Muito se tem investido em pesquisa na compreensão dos processos e fenômenos envolvidos nas respostas imunes às infecções e, principalmente, no desenvolvimento de recursos e tecnologias a fim favorecer os avanços no tratamento da sepse. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos anti-inflamatórios das células-tronco mesenquimais (MSCs) quando administradas por duas diferentes vias: intraperitoneal (IP) e intravenosa (IV), determinando qual a melhor via de traramento, em modelo experimental murino de sepse. Foram utilizados 31 camundongos da linhagem C57Bl/6 para padronização do modelo de Ligadura e Perfuração do Ceco (CLP). Após os experimentos de estabelecimento do modelo, outros 60 animais foram distribuídos em nove grupos: grupo CONTROLE, grupo sepse sem tratamento (SEPSE), grupo SHAM, grupo sepse com administração de PBS via IV (SEPSE PBS IV), grupo sham com administração de PBS via IV (SHAM PBS IV), grupo sham com administração de MSCs via IV (SHAM MSC IV), grupo sham com administração de MSCs via IP (SHAM MSC IP), grupo sepse com administração de MSCs via IP (SEPSE MSC IP) e grupo sepse com administração de MSCs via IV (SEPSE MSC IV). Transcorridas 6 horas da indução da sepse pelo modelo CLP, padronizado com oclusão total do ceco seguida de uma única punctura com agulha 18G, os animais receberam o tratamento de acordo com o grupo que compunham. Após 24 horas do procedimento cirúrgico, procedeu-se a eutanásia dos animais para coleta dos órgãos, sangue e fluidos peritoneais. As amostras foram analisadas quanto aos parâmetros histológicos, hematológicos e inflamatórios, respectivamente. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que: 1) O modelo CLP padronizado com oclusão total do ceco e uma punctura com agulha 18G induziu sepse aguda nos animais; 2) A administração das MSCs via IP foi atenuadamente mais eficaz na redução da concentração de leucócitos hematológicos e no quadro de trombocitopenia instalado nos animais com sepse induzida; 3) A injeção IP das MSCs diminuiu, com maior eficiência, a infiltração de células inflamatórias na região abdominal dos animais doentes. 4) As citocinas IL-6, TNF-α e IL- 10 obtiveram queda de suas concentrações séricas com a terapia nos animais dos grupos submetidos à indução da sepse. 5) O tratamento com MSCs melhorou o grau de peritonite, necrose e ulcerações observadas na histologia do ceco dos animais, com melhores resultados encontrados no grupo SEPSE MSC IP. / Much has been invested on research regarding comprehension of the processes and phenomena that are involved in immune responses to infections and mainly on resources and technologies development in order to support advances in the treatment of sepsis. This study has been performed in order to evaluate the anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells (MSCs) when administered by two different routes: intraperitoneal (IP) and intravenous (IV), to determine which is the best treatment route, in an experimental murine model of sepsis. Thirty-one C57Bl/6 strain mice have been used to standardize the Cecal Ligation and Perforation (CLP) model. After the establishment of CLP, 60 animals were allocated into nine groups: CONTROL group, sepsis group without treatment (SEPSE), SHAM group, sepsis group with intravenously administration of PBS (SEPSE PBS IV), sham group with intravenously administration of PBS (SHAM PBS IV), sham group with intravenously administration of MSCs (SHAM MSC IV), sham group with intraperitoneal administration of MSCs (SHAM MSC IP), sepsis group with intraperitoneal administration of MSCs (SEPSE MSC IP), and sepsis group with intravenously administration of MSCs (SEPSE MSC IV). 6 hours after the induction of sepsis by CLP model, standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle, the animals received the treatment according to the group they belonged to. 24 hours after the surgical procedure the animals were sacrificed in order to get the organs, blood and peritoneal fluid. The samples were analyzed for histological, haematological and inflammatory parameters, respectively. Basing on the results it was concluded that:1) The CLP model standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle induced acute sepsis in the animals; 2) The intraperitoneal administration of MSCs was slightly better in reducing the hematological concentration of leukocytes and the installed picture of thrombocytopenia in sepsis groups; 3) the intraperitoneal injection of MSCs decreased, with greater efficiency, the inflammatory cells infiltration in the abdominal cavity of sepsis groups. 4) The IL-6, TNF-α and IL-10 cytokines had their serum concentrations decline with therapy, in the groups subjected to induction of sepsis. 5) Treatment with MSCs improved the severity of peritonitis, necrosis and ulceration observed in cecum histology, with better results in the SEPSIS MSC IP group.