carica papaya es la actividad lipolítica (3.1.1.X).Las enzimas lipolíticas pueden catalizar reacciones de hidrólisis sobre varios sustratos e igualmente, en condiciones termodinámicas favorables, pueden catalizar reacciones de síntesis. Adicionalmente, son activas en presencia de solventes orgánicos, por lo que son biocatalizadores atractivos para aplicaciones industriales. Sin embargo, la mayor parte de la actividad lipolítica del látex se encuentra asociada a la matriz insoluble del látex, formando un biocatalizador auto-inmovilizado.Por esta razón, hasta la fecha no ha sido posible elucidar qué enzima o enzimas son responsables de la actividad lipolítica observada en el látex de C. papaya. En consecuencia, la presente investigación está dedicada al estudio de la actividad lipolítica en Carica papaya. Para ello, se realizaron estudios de purificación parcial del látex de Carica papaya, así como la evaluación de las propiedades catalíticas de las fracciones parcialmente purificadas en la hidrólisis de triglicéridos, resolución de mezclas racémicas de octil éster del ácido 2-bromo-fenilacético y síntesis de biopolímeros y lípidos estructurados. Paralelamente, se realizó un análisis genómico mediante la búsqueda con motivos conservados que codifican para diversas proteínas lipolíticas, así como ensayos de transcriptómica para buscar la expresión in vivo de secuencias seleccionadas en las hojas de la planta, que permitieron encontrar por primera vez una expresión in vivo de una lipasa en C. papaya (CpLip2). Esta proteína y otras dos previamente identificadas en el látex de papaya (CpEst y CpLip1), fueron expresadas de forma funcional empleando respectivamente Nicotiana sp., Yarrowia lipolytica y Pichia pastoris como sistemas de expresión. Finalmente algunas de las propiedades bioquímicas y catalíticas de las proteínas expresadas fueron determinadas

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-05-12T14:19:07Z No. of bitstreams: 1 2010 - Henriqueta Talita Guimar?es Barboza.pdf: 10302674 bytes, checksum: 6daf4f88308c3c733615f0772d6db594 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T14:19:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010 - Henriqueta Talita Guimar?es Barboza.pdf: 10302674 bytes, checksum: 6daf4f88308c3c733615f0772d6db594 (MD5) Previous issue date: 2010-03-04 / Twelve heterocyclic dialkylphosphorylhydrazones compounds were synthesized in this work. Dialkylphosphorylhydrazones were obtained through 3 steps of reaction. The first step consists on the synthesis of different dialkylphosphonates obtained by reaction of triethyl phosphate (PCl3) with 3 mols of the corresponding alcohol. The second step occurs by the reaction with dialkylphosphonates synthesized and hydrazine, producing dialkylphosphorylhydrazines. The third and last step is the condensation reaction of these dialkylphosphorylhydrazines with different heterocycle substituted aromatic aldehydes. The analysis of the 1H NMR spectra allowed to observe the stereoisomers E and Z, with the formation of E diastereisomer preferencially. All the compounds were characterized by 1H, 13C and 31P NMR, IR and mass spectroscopy. Tests in vitro with, Alternaria sp., Colletotrichum sp., Fusarium sp. e Fusarium solani, known as patogenic in papaya (Carica papaya L.) were performed in order to confirm if the compounds showed fungicide activity. The substance 6 B was the one with the best performance in the inhibition of all fungal growths. Finally, tests with acetylcholinesterase enzyme indicated that all substances did not inhibit this enzyme. Figure 2 - General structures of dialkylphosphoryhidrazones synthesized. R ? Ethyl; propyl; isopropyl e isobuthyl. X = O, Y, Z e W = CH; X = S, Y, Z e W = CH; X = NH, Y, Z e W = CH; X = NH, Y= CH, Z=CH e W = N; X = CH, Y= N, Z=CH e W = N; / Neste trabalho foram sintetizadas doze (12) novas dialquilfosforilidrazonas heteroc?clicas. Esses compostos foram obtidos utilizando-se tr?s etapas de rea??o. A primeira etapa consiste na s?ntese de diferentes fosfonatos de dialquila, obtidos por meio da rea??o do tricloreto de f?sforo (PCl3) com tr?s mols do ?lcool correspondente. A segunda etapa ocorre por meio da rea??o dos fosfonatos de dialquila sintetizados com a hidrazina, formando as dialquilfosforilidrazinas. A terceira e ?ltima etapa ? a condensa??o destas dialquilfosforilidrazinas com diferentes alde?dos heteroc?clicos. A an?lise dos espectros de RMN-1H indica a forma??o de diastereois?meros, E e Z, com predomin?ncia do diastereis?meros E. Todos os compostos obtidos foram caracterizados por RMN de H1 e C13 e P31, IV, an?lises de massas. Em seguida foram realizados testes in vitro para verificar se os mesmos possuem atividade fungicida sobre os fungos Alternaria sp., Colletotrichum sp., Fusarium sp. e Fusarium solani, conhecidos por serem pat?genos da cultura de mam?o (Carica papaya L.). O composto 6 B foi o que apresentou o melhor efeito fungicida sobre o crescimento de todos os fungos. Finalmente foram realizados testes com a enzima acetilcolinesterase a fim de observar a toxicidade dos compostos sintetizados frente a esta enzima. Figura 1- Estrututa gen?rica das dialquilfosforilidrazonas heteroc?clicas sintetizadas. R ? Etil; propil; isopropil e isobutil. X = O, Y, Z e W = CH; X = S, Y, Z e W = CH; X = NH, Y, Z e W = CH; X = NH, Y= CH, Z=CH e W = N; X = CH, Y= N, Z=CH e W = N.

Submitted by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2016-04-11T20:49:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação_Jean.pdf: 1797995 bytes, checksum: b603b8c2f1c6e995111923a3d87928d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-16T14:48:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação_Jean.pdf: 1797995 bytes, checksum: b603b8c2f1c6e995111923a3d87928d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-16T14:48:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação_Jean.pdf: 1797995 bytes, checksum: b603b8c2f1c6e995111923a3d87928d5 (MD5) / Financiadora de Estudos e Projetos - FINEP, CNPq, CAPES, FAPES / A meleira, causada pelo Papaya meleira virus (PMeV), é uma doença importante no Brasil e no México devido as grandes perdas econômicas que ela causa. Estudos para avaliar a interação patógeno-hospedeiro em nível histológico são fundamentais para compreender os mecanismos responsáveis pela resistência natural das plantas. Neste estudo foram coletadas folhas de mamoeiros saudáveis e sintomáticos para meleira e observou-se a topografia e a dureza da parede celular dessas plantas por microscopia de força atômica (AFM). As imagens em duas dimensões obtidas a partir de diferentes áreas da parede celular mostraram que as paredes celulares das plantas saudáveis são mais uniformes do que as paredes de plantas doentes. As plantas saudáveis também apresentaram características constitutivas da parede celular mais elevadas do que as de plantas doentes e a média da força de adesão máxima observada foi maior em plantas saudáveis do que em plantas doentes. Estes resultados indicam que o PMeV promove alterações nas paredes das células, tornando-as mais frágeis e suscetíveis à ruptura. Estas alterações, associadas ao aumento da captação de água e aumento da pressão interna dos laticíferos, provocam o rompimento celular que leva à exsudação espontânea do látex e facilita a disseminação de PMeV para outros laticíferos. Os resultados deste trabalho fornecem novas percepções sobre a interação mamoeiro-PMeV que podem revelar-se úteis no que se refere a entender e controlar a meleira do mamoeiro. / Papaya sticky disease, caused by Papaya meleira virus (PMeV), is an important papaya disease in Brasil and Mexico due the severe economic losses it causes. Studies to assess the pathogen-host interaction at a histological are fundamental in order to understand the mechanisms that underlie natural resistance. In this study we collected leaves of healthy and symptomatic papaya sticky diseased plants and observed the topography and mechanical properties of plant cell walls by atomic force microscopy (AFM). Two-dimensional images obtained from different areas of the cell wall showed that the cell walls of healthy plants are smoother than the walls of sticky diseased plants. Also healthy