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O cÃncer colorretal(CCR) à altamente prevalente nos paÃses mais ricos e industrializados. As metaloproteinases de matriz (MMPs) sÃo importantes enzimas que facilitam a invasÃo e disseminaÃÃo do tumor em vÃrios tipos de cÃncer, inclusive o colorretal. Os inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMPs) sÃo os principais inativadores fisiolÃgicos destas enzimas. Este estudo avaliou a expressÃo de metaloproteinase-2 (MMP-2), metaloproteinase-14 (MMP-14) e inibidor tecidual de metaloproteinases-2 (TIMP-2) no cÃncer colorretal. O imunomarcador CD68 foi utilizado para caracterizar a natureza das cÃlulas mononucleadas do estroma. Amostras teciduais de 50 casos de colectomias, devido ao cÃncer colorretal no perÃodo de 2004 a 2010, obtidas dos arquivos do Departamento de Patologia e Medicina Legal (DPML), Faculdade de Medicina da Universidade Federal do Cearà (UFC), foram analisadas. Realizou-se tissue microarrays e a seguir imuno-histoquÃmica para avaliar a expressÃo de MMP-2, MMP-14 e TIMP-2 de acordo com os seguintes escores baseados em outros relatos: 0= sem imunomarcaÃÃo ou raras cÃlulas marcadas (<5%); 1 = discreta marcaÃÃo na maioria (> 50%) das cÃlulas tumorais ou cÃlulas mononucleares do estroma, ou moderada marcaÃÃo em uma minoria de cÃlulas (<50 %); 2 =marcaÃÃo moderada na maioria (> 50%) de cÃlulas tumorais ou cÃlulas mononucleares ou intensa marcaÃÃo em minoria de cÃlulas (<50%); 3 = marcaÃÃo intensa na maioria (> 50%) de cÃlulas tumorais ou cÃlulas mononucleares. Observou-se relaÃÃo entre a expressÃo aumentada de MMP-14 em mononucleares de tumor primÃrio e casos sem metÃstases linfonodais (MMP-14, escores 2 e 3/N0 : 23/24 = 95%; N1-N3: 14/20 = 70%, p = 0,0353). No entanto, nenhuma relaÃÃo significativa foi encontrada entre a expressÃo de MMP-14, MMP-2 e TIMP-2 nos tumores primÃrios em cÃlulas cancerosas ou mononucleares e outros parÃmetros clÃnico-patolÃgicos. A imunoexpressÃo de MMP-2 foi negativa nas cÃlulas neoplÃsicas, em tumores primÃrios (47/47=100%) e metastÃticos (12/12 = 100%). A imunorreatividade de MMP-14 em cÃlulas neoplÃsicas foi frequentemente positiva em tumores primÃrios (50/50 = 100%) e metastÃticos (7/8= 88%). Em mononucleares, a maioria dos quais macrÃfagos (corados pelo CD68), a expressÃo positiva de MMP-14 tambÃm predominou marcadamente, tanto em tumores primÃrios (46/47 = 98%) como em carcinomas metastÃticos (9/10 = 90%). A expressÃo de TIMP-2 em cÃlulas neoplÃsicas, discreta, ocorreu em 70% de tumores primÃrios (35/50 casos) e 100% dos metastÃticos (8/8). A imunocoloraÃÃo para TIMP-2 em macrÃfagos associados ao tumor (TAMs) foi ainda mais elevada do que nas cÃlulas neoplÃsicas. Em conclusÃo, a MMP-14 e TIMP-2 sÃo frequentemente expressas em carcinomas colo-retais em ambas localizaÃÃes anatÃmicas, principalmente nas metÃstases para linfonodos , sugerindo que estas proteases desempenham papel importante na invasÃo local e na progressÃo tumoral neste tipo de cÃncer. A predominÃncia destes marcadores nas cÃlulas mononucleares (sobretudo macrÃfagos) , claramente evidentes na positividade para a MMP-2, enfatiza a importÃncia do microambiente tumoral no desenvolvimento de neoplasias. / The colorectal cancer (RCC) is highly prevalent in richer and industrialized countries. The matrix metalloproteinases (MMPs) are regarded as important for facilitating tumor invasion and spread in various cancers, including colorectal. Tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) are the major physiological inhibitors of MMPs. The expression of metalloproteinase-2 (MMP-2), metalloproteinase 14 (MMP-14) and tissue inhibitor of metalloproteinases-2 ( TIMP-2) in colorectal cancer was assessed. CD68 immunostaininig was utilized to the characterization of mononuclear cells nature. Paraffin-embedded tissues from patients undergoing colectomy for colorectal cancer in the period 2004 to 2010, were selected from the files of the Department of Pathology and Forensic Medicine (DPML), Medical School , Federal University of Cearà (UFC). Tissue microarrays were performed and slides were obtained for immunohistochemical detection of the expression of MMP-2, MMP-14 and TIMP-2 and the tissue samples analyzed. The following scores were applied: 0 = no immunostaining or rare labeled cells (<5%), 1 = slight marking the majority (> 50%) of tumor cells or stromal mononuclear cells, or moderate marking in a minority of cells (<50%) 2 = moderate labeling in the majority (> 50%) of tumor or mononuclear cells or intense marking in the minority of cells (<50%) and 3 = intense labeling in the majority (> 50%) of tumor cells or mononuclear cells. In this study, the relationship between increased expression of MMP-14 in mononuclear primary tumor cells and cases without lymph node metastases (MMP-14, 2 and 3/N0 scores: 23/26 = 88%; N1-N3: 14/21 = 67%, p = 0.0353) was stablished . However, no significant relationship was found between the immunohistochemical expression of MMP-14, MMP-2 and TIMP-2 in primary tumors in cancer cells and mononuclear cells and other clinico-pathological parameters. The expression of MMP-2 were negative in the neoplastic cells both in primary tumors (47/47 = 100%) and in metastatic ones (12/12 = 100%). The immunoreactivity of MMP-14 in neoplastic cells in primary tumors was positive (50/50 = 100%) and in all cases except one of metastatic carcinoma (7/8 = 88%). In mononuclear cells, most of them characterized as macrophages (CD68 stained), MMP-14 positive expression also predominated markedly, both in primary tumors (46/47 = 98%) and in metastatic carcinomas (9/10 = 90%). TIMP-2 expression in neoplastic cells of primary tumors occurred in 35/50 cases (70%) and lymph nodes showed positive immunostaining in all cases (8/8 = 100%). In both sites there were no cases with high expression. The TIMP-2 immunoreactivity in tumour associated macrophages (TAMs) was even higher than in the neoplastic cells. In conclusion, MMP-14 and TIMP-2 are frequently expressed in colorectal carcinomas in both anatomical sites , mainly in lymph node metastasis, suggesting that these proteases play an important role in local invasion and tumor progression of these cancers. The predominance of these biomarkers in mononuclear cells, clearly evident in the positivity for MMP-2, emphasizes the importance of tumor microenvironment in the development of neoplasms.