plants displayed higher constitutive characteristics of the cell wall than diseased plants and the average maximum adhesion force was higher on healthy plants than on diseased plants. PMeV promotes changes on cell walls, making them more fragile and susceptible to breakage. These changes, associated with increased water uptake and internal pressure of laticifers causes cell disruption that leads to spontaneous exudation of latex and facilitates the spread of PMeV to other laticifers. The results of this work provide new insights on the interaction papaya-PMeV which could prove helpful when trying to understand and control the papaya sticky disease.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 638342 bytes, checksum: 8e72262147ec2f82c5e75db8ecf80969 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Somatic embryogenesis is an alternative technique of clonal micropropagation in Carica papaya, taking into account the problems generated by the conventional seed propagation and the absence of an effective method for early sex determination of this trioecious species. Considering the interest in large-scale seedlings production of papaya, liquid system and the use of immature zygotic embryos as explant source have proved to be more efficient for the somatic embryos generation in quickly way and in relatively high amount. However, tissue culture techniques are frequently associated with somaclonal variation ocorrence. Therefore, detection and selection of somaclones become necessary, and different methodologies have been employed for this purpose. In this perspective, this study adapted a protocol for mass production of somatic embryos in liquid medium and adopted cytometry and cytogenetics strategies for monitoring somaclonal variation in papaya. Firstly, immature zygotic embryos, which show a high embryogenic potential, were cultured in semi-solid médium, in the presence of 2,4-D, for friable embryogenic callus induction. The transfering of these callus to a liquid system, under the 2,4-D and BAP regulators action, allowed the increase of the cell aggregates proliferation. This auxin and cytokinin ratio was ideal for allowing only cell proliferation rather than differentiation of the suspensions in somatic embryos. These were converted and matured after inoculation of aggregates in liquid medium supplemented with ABA. In this condition, somatic embryos suspensions were obtained, in the early heart, torpedo, pre-cotyledonary and cotyledonary stages. Direct somatic embryogenesis, without callus formation, was also observed from the primary somatic embryos. Cotyledonary embryos were extracted and germinated on semi-solid medium containing GA3. About 80% of plantlets were regenerated and subjected to in vitro acclimatization. The potential of the flow cytometry technique could be demonstrated by verifying the ploidy level of regenerants and, thus, the evaluation of somaclonal variation occurrence. In this screening, diploid (88%), tetraploid (6%) and aneuploid (6%) seedlings were detected. For cytogenetic methodology, known diploid seedlings had their karyograms assembled, in which it did not observe any numerical or structural change. The association of flow cytometry and cytogenetics methodologies has proven effective for somaclonal variants characterization and the interest diploid seedlings selection for clonal propagation. Mainly, flow cytometry can be considered a viable technique for commercial purposes. / A embriogênese somática é uma técnica alternativa de micropropagação clonal em Carica papaya, tendo em vista os problemas gerados pela propagação convencional, via seminífera, e a ausência de um método eficaz para determinação sexual precoce dessa espécie trióica. Considerando o interesse pela produção em larga escala de plântulas do mamoeiro, o sistema líquido e o uso de embriões zigóticos imaturos como fonte de explante têm se mostrado mais eficientes para a geração de embriões somáticos de forma rápida e em quantidade relativamente elevada. Entretanto, técnicas de cultura de tecidos estão, frequentemente, associadas com a ocorrência