Estratégias para minimizar o efeito do balanço energético negativo (BEN) em vacas leiteiras vêm sendo estudadas constantemente no passar dos anos, pois o período de transição é caracterizado por grande estresse metabólico. O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros metabólicos, produtivos e reprodutivos em vacas da raça Holandesa após a aplicação de drench no pós-parto imediato e 24 h após, como alternativa para minimizar o BEN e proporcionar melhor desempenho produtivo e reprodutivo aos animais. Foram utilizadas 129 vacas, 64 no grupo 1 (1ª e 2ª lactação) e 65 no grupo 2 (≥ 3ª lactação), distribuídas em: verão (n= 63) e inverno (n= 66) e região da Serra Gaúcha (Fazenda A, n= 48) e Planato Médio (Fazenda B, n= 81). Foram coletadas amostras de sangue para obtenção de soro e plasma e determinação de β-hidroxibutirato (BHB) com sistema Abbot Precision Xtra. Foi medido o escore de condição corporal e a temperatura corporal, e realizado acompanhamento de controle leiteiro para avaliar produção e composição de leite. Foi realizada ultrassonografia ovariana para avaliação de ciclicidade ovárica e primeira ovulação pós-parto. O tratamento drench provocou uma tendência a diminuir os valores de BHB sérico no período experimental, sendo que, no período de verão essa diminuição foi significativa na Fazenda A. Na Fazenda B, nas semanas 3 e 4, o tratamento com drench aumentou significativamente a produção de leite nos grupos 1 e 2. A exceção foi no grupo 1 no período de verão, onde o efeito foi negativo. Também na Fazenda B, o tratamento com drench teve efeito positivo no percentual de gordura nas vacas do grupo 1 e efeito negativo nas vacas do grupo 2. Parâmetros reprodutivos não tiveram interações significativas. Em conclusão, o tratamento com drench preveniu a ocorrência de cetose subclínica, aumentou a produção leiteira no inverno e no verão em vacas de 3 ou mais lactações e também aumentou o percentual de gordura no leite em vacas de uma ou duas lactações. / Strategies to minimize the effect of negative energy balance (NEB) in dairy cows are being studied constantly over the years, since the transition period is characterized by excessive metabolic stress. The present study had the objective to evaluate metabolic, productive and reproductive parameters in dairy cows after application of drench in the immediate postpartum period and 24 hours after as an alternative to minimize NEB providing better productive and reproductive performance of animals. 129 cows, 64 were used in group 1 (1st and 2nd lactation ) and 65 in group 2 ( ≥ 3rd lactation ), distributed in: summer ( n = 63 ) and winter ( n = 66 ) and Serra Gaucha (Farm A, n = 48) and Planato Médio (Farm B, n = 81 ) . Blood samples were collected to obtain serum and plasma and determination of β-hydroxybutyrate (BHB) with the Abbott Precision Xtra system . Body condition score and body temperature, were also obtained by milk information system to evaluate production and milk composition was measured. Ovarian ultrasonography was performed for evaluation of cyclicity and days to first ovulation postpartum. The drench treatment had a trend towards significance in the reduction of mean serum BHB during the experimental period, whereas in the summer period this decrease was significant in farm A. On farm B at weeks 3 and 4, drench significantly increased milk production in groups 1 and 2. Except for group 1 during the summer, where the effect was negative. Also on farm B, drench had a positive effect on fat percentage in cows of group 1 and negative effect on cows in group 2. Reproductive parameters showed no significant interactions. In conclusion, drench prevented the occurrence of subclinical ketosis, increased milk production during winter and during summer in cows of third or more lactation and also increased of milk fat percentage in cows of first and second lactations.