de variação somaclonal. Portanto, a detecção e a eliminação de somaclones tornam-se necessárias, e diferentes metodologias têm sido empregadas para tal fim. Nesta perspectiva, este estudo adaptou um protocolo para produção em massa de embriões somáticos em meio líquido e adotou estratégias citométricas e citogenéticas para o monitoramento de variação somaclonal, em mamoeiro. Inicialmente, embriões zigóticos imaturos, que apresentam alto potencial embriogênico, foram cultivados em meio semi-sólido, na presença de 2,4-D, para indução de calos embriogênicos friáveis. A transferência desses calos para um sistema líquido, sob a ação dos reguladores 2,4-D e BAP, possibilitou a ampliação da proliferação de agregados celulares. Esta combinação de auxina e citocinina foi ideal por possibilitar somente a proliferação celular e não a diferenciação das suspensões em embriões somáticos. A conversão e a maturação destes ocorreram após a inoculação dos agregados em meio líquido suplementado com ABA. Nesta condição, foram obtidas suspensões de embriões somáticos, nos estágios cordiforme, torpedo, pré-cotiledonar e cotiledonar. Embriogênese somática direta, sem a formação de calos, também foi observada a partir dos embriões somáticos primários. Embriões no estágio cotiledonar foram extraídos e germinados em meio semi-sólido contendo GA3. Cerca de 80% de plântulas foram regeneradas e submetidas à aclimatização in vitro. A potencialidade da técnica de citometria de fluxo pôde ser demonstrada pela verificação do nível de ploidia dos regenerantes e, consequentemente, pela avaliação da ocorrência de variação somaclonal. Neste escaneamento, foram detectadas plântulas diplóides (88%), tetraplóides (6%) e aneuplóides (6%). Pela metodologia citogenética, plântulas conhecidamente diplóides tiveram seus cariogramas montados, nos quais não foi observada nenhuma alteração numérica ou estrutural. A associação de metodologias citométricas de fluxo e citogenéticas se mostrou eficaz para a caracterização de variantes somaclonais e para a seleção das plântulas diplóides de interesse para a propagação clonal. Principalmente, a citometria de fluxo pode ser considerada uma técnica viável para fins comerciais.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-08-23T21:04:05Z No. of bitstreams: 1 2009 - Monique Lopes Ribeiro.pdf: 2169069 bytes, checksum: d331284a6463585cb4755e8e93b90be8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-23T21:04:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Monique Lopes Ribeiro.pdf: 2169069 bytes, checksum: d331284a6463585cb4755e8e93b90be8 (MD5) Previous issue date: 2009-03-27 / CAPES / Brazil is responsible for 25 % of total papaya production in the world, a fruit wich is mainly characterized for its nutritional aspects. The juice and pulp industries have showed an increase in their production in the last years. However, this segment takes only 5% of total papaya produced, while the remaining is consumed as a fresh fruit. This scene is unfavorable, because the high rate of losses during times of big harvests. The processing of papaya can minimize the losses, increasing its shelf life and adding value to this tropical fruit. One of the most used conservation method is HTST pasteurization (high temperature, short time), wich reduces microbial count to safe levels for the consumers and inactivates pectinesterase. This enzyme has an important role during fruit ripening, but it becomes undesirable after process, because acts in pectin and causes undesirable changes in the pulp. The main objective of this study was investigate the effects of temperature and process time on the pectinesterase activity in papaya Formosa pulp. The effects of thermal process on the physical and chemical, nutritional, microbiological and sensorial characteristics were also evaluated. The experiments were carried out following a 22 factorial design with central point. Two independents variables were studied, temperature and time, in the range of 75 to 95?C / 20 to 60 s. The results were submitted to analyses of variance with 95% of confidence interval. In the