Muito se tem investido em pesquisa na compreensão dos processos e fenômenos envolvidos nas respostas imunes às infecções e, principalmente, no desenvolvimento de recursos e tecnologias a fim favorecer os avanços no tratamento da sepse. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos anti-inflamatórios das células-tronco mesenquimais (MSCs) quando administradas por duas diferentes vias: intraperitoneal (IP) e intravenosa (IV), determinando qual a melhor via de traramento, em modelo experimental murino de sepse. Foram utilizados 31 camundongos da linhagem C57Bl/6 para padronização do modelo de Ligadura e Perfuração do Ceco (CLP). Após os experimentos de estabelecimento do modelo, outros 60 animais foram distribuídos em nove grupos: grupo CONTROLE, grupo sepse sem tratamento (SEPSE), grupo SHAM, grupo sepse com administração de PBS via IV (SEPSE PBS IV), grupo sham com administração de PBS via IV (SHAM PBS IV), grupo sham com administração de MSCs via IV (SHAM MSC IV), grupo sham com administração de MSCs via IP (SHAM MSC IP), grupo sepse com administração de MSCs via IP (SEPSE MSC IP) e grupo sepse com administração de MSCs via IV (SEPSE MSC IV). Transcorridas 6 horas da indução da sepse pelo modelo CLP, padronizado com oclusão total do ceco seguida de uma única punctura com agulha 18G, os animais receberam o tratamento de acordo com o grupo que compunham. Após 24 horas do procedimento cirúrgico, procedeu-se a eutanásia dos animais para coleta dos órgãos, sangue e fluidos peritoneais. As amostras foram analisadas quanto aos parâmetros histológicos, hematológicos e inflamatórios, respectivamente. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que: 1) O modelo CLP padronizado com oclusão total do ceco e uma punctura com agulha 18G induziu sepse aguda nos animais; 2) A administração das MSCs via IP foi atenuadamente mais eficaz na redução da concentração de leucócitos hematológicos e no quadro de trombocitopenia instalado nos animais com sepse induzida; 3) A injeção IP das MSCs diminuiu, com maior eficiência, a infiltração de células inflamatórias na região abdominal dos animais doentes. 4) As citocinas IL-6, TNF-α e IL- 10 obtiveram queda de suas concentrações séricas com a terapia nos animais dos grupos submetidos à indução da sepse. 5) O tratamento com MSCs melhorou o grau de peritonite, necrose e ulcerações observadas na histologia do ceco dos animais, com melhores resultados encontrados no grupo SEPSE MSC IP. / Much has been invested on research regarding comprehension of the processes and phenomena that are involved in immune responses to infections and mainly on resources and technologies development in order to support advances in the treatment of sepsis. This study has been performed in order to evaluate the anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells (MSCs) when administered by two different routes: intraperitoneal (IP) and intravenous (IV), to determine which is the best treatment route, in an experimental murine model of sepsis. Thirty-one C57Bl/6 strain mice have been used to standardize the Cecal Ligation and Perforation (CLP) model. After the establishment of CLP, 60 animals were allocated into nine groups: CONTROL group, sepsis group without treatment (SEPSE), SHAM group, sepsis group with intravenously administration of PBS (SEPSE PBS IV), sham group with intravenously administration of PBS (SHAM PBS IV), sham group with intravenously administration of MSCs (SHAM MSC IV), sham group with intraperitoneal administration of MSCs (SHAM MSC IP), sepsis group with intraperitoneal administration of MSCs (SEPSE MSC IP), and sepsis group with intravenously administration of MSCs (SEPSE MSC IV). 6 hours after the induction of sepsis by CLP model, standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle, the animals received the treatment according to the group they belonged to. 24 hours after the surgical procedure the animals were sacrificed in order to get the organs, blood and peritoneal fluid. The samples were analyzed for histological, haematological and inflammatory parameters, respectively. Basing on the results it was concluded that:1) The CLP model standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle induced acute sepsis in the animals; 2) The intraperitoneal administration of MSCs was slightly better in reducing the hematological concentration of leukocytes and the installed picture of thrombocytopenia in sepsis groups; 3) the intraperitoneal injection of MSCs decreased, with greater efficiency, the inflammatory cells infiltration in the abdominal cavity of sepsis groups. 4) The IL-6, TNF-α and IL-10 cytokines had their serum concentrations decline with therapy, in the groups subjected to induction of sepsis. 5) Treatment with MSCs improved the severity of peritonitis, necrosis and ulceration observed in cecum histology, with better results in the SEPSIS MSC IP group.

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M. smegmatis mc2 155 was transformed with pLA71-CMX by electroporation, and the presence of the CMX protein was confirmed by imuno blotting. BALB/c mice were distributed in four groups: saline, infection, BCG and mc2-CMX. The groups were immunized with their respective vaccines in two moments with an interval of fifteen days and the animal blood was collected fifteen days after the last immunization. Thirty days after the last immunization, the animals were challenged with Mtb H37Rv (intravenously) and thirty days after the challenge, the blood was collected to perform ELISA test. Seventy days after the challenge, the lungs from all mice were collected to obtain cells for flow-cytometry, histological analysis and also to determine the bacillary burden. The immunization with mc2-CMX induced higher levels of antibodies of IgG1 (1,910±0,70) and IgG2a (0,139±0,020) class anti-CMX when compared with BCG group (0,646±0,19 and 0,413±0,24; respectively, p<0,05). These results demonstrated the relevance of CMX antigen in the immunogenicity of the recombinant vaccine. Seventy days after the challenge, the amount of T CD4 cells in the lung producing Th1- type cytokines was assessed. It was observed a significant increase in the percentage of T CD4 cells positive for IFN-γ and TNF-α in the immunized mice with mc2-CMX vaccine, when compared with the group immunized with BCG. Mice challenged with Mtb presented significant higher percentage of IL-2 producer cells when compared with the non-immunized group. However, only the mice immunized with the vaccine mc2- CMX presented significant higher percentage when compared with the infection group. The immune response induced by the vaccine was effective in the control of Mtb infection, confirmed by the histological analysis and the bacillar burden determined. The groups vaccinated with mc2-CMX and BCG presented a significant reduction of the lung lesion induced by the Mtb infection, and also lung bacterial load, when compared with the infection group. Thus, the recombinant vaccine mc2-CMX presents potential characteristics to be used in the prevention of TB. / Há séculos a tuberculose (TB), doença infectocontagiosa causada por Mycobacterium tuberculosis (Mtb), vem sendo um problema de saúde pública mundial. Mesmo após o surgimento da vacina BCG em 1921, o controle da tuberculose continua a passos lentos. Isso se deve à eficácia variável de 0 a 80% apresentada pela vacina na proteção contra TB em indivíduos adultos. Deste modo, o desenvolvimento de uma nova vacina contra a TB é necessário. Neste estudo, avaliou-se uma vacina recombinante composta por Mycobacterium smegmatis expressando a proteína de fusão CMX (mc2-CMX), formada por três antígenos do Mtb: Ag85C, MPT51 e HspX. M. smegmatis mc2 155 foi transformado com pLA71-CMX por eletroporação, sendo a expressão da proteína CMX confirmada por imunoblot. Camundongos BALB/c foram distribuídos em quatro grupos: salina, infecção, BCG e mc2-CMX. Os grupos foram imunizados com suas respectivas vacinas em dois momentos com intervalos de 15 dias, e o sangue de todos os animais coletado quinze dias após a última imunização. Trinta dias após a imunização, os animais foram desafiados com Mtb H37Rv (via endovenosa) e trinta dias após o desafio, o sangue foi coletado para realização de ELISA. Setenta dias após desafio, o pulmão e o baço de todos os camundongos foi coletado para obtenção de células para realização de citometria, histopatológico e determinação da carga bacilar. A imunização com o mc2-CMX induziu níveis maiores de anticorpos da classe IgG1 (1,910±0,70) e IgG2a (0,139±0,020) anti-CMX quando comparado com o grupo BCG (0,646±0,19 e 0,413±0,24, respectivamente, p<0,05). Estes resultados demonstram a relevância do antígeno CMX na imunogenicidade da vacina recombinante. Após setenta dias do desafio, a quantidade de células T CD4 produtoras de citocinas do tipo Th1 foi analisada no pulmão. Foi observado um aumento significativo na porcentagem de células T CD4 positivas para IFN-γ e TNF-α nos camundongos imunizados com vacina mc2-CMX, quando comparado com o grupo BCG. Camundongos desafiados com Mtb apresentaram porcentagens maiores de células produtoras de IL-2, quando comparado com o grupo não desafiado. Todavia, somente os camundongos imunizados com a vacina mc2-CMX apresentaram porcentagens significativamente maiores em comparação ao grupo infecção. A resposta imune observada foi efetiva no controle da infecção por Mtb, sendo isto confirmado quando os pulmões dos camundongos foram analisados histologicamente e a carga bacilar determinada. Os grupos vacinados com as vacinas mc2-CMX e BCG apresentaram uma redução significativa da lesão pulmonar induzida pela infecção por Mtb, e também da carga bacilar no pulmão, quando comparados com o grupo infecção. Conclui-se que mc2-CMX tem um bom potencial para ser explorado como vacina contra a TB.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Myelodysplastic syndrome (MDS) and aplastic anemia (AA) are two of the hematological disorders which present peripheral cytopenias, with extensive clinical manifestations that vary from slight anemia to severe pancytopenia; the latter requiring continuous transfusional reposition of red cell (RC) and platelet concentrates (PC), which can induce aloimunization in patients. Such patients can develop a post-transfusional refractory state, rendering further transfusions unviable. The objective of the present study was to investigate the incidence of anti-HLA antibodies in politransfused patients, and correlate the aloimmunity levels to the clinical profiles of MDS and AA patients. A total of 110 politransfused patients (70 with MDS, and 40 with AA) have been included in the study, with the MDS patients being subclassified into four clinical diagnostic categories: refractory anemia (RA), ringed-sideroblastic refractory anemia (RSRA), refractory anemia with excess blasts (RAEB) and refractory anemia with excess blasts in transformation (RAEB-t). Blood serum samples from these patients were treated with dithiothreitol for the detection of anti-HLA class I antibodies, using the complement-dependent cytotoxicity test (CDC), in a panel of lymphocytes constituted on the basis of the frequency of HLA antigens in our population (PRA). The results showed that a larger number of AA patients were aloimmunized than MDS patients (45% v 28.6%), with the aloreactivity being higher in AA patients who received higher mean transfusions of PC, than in MDS patients who received higher average number of EC transfusions. The degree of aloimmunization was different in the two disorders, and was generally related to: the number of transfusions received, the application of un-deleukocytised PC and EC, and the type of immunosuppressant drugs used in treatment [Cyclosporin (CsA) and/or antiglobulin (ALG) therapy significantly reduced aloimmunization, but corticoids alone were not sufficient]. The highest degree of aloimmunity (Grade 4) was observed only in MDS females, particularly in those who had multiple births. Persistent IgG was also associated with Grade 4 aloimmunity. These results reveal that significant numbers of MDS and AA patients, if politransfused with un-deleukocytised PC and EC