range of study, factors temperature, process time and interaction did not show significant effects in the characteristics such as pH, titratable acidity, soluble solids contents, vitamin B1, B2 and C contents, antioxidant activity, phenolic compounds, carotenoids contents and colour parameters (L, a, b e ?E). Temperature showed a positive significant (p<0,05) linear effect in the reduction of pectinesterase activity. The best time and temperature ranges for heat processing, which reached more than 95 % of enzyme inactivation were between 20 and 60 seconds at 95?C. The process at 95 ? C/ 60 s promoted a significant decrease in vitamin C content, compared to fresh pulp (Dunnett test at 5% probability level), while the other nutrients did not show significant losses. The presence of coliforms at 45 ?C and Salmonella was not detected. The applied treatments were sufficient to promote a reduction of about 3 logarithmic cycles in the population of molds and yeasts. The Preference Map obtained by the acceptance analyses showed a trend of preference for the pasteurized at 95 ?C / 60 s, 95 ?C / 20 s and fresh samples, while commercial pulps were rejected by consumers. / O Brasil ? respons?vel por 25% do total da produ??o mundial de mam?o, um fruto que se caracteriza principalmente por seus aspectos nutricionais. A ind?stria de sucos e polpas tem apresentado um aumento na sua produ??o nos ?ltimos anos. Entretanto, este segmento aproveita somente 5 % do total de mam?o produzido, sendo o restante consumido in natura. Este quadro ? desfavor?vel tendo em vista os altos ?ndices de perdas nas ?pocas de grandes safras. O processamento em forma de polpa minimiza as perdas, pois aumenta a vida ?til e agrega valor econ?mico ao fruto. Um dos tratamentos mais aplicados para a polpa de mam?o ? a pasteuriza??o do tipo HTST (High Temperature, Short Time), cuja finalidade ? reduzir a carga microbiana a n?veis seguros para os consumidores e inativar a enzima pectinesterase. Esta enzima, que tem um papel fundamental na matura??o do fruto, se torna indesej?vel ap?s o processamento, pois atua sobre a pectina causando altera??es indesej?veis na polpa. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar o efeito da temperatura e tempo de processo na atividade da enzima pectinesterase presente na polpa de mam?o Formosa. Tamb?m foram avaliados os efeitos do tratamento t?rmico nas caracter?sticas microbiol?gicas, f?sico-qu?micas, nutricionais e sensoriais da polpa. Os experimentos foram realizados seguindo um planejamento fatorial completo 22 com ponto central, sendo as vari?veis independentes o tempo e a temperatura de processo, em uma faixa de observa??o entre 75 ?C e 90 ?C / 20 s e 60 s. Os dados foram submetidos ? an?lise de vari?ncia com intervalo de confian?a de 95 %. Na faixa observada, tanto os fatores tempo e temperatura como a intera??o entre os fatores n?o apresentaram efeitos significativos nas caracter?sticas como pH, acidez titul?vel, teor de vitamina B1, teor de vitamina B2, teor de vitamina C, teor de caroten?ides, atividade antioxidante, teor de compostos fen?licos e par?metros da cor (L, a, b e ?E). O fator temperatura apresentou um efeito linear significativo (p < 0,05) e positivo para redu??o da atividade da pectinesterase, sendo que os tratamentos a 95 ?C / 20 s e 95 ?C / 60 s foram os que apresentaram maior percentual de redu??o, com aproximadamente 95 %. Em compara??o ? polpa in natura, somente a polpa submetida a 95 ?C / 60 s apresentou um decr?scimo significativo no teor de vitamina C (pelo teste de Dunnett ao n?vel de 5 %), sendo que para os outros nutrientes n?o houve decr?scimo significativo. Nas an?lises microbiol?gicas n?o foi detectada a presen?a de coliformes a 45 ?C e de Salmonella sp. Os tratamentos aplicados promoveram uma redu??o na ordem de 103 na contagem total de fungos e leveduras. Na an?lise sensorial, o Mapa Interno de Prefer?ncia obtido a partir dos dados de aceita??o mostraram uma tend?ncia ? prefer?ncia pelas amostras pasteurizadas a 95 ?C / 60 s, 95 ?C / 20 s e in natura, enquanto que as polpas de marcas comerciais foram rejeitadas.