and un-treated with immunosuppressants CsA and/or ALG, can develop anti-HLA antibodies and become refractory to further transfusions. Such aloimmunized patients can also become potentially unsuited to receive bone marrow transplants from HLA-matched donors. / As SÃndromes MielodisplÃsticas e Anemia AplÃstica sÃo desordens hematolÃgicas que apresentam citopenias perifÃricas, com desenvolvimento de caracterÃsticas clÃnicas extensas, com manifestaÃÃes clÃnicas variÃveis que vÃo desde uma leve anemia atà uma pancitopenia severa, necessitando, nos Ãltimos casos, de reposiÃÃo transfusional contÃnua de concentrados de hemÃcias (CH) e de plaquetas (CP), tornando-os alvos à aloimunizaÃÃo pÃs-transfusional e desenvolvimento do estado de refratariedade Ãs transfusÃes. Este estudo objetivou determinar a incidÃncia de anticorpos anti-HLA de classe I em pacientes politransfundidos e correlacionar a aloimunidade ao perfil clÃnico dos pacientes de SMD e AA. 110 pacientes foram incluÃdos nesta pesquisa (70 portadores das SMD e 40 de AA), com os portadores das SMD classificados em quatro sub-grupos clÃnicos: anemia refratÃria (AR), anemia refratÃria sideroblÃstica em anel (ARSA), anemia refratÃria com excesso de blastos (AREB) e anemia refratÃria com excesso de blastos em transformaÃÃo (AREB-t). Soros dos pacientes foram tratados com Dithiothreitol (DTT) para a pesquisa de Acs contra os Ag HLA de classe I, usando a tÃcnica de âcitotoxicidade dependente do complementoâ (CDC), no painel de linfÃcitos baseado na frequÃncia dos Ags HLA da nossa populaÃÃo (PRA). Os resultados demonstraram que os pacientes portadores das SMD desenvolveram um menor grau de aloimunizaÃÃo (28,6%), que os pacientes de AA (45%). A alorreatividade foi mais freqÃente nos portadores de AA que tinham recebido maiores mÃdias transfusionais de CP, em relaÃÃo aos pacientes de SMD que receberam maior nÃmero de transfusÃes com CH. O grau de alorreatividade se manifestou diferente nestas duas doenÃas e, de forma geral, se relacionou com: o maior nÃmero mÃdio de transfusÃes, a aplicaÃÃo de preparaÃÃes nÃo desleucotizadas de CH e CP e o uso de imunossupressores (ciclosporina e/ou soros anti-leucocitÃrios). Somente o uso de corticÃide nÃo foi suficiente para reduzir a aloimunizaÃÃo. O mais alto grau de alorreatividade (PadrÃo 4) nas SMD foi evidenciado somente em mulheres, principalmente nas multÃparas. IgG persistente esteve mais presente no PadrÃo 4. Estes dados revelam que alguns pacientes das SMD e AA podem desenvolver anticorpos anti-HLA, se forem politransfundidos com hemoconcentrados nÃo desleucotizados e sem o tratamento com os imunossupressores CsA e/ou GAL. Tal alorreatividade poderà tornar o paciente refratÃrio Ãs futuras transfusÃes e dificultar, em princÃpio, recebimento do transplante de medula Ãssea de doadores HLA compatÃveis.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Aline Vasconcelos.pdf: 1922352 bytes, checksum: 396105ae13c0c0a23d13ec2e66379131 (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / Considering the relevance of tear production and tear quality to the conservation of the corneal health, the present study aimed to evaluate tear production and conjunctival goblet cells density in Shih-tzu dogs. Thirty five grownup Shih-tzu dogs, including 33 females and 2 males, were subjected to Schirmer tear test 1 (STT-1) and Schirmer tear test 2 (STT-2). Among these dogs, fourteen females and one male were underwent to conjunctival biopsy for histologic evaluation of goblet cell density (GCD) and goblet cell index (GCI). The STT-1 mean values found were 19,66 ± 7,3 mm/min for left eye (LE) and 21,97 ± 5,7 mm/min for right eye (RE). The STT-2 mean values were 10,71 ± 6,1 mm/min and 9,14 ± 4,78 mm/min for LE and RE, respectively. The GCD mean values found were 13,64 ± 3,44 goblet cells/50 epithelial cells for LE and 13, 64 ± 4,07 goblet cells/50 epithelial cells for RE. The GCIs correspondent were 0,27 ± 0,069 and 0,27 ± 0,081 for LE and RE, respectively. There was significant difference between LE and RE STT-1 values. There was not significant difference between eyes for STT-2, GCD and GCI values. STT-1 and STT-2 values did not influence significantly GCI values. STT-1 and STT-2 values are within of the pattern considered normal, but the GCD and GCI mean values are lower than those values described in literature for healthy dogs of other breeds. The conjunctival specimens histological evaluation was accepted as convenient, which demonstrated squamous metaplasic areas in 83,3% of the specimens. Within 44% of these, squamous metaplasia was predominantly associated with mononuclear inflammatory infiltrate. / Considerando a importância da produção e qualidade lacrimal para a manutenção de uma córnea saudável, o presente trabalho objetivou avaliar a produção lacrimal e a densidade de células caliciformes conjuntivais em cães da raça Shih-tzu. Trinta e cinco cães Shih-tzu, sendo 33 fêmeas e dois machos, adultos, foram submetidos aos testes lacrimais de Schirmer 1 (TLS-1) e 2 (TLS-2). Destes animais, quatorze fêmeas e um macho foram submetidos à biópsia conjuntival para avaliação histológica da densidade e índice de células caliciformes conjuntivais (DCC e ICC). Os valores médios obtidos de TLS-1 para os cães estudados foram de 19,66 ± 7,3 mm/min para o olho esquerdo (OE) e de 21,97 ± 5,7 mm/min para o direito (OD). Os valores do TLS-2 foram de 10,71 ± 6,1 mm/min e de 9,14 ± 4,78 mm/min para OE e OD, respectivamente. A densidade média de células caliciformes (células caliciformes / 50 células epiteliais) encontrada foi de 13,64 ± 3,44 e 13, 64 ± 4,07 para os olhos esquerdo e direito, respectivamente. Os índices de células caliciformes médios correspondentes foram de 0,27 ± 0,069 para o olho esquerdo e de 0,27 ± 0,081 para o olho direito. Houve diferença significativa entre os olhos esquerdo e direito para TLS-1. Não houve diferença significativa entre os olhos para TLS-2, DCC e ICC. Os valores de TLS-1 e TLS-2 não influenciaram significativamente os valores de ICC. Os valores de TLS-1 e 2 encontrados para os animais avaliados se encontram dentro dos padrões considerados normais, mas os valores médios de ICC e DCC são inferiores aos valores descritos na literatura para cães hígidos de outras raças. Admitiu-se como oportuna a avaliação histológica dos fragmentos conjuntivais biopsiados, a qual revelou presença de áreas de metaplasia escamosa em 83,3% das lâminas avaliadas. Destas, 44% apresentavam metaplasias associadas a infiltrados inflamatórios predominantemente mononucleares.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Angelo_Basile.pdf: 1980451 bytes, checksum: 3dcb4a7b71f6b32a798f1ca3559bf8eb (MD5) Previous issue date: 2008-05-16 / Diferentemente das demais raças, o Bulldog Inglês apresenta um padrão abaulado de conformação do tórax. Essa notória característica associada à predisposição de acentuado acúmulo de tecido adiposo sobre o rebordo costal, dificulta ainda mais o acesso dos principais meios de diagnóstico por imagem ao coração. A tendência racial à obesidade é outro fator limitante, quando se considera a integridade morfofisiológica do aparelho cardiovascular. Cães obesos tendem a ser portadores assintomáticos de cardiopatias ou, em muitos casos, mimetizam sinais clínicos dessas afecções; dificultando a identificação da incidência de distúrbios cardíacos em exemplares dessa raça. Foram utilizados 30 cães adultos, 15 machos e 15 fêmeas, clinicamente saudáveis oriundos do canil MACM Kennels e da casuística das clínicas Bicho de Estimação e CãoQMia, sendo submetidos à avaliações ecodopplercardiográficas, eletrocardiográfica computadorizada, radiográfica e morfométrica. Para todas as variáveis ecocardiográficas e o VHS procedeu-se correlação com o peso corporal e circunferência torácica. Em relação ao sexo, foi utilizado o teste t de Student para comparação dos valores médios, entre machos e fêmeas. As variáveis EFSIV, DIVEs, DIVEd, desnivelamento do intervalo ST e peso corpóreo apresentaram diferenças significativas entre machos e fêmeas avaliados. Os parâmetros DIVEd, DIVEs e FE% apresentaram correlação alta e significativa com o peso corpóreo; enquanto que os parâmetros relação AE:AO, SIVd, DIVEs, SSPE, onda EM e fluxo pulmonar apresentaram correlação baixa e pouco significativa com a circunferência torácica. A SSPE para exemplares desta raça é de até 0,65cm, sendo o VHS aceitável de 12 corpos vertebrais. Quando comparadas as alterações diagnosticadas neste estudo, observou-se uma maior prevalência destas, nas fêmeas

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A esquistossomose à uma doenÃa que no Brasil ainda à um sÃrio problema de saÃde pÃblica. AlteraÃÃes ambientais, comportamentais e imunolÃgicas ocorridas nos seus hospedeiros intermediÃrios podem predizer o sucesso ou nÃo de uma infecÃÃo. As alteraÃÃes ocorridas durante o desenvolvimento de uma infecÃÃo envolvem fatores internos e externos ao molusco. Dentre os internos as alteraÃÃes celulares (hemÃcitos) e humorais (soro) tÃm sido bastante estudadas. Em relaÃÃo aos externos a temperatura foi um dos fatores por nÃs escolhido para se avaliar a sua importÃncia na relaÃÃo molusco-parasito, principalmente porque a quase totalidade dos trabalhos abordando este assunto data da dÃcada de 50. Este trabalho teve como objetivo estudar a resistÃncia ou susceptibilidade de moluscos do gÃnero Biomphalaria frente à infecÃÃo pelo S. mansoni diante de fatores endÃgenos e exÃgenos. HemÃcitos de B. glabrata foram obtidos conforme tÃcnica preconizada e avaliados quanto a sua capacidade fagocitÃria, utilizando a tÃcnica de reduÃÃo do MTT, um sal de formazan, sendo seus valores quantificados por absorbÃncia a 570 nm. Caramujos B. glabrata foram tambÃm infectados nas temperaturas de 15oC, 20oC e 30oC e analisados quanto à eliminaÃÃo de cercarias aos 30 e 60 dias pÃs-infecÃÃo (DPI). Em outro experimento, um grupo de B. tenagophila (CF)- susceptÃvel, recebeu soro de B. tenagophila (Taim) - resistente, sendo posteriormente infectados pelo S. mansoni e observados quanto à alteraÃÃo do nÃvel de resistÃncia. Nossos resultados mostram que o comportamento dos hemÃcitos quanto a sua atividade fagocitÃria apresentou diferenÃa significativa entre os grupos B. glabrata nÃo infectado no seu estado basal comparado com o grupo nÃo infectado e resfriado, como tambÃm os mesmos grupos quando ativados pelo zymozan. Um outro dado obtido mostra que a diminuiÃÃo da temperatura influencia no desenvolvimento da infecÃÃo com diferenÃas significativas (p<0,05) entre 15oC e 30oC. Observamos tambÃm que a transferÃncia de soro conferiu um aumento no nÃmero de caramujos resistentes originalmente susceptÃveis em torno de 50% em comparaÃÃo ao grupo nÃo imunizado (p<0.05). A extrapolaÃÃo destes dados pode levar a um melhor entendimento da esquistossomose sobre o ponto de vista epidemiolÃgico. Os resultados obtidos nos permitem concluir que a atividade fagocitÃria dos hemÃcitos de B. glabrata à influenciada pela temperatura, e que esta influi diretamente na capacidade de infecÃÃo de B. glabrata pelo S. mansoni. Observamos tambÃm que a transferÃncia de soro de B. tenagophila resistente para B. tenagophila susceptÃvel, aumentou a resistÃncia desta Ãltima ao Schistosoma mansoni. / Schistosomiasis is one illnesses that in Brazil still is a serious problem of public health. Ambient, mannering and immunological alterations occured in its intermediate hosts can predict the success or not of one infection. The alterations that occured during the development of an infection involve internal and external factors on the molusc. Among the interns the cellular alterations (hemocytes) and humoral (serum) have been sufficiently studied. In relation to external the temperature was one of the factors chosen for us to evaluate its importance in the relation snail-parasite, mainly because almost the totality of the works approaching this subject dates of the fifty decade. This work had as objective study the resistance and susceptibility of snails of the genus Biomphalaria ahead of the S. Mansoni infection in front of endogenous and exogens factors. Hemocytes of B. glabrata had been gotten according to praised technique and evaluated about its fagocitary capacity, using the technique of reduction of the MTT, being its values quantified for absorbancy 570mm. B. glabrata snailswere also infected in the temperatures of 15oC, 20oC and 30oC and analyzed about the elimination of cercaries to the 30 and 60 days after-infection (DPI). In another experiment, a group of B. tenagophila (CF) - susceptible, received serum from B. tenagophila (Taim) - resistant, being later infected by the S. mansoni and observed about the alteration of the resistance level. Our results show that the behavior of the hemocytes about its fagocitary activity presented significant values between B. glabrata groups not infected in its compared basal state with the not infected and cooled group, as also the same groups when activated by zimozan. Another gotten data shows that the reduction of the temperature influences in the infection development with significant differences (p<0,05) between 15oC and 30oC. We also observe that the serum transference conferred an increase in the number of resistant snails originally susceptible around 50% in comparison to the group not immunized (p<0.05). The extrapolation of these data can take to one better understanding of schistosomiasis on the epidemiologist point of view. The results gotten allow us to conclude that the fagocitary activity of the hemocytes of B. glabrata is influenced by the temperature, as also that the transference of serum of B. tenagophila resistant for B. tenagophila susceptible, increased the resistance of this last one. Finally, we can also affirm that the temperature influences directly in the capacity of infection of B. glabrata by the S. mansoni.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leila_Parente.pdf: 6581377 bytes, checksum: 53f5a33a755753138bfb33661373f45c (MD5) Previous issue date: 2008-09-11 / The Calendula officinalis L. is an annual herb, originating in the Mediterranean region, belonging to the Asteraceae family and well known as calendula. Displays orange or yellow flowers, which are attributed medicinal properties, with emphasis on healing activity. In this study, the ethanolic extract of flowers of C. officinalis grown in Brazil was prepared by soaking the cold and fractionated to obtain fractions of dichloromethane and hexane. The angiogenesis activity of the extract and fractions was evaluated using the model of membrane corioalantóide in embryonated chicken eggs. But the healing effect of the extract was evaluated by the model of skin wounds in rats, with assessment of macroscopic and microscopic characteristics. In this model, the ethanol extract of angiogenesis activity in the dermis of rats was also evaluated by immunohistochemistry, and measured the intensity of expression of vascular endothelial growth factor (VEGF). The in vitro antibacterial activity of extract and fractions was evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) using the dilution plate. The ethanol extract and the fractions of calendula showed marked angiogenesis activity, demonstrated in both experimental models used. This activity was not related to the observed increase in intensity of expression of VEGF, which may be related to other pro-angiogenic factors. In the model of skin wounds in rats the ethanolic extract showed anti-inflammatory activity, demonstrated by the decrease in serous exudation of hyperemia, the deposition of fibrin and epidermal hyperplasia, besides the presence of more thin crusts and soaked in the control group. There was an increase in the amount of collagen in granulation tissue and antibacterial activity was observed, mainly on gram-positive bacteria. Still, the C. officinalis served as positive about the process of vascular neoformation and activity in healing skin wounds in rats, and also presented antibacterial activity in vitro. Thus, it is the healing effect attributed to this species / A Calendula officinalis L. é uma herbácea anual, originária da região Mediterrânea, pertencente á família Asteraceae e conhecida popularmente como calêndula. Apresenta flores alaranjadas ou amareladas, às quais são atribuídas propriedades medicinais, com destaque à atividade cicatrizante. Neste trabalho, o extrato etanólico das flores da C. officinalis cultivada no Brasil foi preparado por maceração à frio e fracionado para obtenção das frações diclorometano e hexânica. A atividade angiogênica do extrato e frações foi avaliada, utilizando-se o modelo da membrana corioalantóide em ovos embrionados de galinha. Já o efeito cicatrizante do extrato foi avaliado pelo modelo de feridas cutâneas em ratos, com avaliação das características macroscópicas e microscópicas. Nesse modelo, a atividade angiogênica do extrato etanólico na derme de ratos também foi avaliada por imunoistoquímica, sendo mensurada a intensidade de expressão do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). A atividade antibacteriana in vitro do extrato e das frações foi avaliada pela determinação da concentração inibitória mínima (CIM) pelo método de diluição em placa. O extrato etanólico e as frações da calêndula apresentaram acentuada atividade angiogênica, evidenciada nos dois modelos experimentais utilizados. Esta atividade evidenciada não foi relacionada ao aumento da intensidade da expressão do VEGF, podendo estar relaciona a outros fatores pró-angiogênicos. No modelo das feridas cutâneas em ratos o extrato etanólico apresentou atividade antiinflamatória, demostrada pela diminuição da exsudação serosa, da hiperemia, da deposição de fibrina e da hiperplasia epidermal, além da presença de crostas mais delgadas e umedecidas em relação ao grupo controle. Houve aumento na quantidade de colágeno no tecido de granulação e foi observada atividade antibacteriana, principalmente sobre bactérias gram-positivas. Ainda, a C. officinalis atuou de forma positiva sobre o processo de neoformação vascular e da atividade cicatricial em feridas cutâneas em ratos, e apresentou ainda atividade antibacteriana in vitro. Desta forma, justifica-se o efeito cicatrizante atribuído a essa espécie vegetal